Tesis Trypanosoma Guayaquil Ecuador 2018

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UNIVERSIDAD CATÓLICA

DE SANTIAGO DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE EDUCACIÓN TÉCNICA PARA EL DESARROLLO

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TEMA:

Prevalencia de Tripanosoma sp. en el ganado bovino en las zonas


rurales de la provincia del Guayas (Salitre – Samborondón).

AUTOR:

PEÑAFIEL BOWEN, GILBERTO ALEJANDRO.

Trabajo de titulación previo a la obtención de grado de

MÉDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA

TUTOR:

Dra. Lucila Sylva Moran, MS. c

Guayaquil, 13 de septiembre de 2018.


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FACULTAD DE EDUCACIÓN TÉCNICA PARA EL DESARROLLO

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

CERTIFICACIÓN

Certificamos que el presente trabajo de titulación, fue realizado en su totalidad


por Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro, como requerimiento para la
obtención del título de Médico Veterinario Zootecnista.

TUTOR

_______________________________

Dra. Lucila Sylva Moran, MS. c

DIRECTOR DE LA CARRERA

____________________________________

Ing. Franco Rodríguez, John Eloy Ph. D.

Guayaquil, 13 de septiembre de 2018.


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FACULTAD DE EDUCACIÓN TÉCNICA PARA EL DESARROLLO

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

DECLARACIÓN DE RESPONSABILIDAD

Yo, Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro.

DECLARO QUE:

El Trabajo de Titulación, Prevalencia de Tripanosoma sp. en el ganado


bovino en las zonas rurales de la provincia del Guayas (Salitre –
Samborondón), previo a la obtención del título de Médico Veterinario
Zootecnista, ha sido desarrollado respetando derechos intelectuales de
terceros conforme las citas que constan en el documento, cuyas fuéntes se
incorporan en las referencias o bibliografías. Consecuentemente este trabajo
es de mi total autoría.

En virtud de esta declaración, me responsabilizo del contenido, veracidad y


alcance del Trabajo de Titulación referido.

Guayaquil, 13 de septiembre de 2018.

El AUTOR

____________________________________

Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro.


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DE SANTIAGO DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE EDUCACIÓN TÉCNICA PARA EL DESARROLLO

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

AUTORIZACIÓN

Yo, Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro.

Autorizo a la Universidad Católica de Santiago de Guayaquil a la publicación


en la biblioteca de la institución del Trabajo de Titulación, Prevalencia de
Tripanosoma sp. en el ganado bovino en las zonas rurales de la provincia
del Guayas (Salitre – Samborondón), cuyo contenido, ideas y criterios son
de mi exclusiva responsabilidad y total autoría.

Guayaquil, 13 de septiembre de 2018.

El AUTOR

___________________________________

Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro.


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CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

CERTIFICACIÓN URKUND

La Dirección de las Carreras Agropecuarias revisó el Trabajo de Titulación


“Prevalencia de Tripanosoma sp. en el ganado bovino en las zonas
rurales de la provincia del Guayas (Salitre – Samborondón).”, presentado
por el estudiante Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro, de la carrera de
Medicina Veterinaria y Zootecnia, donde obtuvo del programa URKUND, el
valor de 0 % de coincidencias, considerando ser aprobada por esta dirección.

Fuente: URKUND-Usuario Kuffó García, 2018.


Certifican,

_____________________________ ____________________________
Ing. John Franco Rodríguez, Ph. D Ing. Alfonso Kuffó García, M. Sc.
Director Carreras Agropecuarias Revisor – URKUND
UCSG-FETD

V
AGRADECIMIENTOS

La vida nos presenta muchos retos, pero el sentido de esta consiste en


alcanzarlos. Por este motivo, quiero agradecer a todos aquellos que han
hecho posible la culminación de este proyecto de vida.

En primer lugar, agradezco a Dios por permitirme vivir y disfrutar esta


maravillosa experiencia, por hacerse presente en cada uno de mis pasos y
por la hermosa familia que me dio.

Agradezco a mis padres, a las personas más importantes en mi vida. Gracias


a ellos por su amor, su dedicación y su preocupación por mi desarrollo en este
proyecto y durante toda mi carrera.

A mí, madre, por tu disposición a acompañarme cada larga y agotadora noche


de estudio y por haberme enseñado que con esfuerzo, trabajo y constancia
todo se consigue.

A mí, padre por ser fuente de motivación e inspiración para poder superarme
cada día más, él es mi mejor ejemplo que yo eh tenido.

A mí, novia por su apoyo incondicional en todo mi proceso como estudiante y


por su amor desmedido.

Y finalmente, a la institución y a mis beneméritos maestros por sus esfuerzos


y conocimientos transmitidos, que permitieron que me convierta en un feliz
profesional.

VII
DEDICATORIA

Este trabajo de titulación quiero dedicarlo a la persona más importante en mi


vida, aquella que me ha brindado su amor, sus enseñanzas y todo su sacrificio
durante toda mi vida, para que yo pueda ver mis sueños transportados en una
realidad.

Eres una mujer que me llena de orgullo, y esta meta cumplida no es solo mía
es tuya. Me enseñaste a no desfallecer ni rendirme ante nada y a siempre
perseverar a través de tus sabios consejos.

Dedicado a ti, amada madre.

VIII
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CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN

_____________________________

Dra. Lucila Sylva Moran, M. Sc.

TUTOR

_____________________________

Ing. Franco Rodríguez John Eloy, Ph. D.

DIRECTOR DE CARRERA

____________________________

Ing. Caicedo Coello Noelia Carolina, M. Sc.

COORDINADOR DEL ÁREA

IX
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CALIFICACIÓN

____________________________________

Dra. Lucila Sylva Moran, MS. c

TUTOR

X
ÍNDICE GENERAL

1 INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 2

1.1 Objetivos ................................................................................................... 3

1.1.1 Objetivo general. ............................................................................. 3

1.1.2 Objetivos específicos. ..................................................................... 4

2 MARCO TEÓRICO ............................................................................................ 5

2.1 Tripanosomiasis ........................................................................................ 5

2.2 Clasificación taxonómica ........................................................................... 6

2.3 Morfología ................................................................................................. 8

2.4 Ciclo bilógico ............................................................................................. 9

2.5 Transmisión ..............................................................................................12

2.6 Patogenia .................................................................................................13

2.7 Sintomatología..........................................................................................13

2.8 Diagnóstico...............................................................................................14

2.8.1 Toma de muestras. ........................................................................15

2.8.2 Frotis sanguíneo. ...........................................................................17

2.8.2.1 Procedimiento. ...............................................................................17

2.8.3 Métodos directos............................................................................18

2.8.3.1 Extensión de sangre húmedas. ......................................................18

2.8.3.2 Extensión de gota gruesa...............................................................19

2.8.3.4 Método de Giemsa. ........................................................................21

2.8.3.6 Método de Leishman......................................................................22

2.8.4 Métodos moleculares .....................................................................23

2.8.5 Diagnóstico Diferencial ..................................................................24

2.8.4.1 Anaplasma. ..........................................................................................25

2.8.4.2 Babesiosis. ..........................................................................................25

2.8.4.3 Carbunco. ............................................................................................25

XI
2.8.4.4 Leptospirosis........................................................................................25

2.8.4.5 Botulismo bovino (Mal del Aguaypé). ...................................................26

2.8.4.6 Rabia desmodina. ................................................................................26

2.8.4.7 Fasciola hepática. ................................................................................26

3 MARCO METODOLÓGICO ............................................................................ 27

3.1 Localización ..............................................................................................27

3.2 Ubicación..................................................................................................27

3.3 Características climáticas .........................................................................28

3.4 Materiales .................................................................................................28

3.5 Población de estudio ................................................................................29

3.6 Tipo de estudio .........................................................................................30

3.7 Análisis estadístico ...................................................................................30

3.8 Variables de estudio .................................................................................30

4 RESULTADOS ................................................................................................ 33

4.1 Sintomatología de las ganaderías bovinas ...............................................35

5 DISCUSIÓN..................................................................................................... 45

6 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ................................................... 46

6.1 Conclusiones ............................................................................................46

6.2 Recomendaciones ....................................................................................46

BIBLIOGRAFIA

ANEXOS

XII
ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1. Clasificación de las especies del género Tripanosoma sp............................7


Tabla 2. Pruebas en las que se dispone para el diagnóstico de la tripanosomiasis por
detección de infección activa………………………....................................................20
Tabla 3. Pruebas moleculares: pruebas en las que se dispone para el diagnóstico
de la tripanosomiasis por propagación del parasito y diagnostico serológico............22
Tabla 4. Según su prevalencia en general……………………………………….....35
Tabla 5. Según el grado de emaciación………………………………………..............36
Tabla 6. Clasificación según su grado de Anemia: Hda “El Encanto Uno”………….38
Tabla 7. Clasificación según su grado de Anemia: finca “La Germinia”...……………38
Tabla 8. Clasificación según su grado de Anemia: Hda. “El Encanto Dos”…………39
Tabla 9. Clasificación según su grado de Anemia: Hda. “El Destino”………………40
Tabla 10. Según el grado de Anorexia en las diferentes ganaderías.........................41
Tabla 11. Presencia en “La Finca La Germinia” ...………………………...................42
Tabla 12. Anova Unilateral: C. Co., °C., Anemia, Anorexia, Edema,
Ganglios................................................................................................................... 42
Tabla 13. Método Tukey…………………………………………………………………43
Tabla 14. Método Ficher…………………………………………………………….……44

XIII
ÍNDICE DE GRÁFICOS

Gráfico 1. Prevalencia de tripanosoma, Babesia sp. y Anaplasma marginale en la


Hda. El Encanto 1 en Samborondón……………………………………………………33

Gráfico 2. Prevalencia de tripanosoma, Babesia sp. y Anaplasma marginale en la


Hda. La Germinia en Samborondón…………………………………………………….33

Gráfico 3. Prevalencia de tripanosoma, Babesia sp. y Anaplasma marginale en la


Hda. El encanto 2 en Salitre-Candilejo………………………………………………….34

Gráfico 4. Prevalencia de tripanosoma, Babesia sp. y Anaplasma marginale en la


Hda. El destino en Salitre- candilejo…………………………………………………….34

Gráfico 5. Prevalencia de las enfermedades en general……………………………..35

Gráfico 6. Presencia de emaciación (descompensación corporal) en los animales en


observados…………………………………………………………………………………37

Gráfico 7. Clasificación según método de la “FAMACHA”: Hda. “El Encanto Uno”...38

Gráfico 8. Clasificación según método de la “FAMACHA”: “Finca La Germinia”…...40


Gráfico 9. Clasificación según método de la “FAMACHA”: Hda. “El Encanto Dos” 40
Gráfico 10. Clasificación según método de la “FAMACHA”: Hda. “El Destino”……41
Gráfico 11. Presencia de anoréxica en la ganadería de la Hda. El Encanto Uno, la
finca la Germinia, la Hda El Encanto Dos y la Hda. el Destino…………………………42

Gráfico 12. Presencia en la ganadería de la Finca “La Germinia”……………………42

XIV
RESUMEN

El presente trabajo investigativo titulado “Prevalencia de


Tripanosoma sp. en el ganado bovino de las zonas rurales de la provincia
del Guayas (Salitre – Samborondón)”, se lo realizó en 3 haciendas y una
finca del sector de Salitre y Samborondón de la provincia del Guayas, donde
se tomó las muestras de sangre para ser analizadas en el Laboratorio
Veterinario de la Universidad Católica de Santiago de Guayaquil en los meses
de junio, julio y agosto del 2018. Para este trabajo de investigación se
obtuvieron muestras de 132 cabezas de ganado bovino y para el análisis de
laboratorio se utilizó la técnica de Giemsa.
El objetivo principal de este trabajo fue determinar la prevalencia de
Trypanosoma sp., en bovinos con sintomatología de la enfermedad.
Los resultados evidencian que no hubo muestras positivas para Tripanosoma,
en los animales estudiados en estos sectores de la Provincia del Guayas, pero
si se presentó evidencia de Babesia sp. y Anaplasma marginale.

Palabras Clave: Tripanosomiasis, toma de muestras sanguíneas, frotis


sanguíneo, método de tinción de Giemsa y prueba de Woo.

XV
ABSTRAC

The present investigative work entitled "Prevalence of Trypanosoma sp.


in cattle in rural areas of the province of Guayas (Salitre - Samborondón), "was
carried out in 3 cattle ranches and a 1 farm in the saltpeter and Samborondón
sector in the province of Guayas, where blood samples were taken to be
analyzed in the Veterinary Laboratory of the Catholic University of Santiago de
Guayaquil in the months of June, July and August of the present year, 2018.
For this research work samples of 200 heads of cattle were obtained and for
the laboratory analysis the Giemsa technique was used. The main objective of
this work was to determine the prevalence of Trypanosoma sp., In apparently
healthy cattle in rural areas of the province of Guayas in 2 haciendas in the
Salitre and Samborondón cantons. The results show that there were no
positive samples for Trypanosoma, in the animals studied in this sector of the
Province of Guayas, but there was evidence of Babesia sp. and Anaplasma
marginale.

Key words: Trypanosomiasis, blood sampling, blood smear, Giemsa stain


method and Woo test.

XVI
1 INTRODUCCIÓN

Con esta investigación se aportará para el estudio de la tripanosomiasis


bovina en nuestro medio, siendo las zonas escogidas para esta investigación
zonas tropicales secas y húmedas; que es el medio adecuado para la
proliferación de la enfermedad.

Estos parásitos afectan a los animales domésticos y de granja como


équidos, camellos, bovinos y búfalos; y salvajes como coati (Nasua nasua),
venado cola blanca (Odocoileus virginianus) y capibara (Hydrochoerus
hydrochaeris) que son hospedadores definitivos y también pueden ser de
reservorio. Como en el caso de la prevalencia de la tripanosomiasis en el
ganado bovino, ya que la distribución de estos parásitos es a nivel mundial,
principalmente en áreas tropicales y subtropicales de Asia, África y América;
que tiene en su mayoría presencia de este en lo que es el Centroamérica y
Sudamérica, donde se propaga hacia nuevas áreas en forma de ondas
epizoóticas.

La tripanosomiasis en el ganado bovino es una parasitósis hemática


patógena dependiendo de la especie que ataque a estos, si es el Tripanosoma
vivax, que es altamente patógeno ocasiona una considerable mortalidad y los
que no mueren padecen de un enflaquecimiento progresivo quedando en
estado crónico como portadores, permitiendo que prolifere cada vez más la
enfermedad. En otros tipos de tripanosomiasis, el bovino padece en forma
leve o actúa como portador, por ejemplo, el Tripanosoma evansi.

La tripanosomiasis manifiesta signos clínicos no patognomónica, es decir


no produce síntomas lo que ocasiona confusión en el diagnóstico. Los signos
son: fiebre, anemia, emaciación, edema, trastornos digestivos (diarrea) y
trastornos nerviosos (convulsiones y dificultad en la locomoción); pueden
presentarse de forma aguda, subaguda y crónica. La forma crónica es común
en bovinos y búfalos con aparente recuperación.

2
De acuerdo a lo anterior, esta enfermedad es importante, debido a los
problemas que presentan los hatos ganaderos afectados como alta
mortalidad, disminución de los parámetros reproductivos y productivos, así
mismo, la tripanosomiasis tiene algunos efectos directos en lo que
corresponde a la producción de leche y carne en la actualidad.

La OIE (2015) en Ecuador no hay reportes de la presencia de


tripanosomiasis en bovinos, sin embargo un estudio realizado por Ortega
(2014) en un centro de faenamiento de Quito reportó mediante PCR una
prevalencia del 30,26 % (46/152) de casos positivos a Tripanosoma vivax en
el ganado ecuatoriano, lo cual permite evidenciar la importancia del estudio
de tripanosomiasis en Ecuador, y a su vez datos epidemiológicos confiables
permitirán crear estrategias de control y un correcto tratamiento, con el fin de
proteger la industria ganadera.

Considerando que el Tripanosoma vivax está distribuido en algunas de las


regiones ganaderas tradicionales del Ecuador por tal razón el impacto
económico que tiene esta enfermedad en la producción pecuaria, se hace
necesario realizar algunos estudios de diferente naturaleza en cuanto a
prevalencia, distribución, virulencia, patogenicidad e identificación de las
mismas en los diferentes áreas o partes del Ecuador.

1.1 Objetivos

1.1.1 Objetivo general.

Determinar la prevalencia de Trypanosoma sp., en bovinos con


sintomatología a fines de la enfermedad en las zonas rurales de la provincia
del Guayas en 3 haciendas y una finca de los cantones Salitre y
Samborondón.

3
1.1.2 Objetivos específicos.

• Identificar la presencia de Trypanosoma sp., en ganado bovino con


sintomatología a fines de la enfermedad en zonas de Salitre y
Samborondón mediante el método de microscopia directa.

• Relacionar los datos obtenidos sobre las muestras en estas zonas de


Salitre y Samborondón con sus diferentes variables.

4
2 MARCO TEÓRICO

2.1 Tripanosomiasis

Tripanosomiasis es un término colectivo que se aplica a un grupo de


enfermedades del hombre y de los animales, producidas por una o más
especies de protozoarios parásitos unicelulares pertenecientes al género
Trypanosoma. La tripanosomiasis bovina es una enfermedad infecciosa del
ganado provocada por uno, o más, de los siguientes tripanosomas:
Tripanosoma congolense, Tripanosoma vivax, Tripanosoma evansi,
Tripanosoma brucei. También se ha encontrado en el ganado Tripanosoma
simiae y Tripanosoma uniforme (Miranda y Gonzales, 2010, P.5).

Los tripanosomas tienen una variedad diferente en formas del hospedador


invertebrado, y en los hospedadores vertebrados las células toman una forma
característica llamada tripomastigote, donde el flagelo corre de atrás hacia
adelante de la célula y se conecta por una membrana ondulante (Soulsby
1987 P.521).

El ciclo vital de los trypanosomas en las moscas tse-tsé implica el


desarrollo cíclico durante un periodo de tiempo variable, según la especie y la
temperatura ambiente. T. vivax completa su ciclo de desarrollo en la
probóscide y la faringe, y puede ser transmitido (como tripanosomas
metacíclicos) durante la primera semana desde la picadura infectiva inicial
(Useche, 2010, p. 32).

La enfermedad también es conocida como “Surra”, “Mal de Caderas”,


“Murrina” y “Derrengadura”, nombres designados de acuerdo a la región. Este
hemoprotozoario es de importancia veterinaria debido a la capacidad de
infectar a gran variedad de mamíferos que incluyen equinos, camélidos,
bovinos, búfalos y ciervos (Suazo, 2015, p. 3).

5
2.2 Clasificación taxonómica

El género Trypanosoma, pertenece a Subphylum: Mastigophora, clase:


Zoomastigophora, orden: Kinetoplastida, suborden: Trypanosomatida, familia:
Trypanosomatidae. A su vez se dividen en dos secciones o tipos de acuerdo
a su forma de transmisión dentro del vector: Salivaría, son aquellos
transmitidos a través de la inoculación de fluidos contenidos en las glándulas
salivares de dípteros y Stercoraria, transmitidos por medio de heces
depositadas en el sitio de alimentación por parte de triatominos (Suazo, 2015,
p. 3).

En América Latina, existen cuatro especies de tripanosomas de


importancia médica y económica para la producción pecuaria: Trypanosoma
vivax, Trypanosoma evansi, Trypanosoma equiperdum y Trypanosoma cruzi.
Se clasifican en dos secciones: Stercoraria, representado por Tripanosoma
cruzi que es autóctona de América, integrado por las otras tres especies antes
mencionadas y que fueron introducidas al continente americano por el hombre
a través de animales domésticos (Desquesnes, 2004).

6
TABLA 1. Clasificación de las especies del género Tripanosoma sp.
Sección Subgénero Especie Subespecie
Salivaria Duottonella Trypanosoma vivax
T. uniforme
Trypanozoon Trypanosoma evansi,
T. equiperdum
T. brucei T. b. brucei,
T. b. rhodesiense
T. b. gambiense
Nannomonas Trypanosoma simiae
T. godfreyi
T. congolense T. c. (savannah)
T. c. (forest)
T. c. (Kilifi)
T. c. (Tsave)
Pycnomonas Trypanosoma suis
Tejeraia Trypanosoma rangeli
Stercoraria Schizotrypanum Trypanosoma cruzi
T. dionisi
Megatrypanum Trypanosoma theileri
T. melophagium
T. mazamarum
T. ingens
Herpetosoma Trypanosoma lewisi
T. musculi
T. microti
Fuente: Desquesnes, 2004
Elaborado: EL Autor.

7
2.3 Morfología

Estos protozoarios, pertenecientes a la clase mastigophora, tienen el


cuerpo limitado por una pared fija o periplasto, provistos de órganos
locomotores y prehensores: flagelos y en ocasiones membrana ondulante.
Formas ovoides, piriformes o fusiformes. En el citoplasma presentan: K1
núcleo con nucléolo y membrana nuclear; el blefaroplasto, constituido por
corpúsculos cromáticos libres o sobre la membrana nuclear; de allí parte un
axolicma que a su vez se continua con los flagelos; el cuerpo para-basal es
una masa cromática; el cinetonúcleo o cinetoplasio: la unión del cuerpo para-
basal y del blefaroplasto, como se presenta en algunos flagelados; el Axostilo
es una pieza rígida localizada desde el blefaroplasto hasta el extremo
posterior del cuerpo.

Figura 1. Diagrama esquemático de un Trypanosoma.


A-Flagelo anterior, B- Cito esqueleto, C- Núcleo, D-mitocondrias, E- Kinetoplasto, F-
Glicosoma, G-bolsillo flagelar, H- Cuerpo para basal, I- Aparato de Golgi, J. Retículo
endoplasmatico, K- Membrana ondulante, L-Flagelos accesorios de la M. ondulante,
M- Flagelo accesorio unido a la Célula.
Fuente: Arias, L., 2005, p.17
Elaborado: El autor.

8
2.4 Ciclo biológico

El Trypanosoma vivax tiene un periodo de incubación variable (de 4 a 40


días) y es considerado menos virulento para el ganado. Parece haber una
variación marcada en la virulencia con diferentes cepas de T. vivax, pero sigue
siendo la causa más importante. En caballos la enfermedad no es grave y es
crónica en perros. Resulta difícil encontrar T. vivax en frotis sanguíneo, pero
no así en frotis del contenido de ganglios linfáticos (Cano, 2008, p,6).

Generalmente, se extiende por áfrica transmitiéndose por las moscas tse-


tsé también en américa central y américa del sur de la cual se transmite por
las moscas picadoras (Martínez y Rojo, 1987, p.532).

El Trypanosoma evansi se transmite mecánicamente mediante muchos


insectos hematófagos, especialmente las de las moscas picadoras y moscas
de establo tales como Chrysops sinensis, tabuanus sitriatus, t. rubidus,
Stonoxys carcitrans y S. índice. Sin embargo, el rol y la eficiencia de estos
vectores está sujeta a varias condiciones, es así como mientras mayor sea la
longitud del tiempo entre las picaduras de estos animales, mayor la
oportunidad de éxito de la enfermedad, esto debido a que el tripanosoma
posee un tiempo limitado en la boca del vector (Arias, 2005, p.17).

El Trypanosoma equiperdum causa una enfermedad venérea en


caballos, llamada “Durina” que se extiende por el norte y sur de áfrica, centro
y sur de américa hace unos años. Se transmite, generalmente por el coito en
rara ocasiones es propagada por moscas picadoras y descargas infectantes
que contaminan las membranas mucosas. El organismo varía en su virulencia;
algunas infecciones nunca llegan a desencadenar síntomas clínicos, mientras
que otras provocan una clínica definitiva. La “durina progresa a través de 3
fases distintas con un periodo de incubación que dura de 2 a 12 semanas o
varios meses. En algunos casos latentes, la enfermedad solo es
desencadenada por otros serios desordenes. (Martínez y Rojo, 1987, p.542).
9
Esta enfermedad cursa generalmente de forma crónica, con lesiones
localizadas en la zona urogenital, anemia, enflaquecimiento progresivo,
edemas y parálisis (Ramírez, 2007, p.13).

El vector de la Trypanosoma cruzi es un insecto hematófago de la familia


Reduviidae, subfamilia Tritominae y géneros Rhodnius, Triatoma y
Panstrongylus, conocidos popularmente como chinches besuconas o con
otros nombres según los países. Estos vectores se infectan al succionar la
sangre del huésped con tripomastigotes sanguíneos circulantes. Estas formas
sufren transformaciones a lo largo del tracto digestivo del vector, las cuales se
dividen en tres fases: formas redondeadas en el estómago, denominadas por
algunos autores como esferomastigotes; epimastigotes en el intestino medio,
que se multiplican intensamente por división binaria y tripomastigotes
metacíclicos, infectantes para el huésped vertebrado. Por lo general, el vector
se torna infectante 20 días después de la ingesta de sangre contaminada y
permanece así toda su vida, la cual es aproximadamente de un año (Guzman,
2015, p.7).

Los triatomíneos infectados, al picar nuevamente al hombre o a los


animales y después de una ingestión abundante de sangre, defecan
fácilmente sobre la superficie. Cuando estas deyecciones se frotan sobre la
piel, contaminan el sitio de la picadura u otro sitio lesionado y los parásitos
penetran al tejido (Botero, 2003, p.15).

El ciclo de vida se inicia cuando el insecto vector (triatomino, chinche)


realiza la obtención de la sangre de un hospedador vertebrado. En ese
momento, ingiere tripomastigotes de que se transforman en epimastigotes en
el intestino del insecto vector. Se multiplican por fisión binaria longitudinal y a
los 10 días se transforman en tripanosomas metacíclicos, localizados en la
porción distal del intestino de la chinche. Cuando el vector ingiere sangre para
alimentarse y libera tripanosomas infectados en sus heces cerca del sitio de
la herida de la picadura. Estos entran al hospedador a través de la herida o
10
de los tejidos mucosos, como la conjuntiva. Las especies de vectores
triatominos más comunes para la tripanosomiasis pertenecen a los géneros
triatoma, Rognius y Panstrongylus. Dentro del hospedador vertebrado, los
tripomastigotes invaden las células cercanas al sitio de la inoculación, donde
se diferencian en amastigotes intracelulares (Concha, 2015, p.23).

Los amastigotes se multiplican por fisión binaria cada 10 horas, lisando la


célula y se diferencian en tripomastigotes y luego se liberan en el torrente
circulatorio. Los tripomastigotes infectan las células de una gran variedad de
tejido y se transforman en amastigotes celulares en nuevos sitios de infección,
las manifestaciones clínicas pueden resultar de este tipo infectivo. Los
tripomastigotes del torrente sanguíneo no se replican a diferencia de los
tripanosomas africanos. La recopilación se reanuda solo cuando los parásitos
entran en otra célula o son ingeridos por otro vector (Concha, 2015, p.23).

Figura 2. Insecto vector realiza la obtención de la sangre de un hospedador.


Fuente: Arias, L., 2005, p. 16.
Elaborado: El autor.

11
2.5 Transmisión

De acuerdo a la transmisión existen dos grupos de tripanosoma:

• Stercoraria: El parasito se transmite a través de in insecto vector al


hospedador mediante la contaminación fecal, en este grupo
pertenecen las especies d: T. cruzi, T. theileri y T. melophagium.
• Salivariana: la enfermedad se transmite por la saliva del vector hacia
el huésped, las especies de este grupo son: T. vivax, T. congélense y
T. brucey (Oñate, 2015, p. 34 y 35).

En el artrópodo considerado como vector intermedio en la transmisión


cíclica del genero Trypanosoma; cuando se infecta el vector, los tripanosomas
pasan por diversos cambios morfológicos, que requieren alrededor de 15 a 35
días, de los cuales se dan a nivel del tracto digestivo anterior y por último en
las glándulas salivales del vector hasta llegar a la forma infectiva que
transmitirá al mamífero por su picadura en el caso del grupo salivariana
(Oñate, 2015, p.35).

En el grupo Stercoraria, en el vector los cambios morfológicos que sufre


el Tripanosoma spp.; ocurren en el tracto digestivo inferior, es decir en el
intestino, ocasionando que las formas infectivas se dirijan hacia el recto, y la
transmisión se da cuando el artrópodo elimina sus heces y las inocula.; Esta
se considera una transmisión no cíclica, cuando se la transmite por vectores
mecánicos, que son insectos picadores como el tábano y Stomoxys, mosca
picadora se infecta y almacena al Trypanosoma sp. en las áreas bucales, ya
que viven por un corto periodo de tiempo; estas transmiten el parasito de un
mamífero a otro mediante su alimentación periódica la cual tiene que ser
rápida ya que los tripanosomas no sobreviven mucho tiempo (Oñate, 2015, p.
35).

12
2.6 Patogenia

Los tripanosomas metacíclicos son inoculados vía intradérmica por las


moscas. Se multiplican en la zona de inoculación dando lugar a una reacción
cutánea local (chancro) que es más pronunciada en los huéspedes con
susceptibilidad completa y que puede no existir o ser muy leve con algunas
cepas o especies de tripanosomas (Useche, 2010, p34).

Los parásitos metacíclicos se transforman en tripanosomastigote en el


interior de los mamíferos y alcanzan el torrente sanguíneo directamente o a
través de los linfáticos, e inician la parasitemia intermitente característica. Su
comportamiento posterior depende principalmente de la especie de
Tripanosoma transmitida. Generalmente, el Tripanosoma vivax se multiplica
en la sangre y se dispersa ampliamente por todo el sistema cardiovascular,
mientras que Tripanosoma congolense tiende a agruparse en vasos
sanguíneos capilares y capilares del corazón, cerebro y músculo esquelético,
siendo infrecuente como causa de parasitemia intensa (Useche, 2010, p.35).

2.7 Sintomatología

El desarrollo de la tripanosomiasis bovina se presenta de forma aguda,


subaguda o crónica. Los animales sometidos a estrés y malnutrición, así como
hembras preñadas y trabajo excesivo, son más susceptibles a la infección.
Los signos típicos o clásicos son: fiebre, anemia, emaciación, hipertrofia de
los nódulos linfáticos, edema, anorexia, trastornos digestivos y/o nerviosos,
seguido por una pérdida de peso (Suazo, 2015, p. 12).

13
Se ha observado que los animales infectados con T. vivax desarrollan
inicialmente un cuadro febril, acompañado de anorexia, aumento de la
frecuencia cardiaca y respiratoria, anemia y progresivamente se tornan
débiles e improductivos. El curso de la enfermedad es generalmente de
evolución crónica y debilitante, con pérdida de condición física, anemia
progresiva, trastornos de la locomoción, palidez de las mucosas,
agrandamiento de los ganglios linfáticos y eventualmente postración y muerte
por la infección que perdura durante meses o años (Ramírez, 2015, p. 37).

En el curso agudo y subagudo se presenta tan rápido que no permite


identificar bien la signología, no obstante, se observa un síndrome febril. Estos
casos agudos, pueden resultar en la muerte. Normalmente los individuos que
desarrollan este tipo de infección son inmunocomprometidos (adultos con
inmunodeficiencia o jóvenes que aún no han desarrollado su capacidad
inmune) o en hospedadores que ingresan en zonas endémicas sin haber
tenido anteriormente contacto con el parásito (Suazo, 2015, p. 12).

En los brotes de T. vivax reportados en Mato Grosso del Sur, Brasil y Santa
Cruz, Bolivia, los bovinos afectados presentaron las tres formas clínicas, la
hiperaguda caracterizada por hemorragias y mortalidad. La crónica donde la
pérdida de peso y el desarrollo de anemia son los signos principales y la forma
subclínica que puede desaparecer sin necesidad de tratamiento. También se
registró la ocurrencia de aborto y cuadros diarreicos (Miranda y González,
2010, p.21).

2.8 Diagnóstico

Para generar un diagnóstico acertado deben realizarse pruebas de


laboratorio ya que los síntomas clínicos generales por infección de
Tripanosoma no son patognomónicos es decir que no se puede establecer
tripanosomiasis solo con los síntomas descritos anteriormente pues estos son
similares a los de otras enfermedades (Aso. Senepol Colombia, 2015, p.3).
14
Existen una gran variedad de pruebas de diagnóstico y los investigadores
tratan aún de mejorar las existentes y de desarrollar otras nuevas. Las
pruebas de diagnóstico actuales varían en cuanto a la sensibilidad y la
especificidad, la comodidad de aplicación y el costo. La elección de una
prueba concreta se regirá por criterios económicos y por la disponibilidad de
personal especializado, pero especialmente por las necesidades del
diagnóstico. Por ejemplo, se aplican diferentes grados de sensibilidad y
especificidad para la confirmación de la infección en un animal individual en
comparación con la detección de la infección a nivel de rebaño. De forma
similar, la/s pruebas de diagnóstico para establecer la prevalencia
parasitológica de la tripanosomiasis es diferente de la requerida para
establecer la presencia de la enfermedad en una zona. Se pueden conseguir
diagnósticos fiables combinando pruebas de diagnóstico apropiadas. Hecho
la interpretación de los resultados de las pruebas diagnósticas sea fiable,
dependerá de la validez de las pruebas y de si las muestras se han
escogido/obtenido de forma adecuada, de si son del tamaño adecuado y de
la forma de realizar las pruebas de diagnóstico. (Manual Terrestre de la OIE,
2013, p. 2)

2.8.1 Toma de muestras.

El examen parasitológico en sangre, se realiza habitualmente para el


diagnóstico de algunas parasitosis hemo-tesiduales como: enfermedad de
Chagas, paludismo, filariasis, tripanosomiasis africana, entre otras. Excepto la
enfermedad de Chagas, las otras parasitosis mencionadas son exóticas para
nuestro medio; pero se debe tener presente que el aumento en la frecuencia
de viajes a diversas partes del mundo, con fines turísticos, laborales u otros,
hacen, por ejemplo, que en los últimos años en nuestro país aumentaran los
casos de pacientes con paludismo, adquiriendo relevancia la realización de
un diagnóstico clínico y de laboratorio correcto de esta parasitosis exótica para
nuestro medio. Por estas razones para los exámenes habituales se deben

15
preparar tanto frotis como gotas gruesas. (Departamento de Laboratorio
Clínico. Hospital de Clínicas. 2004, p.45)

Para la correcta determinación de las enfermedades, es importante que


las muestras sean representativas del o los padecimientos y lesiones que
presenten los animales. Al obtener y manejar de forma correcta alguna
muestra, se estará favoreciendo la calidad del diagnóstico y por ende la
identificación certera, de la enfermedad problema (Narro J., Alcocer S., Pérez
J., Ruiz R., Sandoval R., Gonzales L., 2003).

Para la adecuada recolección de sangre debe tenerse en cuenta el sitio


de punción y el calibre de aguja a utilizar para cada especie como vamos a
utilizar al ganado bovino tenemos que utilizar la vena coccígea como sitio de
punción con una aguja de 14 a 18 c.c. Siempre utilizar aguja y tubo
vacutainner (sistema al vacío), no jeringuilla ya que ésta propicia que se dañe
la muestra por hemolisis y además representa un alto riesgo de bioseguridad
para las personas que las transportan o las manejan en el laboratorio
(Livexlab, 2014, p. 1).
Consideraciones generales para la toma de muestras de sangre:

• No colocar el bisel de la aguja hacia abajo pues imposibilita el paso de


sangre.
• No usar agujas húmedas ya que se hemolizan los glóbulos rojos.
• Utilizar siempre aguja y tubo vacutainner individual por cada animal
• En caso de que se requiera anticoagulante es aconsejable utilizarlo en
polvo y no en forma líquida, pues se diluye la sangre.
• Homogenizar la sangre con el anticoagulante para evitar la formación
de coágulos.
Este sistema manejado en forma adecuada representa un menor riesgo de
Hemólisis de las muestras, con respecto al sistema de extracción con
Jeringuilla. (Livexlab, 2014, p. 1).

16
2.8.2 Frotis sanguíneo.

El frotis es el extendido de una gota de sangre en una lámina


portaobjetos seguida de la fijación de la muestra y posterior tinción con
Giemsa u otros reactivos según el método que vamos a utilizar. (Vega y
Náquira, 2005, p35)

La sangre para el examen, se puede obtener por punción digital,


punción del lóbulo de la oreja o por venoclisis. Si se emplea alcohol al 70%
para desinfectar el punto de punción se esperará que este se evapore
completamente, antes de realizar la punción. (Departamento de Laboratorio
Clínico. Hospital de Clínicas, 2004, p.46)

2.8.2.1 Procedimiento.

a. Colocar una gota de sangre en el extremo de la superficie de una


lámina portaobjetos limpia.
b. Acercar a la muestra el borde de otra lámina portaobjetos,
posesionándola de tal manera que formen un ángulo de 45º y dejar que
la muestra se distribuya en el borde de la lámina.
c. Conservando el ángulo de 45º, deslizar la lámina auxiliar sobre la
superficie de la lámina con la muestra. El extendido de sangre o frotis
debe ser una película fina.
d. Dejar secar a temperatura ambiente.
e. Fijar la muestra con metanol absoluto P.A durante un minuto
f. Colorear con Giemsa u otros reactivos. (Vega y Náquira, 2005, p35)

Otro procedimiento:

a. Se coloca una gota de sangre de 2 a 4 mm de diámetro, a 1 cm de uno


de los extremos de un portaobjetos limpio y sin polvo; se apoya sobre
una mesa o superficie plana, sosteniéndolo firmemente. Se toma un
17
segundo portaobjetos, que se sostiene con el pulgar e índice de la
mano hábil; este portaobjetos extensor se aplica sobre la superficie del
primero en ángulo de 35-45º y deslizándolo en retroceso desde la gota
de sangre, se extenderá con rapidez moderada, hasta que toda la
sangre se haya extendido en una película de mediano espesor.
b. El espesor de la extensión se puede ajustar cambiando el ángulo del
portaobjetos extensor o la rapidez de extensión, o utilizando una gota
más grande o más pequeña de sangre.
c. En las extensiones de espesor óptimo, los leucocitos no deben estar
demasiado próximos y los hematíes pueden superponerse en una parte
de ellas, pero la distribución y separación de los hematíes son buenas
hacia el extremo delgado.
d. El borde del portaobjetos extensor debe ser liso, de no ser así la
extensión presentará flecos con abundantes leucocitos.
e. El frotis debe secarse agitando rápidamente al aire. El secado lento da
lugar a una contracción artificial de las células.
f. El portaobjetos debe etiquetarse, marcando nombre del paciente, con
lápiz en el extremo más grueso de la película de sangre.
(Departamento de Laboratorio Clínico. Hospital de Clínicas, 2004, p.46)

Para diagnosticar la tripanosomiasis se utilizan diferentes métodos clínicos


dividiéndose estas en:

2.8.3 Métodos directos.

2.8.3.1 Extensión de sangre húmeda.

Se realizan colocando una gota de sangre sobre una porta limpia de


microscopio y se cubre con un cubreobjetos. La sangre se examina al
microscopio a un aumento total de ×400 con apertura de condensador,
contraste de fase o contraste de interferencia. Se puede reconocer a los
tripanosomas por su movimiento entre los eritrocitos.

18
La sensibilidad diagnóstica del método es generalmente baja, pero depende
de la experiencia del analista y del grado de la parasitemia (Manual Terrestre
de la Oie.2013, p.4).

2.8.3.2 Extensión de gota gruesa.

Se utiliza para el diagnóstico de babesia y tripanosoma. pero no es


apropiada para la anaplasmosis debido que es difícil de identificar una vez
que se separa de los eritrocitos (Peña y Sandoval, 2014, p.41).

Se hacen depositando una gota de sangre sobre un portaobjeto limpio


de microscopio y extendiéndola sobre un área de 2 cm de diámetro,
aproximadamente, utilizando el borde de otro portaobjeto. El grosor de la
extensión resultante debe ser tal que, cuando se seque, se puedan leer a
través de ella los números de la esfera de un reloj de pulsera. La gota se seca
complemente agitándola rápidamente en el aire y, sin fijación, se
deshemoglobiniza por inmersión en agua destilada durante unos pocos
segundos y se seca antes de teñirla. Debe guardarse un frotis seco y protegido
del polvo, el calor, las moscas y otros insectos. Se tiñe durante 30 minutos
con colorante Giemsa diluido al 4% en una solución salina tamponada con
fosfato, pH 7.2. El tiempo de tinción y la dilución del colorante pueden variar
según el colorante y la técnica. Por consiguiente, es importante comenzar con
las instrucciones del fabricante y variar el tiempo de tinción y la concentración
de la tinción hasta obtener los resultados óptimos (Manual Terrestre de la
Oie.2013, p.3).

19
Tabla 2. Pruebas en las que se dispone para el diagnóstico de la tripanosomiasis por
detección de infección activa.

Clave: +++ = método recomendado; ++ = método adecuado; + = puede utilizarse en ciertas


situaciones, pero el coste, la fiabilidad u otros factores limitan mucho su aplicación; – = no
adecuado para esta finalidad. Aunque no todas las pruebas clasificadas como +++ o ++ han
sido estandarizadas y validadas formalmente, su perfil sistemático y el hecho de que se hayan
utilizado mucho sin resultados dudosos, las hace aceptables.
Fuente: Manual Terrestre de la Oie.2013, p.3.
Elaborado: El autor.

2.8.3.3 Técnica de centrifugación del micro


hematocrito (método de Woo)

Esta técnica es la más usada por razones de tiempo al momento de


diagnosticar Trypanosoma sp. en sangre. Consiste en separar la sangre en
tres fases dependiendo de su gravedad específica mediante la centrifugación
del hematocrito, permitiendo observar al protozoario en la capa leucocitaria,
esto ocurre por la similitud de la densidad del Trypanosoma sp., y la capa
leucocitaria (Woo 1970).

La técnica de centrifugación del micro hematocrito, o método de Woo


(1970), se utiliza mucho para el diagnóstico de la tripanosomiasis animal. Se
basa en la separación de los diferentes componentes de la muestra de sangre

20
dependiendo de su gravedad específica. La técnica de centrifugación del
micro hematocrito es más sensible que otras técnicas de diagnóstico, Aunque
la identificación de las especies de tripanosomas es difícil (Manual Terrestre de
la Oie.2013, p.4.).

Las desventajas se centran en la experticia del operador al momento


de visualizar al Hemoparásitos, y el riesgo de contaminación. La sensibilidad
de la prueba radica en la parasitemia que tenga el animal, debido a que mayor
parasitemia (>700 parásitos/mL) la sensibilidad es del 100%. Se ha visto que
en promedio la prueba tiene una sensibilidad de 200±100 tripanosomas/mL
(Rodriguez, 2017, P17).

2.8.3.4 Método de Giemsa.

Sobre el frotis fijado, extender la solución de Giemsa al 1 por 10;


colorear una hora. Para las coloraciones lentas, diluir el colorante 1:20. En
caso de sub coloración, diferenciar rápidamente con tanino-naranja
(Rodríguez, 1964, p.1125).

Otro procedimiento es que se coloca una gota grande de sangre sobre


un portaobjetos y utilizando el borde de otro portaobjetos, se extiende sobre
un área circular de unos 2 cm de diámetro. Se seca rápidamente abanicando
el portaobjetos en el aire y, sin fijar previamente, se tiñe la preparación durante
30 minutos con una solución de colorante Giemsa al 4% en agua corriente.
Considerando que el tiempo y la dilución de tinción pueden variar en función
del fabricante del colorante y del protocolo concreto que se utilice, se
recomienda empezar siguiendo las indicaciones del fabricante. Tras la tinción,
el portaobjetos se lava suavemente con agua corriente y se observa al
microscopio, usando para ello el objetivo de inmersión 100x. Es fácil
reconocer a los tripanosomas por su morfología general. No obstante, es
posible que hayan resultado dañados en el curso del proceso y ello puede
dificultar la identificación de la especie (González, 2007).

21
2.8.3.5 Método Panóptico.

Sobre el frotis no fijado, extender 15 gotas de sol. de May- Grunwald;


cubrir, para impedir la evaporación; luego de tres minutos, agregar 15 gotas
de agua destilada, dejar un minuto y después reemplazar este colorante sin
lavar por la solución. de Giemsa al 1/10. Colorear durante una hora
(Rodriguez,1964, p.1125).

2.8.3.6 Método de Leishman.

Depositar, sobre un frotis no fijado, 10 gotas de colorante de Leishman;


cubrir; después de un minuto, agregar 20 gotas de agua destilada; dejar
colorear 10 a 30 minutos y lavar; secar (Rodriguez,1964, p.1125).

Tabla 3. Pruebas Moleculares: Pruebas en las que se dispone para el diagnóstico


de la tripanosomiasis por Propagación del parasito y diagnostico serológico.

Clave: +++ = método recomendado; ++ = método adecuado; + = puede utilizarse en ciertas


situaciones, pero el coste, la fiabilidad u otros factores limitan mucho su aplicación; – = no
adecuado para esta finalidad. Aunque no todas las pruebas clasificadas como +++ o ++ han
sido estandarizadas y validadas formalmente, Ident. del agente = identificación del agente;
PCR = reacción en cadena de la polimerasa; IFAT = prueba de inmunofluorescencia indirecta;
ELISA = enzimoinmunoanálisis.
Fuente: manual terrestre de la Oie.2013, p.3.
Elaborado: El autor.

22
2.8.4 Métodos moleculares

Dentro de los métodos moleculares, se encuentra la técnica de


reacción en cadena de la polimerasa (PCR), (Tabla. 4), la cual ha permitido el
análisis de ADN extraído de animales infectados, considerando que la técnica
amplifica la subunidad pequeña del ARN ribosomal (SSU) permitiendo
identificar y diferenciar las especies de tripanosomas clínicamente
importantes, siendo este un método sensible en comparación con otros, ya
que reporta una información detallada siendo esta una herramienta viable. La
ventaja del método de PCR es la alta sensibilidad y especificidad siendo esta
de 1 hemoparásito por mL de sangre (Desquesnes 2004).

Según el tripanosoma en estudio, existen cebadores específicos como


TVWJ1 y TCWJ2 para T. vivax, ESAG para T. evansi, entre otros. En un
estudio realizado por (Cox et al. 2005), utilizó cebadores con las regiones ITS,
mediante una PCR anidada la cual comprende dos rondas de amplificación
con cebadores internos (ITS3 18 e ITS4) y cebadores externos (ITS1 e ITS2),
permitiendo la identificación de cualquier especie de tripanosoma. La
desventaja de esta técnica son los altos costos lo cual no permite que sea una
herramienta de diagnóstico rutinario. Otras técnicas que se han utilizado en
los últimos años son: PCR de polimorfismos de longitud de fragmentos de
restricción (RFLP), amplificación isotérmica en bucle (Rodriguez, 2017,
P17,18).

En un estudio realizado por Oñate, en la ganadería bovina JHOMAR


ubicada en el cantón Pedro Vicente Maldonado al noroccidente de Pichicha
determino la prevalencia de hemoparásitos, de los siguientes géneros:
Anaplasma sp., Babesia sp. y Tripanosoma evansi. La cual se muestrearon
65 cabezas de ganado bovinas, de los cuales se extrajeron 130 muestras
sanguíneas, conformadas por 65 muestras de sangre periférica y 65 muestras
de sangre capilar, para comprobar si se puede observar hemoparásitos en
diferentes muestras sanguíneas. La comprobación demostró que no existe
diferencias significativas, por lo tanto, las dos muestras permiten observas

23
hemoparásitos. La identificación de los hemoparásitos se los realizó por frotis
sanguíneo de gota fina, expuesto a la técnica de tinción giemsa; el hematocrito
se midió a través de muestras de sangre con anticoagulante (EDTA); las PST
se evaluaron en sangre sin anticoagulante. De acuerdo a los resultados
realizados se obtuvo una prevalencia del 23,1% de hematozoarios, el 93,3%
correspondiente al género Anaplasma sp.; el 6,7% a los géneros Anaplasma
sp y Babesia sp.; y el 0 % al género Tripanosoma Evansi (2015, p.6).

En otro estudio realizado por Vargas, en la parroquia Santa Rosa en la


provincia del Napo en tres propiedades de ganadería bovina, se evaluaron 55
muestras de cabezas de ganado bovino utilizando dos técnicas: la primera
técnica la del frotis sanguíneo in situ obtenido de la vena marginal de la oreja
y la del frotis sanguíneo realizado en el laboratorio a partir de las muestras de
sangre tomadas de la vena coccígea enviadas en tubos de ensayo de 4,5ml
con anticoagulante (EDTA). Mediante el frotis in situ determino que el 69,10
% de los animales muestreados en las tres propiedades en estudio
presentaron hemoparásitos distribuidos de la siguiente manera: Babesia
bigemina 43,6 %, anaplasma marginale 20 % eh infecciones mixtas 5,5 % en
donde se encontró una diferencia significativa con mayor presencia de
Babesia bigemina frente a la Anaplasma marginale. No se encontró ningún
animal con tripanosoma ya que no existía el vector principal que es el tábano,
pero la garrapata también es la causante en un menor grado de ser el vector
de dicho hemoparásito (2014, p. 6).

2.8.5 Diagnóstico Diferencial

El diagnóstico se enfoca a la detección de parásitos en sangre. Debido


a que las parasitemia son variables, es preciso tomar muestras en el rebaño
o muestras repetidas si hubiese alguna sospecha. La emaciación y la anemia
también pueden deberse a la Anaplasmosis, Babesiosis, Carbunco
Leptospirosis, Rabia desmodina, Fasciola hepática, y Carbunco. (Vargas,
2014, p. 32).

24
2.8.4.1 Anaplasma.

Los signos de la enfermedad son inapetencia, elevación de la


temperatura corporal. La anemia es notable y a medida que avanza la
enfermedad se observa ictericia y una marcada pérdida de peso. No se
presenta hemoglobinuria, pero la orina puede tener color marrón debido a la
presencia de pigmentos biliares. En hembras preñadas pueden presentarse
abortos (Celi, 2013, p.11).

2.8.4.2 Babesiosis.

Los signos se presentan de 2 a 3 semanas después de la infestación


de la garrapata, el periodo de infestación después de la inoculación de sangre
es de 5 a 12 días (Vargas, 2014, p.25).

Los animales que padecen esta enfermedad presentan fiebre,


hemoglobinuria anemia e ictericia. Tomando en cuenta que los signos clínicos
de anemia no son los que provoca la muerte al animal, en cambio los
metabolitos del parasito activan los mecanismos fisiológicos, los cuales
terminan en una inflamación generalizada, shock y muerte del mismo. (Oñate,
2015, p.26).
2.8.4.3 Carbunco.

Se puede confundir con esta enfermedad debido a la apariencia


macroscópica del bazo (Celi, 2013, p.15).

2.8.4.4 Leptospirosis.

Esta enfermedad puede presentar ictericia, muerte en terneros y


abortos en adultos (Celi, 2013, p.15).

25
2.8.4.5 Botulismo bovino (Mal del Aguaypé).

Caracterizada por debilidad de los miembros posteriores y luego


parálisis. No se observa hipertermia ni ictericia (Celi, 2013, p.16).

2.8.4.6 Rabia desmodina.

Es una enfermedad trasmitida por el desmodun rotundum, se


caracteriza por balanceo, debilitamiento y parálisis del tren posterior, se
tropiezan con facilidad. Al 3 al 5 día cae y no se vuelve a levantar (Celi, 2013,
p.31).

2.8.4.7 Fasciola hepática.

Es una enfermedad causada por la infestación por Fasciola. Se


caracteriza por presentar insuficiencia hepático agudo o crónica. Anemia,
pérdida de peso, edema sub-mandibular y palidez de mucosas (Celi, 2013,
p.32).

26
3 MARCO METODOLÓGICO
3.1 Localización

El presente trabajo de titulación se llevó a cabo en las zonas de Salitre -


Samborondón de la provincia del Guayas, de dos haciendas en cada lugar de
las cuales fueron: la hacienda “El Encanto Uno” y la finca de “La Germinia” en
la zona de Samborondón; la hacienda “El Encanto Dos” y la hacienda “El
Destino” en la zona Salitre en Candilejo. El diagnóstico de laboratorio se
desarrolló en las instalaciones del laboratorio veterinario en la Universidad
Católica de Santiago de Guayaquil para la detección e identificación del
parásito en las muestras obtenidas.

3.2 Ubicación

Gráfico 1. Zona urbana de Samborondón.

Fuente: Google Maps, 2018.

27
Gráfico 2. Zona urbana de Salitre.

Fuente: Google Maps, 2018.

3.3 Características climáticas

En las dos zonas de la provincia del Guayas se presenta el mismo clima


que es sumamente cálido de gran humedad, se ubica en la zona de clima
tropical mega térmico, sintiéndose con mayor rigidez en la época de invierno,
su temperatura diaria oscila entre 26 a 27 º C. y en el verano la temperatura y
grado de humedad descienden considerablemente hasta 20 º C. La existencia
de dos estaciones, seca y lluviosa, marca todo el devenir del territorio. Los
meses de lluvias que van desde diciembre a abril establecen al sistema
territorial como un gran humedal en el que el agua de precipitación se
transforma en el recurso primordial que se relaciona con todas las actividades
de los moradores del cantón.

3.4 Materiales

De campo:

• Ganado mestizo.
• Guantes.
• Jeringas de 3 a 5 ml.
• Agujas de calibre 14 - 18.

28
• Hielera grande.

En el consultorio veterinario de la Universidad Católica.

De Laboratorio:

• Mandil.
• Microscopio.
• Papel.
• Bolígrafo.
• Muestras de sangre venosa.
• Tubo de ensayo.
• Porta objeto.
• Pipetas.
• Algodón.
• Soporte para porta objetos.
• Vaso de Coplin

Reactivos:

• Aceite de inmersión.
• Tinción de giemsa.
• Metanol.

3.5 Población de estudio

Se trabajó con un universo de 200 animales de las cuales con una fórmula
estadística se estableció una muestra finita de 132 muestras sanguinas, la
fórmula que se utilizó fue:

Z2 p x q N

n = _______________________

e2 (N-1) + Z2 p x q

29
Donde:

n = tamaño de muestra, N = población o universo, Z = nivel de confianza, p =


Probabilidad a Favor, q = Probabilidad en contra y e = Error muestral.

3.6 Tipo de estudio


El presente estudio es un diseño cuantitativo no experimental observacional,
transversal y descriptivo que tuvo como objetivo de determinar la prevalencia
de Tripanosomas.
3.7 Análisis estadístico

Para el análisis estadístico, se empleó la herramienta de Excel donde, se


registró todos los datos correspondientes a las variables en estudio y,
mediante una estadística simple, se presentaron los resultados promédiales y
porcentuales.

Número de Casos POSITIVOS

PREVALENCIA = -----------------------------------------------------------x 100

Numero de MUESTRA

3.8 Variables de estudio

Las variables evaluadas fueron las siguiente en este estudio:

Variables dependientes:
• Prevalencia de Tripanosoma.

Variables independientes:

• Sexo: - Mestizas
- Macho • Procedencia:
- Hembra - Hda. “El Encanto Uno”.
• Edad, - Fca. “La Germinia”.

• Raza: - Hda. “El Encanto Dos”.

- Puras - Hda. “El Destino”

30
• Sintomatología:
- C.C. (emaciación). - Edema.
- Anemia. - Inflamación de Ganglios.
- Anorexia.

3.9 Manejo del ensayo.

En el manejo del ensayo se realizó una encuesta general en cada una de


las haciendas para recopilar información acerca del sistema de producción,
manejo sanitario, tipo de alimentación y presencia de otras especies
domésticas. También se realizó una hoja de registros por cada cabeza de
ganado bovino muestreado que se incluyó con las variables como sexo, edad,
raza, procedencia y Sintomatología afines a la enfermedad.

Se procedió después a la recolección de la muestra sanguínea tomando


a la vena coxígea el punto de extracción. Primeramente, nos colocamos el
mandil y los guantes de látex, después para la extracción de la sangre
utilizamos una jeringa de 5ml con una aguja de calibre 16 colocando la aguja
con el bisel hacia abajo porque después imposibilita el paso de la sangre
venosa, al terminar de extraer la sangre se hizo dos procedimientos el primero
se colocó directamente a los tubos de tapa lila para ser llevados a la u. c. s. g.
para hacer el frotis sanguíneo, el segundo, la sangre extraída se lo colocó en
un porta objeto una gota de sangre para hacer el frotis sanguíneo en el campo
y el resto de sangre en los tubos con tapa morada con solución anticoagulante
de EDTA, de la cual se agitó de 5 a 8 veces hasta homogenizar la sangre
después de unos 5 minutos lo colocamos en la hielera con la identificación
del animal para después utilizar la técnica de Giemsa en el consultorio
veterinario de la U.C.S.G.

En el consultorio veterinario donde encontramos los reactivos, en el primer


procedimiento es lo mismo que el segundo, pero utilizamos los capilares para
colocar la gota de sangre en el portaobjeto de la cual fueron fijados con
metanol durante 15 minutos en el vaso de Coplin, se dejó secar unos minutos

31
y se agregó la tinción de Giemsa durante 10 minutos; después se eliminó el
exceso con la solución pH 7 o agua destilada y se los coloco en el escurridor
para secarse con el ambiente; después se colocó una gotita de aceite de
inmersión y colocarle el cubreobjeto.

Realizado este proceso se procedió a su observación directa al microscopio


utilizando el método en zigzag, con los objetivos 40x y 100x.

El segundo procedimiento fue que los frotis obtenidos del campo fueron
fijados con metanol durante 15 minutos, luego se lavó el exceso con solución
de pH 7o agua destilada. Después se agregó la tinción de Giemsa durante 9
minutos, después se eliminó el exceso con la solución pH 7 y se secó al
ambiente; se procedió a su observación directa al microscopio utilizando el
método en zigzag, con los objetivos 40x y 100x.

32
4 RESULTADOS

De acuerdo a los datos obtenidos en este trabajo de investigación con el


método de la tinción Giemsa, para confirmar la presencia de tripanosoma en
las 3 haciendas y 1 finca seleccionadas y con la sintomatología presentada
por los animales muestreados, se procedió al estudio de enfermedades
causadas por hemoparásitos, obteniendo como resultado 132 bovinos
negativos a tripanosoma, de los cuales 21 animales fueron positivos a Babesia
sp. (46,67%), y 23 animales positivos a Anaplasma marginale (51,11%) en la
hacienda “El Encanto Uno”.(Gráfico. 1); y 17 animales fueron positivos a
Babesia sp. (48,57%) y 27 animales positivos a Anaplasma marginale
(77.14%), en la finca “La Germinia” en Samborondón. (Gráfico. 2)

Gráfico 1. Prevalencia de Tripanosoma sp., Babesia sp. y Anaplasma marginale en


la Hda. “El Encanto Uno” en Samborondón.

Elaborado por: El Autor.

Gráfico 2. Prevalencia de Tripanosoma sp., Babesia sp. y Anaplasma marginale en


la Finca “La Germinia” en Samborondón.

Elaborado por: El Autor.

33
En Salitre- Candilejo en la Hda. “El Encanto Dos”, de los cuales 12
animales salieron positivos a Babesia sp. (40%), y 20 animales positivos a
Anaplasma marginale (66,67%). (Gráfico. 3); y en la Hda. “El Destino” 6
animales positivos a Babesia sp. (27,27%) y 16 positivos a Anaplasma
marginale (72,73%). (Gráfico. 4)

Gráfico 3. Prevalencia de Tripanosoma sp., Babesia sp. y Anaplasma marginale en


la Hda. El Encanto Dos en Salitre-Candilejo.

Elaborado: El autor.

Gráfico 4. Prevalencia de Tripanosoma sp, Babesia sp. y Anaplasma marginale en


la Hda. “El Destino” en Salitre- Candilejo.

Elaborado: El autor.

34
En la tabla 4 podemos observar la prevalencia de los tres hemoparásitos de las Hdas.
el Encanto Uno, el Encanto Dos, el Destino y la finca la Germinia; del cual las 132
muestras obtenidas de los animales bovinos negativos a Tripanosoma sp. (0%), 59
muestras salieron positivos a Babesia sp. (44,70%), 85 muestras a Anaplasma
marginale (64,39%); por lo tanto, 18 muestras presentaron ambas enfermedades
Babesia sp. y Anaplasma marginale (13,54%). (Gráfico 5)

Tabla 4. Según su prevalencia en general.

Babesia sp y
Anaplasma Anaplasma
Tripanosoma sp. Babesia sp. marginale marginale
Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo
HEMBRAS 0 108 51 56 69 38 16 3
MACHOS 0 24 8 17 16 9 2 3
TOTAL 0 132 59 73 85 47 18 6
(%) 0 44,70 64,39 13,64
Elaborado por: El Autor

Gráfico 5. Prevalencia de las enfermedades en general.

Elaborado por: El Autor

4.1 Sintomatología de las ganaderías bovinas

En la sintomatología nos dieron resultados como la emaciación que se la


clasificó según su condición corporal por categorías, donde, 1 es estar muy
flaco a 5 que corresponde a estar muy gordo, que podemos observar en la
Tabla 4 que, 10 animales tienen categoría 2 que son flacas (7,58%), 25
animales que tienen categoría 3 que tienen un peso normal (18,84%), 9
animales que tienen categoría 4 que están gordos y 1 animal que tiene
categoría 5 que está muy gordo (7,58%), en la Hda. “El Encanto Uno”; en la
Finca “La Germinia” tenemos 7 animales de categoría 2 que son flacas

35
(6.06%), 18 animales de categoría 3 que tienen peso normal (13,64%) y 10
animales de categoría 4 que están gordos (7,58%), en la zona de
Samborondón. (Tabla 5)

Tabla 5. Según el grado de Emaciación.

Hda. El Encanto Finca La Hda. El encanto


uno Germinia dos Hda. EL Destino
C.C. Total
Ct. Ct. Ct. Ct. Ct. Ct. Ct. Ct.
1y 4y 1y 4y 1y 4y 1y 4y
2 Ct.3 5 2 Ct.3 5 2 Ct.3 5 2 Ct.3 5

Hembras 8 17 9 6 16 9 6 15 7 3 5 6 107

Machos 2 8 1 2 2 1 1 1 0 0 5 2 25

Total 10 25 10 8 18 10 7 16 7 3 10 8 132

(%) 7,58 18,94 7,58 6,06 13,64 7,58 5,30 12,12 5,30 2,27 7,58 6,06 100,00
Elaborado por: El Autor

36
Gráfico 6. Presencia de Emaciación (descompensación corporal) en los animales
observados.

Elaborado por: El Autor.

En Salitre- Candilejo en la Hda. “El Encanto Dos” tenemos 7 animales


con categoría 2 que son flacas (5,30%), 16 animales de categoría 3 que tienen
un peso normal (12,12%) y 6 animales de categoría 4 que están gordas
(5,30%); en la Hda. “El Destino” tenemos 3 animales tienen categoría 2 que
son flacas (2,27%), 11 animales de categoría 3 que tienen un peso normal
(7,58%) y 8 animales de categoría 4 que están gordos (6,06%). (Gráfico 6)

La anemia se lo detectó según el método de la Famacha donde se


establece 5 categorías. Las categorías 1 y 2 corresponden a las tonalidades
más oscuras. La Categoría 3 se califica como punto intermedio.

Las categorías 4 y 5 son animales en estado anémico riesgoso o


severo. Tenemos 7 animales con categorías 1 y 2 (15,55%); 27 animales con
categoría 3 (60%), 9 animales con categoría 4 (20%) y 2 animales de
categoría 5 (4,44%), en la Hda. “El Encanto Uno” (Tabla 6; Gráfico 6); 5
animales de categoría 2 (22,73%), 15 animales con categoría 3 (68,18%) y 2
animales de categoría 4 (9,09%), en la Finca “La Germinia”. (Tabla 7;
Gráfico 8)

37
Tabla 6. Clasificación según su grado de anemia: Hda “El Encanto Uno”.
ANEMIA 1 2 3 4 5 TOTAL
Hembras 2 3 22 5 2 34
Machos 0 2 5 4 0 11
Total 2 5 27 9 2 45
(%) 4,44 11,11 60,00 20,00 4,44 100,00
Elaborado por: El Autor.

Gráfico 7. Clasificación según método de la “FAMACHA”: Hda. “El Encanto Uno”.

Elaborado por: El Autor.

Tabla 7. Clasificación según su grado de anemia: Finca “La Germinia”.


ANEMIA 1 2 3 4 5 TOTAL
Hembras 0 4 8 2 0 14
Machos 0 1 7 0 0 8
Total 0 5 15 2 0 22

(%) - 22,73 68,18 9,09 - 100,00


Elaborado por: El Autor.

38
Gráfico 8. Clasificación según método de la “FAMACHA”: “Finca La Germinia”.

Elaborado por: El Autor.

En la Hda. “El Encanto Dos” 14 animales están en la categoría 2, 15


animales en categoría 3 y 1 animal en categoría 4 (Tabla 8; Gráfico 9); en la
Hda. “El Destino” 5 animales en categoría 2, 15 animales de categoría 3 y 2
animales de categoría 4. (Tabla 9; Grafico 10)

Tabla 8. Clasificación según su grado de anemia: Hda. “El Encanto Dos”.


ANEMIA 1 2 3 4 5 TOTAL
Hembras 0 12 15 1 0 28
Machos 0 2 0 0 0 2
Total 0 14 15 1 0 30

(%) - 46,67 50,00 3,33 - 100,00


Elaborado por: El Autor.

39
Gráfico 9. Clasificación según método de la “FAMACHA”: Hda. “El Encanto Dos”.

Elaborado por: El Autor.

Tabla 9. Clasificación según su grado de anemia: Hda. “El Destino”.


ANEMIA 1 2 3 4 5 TOTAL
Hembras 0 4 8 2 0 14
Machos 0 1 7 0 0 8
Total 0 5 15 2 0 22

(%) - 22,73 68,18 9,09 - 100,00


Elaborado por: El Autor.

Gráfico 10. Clasificación según método de la “FAMACHA”: Hda. “El Destino”.

Elaborado por: El Autor.

40
La anorexia se detectó de 132 animales que 3 animales presentan
anorexia en la Hda El Encanto Uno y 1 animal presenta anorexia en la finca
la Germinia en Samborondón. En la Hda. El Encanto Dos 1 animales presenta
anorexia y 2 animales presentan anorexia en la Hda. El Destino en Salitre-
Candilejo. (Tabla 10; Gráfico 11)

Tabla 10. Según el grado de anorexia en las diferentes ganaderías.


Hda. El Encanto uno Finca La Germinia Hda. El encanto dos Hda. EL Destino
TOTAL
ANOREXIA SI NO SI NO SI NO SI NO
HEMBRAS 2 32 1 31 1 27 2 12 108
MACHOS 1 10 0 3 0 2 0 8 24
TOTAL 3 42 1 34 1 29 2 20 132
PORCENTAJE 2,27 31,82 0,76 25,76 0,76 21,97 1,52 15,15 100,00
Elaborado por: El Autor.

Gráfico 11. Presencia de anoréxica en la ganadería de la Hda. El Encanto Uno, la


finca la Germinia, la Hda El Encanto Dos y la Hda. el Destino.

Elaborado por: El Autor.

En edemas solo 1 animal de la Finca La Germinia presento y en


inflamación de ganglios linfáticos ninguno (Tabla 11; Gráfico 12).

41
Tabla 11. Presencia en “La Finca la Germinia”.
EDEMA Si NO TOTAL
HEMBRAS 1 31 32
MACHOS 0 3 3
TOTAL 1 34 35
PORCENTAJE 2,86 97,14 100,00
Elaborado por: El Autor.

Gráfico 12. Presencia en la ganadería de la Finca La Germinia.

Elaborado por: El Autor.

4.2 Pruebas de significancia

Utilice la prueba de la “ANOVA UNILATERAL” para determinar la


significancia de tripanosoma sp. en el ganado bovino de la cual utilice el
método de Tukey y para determinar babesia spp y anaplasma marginale utilice
el método de Fisher con todas las variables en cuestión. (Tabla 12)

Tabla 12: ANOVA Unilateral: C. Co., °C., Anemia, Anorexia, Edema, Ganglio...
Fuente GL SC Cm F P
Factor 8 131526,9 16440,9 83897,63 0
Error 953 186,8 0,2
Total 961 131713,7
S = 0,4427 R (2). = 99,86% R (2) (ajustado) = 99,86%
El valor de R (2) ajustado (99,86 %) explica los factores e interacciones. La diferencia
de R (2) es atribuible a otras variables o es un factor de ruido.
Elaborado por: El Autor.

42
En la tabla 13 donde agrupamos la información utilizando el método de
Tukey que hace la correlación de mi trabajo entre las variables
correspondiente a la anemia, temperatura y condición corporal
(emaciación) que son significativas mientras que la Anaplasma marginale,
Babesia sp, Anorexia, Tripanosoma sp., Inf. de los ganglios linfáticos y
edema en las partes de patas posteriores, inferiores y tronco no existe
ninguna significancia alguna. Este resultado nos quiere decir que no hay
presencia de Tripanosoma sp. en los cantones de Salitre y Samborondón.

Tabla 13. Método Tukey.


N Media Agrupación
°C 107 37,896 A
Emaciación 107 3,075 B
Anemia 107 2,850 C
A. marginale 107 0,654 D
Babesia sp. 107 0,467 D
Anorexia 106 0,047 E
Trypanosoma sp. 107 0,00 E
Ganglios 107 0,00 E
Edema 107 0,00 E
Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.
Elaborado por: El Autor.

Utilizando el método de ficher en la tabla 14 resulto que las medias con


una misma letra en común no son significativas como es el caso de anorexia,
Trypanosoma sp, inf. de los ganglios, edema en las que no existe
significatividad, por lo contrario, la anemia, Anaplasma marginale, Babesia
sp. es significativa, así como la temperatura y condición corporal. Esto quiere
decir que tiene correlación la anemia con la temperatura y condición corporal
se atribuyen directamente a la infección de las enfermedades Babesia sp. y
Anaplasma marginale.

43
Tabla 14. Método Ficher.
N Media Agrupación
°C 107 37,896 A
Emaciación 107 3,075 B
Anemia 107 2,850 C
A. marginale 107 0,654 D
Babesia sp. 107 0,467 E
Anorexia 106 0,047 F
Trypanosoma sp. 107 0,00 F
Ganglios 107 0,00 F
Edema 107 0,00 F
Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.
Elaborado por: El Autor.

44
5 DISCUSIÓN

Según el estudio realizado en este trabajo se corrobora que de los


animales estudiados en las zonas de Salitre y Samborondón; de las haciendas
el encanto uno, finca la Germania, hacienda el encanto dos y hacienda el
destino no se encontró evidencia de tripanosoma a pesar de que hace 3 años
se presumía la presencia de este parásito, pero no había estudio que se haya
confirmado.

Este estudio coincidió el trabajo de Oñate (2015) en la provincia del


Pichincha, obtuvo una prevalencia del 23,1% de hematozoarios, el 93,3%
correspondiente al género Anaplasma spp.; el 6,7% a los géneros Anaplasma
spp y Babesia spp.; y el 0 % al género Tripanosoma Evansi utilizando frotis
sanguíneo de gota fina, expuesto a la técnica de tinción giemsa; el hematocrito
que media las muestras de sangre con anticoagulante (EDTA); las PST para
evaluar la sangre sin anticoagulante y también coincidió con Vargas (2014) en
la provincia del Napo que presentó hemoparásitos distribuidos de la siguiente
manera: Babesia bigemina 43,6 %, anaplasma marginale 20 % eh infecciones
mixtas 5,5 % en donde se encontró una diferencia significativa con mayor
presencia de Babesia bigemina frente a la Anaplasma marginale. No se
encontró ningún animal con tripanosoma ya que no existía el vector principal
que es el tábano, pero la garrapata también es la causante en un menor grado
de ser el vector de dicho hemoparásito; para el diagnóstico utilizo dos
técnicas: la primera técnica la del frotis sanguíneo in situ obtenido de la vena
marginal de la oreja y la del frotis sanguíneo realizado en el laboratorio a partir
de las muestras de sangre tomadas de la vena coccígea enviadas en tubos
de ensayo con anticoagulante (EDTA).

45
6 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

6.1 Conclusiones
• Los resultados negativos por la técnica de tinción de Giemsa
determinan que en los cantones de Salitre y Samborondón, no
presenta la infección de Trypanosoma sp. en bovinos.
• En esta investigación no se comprobó la presencia de Trypanosoma
sp. con la técnica de “Tinción por Giemsa” pero si hubo evidencia de
Babesia spp y Anaplasma marginale.
• En la zona no existe un verdadero control de vectores, encaminado a
prevenir el contacto insecto-bovino.

6.2 Recomendaciones

• Realizar otras investigaciones que permitan establecer la o las


especies de Trypanosoma presentes en la zona en estudio, y a la vez
establecer también su distribución, aplicando otras técnicas
diagnósticas.

• Tomar en cuenta anamnesis y sintomatología clínica compatible con


tripanosomiasis en futuras investigaciones, con el fin de incrementar
las posibilidades de identificar el agente etiológico.

• Ejecutar estudios sobre los posibles vectores que puedan estar


interviniendo en el desarrollo y transmisión de tripanosomas en el
cantón Salitre y Samborondón en la provincia del Guayas.

• Establecer métodos diagnósticos para la detección de tripanosoma en


los protocolos rutinarios.

46
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el diagnóstico de la trypanosomiosis americana (enfermedad de
chagas)”. Recuperado de:
http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/otrpubs/pdf/Manual_Enfermed
ades_Chagas.pdf.

Villar Cleves, C., 2008. “Tripanosomiasis bovina enfermedad hemoparasitaria


de las regiones tropicales de Centro y Suramérica.” Recuperado de
https://www.engormix.com/ganaderia-carne/articulos/tripanosomiasis-
bovina-enfermedad-hemoparasitaria-t27484.htm.

Woo P., 1970. “The haematocrit centrifuge technique for the diagnosis of
African trypanosomiasis”. Acta tropica 27,384-6. Recuperado de:
https://www.researchgate.net/publication/17826561_The_haematocrit
_centrifuge_technique_for_the_detection_of_Trypanosomes_in_blood

52
ANEXOS

53
Anexo 1. Hoja de registro de la Hda. “El Encanto Uno” (Samborondón).
CONDICION
Nº IDENTIFICACION EDAD SEXO RAZA PROCEDENCIA °C ANEMIA ANOREXIA EDEMA GANGLIOS Trypanosoma Babesia Anaplasma
CORPORAL
El Encanto 1
1 151 4 años H Mestizo 3 37,8 3 No No No - +
Samborondón -
El Encanto 1
2 21 3 años H Mestizo 2 38,1 3 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
3 29 3 años H Mestizo 3 37,9 3 No No No - +
Samborondón -
El Encanto 1
4 70 2 años H Mestizo 3 37,8 3 No No No - +
Samborondón -
El Encanto 1
5 13 10años H Mestizo 2 37,8 4 No No No - +
Samborondón -
El Encanto 1
6 77 4 años H Mestizo 3 38 3 No No No - +
Samborondón -
El Encanto 1
7 4 6años H Mestizo 4 38,1 3 No No No - +
Samborondón -
El Encanto 1
8 126 7 años H Mestizo 4 38,2 3 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
9 130 6 años M Mestizo 4 37,6 4 No No No - +
Samborondón -
El Encanto 1
10 23 7 años H Mestizo 4 38,2 2 No No No - +
Samborondón -
El Encanto 1
11 88 2 años H Mestizo 2 38,5 3 No No No -
Samborondón + -
1,5 El Encanto 1
12 28 H Jersey 3 38,2 3 No No No -
años Samborondón - +
El Encanto 1
13 137 3 años H Mestizo 3 39,3 3 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
14 15 3 años H Mestizo 3 38 3 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
15 135 5 años H Mestizo 4 37,7 3 No No No -
Samborondón - +
Elaborado por: El autor.

54
Anexo 1.
Nº IDENTIFICACION EDAD SEXO RAZA PROCEDENCIA CONDICIÓN °C ANEMIA ANOREXIA EDEMA GANCLIOS Trypanosoma Babesia anaplasma
CORPORAL
El Encanto 1
16 3 4 años M Brama 3 37,4 4 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
17 56 3 años H Mestizo 3 37,8 1 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
18 12 4 años H Holstein 5 37,5 2 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
19 95 4 años H Mestizo 4 37,7 2 No No No -
Samborondón - +
Brama- Brown El Encanto 1
20 103 3 años H 4 38 3 No No No -
sui Samborondón + -
1,5 El Encanto 1
21 7 H Mestizo 2 37,4 3 No No No -
años Samborondón + -
El Encanto 1
22 19 2 años M Mestizo 3 37,3 4 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
23 31 3 años H Mestizo 3 38 4 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
24 20 1 años M Mestizo 3 38,2 4 No No No -
Samborondón - -
El Encanto 1
25 32 2 años H Mestizo 2 37,6 4 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
26 21 2 años H Mestizo 2 37,9 5 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
27 59 3 años H Mestizo 3 38,6 3 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
28 5 2 años M Mestizo 2 37,9 3 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
29 40 3 años M Mestizo 3 37,9 2 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
30 65 2 años H Mestizo 3 38,5 3 No No No -
Samborondón - +
Elaborado por: El Autor.

55
Anexo 1.
Nº IDENTIFICACION EDAD SEXO RAZA PROCEDENCIA CONDICION °C ANEMIA ANOREXIA EDEMA GANGIOS Trypanosoma Babesia Anaplasma
CORPORAL
3 El Encanto 1
31 25 M Mestizo 3 38,3 3 No No No -
años Samborondón - +
1,5 El Encanto 1
32 182 H Mestizo 3 38,6 3 No No No -
años Samborondón - +
El Encanto 1
33 71 2 años H Mestizo 3 37,6 3 No No No -
Samborondón - +
1,5 El Encanto 1
34 13 M Mestizo 3 38,3 3 No No No -
años Samborondón + -
El Encanto 1
35 17 8 años H Gyrolando 2 37,3 3 Si No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
36 78 7 años H Mestizo 2 37,7 3 Si No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
37 139 5 años H Gyr. 3 37,7 4 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
38 55 7 años H Mestizo 4 37,2 1 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
39 143 5 años H Mestizo 3 37,6 3 No No No -
Samborondón + -
El Encanto 1
40 148 3 años H Mestizo 3 37,7 3 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
41 8 1 años M Mestizo 3 38 2 No No No -
Samborondón - +
El Encanto 1
42 69 2 años H Mestizo 3 38,3 5 No No No -
Samborondón - +
1,5 El Encanto 1
43 29 M Mestizo 2 37,8 3 Si No No -
años Samborondón - +
El Encanto 1
44 155 3 años H Mestizo 4 37,9 4 No No No -
Samborondón - +
1,5 El Encanto 1
45 30 M Mestizo 3 37 3 No No No -
años Samborondón + -
Elaborado por: El Autor.

56
Anexo 2. Materiales de Campo. Anexo 3. Lugar Hda. “El Encanto Uno”.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

57
Anexo 4. Ganadería de la Hda. “El Encanto Uno”.

Elaborado por: El Autor.

58
Anexo 5. Toma de temperatura. Anexo 6. Revisión de parpados por el método “Famacha”.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

59
Anexo 7. Extracción de sangre vía venosa (Vena coxígea). Anexo 8. Colocación de la sangre en los tubos de tapa lila (EDTA).

Elaborado por: El Autor Elaborado por: El Autor.

60
Anexo 9. Materiales de laboratorio. Anexo 10. Frotis sanguíneo.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

61
Anexo 11. Utilización de la tinción de Giemsa.

Elaborado por: El Autor.

62
Anexo 12. Utilización del microscopio como parte de los materiales de laboratorio.

Elaborado por: El Autor.

63
Anexo 13. Vista macroscópica de la babesia sp. y Anaplasma Marginale.

Elaborado por: El Autor.

64
Anexo 14. Hoja de Registros de la Hda. “El Encanto Dos” (Salitre- Candilejo).
Nº IDENTIFICACION EDAD SEXO RAZA PROCEDENCIA CONDICION °C ANEMIA ANOREXIA EDEMA GANGIOS Trypanosoma Babesia Anaplasma
CORPORAL

"El Encanto 2" Salitre


46 No No No -
60 9 años H Holstein Candilejo 4 38 3 - +
"El Encanto 2" Salitre
47 No No No -
33 5 años H Holstein Candilejo 3 37,9 3 - +
"El Encanto 2" Salitre
48 No No No -
52 5 años H Mestizo Candilejo 3 38,5 3 + -
"El Encanto 2" Salitre
49 No No No -
30 8 meses H Mestizo Candilejo 2 38,2 2 + -
10 "El Encanto 2" Salitre
50 No No No -
Hijo de Corazón meses M Mestizo Candilejo 3 38,4 2 + +
"El Encanto 2" Salitre
51 No No No -
4 8 años H Mestizo Candilejo 2 38,7 3 + +
Hijo de "El Encanto 2" Salitre
52 No No No -
Polveada 7 meses M Mestizo Candilejo 2 37,9 2 - +
"El Encanto 2" Salitre
53 No No No -
82 6 años H Mestizo Candilejo 3 38 2 + -
"El Encanto 2" Salitre
54 No No No -
38 7 años H Mestizo Candilejo 3 37,6 2 - -
Holstein y "El Encanto 2" Salitre
55 No No -
74 4 años H Brown S. Candilejo 2 37,6 2 Si + -
"El Encanto 2" Salitre
56 No No -
37 10 años H Mestizo Candilejo 3 38,5 3 No - +
"El Encanto 2" Salitre
57 No No -
4 5 años H Mestizo Candilejo 3 37,8 3 No - +
"El Encanto 2" Salitre
58 No No -
123 7 años H Mestizo Candilejo 3 38,7 2 No + -
"El Encanto 2" Salitre
59 No No -
103 8 años H Mestizo Candilejo 3 38,2 2 No - +
"El Encanto 2" Salitre
60 No No -
119 6 años H Mestizo Candilejo 3 38 3 No - +
Elaborado por: El Autor.

65
Anexo 14.
Nº IDENTIFICACION EDAD SEXO RAZA PROCEDENCIA CONDICION °C ANEMIA ANOREXIA EDEMA GANGIOS Trypanosoma Babesia Anaplasma
CORPORAL

"El Encanto 2" Salitre


61 No No -
10 4 años H Holstein Candilejo 4 37,8 3 No - +
"El Encanto 2" Salitre
62 No No -
146 3 años H Holstein Candilejo 3 38 2 No - +
"El Encanto 2" Salitre
63 No No -
83 5 años H Holstein Candilejo 3 38,2 3 No - +
"El Encanto 2" Salitre
64 No No -
127 8 años H Holstein Candilejo 4 38,2 3 No + +
"El Encanto 2" Salitre
65 No No -
104 7 meses H Brown S. Candilejo 2 38,1 2 No - +
"El Encanto 2" Salitre
66 No No -
46 8 años H Mestizo Candilejo 3 38,3 3 No - +
"El Encanto 2" Salitre
67 No No -
62 4 años H Mestizo Candilejo 2 38 3 No + -
"El Encanto 2" Salitre
68 No No -
92 5 años H Mestizo Candilejo 3 38,2 3 No + +
"El Encanto 2" Salitre
69 No No -
112 10 años H Mestizo Candilejo 4 38 2 No - +
"El Encanto 2" Salitre
70 No No -
43 8 años H Mestizo Candilejo 4 37,6 3 No - +
"El Encanto 2" Salitre
71 No No -
124 8 años H Mestizo Candilejo 3 37,8 2 No - +
"El Encanto 2" Salitre
72 No No -
108 10 años H Mestizo Candilejo 4 38,4 2 No - -
"El Encanto 2" Salitre
73 No No -
63 8 años H Mestizo Candilejo 4 38 2 No - +
"El Encanto 2" Salitre
74 No No
109 5 años H Mestizo Candilejo 2 37,2 4 No - + -
"El Encanto 2" Salitre
75 No No
99 3 años H Mestizo Candilejo 3 38,8 3 No - + -
Elaborado por: El Autor.

66
Anexo 15. Ganadería de la Hda. “El Encanto Dos”.

Elaborado por: El Autor.

67
Anexo 16. Lugar Hda. “El Encanto Dos” (Salitre- Candilejo).

Elaborado por: El Autor.

68
Anexo 17. Revisión de parpados por el método “Famacha”.

Elaborado por: El Autor.

69
Anexo 18. Observación de edemas en patas e inflamación de ganglios. Anexo 19. Toma de temperatura.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

70
Anexo 20. Extracción de sangre venosa (vena coxígea). Anexo 21. Frotis sanguíneo.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

71
Anexo 22. Utilización del alcohol metílico para fijar las muestras sanguíneas. Anexo 23. Técnica de tinción de Giemsa.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

72
Anexo 24. Observación en el microscopio. Anexo 25. No hay evidencia de Tripanosoma sp.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

73
Anexo 26. Hoja de Registro finca “La Germinia” (Samborondón).
Nº IDENTIFICACION EDAD SEXO RAZA PROCEDENCIA CONDICION °C ANEMIA ANOREXIA EDEMA GANGIOS Trypanosoma Babesia Anaplasma
CORPORAL

"La Germinia"
76 No No
13 3 años H Mestizo Samborondón 2 38 4 No - + +
"La Germinia"
77 No No
63 3 años H Mestizo Samborondón 3 37,8 3 No - + +
"La Germinia"
78 No No
109 3 años H Mestizo Samborondón 2 38,4 3 No - - +
"La Germinia"
79 No No
99 3 años H Mestizo Samborondón 3 37,3 3 No - - +
"La Germinia"
80 No No
21 6 años H Mestizo Samborondón 4 38,4 2 No - + +
"La Germinia"
81 No No
18 4 años H Mestizo Samborondón 3 37,3 3 No - - +
"La Germinia"
82 No No
54 2 años H Mestizo Samborondón 3 37,1 3 No - - +
"La Germinia"
83 No No
22 3 años H Mestizo Samborondón 3 37,5 2 No - - +
"La Germinia"
84 No No
6 5 años H Mestizo Samborondón 4 37,1 3 No - + -
"La Germinia"
85 No No
2 3 años H Mestizo Samborondón 2 37,5 4 No - + +
"La Germinia"
86 No No
107 4 años H Mestizo Samborondón 4 37,9 2 No - + +
"La Germinia"
87 No No
39 6 años H Mestizo Samborondón 3 37,2 3 No - - +
"La Germinia"
88 No No
25 4 años H Mestizo Samborondón 3 37,1 3 No - - +
"La Germinia"
89 No No
138 8 años H Mestizo Samborondón 3 38 2 No - + +
"La Germinia"
90 No No
87 8 años H Mestizo Samborondón 4 37,6 3 No - + -
Elaborado por: El Autor.

74
Anexo 26.
Nº IDENTIFICACION EDAD SEXO RAZA PROCEDENCIA CONDICION °C ANEMIA ANOREXIA EDEMA GANGIOS Trypanosoma Babesia Anaplasma
CORPORAL

"La Germinia"
91 No No
105 3 años H Mestizo Samborondón 4 38,4 3 No - - +
"La Germinia"
92 No
44 3 años H Mestizo Samborondón 3 37,2 4 No si - + -
"La Germinia"
93 No
156 3 años H Mestizo Samborondón 4 37,5 3 No No - - +
"La Germinia"
94 No
72 3 años H Mestizo Samborondón 4 37,3 2 No No - + +
"La Germinia"
95 No
98 2 años H Mestizo Samborondón 3 37,8 3 No No - - -
"La Germinia"
96 No
67 9 años H Mestizo Samborondón 4 37,5 2 No No - + +
"La Germinia"
97 No
35 2 años H Mestizo Samborondón 2 37,4 3 No No - + -
"La Germinia"
98 No
49 8 meses H Mestizo Samborondón 2 38 2 No No - - +
"La Germinia"
99 No
14 2 años H Mestizo Samborondón 3 37,8 3 No No - + +
"La Germinia"
100 No
18 9 meses M Mestizo Samborondón 3 38,2 2 No No - - +
"La Germinia"
101 No
32 3 años H Mestizo Samborondón 2 38,3 3 No No - + +
"La Germinia"
102 No
50 6 años H Mestizo Samborondón 4 37,2 3 No No - - +
"La Germinia"
103 No
36 5 años H Mestizo Samborondón 3 37,9 2 No No - - +
Elaborado por: El Autor.

75
Anexo 26.
Nº IDENTIFICACION EDAD SEXO RAZA PROCEDENCIA CONDICION °C ANEMIA ANOREXIA EDEMA GANGIOS Trypanosoma Babesia Anaplasma
CORPORAL

"La Germinia"
104 No
89 5 años H Mestizo Samborondón 3 38 3 No No - + -
"La Germinia"
105 No
24 5 años H Mestizo Samborondón 3 37,3 3 No No - - +
"La Germinia"
106 No
11 2 años M Mestizo Samborondón 4 38,5 3 No No - - +
"La Germinia"
107 No
70 8 meses M Mestizo Samborondón 3 38,7 3 No No - - +
"La Germinia"
108 No
38 6 años H Mestizo Samborondón 2 37 4 Si No - + -
"La Germinia"
109 No
4 3 años H Mestizo Samborondón 3 37,3 3 No No - - +
"La Germinia"
110 No
126 9 años H Mestizo Samborondón 3 37,8 3 No No - + -
Elaborado por: El Autor.

76
Anexo 27. Lugar finca “La Germinia” (Samborondón).

Elaborado por: El Autor.

77
Anexo 28. Ganadería de la finca “La Germinia”. Anexos 29. Utilización de la técnica Giemsa en frotis sanguíneo.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

78
Anexo 30. Vista macroscópica con el microscopio de la Babesia sp.

Babesia sp.

Elaborado por: El Autor.

79
Anexo 31. Hoja de registro Hda “El Destino” (Salitre-Candilejo).

111 7 3 años H Mestizo "El Destino" Salitre 4 38 3 No No No - - +

112 1 5 años M Brama "El Destino" Salitre 3 37,9 3 No No No - + -


113 23 7 meses H Mestizo "El Destino" Salitre 2 37,5 3 No No No - - +
114 28 5 años H Mestizo "El Destino" Salitre 4 38,5 2 No No No - + -

115 17 3 años H Jersey "El Destino" Salitre 3 39 3 No No No - + +

116 12 2 años M Gyrolando "El Destino" Salitre 3 37,7 3 No No No - - -


117 15 4 años H Mestizo "El Destino" Salitre 3 38 2 No No No - - +
118 3 2 años H mestiza "El Destino" Salitre 3 37,5 3 No No No - + +
119 21 7 años H Jersey "El Destino" Salitre 2 37,8 4 Si No No - + -
120 13 6 años H Mestizo "El Destino" Salitre 4 37,6 3 No No No - - +
1,5
121 24 "El Destino" Salitre
años M Mestizo 3 37,8 3 No No No - - -
122 9 3 años H Brown S. "El Destino" Salitre 3 38,3 3 No No No - + -
123 11 3 años M Mestizo "El Destino" Salitre 4 37,4 3 No No No - - +
124 6 5 años M Mestizo "El Destino" Salitre 3 37,5 3 No No No - + +
Elaborado por: El Autor.

80
Anexo 31.

125 19 5 años H Mestizo "El Destino" Salitre 4 38,6 2 No No No - - +


126 25 1 años H Jersey "El Destino" Salitre 4 37,5 3 No No No - + +
127 22 8 meses M Mestizo "El Destino" Salitre 3 38,6 2 No No No - - +
128 20 3 años M Mestizo "El Destino" Salitre 3 39 3 No No No - - +
129 18 3 años H Mestizo "El Destino" Salitre 2 37,5 4 Si No No - + -
130 5 4 años H Gyrolando "El Destino" Salitre 3 37,2 2 No No No - - +
131 27 9 meses M Mestizo "El Destino" Salitre 4 37,8 3 No No No - - +
132 4 7 meses H Gyrolando "El Destino" Salitre 4 38,7 3 No No No - - +
Elaborado por: El Autor.

81
Anexo 32. Lugar la Hda “El Destino” (Salitre- Candilejo).

Elaborado por: El Autor.

82
Anexo 33. Ganadería de la Hda. “El Destino”. Anexo 34. Revisión de parpados con el método “Famacha”.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

83
Anexo 35. Extracción de sangre venosa (vena coxígea). Anexo 36. Colocación de la sangre en los tubos de tapa lila (EDTA).

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

84
Anexo 37. Colocación de los tubos en la hielera. Anexo 38. Materiales de laboratorio.

Elaborado por: El Autor. Elaborado por: El Autor.

85
Anexo 39. Colocación de alcohol metílico en las placas sanguíneas. Anexo 40. Utilización de la técnica Giemsa.

Elaborado por: El autor. Elaborado por: El Autor.

86
Anexo 41. Vista macroscópica del Anaplasma marginale.

Elaborado por: El Autor

87
DECLARACIÓN Y AUTORIZACIÓN

Yo, Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro con C.C: # 0921268348 autor del
Trabajo de Titulación: “Prevalencia de Tripanosoma sp. en el ganado
bovino en las zonas rurales de la provincia del Guayas (Salitre –
Samborondón)”, previo a la obtención del título de Médico Veterinario
Zootecnista en la Universidad Católica de Santiago de Guayaquil.

1.- Declaro tener pleno conocimiento de la obligación que tienen las


instituciones de educación superior, de conformidad con el Artículo 144 de la
Ley Orgánica de Educación Superior, de entregar a la SENESCYT en formato
digital una copia del referido trabajo de titulación para que sea integrado al
Sistema Nacional de Información de la Educación Superior del Ecuador para
su difusión pública respetando los derechos de autor.

2.- Autorizo a la SENESCYT a tener una copia del referido trabajo de


titulación, con el propósito de generar un repositorio que democratice a la
información, respetando las políticas de propiedad intelectual vigentes.

Guayaquil, 13 de septiembre del 2018.

f.__________________________________
Nombre: Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro
C.C: 0921268348

107
REPOSITORIO NACIONAL EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA
FICHA DE REGISTRO DE TESIS/TRABAJO DE TITULACIÓN
TEMA Y SUBTEMA: Prevalencia de Tripanosoma sp. en el ganado
bovino en las zonas rurales de la provincia del
Guayas (Salitre – Samborondón).
AUTOR(ES): Peñafiel Bowen, Gilberto Alejandro.
REVISOR(ES)/TUTOR(ES) Sylva Morán, Lucila María.
INSTITUCIÓN: Universidad Católica de Santiago de Guayaquil.
FACULTAD: Técnica para el Desarrollo.
CARRERA: Medicina Veterinaria y Zootecnia.
TITULO OBTENIDO Médico Veterinario Zootecnista.
FECHA DE 13 de septiembre No. DE 106
PUBLICACIÓN del 2018 PÁGINAS:

ÁREAS TEMÁTICAS: Higiene y Sanidad Animal


PALABRAS CLAVES/ Tripanosomiasis, toma de muestras sanguíneas,
KEYWORDS frotis sanguíneo, método de tinción de Giemsa y
prueba de Woo.
RESUMEN/ABSTRACT (150-250 palabras): El presente Trabajo de Titulación se
desarrolló durante los meses junio, julio y agosto del 2018, en la cual se lo realizó
en 3 haciendas y una finca del sector de Salitre y Samborondón de la provincia del
Guayas, donde se tomó las muestras de sangre para ser analizadas en el
Laboratorio del Consultorio Veterinario de la Universidad Católica de Santiago de
Guayaquil. La investigación consistió en determinar la prevalencia de Tripanosoma
sp., en bovinos con sintomatología de la enfermedad. Para la realización del
trabajo de investigación se obtuvieron muestras sanguíneas de 132 cabezas de
ganado bovino para el análisis de laboratorio donde se utilizó la técnica de Giemsa.
Los resultados evidenciaron que no hubo muestras positivas para Tripanosoma
sp., en los animales estudiados en estos sectores de la Provincia del Guayas, pero
si se presentó evidencia de los siguientes hemoparásitos con una prevalencia de
Babesia sp. 45 %, Anaplasma marginale 64 % y ambos parásitos con 14 %.

ADJUNTO PDF: SI NO
CONTACTO CON Teléfono: Email:
AUTOR/ES: +593997804003 Alexpenafiel180@hotmail.com

CONTACTO CON LA Nombre: Ing. Noelia Caicedo Coello, M. Sc.


INSTITUCIÓN: Teléfono:+593987361675
Email: noelia.caicedo@cu.ucsg.edu.ec
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