Pruebas Generales para aminoácidos y proteínas.

Yañez K. Julieth y Barinas J. Karen

(1) Universidad del Cauca, Facultad de Ingeniería Civil, Programa de Ingeniería Ambiental,
Popayán, Cauca, Colombia.
(e-mail: juliethya@unicauca.edu.co; karbarinas@unicauca.edu.co)
Grupo: 9
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1. Resumen
Las proteínas son macromoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos y
compuestas por Carbono, Hidrógeno, Oxígeno y Nitrógeno. Son moléculas esenciales en la
constitución de los organismos, ya que, las células necesitan proteínas para llevar acabo sus
funciones. Los aminoácidos son sustancias orgánicas que contiene al menos un grupo
amino (-NH2) y al menos un grupo ácido, que casi siempre es el grupo carboxilo (Morán,
2016). Para esta práctica, se emplearon 11 muestras (Fenilalanina, Asparagina, Triptófano,
Glicina, Histidina, Tirosina, Urea, Gelatina, Albumina y dos muestras problemas).
Basándose en las diferencias estructurales que éstas presentan, es posible la identificación
de las mismas, mediante cinco pruebas cualitativas, las cuales demuestran alguna propiedad
química específica del aminoácido, cuya presencia o ausencia fue determinada. Teniendo
en cuenta los cálculos obtenidos, se reconoció si estas muestras se trataban de aminoácidos
y la caracterización de grupos comunes de proteínas como aminos o uniones peptídicas
(Ninhidrina y Biuret).

Ilustración 1. Esquema general de la estructura de los α –Aas

 2. Cálculos y Resultados
PRUEBA
MUESTRA XANTOPROTEÍCA BIURE NINHIDRINA HOPKINS- EHRLICH
T COLE
ALBUMINA ++ +++ +++ + +
GELATINA + +++ ++ -- +
UREA -- + -- -- --
FENILALANINA -- -- +++ -- --
ASPARAGINA + ++ +++ -- +++
GLICINA -- -- +++ -- --
HISTIDINA -- -- +++ -- ++
TRIPTÓFANO +++ -- +++ + +
TIROSINA +++ -- +++ ++ +++
M. P. 1 +++ -- +++ +++ --
M.P. 2 +++ ++ +++ ++ --
AGUA -- -- -- -- --
Tabla 1. Resultados Cualitativos de la práctica

3. Análisis La reacción xantoproteíca se puede

considerar como una sustitución
3.1 Reacción Xantoproteíca electrofílica aromática de los residuos de
tirosina de las proteínas por el ácido
Es un método que se puede utilizar para nítrico dando un compuesto coloreado
determinar la presencia de proteínas amarillo a pH básico.
solubles en una solución, empleando
Muestras de albumina conformada por
ácido nítrico concentrado. La prueba da Triptofano y la gelatina, que es un
resultado positivo en aquellas proteínas proteína conformada por tirosina, el
con aminoácidos portadores de grupos aminoácido sustituido electrolíticamente
aromáticos, especialmente en presencia por el ácido nítrico mientras que los
de tirosina. Si una vez realizada la prueba aminoácidos como triptófano, tirosina,
se neutraliza con un álcali, se vuelve color están formados por anillos aromáticos que
al ser remplazados por ácido nítrico
amarillo oscuro el resultado es positivo.
forman el compuesto de color amarillo.
Ing. Yanira G, Jorge V (2014)
Sin embargo, la asparagina obtuvo un
resultado positivo a pesar de que en su
estructura no contiene ningún anillo
aromático por lo tanto es un error de
método del laboratorista.

3.2 PRUEBA DE BIURET

Esquema 2. Reacción xantoproteíca
El Reactivo de Biuret indica la presencia
de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces error de método de un laboratorista ya
peptídicos en sustancias de composición que a todos les dio positivo para esta
desconocida. muestra.

Al igual que la asparagina, la urea

también viro positivo en Biuret.

Esquema 3. Reacción de Biuret

Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y

sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de
sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo
cambia a violeta en presencia de proteínas, y
vira a rosa cuando se combina con Ilustración 3. Esquema general de la
polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de estructura de la Urea.
potasio no participa en la reacción, pero
proporciona el medio alcalino necesario para La urea es un compuesto químico
que tenga lugar. Ing. Yanira G, Jorge V cristalino e incoloro; de fórmula
(2014) CO(NH2)2.

En este caso solo existen 2 proteínas, las El nitrógeno de la urea, que constituye el
cuales son albumina y gelatina, sin 80 % del nitrógeno en la orina, procede
embargo, también hubo viraje de un de la degradación de los diversos
aminoácido, la asparagina. compuestos con nitrógeno, sobre todo de
los aminoácidos de las proteínas en los
alimentos, sin embargo, esta no posee lo
enlaces peptídicos de una proteína por lo
tanto también hubo contaminación ya que
a 2 de 3 grupos les dio positivo.

3.3 NINHIDRINA
Ilustración 2. Esquema general de la Esta prueba es positiva tanto para
estructura de la Asparagina.
proteínas como para aminoácidos. En
Es posible que la muestra estuviera aquellos casos donde no da positiva la
contaminada, con alguna proteína, dado a prueba de Biuret, da positiva la de
que esta prueba es solo para proteínas las ninhidrina, e indica que no hay proteínas,
cuales se forma con enlaces peptídicos y pero sí hay aminoácidos libres de un pH 4
contienen cadenas de más de 50 y 8.
aminoácidos, se descarta que fuese el
 Ilustración 4. Esquema general de la
estructura del Triptófano.
Esquema 4. Prueba de Ninhidrina
Se clasifica entre los aminoácidos
Reacciona con todos los aminoácidos alfa apolares, también llamados hidrófobos.
cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una Se caracteriza por una cadena lateral con
coloración que varía de azul a violeta el grupo indol.
intenso. Este producto colorido (llamado
púrpura de Ruhemann) se estabiliza por El grupo indol del aminoácido triptófano
resonancia, la coloración producida por la se condensa con el ácido glioxílico del
ninhidrina es independiente de la coloración reactivo, formando así compuestos
original del aminoácido. Ing. Yanira G, coloreados. El agregar una pequeña
Jorge V (2014) cantidad de ácido sulfúrico concentrado,
aumenta la sensibilidad de la reacción.
En esta ocasión todas las muestras
excepto la urea y el agua obtuvieron un Ing. Yanira G, Jorge V (2014)
resultado positivo, dado a que la
albumina y la gelatina son proteínas
están conformadas por aminoácido y la
fenilalanina, asparagina, glicina,
histidina, triptófano, tirosina son
aminoácidos por lo tanto esta prueba
arrojo resultados verídicos.

3.4 HOPKINS-COLE

La reacción de Hopkins-Cole, conocida Ilustración 5. Esquema general de la

como reacción de Adamkiewiczs, es una estructura de la albumina modificada.
prueba estándar para el triptófano y para
las proteínas que contienen triptófano. La Es por ello que la albumina al contener
solución que se va a examinar se mezcla triptófano obtiene un resultado positivo.
con ácido glioxílico y se agrega ácido
sulfúrico concentrado. Un anillo entre A pesar de que para esta prueba solo
violeta y rojo en la unión de los dos debía dar positivo en albumina y el
líquidos indica que la reacción es mismo triptófano, también se presentó el
positiva.
anillo violeta en la tirosina, de nuevo debido a que esta prueba se especializa en
puede ocurrir que la contaminación del determinar la presencia de histidina y
reactivo por el intercambio del material a tirosina, es lógico que estos dos aminoácidos
la hora de extraer los compuestos haya tuvieran un resultado positivo.
generado que los resultados sean
erróneos.

3.5 PRUEBA DE EHRLICH

La presencia de anillos aromáticos

fenólicos o nitrogenados en la cadena
lateral de los Aminoácidos se puede
identificar mediante la reacción con ácido
sulfanílico y nitrito de Sodio por Ilustración 7. Esquema general de la
formación de sales de Diazonio estructura de la Histidina.
fuertemente coloreadas (rojo o color
gracias a que la histidina posee un anillo
violeta) permitiendo así detectar la
nitrogenado en su cadena lateral,
presencia de Tirosina e Histidina libres o
formando péptidos y proteínas.

Ing. Yanira G, Jorge V (2014)

Ilustración 8. Esquema general de la

Esquema 5. Reacción de Ehrlich estructura de la Tirosina.
Para esta prueba el resultado positivo tenía
y a que la tirosina posea un anillo fenólico en
que darse para la albumina y la Gelatina, su cadena lateral.
proteínas que contienen en su interior
aminoácidos como la histidina y la tirosina. Sin embargo, también se obtuvieron
resultados positivos para el Triptofano,
quien, si contiene un anillo nitrogenado en
su estructura, (remítase a la ilustración 4).

Mientras que la asparagina que también

obtuvo resultados positivos no posee
ninguna de estas cualidades (remítase a la
ilustración 2), así que se descarta como una
Ilustración 6. Esquema general de la muestra contaminada.
estructura del colágeno que conforma la
gelatina.
 3.6 MUESTRA PROBLEMA 1 3.7 MUESTRA PROBLEMA 2

PRUEBA RESUL- PARA QUE PRUEBA RESUL- PARA QUE

TADO SIRVE TADO SIRVE
XANTOPROTEÍCA +++ Anillos XANTOPROTEÍCA +++ Anillos
aromático aromático
(tirosina) (tirosina)
BIURET --- Proteínas con BIURET ++ Proteínas con
enlaces enlaces
peptídicos peptídicos
NINHIDRINA +++ Aminoácidos NINHIDRINA +++ Aminoácidos
Alfa Alfa
HOPKINS +++ Proteínas HOPKINS ++ Proteínas
(Triptofano) (Triptofano)
EHRLICH --- Anillos EHRLICH --- Anillos
aromáticos aromáticos
fenol o nitro fenol o nitro
(tirosina- (tirosina-
histidina) histidina)

Tabla 2. Resultados Cualitativos de la Tabla 2. Resultados Cualitativos de la

Muestra Problema 1. Muestra Problema 2.

Si examinamos los resultados positivos de al examinar la tabla podemos ver que

la M.P.1 podemos concluir que esta pese a lo que el docente afirmo en el
muestra no es una proteína, sino más bien laboratorio la muestra da positivo para
un aminoácido (según la prueba proteínas (prueba de Biuret) y también
ninhidrina) que contiene un anillo da positivo para aminoácidos (prueba
aromático (según la prueba con ninhidrina), al asumir que contiene
xantoproteíca) nitrogenado que compone una proteína y esta da positivo para
su cadena lateral de indol por lo tanto este Triptofano (prueba Hopkins) se asume
aminoácido corresponde al Triptofano. que esta proteína es albumina, mientras
que por parte del aminoácido se puede
Este es un aminoácido esencial en la
decir que contienen anillos aromáticos
nutrición humana. Es uno de los 20
(prueba xantoproteíca) por lo tanto puede
aminoácidos incluidos en el código
ser tirosina, sin embargo la prueba
genético (codón UGG). Es esencial para
Ehrlich salió negativa por lo tanto es
promover la liberación de la
posible que en esta ocasión también
neurotransmisora serotonina, involucrado
contenga Triptofano en forma de
en la regulación del sueño y el placer. Su
aminoácido libre.
punto isoeléctrico se ubica a pH=5.89. La
falta de triptófano puede contribuir
negativamente a cuadros de ansiedad,
insomnio y estrés.
4. Conclusiones Todas aquellas sustancias que presentan
al menos un grupo amino y uno carboxilo
Los aminoácidos son compuestos libre, reaccionaran con la ninhidrina. La
orgánicos que contienen grupos amino y positividad se manifiesta por la aparición
carboxilo, por lo tanto, poseen de un color violeta o amarillo. Debido a
propiedades acidas y básicas. que las proteínas y los aminoácidos,
poseen esta característica, la reacción
Las proteínas, son importantes en las sirve para identificarlos. Algunas
organizaciones estructurales y funcionales soluciones de amonio y aminas, dan la
de células y tejidos. Todas las enzimas, coloración característica, aparentemente
fundamentales para las reacciones debido a una oxidación y reducción
bioquímica, y todos los anticuerpos, intramolecular de la ninhidrina en
esenciales en los procesos de presencia de amoníaco. Los aminoácidos
inmunidad, son proteínas. porina e hidroxiprolina, que no poseen
grupo amino sino imino (-NH-), dan un
La prueba Xantoproteíca y de Ehrlich se color rojo que pasa rápidamente a
usa para reconocer proteínas con amarillo (Lozano, 2016). La reacción se
aminoácidos portadores de grupos muestra en la Ilustración 2.
aromáticos, fenólicos o nitrogenados. La
de Biuret y Ninhidrina, para identificar
proteínas con dos o más enlaces
peptídicos, y la prueba de Hopkins-Cole
para reconocer α -aminoácidos libres con
anillo indólico.

En aquellos casos donde da negativa la

prueba de Biuret y da positiva la de
Ninhidrina, como se observa en la
Fenilalanina, Glicina, Histidina,
Triptófano, tirosina y muestra problema
1, indica que no hay proteínas, pero si hay
aminoácidos libres
El reactivo Biuret solo funciona para
detectar la presencia de proteínas, mas no
incluye aminoácidos, puesto que el
Biuret, reacciona con enlaces peptídicos
formados por la unión de aminoácidos
propios de las proteínas.

Ilustración 2. Reacción de la prueba de

5. Preguntas Complementarias ninhidrina

5.1. Describa en detalle la reacción entre 5.2. ¿Qué proteínas darán positiva la
un α-aminoácido y la ninhidrina. prueba de Hopkins-Cole?
Los derivados indol dan productos de
condensación cuando se tratan con
aldehídos aromáticos en presencia de
ácido sulfúrico o clorhídrico. El
aminoácido triptófano contiene un grupo
indol y por eso la reacción es específica
para triptófano (Escalante, 2014).
5.3. En la reacción Xantoproteica: ¿Qué
sucede cuando la solución alcalina de
hidróxido de sodio está en contacto con
la mezcla de ácido nítrico y la solución
de aminoácido o proteína? Explique.
Los compuestos que presentan bencenos
sustituidos (con grupos unidos al anillo
bencénico), al reaccionar con el ácido
nítrico concentrado forman compuestos
nitrados de color amarillo, el cual se
intensifica en medio alcalino (Lozano,
2016).
5.4. Interprete los resultados de Ilustración 2. Reacción de la prueba de
estos experimentos describiendo ninhidrina
los procesos físicos y las
reacciones químicas
involucradas.
Prueba de Biuret
Es una prueba general para polipéptidos y
Reacción con ninhidrina proteínas, ya que sirve para reconocer las
El grupo alfa-amino de los aminoácidos uniones peptídicas. La positividad se
forma complejos coloreados con la manifiesta por la aparición de una
ninhidrina: violeta azuloso en coloración violeta. La formación de un
aminoácidos cuyo grupo amino es complejo de coordinación entre los
primario; amarillo para la prolina e cationes cúpricos en medio alcalino con
hidroxiprolina y café para la Asparagina las uniones peptídicas (Rodriguez, 1987).
que tiene un grupo amido en la cadena
lateral. Esta reacción también identifica
los grupos alfa-amino libres presentes en
péptidos y proteínas (Lozano, 2016).

Ilustración 3. Reacción de Biuret.

Reacción Xantoproteica Kensel. Mathews, Christopher. Ahern,
Los anillos aromáticos presentes en 2004).
algunos aminoácidos reaccionan con
ácido nítrico concentrado formando
nitroderivados de color amarillo o
anaranjado, por lo cual esta reacción
permite reconocer la presencia de
Tirosina, Fenilalanina y Triptófano
(Lozano, 2016).

Ilustración 4. Reacción Xantoproteica

Ilustración 6. Reacción de Hopkins-Cole
Reacción de Ehrlich
La presencia de anillos aromáticos 6. Bibliografía
fenólicos o nitrogenados en la cadena
lateral de los aminoácidos, se puede Escalante, K. (2014). Pruebas generales
identificar mediante la reacción con ácido para aminoacidos y proteinas.
sulfanílico y nitrito de Sodio, por https://www.academia.edu/9554305/
formación de sales de Diazonio PRUEBAS_GENERALES_PARA_
fuertemente coloreadas, permitiendo así, AMINOACIDOS_Y_PROTEINAS
detectar la presencia de Tirosina e Lozano, J. (2016). Ensayos para
Histidina libres o formando péptidos y reconocimiento de aminoácidos.
proteínas (Van Holde, Kensel. Mathews, Universidad de Bogota.
Christopher. Ahern, 2004).
Morán, A. (2016). Aminoácidos, péptidos
y proteínas.
https://www.dciencia.es/aminoacido
s-peptidos-y-proteinas/
Rodriguez, J. (1987). Reacciones de
Ilustración 5. Reacción de Ehrlich
identificación de aminoácidos y
proteínas. (Universidad & A. de N.
Reacción de Hopkins-Cole León, Eds.). Mexico D.F.
El anillo indólico presente en la cadena Van Holde, Kensel. Mathews,
lateral de los alfa-aminoácidos libres o Christopher. Ahern, K. (2004).
haciendo parte de péptidos y proteínas, se Bioquimica. In Pearson (Ed.),
puede reconocer mediante reacción con el Bioquimica (3a ed.). España.
ácido glioxílico a pH ácido, puesto que
forma complejos de coloración violeta o Ing. Yanira G, Jorge V; Leticia G. (2014)
amarillo violeta, permitiendo así Caracterización fisicoquímica y de
identificar al triptófano (Van Holde,
contenido de proteínas de extractos
fluidos del ostión mangle.
Editorial Revista cubana de química vol.
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