Tesis

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL
FACULTAD DE BIOQUÍMICA Y CIENCIAS

BIOLÓGICAS
Tesis para la obtención del título de

Doctor en Ciencias Biológicas
CONTROL HORMONAL DE LA PRODUCCIÓN DE LECHE EN

BOVINOS HOLSTEIN. EFECTOS DE NEMATODIASIS
GASTROINTESTINALES DURANTE EL DESARROLLO DE
TERNERAS Y DISTINTAS ETAPAS REPRODUCTIVAS DE LA
VACA ADULTA
Autor: Adrián F. Perri

Directora: Dra. Isabel Lacau
Codirectora: Dra. Bibiana E. Dallard
Facultad de Ciencias Veterinarias

Laboratorio de Biología Celular y Molecular
Universidad Nacional del Litoral
Dedico esta tesis a la memoria de Alfredo Perri (mi papá) quien en su
diario vivir me diera ejemplo de trabajo, esperanza, lucha y alegría
incluso en los momentos más duros de la vida.
Agradecimientos
Intentaré resumir escuetamente mi mas profundo agradecimiento para con las
personas e instituciones que han colaborado con esta tesis y con mi formación
integral.
A mi familia, a mi padre, a mi madre, a mi abuela y a mi hermana, que son quienes

me brindaron consejo, ayuda y aliento cuando el ánimo decaía. Sin su apoyo y amor
incondicional nunca hubiese llegado a esta instancia. A ustedes GRACIAS!
A mis directoras Isabel Lacau y Bibiana Dallard que confiaron en mí, me guiaron e
invirtieron su tiempo, dedicación y experiencia en mi formación.
A Hugo Ortega que aceptó ser codirector de beca colaborando en todo lo que estuvo a
su alcance y me abrió las puertas del laboratorio donde finalmente concluí este
trabajo.
A la gente de la escuela Inchausti….

A mis queridos amigos con quienes compartí inolvidables momentos y me brindaron
su sincera amistad y en quienes siempre encontré una mano tendida, Rubén Carrion,
Calos Massi, Matías Moreles, Ariel Valentini y Hugo Martinelli.
A mis compañeros de trabajo quienes colaboraron desinteresadamente en todas las
actividades desempeñadas en el campo muchas veces en situaciones climáticas
adversas. Néstor Formia, Guadalupe Francia y Martín Miglierina.
A los alumnos de la escuela que colaboraron en actividades de campo y de
laboratorio.
A las autoridades, Ricardo Cabassi y Héctor Pérez por su excelente disposición para
el desarrollo de las actividades de investigación.
A mis queridos compañeros y amigos del laboratorio de Biología Celular y Molecular

de la Facultad de Ciencias Veterinarias de Esperanza, que desde mi llegada me
hicieron sentir parte del mismo. Y quienes me mostraron gestos de solidaridad que
nunca olvidaré en el momento más difícil que me tocó vivir: Celina Baravalle, Melisa
Velazquez, Ayelén Anweg, Fernanda Rodríguez, Elizabet Pereyra, Sol Rena, Matías
Stangaferro, Pablo Díaz, Leandro Neme, Valentina Matiller, Natalia Alfaro, Carolina
Panzani, Carolina Andreotti, Natalia Salvetti, Florencia Rey, Bibiana Dallard y Hugo
Ortega.
A mis compañeras del IBYME, por brindarme su colaboración, dirección y amistad,

Graciela Díaz, Isabel García Tornadu, Carolina Cristina, Ana María Ornstein,
Guillermina Luque, Cecilia Ramírez, Victoria Recouvreux, Damasia Becu e Isabel
Lacau.
A Luís Calvinho quien tuvo una excelente disposición en mi búsqueda de lugar de

trabajo para concluir esta tesis.
A Marcelo Signorini quien aportó su experiencia estadística a este trabajo.
A Laura Marangunich por atender a mis consultas estadísticas.
Al Dr. Eduardo Charreau que me brindó su aval para gestionar el cambio de lugar de
trabajo.
A Cesar Fiel por contribuir con mi formación parasitológica.

Al área de posgrado de la Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas de la
Universidad Nacional del Litoral por su excelente disposición para solucionar
problemas administrativos.
A mi país que posibilitó mi formación y crecimiento profesional por medio de sus

instituciones FBCB-UNL, FCV-UNL, Escuela Inchausti, IBYME-CONICET, y
Agencia.
Índice general
Abreviaturas utilizadas I
Índice de figuras III
Índice de tablas VII
Resumen IX
Abstract XII
1 Capítulo 1: Introducción _________________________________________ 1

1.1 Parasitosis gastrointestinales en bovinos _____________________________ 4
1.1.1 Ciclo Biológico de nematodos gastrointestinales _____________________________ 4
1.1.2 Ecología de la forma de vida libre ________________________________________ 5
1.1.3 Interacciones dentro del hospedador ______________________________________ 5
1.1.4 Relación inmunitaria hospedador-helmintos ________________________________ 6
1.1.5 Regulación por parte del parásito _________________________________________ 8
1.1.6 Patología causada en el hospedador _______________________________________ 9
1.2 Desarrollo mamario _____________________________________________ 10
1.2.1 Regulación endocrina del desarrollo mamario ______________________________ 12
1.2.2 Estrógeno y su receptor _______________________________________________ 12
1.2.3 Hormona de crecimiento (GH), su receptor y hormona efectora ________________ 13
1.2.4 Síntesis de IGF-1, su receptor y acción del factor ___________________________ 14
1.2.5 Regulación de la acción de IGF-1 por las IGFBPs___________________________ 15
1.2.6 Progesterona ________________________________________________________ 15
1.2.7 Vías entrecruzadas ___________________________________________________ 16
1.3 Sistema en estudio. ______________________________________________ 17
2 Capítulo 2: Objetivos ___________________________________________ 19
2.1 General _______________________________________________________ 20
2.2 Específicos _____________________________________________________ 20
2.2.1 Sistemas tambo y recría _______________________________________________ 20
2.2.2 Vacas en producción _________________________________________________ 20
2.2.3 Recría _____________________________________________________________ 20
3 Capítulo 3: Evaluación eco-parasitológica del sistema de tambo en la
Escuela Agropecuaria Inchausti. ______________________________________ 22
3.1 Objetivo _______________________________________________________ 23
3.2 Materiales y métodos ____________________________________________ 24
3.2.1 Muestreo de pasturas _________________________________________________ 24
3.2.2 Muestreo de materia fecal, huevos por gramo (HPG) y cultivo _________________ 25
3.2.3 Análisis estadísticos __________________________________________________ 27
3.2.4 Análisis de los subsistemas ____________________________________________ 27
3.3 Resultados _____________________________________________________ 27
3.3.1 Subsistema de tambo _________________________________________________ 27
3.3.1.1 Larvas en la pastura. _____________________________________________ 27
3.3.1.2 Diversidad de géneros larvales en la pastura __________________________ 28
3.3.1.3 Huevos en materia fecal __________________________________________ 29
3.3.1.4 Larvas producto de cultivo de huevos de nematodos en materia fecal _______ 31
3.3.2 Subsistema de recría__________________________________________________ 31
3.3.2.1 Larvas en la pastura _____________________________________________ 31
3.3.2.2 Diversidad_____________________________________________________ 32
3.3.2.3 Huevos por gramo en materia fecal _________________________________ 33
3.3.2.4 Larvas producto de cultivo de huevos de nematodos en materia fecal _______ 34
3.4 Discusión y conclusión ___________________________________________ 35
3.4.1.1 Subsistema de tambo ____________________________________________ 35
3.4.1.2 Subsistema de recría _____________________________________________ 37
4 Capítulo 4: Influencia de los parásitos nematodos en la producción de leche
y hormonas relacionadas con la lactancia. ______________________________ 41
4.1 Objetivos ______________________________________________________ 43
4.2.1 Conteo de huevos de nematodos e identificación de géneros. __________________ 44
4.2.2 Determinaciones hormonales ___________________________________________ 45
4.2.3 Análisis estadístico ___________________________________________________ 45
4.3 Resultados _____________________________________________________ 46
4.3.1 HPG en periparto y producción de leche __________________________________ 46
4.3.2 Cuantificación de hormonas relacionadas con la producción de leche____________ 49
4.4.1 Parásitos ___________________________________________________________ 51
4.4.2 Lactancia y HPG ____________________________________________________ 51
4.4.3 Hormonas __________________________________________________________ 53
4.4.4 Conclusión _________________________________________________________ 54
4.4.5 Conclusión de tipo práctico para la producción _____________________________ 55
5 Capítulo 5: Evaluación del efecto tratamiento antiparasitario sobre el
desarrollo de la glándula mamaria de terneras Holstein __________________ 56
5.1 Objetivos ______________________________________________________ 57
5.2.1 Determinaciones hormonales ___________________________________________ 58
5.2.2 Evaluación del efecto del tratamiento antiparasitario en la glándula mamaria de
terneras Holstein ____________________________________________________________ 59
5.2.2.1 Biopsias de glándula mamaria _____________________________________ 59
5.2.2.2 Procesamiento del tejido mamario __________________________________ 60
5.2.2.3 Histología (medición de la relación parénquima/estroma) ________________ 60
5.2.2.4 Inmunohistoquímica _____________________________________________ 61
5.2.2.5 Controles______________________________________________________ 62
5.2.2.6 Análisis de imágenes ____________________________________________ 62
5.2.2.7 Cuantificación de la inmunomarcación_______________________________ 63
5.2.2.8 Evaluación y cuantificación de la proliferación celular __________________ 63
5.2.2.9 Evaluación y cuantificación de proteínas ligadoras de IGF-1 (IGFBP-2 y 3)__ 64
5.2.2.10 Evaluación y cuantificación de receptores de estrógeno (ER-α)____________ 64
5.2.3 Análisis estadísticos de los datos ________________________________________ 66
5.3 Resultados _____________________________________________________ 67
5.3.1 Influencia de los nematodos a nivel sistémico ______________________________ 67
5.3.1.1 Conteo de huevos por gramo en materia fecal _________________________ 67
5.3.1.2 Evaluación del desarrollo corporal de los grupos experimentales mediante peso
corporal 68
5.3.1.3 Concentraciones séricas de IGF-1___________________________________ 68
5.3.1.4 Estado puberal _________________________________________________ 69
5.3.2 Influencia de los nematodos sobre el desarrollo de la glándula mamaria__________ 70
5.3.2.1 Relación parénquima/estroma______________________________________ 70
5.3.2.2 Proliferación celular mediante expresión de PCNA en tejido mamario ______ 72
5.3.2.3 Expresión de IGFBP-2 en tejido mamario ____________________________ 74
5.3.2.4 Expresión de IGFBP-3 en tejido mamario ____________________________ 75
5.3.2.5 Expresión de receptores de estrógeno alfa (ER-) en tejido mamario _______ 78
5.3.3 Significancias estadísticas _____________________________________________ 81
5.4.1 Nivel sistémico______________________________________________________ 82
5.4.1.1 Conteo de huevos por gramo y desarrollo corporal _____________________ 82
5.4.1.2 Niveles séricos de IGF-1 y pubertad_________________________________ 83
5.4.2 Nivel local _________________________________________________________ 84
5.4.2.1 Relación parénquima/estroma y proliferación celular (PCNA) ____________ 84
5.4.2.2 Expresión de componentes del sistema de IGF_________________________ 86
5.4.2.3 Expresión del receptor de estrógeno alfa (ER-α) _______________________ 88
5.4.3 Conclusión general ___________________________________________________ 90
6 Capítulo 6: Resumen de conclusiones ______________________________ 92
7 Bibliografía ___________________________________________________ 94
Abreviaturas utilizadas
I
CD4 Cúmulo de diferenciación 4
CD8 Cúmulo de diferenciación 8
DAB Diaminobenzidina
EGF Factor de crecimiento epidérmico
ER-α Receptor de estrógeno tipo alfa
ER-β Receptor de estrógeno tipo beta
E2 17 β-estradiol
GH Hormona de crecimiento
HPG Huevos por gramo
IGFBP Proteína de unión a IGF
IG Inmunoglobulina
IGF Factor de crecimiento similar a insulina
IHQ Inmunohistoquímica
IL Interleuquina
L1 Larva primera etapa de desarrollo.
L2 Larva segunda etapa de desarrollo.
L3 Larva infectiva de nematodo
L4 Larva de nematodo en desarrollo intermedio
L5 Larva de nematodo última etapa del desarrollo
LH Hormona luteinizante
Pp posparto
RIA Radioinmunoensayo
RELM β Resistina similar a molécula β
TDU Unidad terminal ductal
SEM Error estándar de la media
TEBs Botones terminales
T3 Triiodotironina
T4 Tetraiodotironina
Th 1 Células T colaboradoras de tipo 1
Th 2 Células T colaboradoras de tipo 2
PCNA Antígeno nuclear de proliferación celular
II
Índice de figuras
III
Pag.
Figura 1. A: Glándula mamaria de ratón en desarrollo, las flechas señalan a los
botones terminales (TEBs) (análogos a TDU en bovinos) que penetran en el tejido 11
graso. B: Unidad terminal ductal (TDU) en bovino. C: Imagen tridimensional de la
TDU bovina. D: Esquema de glándula mamaria desarrollada lobule=lóbulillo,
alveoli=alvéolos, duct=conducto, gland cistern= cisterna de la glándula, teat
cistern=cisterna del pezón, teat=pezón. Figurass A, B y D tomadas de (Capuco y
Ellis, 2005).
Figura 2. A) La referencia amarilla marca la posición de la escuela M. C. y M. L. 18

Inchausti. Ubicada entre los partidos de 25 de Mayo y 9 de Julio de la provincia de
Buenos Aires (Google earth y Inav/Geosistemas SRL, 2012a). B) Imagen de los
edificios escolares y los dos subsistemas (tambo y recría) (Google earth y
Inav/Geosistemas SRL, 2012b).
25
Figura 3. Embudos para colectado de larvas.
25
Figura 4. Larvas recuperadas de las pasturas. A) Género Cooperia. B) Género
Nematodirus
Figura 5. A) Huevo de nematodo. B) Cámara de Mac Master conteniendo dilución

26
de materia fecal.
Figura 6. Densidad de larvas por kg de materia seca respecto del tiempo. 28
Figura 7. Densidad de larvas por kg de materia seca respecto del tiempo. 29

Figura 8. A) Huevos por gramo en materia fecal del rodeo 1. B) Huevos por gramo
en materia fecal del rodeo 2. C) Huevos por gramo en materia fecal de secas y
30
vaquillonas.
Figura 9. Positividad al HPG. Representa el porcentaje de animales que 30

presentaron HPG>0 en cada uno de los rodeos.
Figura 10. Diversidad de géneros de nematodos presentes en cultivo de materia 31

fecal.
Figura 11. Densidad de larvas por kg de materia seca respecto del tiempo (marzo
32
de 2007 a febrero de 2008).
Figura 12. Abundancia relativa de géneros larvales presentes en pasturas del 32

sistema de recría.
Figura 13. A, B, C) Huevos por gramo (HPG) en materia fecal de los tres grupos
de recrías. D: HPG de vaquillonas (se deja constancia que en esta última hay un
33
cambio en la escala del eje de las ordenadas de 10 veces con respecto a los
anteriores).
Figura 14. Diversidad de géneros larvales en cultivo de materia fecal del sistema 34
de recría.
Figura 15. Figura 15. Niveles medios de huevos de nematodos en materia fecal de 47
vacas (n=191) relacionados con los meses en leche. El mes de lactancia cero
corresponde al muestreo realizado entre los días 0 y el 29 posparto. Las barras
verticales representan el error estándar de la media (SEM). El tiempo promedio de
lactancia de vacas fue de 358,5 días ± 4,8 (SEM).
IV
Figura 16. Producción total de leche procedente de vacas agrupadas por su
47
positividad al HPG en torno a la parición. A) Mes=-1: muestra de materia fecal
obtenida entre los días -30 a -1, B) mes=0: muestra tomada entre los días 0 a 29,
C) mes=-1 y 0: se toman dos muestras, una en el mes -1 y otra durante el mes 0;
D) mes=1: corresponde a muestras tomadas desde el día 30 al 59.
Figura 17. Tiempos de lactancia de animales negativos y positivos al HPG. Mes - 48

1: muestra de materia fecal obtenida entre los días -30 a -1. Mes 0: muestra tomada
entre los días 0 a 29. Mes -1 y 0: se toman dos muestras, una en el mes -1 y otra
durante el mes 0. Mes 1: corresponde a muestras tomadas desde el día 30 al 59.
Figura 18. Niveles hormonales séricos durante la lactación en vacas con HPG>0, 50
(línea roja) y HPG=0, (línea verde) huevos de nematodos parásitos en la materia
fecal en la muestra tomada en el mes 0 (días 0 a 29 posparto). A) GH, B: IGF-1. C)
prolactina (Prl). D) Insulina. Letras minúsculas diferentes indican diferentes
concentraciones hormonales a los diferentes tiempos (p< 0,05).
Figura 19. Toma de biopsia en una ternera Holstein. A) Introducción de la aguja y 59

disparo del biopsiador. B) Estado del animal posterior a la toma de muestra. C)
Muestra de tejido mamario a ser retirada de la aguja de biopsia.
Figura 20. A) Biopsia completa de glándula mamaria bovina (X100). B) Unidad

61
ductal terminal (TDU) X 400. El área azul en ambas figuras representa al
parénquima mamario mientras que el área rosada-blanquecina corresponde al
estroma mamario. Coloración: Hematoxilina/eosina.
Figura 21: A) Muestra control negativo de la técnica de inmunohistoquímica, la 65

cual carece de anticuerpo primario. B) Muestra tratada con anti-PCNA. C) Muestra
tratada con anti-IGFBP-2. D) Máscara de la imagen –B revela marcación nuclear.
E) Máscara de la imagen –D revela marcación citoplasmática. X 400.
Figura 22. Evaluación de huevos por gramo (HPG) según la edad en terneras
tratadas con antihelmínticos y controles Las barras representan las medias ± SEM. 67
*Indica p<0,05 para cada período de tiempo.
Figura 23. Pesos de los grupos tratados y controles a lo largo de un año. Las barras 68
indican medias ± SEM. La diferencia entre los mismos se hace significativa a
partir del mes 5. *Indica p<0,05.
Figura 24. Medias de las concentraciones séricas de IGF-1 a las 20, 30, 40 y 70 69
semanas de edad de terneras tratadas con antiparasitarios (barra verde) y controles
(barra roja) ± SEM. *Indica p<0.05.
Figura 25. Edad promedio de entrada en la pubertad en semanas de los grupos 69

tratados con antihelminticos (verde) y controles (rojo). Medias ± SEM. * Indica
p=0,02.
Figura 26. % de terneras púberes de los grupos tratados con antihelminticos 70

(verde) y controles (rojo) a las 20, 20 40 y 70 semanas de vida.
Figura 27. Biopsias de glándula mamaria de terneras tratadas con atiparasitarios y 71

controles a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida. Coloración: Hematoxilina/eosina.
X 200.
Figura 28. Porcentaje de parénquima en biopsias de glándula mamaria en animales

tratados con antiparasitario y controles sin tratamiento a las 20, 30, 40 y 70 72
semanas de vida. Las barras representan las medias ± SEM.
V
Figura 29. Inmunomarcación con anti-PCNA en glándula mamaria de terneras 73
tratadas (izquierda) y controles (derecha) a las 20, 30, 40 y 70 semanas de edad.
Las flechas indican núcleos de células PCNA intensamente marcadas (marrón) en
el epitelio que reviste las unidades ductales terminales. X 400.
Figura 30. Porcentaje de área inmunomarcada con anti-PCNA asociado a

74
parénquima de glándula mamaria de terneras tratadas con antiparasitario y controles
sin tratamiento a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida. Las barras representan las
medias ± SEM.
Figura 31. Inmunomarcación para IGFBP-2, en terneras tratadas con

antiparasitario (izquierda) y controles sin tratamiento (derecha). Biopsias
76
realizadas a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida. X 400.
Figura 32. Porcentaje de inmunomarcación con anti-IGFBP-2 a las 20, 30, 40 y 70 77

Figura 33. Inmunomarcación para IGFBP-3, en terneras tratadas con

antiparasitario (izquierda) y controles sin tratamiento (derecha). Biopsias 77
realizadas a las 20, 30 y 40 semanas de edad. X400.
Figura 34. Porcentaje de inmunomarcación con anti-IGFBP-3 a las 20, 30 y 40 78

Figura 35. Inmunomarcación para receptor de estrógeno α, en terneras tratadas con

antiparasitarios (izquierda) y controles sin tratamiento (derecha). Biopsias
realizadas a las 20, 30, 40 y 70 semanas de edad. X400. Las flechas indican 80
núcleos de células epiteliales inmunomarcados.
Figura 36. Porcentaje de área inmunomarcada con anti-ER- asociado a

parénquima de glándula mamaria de terneras tratadas con antiparasitario y 81
controles sin tratamiento a las 20, 30, 40 y 70 semanas de edad. Las barras
representan las medias ± SEM.
VI
Índice de tablas
VII
Pag.
Tabla1. Niveles medios de HPG en materia fecal tomada durante la
lactancia (meses 1-12) en vacas clasificadas acordes a su positividad al 49
HPG en torno a la parición.
Tabla 2. Duración (en días) del intervalo parto al primer servicio (P-PS) y
del intervalo parto concepción (P-C) de vacas con conteo de huevos de 49
nematodos en heces y sin huevos en muestras tomadas en torno a la
parición. a Ambas muestras HPG negativo. b Ambas muestras HPG
positivo.
Tabla 3. Anticuerpos primarios y secundarios utilizados, sus diluciones de

trabajo y su procedencia respectiva y el método de recuperación antigénica 62
empleado en cada caso.
Tabla 4. Significancias calculadas para todas las variables analizadas. pT:

significancia del efecto tratamiento. ptT: significancia del efecto tiempo 81
para el grupo tratado. ptC: significancia del efecto tiempo para el grupo
control. p20: significancia a la semana 20 de la comparación de tratados y
controles. p30: significancia a la semana 30 de la comparación de tratados
y controles. p40: significancia a la semana 40 de la comparación de
tratados y controles. p70: significancia a la semana 70 de la comparación
de tratados y controles. F=Friedman, M-W=Mann-Whitney
VIII
Resumen
IX
En el presente trabajo se evaluó la influencia de las parasitosis gastrointestinales
sobre aspectos productivos de bovinos Holstein, investigando los mecanismos
fisiológicos involucrados. Con este propósito se evaluaron parámetros productivos, de
desarrollo corporal y de desarrollo mamario y se determinaron variables endócrinas y
receptores específicos.
Como primer punto se caracterizó parasitológicamente el sistema de estudio, con una
exploración detallada a lo largo del tiempo. En el tambo de la escuela agropecuaria
M. C. y M. L. Inchausti (prov. Bs. As.), se identificaron los géneros de nematodos
presentes, la oferta larvaria, la dinámica poblacional anual y la prevalencia de
parásitos en las distintas categorías de bovinos presentes. El impacto de los
nematodos se evaluó en vacas adultas (Subsistema tambo, vacas en producción) y en
terneras en desarrollo (Subsistema recría). En el primer caso se evaluó la producción
de leche y la concentración de hormonas involucradas en la lactogénesis y en el
segundo, la influencia parasitaria sobre parámetros de desarrollo mamario en relación
con las alteraciones hormonales encontradas.
Con el propósito de evaluar la oferta parasitaria en el lugar de trabajo se realizaron
muestreos quincenales de las pasturas donde pastaban los rodeos, a lo largo de un
año, se colectaron las larvas de nematodos, se identificaron (según género) y se
cuantificaron. Los géneros representados en el sistema fueron, Cooperia, Ostertagia,
Oesophagostomun, Nematodirus, Trichostrongylus, siendo Cooperia el género
dominante en el subsistema recría y Ostertagia el subsistema tambo, durante todo el
año.
A todas las vacas del subsistema tambo (n=265) se les tomaron, mensualmente
durante dos años, muestras de materia fecal para conteo de huevos de nematodos por
gramo de heces (HPG). Se realizaron, durante el primer año, cultivos de huevos con
el objetivo de identificar y cuantificar las larvas parásitas. Un estudio similar se
realizó en el subsistema recría (n=450), incluyendo cultivos e identificación de larvas,
durante doce meses.
Los resultados de los cultivos de huevos en materia fecal informaron que en tambo
Ostertagia fue el género más abundante mientras que en recría Cooperia resultó ser
dominante, en coincidencia con la prevalencia larvaria de las pasturas. Ambos
géneros han sido reportados como los más patogénicos para bovinos, y los resultados
concuerdan con lo esperado para la zona de trabajo.
A las vacas en producción (N=180) se les midió individualmente el volumen diario de
leche producida y se les tomó muestras de sangre para determinación de
concentraciones de las siguientes hormonas relacionadas con la lactancia: hormona de
crecimiento (GH), factor de crecimiento similar a insulina de tipo 1 (IGF-1),
prolactina e insulina.
Las vacas que resultaron positivas al control parasitológico (HPG>0) durante el
periparto (meses -1 y 0, siendo mes 0 el mes desde el día del parto al día 29 posparto)
produjeron un volumen anual de leche significativamente inferior que las negativas
(HPG=0). Esta merma en producción estuvo acompañada por menores valores séricos
de GH, IGF-1 y prolactina durante la lactancia, siendo todas hormonas responsables
de la distribución homeorréctica de nutrientes y la regulación de la actividad secretora
de la glándula mamaria.
En el subsistema de recría se generaron dos grupos de 20 individuos cada uno (con 4
réplicas una por cada estación del año), uno tratado con antiparasitarios
sistemáticamente desde el nacimiento y otro control, sin tratamiento. Todas las
terneras fueron pesadas mensualmente y se les tomaron, en cada oportunidad,
muestras de materia fecal para control parasitológico y muestras de sangre para
X
determinaciones de hormonas relacionadas con el crecimiento y el desarrollo (IGF-1
y progesterona). Por otra parte, se tomaron biopsias seriadas a 3 individuos de cada
grupo experimental (realizado para todas las replicas) a las 20, 30, 40 y 70 semanas
de vida, para determinar la posible influencia de la presencia de nematodos en el
desarrollo de la glándula mamaria En estas muestras se determinaron los siguientes
parámetros: relación parénquima/estroma, proliferación celular, proporción de
receptores de estrógeno de tipo α (ER-α) y proporción de proteínas de unión a IGF de
los tipos 2 y 3 (IGFBP-2 y -3). A las 70 semanas se midió el área pélvica de las
terneras.
Las terneras tratadas con antiparasitarios, presentaron mayor peso corporal,
adelantamiento puberal, mayor área pélvica y mayor concentración sérica de IGF-1,
corroborando resultados anteriores de nuestro laboratorio. El tejido mamario de las
terneras tratadas resultó tener una mayor relación parénquima/estroma, una mayor
proliferación celular, una mayor proporción de ER-α y una menor proporción de
IGFBP-2 que el de las terneras sin tratar.
El menor desarrollo mamario presentado por las terneras controles podría estar
mediado sistémicamente por la menor concentración de IGF-1, que a su vez podría
estar afectando la concentración de los receptores de estradiol, hormona indispensable
para el desarrollo mamario en la etapa puberal. Además, el aumento de IGFBP-2
intramamario podría generar el secuestro de parte del IGF-1, dejando menos factor de
crecimiento biodisponible, efecto que se sumaría a la deficiencia sistémica observada.
El conjunto de estas situaciones (menor IGF-1 sistémico y biodisponible, menor
concentración de los receptores de estradiol) explicaría los parámetros diferenciales
de crecimiento entre los grupos experimentales.
Como conclusión general de este trabajo podríamos decir que la energía
redireccionada hacia el desarrollo y la reproducción de los parásitos causa, en vacas,
una disminución de su producción de leche y, en terneras, un menor desarrollo de la
glándula mamaria, el cual es consistente con un retraso en el desarrollo general de los
animales afectados. Todos estos efectos estarían mediados, al menos en parte, por
alteraciones en el sistema regulatorio endocrino del hospedador.
XI
Abstract
XII
In the present work the influence of the gastrointestinales parasitisms was evaluated
on productive aspects of Holstein bovines, investigating the involved physiological
mechanisms. With this intention were evaluated, productive parameters, corporal
parameters and mammary gland development parameters and endocrine variables and
specific receptors were determinated. As first point parasitological characteristics of
system (in study) were determinate, with an exploration detailed throughout the time.
In the dairy farm of school M. C. and M. L. Inchausti (Buenos Aires province.), the
genus of nematodes were identified, the larval offer, annual population dynamics and
the prevalence of parasites in the different categories from bovine presents were
identified.
The impact of the nematodes was considered in adults cows (dairy factory’s
subsystem, cows in production) and in developing heifer calves (yearling heifer’s
subsystem).
In the first case the milk production was evaluated and hormones related to
lactogenesis were measured in serum. In the second case, the influence of the
presence of nematodes on mammary developmental parameters was considered, and
was related to the hormonal alterations.
With the purpose of evaluating the parasitic offer of the work site, samplings of the
pastures (performed every two weeks) where taken where herds grazing. Nematode
larvae were collected, then identified (according to genera) and quantified.
With respect to diversity, the genera represented in the system were Cooperia,
Ostertagia, Oesophagostomun, Nematodirus, Trichostrongylus. According to the
abundance, the dominant genera in all the system were Cooperia and Ostertagia at
spatial (both subsystems) and temporal (during the year) levels. The first was
dominant in the yearling heifer’s subsystem whereas the second was dominant in the
dairy factory’s subsystem.
All the cows in the dairy factory’s subsystem (n=265) were monthly sampled for
feces during two years for counting egg per gram (EPG). During the first year, egg
cultures with the intention of identifying and quantifying parasitic larvae, were
performed. The study was similar for the yearling heifer’s subsystem (n=450),
including cultures and identification of larvae, during twelve months.
The results of the egg cultures in fecal matter informed that Ostertagia was the most
abundant in dairy farm and in breeding Cooperia became dominant, in coincidence
with the larval prevalence of the pastures. Both sorts have been reported like most
pathogenic for bovines, and the results agree with the expected for the zone of work.
Milk production was individually and daily measured to all cows in production
(n=180) and blood samples for determination of hormonal concentrations related to
the lactation (GH, IGF-1, prolactin and insulin) were monthly taken to all of them.
The positive cows to the parasitological control during peripartum (moth -1 and 0,
being month 0 the month from the day of the parturation to day 29 posparturation),
produced an annual volume of milk significantly lower than negative cows (EPG=0).
This decrease in production was accompanied by smaller séricos values by GH, IGF-
1 and prolactina during lactation, being all hormones responsible for the homeorrectic
distribution of nutrients and the regulation of the secretory activity of the mammary
gland.
In the yearling heifer’s subsystem two groups of heifer calves (with 4 replicates one
by each station of the year) were randomly generated. One was systematically treated,
from birth onward, with antiparasitics drugs (n=20) and the other was left without
treatment, as control (n=20).
XIII
All the calves were weighed monthly and, in each opportunity, samples of feces for
parasitological control, and blood for hormone determinations, (IGF-1 and
progesterone), were taken.
On the other hand, serial biopsies to 3 individuals were taken from each experimental
group (made for all replies) at 20, 30, 40 and 70 weeks of life, to determine the
possible influence of the presence of nematodes in the development of the mammary
gland. In these samples the following parameters were determined:
parenchyma/stroma rate, cellular proliferation, proportion of estrogen receptors α and
proportion of IGFBP-2 and -3.
The calves treated with antiparasitic drugs, had greater body weight, puberal
advancement, greater pelvic area and higher serum concentration of IGF-1 (in
agreement with previous results from our laboratory). The mammary tissue of the
treated calves had greater parenchyma/stroma rate, higher cellular proliferation rate,
greater proportion of estrogen receptors α and a smaller proportion of IGFBP-2
comparing with untreated heifers.
The lesser mammary development presented by the untreated calves could be
mediated systemically by smaller concentration of IGF-1, that could be in turn
affecting the concentration of the estrogens receptors, as estrogens and IGF-1 are both
essential for pubertal mammary development. Furthermore, the intramammary
increase of IGFBP-2 could capture part of IGF-1, leaving less growth factor
bioavailable. All these situations together (lower systemic and bioavailable IGF-1,
and lower concentration of the estrogens receptors) could explain the differential
parameters of mammary development between the experimental groups.
As general conclusion of this work, we can say that the energy redirected towards the
development and reproduction of the parasites causes a diminution of milk production
in cows, and a smaller development of the mammary gland, which is consistent with a
delay in the general development of the affected animals observed, in calves. All
these effects would be mediate, at least in part, by alterations in the endocrine
regulatory system of the guest.
XIV
1 Capítulo 1: Introducción
1
Los sistemas rurales de producción son estructuras que resultan de la acción
antrópica sobre los sistemas naturales (tanto en sus componentes orgánicos como
inorgánicos). Su origen y evolución están asociados a necesidades humanas,
fundamentalmente de obtención de alimentos (Sans, 2007). Los componentes del
agroecosistema son físicos, como el sustrato geológico, el suelo, el clima o la parcela
de cultivo; biológicos, como plantas, animales y microorganismos; y
socioeconómicos, como los humanos que lo habitan y/o explotan (Ortíz-Avila, 2008).
En los sistemas naturales, las poblaciones que forman la comunidad interactúan
con intercambio de materia y energía (Begon y col., 2006). Esta característica la
comparten con los agroecosistemas, pero en este último caso se suma el aporte
energético exógeno, por parte del hombre, en pos del mantenimiento del sistema.
La palabra biodiversidad es la forma abreviada de diversidad biológica y fue
inicialmente definida como el conjunto de plantas, animales y microorganismos que
viven e interaccionan en un ecosistema (Wilson, 1988). También fue definida como:
“la diversidad de vida en la tierra en todos sus niveles, desde los genes a los
ecosistemas y los procesos ecológicos y evolutivos que lo sustentan” (Gaston, 1996).
Son también componentes fundamentales de la biodiversidad los procesos
funcionales que derivan de la especialización e interacción entre los individuos
(Williams y col., 1996).
Las relaciones entre los seres vivos se conocen como interacciones y pueden ser
de tipo intra o interespecíficas y ocurren tanto en los sistemas naturales como en los
antrópicos. Las relaciones interespecíficas conocidas son: depredación, simbiosis,
comensalismo y parasitismo. Estas relaciones constituyen algunos de los elementos a
través de los cuales opera la selección de individuos y que, sin intervención humana,
conocemos como selección natural.
El parasitismo está considerado como un caso especial de depredación o
consumo. Begon define a los parásitos como “aquel grupo de organismos que obtiene
sus nutrientes de uno o de algunos pocos individuos hospedadores, normalmente
causando daño pero no la muerte inmediata” (Begon y col., 2006). Por otra parte
Haldane, caracterizó a la interacción Hospedador-parásito como una de las mayores
fuerzas en ecología y evolución (Haldane, 1949). Se sabe que esta relación es
promotora de coevolución entre las especies. Ésta resulta de la evolución de una
especie en respuesta a la selección impuesta por una segunda especie, que a su vez es
2
afectada por la primera especie. De este modo la selección recíproca es un
prerrequisito para la coevolución (Clayton y col., 1999).
La relación hospedador-parásito genera en el hospedador un abanico de
consecuencias negativas a nivel de estado corporal y eficiencia biológica. En sistemas
ganaderos los parásitos provocan cuantiosas pérdidas y las presiones selectivas sobre
los parásitos provienen mayormente del manejo humano. Las parasitosis son
combatidas por su impacto productivo, por lo que los cambios en los organismos se
producen mayormente en una dirección en donde una de las especies cambia más
rápidamente que la otra. Un ejemplo de esto es la adaptación que se produce en
parásitos sometidos a la presión selectiva de antiparasitarios y que se conoce como
resistencia antiparasitaria.
En el presente trabajo se investiga la influencia de parásitos nematodos
gastrointestinales en la producción de leche y en el desarrollo de la glándula mamaria
de bovinos Holstein.
En los bovinos, la interacción parasitaria ha sido exhaustivamente estudiada en
ganado de carne pero no tanto en vacas lecheras. En Argentina, algunos ensayos
indican un aumento en la producción de leche del 5% en los animales desparasitados
durante la lactancia a intervalos mensuales (Biondani y Steffan, 1988; Fiel y Steffan,
1994). A pesar de estos antecedentes, la postura más difundida entre veterinarios
rurales y productores sostiene que las consecuencias de la presencia de nematodos
gastrointestinales son escasas o nulas entre animales adultos, por haberse llegado a un
equilibrio hospedador-parasito (inmunidad adquirida).
Trabajos de nuestro laboratorio han descripto también consecuencias de las
nematodiasis en terneras de raza lechera, las cuales presentaron menor peso corporal,
menor área pélvica, retraso puberal y disminución en la concentración sérica de
hormonas involucradas en el crecimiento y la regulación de la reproducción (Mejía y
col., 1999; Lacau-Mengido y col., 2000).
En el presente trabajo se investigó la influencia de los parásitos nematodos sobre
la producción de leche y sobre el desarrollo de la glándula mamaria prepuberal. Es
por ello que, a continuación, se desarrollarán dos puntos introductorios que, en
apariencia, no tienen relación entre si, pero que serán necesarios para la correcta
comprensión de este trabajo de tesis. En primer lugar, se comentarán las
características del ciclo de vida de los parásitos nematodos que están asociados a
bovinos mediante la interacción hospedador-parasito y se incluirán efectos conocidos
3
de esta interacción sobre los hospedadores. En segundo lugar, se explicará el
desarrollo normal de la glándula mamaria y su regulación.
1.1 Parasitosis gastrointestinales en bovinos
1.1.1 Ciclo Biológico de nematodos gastrointestinales
El ciclo de los nematodos gastrointestinales de bovinos es de tipo directo dado

que no involucra hospedadores intermedios. Existen dos fases diferenciadas, una en
donde el parásito se desarrolla dentro del hospedador y otra de vida libre.
El ciclo comienza cuando larvas infectivas (L3) son incorporadas con la
ingestión de forraje, y luego de desprendida su cutícula externa, penetran en la
mucosa del abomaso o intestino. Allí mudan a larva L4 y luego a L5, aumentando de
tamaño (Levine, 1963; Amour y Osbourn , 1982). Alcanzan luego la madurez sexual
y se produce la cópula entre machos y hembras, las cuales iniciarán la oviposición.
El período comprendido desde la ingestión de la larva hasta la hembra
ovipositando se denomina prepatencia. La duración del mismo es variable según el
género, oscilando en la mayoría entre 3 y 6 semanas (Steffan y Fiel, 1986).
El período externo, o de vida libre, del ciclo comienza cuando los huevos puestos
por los parásitos son eliminados junto con la materia fecal del hospedador. Cuando
las condiciones de temperatura y humedad son apropiadas los huevos eclosionan a
larvas L1, que se encuentran cubiertas por una cutícula. Con posterioridad mudan a
L2 cambiando la cutícula que las recubre. Durante estos dos primeros períodos las
larvas se alimentan de hongos y bacterias presentes en la materia fecal y acumulan
glucógeno (Williams, 1983). El desarrollo continúa hasta L3 generando una nueva
envoltura por fuera y conservando la cutícula anterior. Esta característica le otorga
una gran resistencia a las condiciones ambientales adversas aunque le impide
alimentarse, por lo que vive de sus reservas nutritivas.
El ciclo queda completo cuando las L3 infestantes abandonan la materia fecal,
favorecidas por condiciones ambientales como las lluvias, y migran a los pastos para
ascender por ellos. Cuando, más tarde, éstos son consumidos por el ganado, se
produce la reinfección (Steffan y Fiel, 1986).
4
En la mayoría de los géneros se presenta una adaptación que les permite sortear
condiciones ambientales adversas mediante la interrupción temporal de su desarrollo.
Este proceso de denomina inhibición o hipobiosis (Steffan y Fiel, 1986; Fiel y col.,
2001) y consiste en detener su ciclo en la fase de L4 y permanecer en ella por varios
meses (4-5) para luego reanudar el desarrollo, pasando a L5 y posteriormente a
adulto, cuando las condiciones ambientales son favorables.
1.1.2 Ecología de la forma de vida libre
La eclosión de los huevos es favorecida por condiciones de alta humedad y

temperatura media. El excesivo calor deshidrata las larvas siendo una importante
causa de muerte (Steffan y Fiel, 1986), por lo que las mejores condiciones para la
vida de las larvas en la región pampeana suelen darse en otoño-primavera.
Las lluvias, y en menor medida el pisoteo por parte del ganado, juegan un papel
fundamental en la migración de las larvas desde la materia fecal a las pasturas
(Williams, 1983).
Las mayores densidades de larvas L3 se encuentran en las proximidades de la
materia fecal, dispersadas por los agentes antes citados. Como son altamente móviles,
ascienden a los pastos, encontrándose la mayor proporción de ellas entre los 0 y 3 cm
de altura (Williams, 1983).
1.1.3 Interacciones dentro del hospedador
El medio interno del hospedador puede ser colonizado por distintas especies de
parásitos coinfectantes. El mismo se convierte en su medioambiente y es allí donde se
establecen las interacciones entre especies: parásito-párasito y parásito-hospedador
(Pedersen y Fenton, 2007).
Entre parásitos puede plantearse competencia intra e interespecífica por recursos
o nicho. Algunos son más eficientes en la utilización de los recursos o limitan el
establecimiento de otros parásitos. Por ejemplo, los nematodos del género Ostertagia
dificultan, en ovinos, el establecimiento y la oviposición de otros nematodos como
Haemonchus, mediante la inducción de cambios en la fisiología del tracto
gastrointestinal del hospedador (Dobson y Barnes, 1995). Por otro lado, se ha
observado que las infecciones de Trichostrongilus axei disminuyen las infecciones de
Haemonchus contortus y Ostertagia circumcincta en ovejas (Reinecke y col., 1980;
5
Reinecke y col., 1982). Además, infecciones moderadas de Ostertagia circumcincta
atenúan la patología normal causada por Haemonchus contortus en ovejas (Blanchard
y col., 1986). También, suelen darse interacciones positivas o aditivas, como es el
caso de las especies T. culimbriformis y O. circumcincta que pueden coexistir
causando infecciones con síntomas más agudos que en las monoespecficas (Steel y
col., 1982).
Otras interacciones son las que surgen entre parásito y hospedador. Las mismas
pueden ser del tipo resistencia y/o resiliencia. Resistencia es la capacidad del
hospedador de controlar sus poblaciones parasitarias mediante el sistema inmune y la
resiliencia es la capacidad de los animales de soportar un cierto grado de parasitismo
y mantenerse productivos (Torres-Acosta y col., 2004). Estas características varían de
un animal a otro dependiendo de la raza, la edad, la condición corporal y el sexo. Las
razas cebuinas o aquellas razas emparentadas con cebú como los Brangus o Santa
Gertrudis son más sensibles a las nematodiasis que las razas británicas tradicionales
de la región pampeana (Suarez, 1994).
1.1.4 Relación inmunitaria hospedador-helmintos
El sistema inmune de los vertebrados tiene una amplísima capacidad de reacción

frente a una gama importante de patógenos, pero cuando se trata de parásitos
pluricelulares como los nematodos por ejemplo, la capacidad de eliminarlos
completamente se ve limitada, ya que éstos interactúan con el sistema inmune de tal
modo que pueden evadir, atenuar o modificar su actividad.
La respuesta inmune generada por parte de los vertebrados a causa de la
presencia de helmintos es totalmente diferente a la inducida por patógenos
bacterianos. Los helmintos inducen una respuesta de tipo Th2 la cual involucra
diversas interleuquinas (IL-3, IL-4, IL-5, IL-9, IL-10, IL-13), anticuerpos como
inmunoglobulina tipo G1 (IgG1), inmunoglobulina tipo E (IgE) y la expansión de
poblaciones de eosinófilos, basófilos, mastocitos y activación de macrófagos
(Finkelman y col., 2004; Anthony y col., 2007).
Una vez que el parásito está en el tracto gastrointestinal, produce antígenos que
son endocitados por células dendríticas de la mucosa, las cuales migran a los ganglios
6
linfáticos regionales y presentan estos antígenos a los linfocitos T CD4+ y CD8+
(Fainboin y Geffner, 2011).
En el caso de la inmunidad tipo Th2 las células CD4+ juegan un papel
fundamental (Mohrs y col., 2001), expresando diversas citoquinas y quemoquinas,
entre ellas IL-3 e IL-9. Éstas activarán mastocitos y basófilos (sistema inmune innato)
que producirán IL-4. En el mismo sentido, también las células CD4+ producirán IL-4
e IL-13 (sistema adaptativo). De este modo las mencionadas IL son sintetizadas
conjuntamente por el sistema innato y el adaptativo.
Las células epiteliales del intestino, ante la presencia de parásitos, producen IL-
25 e IL-33, las cuales activan a otros leucocitos llamados nuocitos, que producen IL-
13 como respuesta, lo que da mayor sinergia al sistema ya descripto. Las IL-4 y 13
serán captadas por los receptores IL-4R e IL-13R presentes en músculo liso y células
epiteliales del intestino (Allen y Maizels, 2011), que se activan y estimulan la
hipercontractibilidad muscular y el movimiento de las microvellosidades de las
células epiteliales para favorecer la expulsión de los parásitos (Cliffe y col., 2005).
Las células epiteliales, además de su función de barrera física, son componentes
integrados a la inmunidad innata y adaptativa (Saenz y col., 2008) y responden,
además, promoviendo la diferenciación de las células glandulares, lo cual eleva la
secreción de moco (Hasnain y col., 2011) y aumenta la producción de resistina
similar a molécula β (RELM β) que es una proteína con efecto directo antihelmíntico
(Artis y col., 2004; Herbert y col., 2009).
El perfil humoral de la respuesta Th2 se centra en la elevación de los niveles de
IgG1 e IgE. Estos isotipos de inmunoglobulinas son dependientes de citoquinas, las
cuales derivan del sistema inmune adaptativo e innato (IL-4) (Satoguina y col., 2005).
Los anticuerpos serían particularmente importantes en la mediación de la respuesta a
los estados extraintestinales de las infecciones con helmintos, generando una
reducción en la eficiencia biológica (“fitnnes”) de los parásitos (McCoy y col., 2008;
Harris y Gause, 2011). Además existen evidencias in vitro de que IgE ejercería
efectos citotóxicos sobre larvas de helmintos (Capron y col., 1995).
Esta respuesta de tipo Th2 presenta algunas características favorecidas por la
selección natural frente a otro tipo de respuesta inmune. Ya que es de tipo no
inflamatoria y al mismo tiempo reparadora del tejido dañado (Eming y col., 2007).
Además tiende a encapsular los macroparásitos mediante una matriz extracelular de
proteínas (Allen y Wynn, 2011).
7
1.1.5 Regulación por parte del parásito
Investigaciones recientes de la relación hospedador-parásito han mostrado que la

presencia de parásitos redunda en algunos beneficios indirectos para el hospedador;
como es el caso del desarrollo de un tipo de respuesta inmune que previene ciertas
patologías inmunitarias. Si bien este hecho se está estudiando particularmente en
humanos, es relevante destacarlo ya que la similitud del sistema inmune entre
mamíferos es muy alta.
Sistemas experimentales han vinculado las infecciones parasitarias con la
marcada expansión de poblaciones celulares de naturaleza inmunoregulatoria, como
la activación alternativa de macrófagos T reguladores y B reguladores (Allen y
Maizels, 2011).
Por otra parte, se ha observado que numerosas alergias y condiciones
inflamatorias autoinmunes pueden ser atenuadas por diferentes infecciones
producidas por helmintos (Fleming y Fabry, 2007; Fallon y Mangan, 2007). Los
parásitos generan factores que inducen directamente la conversión de de células T
vírgenes a células T reguladoras y funcionales (Grainger y col., 2010) y de este modo
la presencia del parásito regula la respuesta inmune por parte del hospedador. Para el
caso de los rumiantes (ovejas) se ha descripto la respuesta tipo Th2 frente a la
infección por Haemonchus contortus (Schallig, 2000).
El aumento excesivo de la respuesta Th2 genera disminución en la respuesta Th1
que es quien controla las infecciones bacterianas (Wilson y col., 2005).
Este fenómeno de regulación por parte del parásito está siendo en la actualidad
objeto de estudio en humanos. En la mayoría de las poblaciones, los parásitos no
representan un factor selectivo de los individuos y por lo tanto se ha ido perdiendo
diversidad genética capaz de enfrentarlos, y de este modo se han favorecido genotipos
proinflamatorios. Esta situación ha causado el aumento de trastornos de tipo alérgicos
y autoinmunes (Allen y Maizels, 2011). Esta problemática no acontece en lugares con
poblaciones parasitarias en equilibrio con las humanas, las cuales conservan una
mayor diversidad genética y la inmunomodulación mediada por los parásitos.
8
1.1.6 Patología causada en el hospedador
En los bovinos, los géneros de nematodos capaces de causar trastornos a nivel del
estómago son: Ostertagia, Cooperia, Trichostrongilus y Haemonchus. Por otro lado
los que causan patologías intestinales son: Cooperia, Oesophagostomum y
Nematodirus (Williams, 1983).
Ostertagia junto con Cooperia son los principales géneros causantes de
enfermedad parasitaria, clínica y/o subclínica en la Pampa húmeda, causando
pérdidas productivas importantes en animales jóvenes debido a su gran patogenicidad
en el primer caso, y a su elevada prevalencia en el segundo (Fiel y col., 1990).
Las alteraciones estomacales son causadas mayormente por Ostertagia. Las
larvas, una vez en el estómago, se introducen dentro de las glándulas gástricas
(productoras de acido clorhídrico) crecen y luego emergen, destruyéndolas. La
emergencia de los géneros como Ostertagia que presentan hipobiosis (larvas
inhibidas) puede darse de tres maneras: 1- Madurar pocas diariamente, 2- madurar
por oleadas o 3- madurar simultáneamente; (Williams, 1983). El último caso
mencionado es el más grave debido a que la emergencia larval destruye gran cantidad
de glándulas al mismo tiempo (Amour y Osbourn , 1982), lo que conduce a la
disminución de la acidez del estómago, necesaria para el funcionamiento de las
enzimas digestivas.
La proenzima pepsinógeno requiere de condiciones ácidas (pH menor a 2,5) para
transformarse eficientemente en pepsina y degradar las proteínas de las fibras
vegetales. Al aumentar el pH, el pepsinógeno no pasa a pepsina, causando una
deficiencia en la degradación proteica. Por otra parte, el aumento de pH causa otros
problemas asociados, como proliferación de bacterias que causan diarrea. Los
nematodos que, como adultos colonizan el intestino delgado, como Cooperia spp.,
Trichostrongylus spp., y Nematodirus (importante en zonas frías), y aquellos que
colonizan el intestino grueso, ocasionan enteritis.
En todos los casos, los trastornos para el animal incluyen, disminución del apetito
(Coop y col., 1977), reducción del tránsito digestivo, alteraciones de la digestibilidad
del alimento así como también del metabolismo del calcio, fósforo y del balance
electrolítico (Entrocasso y col., 1986). Como consecuencia, la falta de incorporación
proteica de origen nutricional resulta en disminución del peso y del tejido muscular
(Suarez y col., 1991).
9
1.2 Desarrollo mamario
El proceso de desarrollo de la glándula mamaria comienza en la embriogénesis

como un derivado ecto-mesodérmico guiado por características genéticas y
ambientales y se conoce como mamogénesis. Para todos los mamíferos euterios la
mayor parte del desarrollo mamario ocurre postnatalmente y está dirigido por señales
de tipo endocrinas y factores de crecimiento locales (Topper y Freeman, 1980;
Hennighausen y Robinson, 1998). En el feto femenino la insulina y la hormona del
crecimiento (GH) favorecen el desarrollo de las yemas o brotes mamarios. En cambio
en el macho por la influencia de los andrógenos, elaborados por los testículos
parcialmente activos, se inhibe el crecimiento mamario.
La glándula mamaria está formada por dos estructuras principales: el parénquima
y el estroma. El parénquima es la parte secretora de la glándula y está constituido por
tejido epitelial túbulo-alveolar, derivado del engrosamiento lineal del ectodermo del
embrión, y consta de los llamados sistemas alveolar y tubular (ductal). El estroma
está formado por otros tejidos complementarios de origen mesodérmico como los
sistemas vasculares sanguíneo y linfático, el tejido adiposo, el conjuntivo y el
nervioso (Hovey y col., 2002; Hovey y Trott, 2004).
Ambas estructuras se desarrollan muy temprano en el embrión. A partir del
ectodermo ventral, se induce la migración de células epiteliales hacia ambos lados de
la línea media, formando dos cordones mamarios en la superficie de la piel,
constituidos por células epiteliales ectodérmicas, que se van estrechando hasta formar
dos líneas, llamadas líneas mamarias de la leche (Hovey y col., 1999).
En el bovino, las líneas mamarias son visibles en embriones a partir de los 35
días de vida (Glauber, 2007). Al nacimiento, la glándula mamaria bovina consiste en
una red rudimentaria de ductos conectados con la pequeña cavidad de la cisterna, que
a su vez se comunica con el canal del pezón (Capuco y Ellis, 2005). Estas estructuras
están incluidas en una matriz grasa. Los ductos son cuerdas de células epiteliales que
penetran en el estroma (matriz grasa), y se desarrollan y ramifican a medida que el
animal crece (Fig. 1 A). Estas cuerdas terminan en las unidades terminales de ducto
(en inglés: terminal ductal units -TDU) que poseen aspecto arborescente en bovinos y
son las estructuras desde dónde la glándula se va desarrollando y diferenciando
(Capuco y Ellis, 2005) (Fig. 1 B y C). Los TDU contienen aproximadamente 4 a 8
10
estratos de células epiteliales. El estrato basal está poblado por células indiferenciadas
presumiblemente precursores mioepiteliales (Capuco y col., 2002; Capuco y Ellis,
2005). Conforme avanza el desarrollo, en esta estructura compacta se forma un lumen
central. En los bovinos, a diferencia de otras especies, este lumen se generaría sin que
ocurra apoptosis, solamente por separación de las células (Capuco y col., 2002).
A B
C D
Figura 1. A: Glándula mamaria de ratón en desarrollo, las flechas señalan a los botones terminales
(TEBs) (análogos a TDU en bovinos) que penetran en el tejido graso. B: Unidad terminal ductal
(TDU) en bovino. C: Imagen tridimensional de la TDU bovina. D: Esquema de glándula mamaria
desarrollada lobule=lóbulillo, alveoli=alvéolos, duct=conducto, gland cistern= cisterna de la
glándula, teat cistern=cisterna del pezón, teat=pezón. Figuras A, B y D tomadas de (Capuco y
Ellis, 2005).
Tanto en ratones como en bovinos, el desarrollo comprendido entre el nacimiento

y la pubertad, está caracterizado por la acumulación de estructuras ductales epiteliales
(Silberstein, 2001; Capuco y col., 2002).
El desarrollo neonatal y postnatal (hasta los 3 meses de edad) de la glándula
mamaria ocurre de modo isométrico con el resto del desarrollo somático (se da al
mismo ritmo que el resto del cuerpo), mientras que en el período pre y peripuberal (3-
9 meses) y puberal (8-9 meses en adelante), el crecimiento se da de modo alométrico
(más rápido que el resto del cuerpo) con elongación de ductos que invaden el tejido
11
adiposo, ramificación de las terminales (TDU) y adquisición de forma alveolar por
parte de éstas (Hovey y col., 2002; Hovey y Trott, 2004).
Durante este período la síntesis de ADN en el tejido mamario se incrementa 3,5
veces (Martinet y Houdebine, 1993).
1.2.1 Regulación endocrina del desarrollo mamario
Los diferentes estadios de crecimiento, diferenciación, y también actividad

secretoria e involución de la glándula mamaria, durante la vida de la hembra
mamífera, están regulados fisiológicamente.
Las distintas fases de desarrollo están coordinadas por hormonas y factores de
crecimiento que interactúan para llevar adelante la morfogénesis de la glándula. Las
hormonas intervinientes son de origen: ovárico (estradiol y progesterona), hipofisario
(GH y prolactina), tiroideo (triiodotironina (T3) y tetraiodotironina o tiroxina (T4), y
factores de crecimiento de producción local y hepática (IGF-1 y factor de crecimiento
epidérmico o EGF). Cada una de estas hormonas interviene en distintos aspectos de la
morfogénesis glandular en una coordinada y compleja sincronización. La elongación
de los ductos estaría principalmente dirigida por los estrógenos, por el sistema
GH/IGF-1 y por EGF, mientras que progesterona, prolactina, T3 y T4 estimularían su
ramificación (Hovey y col., 2002). Además, y en todo momento, participarían
factores del estroma en una regulación paracrina, regulados a su vez por las hormonas
ováricas e hipofisarias (Masso-Welch y col., 2000; Beleut y col., 2010).
1.2.2 Estrógeno y su receptor
Clásicamente se ha demostrado que el estradiol es el principal responsable del

desarrollo mamario entre los estadios de prepubertad y adulta virgen (Lydon y col.,
1995). En ratones, se observó, que si a los animales normales se les suministra un
tratamiento anti-estrogénico durante la etapa juvenil y prepuberal se inhibe la
proliferación del epitelio mamario (Silberstein y col., 1994). Por otra parte los ratones
knockout para el receptor de estradiol tipo alfa presentan estructuras mamarias
indiferenciadas durante toda la vida, lo que reafirma el papel indispensable que juega
esta hormona en la mamogénesis (Bocchinfuso y Korach, 1997). En bovinos se ha
12
demostrado que el desarrollo mamario puberal está fuertemente vinculado con la
maduración gradual de los ovarios, ya que una ovariectomía temprana anula
completamente el crecimiento mamario (Purup y col., 1993; Ballagh y col., 2008).
Esto fue corroborado también en cabras, en donde la ovariectomía temprana tuvo un
impacto negativo sobre el desarrollo puberal de la glándula mamaria, resultando en
un parénquima mamario rudimentario, en una menor expresión de los receptores de
estradiol y progesterona y en una menor tasa de división celular (Dessauge y col.,
2009).
Se conoce, desde hace tiempo, que los receptores de estradiol se sintetizan

tempranamente en el mesénquima embrionario, (Durnberger y Kratochwil, 1980). De
este último existen dos isoformas ER-α y ER-β. En el caso de glándula mamaria
bovina, se ha demostrado que la isoforma alfa (ER-α) es la que predomina en el tejido
durante todas las etapas del desarrollo (Schams y col., 2003; Connor y col., 2005;
Meyer y col., 2007).
1.2.3 Hormona de crecimiento (GH), su receptor y hormona

efectora
La hormona GH es otro participante fundamental de la regulación de la

morfogénesis de la glándula mamaria. Esta hormona se sintetiza mayoritariamente en
la hipófisis, en altas concentraciones durante el período de crecimiento y en menores
cantidades en la adultez (Buonomo y Baile, 1990). Presenta un patrón de secreción
pulsátil, sexualmente diferenciado (Chowen y col., 1996; Agrawal y Shapiro, 2001).
Como su nombre lo indica, su principal función es la promoción del crecimiento
corporal, y participa también en la estimulación de la mayoría de los procesos de
desarrollo tisular (Renaville y col., 2002; Waters y col., 2006).
Por otro lado, el principal factor efector de la hormona GH es el IGF-1, que se
secreta principalmente en el hígado, desde donde es vertido a la circulación, pero que
también es sintetizado en los tejidos blancos de la hormona, estimulado o no, por ella
(Yakar y col., 2005). En este sentido, se ha detectado expresión del receptor de GH
(GHR) en tejido mamario bovino (Plath-Gabler y col., 2001) y en líneas celulares
mamarias (Zhou y col., 2008; Johnson y col., 2010).
13
La hormona de crecimiento es esencial para la morfogénesis ductal, actuando
principalmente a través de la estimulación de la síntesis de IGF-1 tanto a nivel
hepático como mamario (Ruan y col., 1992; Kleinberg y col., 2000).
También se ha demostrado que la glándula mamaria de ratón, expresa
endógenamente GH, en forma predominante en las células epiteliales, y que su nivel
de expresión está regulado diferencialmente durante las etapas ontogénicas del
desarrollo mamario. La acción autócrina de GH sería máxima durante el período de la
pubertad (Mukhina y col., 2006).
Trabajos anteriores han demostrado un papel primario para la GH en la
formación de las yemas terminales de ducto (del inglés: terminal end buds (TEBs))
(Ruan y col., 1992) (Ruan y col., 1992; Walden y col., 1998), estructuras altamente
proliferativas que conducen el proceso de morfogénesis ductal durante la pubertad en
murinos y que son homólogas a las TDU de bovinos.
1.2.4 Síntesis de IGF-1, su receptor y acción del factor
Como se ha mencionado, además de sintetizarse en el hígado, el IGF-1 se

produce en diversos tejidos en donde ejerce su acción en forma paracrina. Estudios
realizados en glándula mamaria murina demostraron la expresión endogena de IGF-1,
de IGF-2, y de su receptor de señalización primaria, el IGF-1R, durante la fase
postnatal de crecimiento epitelial rápido (Richert y Wood, 1999). Particularmente, la
producción local de IGF-1 ha sido descripta en el estroma de la glándula mamaria de
ratones y se postula que sería responsable de parte del desarrollo ductal, ya que la
deleción tisularmente dirigida del gen productor de IGF-1 en el hígado, que llevó a
una reducción del 75 % del IGF-1 sérico, no alteró las concentraciones del factor en
el tejido mamario, ni tampoco afectó el desarrollo mamario puberal (Richards y col.,
2004). Por otra parte, en glándula mamaria de ratón, se ha encontrado que la deleción
total del gen que codifica para IGF-1R reduce la proliferación celular e incrementa la
apoptosis en las TEBs, evidencia que sostiene la idea de que IGF-1R es fundamental
para el desarrollo de las terminales ductales (Bonnette y Hadsell, 2001).
En ratones ovariectomizados y deficientes en el gen que codifica para IGF-1, no
se observó desarrollo de estructuras ductales en la glándula mamaria a pesar de que
las concentraciones de GH eran normales. Con el suministro exógeno de estradiol e
14
IGF-1, se logró el desarrollo ductal antes inexistente, demostrando la importancia de
ambas hormonas. Además, la acción estimuladora del crecimiento de GH se vio
significativamente aumentada cuando esta hormona se administraba conjuntamente
con el estradiol durante la pubertad (Kleinberg y col., 2000).
1.2.5 Regulación de la acción de IGF-1 por las IGFBPs
Por otra parte, IGF-1 está regulado por varias proteínas de unión llamadas
también IGFBPs (del inglés: Insulin-like growth factor binding proteins), que lo
capturan con diversa afinidad. Sólo cuando IGF-1 está libre puede unirse a su
receptor y desencadenar una respuesta (Frystyk y col., 1994; Cusi y Defronzo, 2000).
Hasta ahora han sido identificadas seis de estas proteínas que se numeran del 1 al 6
(Rosenfeld y col., 1994; Jones y Clemmons, 1995). En el tejido mamario bovino se ha
caracterizado la expresión de 3 de las IGFBPs, las -2, -3 y -5 (Akers y col., 2005).
1.2.6 Progesterona
En último lugar, no se puede dejar de mencionar a la progesterona que también

participa en el desarrollo mamario, induciendo la proliferación y la diferenciación en
este tejido (Lydon y col., 2000). Aunque su acción más notoria, pero no exclusiva,
ocurre durante la preñez con formación ductal y alveolar, también se observó que el
tratamiento con progesterona durante la etapa peripuberal incrementó la morfogénesis
ductal y aumentó la ramificación de las terminales en la glándula mamaria de ratones
(Hovey y col., 2002). Durante las primeras etapas del desarrollo ductal mamario
también se ha detectado una fuerte influencia de la progesterona mediada por la
acción de su receptor (PR) (Shi y col., 2004).
Experimentos clásicos demostraron que la progesterona y el estradiol actúan
sinérgicamente promoviendo el desarrollo mamario. En conejos, la administración
conjunta de estrógenos y progesterona indujo el crecimiento mamario (Yamamoto y
Tuner, 1956). También en bovinos, en un experimento realizado en vacas adultas no
preñadas y no lactantes, la combinación de estrógenos y progesterona estimuló la
diferenciación del epitelio mamario y el desarrollo lobuloalveolar (Turner y col.,
1956).
15
1.2.7 Vías entrecruzadas
Es importante destacar que existen interacciones entre las acciones de IGF-1/

estradiol y sus respectivos receptores para regular el desarrollo mamario,
particularmente es importante destacar que existen especiales interacciones entre
IGF-1 y estradiol y sus respectivos receptores.
Un sinnúmero de experimentos han demostrado el efecto estimulador de
estradiol sobre el sistema IGF in vivo e in vitro. En ratas prepúberes se ha observado
la magnificación de la actividad mamogénica de IGF-1 cuando se trataron con 17β-
estradiol (E2) (Ruan y col., 1995). Estudios realizados en ratones demostraron que los
niveles intrauterinos de IGF-1 se incrementaron luego de la exposición a E2 (Murphy
y col., 1990; Kapur y col., 1992). Se ha demostrado, en útero de ratón, que E2
actuando a través de ER-α, estimula la señalización de IGF-1/IGF-1R e incrementa la
mitosis celular (Klotz y col., 2000; Klotz y col., 2002). Efectos similares a este han
sido reportados en la matriz grasa de la glándula mamaria bovina (Meyer y col., 2006;
Li y col., 2006).
Por otra parte, también se da el efecto inverso del IGF-1 sobre los receptores de
estradiol. Estudios realizados in vitro han demostrado que en ausencia de E2, IGF-1
puede estimular la fosforilación de ER (Aronica y Katzenellenbogen, 1993) e inducir
la expresión de los genes de respuesta a estrógeno (ERGs) (Klotz y col., 2002).
En el caso de la glándula mamaria de murinos se ha encontrado evidencia
concluyente de que el proceso de morfogénesis ductal está controlado por la suma de
las acciones de ambas hormonas: E2 e IGF-1 (Ruan y Kleinberg, 1999; Kleinberg y
col., 2000; Ruan y col., 2005).
En la glándula mamaria bovina el estrógeno estimula mayormente la expresión
de genes de IGF-1, más extensamente en la matriz grasa que en el parénquima (Berry
y col., 2001; Meyer y col., 2006), y el mayor grado de proliferación celular epitelial
ocurre en las regiones del parénquima adyacentes a la matriz grasa (Capuco y col.,
2002).
Además, dada la similitud estructural entre el receptor de IGF-1 y el de insulina
(IR) (tetrámeros de glicoproteínas compuestos por dos subunidades extracelulares α y
dos trasmembranales β) (Ullrich y col., 1985; Ullrich y col., 1986), es que se
producen reacciones cruzadas y tanto IGF-1 como insulina pueden unirse al otro
receptor, aunque con una afinidad mucho más débil que con el propio ligando
16
(Ozkan, 2011). En lo que concierne a la mitogénesis, ambas hormonas actúan en el
proceso, pero dependiendo del contexto fisiológico específico (donde hay muchas
variables interactuantes) IGF-1 puede actuar con efecto metabólico o mitogénico
(Bartella y col., 2012).
Teniendo en cuenta la multitud de factores que interactúan en el desarrollo de las
terneras, se ha postulado que la alteración de los mismos acarrearía consecuencias
sobre el crecimiento óptimo de los animales y el desarrollo normal de sus tejidos y
órganos, y esto, en última instancia, afectaría el posterior período de lactación
(Lammers y col., 1999; Sejrsen y col., 2000).
1.3 Sistema en estudio.
El sistema de tambo de la Escuela Agropecuaria M. C. y M. L. Inchausti (UNLP)

fue el lugar definido para el desarrollo del plan experimental del presente trabajo.
La escuela se encuentra situada en el partido de 25 de Mayo, Provincia de
Buenos Aires, Argentina (35 º 50’ 56´´ S; 60º 32’ 24´´ O) (Fig. 2 A).
El tambo se divide en dos sub-sistemas, el de producción y el de reposición (Fig.
2 B). En el primer sub-sistema se encuentran las vacas en lactación y en etapas
reproductivas. El segundo sub-sistema denominado “recría” cuenta con animales
jóvenes, desde el nacimiento hasta que llegan a la categoría de pre-servicio.
Posteriormente pasan a la categoría “en servicio” en la cual las vaquillonas son
inseminadas y, si están preñadas, son trasladadas al sector de producción para
sumarlas a los rodeos en lactación después del parto.
El manejo de ambos sistemas es pastoril, sobre pasturas consociadas o verdeos,
dependiendo de la época del año, con rotación diaria de parcelas y suplementación
con grano y reservas de forraje adecuada a cada categoría.
En el presente trabajo se investigó la influencia de parásitos nematodos en la
producción de leche y el desarrollo de la glándula mamaria prepuberal. Lo cual
requirió inicialmente un relevamiento parasitológico de pasturas y animales
(hospedadores) para conocer los valores de infección parasitaria y posteriormente
relacionarlos con parámetros fisiológicos y productivos de los bovinos.
17
A
B
Escuela
Subsistema de tambo
Subsistema de recría
Figura 2. A) La referencia amarilla marca la posición de la escuela M. C. y M. L. Inchausti.

Ubicada entre los partidos de 25 de Mayo y 9 de Julio de la provincia de Buenos Aires (Google
earth y Inav/Geosistemas SRL, 2012a). B) Imagen de los edificios escolares y los dos subsistemas
(tambo y recría) (Google earth y Inav/Geosistemas SRL, 2012b).
18
2 Capítulo 2: Objetivos
19
2.1 General
Evaluar la influencia de los parásitos nematodos gastrointestinales en la

producción lechera de vacas Holstein y en el desarrollo de la glándula mamaria de
terneras de la misma raza y estudiar los mecanismos fisiológicos involucrados.
2.2 Específicos
2.2.1 Sistemas tambo y recría
-Caracterizar la dinámica de parásitos nematodos del tambo en la escuela

agropecuaria Inchausti.
2.2.2 Vacas en producción
-Evaluar la influencia de parásitos nematodos en la producción lechera, por

comparación del volumen de leche producido por vacas con conteos positivo y
negativo de huevos de nematodos por gramo de materia fecal (HPG) durante el
periparto.
-Investigar la influencia de las nematodiasis sobre las concentraciones de las
hormonas relacionadas con la lactogénesis, GH, prolactina, IGF-I e insulina, mediante
la medición de las mismas en suero.
2.2.3 Recría
-Evaluar, en animales tratados con antiparasitarios y controles sin tratar, las

posibles diferencias en las concentraciones de las hormonas involucradas en la
regulación del desarrollo y el crecimiento (GH, IGF-1) y en la hormona marcadora de
la pubertad (Progesterona).
20
-Evaluar el efecto del tratamiento con antiparasitarios en el desarrollo de la
glándula mamaria de terneras Holstein criadas en un sistema pastoril, mediante la
realización de biopsias sucesivas y determinación de los siguientes parámetros:
a. Relación: área epitelial/área estromal.
b. Proliferación celular, mediante la cuantificación de la expresión de
PCNA (antígeno nuclear de proliferación celular) por inmunohistoquímica (IHQ).
c. Receptores de estrógeno alfa (ER-) mediante IHQ.
d. IGFBPs (2 y 3) por IHQ utilizando anticuerpos específicos.
21
3 Capítulo 3: Evaluación eco-
parasitológica del sistema de tambo
en la Escuela Agropecuaria
Inchausti.
22
En el presente capítulo se expondrán los resultados de las tareas de relevamiento
parasitológico, realizadas en el tambo de la Escuela Inchausti, que contemplaron los
dos sub-sistemas que lo integran (tambo y recría).
El tambo cuenta con 500 hectáreas praderizadas y con verdeos forrajeros según
la estación del año y con reservas de forraje de silo de maíz de producción propia. Se
ordeñan 180 vacas (promedio año) en una sala con fosa central, máquina ordeñadora
con extractores automáticos de pezoneras y con medidores computarizados de leche
en todas sus bajadas.
Los animales del tambo están divididos en cuatro grupos, y son trasladados de
uno a otro según su ciclo productivo y reproductivo. Los grupos se dividen en
animales de alta producción (entre 80 y 110 individuos), animales de baja producción
(entre 50 y 70 individuos), vacas secas (no productoras) que suelen compartir
potreros con las vaquillonas preñadas formando un solo rodeo (entre 20 y 60) y en
preparto (hasta 15 animales, según las pariciones).
El establecimiento cuenta con 200 hectáreas extras, destinadas a la cría y recría,
también con praderas permanentes o verdeos anuales. Los animales de la recría (entre
400 y 500 dependiendo el momento del año) están divididos en cinco grupos. La
guachera, integrada por animales jóvenes criados en estaca o jaula con alimento
balanceado y leche. En esta etapa permanecen durante los primeros sesenta días de
vida. Conforme van creciendo se los pasa a tres grupos sucesivos de recría (recría 1,
recría 2 y recría 3) alimentados con pasturas implantadas y distintas suplementaciones
de concentrados balanceados y maíz. El último grupo está integrado por vaquillonas
preservicio (alrededor de 300 kg). Los machos se recrían hasta alrededor de los 250
kg y luego son sacados del sistema tambo para pasar al de invernada.
3.1 Objetivo
- Caracterizar la dinámica de parásitos nematodos del tambo en la escuela

agropecuaria Inchausti.
Para el cumplimiento del objetivo se procedió a la caracterización parasitológica

del sistema durante un ciclo anual completo, evaluando:
23
- infestividad de las praderas
- diversidad de nematodos parásitos presentes en las mismas
- carga parasitaria de los animales de las distintas categorías y
- abundancia de géneros que eclosionan de huevos de nematodos cultivados.
3.2 Materiales y métodos
Entre marzo de 2007 y febrero de 2008 se realizaron muestreos quincenales de

todas las pasturas donde pastaban los animales, que permitieron (por técnicas de
extracción de larvas adheridas) determinar la oferta parasitaria cuali y cuantitativa a la
que estaban sometidos los individuos. Por otro lado se tomó mensualmente materia
fecal a todos los animales del sistema. Estas muestras permitieron cuantificar la
descarga de huevos de parásitos (HPG) además de posibilitar la identificación de
géneros parasitarios presentes mediante cultivo e identificación de larvas.
3.2.1 Muestreo de pasturas
La toma de muestras de pasturas se realizó en los potreros donde pastaban los

animales, recorriéndolos en forma de W y colectando pasto en la proximidad de las
deposiciones fecales (de unos 14 días de antigüedad aproximadamente). El pasto
colectado fue lavado con ¾ partes de agua sin cloro más el agregado de 2 o 3 gotas de
detergente no iónico durante 30 minutos, utilizando un lavarropas semiautomático.
El agua de lavado se pasó por un tamiz de 37 μ de abertura entre hilos, donde
quedaron retenidas las larvas. El producto del filtrado, tratado con la técnica de
Bareman (Fiel y col., 2005), fue depositado en embudos cónicos y las larvas se
colectaron por precipitación en el fondo de un tubo de ensayo luego de 24 horas (Fig.
3). El pasto fue secado y posteriormente pesado.
Pasadas las 24 horas se retiró el tubo de ensayo y se aspiró el sobrenadante (por
sifonado) considerando que las larvas estaban concentradas en el fondo del mismo.
24
Figura 3. Embudos para colectado de larvas.
El líquido conteniendo las larvas se colocó en un portaobjetos y se agregó

solución yodurada (yodo metálico al 2 % mas yoduro de potasio al 4 %). Las larvas
parásitas no se tiñen con esta solución, en cambio sí lo hacen los nematodos de vida
libre propios del suelo que toman un fuerte color rojizo. Los nematodos parásitos
fueron así identificados según clave de Fiel (Fiel y col., 2005) y cuantificados bajo
microscopio (Fig. 4 A y B). Esta técnica permite recoger un 40% de las larvas
presentes en la hierba (Fiel y Steffan, 1994).
A B
Figura 4. Larvas recuperadas de las pasturas. A) Género Cooperia. B) Género Nematodirus
3.2.2 Muestreo de materia fecal, huevos por gramo (HPG) y

cultivo
Se tomaron muestras de aproximadamente 100 g de materia fecal del recto de los

animales, directamente en bolsas de polietileno. De la muestra inicial se tomó una
alícuota de 3 g y se diluyó (1/10) con solución sobresaturada de cloruro de sodio.
Posteriormente se contaron los huevos de nematodos (Fig. 5 A) bajo microscopio
óptico en cámaras de Mac Master (Robert y O`Sullivan modificada por INTA) (Fig. 5
25
B), el valor cuantificado se multiplicó por el factor de dilución, expresándose el
resultado en huevos por gramo de materia fecal (HPG) (Fiel y Steffan, 1994) cuando
no se detectaron huevos de nematodos en la muestra de materia fecal analizada, el
valor informado de HPG resulto ser cero (0).
A B
Figura 5. A) Huevo de nematodo. B) Cámara de Mac Master conteniendo dilución de

materia fecal.
Para la identificación de los géneros de nematodos presentes en la materia fecal

se realizó el cultivo de la misma según O’Sullivan adaptado por INTA (Fiel y Steffan,
1994) y se identificaron según clave (Fiel y col., 2005). Esta técnica se aplicó en
“pooles” de muestras detectadas como positivas al HPG.
Para inducir la eclosión de los huevos se procedió según la metodología de
(Henriksen y Korsholm, 1983). Brevemente, se toman 2 o 3 g de materia fecal
colocándolos en un recipiente, agregando telgopor granulado y mezclando bien.
Luego la preparación se envuelve en una gasa y se deja en un vaso de precipitados
con agua sin cloro a una temperatura de entre 20 y 22 º C durante 15 días.
Posteriormente se recuperan las larvas del cultivo por filtrado y decantación y tras
colocarse una alícuota del líquido que las contiene en el portaobjetos se las tiñe con
solución de yoduro de potasio para diferenciar larvas de vida libre de especies
parásitas. Las primeras se tiñen fuertemente con el colorante mientras que las
especies parásitas conservan su tono original. Finalmente, se identifican y cuantifican
las larvas de los géneros parásitos al microscopio.
26
3.2.3 Análisis estadísticos
En el caso del subsistema de recría para chequear la posible existencia de

diferencia entre las cargas parasitarias presentadas por machos y hembras y la posible
diferencia de carga parasitaria asociada al paso de categoría (edad), se aplicó
ANOVA (análisis de la varianza) de dos vías para medidas repetidas considerando los
efectos sexo y grupo (edad). Contemplando a individuos de las recrías 1 y 2,
descartándose en este análisis la recría 3 de donde los machos fueron retirados en
junio.
Para analizar el efecto de la edad sobre la carga parasitaria de los animales se
utilizo ANOVA para medidas repetidas seguida de Duncan. Se compararon
únicamente las hembras de las cuatro categorías.
3.2.4 Análisis de los subsistemas
Para facilitar la exposición de resultados, discusión y conclusiones de este

capítulo, se lo separara según el subsistema del cual derivan: tambo y recría.
3.3 Resultados
3.3.1 Subsistema de tambo
Actividades realizadas: cuantificación e identificación de géneros presentes en

pasturas, cuantificación de huevos en materia fecal y cuantificación e identificación
de larvas producto de cultivo de materia fecal.
3.3.1.1 Larvas en la pastura.
La abundancia de larvas recuperadas del pasto a lo largo del año se muestra en la

Figura 6.
27
El mes de abril presentó el valor promedio más elevado del año, superando en 6
veces al máximo de agosto (Fig. 6). El alto valor para este mes fue aportado
principalmente por un potrero donde se introdujeron vaquillonas preñadas
(provenientes del subsistema recría) el cual compartieron con vacas secas, la
introducción de las mismas ocurrió a principios de marzo (2 semanas antes del inicio
de los muestreos). Los rodeos de producción que en este momento no compartían
pasturas con las categorías antes mencionadas, presentaron para este mismo mes un
rango de 22 a 162 larvas/kg materia seca.
Entre mayo y octubre, el rango de valores medido en larvas por kg de materia
seca fue de 50 a 100.
En enero la cantidad de larvas en las pasturas fue similar a las registradas en
invierno.
800
700
Larvas/Kg Materia seca .
600
500
400
300
200
100
0
Mar Abr May Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic Ene Feb
Tiempo
Figura 6. Densidad de larvas por kg de materia seca respecto del tiempo.
3.3.1.2 Diversidad de géneros larvales en la pastura
Los géneros larvales identificados en las pasturas fueron Cooperia,

Oesophagostomun, Trichostrongylus, Ostertagia, Haemonchus y Nematodirus (Fig.
7).
Cooperia se detectó en el 66,66 % de los muestreos y representó el 35,58 % de la
comunidad parasitaria, Oesophagostomun apareció en el 16,66 % de los muestreos y
representó el 8,56 % de la comunidad, Trichostrongylus se detectó en el 25 % de los
muestreos y representó al 2,60 % de la comunidad, Ostertagia se detectó en el 75% de
los muestreos y representó al 44,77 % del la comunidad, Haemonchus apareció en el
28
16,66 % de los muestreos y representó al 5,70 % de la comunidad y por último
Nematodirus que se detectó en el 16,66 % de los muestreos y contribuyó a la
comunidad en un 3 % (Fig. 7).
Como se puede observar en la figura 7, Ostertagia es el género más abundante
en las pasturas del subsistema de tambo, secundado por Cooperia.
Nematodirus
1 00%
Oeso phagos to mu m
Trich ostrongylus
Os tertagia
80%
Haemo nchu s
Cooperia
Abundancia %
60%
40%
20%
0%
Tiempo
Figura 7. Abundancia relativa de géneros larvales presentes en pasturas del subsistema de tambo.
3.3.1.3 Huevos en materia fecal
Los promedios de HPG obtenidos en materia fecal para los rodeos de alta y baja
producción de leche y para los rodeos de vacas secas y vaquillonas se muestran en la
Figura 8.
El rango de los promedio mensuales de HPG para el rodeo 1 (de alta producción
de leche) osciló entre 5,35 (marzo) y 12,32 (enero) (Fig. 8 A), en los meses de
diciembre y enero el promedio tendió a elevarse a causa de un reducido número de
animales que eliminaron elevadas cantidades de huevos. En el caso del rodeo 2 (de
baja producción de leche) el rango fue de 0 (octubre-noviembre) a 23,14,
correspondiendo este último valor al mes de mayo en el cual se detectaron algunos
animales con conteos muy elevados lo cual elevó el promedio en este mes (Fig. 8 B).
El rodeo de vacas secas y vaquillonas mantuvo niveles de HPG levemente más
altos que los animales en producción, el rango anual de HPG en esta categoría fue de
3,15-20,08 (Fig. 8 C). El aumento de HPG detectado en agosto fue producido por un
número reducido de animales que eliminaron mayor cantidad de huevos.
29
50
Rodeo 1 A 50
Rodeo 2 B
40 40
HPG 30 30
HPG
20 20
10 10
0 0
ic
br
ct
n
go
ov
e
l
br
go
ov
e
n
ar
b
ar
ay
ic
ct
ay
Ju
Ju
En
Fe
Ju
En
Fe
Ju
Se
O
Se
A
M
D
M
A
N
M
N
M
Tiempo Tiempo
Secas y Vaquillonas C
50
40
30
HPG
20
10
0
ov
e
n
b
r
go
ic
ar
ct
ay
Ju
Ab
En
Ju
Se
Fe
O
D
M
N
M
Tiempo
Figura 8. A) Huevos por gramo (HPG) en materia fecal del rodeo 1 (alta producción de leche). B)
HPG en materia fecal del rodeo 2 (baja producción de leche). C) HPG en materia fecal de secas y
vaquillonas.
En líneas generales puede observarse que los valores de HPG tienden a ser
mínimos durante la primavera (octubre) y máximos durante el verano y el otoño
(enero-mayo).
En todos los casos, la mayoría de las vacas presentaron un conteo de HPG=0, y
solamente una baja proporción de las mismas presentaron conteo positivo. El
porcentaje de positividad a lo largo del año para cada rodeo se muestra en la Figura 9.
En la mayoría de los muestreos (exceptuando el mes de marzo) el rodeo de alta
producción de leche (rodeo 1) resultó tener el mayor número de vacas HPG positivo.
45 Secas y vaquillonas
40 Rodeo alta producción

Rodeo baja producción
35
% Positividad al hpg .
30
25
20
15
10
5
0
Mar Abri May Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic Ene Feb
Tiempo
Figura 9. Positividad al HPG. Representa el porcentaje de animales que

presentaron HPG>0 en cada uno de los rodeos.
30
3.3.1.4 Larvas producto de cultivo de huevos de nematodos en materia fecal
Los géneros nematodos representados en los cultivos fueron Cooperia,

Ostertagia, y Haemonchus (Fig. 10). Cooperia se encontró en el 75 % de los
muestreos realizados y representó el 8,20 % de las larvas totales, Haemonchus
apareció en el 91,6 % de los muestreos y representó el 17,17 % de las larvas totales
mientras que Ostertagia se mostró dominante apareciendo en el 100 % de los
muestreos y representando al 74,17 % de las larvas totales.
100%
90% Ostertagia
Haemonchus
80%
Cooperia
70%
Abundancia .
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Tiempo
Figura 10. Diversidad de géneros de nematodos presentes en cultivo de materia

fecal.
3.3.2 Subsistema de recría
3.3.2.1 Larvas en la pastura
En las pasturas correspondientes a la recría, en otoño se detectó un aumento de

la carga larval, con un máximo en abril de 121 larvas/kg de materia seca (Fig. 11). En
los meses siguientes hasta julio se registró una tendencia hacia cargas larvales mas
bajas. Entre agosto y septiembre la comunidad de larvas se incrementó, para alcanzar
un pico máximo al principio de primavera con promedios de 480 larvas/kg de materia
seca. En octubre se observó una disminución de la carga larval, no recuperándose
ninguna en noviembre ni diciembre.
31
A comienzo del verano se registraron nuevamente larvas, con tendencia a incrementar
su abundancia en el período enero-febrero. (Fig. 11).
600
500
Larv/Kg Mat. Seca
400
300
200
100
0
Tiempo
Figura 11. Densidad de larvas por Kg de materia seca respecto del tiempo (Marzo
2007 a Febrero 2008).
3.3.2.2 Diversidad
Los géneros larvales identificados en las pasturas del subsistema de recría a lo

largo de un año fueron Cooperia, Haemonchus, Ostertagia, Trichostrongylus,
Oesophagostomum y Nematodirus, (Fig. 12).
100% Ne ma to d iru s
90% Oe s o p h a g o s to m u m
Tric h o s tro n g yilu s
80%
Os te rta g ia
70% Ha e mo n c h u s
Abundancia
60% Co o p e ria
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Tiempo
Figura 12. Abundancia relativa de géneros larvales presentes en pasturas del subsistema de recría.
Cooperia se encontró en el 53,84 % de los muestreos y representó el 26,76 %

de la comunidad parasitaria, Haemonchus se halló en el 53,84 % de los muestreos y
representó el 15,30 % de la comunidad, Ostertagia apareció en el 61,53 % de los
32
muestreos y aportó 32,83 % a la comunidad, Trichostrongylus se encontró en el 23,07
% de los muestreos y sumó un 1,17 % a la comunidad, Nematodirus se halló en el
7,69 % de los muestreos y representó el 4,39 % de la comunidad y Oesophagostomun
se encontró en el 30 % de los muestreos y aportó el 19,51 % a la comunidad.
3.3.2.3 Huevos por gramo en materia fecal
En animales de la recría 1 (Fig. 13 A) (machos y hembras jóvenes, de 2 a 5

meses), el rango de los promedios mensuales de HPG en hembras fue de 67,25-
500,12, mientras que para machos fue de 17,5-542,4. Por otra parte el conteo
promedio en los machos superó al de las hembras en el 67 % de los muestreos,
mientras que las hembras superaron a los machos en el 33 % de los mismos.
La recría 2 (Fig. 13 B) estuvo conformada por machos y hembras de mayor
edad que la recría 1 (5-7 meses). En ella se observó un rango de HPG para hembras
de 18,03-251,27 y para machos de 20,64-262,73. A pesar de tener rangos similares,
los machos presentaron conteos promedios mayores a las hembras en el 58 % de los
muestreos mientras que en el 25 % de los mismos las hembras superaron a machos.
En el resto de los muestreos (17%) los promedios fueron similares en ambos sexos.
A B
Hembras Hembras
Recria 1 800 Recria 2
800 Machos Machos
600 600
HPG
HPG
400 400
200 200
0 0
c
n
t
l
e
p
c
n
e
r
b
ar
r
ay
ar
o
ay
Oc
Ju
Oc
Ju
En
Ab
Di
En
Ab
Di
Ju
Se
Fe
No
Ju
Se
Fe
No
Ag
Ag
M
M
M
Tiempo Tiempo
C D
Recria 3 80 Vaquillonas
800 Hembras
Machos
600 60
HPG
HPG
400 40
200 20
0 0
c
t
n
e
v
p
b
r
ar
c
o
n
ay
p
b
r
ar
Oc
ay
Ju
Oc
En
Ju
Ab
Di
En
Ju
Se
No
Fe
Ab
Di
Ju
Se
Fe
Ag
No
Ag
M
M
M
M
Tiempo Tiempo
Figura 13. A, B, C) Huevos por gramo (HPG) en materia fecal de los tres grupos de recrías. D:
HPG de vaquillonas (se deja constancia que en esta última hay un cambio en la escala del eje de
las ordenadas de 10 veces con respecto a los anteriores).
33
La recría 3, con animales mayores a 7 meses, (Fig. 13 C) presentó, para hembras,
un rango de 3,45-29,89 huevos por gramo, mientras que para machos el mismo fue de
de 20,45-273,21. Hay que destacar que estos últimos fueron retirados del sistema en
el mes de junio.
Las vaquillonas en servicio conforman la categoría de animales de más edad en
el subsistema de recría (Fig. 13 D). El rango de HPG de los promedios mensuales
osciló entre 5,23-37,02. Se registró una variación estacional en la descarga de huevos,
observándose entre marzo y julio una tendencia decreciente, mientras que entre
agosto y noviembre la descarga tuvo tendencia creciente.
Estadísticamente no se detectaron diferencias en el conteo de huevos por gramo
entre machos y hembras (p=0,39), ni se observó efecto grupo (p=0.07). Aunque este
último valor estadístico marca una tendencia, no se registró interacción (p=0.21).
Sí en cambio existió diferencia entre las categorías (edad) (p=0,004) para las
hembras, resultando la recría 1 diferente a todos los grupos, del mismo modo que la
recría 2, mientras que vaquillonas y recría 3 fueron iguales entre si y distintas a los
otros grupos.
3.3.2.4 Larvas producto de cultivo de huevos de nematodos en materia fecal
Los géneros detectados en cultivo fueron Cooperia, Ostertagia,

Trichostrongilus y Haemonchus (Fig. 14). Daurante el año Cooperia representó el
49,10 % de la población, Ostertagia el 35,30 %, Trichostrongylus el 8,9 % y
Haemonchus el 6,7 %.
100%
Tric h o s tro n g ylu s
90% Os te rta g ia
Ha e mo n c h u s
80% Co o p e ria
70%
Abundancia .
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Tiempo
Figura 14. Diversidad de géneros larvales en cultivo de materia fecal del sistema de recría.
34
En los meses de agosto y noviembre no se muestran larvas dado que se
perdieron los cultivos debido a un error técnico que consistió en la pérdida de
humedad en los mismos que determinó su secado y posterior muerte de las larvas.
3.4 Discusión y conclusión

3.4.1.1 Subsistema de tambo
En cuanto a las larvas presentes en la pastura, inicialmente en el mes de marzo se

presentaron valores esperados de contaminación aunque, por su parte en el mes de
abril se registraron valores atípicamente altos. En este punto se debe considerar que,
como ya se mencionó, antes del inicio de los muestreos del presente trabajo se
introdujeron al subsistema de tambo las vaquillonas preñadas provenientes del
subsistema de recría. Esta categoría se caracterizó por presentar mayor conteo de
huevos de nematodos en materia fecal que el resto de los animales del tambo. Dado
que las vaquillonas constituyen el grupo de animales más jóvenes del tambo, por su
condición inmunológica un número bajo de animales tienden a presentar altos niveles
de HPG, comparados con los rodeos en producción donde las cargas de HPG son más
equitativas. Probablemente la descarga de huevos se tradujo en un aumento de la
carga larval en el potrero donde pasaban más tiempo las vaquillonas. Esta
característica generó que el promedio de larvas encontradas en el pasto aumentara
(abril). En el mes de marzo se observó una baja carga larval probablemente porque
las larvas en las heces estaban en desarrollo, y aún no habían migrado al pasto.
Para el período comprendido entre mayo y octubre los datos son semejantes a los
citados para la región (Suarez, 1990a; Suarez, 1994), detectándose relativamente alta
abundancia de larvas entre fines de otoño y principios de primavera. Entre noviembre
y diciembre no se obtuvieron larvas de la hierba colectada, probablemente debido a
las intensas lluvias ocurridas durante la primavera del año 2007 (Servicio
Meteorológico Nacional (SMN), 2007b). Como ya se mencionó en la descripción del
ciclo de vida, el agua es el principal agente dispersante de las larvas. En períodos de
lluvias copiosas y sostenidas, los pastos son lavados y las larvas arrastradas de modo
que la mayoría de las larvas L3 se encuentran en el suelo y no en las pasturas (las
lluvias ocurrieron antes y durante los muestreos). Por otra parte, la cantidad de larvas
35
colectadas en las pasturas durante el mes de enero fue inusualmente alta respecto a la
esperada para ese momento del año según la bibliografía (Suarez y Lorenzo, 2000).
El calor y la radiación solar son agentes adversos para la supervivencia larval por la
desecación que ocasionan. Este fenómeno de abundancia en una época inusual podría
deberse al hecho, ya mencionado, de que la primavera de 2007 fuera atípicamente
lluviosa. La producción de forraje fue abundante y el suelo se mantuvo húmedo
durante varios meses. Esa humedad retenida en el suelo podría haber sido un factor
clave para permitir la supervivencia de las larvas en esta época.
En cuanto a los géneros presentes en la pastura, Cooperia y Ostertagia resultaron ser
los más abundantes, en concordancia con los antecedentes para la región (Entrocasso
y Fiel, 1986; Suarez y Lorenzo, 2000) Cooperia fue muy abundante en verano y
otoño, comportamiento estacional coincidente con el citado en la bibliografía
(Ferreyra y col., 2002).
Difieren los datos encontrados para el caso de la primavera, en donde Cooperia
se vio pobremente representada en el subsistema, probablemente por la baja eficiencia
del muestreo en la recolección debido a las lluvias antes mencionadas para este
período. Ostertagia, por su parte, mostró un pico de abundancia en octubre. El
máximo de abundancia para este género discrepó levemente con la bibliografía
(Ferreyra y col., 2002) ya que en aquel caso el mismo ocurrió en otoño-invierno.
Probablemente esta discrepancia se deba a las diferencias geográficas entre las áreas
de muestreo y a condiciones climáticas propias del año.
En cuanto a la valoración de los huevos por gramo presentados por las
categorías adultas, se debe considerar que el desarrollo del sistema inmune de los
hospedadores adultos inhibe, al menos en forma parcial, la ovoposición de las
hembras de nematodos, por lo que ya es conocido que los niveles de HPG en bovinos
adultos tienden a ser bajos. Los datos aportados en este trabajo para los rodeos de
animales adultos son consistentes con las cargas usualmente bajas descriptas para
animales adultos (Fiel y Steffan, 1994; Fiel y col., 2005). La variable de HPG sigue
una distribución asimétrica y de gran dispersión, con una alta frecuencia de de casos
de HPG cero y algunos individuos con HPG muy elevados, lo cual genera una gran
desviación estándar (Stromberg y Gasbarre, 2006).
Solamente el 25 % de los animales mostró muestras positivas al HPG y las más
altas incidencias se encontraron en el rodeo de alta producción (excepto en marzo), el
cual incluye todas las vacas que parieron recientemente. En el mes de marzo el rodeo
36
de vacas secas y vaquillonas mostró la proporción más alta de individuos con HPG
positivo. En este momento del año este rodeo estuvo formado casi exclusivamente
por vaquillonas que se habían inseminado en septiembre-octubre del año anterior para
reposición. Y siendo los animales jóvenes más sensibles a las parásitos (lo que
implica también que estos últimos pueden expresar mas libremente su potencial
reproductivo), descargan más huevos de nematodos en la materia fecal respecto a las
vacas más viejas (Claerebout y Vercruysse, 2000).
Las vacas del rodeo 1 (de alta producción) fueron las que mostraron mayor
porcentaje de positividad. Esto probablemente se deba a que en este rodeo, están
todas las vacas “frescas” (de reciente parición), cuyo sistema inmune se halla en
recuperación del estrés generado durante el período de periparto (Claerebout y
Vercruysse, 2000) y por lo tanto menos eficiente en su lucha contra los nematodos.
A pesar de que la mayoría de los géneros presentan la potencialidad de producir
más huevos por día que Ostertagia (Cooperia unas cinco veces más, Haemonchus
unas diez veces más) (Fiel y col., 2005) las formas adultas del resto de los géneros
son más sensibles al sistema inmunitario del hospedador, mientras que contra
Ostertagia el desarrollo de la inmunidad es más lento (Quiroz, 1990). Este hecho
podría explicar la dominancia de Ostertagia en los cultivos de materia fecal de los
rodeos del tambo.
Se puede concluir que la dinámica parasitaria del sistema de tambo se ajusta a lo
esperado para la zona del país en cuanto a diversidad de géneros parasitarios
presentes, abundancia y grado de infección de los animales, con dominancia de los
géneros Ostertagia y Cooperia. Además, se demostró que los rodeos constituidos por
animales más jóvenes o de reciente parición, presentaron mayor proporción de
individuos con HPG positivo.
3.4.1.2 Subsistema de recría
En cuanto a las larvas encontradas en la pastura existieron concordancias y

diferencias en la fluctuación anual respecto a la esperada para la región según
estudios previos (Suarez, 1990b; Suarez, 1994). Coincidiendo con la literatura, se
registró un aumento en el número de larvas, durante el invierno y principios de
primavera, favorecida por el frío y la humedad que proporcionan las condiciones
óptimas para la supervivencia de las mismas. Además, las pasturas retardan su
crecimiento con el frío (y por lo tanto hay menos pasto disponible) lo que ocasiona un
37
aumento indirecto de la densidad larval. En discrepancia con los mencionados
trabajos, se observó una gran abundancia larval en períodos estivales (similares a los
invernales). Esto podría deberse, en parte, a la variación geográfica entre los dos
lugares evaluados. Si bien la localidad donde se realizaron relevamientos previos
(Anguil, La Pampa. 36, 52° Lat. S; 64,01° Long. O) se encuentra aproximadamente
en la misma latitud que el sitio de muestreo de este trabajo, ambos sitios difieren en
longitud (Anguil se encuentra 350 km lineales hacia el oeste). Esta variación
geográfica se acompaña por un descenso de las precipitaciones medias anuales y
podría dar cuenta de las diferencias en la composición anual de las poblaciones
parasitarias. Por otro lado y en forma adicional a lo anterior, otro factor que podría
explicar la atípica abundancia estival de larvas es el clima, ya que 2007 se presentó
como un año con copiosas lluvias particularmente en primavera que mantuvieron la
humedad del suelo durante un período más prolongado. Durante fines de 2007
(diciembre) y hasta mediados de enero de 2008 las lluvias fueron escasas (Servicio
Meteorológico Nacional (SMN), 2007a; Servicio Meteorológico Nacional (SMN),
2008a) pero a partir de la mitad de enero volvió a llover y se recuperó sostenidamente
la humedad del suelo por lo que febrero de 2008 presentó muy buena humedad
(Servicio Meteorológico Nacional (SMN), 2008b) Las temperaturas en todo el
período descripto fueron las usuales para cada época del año.
La patogenicidad de los géneros parasitarios difiere entre si, siendo los de
mayor importancia por su impacto en la producción: Cooperia, Ostertagia,
Haemonchus y Trichostrongilus (Suarez, 1994), todos ellos fueron identificados en el
sub-sistema de recría. Cooperia y Ostertagia se encontraron en la mayor parte de los
meses del año, situación de prevalencia coincidente con la citada para la zona (Fiel y
Steffan, 1994). Por otra parte, aunque se había descripto una mayor incidencia de
Haemonchus y Oesophagostomun en verano (Fiel y Steffan, 1994), los datos
recolectados en este trabajo indicaron que Haemonchus se presentó poco abundante a
lo largo del año pero cuantitativamente constante (exceptuando el pico de marzo) y
Oesophagostomun solo se presentó en otoño-invierno.
Trichostrongylus y Nematodirus resultaron dos géneros escasamente representados en
estas pasturas.
Los animales mas jóvenes, integrantes de la “guachera”, criados en jaulas con
balanceado y leche, no registraron huevos de nematodos en sus heces. Esto concuerda
con resultados previos del laboratorio de regulación hipofisaria (IBYME-CONICET)
38
en los cuales efectivamente el HPG fuera 0 en terneros de esta edad (Mejía y col.,
1999). Sin embargo, en aquel caso se había encontrado un retraso en el desarrollo de
los terneros sin tratamiento antiparasitario, que fue explicado cuando se sacrificaron
individuos y se recuperaron nematodos adultos de sus intestinos. Esto mostró que ya
en la guachera, con escaso volumen de pasto ingerido, comienza la contaminación y
el efecto parasitario, aunque la ovoposición se manifieste recién en la etapa de recría.
En individuos jóvenes (recría 1) fue frecuente encontrar conteos elevados de
HPG (por encima de 600). Esto obedece a que los animales más jóvenes son
inmunológicamente más inmaduros por lo que los parásitos pueden expresar todo su
potencial reproductivo en ellos. Tal es así, que un pequeño número de adultos pueden
producir cantidades importantes de huevos. Se ha demostrado que los huevos por
gramo de materia fecal se pueden correlacionar aceptablemente con la población de
nematodos adultos (considerando la ovoposición de cada género e identificando
larvas por cultivo) hasta pasado el año de vida, luego la extrapolación pierde peso por
el fortalecimiento del sistema inmunitario (Fiel y col., 2005).
En las vaquillonas preservicio, que por ser los animales más maduros del
subsistema de recría ya han estado expuestos a repetidas infecciones parasitarias y por
lo tanto han adquirido el mayor grado de inmunidad, las cargas de huevos en materia
fecal fueron aproximadamente 22 % menores que en la categoría previa (recría 3).
Del análisis de HPG se desprende la idea de que la descarga de huevos de
nematodos en las heces disminuye conforme el hospedador crece y se desarrolla. Esta
evidencia se hallo en hembras no así en machos, probablemente el número de
categorías analizadas de estos últimos haya sido insuficiente para revelar diferencia
de HPG asociada a la edad. Los resultados de esta etapa del trabajo son coincidentes
con estudios anteriores que indicaron un aumento sostenido de los niveles de HPG
hasta los 8 meses de edad y después un paulatino descenso hasta la pubertad (Mejía y
col., 1999).
Las hembras de nematodos adultos presentan diferente fecundidad, siendo
Haemonchus y Oesophagostomun las más fecundas (5.000 a 10000 huevos por día),
seguidas por Cooperia (500-100 huevos por día) y Ostertagia (100-200 huevos por
día) (Fiel y col., 2005).
En cultivo se hallaron 4 de los 6 géneros encontrados en las pasturas, aunque en
diferente orden de abundancia, a saber Cooperia, Ostertagia, Haemonchus y
Trichostrongylus. Esta diferencia en orden de abundancia de géneros larvales
39
ofertados en las pasturas y la abundancia de géneros larvales en cultivo (de materia
fecal) podría deberse a una viabilidad diferencial de los huevos de los distintos
géneros o fertilidad diferencial asociada a las condiciones de cultivo en laboratorio
(diferentes a las de campo).
Si se consideran los parámetros de fecundidad y de eclosión de larvas en cultivo
se puede concluir que Cooperia y Ostertagia son los nematodos que menos huevos
producen pero mantuvieron niveles de eclosión altos (en condiciones de laboratorio).
A partir de los datos expuestos se puede aproximar indirectamente la proporción
de poblaciones parasitarias que colonizan a las recrías concluyendo que los géneros
Cooperia, Ostertagia, Haemonchus y Trichostrongylus representan la mayor parte de
la comunidad de adultos parásitos.
40
4 Capítulo 4: Influencia de los
parásitos nematodos en la
producción de leche y hormonas
relacionadas con la lactancia.
41
La mayor cantidad de estudios con respecto a la influencia de los parásitos
nematodos en la producción se han realizado en ganado de carne, en el cual la
productividad está en directa relación con la ganancia de peso corporal (Holmes,
1985; Entrocasso, 1988; Mertz y col., 2005). En ganado lechero, trabajos sobre el
impacto de la presencia de nematodos durante el desarrollo han demostrado un retraso
en el inicio de la pubertad y en consecuencia un importante retraso en el inicio de la
primera lactancia, además de la disminución del área pélvica a los 15 meses de edad y
un aumento en la tasa de rechazo durante la lactancia (Mejia y col., 1999; Mejia y
col., 2009).
Clásicamente, se asume que, en las vacas adultas, el establecimiento de un
equilibrio hospedador-parásito minimiza la actividad patogénica de los parásitos. Sin
embargo, durante la última década se han generado evidencias que dan cuenta del
impacto negativo de los parásitos gastrointestinales en el desempeño productivo y
reproductivo de las vacas lecheras. Estudios recientes han descripto el resultado del
tratamiento antihelmíntico del rodeo en la producción de leche (Nodtvedt y col.,
2002; Sithole y col., 2005; Charlier y col., 2007), así como también la relación entre
la carga parasitaria y la producción de leche (Sanchez y Dohoo, 2002; Charlier y col.,
2005). A pesar de todo, el efecto de los parásitos sobre los parámetros reproductivos
durante la lactancia no está dilucidado ya que los resultados no son concluyentes
(Charlier y col., 2005; Charlier y col., 2009).
Dado que se ha descripto la aparición de resistencia a los antiparasitarios en
nematodos que afectan a bovinos (Hosking y col., 1996; Coles y col., 2006; Mejia y
col., 2009), resultaría de gran importancia determinar parámetros de selectividad
individual para tratamientos estratégicos que pudieran minimizar su riesgo. El
tratamiento selectivo permitiría mantener en la población parasitaria un reservorio de
alelos sensibles a los tratamientos (Kenyon y col., 2009). Por lo tanto, la
identificación de animales sensibles a contraer parásitos sería una herramienta de gran
utilidad para hacer más eficientes los tratamientos y prolongar la vida útil de las
drogas antiparasitarias existentes.
Por otro lado, existe escasa información acerca de los mecanismos endocrinos
involucrados en el detrimento productivo ocasionado por los nematodos parásitos.
Trabajos previos han demostrado los efectos negativos de los parásitos en la
concentración sérica de IGF-1, retrasando el inicio de la pubertad en terneras (Lacau-
Mengido y col., 2000). Por otra parte, se ha descripto que la anorexia es uno de los
42
síntomas principales de las infecciones parasitarias (Fox y col., 1989; Simpson,
2000), causando alteraciones nutricionales que pueden modificar la concentración de
hormonas metabólicas (Widmaier, 1992; Chagas y col., 2008). Además, como fue
expuesto en la introducción, el sistema GH-IGF-1 es de gran importancia para la
regulación de la proliferación y la diferenciación de las células epiteliales mamarias
(Plath-Gabler y col., 2001), y GH es la principal hormona galactopoyética en los
bovinos (Akers, 2000). Por su parte la hormona insulina actúa coordinadamente con
GH, IGF-1, prolactina, hormonas tiroideas y leptina en la regulación de la partición
de nutrientes y la producción de leche (Chilliard y col., 2005; Cavestany y col.,
2009b). Todas estas hormonas son susceptibles de ser modificadas por infecciones
parasitarias, pudiendo impactar en la producción de leche.
4.1 Objetivos
- Evaluar la influencia de parásitos nematodos en la producción lechera, por

comparación del volumen producido por vacas con conteo positivo y negativo de
de huevos por gramo (HPG) durante el periparto.
- Investigar la influencia de nematodiasis en concentraciones de hormonas
relacionadas con la lactogénesis, GH, prolactina, IGF-I e insulina, mediante la
medición de las mismas en suero.
Para el desarrollo del presente capítulo se seleccionaron cuatro rodeos de tambo,

los cuales incluyen dos rodeos en producción, uno de alta producción (en lactancia
temprana o media) con 80-110 individuos dependiendo del momento del año y otro
de baja producción (en lactancia tardía) con 50-70 individuos; además un rodeo de
vacas secas (15-30) y uno compuesto de vaquillonas preñadas para reposición (0-40).
Las vacas en producción se alimentaron con pasturas implantadas (ryegrass,
alfalfa o trébol dependiendo de la época del año) con una carga animal promedio de
de 1,5 animales/ha. Además, los animales recibieron suplementación: ración mezcla
43
de grano de maíz, girasol, semillas de algodón, cloruro de calcio y silaje de maíz en
concordancia con los requerimientos nutricionales, producción individual de leche,
estación y disponibilidad de forraje. Los rodeos de producción fueron ordeñados dos
veces al día. Los datos individuales de producción se registraron y guardaron
mediante el sistema Alpro-Milking. El período mínimo pos parto establecido para
realizar la inseminación artificial fue de 50 días. Los datos reproductivos se
registraron con el programa DairyCOMP 305 (Valley Agricultural Software). Las
vacas secas y preñadas de reposición se mantuvieron en las mismas pasturas, o de
calidad similar, recibiendo entre 10 y 20 kg de silaje de maíz dependiendo de la
disponibilidad de pasturas. Veinte días antes de la fecha probable de parto las vacas
se confinaron a un potrero y recibieron una ración mezcla de silaje de maíz (18-20
kg), grano de maíz (6 kg) y núcleo mineral para vacas preparto.
Durante dos años todas las vacas del sistema productivo fueron muestreadas una
vez por mes, tomando materia fecal del recto y sangre de la vena coccígea. Las
muestras fecales fueron mantenidas a 4°C antes del análisis. Las muestras de sangre
fueron centrifugadas para la extracción de suero el cual fue conservado a -20°C para
la determinación de las concentraciones hormonales.
Para cada vaca el día del parto se consideró como día 0. Las muestras obtenidas
entre el día 0 y 29 post parto (pp) correspondieron al mes 0 de lactancia, y entre el día
30 y 59 pp al mes 1 y así sucesivamente. Para el período preparto, las muestras
tomadas entre el día -30 y -1 correspondieron al mes -1.
Todas las vacas (n=191) que parieron entre marzo de 2007 y febrero de 2008
fueron monitoreadas en cuanto a descarga de huevos en materia fecal y producción de
leche hasta el fin de la lactancia.
4.2.1 Conteo de huevos de nematodos e identificación de

géneros.
Los conteos de huevos de nematodos y cultivo de los mismos se realizaron a

partir de muestras frescas de materia fecal, según la técnica descripta en el capítulo 1.
44
4.2.2 Determinaciones hormonales
Las concentraciones de GH y prolactina se determinaron mediante el uso de

anticuerpos procedentes del Hormone Distribution Program del National Institute of
Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK) (EEUU); la concentración
mínima detectable fue de 0.8 ng/ml para las dos hormonas. Las concentraciones de
insulina se midieron mediante el uso de anticuerpo anti insulina bovina (Sigma, St.
Louis Missouri, EEUU) y estándares de insulina humana procedentes de los
laboratorios Beta (Buenos Aires, Argentina). La concentración mínima detectable
para esta hormona fue de 0,05 ng/ml. Los coeficientes de variación intraensayo e
interensayo para las tres hormonas fueron menores a 8% y 11%, respectivamente.
Para el RIA de IGF-1 fue necesaria una extracción previa del factor, con solución de
etanol-ácido, según se describe en (Lacau-Mengido y col., 2000). Se utilizó el
anticuerpo anti IGF-1 (UB-495) de NIDDK. El coeficiente de variación intraensayo
fue del 8%, y la concentración mínima detectable fue de 2,5 ng/ml. Los coeficientes
de variación fueron calculados mediante el uso de sueros controles (Farinati de
Piccinni y col., 1980).
4.2.3 Análisis estadístico
La producción total de leche se comparó mediante ANOVA de dos vías

utilizando el software SPSS (versión 15.0 para Windows, SPSS Inc. ©). Los
factores considerados fueron, número de lactancia y positividad al HPG, con un nivel
de significancia del 0,05. Los valores de las muestras individuales de HPG se
compararon mediante test t de Stundent para el caso de comparación de dos grupos, o
mediante ANOVA de una vía seguida del post-test de Bonferroni, para el caso de la
comparación de tres o más grupos (se realizó una normalización previa por
transformación matemática, log (HPG+1)). El efecto de la positividad al HPG en
torno a la parición sobre el período primer servicio-concepción se evaluó mediante el
análisis de supervivencia de Kaplan-Meier. Primer servicio o concepción, se definió
como el evento, y día postparto como el factor tiempo. Los ajustes por número de
partos (1 respecto + 2) se incluyeron en el análisis. El test Logrank se realizó en
forma posterior. La proporción de positividad en vacas primíparas y multíparas se
45
comparó por el test de Chi cuadrado. Las concentraciones hormonales se compararon
por ANOVA (análisis de la varianza) de dos vías para medidas repetidas,
considerando los efectos de tiempo y grupo. Las muestras elegidas fueron para los
meses 0, 2, 4 y 6 posteriores al parto (siendo el mes 0 el transcurrido desde el día del
parto hasta el día 29 posparto) y los grupos de vacas incluidas fueron las que
resultaron positivas (HPG>0) y negativas (HPG=0) al conteo de huevos de
nematodos en la materia fecal, en el primer muestreo posparto.
4.3 Resultados
4.3.1 HPG en periparto y producción de leche
Para una descripción detallada de los niveles de HPG, géneros larvales

presentes en pasturas y en cultivo de materia fecal ver capitulo 1.
Cuando se ordenó la variable HPG en función de los meses de lactancia (Fig.
15) se detectó un incremento en los niveles de HPG en torno al mes del parto (mes 0),
con un ligero decrecimiento a partir de entonces. Si bien cuando se analizó la
producción total de leche por vaca en función de los niveles medios de HPG durante
la lactancia, no se halló correlación significativa (Spearman r=-0,05, p=0,48), cuando
las vacas se agruparon por “positividad” en torno al parto el resultado fue
significativamente distinto. El tiempo promedio de lactancia de las vacas resultó ser
de 358,5 días ± 4,8 (SEM) y la producción de leche promedio de los animales resulto
23,04 L ± 0,2 (SEM).
Considerando el resultado expuesto en la figura 15 (mayor descarga de huevos de
nematodos durante el periparto) se optó por agrupar virtualmente los individuos
acorde a positividad al HPG (cero o positivo) en torno al mes de parición (mes -1, 0 o
ambos) (Fig. 16). A partir de este arreglo se detectaron diferencias en la producción
total de leche según la presencia o ausencia de huevos de parásitos en las heces en el
mes 0 y/o en el mes -1. En todos los casos la mayor descarga de huevos se asoció con
una disminución en la producción de leche.
Cuando las vacas fueron separadas por su positividad al HPG en torno al mes 1
(posterior a la parición, día 30 a 59 pp), no se observó efecto en la producción de
leche. No se detectó interacción entre factores (número de lactancia y positividad al
HPG) para la producción de leche en ningún caso, por lo tanto los individuos
46
pudieron agruparse en función de HPG sin tener en cuenta las pariciones de cada uno
para la presentación de los datos. La proporción de HPG positivo durante la lactancia
16
14
12
10
hpg
0
-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Meses de lactancia
Figura 15. Niveles medios de huevos de nematodos en materia fecal de vacas (n=191)
relacionados con los meses en leche. El mes de lactancia cero corresponde al muestreo realizado
entre los días 0 y el 29 posparto. Las barras verticales representan el error estándar de la media
(SEM). El tiempo promedio de lactancia de vacas fue de 358,5 días ± 4,8 (SEM).
30 A 30 B
25 25
Lt. de leche
Lt. leche
20 20
15
15
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Mes de lactancia
Meses de lactancia
HPG 0 mes-1 HPG > 0 mes -1 HPG 0 mes 0 HPG >0 mes 0
30 30
C D
25 25
Lt. de leche
Lt. Leche
20 20
15 15
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Mes de lactancia
HP G 0 me se s - 1 y 0 Mes de lactancia
HP G>0 me se s - 1 o 0 (a l me nos uno de los dos)
HP G>0 me se s - 1 y 0 (los dos) HPG 0 mes 1 HPG > 0 mes 1
Figura 16. Producción total de leche procedente de vacas agrupadas por su positividad al HPG en
torno a la parición. A) Mes=-1: muestra de materia fecal obtenida entre los días -30 a -1, B) mes=0:
muestra tomada entre los días 0 a 29, C) mes=-1 y 0: se toman dos muestras, una en el mes -1 y
otra durante el mes 0; D) mes=1: corresponde a muestras tomadas desde el día 30 al 59.
47
fue mayor en vacas primíparas (38%) que en multíparas (22%) (p<0,05), sin embargo
las diferencias en producción de leche dentro de cada parición se modificaron
significativamente por la positividad al HPG (no hubo interacción en el ANOVA), de
este modo el número de pariciones no fue considerado para análisis posteriores.
500
400
Tiempo lactancia (dias)
300
200
100
0
Mes 0 Mes -1 Mes -1 y 0 Mes 1
HPG=0 HPG>0
Figura 17. Tiempos de lactancia de animales negativos y positivos al HPG. Mes -1: muestra de
materia fecal obtenida entre los días -30 a -1. Mes 0: muestra tomada entre los días 0 a 29. Mes -
1 y 0: se toman dos muestras, una en el mes -1 y otra durante el mes 0. Mes 1: corresponde a
muestras tomadas desde el día 30 al 59.
Por otra parte cuando se analizaron los períodos de lactancia de cada uno de los
grupos (HPG=0 y HPG>0), no se hallaron diferencias en la duración de la misma
(Fig. 17).
Se evaluaron también los niveles medios de HPG que presentaron las vacas
durante los meses de lactancia (mes 1-12) y se relacionó la descarga de huevos
presentada por las vacas en ese período con la condición parasitaria inicial, es decir se
analizó si la condición parasitaria inicial resultaba un buen índice de predicción de la
descarga de huevos de nematodos que las vacas presentarían durante el período de
lactancia (tabla 1). Como se muestra, la positividad a HPG en el mes 0, o meses 0 y -
1, o mes 1 pero no mes -1, predicen (dada la significancia estadística) la infección
parasitaria durante la lactación.
Se evaluó también los parámetros reproductivos, como son los intervalos parto-
primer servicio y parto-concepción, en relación con el grado de descarga de huevos
de parásitos nematodos en el periparto, comparando vacas agrupadas por valores de
HPG en las heces en torno a la parición (tabla 2).
48
Momento de Grupo clasificado por HPG al N Media HPG (error p
muestreo periparto estándar)
Mes 0 HPG=0 128 5,0 (0,7) 0,0003
HPG>0 63 15,4 (2,6)
Mes -1 HPG=0 135 8,9 (1,6) 0,08
HPG>0 56 12,4 (1,6)
Mes -1 y 0 HPG=0 (Ambos) 81 3,5 (0,4) <0,0001
HPG>0 (Ambos) 37 15,0 (1,5
Mes 1 HPG=0 129 3,8 (0,3) <0,0001
HPG>0 62 19,9 (3,2)
Tabla 1: Niveles medios de hpg en materia fecal tomada durante la lactancia (meses 1-12) en vacas
clasificadas acordes a su positividad al hpg en torno a la parición.
El intervalo parto primer servicio tendió a ser mas corto (p=0,08) para el grupo
de HPG negativo con respecto al grupo HPG positivo en el período de posparto (mes
0).
No se registraron otras diferencias significativas en ninguno de los parámetros
medidos. El número de partos de cada animal no afectó estos resultados.
Momento Intervalo Categoría huevos nematodos p

muestreo HPG=0 HPG>0 Análisis de supervivencia
heces Kaplan-Mayer (post-test
longrank)
Mes -1 P-PS 84,5 ± 5,8 91,8 ± 7,6 0,327
P-C 111,7 ± 7,2 117,4 ± 11,0 0,834
Mes 0 P-PS 82,2 ± 3,6 100,5 ± 8,9 0,080
P-C 121,4 ± 7,2 131,9 ± 10,5 0,762
a b
Mes -1 y 0 P-PS 82,1 ± 6,2 102,6 ± 11,4 0,249
P-C 103,6 ± 7,5 a 121,8 ± 16,0 b 0,769
Tabla 2. Duración (en días) del parto al primer servicio (P-PS) y parto concepción (P-C) de
vacas con conteo de huevos de nematodos en heces y sin huevos en muestras tomadas en
torno a la parición. a Ambas muestras hpg negativo. b Ambas muestras hpg positivo.
4.3.2 Cuantificación de hormonas relacionadas con la

producción de leche
Los niveles hormonales de GH, prolactina e insulina durante la lactancia en vacas

con HPG positivo y HPG cero en materia fecal durante el posparto temprano se
grafican en la Figura 18. No se detectó interacción entre factores para GH (p=0,27),
prolactina (p=0,48) e IGF-1 (p=0.80). El efecto del tiempo se evidenció para GH e
IGF-1 resultando significativo para ambas hormonas (p<0,001). Como se puede ver
en la Figura 18 A y B, mientras las concentraciones séricas de GH disminuyeron
49
durante la lactancia, las concentraciones de IGF-1 aumentaron. También las
concentraciones séricas de prolactina se incrementaron con el tiempo (p=0,05).
Los niveles séricos de GH, prolactina e IGF-1 fueron mayores en vacas con HPG
igual a cero en la primera muestra de materia fecal posparto, comparadas con vacas
con HPG positivo (p<0,01, p=0,02 y p=0,02; para GH, prolactina e IGF-1
respectivamente). Los niveles de insulina fueron estables en el tiempo y no mostraron
diferencias entre los grupos.
A B
a b b b
5.00 ab b 200
4.00 c a
150
IGF-1 (ng/ml) .
GH (ng/ml)
3.00
100
2.00
50
1.00
0.00 0
0 2 4 6 0 2 4 6
Mes posparto Mes posparto
HPG=0 HPG>0 HPG=0 HPG>0
C D
10 1.00
8
0.75
Insulina (ng/ml).
Prl (ng/ml) .
6
0.50
4
2 0.25
0
0.00
0 2 4 6
0 2 4 6
Mes posparto
Mes posparto
HPG=0 HPG>0 HPG=0 HPG>0
Figura 18. Niveles hormonales séricos durante la lactación en vacas con HPG>0, (línea roja) y
HPG=0, (línea verde) huevos de nematodos parásitos en la materia fecal en la muestra tomada en el
mes 0 (días 0 a 29 posparto). A) GH, B: IGF-1. C) prolactina (Prl). D) Insulina. Letras minúsculas
diferentes indican diferentes concentraciones hormonales a los diferentes tiempos (p< 0,05).
50
4.4.1 Parásitos
La curva de HPG durante la lactancia demuestra que los valores medios más
altos de HPG suceden en torno al parto. Esto se debió a una mayor proporción de
muestras positivas en este momento (33%) más allá de los altos valores individuales
de HPG. Con respecto a esto, es conocido que las vacas lecheras son susceptibles a
incrementos de enfermedades durante el período de periparto. El estrés del parto y las
alteraciones metabólicas durante el inicio de la lactancia deprimen la función
inmunitaria, sensibilizando al individuo a ser infectado por patógenos durante este
período (Barger, 1993; Sordillo y col., 2009).
4.4.2 Lactancia y HPG
Las vacas agrupadas por positividad al HPG en torno al parto, mostraron

distintos niveles de HPG durante la lactancia. A pesar de que no se demostró
correlación entre los niveles globales de HPG y la producción leche (como se
mencionó en el punto 4.3.1), esta última difiere si las vacas son clasificadas por su
conteo de HPG (cero o positivo) en torno a la parición (pre o postparto). Cuando
solamente se consideró una muestra (pre o posparto), la producción total de leche por
vaca disminuyó el 12 y el 7 % (para pre y postparto, respectivamente), entre el grupo
con HPG negativo y el grupo con HPG positivo. La diferencia entre los grupos trepó
al 15 % cuando se consideraron dos muestreos conjuntamente (pre y postparto:
muestreos en meses -1 y 0). En cambio, cuando las vacas fueron clasificadas de
acuerdo a su positividad al HPG un mes después de comenzada la lactancia (mes 1),
ya no se registraron diferencias en la producción de leche entre los grupos, incluso si
la descarga de huevos permanecía en niveles altos por el resto de la lactancia.
La duración de la lactancia no fue afectada por la positividad al HPG sugiriendo
una disminución de la producción independiente del acortamiento de la lactancia.
Esto fue demostrado al analizar las curvas de lactancia, en donde se observó
claramente que los meses de productividad diferente estuvieron durante el primer
tercio de lactancia coincidentemente con la fase de pico de producción.
51
El hecho de que se observe la producción total afectada por la presencia/ausencia
de huevos de nematodos en la materia fecal durante el período de periparto, hace que
se pueda realizar una predicción sobre el desempeño productivo de los animales, a
partir de la evaluación de la carga parasitaria de este período. La incidencia de otras
enfermedades como la leucosis, metritis o la mastitis no fueron estudiadas en este
trabajo, como tampoco se evaluó el conteo de células somáticas. Por lo tanto la
presencia de parásitos no puede ser asignada como única causa del decrecimiento de
la producción de leche. Sería esperable que futuros trabajos en este campo relacionen
la carga parasitaria con otras patologías causadas por la inmunodepresión propia del
periparto. Como antes se discutió, las vacas en el periparto son susceptibles al
incremento de incidencia y severidad de enfermedades, probablemente debido a las
adaptaciones metabólicas de la lactancia, incluyendo incremento de metabolismo de
los lípidos y estrés oxidativo que deprimen la función inmune (Sordillo y col., 2009).
Los resultados expuestos son consistentes con los obtenidos en Canadá con
tratamientos antiparasitarios durante la lactancia, con un incremento cercano al 8% en
la producción de leche que fue reportado conjuntamente con un decrecimiento
sostenido del conteo de huevos (HPG) en la materia fecal (Nodtvedt y col., 2002). De
manera similar un incremento de producción se reportó en Inglaterra luego de la
aplicación secuencial de eprinomectina (Gibb y col., 2005). También Charlier
(Charlier y col., 2005) encontró una relación inversa entre la concentración de
anticuerpos anti-Ostertagia en tanque de reservorio de leche y la producción total de
los rodeos, sugiriendo un efecto negativo de la presencia de nematodos, aunque no se
estableció relación entre la infestación de las vacas individuales y la producción de
leche.
En cuanto a los parámetros reproductivos, solamente pudieron ser demostrados
efectos marginales, cuando una o dos muestras fueron consideradas en torno a la
parición para clasificar a las vacas. El intervalo parto-primer servicio tendió a ser
mayor en vacas con HPG positivo en el mes 0, comparadas con vacas HPG=0 en el
mismo momento. Sin embargo este retraso en el primer servicio no fue seguido por
un retraso estadísticamente significativo en el intervalo parto-concepción. Se han
publicado algunos resultados controvertidos respecto a la influencia de la carga
parasitaria en parámetros reproductivos. En ganado de carne, el tratamiento
antihelmíntico mejoró el desempeño reproductivo (Hawkins, 1993). En Canadá un
estudio clínico realizado en vacas de tambo tratadas con antihelmínticos, mostró un
52
decrecimiento del intervalo parto-concepción (Sanchez y col., 2002). Sin embargo, un
estudio posterior del mismo grupo de investigación no confirmó estos resultados
(Sithole y col., 2006), probablemente debido a una baja exposición de las vacas a
pasturas infestadas. En estos estudios todos los rodeos fueron tratados,
independientemente del grado de infestación de cada individuo, lo que no es
aconsejable desde el punto de vista del manejo de la resistencia a las drogas
antiparasitarias.
4.4.3 Hormonas
Los perfiles de insulina, prolactina, GH e IGF-1 durante la lactancia fueron

similares a los encontrados en vacas lecheras de sistema pastoril en estudios previos
(Becu-Villalobos y col., 2007; Mejia y col., 2009). En este trabajo se halló que la
presencia de huevos de parásitos durante el periparto afecta las concentraciones
séricas de GH, IGF-1 y prolactina, todas hormonas con activa participación en la
regulación de la producción de leche. El incremento en los valores de GH en el grupo
de HPG cero está probablemente relacionado con la mayor producción de leche
observada en este grupo, ya que GH es la principal hormona galactopoyética en
bovinos (Bauman, 1999). No se hallaron reportes previos respecto a la alteración de
esta hormona por nematodos gastrointestinales, aunque su decrecimiento se ha
descripto para varias enfermedades (Whitlock y col., 2008). Insulina no se modificó
por las condiciones de carga parasitaria, sugiriendo que la síntesis de esta hormona no
está relacionada con las diferencias productivas encontradas. No obstante ambas
hormonas, GH e insulina, son conocidas por estar alteradas por fallas nutricionales
(Hornick y col., 2000), y las interacciones entre parásitos gastrointestinales y su
hospedador ocasionan un perjuicio nutricional sobre este último (Coop y Kyriazakis,
1999).
La baja concentración de GH, en este caso, es acompañada por bajos niveles de
IGF-1 en vacas con HPG positivo, lo cual es esperable ya que GH incrementa la
producción hepática de IGF-1. Por otro lado, IGF-1 está también relacionada con el
plano de nutrición y la producción de leche en vacas lecheras alimentadas con
pasturas (Pedernera y col., 2008). Las bajas concentraciones de IGF-1 en vacas con
HPG positivo en el posparto temprano que se muestran en este estudio,
53
probablemente reflejan un peor estado energético, causado por parásitos que
disminuyen el consumo de alimentos, y causan subnutrición (Simpson, 2000), o
alternativamente, las vacas con un marcado balance energético negativo (reflejado en
los bajos niveles de IGF-1) tienen una alta carga parasitaria ya que se ha visto que una
restricción alimentaria, en presencia de oferta parasitaria, incrementa la infestación
(Coop y Kyriazakis, 1999).
La asociación entre el estado nutricional y la carga parasitaria en el periparto
podría ser indirectamente inferida por la relación de niveles de IGF-1 y positividad a
HPG. Trabajos anteriores sostienen que los parásitos perjudican el crecimiento
normal y el inicio de la pubertad (Mejia y col., 1999), y que el IGF-1 circulante estría
involucrado en este efecto (Lacau-Mengido y col., 2000). En este sentido, la
disminución de IGF-1 durante la primera fase de lactancia puede ser también, al
menos en parte, responsable por el retraso observado en el primer servicio (Cavestany
y col., 2009a). La prolactina también está involucrada en la producción de leche y
participa de la diferenciación de células epiteliales en la glándula mamaria (Oakes y
col., 2008), y probablemente mantiene la lactancia previniendo además la muerte
celular (Flint y col., 2005; Flint y col., 2006). Por otro lado, la prolactina interactúa
con la leptina para aumentar la síntesis de leche (Feuermann y col., 2004). El mayor
nivel de prolactina encontrado en el grupo con HPG cero podría dar cuenta, al menos
en parte, de los mayores niveles productivos observados en este grupo. Sin embargo
existen resultados previos en terneras prepúberes que sugieren que los niveles de
prolactina son disparados, no disminuidos, por las altas cargas parasitarias (Diaz-
Torga y col., 2001). Esta observación dispar podría explicarse por la diferencia de
edad de los animales, ya que como se mostró, las vacas adultas presentan una carga
parasitaria mucho menor que los animales en desarrollo.
Las diferencias en los niveles de prolactina en el presente grupo de vacas podrían
ser el resultado de la diferencia etaria de los animales y la relativamente baja carga
parasitaria registrada en vacas.
4.4.4 Conclusión
En base a los resultados presentados se concluye que el detrimento en la

producción de leche de leche observado en las vacas con mayor descarga de huevos
54
de parásitos en el periparto, podría estar mediado por hormonas de tipo metabólicas y
galactopoyéticas como GH, IGF-1 y prolactina.
4.4.5 Conclusión de tipo práctico para la producción
El conteo de huevos de nematodos en la materia fecal en torno a la parición,

resultaría ser una herramienta útil para detectar vacas individuales a ser tratadas con
antihelmínticos en pos de mejorar su desempeño productivo. Esta estrategia podría
minimizar la utilización de drogas antiparasitarias y por lo tanto disminuir el riesgo
de generar resistencia.
55
5 Capítulo 5: Evaluación del efecto
tratamiento antiparasitario sobre el
desarrollo de la glándula mamaria
de terneras Holstein
56
Como se ha descripto, los parásitos causan trastornos a nivel sistémico,
fundamentalmente por el redireccionamiento de la energía ingerida por el
hospedador, que es transferida en proporción significativa a los parásitos. En bovinos
esta patología afecta principalmente a las categorías más jóvenes dado que su sistema
inmunológico se encuentra en desarrollo. Entre las consecuencias que ocasionan las
parasitosis se cuentan: menor crecimiento corporal, retraso puberal y alteraciones en
concentraciones hormonales relacionadas con el crecimiento y desarrollo.
La hipótesis de este capítulo plantea que la influencia sistémica originada por la
presencia de nematodos gastrointestinales se traduciría, a nivel mamario, en
parámetros relacionados con el desarrollo de la glándula (como por ejemplo la
proliferación celular y la relación parénquima/estroma), y en parámetros relacionados
también con la regulación hormonal (como la densidad de los receptores de estrógeno
y de proteínas ligadoras de IGF-1 que influyen sobre la actividad de este factor).
Son ampliamente conocidos desde hace tiempo los efectos de los nematodos
gastrointestinales sobre la tasa de ganancia de peso corporal en rodeos de carne y de
leche (Ryan y col., 1997; Mejia y col., 1999). Los mismos están relacionados además,
con alteraciones morfológicas como la disminución del área pélvica, así como
también con el retardo de la maduración sexual debido a la alteración del patrón de
secreción de la hormona LH, y el retraso del pico de la hormona leptina previo a la
pubertad (Ambrustolo y col., 1990; Zajac y col., 1991; Diaz-Torga y col., 2001).
Todos ellos están interrelacionados y probablemente respondan a alteraciones
fisiológicas endocrinas, producto del redireccionamiento energético, que lleva a la
disminución de IGF-1 en los animales infectados (Mejía y col., 1999; Lacau-Mengido
y col., 2000).
5.1 Objetivos
-Evaluar, en animales tratados con antiparasitarios y controles, posibles

diferencias en las concentraciones de las hormonas involucradas en el desarrollo y el
crecimiento (GH, IGF-1) y en la hormona marcadora de la pubertad (Progesterona).
57
-Evaluar el efecto del tratamiento con antiparasitarios en el desarrollo de la
glándula mamaria de terneras Holstein mediante la realización de biopsias sucesivas y
determinación de los siguientes parámetros:
a. Relación: área epitelial/área estromal.
b. Proliferación celular, mediante la cuantificación de la expresión de
PCNA (antígeno nuclear de proliferación celular) por
inmunohistoquímica (IHQ).
c. Receptores de estrógeno alfa (ER-) mediante IHQ.
d. IGFBPs (2 y 3) por IHQ utilizando anticuerpos específicos.
En el subsistema de recría de la Escuela Agropecuaria Inchausti (UNLP) se

generaron dos grupos experimentales de terneras, conteniendo 80 individuos en total,
en 3 réplicas, nacidas en diferentes momentos del año (30 nacidas en otoño, 20
nacidas en invierno y 30 nacidas en primavera). Estas fueron asignadas al nacer,
alternativamente, a uno de los dos grupos siguientes: controles o con tratamiento
antiparasitario. El tratamiento se aplicó mensualmente de forma sistemática desde la
guachera (primera etapa de la recría). Se practicó rotación de drogas, Ivermectina 1 %
(1 ml/50 kg), Levamisol 15 % (1/2 ml/15 kg) y Fenbendazol 25 % (2 ml/100 kg) con
el objetivo de mantener mínimos los niveles de infestación del grupo tratado. Ambos
grupos fueron criados en iguales condiciones, y expuestos a la misma infestividad
larvaria de las pasturas. En forma mensual, todas las terneras fueron pesadas, y se les
extrajo, a cada una, materia fecal para el conteo de huevos de nematodos para evaluar
el grado de contaminación individual y la eficacia del tratamiento, y muestras de
sangre de la vena caudal para evaluar las concentraciones hormonales.
5.2.1 Determinaciones hormonales
La sangre extraída a los grupos experimentales fue mantenida a temperatura

ambiente toda la noche y posteriormente se extrajo el suero por centrifugación, el cual
se mantuvo congelado a -20 °C hasta el momento de realizar las determinaciones.
58
En suero se cuantificaron IGF-1 y progesterona por RIA. Para ambos casos se
determinó la concentración de la hormona en ng/ml (Lacau-Mengido y col., 2000).
Para el caso particular de progesterona fue significativo identificar el momento del
desarrollo (edad) en que se produce el primer pico de la hormona que indica el inicio
de la pubertad (Lacau-Mengido y col., 2000).
5.2.2 Evaluación del efecto del tratamiento antiparasitario en la

glándula mamaria de terneras Holstein
5.2.2.1 Biopsias de glándula mamaria
Durante 3 años (2007-2009) se obtuvieron muestras de tejido mamario a través

de la realización de biopsias en terneras de 20, 30, 40 y 70 semanas de edad. Se
utilizó el cuarto caudal derecho de la ubre de 6-8 animales por grupo en cada repique
(3-4 controles y 3-4 tratadas). Para esta práctica se siguió la metodología empleada
por Sorensen (Sorensen y col., 2006), adaptada a terneras Holstein por Licoff (Licoff
y col., 2009) (Fig. 19).
Los animales fueron sedados en la manga con acepromacina 1% (0,1 mg/kg) y
posteriormente sujetados y volteados para ubicarlos en posición decúbito supino. En
esta posición se realizó la tricotomía, limpieza y antisepsia de la zona de biopsia y se
colocó anestesia local por infiltración con lidocaína 2% (5 ml). Después de
aproximadamente 7 minutos se procedió al biopsiado, para lo cual se utilizó un
A B C
Figura 19. Toma de biopsia en una ternera Holstein. A) Introducción de la aguja y disparo del
biopsiador. B) Estado del animal posterior a la toma de muestra. C) Muestra de tejido mamario a
ser retirada de la aguja de biopsia.
59
biopsiador automático para tejidos blandos, marca TRU-CORE I (Angiotech). Con
este equipo se utilizaron agujas para biopsias de 14 G X 20 cm (Angiotech).
5.2.2.2 Procesamiento del tejido mamario
Las muestras de tejido mamario de cada animal en cada uno de los tiempos antes
mencionados, de aproximadamente 40 mg cada una, fueron fijadas en formol-buffer
4% durante 6 a 8 horas a temperatura ambiente. Luego de un lavado prolongado en
agua corriente y buffer fosfato salino 0,05 M pH 7,5 (PBS) se deshidrataron en
concentraciones graduales crecientes de alcohol etílico, se aclararon en xilol y se
embebieron en parafina siguiendo protocolos de rutina (Woods y Ellis , 1994). Los
tacos histológicos fueron cortados en un micrótomo rotativo manual. Los cortes
seriados de 5 μm de espesor fueron montados en portaobjetos previamente tratados
con 3-aminopropyltriethoxysilane (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y secados durante
24 hs a 37 °C.
5.2.2.3 Histología (medición de la relación parénquima/estroma)
Luego de realizados los cortes histológicos, se efectuó una tinción de rutina con
hematoxilina/eosina. La hematoxilina es una base que tiñe de manera preferencial los
componentes ácidos de la célula de un color azulado. El núcleo celular y los
ribosomas contienen gran cantidad de componentes ácidos por lo que presentan gran
afinidad por este colorante. La eosina es un ácido que tiñe los componentes básicos
de la célula de color rosado (Gartner y Hiatt, 1995). De este modo, el parénquima de
la glándula, que posee gran cantidad de células epiteliales con núcleos de pequeño
tamaño se tiñe de azul-violeta, mientras que el estroma que posee abundantes fibras
colágenas embebidas en una matriz amorfa, células de mayor tamaño y con
almacenamiento lipídico se torna rosado-blancuzco (Fig. 20 A y B). Una vez
realizado este procedimiento se tomaron entre 30 y 40 imágenes recorriendo todo el
corte histológico a X 400.
60
A Estroma B
Cel. epiteliales Cel. moepiteliales Matriz grasa

Parénquima
Figura 20. A) Biopsia completa de glándula mamaria bovina (X100). B) Unidad ductal terminal
(TDU) (X 400). El área azul en ambas figuras representa al parénquima mamario mientras que el
área rosada-blanquecina corresponde al estroma mamario. Coloración: Hematoxilina/eosina.
Utilizando el software Image-Pro Plus (Versión 3.0 de Media Cibernetics, 1993-

1997), se delimitó y cuantificó el área teñida de azul integrada por células del
parénquima y mioepiteliales, para luego calcular el cociente de ésta respecto al área
total del corte (parénquima más estroma).
5.2.2.4 Inmunohistoquímica
Los diferentes anticuerpos utilizados y sus concentraciones de uso se detallan en

la tabla 3. Cada anticuerpo fue probado al menos en 5 secciones de tejido para cada
muestra. Se utilizó el método streptavidina-biotina-inmunoperoxidasa según
descripciones previas de (Dallard y col., 2005; Dallard y col., 2007; Ortega y col.,
2007; Dallard y col., 2011). Brevemente, las secciones fueron desparafinadas,
hidratadas y tratadas con recuperación antigénica o no, dependiendo del anticuerpo
primario utilizado. La actividad de la peroxidasa endógena fue inhibida con H2O2 1%
y las uniones inespecíficas fueron bloqueadas con suero normal de cabra 10%. Las
secciones fueron incubadas con el anticuerpo primario 18 hs a 4oC. Luego de tres
lavados sucesivos con PBS de 5 minutos cada uno, los cortes fueron incubadas con el
anticuerpo secundario biotinilado, seleccionado específicamente de acuerdo al tipo de
anticuerpo primario utilizado (monoclonal o policlonal), durante 30 minutos a
temperatura ambiente. La visualización del antígeno se realizó por el método
streptavidina-peroxidasa (BioGenex, San Ramon, CA) utilizándose como cromógeno
3.3-diaminobenzidina (DAB) (Liquid DAB-Plus Substrate Kit - Zymed, San
61
Francisco, CA). Finalmente los cortes fueron lavados en agua destilada,
contracoloreados con hematoxilina de Mayer, deshidratados y montados.
Anticuerpos Huésped Dilución Procedencia Recuperación

antigénica (RA)
Primarios
PCNA (Clon PC-10) Ratón 1:400 Novocastra Microondas

ER-α (Clon 1D5) Ratón 1:50 Biogenex Olla a presión
IGFBP-2 Conejo 1:100 Biotech Reagents Microondas
IGFBP-3 Conejo 1:100 Biotech Reagents Microondas
Secundarios
Anti conejo IgG Cabra 1:300 LETH, UNL, Sta. Fe, Arg.
Anti ratón IgG Cabra 1:120 LETH, UNL, Sta. Fe, Arg.
Tabla 3. Anticuerpos primarios y secundarios utilizados, sus diluciones de trabajo, método de

recuperación antigénica empleado y procedencia.
5.2.2.5 Controles
Para verificar la especificidad de la técnica utilizada se realizaron los siguientes

controles:
A- Omisión del anticuerpo primario y reemplazo por suero no inmune de conejo
o ratón según el anticuerpo primario que se reemplaza (Fig. 21, A).
B- Omisión del anticuerpo secundario biotinilado.
C- Para excluir la posibilidad de la no supresión de la actividad de la peroxidasa
endógena, algunas secciones fueron incubadas solamente con el reactivo DAB.
D- Como control positivo se utilizaron tejidos con reactividad conocida al
anticuerpo primario utilizado.
5.2.2.6 Análisis de imágenes
Se obtuvieron imágenes de todas las secciones histológicas provenientes de todos

los animales de cada tratamiento (50-60 por individuo), mediante una cámara de
video color CCD Moticam 2000 (Mikron Instrument Inc., California, USA) montada
en un microscopio convencional Olympus CX31, (Olympus Co., Japón) usando un
62
objetivo 40X. Se digitalizaron campos microscópicos que cubrieron toda el área a
analizar y se almacenaron bajo el formato TIFF con una definición de 1200 x 1600
pixels y 24 bits de color. Se realizó el análisis de las imágenes utilizando el programa
Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetics, Silver Spring, MA, USA). A la
magnificación usada, cada píxel de la imagen correspondía a 0,13 μm, y cada campo
representaba un área de tejido de 0,032 mm2
5.2.2.7 Cuantificación de la inmunomarcación
Los detalles metodológicos del análisis de imágenes como un método validado

para cuantificar niveles de expresión fueron previamente descriptos (Dallard y col.,
2005; Ortega y col., 2007; Dallard y col., 2010; Dallard y col., 2011). Brevemente, el
área marcada por IHQ por la reacción del anticuerpo, fue calculada como porcentaje
del área total evaluada a través de análisis de segmentación de colores, localizando
todos los objetos de color específico (marcación marrón). De la marcación marrón fue
seleccionado el color de mayor intensidad y luego se aplicó una máscara para separar
los colores de forma permanente. El porcentaje de área inmunomarcada (máscara
negra) fue calculado para al menos 50 imágenes de cada uno de los cortes que
comprendían estructuras de parénquima y estroma.
La inmunomarcación para PCNA, ER-α, IGFBP-2 e IGFBP-3 se cuantificó
utilizando la metodología descripta.
5.2.2.8 Evaluación y cuantificación de la proliferación celular
La proliferación celular se evaluó a través de la inmunomarcación de PCNA

(antígeno nuclear de proliferación celular). La marcación de PCNA fue revelada por
IHQ utilizando un anticuerpo monoclonal específico (Tabla 3).
Todas las células inmunomarcadas para PCNA se consideraron positivas. Éstas
presentaron reacción nuclear positiva con alta heterogeneidad en la intensidad de la
tinción (débil, moderada e intensa) (Fig 21, B). Por este motivo se procedió a medir
sólo el área representada por los núcleos de las células intensamente marcados. En
forma seguida se delimitó el área ocupada por las unidades ductales terminales (TDU)
y se incluyó a las células mioepiteliales en la delimitación. Posteriormente se marcó
la reacción nuclear más intensa y se generó automáticamente una mascara en blanco y
63
negro mediante el programa Image Pro-Plus 3.0.1 (Media Cybernetics, Silver Spring,
MA) que permitió cuantificar el porcentaje de área inmunomarcada (Fig. 21, C).
5.2.2.9 Evaluación y cuantificación de proteínas ligadoras de IGF-1 (IGFBP-2 y

3)
Las proteínas ligadoras de IGF-1 se evaluaron mediante anticuerpos específicos

(Tabla 3). En el tejido mamario estas proteínas están presentes en el estroma y en el
parénquima, evidenciando una marcación de tipo citoplasmática en las células que
componen el tejido (Fig. 21, D). En las imágenes se consideró como positiva la marca
específica de mayor intensidad. Posteriormente se efectuó la máscara en blanco y
negro que permitió cuantificar el porcentaje de área marcada (Fig. 21, E), refiriéndola
a área total observada.
5.2.2.10 Evaluación y cuantificación de receptores de estrógeno (ER-α)
Para la visualización de los receptores de estradiol se utilizó el anticuerpo

específico citado en la tabla 3. Dado que la marcación presentada por el ER-α es
nuclear, se siguió la misma metodología de tratamiento de imágenes y cuantificación
descripta para PCNA.
64
A
B C
D E
Figura 21: A) Muestra control negativo de la técnica de inmunohistoquímica, la cual carece de

anticuerpo primario. B) Muestra tratada con anti-PCNA. C) Máscara de la imagen –B revela
marcación nuclear. D) Muestra tratada con anti-IGFBP-2. E) Máscara de la imagen –D revela
marcación citoplasmática. X 400.
65
5.2.3 Análisis estadísticos de los datos
Para la evaluación de datos provenientes de muestras de materia fecal, pesos y

concentraciones séricas de IGF-1 de terneras tratadas y controles se utilizó ANOVA
de dos vías (o factores) para medidas repetidas considerando el tiempo (edad) como
un factor y el tratamiento como otro factor.
Cuando hubo diferencia significativa en tiempo, se aplicó a cada punto (edades
de los animales) t Student como post test, este análisis indicó el o los tiempos donde
se encontraban las diferencias entre grupos.
Los datos correspondientes a la entrada en pubertad (primer pico de
progesterona) se analizaron por medio de análisis de supervivencia y a las curvas
arrojadas por este se les aplicó la prueba del logaritmo del rango.
Para comparar los parámetros medidos de glándula mamaria (% de área de
parénquima, PCNA, IGFBP-2 y 3 y ER-α) se utilizaron tests no paramétricos. Para
determinar diferencias entre grupos experimentales a lo largo del tiempo (efecto
tratamiento) se utilizó el test de Friedman. El mismo test fue utilizado para evaluar
variaciones de los parámetros dentro de los grupos (efecto tiempo dentro de cada
grupo). Para evaluar el efecto del tratamiento puntualmente dentro de cada uno de los
tiempos (edades de los animales) se empleó la U de Mann-Whitney.
En todos los casos la significación estadística se fijó en p<0,05.
66
5.3 Resultados
5.3.1 Influencia de los nematodos a nivel sistémico
5.3.1.1 Conteo de huevos por gramo en materia fecal
Se evaluó la cantidad de huevos de nematodos parásitos en materia fecal que

presentaron los animales sometidos a ensayo (tratados con antiparasitarios y
controles). Ambos grupos presentaron conteo de huevos a partir del 5to mes de edad
(Fig. 22).
800
*
700
600
*
HPG
500
400
300
*
200
100
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tiempo (Meses)
Tratadas Controles
Figura 22. Evaluación de huevos por gramo (HPG) según la edad en terneras tratadas con
antihelmínticos y controles Las barras representan las medias ± SEM. *Indica p<0,05 para
cada período de tiempo.
El análisis estadístico reveló interacción (tratamiento x tiempo) (pT*t=0,012). Por

otra parte, se observó un efecto del tiempo de muestreo para los diferentes
tratamientos (pt=0,04) y la evaluación estadística en cada período de tiempo reveló un
aumento (p < 0.05) en el conteo de HPG en los animales controles sin tratamiento
antiparasitario con respecto a los tratados a los 6, 7 y 10 meses de edad (Fig. 22). El
conteo de HPG en materia fecal fue mayor en el grupo de terneras controles sin
tratamiento antiparasitario durante el período de muestreo (pT=0,001).
67
5.3.1.2 Evaluación del desarrollo corporal de los grupos experimentales
mediante peso corporal
La evolución temporal del peso de las terneras tratadas y controles se muestra en

la figura 23.
El análisis estadístico mostró interacción tiempo x tratamiento (pT*t=0,001).
Además se observó un efecto del tiempo (pt=0,0001). Las terneras que recibieron
tratamiento antiparasitario mostraron mayor peso que las controles durante el período
de muestreo (pT=0,019) y el aumento en el peso corporal de las terneras tratadas con
antiparasitarios con respecto a las controles se detectó a partir del mes 5 de vida
(p=0,04) observándose un aumento progresivo hasta el mes 9 donde se detectaron las
mayores diferencias (p=0,001) (Fig. 23).
350
*
300 *
*
250 *
*
*
Peso (kg)
200
*
*
150
100
50
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tiempo (mes)
Tratadas Controles
Figura 23. Pesos de los grupos tratados y controles a lo largo de un año. Las barras
indican medias ± SEM. La diferencia entre los mismos se hace significativa a partir del
mes 5. *Indica p<0,05.
5.3.1.3 Concentraciones séricas de IGF-1
Las concentraciones séricas promedio de IGF-1 evaluadas a las 20, 30, 40 y 70

semanas de vida en grupos tratados y controles se muestran en la figura 24. El análisis
estadístico para las concentraciones séricas de IGF-1, de terneras tratadas y sin tratar,
evaluadas a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida no mostró interacción significativa
(pT*t=0.9), mientras que sí se observó un efecto del tiempo de muestreo (pt=0.012) y
del tratamiento (pT=0.002). Las terneras tratadas con antiparasitarios mostraron
68
mayores concentraciones de IGF-1 que las controles sin tratar, y a las 70 semanas de
edad se observaron los mayores niveles séricos con respecto a las otras edades
analizadas (post-hoc test p < 0.05).
25
**
20
IGF-I (ng/ml)
15
10
0
20 30 40 70
Edad (Sem.)
Tratado Control
Figura 24. Medias de las concentraciones séricas de IGF-1 a las 20, 30, 40 y 70 semanas de
edad de terneras tratadas con antiparasitarios (barra verde) y controles (barra roja) ± SEM.
*Indica p<0.05.
5.3.1.4 Estado puberal
En la figura 25 se muestra la edad promedio a la cual las terneras tratadas y

controles alcanzaron la pubertad, la cual correspondió a 34 semanas para tratadas y 38
para controles (p=0,02).
41 Tratadas
Controles
40
39
Edad inicio pubertad (semanas).
38
37
*
36
35
34
33
32
31
30
Grupos experimentales
Figura 25. Edad promedio de entrada en la pubertad en semanas de los grupos tratados
con antihelmínticos (verde) y controles (rojo). Medias ± SEM. * Indica p=0,02.
69
La figura 26 muestra los porcentajes promedios de terneras púberes a cada uno
de los tiempos analizados, revelándose diferencia en el porcentaje de individuos que
entran en pubertad a las 20 y 40 semanas, resultando todas las terneras tratadas
púberes a en este último tiempo (p=0,0179).
100
90
80
70
% terneras puberes
60
50
40
30
20
10
0
20 30 40 70
Tiempo (Sem.)
Tratadas Controles
Figura 26. Porcentajes (%) promedios de terneras púberes de los grupos tratados con
antihelmínticos (verde) y controles (rojo) a las 20, 20 40 y 70 semanas de vida.
5.3.2 Influencia de los nematodos sobre el desarrollo de la

glándula mamaria
En este apartado se describen las diferencias intramamarias derivadas de la

comparación de terneras tratadas (con antihelmínticos) respecto a controles durante el
desarrollo en los parámetros de: relación parénquima/estroma, proliferación celular,
expresión de componentes del sistema de IGF y en la expresión de receptores de
estrógenos alfa.
5.3.2.1 Relación parénquima/estroma
En la figura 27 se observan imágenes de cortes histológicos obtenidos a partir de

biopsias de tejido mamario teñidas con hematoxilina/eosina, de terneras tratadas con
antiparasitarios y controles a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida.
70
Edad (Sem.) Tratamiento Control
20
30
40
70
Figura 27. Biopsias de glándula mamaria de terneras tratadas con antiparasitarios y controles a
las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida. Coloración: Hematoxilina/eosina. X 200.
71
En la figura 28 se observan las proporciones de parénquima con respecto al tejido
total en ambos grupos de terneras, a las cuatro edades estudiadas. El análisis
comparativo entre tratamientos indicó una mayor proporción de parénquima en las
glándulas mamarias de las terneras tratadas (pT=0.04). No se encontraron diferencias
temporales de inmunomarcación a nivel intragrupo (tratados, ptT=0,12; controles,
ptC=0,33).
Cuando se evaluaron las diferencias entre tratadas y controles para cada edad, no
se observaron diferencias en los porcentajes de parénquima entre tratados y controles
en ninguna de ellas (p20=0,1, p30=0,4, p40=0,1 p70=0,4).
70
60
50
% Parenquima
40
30
20
10
0
20 30 40 70
Edad (Sem.)
Tratadas Controles
Figura 28. Porcentaje de parénquima en biopsias de glándula mamaria en animales tratados con
antiparasitario y controles sin tratamiento a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida. Las barras
representan las medias ± SEM.
5.3.2.2 Proliferación celular mediante expresión de PCNA en tejido mamario
La proliferación celular en tejido mamario de terneras tratadas con antiparasitario

y sin tratamiento a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida, evaluada mediante la
expresión nuclear de PCNA, se muestra en la figura 29.
La marcación con el anticuerpo se evidenció en los núcleos de las células
epiteliales y estromales, variando de débil a intensa (color marrón). Particularmente
en las unidades ductales terminales (TDU) se observó marcación tanto en células
epiteliales como en las mioepiteliales que rodean a los ductos (Fig. 29).
Las terneras tratadas con antiparasitarios mostraron, a las 20, 30, 40 y 70
semanas de vida, una tendencia (pT=0,08) a presentar un promedio mayor de área
72
Edad (Sem.) Tratamiento Control
20
30
40
70
Figura 29. Inmunomarcación con anti-PCNA en glándula mamaria de terneras tratadas (izquierda)
y controles (derecha) a las 20, 30, 40 y 70 semanas de edad. Las flechas indican núcleos de células
PCNA intensamente marcadas (marrón) en el epitelio que reviste las unidades ductales terminales.
X 400.
73
inmunomarcada para PCNA con respecto al grupo control (Fig. 30).
En la evaluación de la inmunomarcación a nivel intragrupo para todos individuos
tratados y controles (por separado) a todos los tiempos, no se registró diferencias
(ptT=0,42, ptC=0,56). Tampoco se observaron diferencias en los porcentajes de
inmunomarcación para PCNA entre las hembras tratadas y controles a ninguna de las
edades analizadas (p20=0,1, p30=0,2, p40=0,2 p70=0,4).
0.8
0.7
% Inmunomarcación
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
20 30 40 70
Tiempo (sem.)
Tratadas Controles
Figura 30. Porcentaje de área inmunomarcada con anti-PCNA asociado a parénquima de glándula
mamaria de terneras tratadas con antiparasitario y controles sin tratamiento a las 20, 30, 40 y 70
5.3.2.3 Expresión de IGFBP-2 en tejido mamario
La figura 31 muestra en forma comparativa la inmunomarcación con anti IGFBP-

2 en tejido mamario de terneras tratadas con antiparasitario y controles sin
tratamiento. La expresión de IGFBP-2 en tejido mamario proveniente de terneras
tratadas y controles se asoció a estructuras del parénquima y estroma mamario. Se
observó reacción intensa a la inmunomarcación en el citoplasma de las células
epiteliales que revisten los conductos mamarios. Células del estroma como
fibroblastos y células endoteliales de los vasos sanguíneos también mostraron
reacción intensa en su citoplasma; asimismo las fibras del tejido conectivo mostraron
marcación positiva.
En la figura 32 se muestran los porcentajes de área inmunomarcada para IGFBP-
2 en biopsias de glándula mamaria de terneras sometidas a tratamiento antiparasitario
y en controles. El porcentaje de inmunomarcación en el tejido mamario de los
74
animales tratados varió con la edad mientras que en el de los controles permaneció
prácticamente constante durante el desarrollo. Las terneras tratadas mostraron niveles
máximos de inmunomarcación en la semana 40 de vida y mínimos en los extremos
etarios analizados (20 y 70 semanas). El análisis estadístico mostró una disminución
significativa en los porcentajes de inmunomarcación para IGFBP-2 en tejidos
provenientes de hembras tratadas con antiparasitario durante el desarrollo con
respecto a las hembras controles (no tratadas) (pT=0,04).
La evaluación temporal a nivel intragrupo indicó que la inmunomarcación para
IGFBP-2 de los individuos tratados, tendió a variar con el tiempo (ptT=0,06), en tanto
que en controles no se registró diferencia (ptC=0,98). No se observaron diferencias en
los porcentajes de marcación para IGFBP-2 entre hembras tratadas con antiparasitario
y controles en ninguna de las edades analizadas separadamente (p20=0,1, p30=0,2,
p40=0,7 p70=01).
5.3.2.4 Expresión de IGFBP-3 en tejido mamario
La expresión de IGFBP-3 en tejido mamario proveniente de terneras tratadas y

controles se asoció a estructuras del parénquima y estroma mamario. La figura 33
muestra comparativamente la inmunomarcación con anti-IGFBP-3 para tejido
mamario, de terneras tratadas con antiparasitario y controles sin tratamiento, durante
el desarrollo. El tejido conectivo que rodea a los conductos mamarios reaccionó
intensamente a la inmunomarcación al igual que el citoplasma de las células
epiteliales que revisten los TDU. También se observó inmunorreacción en el
citoplasma de las células endoteliales de los vasos sanguíneos y en los fibroblastos
del tejido conectivo.
En la figura 34 se muestran los porcentajes de área inmunomarcada para IGFBP-
3 en biopsias de glándula mamaria de terneras sometidas a tratamiento antiparasitario
y en biopsias control. Los porcentajes de inmunomarcación en tejido de animales
tratados no mostraron diferencias con respecto a los controles durante el desarrollo
(pT=0,7). No se observó un efecto del tiempo de muestreo en los porcentajes de
inmunomarcación para IGFBP-3 a nivel intragrupo, ni para los individuos tratados
con antiparasitarios (ptT=1) ni para los controles (ptC=1). El análisis en cada punto del
tiempo (edades) no arrojó diferencias entre los grupos experimental analizados
(p20=1, p30=0,4, p40=0,4).
75
Edad (Sem.) Tratada Control
20
30
40
70
Figura 31. Inmunomarcación para IGFBP-2, en terneras tratadas con antiparasitario (izquierda) y
controles sin tratamiento (derecha). Biopsias realizadas a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida. X
400.
76
60
50
% Inmunomarcación.
40
30
20
10
0
20 30 40 70
Tiempo (Sem.)
Tratadas Controles
Figura 32. Porcentaje de inmunomarcación con anti-IGFBP-2 asociado a parénquima y

estroma de glándula mamaria de terneras tratadas con antiparasitario y controles sin
tratamiento a las 20, 30, 40 y 70 semanas de vida. Las barras representan las medias ± SEM
Edad (Sem.) Tratada Control
20
30
40
Figura 33. Inmunomarcación para IGFBP-3, en terneras tratadas con antiparasitario (izquierda) y
controles sin tratamiento (derecha). Biopsias realizadas a las 20, 30 y 40 semanas de edad. X400.
77
50
45
40
% Inmunomarcación
35
30
25
20
15
10
5
0
20 30 40 70
Tiempo (Sem.)
Tratados Controles
Figura 34. Porcentaje de inmunomarcación con anti-IGFBP-3 asociado a parénquima y

estroma de glándula mamaria de terneras tratadas y controles sin tratamiento a las 20,
30 y 40 semanas de vida. Las barras representan las medias ± SEM.
El análisis de IGFBP-3 no incluyó la semana 70 dado que cuando se cuantificó

esta proteína (cronológicamente la última cuantificada de este trabajo) los tacos
histológicos de biopsias pertenecientes a 3 terneras disponían de escaso material lo
que tornó imposible una cuantificación comparativa.
5.3.2.5 Expresión de receptores de estrógeno alfa (ER-) en tejido mamario
En la figura 35 se muestran comparativamente imágenes de tejido mamario

marcado con anti-ER-. En todos los períodos evaluados, se observó
inmunomarcación en los núcleos de las células epiteliales ubicadas en posición
medio-basal en el epitelio que reviste los TDU (marcación marrón). Las células
mioepiteliales y estromales resultaron negativas a la inmunomarcación con anti-ER-

Los resultados de la inmunomarcación revelaron que el área marcada para ER-α
fue superior en las terneras tratadas con antiparasitarios con respecto a las controles
sin tratamiento para todos los períodos analizados en conjunto (pT=0,021). El análisis
de las terneras tratadas con antiparasitarios contemplando todas las edades, mostró
efecto del factor tiempo (ptT=0,042), en cambio para individuos controles no se
detectó variación entre los tiempos (ptC=0,241). La variación temporal en la expresión
de ER- observada en los individuos tratados, se vió reflejada en la variación de los
promedios, hallándose tendencia creciente, con respecto al muestreo anterior, en la
78
expresión del receptor a las 30 semanas y tendencia decreciente a las 40 y 70 semanas
de edad (Fig. 36).
El análisis en cada período de muestreo (edad) no arrojó diferencias entre
hembras tratadas y controles (p20=0,2, p30=0,1, p40=0,2, p70=1).
79
Edad Tratada Control
20
30
40
70
Figura 35. Inmunomarcación para receptor de estrógeno α, en terneras tratadas con

antiparasitarios (izquierda) y controles sin tratamiento (derecha). Biopsias realizadas a las 20, 30,
40 y 70 semanas de edad. X400. Las flechas indican núcleos de células epiteliales
inmunomarcados.
80
35
30
% Inmunomarcación
25
20
15
10
0
20 30 40 70
Tiempo (Sem.)
Tratadas Controles
Figura 36. Porcentaje de área inmunomarcada con anti-ER- asociado a parénquima de

glándula mamaria de terneras tratadas con antiparasitario y controles sin tratamiento a
las 20, 30, 40 y 70 semanas de edad. Las barras representan las medias ± SEM.
5.3.3 Significancias estadísticas
A fin de clarificar los datos aportados por los análisis estadísticos a los que se
sometieron los datos de los individuos pertenecientes al ensayo, se exponen en el
siguiente cuadro todas las variables analizadas y las significancias calculadas para
cada una de ellas.
Variables Test F. Test F. Test F. Test Test Test Test

M-W M-W M-W M-W
Sig. estadística pT ptT ptC p20 p30 p40 p70
Parénquima/ 0,04 0,12 0,33 0,1 0,4 0,1 0,4
estroma
PCNA 0,08 0,42 0,56 0,1 0,2 0,1 0,4
IGFBP-2 0,04 0,06 0,98 0,1 0,2 0,7 0,1
IGFBP-3 0,70 1 1 1 0,4 0,4 ------
ER-α 0,021 0,04 0,24 0,2 0,1 0,2 1
Tabla 4. Significancias calculadas para todas las variables analizadas. pT: sig. del efecto
tratamiento. ptT: sig. del efecto tiempo para el grupo tratado. ptC: sig. del efecto tiempo para el
grupo control. p20: sig. a la semana 20 de la comparación de tratados y controles. p30: sig. a la
semana 30 de la comparación de tratados y controles. p40: sig. a la semana 40 de la comparación de
tratados y controles. p70: sig. a la semana 70 de la comparación de tratados y controles.
F=Friedman, M-W=Mann-Whitney.
81
5.4.1 Nivel sistémico
5.4.1.1 Conteo de huevos por gramo y desarrollo corporal
El número de huevos de nematodos encontrados en la materia fecal resulta un

buen indicador del nivel de infección parasitaria en los animales (Gasbarre y col.,
1996). En este trabajo no se registraron huevos de nematodos durante los primeros
meses de muestreo, esto se debió a que en este momento los individuos
experimentales pertenecían a la guachera (animales jóvenes de hasta 60 días de vida)
que al no ingerir pasto (alimentados artificialmente) no se contaminan con
nematodos. Este resultado es coincidente con lo reportado por (Mejia y col., 1999)
para el mismo sitio geográfico y terneras de la misma edad y raza. En contraposición
a lo descripto en el mencionado trabajo, se detectaron huevos de parásitos en
animales tratados y controles (terneras de recría alimentadas con pasturas),
probablemente por la pérdida de eficiencia de las drogas debido a la aparición de
resistencia a las mismas entre las poblaciones de nematodos (Mejía y col., 2003).
Trabajos previos han demostrado que los tratamientos antihelmínticos realizados
en terneras han resultado en una mayor ganancia de peso corporal (Larson y col.,
1995; Purvis, y Whittier, 1996; Mejia y col., 1999). Se conoce además que los
antiparasitarios no tienen una acción de crecimiento “per se” (Mejia y col., 1999), por
lo que la ganancia de peso de los animales tratados se puede adjudicar a la baja carga
parasitaria mantenida por los antihelmínticos. Los pesos medidos en los grupos
experimentales del presente trabajo suman evidencia en el mismo sentido, indicando
una fuerte influencia del tratamiento antiparasitario sobre la ganancia de peso
corporal de las terneras. La disminución en la ganancia de peso observada en los
animales que no recibieron tratamiento en comparación con los que sí lo recibieron,
podría estar ocasionada por la presencia de nematodos gastrointestinales y al ya
mencionado redireccionamiento energético mediado, entre otros, por las hormonas
metabólicas alteradas.
82
5.4.1.2 Niveles séricos de IGF-1 y pubertad
Como es sabido la hormona del crecimiento (GH) lleva a cabo su actividad

mediante IGF-1, el cual actúa como efector de GH (Yakar y col., 2005). En
rumiantes, el incremento en la expresión de IGF-1 se vincula con períodos de rápido
crecimiento (Hovey y col., 1998). Se ha descripto una correlación positiva entre el
peso corporal de bovinos y la concentración sérica de IGF-1 (hasta los 100 kg)
comparando terneras tratadas con antiparasitarios y controles sin tratamiento (Lacau-
Mengido y col., 2000). En el presente trabajo se encontraron diferencias en las
concentraciones de IGF-1 promedio entre grupos tratados y controles. El tiempo al
que comienza la diferencia en peso corporal (5 meses) coincidió con el tiempo en el
cual las concentraciones séricas de IGF-1 fueron significativamente mayores en los
animales tratados con antiparasitario en relación a los controles. Lacau-Mengido y
col. (2000) determinaron en muestreos más frecuentes que los aquí realizados, que las
diferencias de las concentraciones séricas de IGF-1 entre grupos tratados y controles
aparecen aproximadamente en la semana 20 de vida. En el presente trabajo, éste fue
el momento elegido para el comienzo de los muestreos, encontrándose alterados los
niveles de IGF-1, tal cual lo previsto (mayor concentración de IGF-1 en tratadas
respecto a controles p<0,05).
Además de lo mencionado, los tratamientos antiparasitarios en terneras se han
asociado con el adelantamiento puberal y el mejoramiento de la fertilidad (Larson y
col., 1995; Purvis y Whittier, 1996). Trabajos previos han sumado evidencia en la
misma dirección comparando terneras tratadas con antihelmínticos y controles sin
tratamiento (Lacau-Mengido y col., 2000). Los resultados del presente trabajo se
encuentran en la misma sintonía, ya que terneras tratadas con antihelmínticos respecto
a controles presentaron adelantamiento puberal de más de 4 semanas. Este hecho es
de fundamental importancia en la producción ya que posibilita el adelanto de la vida
productiva de los animales. Los cambios en las concentraciones séricas de IGF-1
previas a la pubertad son fuertemente influenciadas por el régimen nutricional
(Granger y col., 1989). Informes reportados en terneras prepúberes con restricción
alimentaria, revelaron que durante la realimentación de las mismas se incrementaban
los niveles de IGF-1 (Yambayamba y col., 1996). El redireccionamiento de los
nutrientes ingeridos por las terneras hacia el desarrollo de los parásitos podría
impactar en la concentración de IGF-1 de manera análoga a la subnutrición. Para el
83
caso de infecciones con garrapatas se ha se ha evidenciado también una marcada
disminución de IGF-I, la cual se torna exacerbada en animales que poseen niveles
nutricionales deprimidos (Tolleson y col., 2012). También se ha observado, que en
bovinos afectados por garrapatas, disminuye de la expresión de los receptores de GH
en hígado, y aumentan los niveles de cortisol (Tolleson y col., 2010). Si bien en el
presente trabajo no hemos medido estos parámetros, es probable que estén alterados
de manera similar, respondiendo al estrés parasitario, y que sean los causantes de la
disminución de IGF-1 observada, dado que la principal fuente del IGF-I circulante es
hepática y responde a la estimulación con GH. De manera adicional, se ha visto que
alteraciones del eje adrenal con aumento del cortisol resultan en una inhibición de los
niveles de GH (Savage y col., 2002; Ghizzoni y Mastorakos, 2003).
En cuanto a la evaluación del desarrollo mamario, las edades elegidas para los
muestreos, representaron distintas fases del desarrollo puberal. A las 20 semanas,
ninguna de las terneras había comenzado a ciclar, por lo que las muestras obtenidas
fueron todas de glándulas prepuberales en ambos grupos. A las 30 semanas las
primeras terneras estaban comenzando a ciclar, a las 40 todas las terneras del grupo
tratado eran púberes no así las terneras controles, y a las 70 semanas ya todas habían
alcanzado la pubertad.
Esto confiere un marco endocrino de importancia para la evaluación y discusión de
los resultados obtenidos.
Los resultados de la primera parte de este capítulo (HPG, desarrollo corporal,
pubertad) coincidieron con los hallazgos obtenidos por trabajos previos en animales
sometidos a tratamiento antiparasitario y controles sin tratamiento.
Hasta aquí se ha descripto la influencia de los nematodos a nivel sistémico, en la
próxima sección se discutirán posibles influencias de los mismos en parámetros
particulares del desarrollo mamario.
5.4.2 Nivel local
5.4.2.1 Relación parénquima/estroma y proliferación celular (PCNA)
Como se describió anteriormente, los parásitos nematodos afectan de manera

directa a las hembras en desarrollo, y pueden considerarse como un factor de
84
desequilibrio para el hospedador ya que parte de la energía ingerida por éste, se
redirecciona hacia el aumento de la eficiencia biológica (del inglés, Fitness) del
parásito, situación que resultaría análoga a la restricción alimentaria.
Trabajos realizados en cerdas prepúberes de 90 días de edad, han demostrado
que una leve disminución en la cantidad de alimento no afecta el desarrollo mamario;
sin embargo, una restricción alimentaria del 20% durante ese período disminuye la
matriz grasa de la glándula mamaria en un 42% y el parénquima en un 26% (Farmer y
col., 2004).
En cuanto a terneras prepúberes, ha sido bien documentado que la restricción
alimentaria en el período prepuberal afecta la mamogénesis (Petitclerc y col., 1984;
Capuco y col., 1995; Dobos y col., 2000). Por su parte Tucker, (Tucker, 1981)
sostiene que el crecimiento y desarrollo mamario en terneras es crucial para la
productividad, y que el número de células epiteliales mamarias es el principal factor
determinante de la producción de leche. Estudios de la década del ´90 sostienen que
las afecciones ocurridas en el parénquima mamario durante el desarrollo puberal de
terneras, afectan a futuras lactancias (Sejrsen, 1994); aunque falta sumar evidencias al
respecto.
Estudios realizados en terneras de entre 2 y 8 semanas de edad indicaron que
el aumento de energía y proteínas en la dieta indujo un incremento en la masa de
parénquima mamario y la síntesis de ADN y ARN, incrementándose además, la
velocidad de crecimiento corporal (Brown y col., 2005a; Brown y col., 2005b). En
concordancia con estos resultados también se ha encontrado que terneras sometidas a
dietas similares a la anterior, mostraron un incremento de la proliferación del epitelio
mamario al llegar a los 100 kg de peso (respecto a controles), aunque durante el resto
del crecimiento analizado (hasta los 350 kg) no se mantuvo la diferencia (Meyer y
col., 2006).
Los resultados de la relación parénquima/estroma del presente trabajo
demuestran que el tratamiento de las terneras con antiparasitarios ejerce un efecto
significativo sobre los porcentajes de parénquima mamario en comparación con los
animales que no recibieron tratamiento, observándose los menores porcentajes en
estos últimos. A pesar de esto no se detectaron diferencias a nivel puntual (en cada
uno de los tiempos), esto podría deberse a que el número de individuos analizados es
bajo y el test (Mann-Whitney) no lograría resolver diferencias a pesar de las amplias
85
disparidades en promedios entre tratadas y controles (con un máximo de 34,47 puntos
porcentuales de diferencia a las 20 semanas).
En relación a la proliferación celular, se observó una tendencia en el grupo de
terneras tratadas a presentar mayor cantidad de células epiteliales en proliferación en
comparación con las controles, si bien la misma no alcanzó el nivel de significancia
estadística establecido. Sin embargo, tratándose de parámetros de comportamiento no
normal, la tendencia mostrada resulta de importancia. Si bien en el presente estudio
no se evaluaron los índices de apoptosis de las células epiteliales y estromales
mamarias sería un dato complementario a considerar en futuros estudios, ya que
modificaciones en los porcentajes de apoptosis de las células epiteliales en los
animales que no recibieron tratamiento antiparasitario con respecto a los que sí lo
recibieron podrían afectar la tasa de recambio celular perturbando en consecuencia el
desarrollo mamario.
Estos resultados en su conjunto (proporción de parénquima y nivel de

proliferación celular) indicarían un menor desarrollo mamario debido a la presencia
aumentada de nematodos en las hembras que no recibieron tratamiento
antiparasitario.
5.4.2.2 Expresión de componentes del sistema de IGF
Experimentos previos realizados en ratones hembras knockout para IGF-1

demostraron un menor desarrollo mamario en estos animales (Hadsell y Bonnette,
2000; Kleinberg y col., 2000). Por otra parte, la biodisponibilidad de IGF-1 está
regulada por las proteínas ligadoras de IGF (IGFBPs) (6 proteínas en total) las cuales
transportan, secuestran e incrementan la vida media del factor (Akers y col., 2005).
Las mismas están presentes en el suero sanguíneo y en tejidos de vertebrados y su
concentración está diferencialmente regulada según el tejido, la edad y el sexo del
individuo (Cerro y col., 1993; Gatford y col., 1996; Collett-Solberg y Cohen, 1996).
Existe escasa información respecto a la acción exacta de IGF-1 y sus proteínas de
unión durante el desarrollo mamario prepuberal, pero está claro que ejercen un rol
significativo (Akers y col., 2005).
Estudios realizados en ratones púberes, demostraron una expresión variable de
IGFBP-2, -3, -4 y -5 en glándula mamaria y en suero con variaciones espacio
temporales (Allar y Wood, 2004; Kleinberg y col., 2009). En bovinos, se ha detectado
86
expresión de diversas IGFBPs en la glándula mamaria (Weber y col., 2000; Plath-
Gabler y col., 2001). Se ha demostrado que la expresión de las IGFBP-2 y -3 se
evidencia en el parénquima y estroma mamario, mientras que IGFBP-5 se expresa en
el estroma (Akers y col., 2005). En el presente trabajo, en concordancia con estos
hallazgos, se demostró que la localización específica de IGFBP-2 y -3 evaluada por
IHQ, se asoció tanto a componentes del estroma como del parénquima mamario.
La expresión variable y diferencial de las IGFBPs observada en la glándula
mamaria de terneras tratadas con antiparasitario versus controles sin tratamiento,
podría estar relacionada con su papel en la modulación del desarrollo tisular,
probablemente regulando la acción de IGF-1, aunque no se descartarían acciones per-
se de las mismas. Por ejemplo, en modelos experimentales de ratón se determinó que
un aumento de expresión hepática de IGFBP-2 durante el desarrollo fetal retarda el
crecimiento del mismo (Tapanainen y col., 1994). Por otro lado, en conejos
transgénicos que sobre-expresan IGF-1 humano en la glándula mamaria, no se
detectaron alteraciones fenotípicas en la misma pero sí se detectó un aumento
significativo de la expresión de IGFBP-2, este exceso podría explicarse como un
efecto amortiguador, por parte de la IGFBP-2, sobre IGF-1 (Wolf y col., 1997). En
concordancia con lo antes mencionado, se determinó que ratones transgénicos que
expresan IGF-1 modificado (con reducida afinidad por IGFBPs) mostraron severos
cambios en la glándula mamaria, como por ejemplo hiperplasia ductal e involución
deficiente luego de la lactancia (Hadsell y col., 1996). Por otra parte, en ratones
transgénicos que sobre-expresan IGFBP-2 se detectó una disminución significativa
del peso corporal, principalmente debida a una reducción del crecimiento del
esqueleto (Hoeflich y col., 1998).
La IGFBP-2 a nivel sérico ha sido asociada con diversas condiciones patológicas
en humanos, como diabetes mellitus, falla renal crónica, cirrosis hepática y ciertos
tipos de leucemia (Blum y col., 1993). Complementando esta información se ha
demostrado que IGFBP-2 aumenta en la deficiencia congénita de GH y durante la
anorexia nerviosa, mientras que disminuye en pacientes obesos (Barrios y col., 2000).
Por otro lado, en sueros provenientes de cerdos infectados con Sarcocystis
miescheriana se ha observado un aumento de las concentraciones IGFBP-1, -2 y -4
(Prickett y col., 1992).
En cuanto a las funciones modulatorias de IGF-1 por parte de IGFBP-3, se han
descripto efectos contrapuestos (estimulatorios e inhibitorios) dependiendo del diseño
87
experimental (Berry y col., 2001). Además, se han determinado características no
necesariamente relacionadas con su capacidad para modificar la acción de IGF-1
(Blum y Baumrucker, 2002), como por ejemplo su abundancia en secreciones
mamarias (leche) y su capacidad de interactuar con lactoferrina favoreciendo el
mecanismo de apoptosis. Estas interacciones ocurren probablemente durante el
desarrollo mamario (previo a la lactancia) y durante la involución post-lactancia
(Blum y Baumrucker, 2002).
Los resultados de este trabajo en cuanto a los porcentajes de inmunomarcación
para IGFBP-2, indicaron que las terneras controles presentaron valores mayores de
expresión de esta proteína de unión en comparación con las tratadas. Teniendo en
cuenta que existen evidencias de que esta proteína se encuentra ligada al desarrollo de
ciertas patologías, podría ser que la tendencia aquí observada sea causada por
elevadas cargas de parásitos nematodos. Tampoco se puede descartar un efecto
directo de la disminución de IGF-1 sobre la regulación de la síntesis de la proteína.
En cuanto a la IGFBP-3, a pesar de ser la más abundante a nivel sistémico, o
justamente a causa de ello, y tener síntesis endógena en la glándula mamaria bovina
(Weber y col., 2000), no se registraron diferencias en los porcentajes de
inmunomarcación para esta proteína de unión entre animales tratados con
antiparasitarios y controles en este trabajo de tesis.
5.4.2.3 Expresión del receptor de estrógeno alfa (ER-α)
Los esteroides ováricos se incrementan con el inicio de la pubertad, momento en

el que también comienza el crecimiento alométrico de la glándula mamaria. Se ha
establecido que, en particular, la elongación de los ductos es estimulada por estradiol
que actúa, a nivel glandular, sobre receptores de estrógenos (Korach y col., 1996;
Fendrick y col., 1998). De este último existen dos isoformas ER-α y ER-β; en el caso
de glándula mamaria bovina, la isoforma alfa (ER-α) es la que predomina en el tejido
(Schams y col., 2003; Connor y col., 2005; Meyer y col., 2007). Estudios realizados
en ratones, demostraron que los ER-α estromales son indispensables para el
crecimiento ductal epitelial (Cunha y col., 1997). Tanto los ER-α estromales como los
epiteliales, junto con los receptores de progesterona, son necesarios para el normal
desarrollo mamario (Mueller y col., 2002). Sin embargo, aunque presentes en estroma
88
y epitelio mamario de recién nacidos, los ER-α son insensibles a la administración de
estradiol no obteniéndose respuesta de proliferación epitelial con la aplicación
exógena de la hormona en esta etapa (Haslam, 1889; Imagawa y col., 1990; Curtis y
col., 1999).
Posteriormente, en el período inmediatamente anterior al inicio de la pubertad, la
expresión de ER-α aumenta significativamente en el estroma y la glándula mamaria
se torna sensible al estrógeno (Mueller y col., 2002).
Estudios realizados en glándula mamaria bovina utilizando inmunohistoquímica
para detectar ER-α, han demostrado que la expresión de este receptor se restringe al
parénquima de la glándula mamaria y está enteramente confinado al epitelio que
reviste los conductos, con infrecuente expresión en células estromales (Capuco y col.,
2002; Berry y col., 2003). Esta observación ha sido confirmada por RT-PCR
cuantitativa a partir de ARN aislado de células epiteliales y estromales obtenidas por
microdisección con láser (Capuco y col., 2002). Aproximadamente un tercio de las
células epiteliales expresan ER-α (Capuco y col., 2002) y esta expresión está
primeramente asociada a las células embebidas en el epitelio, es decir, entre las que se
localizan inmediatamente en contacto con la membrana basal (basales) y las que están
en contacto con la luz del conducto (luminales) (Capuco y Ellis, 2005). En el presente
trabajo, en coincidencia con los trabajos antes citados, la expresión del ER-α se
detectó en los núcleos de las células epiteliales que revisten los TDU,
fundamentalmente en las que se ubican en posición medio-basal.
La transcripción de ER-α aumenta hasta aproximadamente los 100 kg de peso (en
bovinos) (Meyer y col., 2007) paralelamente al aumento de los niveles de IGF-1, para
luego decrecer en momentos cercanos a la pubertad (Connor y col., 2005; Meyer y
col., 2007), cuando ya los valores del factor se estabilizan. En el presente trabajo, se
determinó que las hembras tratadas con antiparasitarios presentaron mayores
porcentajes de marcación de ER-α durante el desarrollo que las que no recibieron
tratamiento. Esto probablemente esté relacionado con el aumento de IGF-1, tanto
sistémico como biodisponible en la glándula de estas terneras, que regularía
positivamente la expresión del receptor (Imagawa y col 1990., Woodward y col.,
1998).
Se observó además, para el grupo tratado, una fluctuación temporal en la
marcación del receptor, presentándose un aumento a las 30 semanas de vida lo cual se
correspondió con un peso promedio de 135 kg y con un 20 % de terneras ciclantes.
89
Entre las 30 y 40 semanas de vida, el 100 % de las terneras de este grupo alcanzaron
la pubertad. En las semanas posteriores, la inmunomarcación de ER-α disminuyó
cuando ya todas las terneras eran púberes, este comportamiento es similar al
reportado en trabajos previos, (Connor y col., 2005; Meyer y col., 2007) difiriendo
aproximadamente en un 30 % respecto al peso descripto por estos autores, que no
mencionan el porcentaje de terneras que estaban ciclando Esta diferencia podría
asignarse justamente a la diferente etapa madurativa de los animales, que resulta en
diferentes entornos hormonales (principalmente estradiol) de la glándula. Además, la
naturaleza diferencial de los experimentos podría también explicarla, ya que las
mencionadas investigaciones se han realizado aplicando distintos planes nutricionales
a los grupos experimentales; y si bien, como antes se comentó, las parasitosis causan
consecuencias similares a la restricción alimentaria no necesariamente afectan cuali-
cuantitativamente del mismo modo.
Los porcentajes de marcación para ER-α correspondientes a animales controles
denotaron escasa variación a lo largo del tiempo, mostrando valores similares en
todas las edades analizadas. La escasa variación observada en la expresión del
receptor en estos animales podría estar relacionada con (además de los bajos niveles
de IGF-1 circulantes sumados al mayor secuestro del mismo por las mayores
concentraciones de IGFBP2) los momentos de muestreo elegidos. Si el aumento de
receptores fue más tardío que en el otro grupo, y de menor cuantía, es posible que no
se los haya encontrado en los momentos muestreados.
Debe considerarse que a pesar de las discrepancias promediales a nivel puntual
no se hallaron diferencias entre los grupos a ninguno de los tiempos analizados,
podría ser una posible causa de este fenómeno el bajo número de individuos
analizados y el tipo de test estadísticos que si bien permiten trabajar con estas
cantidades (3 por grupo experimental) sacrifican precisión en el proceso.
5.4.3 Conclusión general
Los resultados expuestos en el presente capítulo mostraron un menor desarrollo

mamario en las terneras sin tratamiento antiparasitario. Estos hallazgos podrían
deberse a la menor concentración sistémica de IGF-1 observada en este grupo de
animales, sumada a la expresión incrementada de IGFBP-2 en el tejido mamario que
podría interferir en el secuestro local de IGF-1, resultando en menor cantidad de
90
factor biodisponible en la glándula. Como se mencionó anteriormente, IGF-1 es un
factor mitogénico esencial para el crecimiento de los tejidos. Una menor
concentración de IGF-1 circulante durante la etapa prepuberal, etapa de activa
división celular en la glándula mamaria, resultaría en una menor activación de dicha
proliferación, por lo que estos resultados probablemente también puedan explicar la
diferencia significativa observada en la relación parénquima/estroma y la tendencia
diferencial en la proliferación celular registrada entre los animales tratados con
respecto a los controles. Por otra parte, se ha visto que el IGF-1 es, además, inductor
de receptores de estradiol lo que estaría de acuerdo con la observación de una menor
expresión de los mismos en la glándula mamaria de las terneras controles (que tienen
menor IGF-1). Esto a su vez redundaría en un menor efecto del estradiol,
(especialmente necesario para la mamogénesis en la etapa prepuberal) en el desarrollo
mamario de estos animales, lo que se sumaría al efecto anterior.
Si se consideran las significancias en todas las edades de muestreo analizadas
(p20, p30, p40, p70) de las variables parénquima/estroma, PCNA, IGFBP-2 y ER-α; se
puede observar que alrededor de la semana 20 de vida, aunque no se observe
significancia estadística, los valores absolutos en esta fecha son menores o iguales al
resto de los tiempos, señalando probablemente un especial retardo en el desarrollo de
la glándula mamaria por la presencia de parásitos nematodos en la etapas tempranas
del desarrollo, cuando la pubertad se está preparando. Probablemente el número de
individuos analizados limite las pruebas estadísticas a la hora de revelar diferencias
entre los grupos experimentales a tiempos particulares, ya que empleando un N bajo
el test se torna muy exigente al momento de hallar diferencias significativas, sobre
todo considerando el comportamiento no normal de estas variables.
Como se ha mencionado para otras especies, el período inicial de la vida
postnatal es especialmente sensible a la disminución de la ingesta energética.
Teniendo en cuenta este concepto, los resultados expuestos en este capítulo podrían
ser indicadores del redireccionamiento de la energía ingerida por el hospedador hacia
los parásitos, en desmedro del desarrollo mamario; situación que se tornaría más
evidente a las 20 semanas de vida.
91
6 Capítulo 6: Resumen de
conclusiones
92
En el presente trabajo de tesis se encontró que los nematodos
gastrointestinales afectan a animales adultos en parámetros productivos y
reproductivos mientras que los animales jóvenes (quienes presentan las mayores
cargas parasitarias) se vieron afectados en parámetros concernientes al desarrollo.
Entre las afecciones más destacadas en animales adultos con altas cargas parasitarias,
se encuentra la menor producción de leche y la menor concentración de hormonas
relacionadas con la lactogénesis (GH. IGF-1 y prolactina).
En cuanto a animales en desarrollo (terneras) la influencia de los nematodos

gastrointestinales se revela por medio del menor desarrollo corporal, menor
concentración sérica de IGF-1 y retraso puberal.
En el desarrollo particular de la glándula mamaria en individuos con tratamiento

antiparasitario se halló mayor proporción de parénquima mamario, indicios de mayor
proliferación celular, mayor inmunomarcación para receptores de estrógeno y menor
inmunomarcación para IFGBP-2.
Todas las afecciones aquí descriptas se relacionan fundamentalmente con el

redireccionamiento de recursos energéticos que se suceden en la relación hospedador-
parásito en donde el primero maximiza su eficiencia biológica mientras que el
hospedador asume los costos energéticos. Algunas de las observaciones son la
consecuencia inmediata del mismo, como los trastornos de desarrollo o productivos
observados, y otras forman parte de los mecanismos fisiológicos involucrados, como
las alteraciones endócrinas en hormonas, receptores y moduladores hormonales.
93
7 Bibliografía
94
Agrawal, A. K. y B. H. Shapiro, 2001, Intrinsic signals in the sexually dimorphic
circulating growth hormone profiles of the rat: Mol.Cell Endocrinol., v. 173, no. 1-2,
p. 167-181.
Akers, R. M., 2000, Selection for milk production from a lactation biology
viewpoint: J.Dairy Sci., v. 83, no. 5, p. 1151-1158.
Akers, R. M., S. E. Ellis y S. D. Berry, 2005, Ovarian and IGF-I axis control of
mammary development in prepubertal heifers: Domest.Anim Endocrinol., v. 29, no.
2, p. 259-267.
Allar, M. A. y T. L. Wood, 2004, Expression of the insulin-like growth factor

binding proteins during postnatal development of the murine mammary gland:
Endocrinol, v. 145, no. 5, p. 2467-2477.
Allen, J. E. y R. M. Maizels, 2011, Diversity and dialogue in immunity to helminths:

Nat.Rev.Immunol., v. 11, no. 6, p. 375-388.
Allen, J. E. y T. A. Wynn, 2011, Evolution of Th2 immunity: a rapid repair response

to tissue destructive pathogens: PLoS.Pathog., v. 7, no. 5, p. e1002003.
Ambrustolo, R. R., G. M. Bulman, E. J. Segura, B. Beckwith y J. Guerrero, 1990,

Helminth control and its relation to parameters of breeding fitness in replacement
heifers in the humid pampas of Argentina.: Veterinaria Argentina, v. 7, p. 92-98.
Amour, J. y C. Osbourn , 1982, Bovine Ostertagiasis: A review and annotated

bibliography. Miscellaneous publications N 7.Commonwealth Institute of
Parasitology, Engalnd..
Anthony, R. M., L. I. Rutitzky, J. F. Urban, Jr., M. J. Stadecker y W. C. Gause, 2007,

Protective immune mechanisms in helminth infection: Nat.Rev.Immunol., v. 7, no.
12, p. 975-987.
Aronica, S. M. y B. S. Katzenellenbogen, 1993, Stimulation of estrogen receptor-

mediated transcription and alteration in the phosphorylation state of the rat uterine
estrogen receptor by estrogen, cyclic adenosine monophosphate, and insulin-like
growth factor-I: Mol.Endocrinol., v. 7, no. 6, p. 743-752.
Artis, D. y col., 2004, RELMbeta/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector

molecule in the gastrointestinal tract: Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, v. 101, no. 37, p.
13596-13600.
Ballagh, K., N. Korn, L. Riggs, S. L. Pratt, F. Dessauge, R. M. Akers y S. Ellis,

2008, Hot topic: Prepubertal ovariectomy alters the development of myoepithelial
cells in the bovine mammary gland: J.Dairy Sci., v. 91, no. 8, p. 2992-2995.
Barrios, V., M. Buno, J. Pozo, M. T. Munoz y J. Argente, 2000, Insulin-like growth

factor-binding protein-2 levels in pediatric patients with growth hormone deficiency,
eating disorders and acute lymphoblastic leukemia: Horm.Res., v. 53, no. 5, p. 221-
227.
95
Bartella, V., M. P. De, R. Malaguarnera, A. Belfiore y M. Maggiolini, 2012, New
advances on the functional cross-talk between insulin-like growth factor-I and
estrogen signaling in cancer: Cell Signal..
Barger, I. A., 1993, Influence of sex and reproductive status on susceptibility of

ruminants to nematode parasitism: Int.J.Parasitol., v. 23, no. 4, p. 463-469.
Bauman, D. E., 1999, Bovine somatotropin and lactation: from basic science to
commercial application: Domest.Anim Endocrinol., v. 17, no. 2-3, p. 101-116.
Becu-Villalobos, D., I. Garcia-Tornadu, G. Shroeder, E. E. Salado, G. Gagliostro, C.

Delavaud, Y. Chilliard y I. M. Lacau-Mengido, 2007, Effect of fat supplementation
on leptin, insulin-like growth factor I, growth hormone, and insulin in cattle:
Can.J.Vet.Res., v. 71, no. 3, p. 218-225.
Begon, M., C. R. Townsend y J. L. Harper, 2006, Parasitism and Disease.,

ECOLOGY. From Individuals to Ecosystems.: Cydney, Blackwell Publishing Ltd,
ed, p. 347-380.
Beleut, M., R. D. Rajaram, M. Caikovski, A. Ayyanan, D. Germano, Y. Choi, P.

Schneider y C. Brisken, 2010, Two distinct mechanisms underlie progesterone-
induced proliferation in the mammary gland: Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A, v. 107, no.
7, p. 2989-2994.
Berry, S. D., P. M. Jobst, S. E. Ellis, R. D. Howard, A. V. Capuco y R. M. Akers,

2003, Mammary epithelial proliferation and estrogen receptor alpha expression in
prepubertal heifers: effects of ovariectomy and growth hormone: J.Dairy Sci., v. 86,
no. 6, p. 2098-2105.
Berry, S. D., T. B. McFadden, R. E. Pearson y R. M. Akers, 2001, A local increase in

the mammary IGF-1: IGFBP-3 ratio mediates the mammogenic effects of estrogen
and growth hormone: Domest.Anim Endocrinol., v. 21, no. 1, p. 39-53.
Biondani, C. A. y P. E. Steffan, 1988, Efecto de las parasitosis gastrointestinales

sobre la producción láctea en rodeos lecheros: Vet.Arg., v. 42, p. 115-127.
Blanchard, J. L., A. M. Gallina y R. B. Wescott, 1986, Pathologic changes in lambs

with Ostertagia circumcincta infections associated with decreased infectivity of
Haemonchus contortus: Am.J.Vet.Res., v. 47, no. 2, p. 309-314.
Blum, J. W. y C. R. Baumrucker, 2002, Colostral and milk insulin-like growth

factors and related substances: mammary gland and neonatal (intestinal and
systemic) targets: Domest.Anim Endocrinol., v. 23, no. 1-2, p. 101-110.
Blum, W. F., N. Horn, J. Kratzsch, J. O. Jorgensen, A. Juul, D. Teale, K. Mohnike y

M. B. Ranke, 1993, Clinical studies of IGFBP-2 by radioimmunoassay: Growth
Regul., v. 3, no. 1, p. 100-104.
Bocchinfuso, W. P. y K. S. Korach, 1997, Mammary gland development and

tumorigenesis in estrogen receptor knockout mice:
J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v. 2, no. 4, p. 323-334.
96
Bonnette, S. G. y D. L. Hadsell, 2001, Targeted disruption of the IGF-I receptor gene
decreases cellular proliferation in mammary terminal end buds: Endocrinol, v. 142,
no. 11, p. 4937-4945.
Brown, E. G., M. J. Vandehaar, K. M. Daniels, J. S. Liesman, L. T. Chapin, J. W.

Forrest, R. M. Akers, R. E. Pearson y M. S. Nielsen, 2005a, Effect of increasing
energy and protein intake on mammary development in heifer calves: J.Dairy Sci., v.
88, no. 2, p. 595-603.
Brown, E. G., M. J. Vandehaar, K. M. Daniels, J. S. Liesman, L. T. Chapin, D. H.

Keisler y M. S. Nielsen, 2005b, Effect of increasing energy and protein intake on
body growth and carcass composition of heifer calves: J.Dairy Sci., v. 88, no. 2, p.
585-594.
Buonomo, F. C. y C. A. Baile, 1990, The neurophysiological regulation of growth

hormone secretion: Domest.Anim Endocrinol., v. 7, no. 4, p. 435-450.
Capron, M., G. A. Soussi, M. Morita, M. J. Truong, L. Prin, J. P. Kinet y A. Capron,

1995, Eosinophils: from low- to high-affinity immunoglobulin E receptors: Allergy,
v. 50, no. 25 Suppl, p. 20-23.
Capuco, A. V., J. J. Smith, D. R. Waldo y C. E. Jr. Rexroad, 1995, Influence of

prepubertal dietary regimen on mammary growth of Holstein heifers: J.Dairy Sci., v.
78, p. 2709-2725.
Capuco, A. V. y S. Ellis, 2005, Bovine mammary progenitor cells: current concepts

and future directions: J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v. 10, no. 1, p. 5-15.
Capuco, A. V., S. Ellis, D. L. Wood, R. M. Akers y W. Garrett, 2002, Postnatal

mammary ductal growth: three-dimensional imaging of cell proliferation, effects of
estrogen treatment, and expression of steroid receptors in prepubertal calves: Tissue
Cell, v. 34, no. 3, p. 143-154.
Cavestany, D. y col., 2009a, Effect of prepartum energetic supplementation on

productive and reproductive characteristics, and metabolic and hormonal profiles in
dairy cows under grazing conditions: Reprod.Domest.Anim, v. 44, no. 4, p. 663-671.
Cavestany, D., C. Vinoles, M. A. Crowe, A. La Manna y A. Mendoza, 2009b, Effect

of prepartum diet on postpartum ovarian activity in Holstein cows in a pasture-based
dairy system: Anim Reprod.Sci., v. 114, no. 1-3, p. 1-13.
Cerro, J. A., A. Grewal, T. L. Wood y J. E. Pintar, 1993, Tissue-specific expression

of the insulin-like growth factor binding protein (IGFBP) mRNAs in mouse and rat
development: Regul.Pept., v. 48, no. 1-2, p. 189-198.
Chagas, L. M., P. J. Gore, G. Graham, K. A. Macdonald y D. Blache, 2008, Effect of

restricted feeding and monopropylene glycol postpartum on metabolic hormones and
postpartum anestrus in grazing dairy heifers: J.Dairy Sci., v. 91, no. 5, p. 1822-1833.
97
Charlier, J., E. Claerebout, L. Duchateau y J. Vercruysse, 2005, A survey to
determine relationships between bulk tank milk antibodies against Ostertagia
ostertagi and milk production parameters: Vet.Parasitol., v. 129, no. 1-2, p. 67-75.
Charlier, J., L. Duchateau, E. Claerebout y J. Vercruysse, 2007, Predicting milk-

production responses after an autumn treatment of pastured dairy herds with
eprinomectin: Vet.Parasitol., v. 143, no. 3-4, p. 322-328.
Charlier, J., J. Hoglund, G. Samson-Himmelstjerna, P. Dorny y J. Vercruysse, 2009,

Gastrointestinal nematode infections in adult dairy cattle: impact on production,
diagnosis and control: Vet.Parasitol., v. 164, no. 1, p. 70-79.
Chilliard, Y., C. Delavaud y M. Bonnet, 2005, Leptin expression in ruminants:

Nutritional and physiological regulations in relation with energy metabolism:
Domest.Anim Endocrinol., v. 29, no. 1, p. 3-22.
Chowen, J. A., L. M. Garcia-Segura, S. Gonzalez-Parra y J. Argente, 1996, Sex

steroid effects on the development and functioning of the growth hormone axis: Cell
Mol.Neurobiol., v. 16, no. 3, p. 297-310.
Claerebout, E. y J. Vercruysse, 2000, The immune response and the evaluation of

acquired immunity against gastrointestinal nematodes in cattle: a review:
Parasitology, v. 120 Suppl, p. S25-S42.
Clayton, D. H., P. L. Lee, D. M. Tompkins y E. D. Brodie III, 1999, Reciprocal

Natural Selection on Host-Parasite Phenotypes: Am.Nat., v. 154, no. 3, p. 261-270.
Cliffe, L. J., N. E. Humphreys, T. E. Lane, C. S. Potten, C. Booth y R. K. Grencis,

2005, Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite
expulsion: Science, v. 308, no. 5727, p. 1463-1465.
Coles, G. C., F. Jackson, W. E. Pomroy, R. K. Prichard, G. Samson-Himmelstjerna,

A. Silvestre, M. A. Taylor y J. Vercruysse, 2006, The detection of anthelmintic
resistance in nematodes of veterinary importance: Vet.Parasitol., v. 136, no. 3-4, p.
167-185.
Connor, E. E., D. L. Wood, T. S. Sonstegard, A. F. da Mota, G. L. Bennett, J. L.

Williams y A. V. Capuco, 2005, Chromosomal mapping and quantitative analysis of
estrogen-related receptor alpha-1, estrogen receptors alpha and beta and progesterone
receptor in the bovine mammary gland: Journal of Endocrinology, v. 185, no. 3, p.
593-603.
Collett-Solberg, P. F. y P. Cohen, 1996, The role of the insulin-like growth factor

binding proteins and the IGFBP proteases in modulating IGF action:
Endocrinol.Metab Clin.North Am., v. 25, no. 3, p. 591-614.
Coop, R. L. y I. Kyriazakis, 1999, Nutrition-parasite interaction: Vet.Parasitol., v. 84,

p. 187-204.
Coop, R. L., A. R. Sykes y K. W. Angus, 1977, The effect of a daily intake of

Ostertagia circumcincta larvae on body weight, food intake and concentration of
serum constituents in sheep: Res.Vet.Sci., v. 23, no. 1, p. 76-83.
98
Cunha, G. R., P. Young, Y. K. Hom, P. S. Cooke, J. A. Taylor y D. B. Lubahn, 1997,
Elucidation of a role for stromal steroid hormone receptors in mammary gland
growth and development using tissue recombinants:
Curtis, S. W., J. Clark, P. Myers y K. S. Korach, 1999, Disruption of estrogen

signaling does not prevent progesterone action in the estrogen receptor alpha
knockout mouse uterus: Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, v. 96, no. 7, p. 3646-3651.
Cusi, K. y R. Defronzo, 2000, Recombinant human insulin-like growth factor I

treatment for 1 week improves metabolic control in type 2 diabetes by ameliorating
hepatic and muscle insulin resistance: J.Clin.Endocrinol.Metab, v. 85, no. 9, p. 3077-
3084.
Dallard, B. E., C. Baravalle, C. Andreotti, H. H. Ortega, V. Neder y L. F. Calvinho,

2011, Intramammary inoculation of Panax ginseng extract in cows at drying off
enhances early mammary involution: J.Dairy Res., v. 78, no. 1, p. 63-71.
Dallard, B. E., H. H. Ortega, I. A. Iguzquiza, N. R. Salvetti, O. A. Quaino y L. F.

Calvinho, 2010, The effect of a single intramammary infusion of a biological
response modifier in cows at drying off: Vet.Res.Commun., v. 34, no. 6, p. 519-532.
Dallard, B. E., H. H. Ortega, J. A. Lorente y G. Romano, 2005, Immunolocalization

and expression of insulin-like growth factor I (IGF-I) in the ovine mammary gland
during mammogenesis, lactation and involution. Small Ruminant Res., v. 58, p. 1-
11.
Dallard, B. E., V. Ruffino, S. Heffel y L. F. Calvinho, 2007, Effect of a biological

response modifier on expression of growth factors and cellular proliferation at drying
off: J.Dairy Sci., v. 90, no. 5, p. 2229-2240.
Dessauge, F., L. Finot, S. Wiart, J. M. Aubry y S. E. Ellis, 2009, Effects of

ovariectomy in prepubertal goats: J.Physiol Pharmacol., v. 60 Suppl 3, p. 127-133.
Diaz-Torga, G. S., M. E. Mejia, A. Gonzalez-Iglesias, N. Formia, D. Becu-Villalobos

y I. M. Lacau-Mengido, 2001, Metabolic cues for puberty onset in free grazing
Holstein heifers naturally infected with nematodes: Theriogenology, v. 56, no. 1, p.
111-122.
Dobos, R. C., Nandra K. S., Riley K., Fulkerson W. J., Lean I. J. y Kellawuay R. C.
2000. The effect of dietary protein level during the pre-pubertal period of grown of
mammary gland development and subsequent milk production in Fresian heifers.
Livestock production science 63, 235-243.
Dobson, R. J. y E. H. Barnes, 1995, Interaction between Ostertagia circumcincta and

Haemonchus contortus infection in young lambs: Int.J.Parasitol., v. 25, no. 4, p. 495-
501.
99
Durnberger, H. y K. Kratochwil, 1980, Specificity of tissue interaction and origin of
mesenchymal cells in the androgen response of the embryonic mammary gland: Cell,
v. 19, no. 2, p. 465-471.
Elsasser, T. H., T. S. Rumsey y A. C. Hammond, 1989, Influence of diet on basal

and growth hormone-stimulated plasma concentrations of IGF-I in beef cattle:
J.Anim.Sci., v. 67, no. 1, p. 128-141.
Eming, S. A., T. Krieg y J. M. Davidson, 2007, Inflammation in wound repair:

molecular and cellular mechanisms: J.Invest Dermatol., v. 127, no. 3, p. 514-525.
Entrocasso, C. M., 1988, Epidemiology and control of bovine ostertagiasis in South

America: Vet.Parasitol., v. 27, no. 1-2, p. 59-65.
Entrocasso, C. M. y C. Fiel, 1986, Caracterización de las enfermedades

parasitariasen sistemas de producción de carne en la República Argentina.: Libro de
Resúmenes de Disertaciones.2° Simposio Internacional de Actualización
Parasitaria.Buenos Aires., p. 11-16.
Entrocasso, C. M., J. J. Parkins, J. Armour, K. Bairden y P. N. McWilliam, 1986,

Metabolism and growth in housed calves given a morantel sustained release bolus
and exposed to natural trichostrongyle infection: Res.Vet.Sci., v. 40, no. 1, p. 65-75.
Fainboin, L., y J. Geffner, 2011, Respuesta inmunitaria frente a las infestacciones

parasitarias. en e Editodial médica panamericana ed., Introducción a la inmunología
humana.: Buenos Aires, p. 425-436.
Fallon, P. G. y N. E. Mangan, 2007, Suppression of TH2-type allergic reactions by

helminth infection: Nat.Rev.Immunol., v. 7, no. 3, p. 220-230.
Farinati de Piccinni, Z., A. Galanterik, S. Malkischer de Marpes y S. Quiroga de

Lasala, 1980, Normalización y control de calidad del radioinmunoanálisis., en C
Libertun ed., Radioinmunoanalisis. Fundamentos y Aplicaciones.: Buenos Aires,
Libreros López Editores, p. 79-107.
Farmer, C., D. Petitclerc, M. T. Sorensen, M. Vignola y J. Y. Dourmad, 2004,

Impacts of dietary protein level and feed restriction during prepuberty on
mammogenesis in gilts: J.Anim Sci., v. 82, no. 8, p. 2343-2351.
Fendrick, J. L., A. M. Raafat y S. Z. Haslam, 1998, Mammary gland growth and

development from the postnatal period to postmenopause: ovarian steroid receptor
ontogeny and regulation in the mouse: J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v. 3, no.
1, p. 7-22.
Ferreyra, DA., CA. Fiel, PE. Steffan y F. Gonzalez, 2002, Dinamica estacional y
diaria en las pasturas de poblaciones de nematodes Trichostrongylideos de bovinos.
RIA.Revista de Investigaciones Agropecuarias., v. 31, p. 25-38.
Feuermann, Y., S. J. Mabjeesh y A. Shamay, 2004, Leptin affects prolactin action on

milk protein and fat synthesis in the bovine mammary gland: J.Dairy Sci., v. 87, no.
9, p. 2941-2946.
100
Fiel, C. y col., 2001, Resistencia antihelmíntica en bovinos: causas, diagnóstico y
profilaxis.: Vet.Argnt., v. 18, p. 21-33.
Fiel, C., C. Steffan y A. Almada, 1990, Epidemiology of Tricostrongyle infection in

grazing cattle of the humid Pampa (Argentina) with special reference to Ostertagia
ostertagi, en WHD Leaning and J Guerrero eds., Epidemiology of bovine parasites in
the Americas: Lawrenceville, Veterinary Learning Systems Co., p. 15-24.
Fiel, C., P. Steffan y Ferreyra D., 2005, Manual para el diagnóstico de nematodes en
bovinos. Bayer.División Sanidad Animal de Bayer Argentina S.A., p. 1-58.
Fiel, C. y P. E. Steffan, 1994, Guía de procedimientos para el diagnóstico de

nematodes en bovinos.: Cuadernillo técnico editado por Lab.Hoechst Argentina S.A,
p. 1-14.
Finkelman, F. D., T. Shea-Donohue, S. C. Morris, L. Gildea, R. Strait, K. B.

Madden, L. Schopf y J. F. Urban, Jr., 2004, Interleukin-4- and interleukin-13-
mediated host protection against intestinal nematode parasites: Immunol.Rev., v.
201, p. 139-155.
Fleming, J. y Z. Fabry, 2007, The hygiene hypothesis and multiple sclerosis:

Ann.Neurol., v. 61, no. 2, p. 85-89.
Flint, D. J. y col., 2005, Insulin-like growth factor binding proteins initiate cell death
and extracellular matrix remodeling in the mammary gland: Domest.Anim
Endocrinol., v. 29, no. 2, p. 274-282.
Flint, D. J., M. Boutinaud, C. B. Whitelaw, G. J. Allan y A. F. Kolb, 2006, Prolactin

inhibits cell loss and decreases matrix metalloproteinase expression in the involuting
mouse mammary gland but fails to prevent cell loss in the mammary glands of mice
expressing IGFBP-5 as a mammary transgene: J.Mol.Endocrinol., v. 36, no. 3, p.
435-448.
Fox, M. T., D. Gerrelli, S. R. Pitt, D. E. Jacobs, M. Gill y D. L. Gale, 1989,

Ostertagia ostertagi infection in the calf: effects of a trickle challenge on appetite,
digestibility, rate of passage of digesta and liveweight gain: Res.Vet.Sci., v. 47, no.
3, p. 294-298.
Frystyk, J., C. Skjaerbaek, B. Dinesen y H. Orskov, 1994, Free insulin-like growth

factors (IGF-I and IGF-II) in human serum: FEBS Lett., v. 348, no. 2, p. 185-191.
Gartner, L., y J. L. Hiatt, 1995, Introduccion a la histologia y tecnicas histologicas

basicas , en Panamericana S.A. ed., Atlas de histología.: Buenos Aires, p. 5-25.
Gasbarre, L. C., E. A. Leighton y D. Bryant, 1996, Reliability of a single fecal egg

per gram determination as a measure of individual and herd values for
trichostrongyle nematodes of cattle: Am.J.Vet.Res., v. 57, no. 2, p. 168-171.
Gaston, K. J., 1996, What is biodiversity?, en Blackwell Science Ltd ed.,

Biodiversity: a biology of numbers and difference.: Oxford, U.K., p. 1-9.
101
Gatford, K. L. y col., 1996, Sexual dimorphism of circulating somatotropin, insulin-
like growth factor I and II, insulin-like growth factor binding proteins, and insulin:
relationships to growth rate and carcass characteristics in growing lambs: J.Anim
Sci., v. 74, no. 6, p. 1314-1325.
Ghizzoni, L. y G. Mastorakos, 2003, Interactions of leptin, GH, and cortisol in

normal children: Ann.N Y.Acad.Sci., v. 997, p. 56-63.
Gibb, M. J., C. A. Huckle y A. B. Forbes, 2005, Effects of sequential treatments with

eprinomectin on performance and grazing behaviour in dairy cattle under daily-
paddock stocking management: Vet.Parasitol., v. 133, no. 1, p. 79-90.
Glauber, C. E., 2007, El manejo de la vaquillona de reposición en rodeo lechero, una

introducción. Veterinaria Argentina, 24(234):274-281.: Veterinaria Argentina, v. 24,
no. 234, p. 274-281.
Google earth, y Inav/Geosistemas SRL, 2012a, 25 de mayo. 35° 32´17´´S 60°

23´18´´ O. Elevación 56 m. Altura ojo 86 km.
Google earth, y Inav/Geosistemas SRL, 2012b, Escuela M. C. y M. L. Inchausti. 35°

36´ 38´´ S 60° 32´36´´ O. Elevación 74 m. Altura ojo 2 km.
Grainger, J. R. y col., 2010, Helminth secretions induce de novo T cell Foxp3

expression and regulatory function through the TGF-beta pathway: J.Exp.Med., v.
207, no. 11, p. 2331-2341.
Granger, A. L., W. E. Wyatt, W. M. Craig, D. L. Thompson, Jr. y F. G. Hembry,

1989, Effects of breed and wintering diet on growth, puberty and plasma
concentrations of growth hormone and insulin-like growth factor 1 in heifers:
Domest.Anim Endocrinol., v. 6, no. 3, p. 253-262.
Hadsell, D. L., N. M. Greenberg, J. M. Fligger, C. R. Baumrucker y J. M. Rosen,

1996, Targeted expression of des(1-3) human insulin-like growth factor I in
transgenic mice influences mammary gland development and IGF-binding protein
expression: Endocrinology, v. 137, no. 1, p. 321-330.
Hadsell, D. L. y S. G. Bonnette, 2000, IGF and insulin action in the mammary gland:
lessons from transgenic and knockout models: J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v.
5, no. 1, p. 19-30.
Haldane, J. B. S., 1949, Disease and evolution: La Ricerca Scientifica, v. 19, p. 68-
76.
Harris, N. y W. C. Gause, 2011, To B or not to B: B cells and the Th2-type immune

response to helminths: Trends Immunol., v. 32, no. 2, p. 80-88.
Haslam, S. Z., 1989, The ontogeny of mouse mammary gland responsiveness to

ovarian steroid hormones: Endocrinology, v. 125, no. 5, p. 2766-2772.
Hasnain, S. Z. y col., 2011, Muc5ac: a critical component mediating the rejection of

enteric nematodes: J.Exp.Med., v. 208, no. 5, p. 893-900.
102
Hawkins, J. A., 1993, Economic benefits of parasite control in cattle: Vet.Parasitol.,
v. 46, no. 1-4, p. 159-173.
Hennighausen, L. y G. W. Robinson, 1998, Think globally, act locally: the making of

a mouse mammary gland: Genes Dev., v. 12, no. 4, p. 449-455.
Henriksen, S. A. y H. Korsholm, 1983, A method for culture and recovery of

gastrointestinal strongyle larvae: Nord.Vet.Med., v. 35, no. 11, p. 429-430.
Herbert, D. R. y col., 2009, Intestinal epithelial cell secretion of RELM-beta protects

against gastrointestinal worm infection: J.Exp.Med., v. 206, no. 13, p. 2947-2957.
Hoeflich, A., P. Schmidt, J. Foll, O. Rottmann, M. M. Weber, H. J. Kolb, F. Pirchner

y E. Wolf, 1998, Altered growth of mice divergently selected for body weight is
associated with complex changes in the growth hormone/insulin-like growth factor
system: Growth Horm.IGF.Res., v. 8, no. 2, p. 113-123.
Holmes, P. H., 1985, Pathogenesis of trichostrongylosis: Vet.Parasitol., v. 18, p. 89-

101.
Hornick, J. L., C. Van Eenaeme, O. Gerard, I. Dufrasne y L. Istasse, 2000,

Mechanisms of reduced and compensatory growth: Domest.Anim Endocrinol., v. 19,
no. 2, p. 121-132.
Hosking, B. C., T. G. Watson y D. M. Leathwick, 1996, Multigeneric resistance to

oxfendazole by nematodes in cattle: Vet.Rec., v. 138, no. 3, p. 67-68.
Hovey, R. C., H. W. Davey, D. D. S. Mackenzie y T. B. McFadden, 1998, Ontogeny

and epithelial-stromal interactions regulate IGF expression in the ovine mammary
gland: Mol.Cell.Endocrinol., v. 136, no. 2, p. 139-144.
Hovey, R. C., T. B. McFadden y R. M. Akers, 1999, Regulation of mammary gland

growth and morphogenesis by the mammary fat pad: a species comparison:
Hovey, R. C. y J. F. Trott, 2004, Morphogenesis of mammary gland development:

Adv.Exp.Med.Biol., v. 554, p. 219-228.
Hovey, R. C., J. F. Trott y B. K. Vonderhaar, 2002, Establishing a framework for the

functional mammary gland: from endocrinology to morphology:
Imagawa, W., G. K. Bandyopadhyay y S. Nandi, 1990, Regulation of mammary

epithelial cell growth in mice and rats: Endocr.Rev., v. 11, no. 4, p. 494-523.
Johnson, T. L., B. A. Fujimoto, R. Jimenez-Flores y D. G. Peterson, 2010, Growth

hormone alters lipid composition and increases the abundance of casein and
lactalbumin mRNA in the MAC-T cell line: J.Dairy Res, v. 77, no. 2, p. 199-204.
Jones, J. I. y D. R. Clemmons, 1995, Insulin-like growth factors and their binding

proteins: biological actions: Endocr.Rev., v. 16, no. 1, p. 3-34.
103
Kapur, S., H. Tamada, S. K. Dey y G. K. Andrews, 1992, Expression of insulin-like
growth factor-I (IGF-I) and its receptor in the peri-implantation mouse uterus, and
cell-specific regulation of IGF-I gene expression by estradiol and progesterone:
Biol.Reprod., v. 46, no. 2, p. 208-219.
Kenyon, F. y col., 2009, The role of targeted selective treatments in the development
of refugia-based approaches to the control of gastrointestinal nematodes of small
ruminants: Vet.Parasitol., v. 164, no. 1, p. 3-11.
Kleinberg, D. L., T. L. Wood, P. A. Furth y A. V. Lee, 2009, Growth hormone and

insulin-like growth factor-I in the transition from normal mammary development to
preneoplastic mammary lesions: Endocr.Rev., v. 30, no. 1, p. 51-74.
Kleinberg, D. L., M. Feldman y W. Ruan, 2000, IGF-I: an essential factor in terminal

end bud formation and ductal morphogenesis: J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v.
5, no. 1, p. 7-17.
Klotz, D. M., S. C. Hewitt, P. Ciana, M. Raviscioni, J. K. Lindzey, J. Foley, A.

Maggi, R. P. DiAugustine y K. S. Korach, 2002, Requirement of estrogen receptor-
alpha in insulin-like growth factor-1 (IGF-1)-induced uterine responses and in vivo
evidence for IGF-1/estrogen receptor cross-talk: J.Biol.Chem., v. 277, no. 10, p.
8531-8537.
Klotz, D. M., S. C. Hewitt, K. S. Korach y R. P. DiAugustine, 2000, Activation of a

uterine insulin-like growth factor I signaling pathway by clinical and environmental
estrogens: requirement of estrogen receptor-alpha: Endocrinology, v. 141, no. 9, p.
3430-3439.
Korach, K. S. y col., 1996, Estrogen receptor gene disruption: molecular

characterization and experimental and clinical phenotypes: Recent Prog.Horm.Res.,
v. 51, p. 159-186.
Lacau-Mengido, I. M., M. E. Mejía, G. S. Díaz-Torga, A. González-Iglesias, N.

Formía, C. Libertun y D. Becú-Villalobos, 2000, Endocrine studies in ivermectin-
treated heifers from birth to puberty: J.Anim.Sci., v. 78, p. 817-824.
Lammers, B. P., A. J. Heinrichs y R. S. Kensinger, 1999, The effects of accelerated

growth rates and estrogen implants in prepubertal Holstein heifers on estimates of
mammary development and subsequent reproduction and milk production: J.Dairy
Sci., v. 82, no. 8, p. 1753-1764.
Larson, R. L., L. R. Corah, M. F. Spire y R. C. Cochran, 1995, Effect of treatment

with ivermectin on reproductive performance of yearling beef heifers:
Theriogenology, v. 44, p. 189-197.
Levine, N. D., 1963, Weather, climate and the bionomics of rumiant nematode
larvae.: Ad.Vet.Sci., v. 8, p. 215-261.
Li, R. W., M. J. Meyer, C. P. Van Tassell, T. S. Sonstegard, E. E. Connor, M. E. Van

Amburgh, Y. R. Boisclair y A. V. Capuco, 2006, Identification of estrogen-
responsive genes in the parenchyma and fat pad of the bovine mammary gland by
microarray analysis: Physiol Genomics, v. 27, no. 1, p. 42-53.
104
Licoff,N, Diab, S, Perri, A F, Mejia, M E, Formía, N, Becu-Villalobos, Dy Lacau-
Mengido, I M. Mammary biopsies in Prepubertal Heifers. Histological studies of the
developmental gland. Effect of anthelmintic treatment. Biocell 33[1], A40. 2009.
Ref Type: Abstract
Lydon, J. P., F. J. DeMayo, C. R. Funk, S. K. Mani, A. R. Hughes, C. A.

Montgomery, Jr., G. Shyamala, O. M. Conneely y B. W. O'Malley, 1995, Mice
lacking progesterone receptor exhibit pleiotropic reproductive abnormalities: Genes
Dev., v. 9, no. 18, p. 2266-2278.
Lydon, J. P., L. Sivaraman y O. M. Conneely, 2000, A reappraisal of progesterone

action in the mammary gland: J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v. 5, no. 3, p. 325-
338.
Martinet, J., y L. M. Houdebine, 1993, Glande mammaire, mammogenése facteurs de

croissance lactogenése. en HLMe Martinet J. ed., Biologie de la lactacion.: Paris, p.
3-30.
Masso-Welch, P. A., K. M. Darcy, N. C. Stangle-Castor y M. M. Ip, 2000, A

developmental atlas of rat mammary gland histology: J
Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v. 5, no. 2, p. 165-185.
McCoy, K. D. y col., 2008, Polyclonal and specific antibodies mediate protective

immunity against enteric helminth infection: Cell Host.Microbe, v. 4, no. 4, p. 362-
373.
Mejía, M. E., B. M. Fernández-Igartúa, E. E. Schmidt y J. Cabaret, 2003,

Multispecies and multiple anthelmintic resistance on cattle nematodes in a farm in
Argentina: the beginning of high resistance?: Vet.Res., v. 34, p. 461-467.
Mejia, M. E., A. Gonzalez-Iglesias, G. Diaz-Torga, P. Villafañe, N. Formía, C.

Libertun, D. Becu-Villalobos y I. M. Lacau-Mengido, 1999, Effect of continuous
ivermectin treatment from birth to puberty on growth and reproduction in dairy
heifers.: J.Anim.Sci., v. 77, p. 1329-1334.
Mejía, M. E., A. González-Iglesias, G. S. Díaz-Torga, P. Villafañe, N. Formía, C.

Libertun, D. Becú-Villalobos y I. M. Lacau-Mengido, 1999, Effects of continuous
ivermectin treatment from birth to puberty on growth and reproduction in dairy
heifers: J.Anim.Sci., v. 77, no. 6, p. 1329-1334.
Mejia, M. E., A. F. Perri, M. M. Miglierina, N. Formia, D. Becu-Villalobos y I. M.

Lacau-Mengido, 2009, Effect of anthelmintics on reproductive performance and
first-lactation culling rate in Holstein heifers: Vet.Rec., v. 165, no. 25, p. 743-746.
Mertz, K. J., M. B. Hildreth y W. B. Epperson, 2005, Assessment of the effect of

gastrointestinal nematode infestation on weight gain in grazing beef cattle:
J.Am.Vet.Med.Assoc., v. 226, no. 5, p. 779-783.
Meyer, M. J., A. V. Capuco, Y. R. Boisclair y M. E. Van Amburgh, 2006, Estrogen-

dependent responses of the mammary fat pad in prepubertal dairy heifers:
J.Endocrinol., v. 190, no. 3, p. 819-827.
105
Meyer, M. J., R. P. Rhoads, A. V. Capuco, E. E. Connor, A. Hummel, Y. R.
Boisclair y M. E. Van Amburgh, 2007, Ontogenic and nutritional regulation of
steroid receptor and IGF-I transcript abundance in the prepubertal heifer mammary
gland: J.Endocrinol., v. 195, no. 1, p. 59-66.
Mohrs, M., K. Shinkai, K. Mohrs y R. M. Locksley, 2001, Analysis of type 2

immunity in vivo with a bicistronic IL-4 reporter: Immunity., v. 15, no. 2, p. 303-
311.
Mueller, S. O., J. A. Clark, P. H. Myers y K. S. Korach, 2002, Mammary gland

development in adult mice requires epithelial and stromal estrogen receptor alpha:
Endocrinol, v. 143, no. 6, p. 2357-2365.
Mukhina, S., D. Liu, K. Guo, M. Raccurt, S. Borges-Bendris, H. C. Mertani y P. E.

Lobie, 2006, Autocrine growth hormone prevents lactogenic differentiation of mouse
mammary epithelial cells: Endocrinology, v. 147, no. 4, p. 1819-1829.
Murphy, L. C., H. Dotzlaw, M. S. Wong, T. Miller, B. Mrockowski, Y. Gong y L. J.

Murphy, 1990, Epidermal growth factor: receptor and ligand expression in human
breast cancer: Semin.Cancer Biol., v. 1, no. 5, p. 305-315.
Nodtvedt, A., I. Dohoo, J. Sanchez, G. Conboy, L. DesCoteaux y G. Keefe, 2002,

Increase in milk yield following eprinomectin treatment at calving in pastured dairy
cattle: Vet.Parasitol., v. 105, no. 3, p. 191-206.
Oakes, S. R., R. L. Rogers, M. J. Naylor y C. J. Ormandy, 2008, Prolactin regulation

of mammary gland development: J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v. 13, no. 1, p.
13-28.
Ortega, H. H., N. R. Salvetti, P. Amable, B. E. Dallard, C. Baravalle, C. G. Barbeito

y E. J. Gimeno, 2007, Intraovarian localization of growth factors in induced cystic
ovaries in rats: Anat.Histol.Embryol., v. 36, no. 2, p. 94-102.
Ortíz-Avila, T., 2008, Caractarización de sistemas de manejo de recursos naturales.,

en Astier M., Masera O., and Galván-Miyoshi Y. eds., Evaluación de
sustentabilidad.: Valencia, España, SIAE; CIGA; ECOSUR; CIEco; UNAM; GIRA;
Mundiprensa; Fundación Instituto de Agricultura Ecológica y Sustentable, p. 59-71.
Ozkan, E. E., 2011, Plasma and tissue insulin-like growth factor-I receptor (IGF-IR)
as a prognostic marker for prostate cancer and anti-IGF-IR agents as novel
therapeutic strategy for refractory cases: a review: Mol.Cell Endocrinol., v. 344, no.
1-2, p. 1-24.
Pedernera, M., S. C. Garcia, A. Horagadoga, I. Barchia y W. J. Fulkerson, 2008,

Energy balance and reproduction on dairy cows fed to achieve low or high milk
production on a pasture-based system: J.Dairy Sci., v. 91, no. 10, p. 3896-3907.
Pedersen, A. B. y A. Fenton, 2007, Emphasizing the ecology in parasite community

ecology: Trends Ecol.Evol., v. 22, no. 3, p. 133-139.
106
Petitclerc, D., L. T. Chapin y H. A. Tucker, 1984, Carcass composition and
mammary development responses to photoperiod and plane of nutrition in Holstein
heifers: J.Anim Sci., v. 58, no. 4, p. 913-919.
Plath-Gabler, A., C. Gabler, F. Sinowatz, B. Berisha y D. Schams, 2001, The

expression of the IGF family and GH receptor in the bovine mammary gland:
J.Endocrinol., v. 168, no. 1, p. 39-48.
Prickett, M. D., A. M. Latimer, R. H. McCusker, G. J. Hausman y A. K. Prestwood,

1992, Alterations of serum insulin-like growth factor-I (IGF-I) and IGF-binding
proteins (IGFBPs) in swine infected with the protozoan parasite Sarcocystis
miescheriana: Domest.Anim Endocrinol., v. 9, no. 4, p. 285-296.
Purup, S., K. Sejrsen, J. Foldager y R. M. Akers, 1993, Effect of exogenous bovine

growth hormone and ovariectomy on prepubertal mammary growth, serum hormones
and acute in-vitro proliferative response of mammary explants from Holstein heifers:
J.Endocrinol., v. 139, p. 19-26.
Purvis, H. T. y J. C. Whittier, 1996, Effects of ionophore feeding and anthelmintic

administration on age and weight at puberty in spring-born beef heifers: J.Anim.Sci.,
v. 74, no. 4, p. 736-744.
Quiroz, R. H., 1990, Nematelmintos y acantocéfalos. en ed Limusa ed.,

Parasitología y enfermedades parasitarias de animáles domesticos. Mexico D. F., p.
367-645.
Reinecke, R. K., C. M. Bruckner y I. L. De Villiers, 1980, Studies on Haemonchus

contortus. III. Titration of Trichostrongylus axei and explusion of H. contortus:
Onderstepoort J.Vet.Res., v. 47, no. 1, p. 35-44.
Reinecke, R. K., I. L. De Villiers y G. Joubert, 1982, The effect of predosing calves

with Trichostrongylus axei on subsequent challenge with Haemonchus placei:
Onderstepoort J.Vet.Res., v. 49, no. 3, p. 159-161.
Renaville, R., M. Hammadi y D. Portetelle, 2002, Role of the somatotropic axis in

the mammalian metabolism: Domest.Anim Endocrinol., v. 23, no. 1-2, p. 351-360.
Richards, R. G., D. M. Klotz, M. P. Walker y R. P. Diaugustine, 2004, Mammary

gland branching morphogenesis is diminished in mice with a deficiency of insulin-
like growth factor-I (IGF-I), but not in mice with a liver-specific deletion of IGF-I:
Endocrinology, v. 145, no. 7, p. 3106-3110.
Richert, M. M. y T. L. Wood, 1999, The insulin-like growth factors (IGF) and IGF
type I receptor during postnatal growth of the murine mammary gland: sites of
messenger ribonucleic acid expression and potential functions: Endocrinology, v.
140, no. 1, p. 454-461.
Rosenfeld, R. G., H. Pham, P. Cohen, P. Fielder, S. E. Gargosky, H. Muller, L.

Nonoshita y Y. Oh, 1994, Insulin-like growth factor binding proteins and their
regulation: Acta Paediatr.Suppl, v. 399, p. 154-158.
107
Ruan, W., V. Catanese, R. Wieczorek, M. Feldman y D. L. Kleinberg, 1995,
Estradiol enhances the stimulatory effect of insulin-like growth factor-I (IGF-I) on
mammary development and growth hormone-induced IGF-I messenger ribonucleic
acid: Endocrinology, v. 136, no. 3, p. 1296-1302.
Ruan, W. y D. L. Kleinberg, 1999, Insulin-like growth factor I is essential for

terminal end bud formation and ductal morphogenesis during mammary
development: Endocrinol, v. 140, no. 11, p. 5075-5081.
Ruan, W., M. E. Monaco y D. L. Kleinberg, 2005, Progesterone stimulates mammary

gland ductal morphogenesis by synergizing with and enhancing insulin-like growth
factor-I action: Endocrinol, v. 146, no. 3, p. 1170-1178.
Ruan, W., C. B. Newman y D. L. Kleinberg, 1992, Intact and amino-terminally

shortened forms of insulin-like growth factor I induce mammary gland
differentiation and development: Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, v. 89, no. 22, p. 10872-
10876.
Ryan, W. G., R. J. Crawford, Jr., S. J. Gross y D. H. Wallace, 1997, Assessment of

parasite control and weight gain after use of an ivermectin sustained-release bolus in
calves: J.Am.Vet.Med.Assoc., v. 211, no. 6, p. 754-756.
Saenz, S. A., Taylor B.C. y Artis D., 2008, Welcome to the neighborhood: epithelial
cell-derived cytokines license innate and adaptive immune responses at mucosal
sites.: Immunol.Rev., v. 226, p. 172-190.
Sanchez, J. y I. Dohoo, 2002, A bulk tank milk survey of Ostertagia ostertagi

antibodies in dairy herds in Prince Edward Island and their relationship with herd
management factors and milk yield: Can.Vet.J., v. 43, no. 6, p. 454-459.
Sans, F. X., 2007, La diversidad de los agroecosistemas.: Ecosistemas, v. 16, p. 44-

49.
Satoguina, J. S., E. Weyand, J. Larbi y A. Hoerauf, 2005, T regulatory-1 cells induce

IgG4 production by B cells: role of IL-10: J.Immunol., v. 174, no. 8, p. 4718-4726.
Savage, M. O., S. Scommegna, P. V. Carroll, J. T. Ho, J. P. Monson, G. M. Besser y

A. B. Grossman, 2002, Growth in disorders of adrenal hyperfunction: Horm.Res., v.
58 Suppl 1, p. 39-43.
Schallig, H. D., 2000, Immunological responses of sheep to Haemonchus contortus:

Parasitology, v. 120 Suppl, p. S63-S72.
Schams, D., S. Kohlenberg, W. Amselgruber, B. Berisha, M. W. Pfaffl y F.

Sinowatz, 2003, Expression and localisation of oestrogen and progesterone receptors
in the bovine mammary gland during development, function and involution: Journal
of Endocrinology, v. 177, no. 2, p. 305-317.
Sejrsen, K., 1994, Relationships between nutrition, puberty and mammary

development in cattle: Proc.Nutr.Soc., v. 53, no. 1, p. 103-111.
108
Sejrsen, K., S. Purup, M. Vestergaard y J. Foldager, 2000, High body weight gain
and reduced bovine mammary growth: physiological implications for milk yield
potential: Domest.Anim.Endocrinol., v. 19, p. 93-104.
Servicio Meteorológico Nacional (SMN), 2007a, Diciembre 2007: Departamento

Agrometeorología: .Secretaría de planeamiento.Ministerio de Defensa.República
Argentina., v. 12, p. 1-26.
Servicio Meteorológico Nacional (SMN), 2007b, Septiembre 2007: Departamento

Agrometeorología: Servicio Meteorológico Nacional (SMN).Secretaría de
planeamiento.Ministerio de Defensa., v. 9, p. 1-31.
Servicio Meteorológico Nacional (SMN), 2008a, Enero 2008: Departamento

Agrometeorología: Secretaría de planeamiento.Ministerio de Defensa.República
Servicio Meteorológico Nacional (SMN), 2008b, Febrero 2008. Departamento

Agrometeorología: .Secretaría de planeamiento.Ministerio de Defensa.República
Shi, H. Y., J. P. Lydon y M. Zhang, 2004, Hormonal defect in maspin heterozygous

mice reveals a role of progesterone in pubertal ductal development: Mol.Endocrinol.,
v. 18, no. 9, p. 2196-2207.
Silberstein, G. B., 2001, Postnatal mammary gland morphogenesis:

Microsc.Res.Tech., v. 52, no. 2, p. 155-162.
Silberstein, G. B., K. Van Horn, G. Shyamala y C. W. Daniel, 1994, Essential role of

endogenous estrogen in directly stimulating mammary growth demonstrated by
implants containing pure antiestrogens: Endocrinol, v. 134, no. 1, p. 84-90.
Simpson, H. V., 2000, Pathophysiology of abomasal parasitism: is the host or

parasite responsible?: Vet.J., v. 160, no. 3, p. 177-191.
Sithole, F., I. Dohoo, K. Leslie, L. DesCoteaux, S. Godden, J. Campbell, H. Stryhn y

J. Sanchez, 2005, Effect of eprinomectin treatment at calving on milk production in
dairy herds with limited outdoor exposure: J.Dairy Sci., v. 88, no. 3, p. 929-937.
Sordillo, L. M., G. A. Contreras y S. L. Aitken, 2009, Metabolic factors affecting the

inflammatory response of periparturient dairy cows: Anim Health Res.Rev., v. 10,
no. 1, p. 53-63.
Sorensen, M. T., J. V. Norgaard, P. K. Theil, M. Vestergaard y K. Sejrsen, 2006, Cell

turnover and activity in mammary tissue during lactation and the dry period in dairy
cows: J.Dairy Sci., v. 89, no. 12, p. 4632-4639.
Steel, J. W., W. O. ones y L. E. A. Symons, 1982, Effects of a concurrent infection

of Trichostrongylus colubriformis on the productivity and physiological and
metabolic response of lambs infected with Oatertagia circumsincta.:
Aust.J.Agric.Res., v. 33, p. 131-140.
109
Steffan, P. O. y C. Fiel, 1986, Bioecología de los nematodos gastrointestinales. II
supervalencia y variación estacional de las larvas en las pasturas; III la materia fecal
como reservorio de larvas.: Prod.Anim., v. 1, p. 139-140.
Stromberg, B. E. y L. C. Gasbarre, 2006, Gastrointestinal nematode control programs

with an emphasis on cattle: Vet.Clin.North Am.Food Anim Pract., v. 22, no. 3, p.
543-565.
Suarez, V. H., 1990a, Inhibition patterns and seasonal availability of nematodes for
beef cattle grazing on Argentina's Western Pampas: Int.J.Parasitol., v. 20, p. 1031.
Suarez, V. H., 1990b, Variación estacional de las poblaciones de helmintos parásitos

de bovinos en sistemas de invernada de la región semiárida y subhúmeda pampeana.
Rev.Med.Vet., v. 71, p. 6-19.
Suarez, V. H., 1994, Los parásitos internos del bovino en la region semiarida y
subhúmeda pampeana: En Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, v. 47, p.
5-27.
Suarez, V. H., D. O. Bedotti, S. Larrea, M. R. Busetti y C. A. Garriz, 1991, Effect of

an integrated control programme with ivermectinon growth, carcasse composition
and nematode infection of beef cattle in Argentina's western pampas.: Research in
Veterinary Science, v. 50, no. 2, p. 195-199.
Suarez, V. H. y R. L. Lorenzo, 2000, Ecology of the free living stages of cattle

nematodes during summer contamination in Argentina Western Pampas: Parasite, v.
7, no. 4, p. 255-261.
Tapanainen, P. J., P. Bang, K. Wilson, T. G. Unterman, H. J. Vreman y R. G.

Rosenfeld, 1994, Maternal hypoxia as a model for intrauterine growth retardation:
effects on insulin-like growth factors and their binding proteins: Pediatr.Res., v. 36,
no. 2, p. 152-158.
Tolleson, D. R., G. E. Carstens, T. H. Welsh, Jr., P. D. Teel, O. F. Strey, M. T.

Longnecker, S. D. Prince y K. K. Banik, 2012, Plane of nutrition by tick burden
interaction in cattle: Effect on growth and metabolism: J.Anim Sci.
Tolleson, D. R., P. D. Teel, J. W. Stuth, O. F. Strey, T. H. Welsh, Jr., G. E. Carstens,

M. T. Longnecker, K. K. Banik y S. D. Prince, 2010, Effects of a lone star tick
(Amblyomma americanum) burden on performance and metabolic indicators in
growing beef steers: Vet.Parasitol., v. 173, no. 1-2, p. 99-106.
Topper, Y. J. y C. S. Freeman, 1980, Multiple hormone interactions in the

developmental biology of the mammary gland: Physiol Rev., v. 60, no. 4, p. 1049-
1106.
Torres-Acosta, J. F., D. E. Jacobs, A. Aguilar-Caballero, C. Sandoval-Castro, M.

May-Martinez y L. A. Cob-Galera, 2004, The effect of supplementary feeding on the
resilience and resistance of browsing Criollo kids against natural gastrointestinal
nematode infections during the rainy season in tropical Mexico: Vet.Parasitol., v.
124, no. 3-4, p. 217-238.
110
Tucker, H. A., 1981, Physiological control of mammary growth, lactogenesis, and
lactation: J.Dairy Sci., v. 64, no. 6, p. 1403-1421.
Turner, C. W., H.Yamamoto y L.Ruppert., 1956, The experimental induction of

growth of the cow's udder and the initiation of milk secretion.: J.Dairy Sci., v. 39, p.
1717-1723.
Ullrich, A. y col., 1985, Human insulin receptor and its relationship to the tyrosine
kinase family of oncogenes: Nature, v. 313, no. 6005, p. 756-761.
Ullrich, A. y col., 1986, Insulin-like growth factor I receptor primary structure:

comparison with insulin receptor suggests structural determinants that define
functional specificity: EMBO J., v. 5, no. 10, p. 2503-2512.
Walden, P. D., W. Ruan, M. Feldman y D. L. Kleinberg, 1998, Evidence that the

mammary fat pad mediates the action of growth hormone in mammary gland
development: Endocrinol, v. 139, no. 2, p. 659-662.
Waters, M. J., H. N. Hoang, D. P. Fairlie, R. A. Pelekanos y R. J. Brown, 2006, New

insights into growth hormone action: J.Mol.Endocrinol., v. 36, no. 1, p. 1-7.
Weber, M. S., S. Purup, M. Vestergaard, R. M. Akers y K. Sejrsen, 2000, Regulation

of local synthesis of insulin-like growth factor-I and binding proteins in mammary
tissue: J.Dairy Sci., v. 83, no. 1, p. 30-37.
Whitlock, B. K., J. A. Daniel, R. R. Wilborn, T. H. Elsasser, J. A. Carroll y J. L.

Sartin, 2008, Comparative aspects of the endotoxin- and cytokine-induced endocrine
cascade influencing neuroendocrine control of growth and reproduction in farm
animals: Reprod.Domest.Anim, v. 43 Suppl 2, p. 317-323.
Widmaier, E. P., 1992, Metabolic feedback in mammalian endocrine system:

Horm.Metab.Res., v. 24, p. 147-153.
Williams, J. C., 1983, Internal parasites of catle: Cuadernillo de divulagación editado

por American Hoechst Corporation..
Williams, P., C. Humphries, D. Vane-Wright y K. Gaston, 1996, Value in

biodiversity, ecological services and consensus: Trends Ecol.Evol., v. 11, no. 9, p.
385.
Wilson, E. O., 1988, The current state of biological diversity, en EO Wilson ed.,
Biodiversity: Washington, DC, National Academy of Sciences/Smithsonian
Institution., p. 1-497.
Wilson, M. S., M. D. Taylor, A. Balic, C. A. Finney, J. R. Lamb y R. M. Maizels,

2005, Suppression of allergic airway inflammation by helminth-induced regulatory T
cells: J.Exp.Med., v. 202, no. 9, p. 1199-1212.
Wolf, E., P. M. Jehle, M. M. Weber, H. Sauerwein, A. Daxenberger, B. H. Breier, U.

Besenfelder, L. Frenyo y G. Brem, 1997, Human insulin-like growth factor I (IGF-I)
produced in the mammary glands of transgenic rabbits: yield, receptor binding,
111
mitogenic activity, and effects on IGF-binding proteins: Endocrinology, v. 138, no.
1, p. 307-313.
Woods, A. y C. R. Ellis , 1994, Laboratory Histopathology: A Complete Reference.

London.
Woodward, T. L., J. W. Xie y S. Z. Haslam, 1998, The role of mammary stroma in

modulating the proliferative response to ovarian hormones in the normal mammary
gland: J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia., v. 3, no. 2, p. 117-131.
Yakar, S., H. Kim, H. Zhao, Y. Toyoshima, P. Pennisi, O. Gavrilova y D. LeRoith,

2005, The growth hormone-insulin like growth factor axis revisited: lessons from
IGF-1 and IGF-1 receptor gene targeting: Pediatr.Nephrol., v. 20, no. 3, p. 251-254.
Yamamoto, H. y C. W. Tuner, 1956, Experimental mammary gland growth in rabbits

by estrogen and progesterone: Proc.Soc.Exp.Biol.Med., v. 92, no. 1, p. 130-132.
Yambayamba, E. S., M. A. Price y G. R. Foxcroft, 1996, Hormonal status, metabolic

changes, and resting metabolic rate in beef heifers undergoing compensatory growth:
J.Anim Sci., v. 74, no. 1, p. 57-69.
Zajac, A. M., J. W. Hansen, W. D. Whittier y D. E. Eversole, 1991, The effect of

parasite control on fertility in beef heifers: Vet.Parasitol., v. 40, no. 3-4, p. 281-291.
Zhou, Y., R. M. Akers y H. Jiang, 2008, Growth hormone can induce expression of
four major milk protein genes in transfected MAC-T cells: J.Dairy Sci., v. 91, no. 1,
p. 100-108.
112

Tesis

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Tesis

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Tesis

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL

FACULTAD DE BIOQUÍMICA Y CIENCIAS

Tesis para la obtención del título de

CONTROL HORMONAL DE LA PRODUCCIÓN DE LECHE EN

Autor: Adrián F. Perri

Facultad de Ciencias Veterinarias

A mi familia, a mi padre, a mi madre, a mi abuela y a mi hermana, que son quienes

A la gente de la escuela Inchausti….

A mis queridos compañeros y amigos del laboratorio de Biología Celular y Molecular

A mis compañeras del IBYME, por brindarme su colaboración, dirección y amistad,

A Luís Calvinho quien tuvo una excelente disposición en mi búsqueda de lugar de

A Cesar Fiel por contribuir con mi formación parasitológica.

A mi país que posibilitó mi formación y crecimiento profesional por medio de sus

Índice de figuras III

Índice de tablas VII

1 Capítulo 1: Introducción _________________________________________ 1

Figura 2. A) La referencia amarilla marca la posición de la escuela M. C. y M. L. 18

Figura 5. A) Huevo de nematodo. B) Cámara de Mac Master conteniendo dilución

Figura 6. Densidad de larvas por kg de materia seca respecto del tiempo. 28

Figura 7. Densidad de larvas por kg de materia seca respecto del tiempo. 29

Figura 9. Positividad al HPG. Representa el porcentaje de animales que 30

Figura 10. Diversidad de géneros de nematodos presentes en cultivo de materia 31

Figura 12. Abundancia relativa de géneros larvales presentes en pasturas del 32

Figura 17. Tiempos de lactancia de animales negativos y positivos al HPG. Mes - 48

Figura 19. Toma de biopsia en una ternera Holstein. A) Introducción de la aguja y 59

Figura 20. A) Biopsia completa de glándula mamaria bovina (X100). B) Unidad

Figura 21: A) Muestra control negativo de la técnica de inmunohistoquímica, la 65

Figura 25. Edad promedio de entrada en la pubertad en semanas de los grupos 69

Figura 26. % de terneras púberes de los grupos tratados con antihelminticos 70

Figura 27. Biopsias de glándula mamaria de terneras tratadas con atiparasitarios y 71

Figura 28. Porcentaje de parénquima en biopsias de glándula mamaria en animales

Figura 30. Porcentaje de área inmunomarcada con anti-PCNA asociado a

Figura 31. Inmunomarcación para IGFBP-2, en terneras tratadas con

Figura 32. Porcentaje de inmunomarcación con anti-IGFBP-2 a las 20, 30, 40 y 70 77

Figura 33. Inmunomarcación para IGFBP-3, en terneras tratadas con

Figura 34. Porcentaje de inmunomarcación con anti-IGFBP-3 a las 20, 30 y 40 78

Figura 35. Inmunomarcación para receptor de estrógeno α, en terneras tratadas con

Figura 36. Porcentaje de área inmunomarcada con anti-ER- asociado a

Tabla 3. Anticuerpos primarios y secundarios utilizados, sus diluciones de

Tabla 4. Significancias calculadas para todas las variables analizadas. pT:

1.1 Parasitosis gastrointestinales en bovinos

1.1.1 Ciclo Biológico de nematodos gastrointestinales

El ciclo de los nematodos gastrointestinales de bovinos es de tipo directo dado

1.1.2 Ecología de la forma de vida libre

La eclosión de los huevos es favorecida por condiciones de alta humedad y

1.1.3 Interacciones dentro del hospedador

1.1.4 Relación inmunitaria hospedador-helmintos

El sistema inmune de los vertebrados tiene una amplísima capacidad de reacción

Investigaciones recientes de la relación hospedador-parásito han mostrado que la

El proceso de desarrollo de la glándula mamaria comienza en la embriogénesis

Tanto en ratones como en bovinos, el desarrollo comprendido entre el nacimiento

1.2.1 Regulación endocrina del desarrollo mamario

Los diferentes estadios de crecimiento, diferenciación, y también actividad

1.2.2 Estrógeno y su receptor

Clásicamente se ha demostrado que el estradiol es el principal responsable del

Se conoce, desde hace tiempo, que los receptores de estradiol se sintetizan

1.2.3 Hormona de crecimiento (GH), su receptor y hormona

La hormona GH es otro participante fundamental de la regulación de la

1.2.4 Síntesis de IGF-1, su receptor y acción del factor