FOSFORILACION OXIDATIVA Lenninger

CAPÍTULO 19
Fosforilación oxidativa
Hay herramientas, disponibles on-line, para el auto-estudio que le ayudarán a practicar lo que han aprendido y que reforzarán
los conceptos de! capítulo. Vaya a www.macmillanlearning.com/LehningerBiochemistry7e
19.1 La cadena respiratoria mitocondrial 708- final con un gran potencial de reducción (oxígeno
molecular, O,) (2) La energía libre puesta a disposición
19.2 Síntesis
de ATP 724
por este flujo de electrones “cuesta abajo” (exergóni-
19.3 Regulación
de la fosforilación oxidativa 736 co) está acoplada al transporte “cuesta arriba” de pro-
tones a través de una membrana impermeable a los
19.4 Las mitocondrias
en la termogénesis,
protones, conservándose la energía libre de oxidación
síntesis de esteroides
y apoptosis 740
de los combustibles en forma de potencial electroquí-
19.5 Genes mitocondriales: mico transmembrana. (3) El flujo transmembrana de
su origen y efectos de las mutaciones 741 protones a favor de su gradiente de concentración
mediante canales proteicos específicos proporciona la
energía libre para la síntesis de ATP, catalizada por un
a fosforilación oxidativa es la 64
metabolismo productor de enerfíz
en los organismos aeróbicos. Todos” 108 das Cop
S ADO mato reducióo O) Transportadores electrónicos
(combustible) cede e—. bombean H* al exterior
a medida
dativos en la degradación de glúcidos, grasas y aminoá- que los electrones fluyen hacia el O).
cidos convergen en esta etapa final de la respiración
a Transportadores electrónicos
celular en la que la energía de la oxidación impulsa la Membrahh (cadena respiratoria) H- H+
síntesis de ATP. La fosforilación oxidativa da cuenta de mitocondrial HH H* ae Hs H
la mayor parte del ATP sintetizado por la mayoría de interna P á y + H-
organismos no fotosintéticos en la mayor parte de cir-
m+* E + y
cunstancias. En eucariotas, ls fosforilación oxidativa
o A a mm: pa ai rt / YN
tiene lugar en las mitocondrias en donde intervienen + _ Dadordee” » (Aceptordee")_ +
enormes complejos proteicos incrustados en las mem- reducido ys
branas mitocondriales. La ruta de la síntesis del ATP en +7 0 Energía del flojo de e” conservada | 5,
mitocondrias ha sido un reto fascinante para los bioquí- - enforma de potencial electroquímico.
micos durante la mayor parte del siglo XX.
+ e 2 +
Nuestros conocimientos actuales sobre la síntesis H+ = ri q?
del ATP en la mitocondria se basan en la teoría, introdu- + KT 4 a - +
cida por Peter Mitchell en 1961, según la cual las dife- HI 4 E SA , hs: >, .
rencias transmembrana en la concentración de proto- H+ + > : +
nes son el reservorio de la energía obtenida a partir de H H+ yu+ H+ H*
las reacciones biológicas de oxidación. Esta teoría H+ H+ H+ H+ H+ H+
quimiosmótica está actualmente aceptada como uno O) La ATP sintasa utiliza el potencial
de los grandes principios unificadores de la biología del electroquímico
para sintetizar ATP.
siglo XX, Proporciona un conocimiento de los procesos
de la fosforilación oxidativa y de la fotofosforilación en FIGURA 19-1 Mecanismo quimiosmótico
de la síntesis de ATP en
plantas así como sobre transducciones de energía apa- mitocondrias. Los electrones se desplazan espontáneamente a través de
rentemente tan dispares como son el transporte activo una cadena de transportadores ligados a membrana, la cadena respira-
a través de membranas y el movimiento de los flagelos toria, impulsados por el elevado potencial de reducción del oxígeno y los
bacterianos. potenciales de reducción relativamente bajos de los diversos sustratos
El mecanismo de la fosforilación oxidativa tiene reducidos (combustibles) que experimentan oxidación en la mitocondría.
El flujo de electrones crea un potencial electroquímico por el movimiento
tres componentes definitorios (Fig. 19-1). (1) Los
transrmembrana de protones y cargas positivas. Este potencial electro-
electrones fluyen desde dadores electrónicos (sustra-
químico impulsa la síntesis de ATP por una ATP sintasa ligada a mem-
tos oxidables) a través de una cadena de transportado-
brana que es tundamentalmente similar en mitocondrias y cloroplastos
res ligados a membrana hasta un aceptor electrónico
así como en bacterias y arquebacterias,
707
708 Fosforilación oxidativa
complejo proteico asociado a la membrana (la ATP sin- interna aloja los componentes de la cadena respiratoria
tasa) que acopla el flujo de protones a la fosforilación y la ATP simtasa.
del ADP. La matriz mitocondrial, el espacio acotado por la
El capítulo empieza con la descripción de los com- membrana imterna, contiene el complejo de la piruvato
ponentes de la cadena de transferencia electrónica (la deshidrogenasa y los enzimas del ciclo del ácido cítrico,
cadena respiratoria) y su organización en forma de de la ruta de la $-oxidación de los ácidos grasos y de las
grandes complejos funcionales en la membrana mito- rutas de oxidación de los aminoácidos, es decir, todas
condrial interna, la ruta del flujo electrónico a través de las rutas de oxidación de combustibles excepto la glucó-
estos complejos y el movimiento de protones asociado a lisis que tiene lugar en el citosol. Debido a la permeabi-
dicho flujo. Pasaremos revista a continuación al extraor- lidad selectiva de la membrana mitocondrial interna,
dinario complejo enzimático que, mediante “catálisis separa los intermediarios y enzimas de las rutas meta-
rotacional”, captura la energía del flujo de protones en bólicas citosólicas de los de los procesos metabólicos
forma de ATP. Continuaremos con los mecanismos que se producen en la matriz. Sin embargo, el piruvato,
reguladores que coordinan la fosforilación oxidativa con los ácidos grasos y los aminoácidos o sus derivados
las muchas rutas catabólicas en las que los combustibles a-ceto son llevados por transportadores específicos a la
son oxidados. matriz para poder acceder a la maquinaria del ciclo del
El papel metabólico de la mitocondria es tan crítico ácido cítrico. El ADP y el P, son transportados específi-
para la función celular, y también para el organismo, camente al interior de la matriz al mismo tiempo que el
que aparecen graves problemas médicos como conse- recién sintetizado ATP es transportado al exterior. El
cuencia de defectos en la función mitocondrial, Las mejor inventario actual de proteínas en las mitocondrias
mitocondrias son básicas para las funciones neuronal y de mamíferos señala unas 1.100 de las que al menos 300
muscular así como para la regulación del metabolismo tienen funciones por ahora desconocidas.
energético y del peso corporal del organismo entero. Se La representación de una mitocondria en forma de
acepta que las enfermedades neurodegenerativas, así habichuela de la Figura 19-2 es una simplificación, debi-
como el cáncer, la diabetes y la obesidad son un posible da en parte a estudios iniciales en los que se observaban
resultado de una función mitocondrial defectuosa, y al micorsopio electrónico secciones delgadas de células.
existe una teoría del envejecimiento basada en la pér- Las imágenes tridimensionales obtenidas, ya sea por
dida gradual de la integridad mitocondrial. La produc- reconstrucción de secciones seriadas o por microscopia
ción de ATP no es la única función mitocondrial impor- confocal, revelan importantes variaciones en tamaño y
tante; las mitocondrias también intervienen en la ter- forma. En células vivas teñidas con colorantes fluores-
mogénesis, la síntesis de esteroides y la ptosis ántes OS de las mitocondrias, se ve una gran
(muerte celular programada). El descubri (ae)
estos variados e importantes papeles de la mitocondri
ha estimulado muchas investigaciones actuales sobre la Los tejidos con una gran demanda dle metabolismo
bioquímica de este orgánulo. Discutiremos estas fun- aeróbico (cerebro, músculos esquelético y cardíaco y
ciones diversas de las mitocondrias y las consecuencias ojo, por ejemplo) contienen muchos centenares o milla-
de una función mitocondrial defectuosa en los seres res de mitocondrias por célula y, en general, las mitocon-
humanos. drias de células con actividad metabólica elevada tienen
más crestas, y más densamente empaquetadas (Fig.
19-2c, d). Durante el crecimiento celular y la división, las
19.1 La cadena respiratoria mitocondrial mitocondrias, al igual que las bacterias, se dividen por
El descubrimiento de Eugene fisión (como las bacterias) y en algunas circunstancias
Kennedy y Albert Lehninger las mitocondrias individuales se fusionana para formar
en 1948 de que la mitocondria estructuras más grandes y extensas. Condiciones que
es el sitio en donde se realiza producen estrés, tales como la presencia de inhibidores
la fosforilación oxidativa en de la transferencia electrónica o mutaciones en un trans-
los eucariotas marcó el inicio portador electrónico, desencadenan la fisión mitocon-
de la fase moderna de los drial y, a veces, la mitofagia (degradación de las mito-
estudios enzimológicos sobre condrias yreciclado de los amiknoácidos, nucleótidos y
las transducciones biológicas lípidos liberados. Cuando desaparece el estrés, mitocon-
de energía. Las mitocondrias, drias pequeñas y cortas se fusionan para formar orgánu-
al igual que las bacterias los largos, delgados y tubulares.
Albert L. Lehninger, 1917-1986 gram-negativas, tienen dos
[Fuente: Alan Mason Chesney membranas (Fig. 19-2a). La Los electrones son canalizados hacia trans portadores
Medical Archives of the Johns membrana mitocondrial
universates de electrones
Hopkins Medical Institutions.] externa es fácilmente per-
meable a pequeñas moléculas La fosforilación oxidativa empieza con la entrada de los
(M_<5.000) e iones, que se mueven libremente a través electrones en la serie de transportadores electrónicos
de canales transmembrana compuestos por una familia denominada cadena respiratoria. La mayor parte de
de proteínas integrales de membrana llamadas porinas. dichos electrones provienen de la acción de deshidrogena-
La membrana interna es impermeable a la mayoría de sas que captan electrones de vías catabólicas y los canali-
moléculas pequeñas e iones, incluido el protón (H*); las zan hacia aceptores universales de electrones: nucleótidos
únicas especies que cruzan esta membrana lo hacen a de nicotinamida (NAD* o NADP”») o nucleótidos de flavina
través de transportadores específicos. La membrana (EMN o FAD) (véanse las Figs. 13-24, 13-27).
19.1 La cadena respiratoria mitocondrial 709
(a)
ATP sintasa
(AN)
impermeable a la mayoría
de moléculas pequeñas e
iones, incluido el H*
Contiene:
* Transportadores electró-
nicos respiratorios
(Complejos )-1V)
+ ADP-ATP translocasa
* ATP sintasa (FF)
Y * Otros transportadores
A. de membrana
Contiene:
» Complejo de la
piruvato
deshidrogenasa
e Enzimas de!
ciclo del ácido
cítrico
* Enzimas de la
B-oxidación de
ácidos grasos
Canales de porina + ATP, ADP, P, Mg?*, Ca?*, K*
* Muchos intermediarios metabólicos

solubles
1um
FIGURA 19-2 Anatomía bioquímica de una mitocondria. (a) La mem- en cuanto a la longitud, de las mitocondrias. (c) Las mitocondrias del
brana externa tiene poros que la hacen permeable a pequeñas moléculas músculo cardíaco (azules en la micrografía electrónica coloreada), con
e ¡ones pero no a proteínas. Los repliegues de la membrana interna, gran profusión de crestas y, por tanto, un área de la membrana interna
denominados crestas, le confieren una gran área superficial. La mem- mucho mayor, tienen más de tres veces el número de conjuntos de cade-
brana interna de una sola mitocondria de hígado puede tener más de nas respiratorias que en (d), las mitocondrias hepáticas. Las mitocondrias
10.000 conjuntos de sistemas de transferencia de electrones (cadenas de músculo e higado tienen el tamaño aproximado de una bacteria (1 a
respiratorias) y de moléculas de ATP sintasa, distribuidas por toda la 10 ¿m de longitud). Las mitocondrias de invertebrados, plantas y micro-
superficie de la membrana. (b) Una célula anirnal típica tiene cientos o bios eucariotas son similares a la que se muestra aquí, si bien existe
miles de mitocondrias. Esta célula endotelial de una arteria pulmonar mucha variación en tamaño, forma y grado de repliegue de la membrana
bovina se tiñó con sondas fluorescentes para la actina (azul), para el interna. [Fuentes: (b) Talley Lambert/Science Source. (e) Thomas Dee-
DNA (rojo) y para las mitocondrias Camarillo). Obsérvese la variabilidad, rinck, NCMIR/Science Source. (d) Biophoto Associates/Science Source.]
Las deshidrogenasas ligadas a nucleótidos de Las deshidrogenasas ligadas al NAD eliminan dos
nicotinamida catalizan reacciones reversibles de los átomos de hidrógeno de sus sustratos. Uno es transferi-
tipos generales siguientes: do en forma de ión hidruro (:H7) al NAD* mientras que
el otro aparece como H* en el medio (véase la Fig.
Sustrato reducido + NAD* ===
13-24). El NADH y el NADPH son transportadores elec-
sustrato oxidado + NADH + H*
trónicos hidrosolubles que se asocian reversiblemente
con deshidrogenasas. El NADH transporta los electro-
Sustrato reducido + NADP* ==
nes que provienen de reacciones catabólicas a su punto
sustrato oxidado + NADPH + H*
de entrada en la cadena respiratoria, el complejo de la
NADH deshidrogenasa que se describe más adelante. El
La mayoría de deshidrogenasas que participan en el NADPH generalmente suministra electrones a reaccio-
catabolismo son específicas para el NAD* como aceptor nes anabólicas. Las células mantienen resevas separa-
electrónico (Tabla 19-1). Algunas están localizadas en el das de NADPH y NADH, con potenciales redox diferen-
citosol y otras en la mitocondria, existiendo también tes. Esto se consigue manteniendo las razones [forma
otras con isozimas, mitocondriales y citosólicos. reducida]/[forma oxidada] relativamente alta para el
TABLA 19-1 A reo ee
| a-Cetoglutarato + CoA + NAD* == succinil-CoA + CO, + NADH + H* M

1-Malato + NAD* == oxalacetato + NADH + H* MyC
| Piruvato + CoA + NAD* == acetil-CoA + CO,+ NADH + H* M
| Gliceraldehído-3-fosfato + P, + NAD* == 1,3-bisfosfoglicerato+ NADH + H* C
Lactato + NAD* => piruvato + NADH + H* C
B-Hidroxiacil-CoA + NAD* == Pcetoacil-CoA+ NADH + H* M

Ligadas a NADP |
Ghucosa-6-fosfato + NADP* == 6-fosfogluconato + NADPH + H* c |
L-Malato + NADP* == piruvato + CO,+ NADPH + H* C
Ligadas a NAD o NADP
L-GLutamato + H,O + NAD(P) == o-cetoglutarato + NH; + NAD(P)H M

| Isocitrato + NAD(P)* == o-cetoglutarato + CO,+ NAD(P)H + H” MyC
“Estas reacciones así como sus enzimas se tratan en los Capítulos 14 a 18.
bM indica mitocondria; C, citosol.
NADPHy relativamente baja para el NADH. Ni el NADH Los electrones pasan a través de una serie
ni el NADPH pueden atravesar la membrana jrterna de
la mitocondria, pero los electrones que
transportadores unidos a membrana
pueden ser lanzados a su través indirec , Aaa toria mitocondrial consta de una serie
como veremos más adelante. e transportadores electrónicos que actúan secuencial-
Las flavoproteínas contienen un nucleótido de fla- mente, la mayoría de los cuales son proteínas integrales
vina, FMN o FAD, fuertemente unido, a veces de manera con grupos prostéticos capaces de aceptar y ceder uno
covalente (véase la Fig. 13-27). El nucleótido de flavina o dos electrones. Hay tres tipos de transferencias elec-
oxidado puede aceptar un electrón (dando la forma de trónicas en la fosforilación oxidativa: (1) transferencia
semiquinona) o dos (produciendo FADH, o FMNH,). La directa de electrones, tal como sucede en la reducción
transferencia electrónica se da gracias a que la flavopro- de Fe** a Fe”*; (2) transferencia de un átomo de hidró-
teína tiene un potencial de reducción estándar superior geno (H* + €) y (3) transferencia de un ión hidruro
al del compuesto oxidado. Recuerde que el potencial de GH5 portador de dos electrones. El término equiva-
reducción es una medida cuantitativa de la tendencia lente de reducción se utiliza para designar el equiva-
relativa de una especie química determinada para acep- lente de un electrón sencillo que se transfiere en una
tar electrones en una reacción de oxidación-reducción. reacción de oxidación-reducción.
El potencial de reducción estándar de un nucleótido de Además del NAD y de las flavoproteínas, hay otros
flavina, a diferencia de lo que sucede con el NAD o el tres tipos de moléculas transportadoras de electrones
NADP, depende de la proteína a la que está asociado. que funcionan en la cadena respiratoria: una quinona
Interacciones locales con grupos funcionales de la pro- hidrofóbica, denominada ubiquinona, y dos tipos dife-
teína distorsionan los orbitales electrónicos del anillo de rentes de proteínas con hierro (citocromos y proteínas
flavina, con lo que varía la estabilidad relativa de las ferro-sulfuradas). La ubiquinona (también llamada
formas oxidada y reducida. El potencial de reducción coenzima Q, o sencillamente Q) es una benzoquinona
estándar pertinente es, por tanto, el de la flavoproteína liposoluble que contiene una cadena lateral isoprenoide
concreta, no el del FAD o FMN aislados, habiéndose de larga (Fig. 19-3). La ubiquinona puede aceptar un
considerar al nucleótido de flavina como parte del sitio electrón transformándose en el radical semiquinona
activo de la flavoproteína y no como un reactivo o pro- CQH o dos electrones formando ubiquinol (QH,). Al
ducto en la reacción de transferencia electrónica, Debi- igual que las flavoproteínas transportadoras es, por
do a que las flavoproteínas pueden participar en transfe- tanto, capaz de actuar como puente entre un dador de
rencias de uno o de dos electrones, pueden actuar como dos electrones y un aceptor de un electrón. Debido a
intermedios entre reacciones en las que se ceden dos que la ubiquinona es al mismo tiempo pequeña e hidro-
electrones (como sucede en las deshidrogenaciones) y fóbica puede difundir libremente dentro de la bicapa
en aquéllas en las que se acepta un solo electrón (como lipídica de la membrana mitocondrial interna y puede
en la reducción de una quinona a hidroquinona descrita hacer de lanzadera de equivalentes de reducción entre
más adelante). otros transportadores electrónicos de la membrana
menos móviles. Además, debido a que transporta tanto
H,CO (CH,—CH=C—CH2h9—H
p electrones como protones, juega un papel central en el
acoplamiento del flujo electrónico al movimiento de
protones.
Ubiquinona (Q) Los citocromos son proteínas con una intensa
¿CO CH (totalmente oxidada) absorción de la luz visible característica, debida a la
O
presencia del grupo prostético hemo que contiene hie-
l H+e rro (Fig. 19-4a). Las mitocondrias contienen tres cla-
ses de citocromos que se distinguen por diferencias en
su espectro de absorción de la luz y que se designan a,
R
HOR Radical semiquinona b y c. Cada tipo de citocromo en su estado reducido
H,CO o
.
29mH (Fe?) tiene tres bandas de absorción en el espectro

visible (Fig. 19-4b). La banda de longitud de onda más
0H
larga está cerca de 600 nm en los citocromos del tipo a,
pu "+e cerca de 560 nm en los del tipo b y cerca de 550 nm en
H los del tipo c. Para distinguir entre citocromos de un
tipo estrechamente relacionados, se utiliza en su nom-
H R
o Ubiquinol (QH) bre la absorción máxima exacta, tal como sucede con el
(totalmente reducido) citocromo bygy.
H,CO CH,
OH
Los hemos de los citocromos a y b están unidos
muy fuertemente, aunque no de manera covalente, a
FIGURA 19-3 Ubiquinona (Q, o coenzima Q). La reducción completa sus proteínas asociadas; los grupos hemo de los citocro-
de la ubiquinona requiere dos electrones y dos protones y se produce en mos del tipo c están unidos de forma covalente a través
dos pasos a través dei radical seriquinona intermedio. de residuos Cys (Fig. 19-4). Al igual que con las fla-
voproteínas, el potencial de reducción estándar del
átomo de hierro en el hemo de un citocromo depende
de su interacción con las cadenas laterales de la proteí-
S—Cys
(a) CHy Chic,
CH; CH¿CH¿C007 CM CHCH,COO”

Ferro-protoporfirina IX Hemo e
(en citocromos de tipo b) (en citocromos de tipo c)
CH; CH=CHz
CH¿CH¿COO7
(b) 100
CHO CH)¿CH¿C0O7
Hema a pH Cite
(en citocromos tipo a) reducido
Absorción relativa de luz (%)
FIGURA 19-4 Grupos prostéticos de los citocromos. (a) Cada grupo está formado por cuatro Cite
anillos pentaatómicos que contienen nitrógeno en una estructura cíclica llamada porfirina. Los oxidado
cuatro átomos de nitrógeno están coordinados can un ión Fe central que puece ser Fe? o Fe?
La ferro-protoporfirina 1X se encuentra en los citocromos de tipo b y en la hemoglobina y mio-
un
Ó
T
globina (véase la Fig. 4-17). El hemo c está unido covalentemente a la proteína del citocromo e
mediante enlaces tioéter con dos residuos Cys. El hemo a, que se encuentra en los citocromos
de tipo a, tiene una cola isoprenoide larga unida a uno de los anillo pentaatómicos. El sistema
de dobles enlaces conjugados (sombreado en rosa) del aniilo de la porfirina tiene electrones r
deslocalizados que son excitados de mánera relativamente fácil por fotones con longitudes de 8
onda correspondientes a la luz visible lo que explica la fuerte absorción de luz de la región visi-
bie del espectro por estos hemos (y compuestos relacionados). (b) Espectro de absorción del 0 L 1
citocromo c (cit c) en sus formas oxidada (azul) y reducida (rojo). Se indican las bandas a, 8 y 300 400 500 600
”y características de las formas reducidas. Longitud de onda (nm)

(a) cb) $=Cys
—A
| Cys—S S S—Cys Cys —5
Cys—5 S—Cys Se se
Pos Cys—S5 —Fe
CysT5 S—Cys Cys—S S—Cys
Proteína
FIGURA 19-5 Centros ferro-sulfurados. Los centros Fe-S de las proteí- tiene un centro 2Fe-25; (Observe que en estas designaciones sólo se
nas ferro-suifuradas pueden ser tan sencillos como en (a), con un solo ¡ón cuentan los átomos de $ inorgánicos. Por ejemplo, en el centro 2Fe-25 £b),
Fe rodeado de átomos de S de cuatro residuos Cys; Fe está en rojo, ek S cada ¡ión Fe está, de hecho, rodeado por cuatro átomos de S). El potencial
inorgánico es amarillo y los átomos de S de las Cys son naranja. En otros de reducción estándar exacto del hiero en estos centros depende del tipo
centros hay átomos de $ inorgánicos y orgánicos de la Cys como (b) 2Fe- de centro y de los detalles de su interacción con la proteína asociada.
25 o (c) 4Fe-4S. (d) La ferredoxina de la cianobacteria Anabaena 7120 [Fuente: PD8 1D 1FRD. B. L. Jacobson et al., Biochemistry 32:6788, 1993.]
na, por lo que es diferente para cada citocromo. Los mitocondrial actúan como mínimo ocho proteínas Fe-S.
citocromos de los tipos a y b así como algunos del tipo Los potenciales de reducción de las proteínas Fe-S
c son proteínas integrales de la membrana mitocondrial varían de 0,65 V a +0,45 V, en función del microentor-
interna. Una excepción sorprendente es el citocromo c no del hierro en el interior de la proteína,
que se asocia mediante interacciones electrostáticas En la reacción global catalizada por la cadena respi-
con la superficie exterior de la membrana mitocondrial ratoria mitocondrial se transportan electrones desde el
interna. NADH, el succinato u otro dador electrónico primario a
En las proteínas ferro-sulfuradas, el hierro está través de las flavoproteínas, ubiquinona, proteínas
presente no en forma de hemo sino en asociación con ferro-sulfuradas y citocromos y, finalmente, al O,. Echar
átomos de azufre inorgánico o con átomos de azufre de un vistazo a los métodos utilizados en la determinación
residuos Cys de la proteína, o con los dos al mismo tiem- de la secuencia de actuación de los transportadores es
po. Estos centros ferro-sulfurados (Fe-S) van desde instructivo, dado que se han utilizado aproximaciones
estructuras sencillas con un solo átomo de Fe ares en el estudio de otras cadenas de transferen-
do a cuatro residuos Cys-SH a centros Fe- SiN P ah
EAN ales como las que tienen lugar en cloro-
plejos con dos o cuatro átomos de Fe (Fig. La as e la Fig. 20-16).
proteínas ferro-sulfuradas de Rieske (nombradas En primer lugar, se han determinado experimental-
así porque las descubrió John $. Rieske) son una varian- mente los potenciales de reducción estándar de los
te de las anteriores, en las que un átomo de Fe está transportadores electrónicos individuales (Tabla 19-2).
coordinado con dos residuos His en lugar de con dos Es de esperar que los transportadores funcionen en
residuos Cys. Todas las proteínas ferro-sulfuradas parti- orden de potenciales de reducción crecientes, porque
cipan en transferencias de un electrón en las que se los electrones tienden a fluir espontáneamente desde
oxida o reduce uno de los átomos de Fe de la agrupa- los transportadores de E” más bajo hacia los transpor-
ción ferro-sulfurada. En la transferencia de electrones tadores con E” más elevado. El orden de los transporta-
TABLA 19-2 Potenciales de reducción estándar de los transportadores electrónicos de la cadena

respiratoria y relacionados
Reacción redox (media reacción) EW)
2H" +2 —Z HO : 0414 |
NAD> + H* + 22 — NADH -0,320 |
NADP* + H* + 207 —— NADPH 0,324 |
NADH deshidrogenasa (FMN)+ 2H* + 2e- —— NADH deshidrogenasa (FMNH,) 0,30 |
Ubiquinona 2H* + 2 —- ubiquinol 0,045 |
Citocromo b (FE*) + e — citocromo b (FE?) 0,077 |
Citocromo c, (FE**) + e: — citocromo c, (FE?») 0,22 |
Citocromo ce (FE*) + e —- citocromo e (FE?) 0,254 |
Citocromo a (FE*) + e: —- citocromo a (FE?) 0,29 |
Citocromo a, (FE*) + e: —- citocromo a, (FE?) 0,35 '

150, + 2H" + Le — H,O 0,817
rotenona .
mu E.
a
Q —> Citb —=> Cite —= Cite ——> Cit(a +0) ——> O,
LantimicinaA
2 > Cito USAR 1] —— O,
¡NADH ——>Q ——> Citb ——= Cite, —— Cite —> Cilla+a)

9
——+ 3
FIGURA 19-6 Método para determinar la secuencia de transportado- patrón característico de transportadores oxidados/reducidos: los ante-
res electrónicos. Este método mide el efecto de inhibidores de la trans- ríores al bioqueo quedan reducidos (azul) mientras que los posteriores al
ferencia electrónica sobre el estado de oxidación de cada transportador bloqueo quedan oxidados (rajo).
En presencia de un dador electrónico y O,, cada inhibidor da lugar a un
dores deducido según este método es NADH— Q — que los que funcionan después del bloqueo están com-
citocromo b — citocromo c, — citocromo e — citocro- pletamente oxidados (Fig. 19-6). Mediante la utiliza-
mo a — citocromo a, — O,. Observe, sin embargo, que ción de diversos inhibidores que bloquean diferentes
el orden de los potenciales de reducción estándar no es puntos de la cadena se ha deducido la secuencia com-
necesariamente el mismo que el de los potenciales de pleta; es la misma que la predicha según los dos méto-
reducción reales en condiciones celulares, que depen- dos anteriores.
den de las concentraciones de las formas oxidadas y
reducidas (véase la Ec. 13-5, p. 520). Un segundo méto- Los transportadores de electrones actúan
do para determinar la secuencia de los transportadores
en complejos multienzimáticos
electrónicos consiste en reducir experimentalmente la
cadena de transportadores completa aportando Los transportadores de electrones de la cadena respira-
fuente de electrones en ausencia de eptor d ESNo toria están organizados en complejos supramoleculares
trones (sin O,). Cuando se introduce ene Q AUN. en membranas que se pueden separar físi-
ZA | El tratamiento suave de la membrana mito-
el sistema, la velocidad a la que se oxida cada transpot-
tador, determinada espectroscópicamente, muestra el condrial interna con detergentes permite la resolución
orden en el que funcionan los transportadores. El trans- de cuatro complejos distintos de transportadores elec-
portador más próximo al O, (al final de la cadena) es el trónicos, cada uno de los cuales es capaz de catalizar la
primero en ceder sus electrones, el segundo transporta- transferencia electrónica a través de una porción de la
dor desde el final es el siguiente en oxidarse y así suce- cadena (Tabla 19-3, Fig. 19-7). Los Complejos l y H
sivamente. Este tipo de experimentos ha confirmado la catalizan la transferencia de electrones a la ubiquinona
secuencia deducida a partir de los potenciales de reduc- a partir de dos dadores electrónicos diferentes: NADH
ción estándar. (Complejo D) y succinato (Complejo ID. El Complejo MI
En una confirmación final, se han utilizado agentes transporta electrones desde la ubiquinona reducida al
que inhiben el flujo de electrones a través de la cadena citocromo c, y el Complejo IV completa la secuencia
en combinación con medidas del grado de oxidación de transfiriendo electrones desde el citocromo c al O,,
cada transportador. En presencia de O, y un dador elec- Abordaremos a continuación con mayor detalle la
trónico los transportadores que funcionan antes del estructura y la función de cada complejo de la cadena
paso inhibido quedan totalmente reducidos mientras respiratoria mitocondrial,
NINA SS an a SA ade
Complejo enzimático/proteína Masa (kDa) Número
de subunidades". Grupo(s) prostético(s) |
1 NADH deshidrogenasa 850 45 (14) FMN, Fe-S |
II Succinato deshidrogenasa 140 4 FAD, Fe-5 |
IB Ubiquinona-citoeromo c oxidorreductasa' 250 11 Hemos, Fe-S |
Citocromo c* 13 1 Hemos |
IV Citocromo oxidasa' 204 13 (3-4) Hemos, Cu, Cu, |
“Número de subunidades de los equivalentes bacterianos en paréntesis.

"Los datos de masa y subunidades corresponde a la forma monomérica.
“Observe que el citocrorno c no es parte de un complejo enzimático; se desplaza entre los Complejos ll! y IV corno una proteína soluble.
Tratamiento:
con digitonina ¿A intermembrana Complejo|
(lado p) H* H* H* H* o
Brazo de la membrana
Fragmentos
de la membrana Matriz (lado w)
interna
Se desechan S j
los fragmentos Co 9
de la membrana > 3
externa Q
NADH+H? NAD*
Solubilización con detergente seguida FIGURA 19-8 Estructura del Complejo | (NADH:ubiquinona oxidorre-
de cromatografía de intercambio iónico ductasa). El Complejo i (Aquí se muestra la estructura cristalina del pro-
cedente de Thermus thermophilus) cataliza la transferencia de un ión
hidruro desde el NADH al FMN, y del FMN pasan dos electrones a tra-
vés de una serie de centros Fe-S al centre Fe-S de N-2 situada en el
brazo de! complejo orientado hacia la matriz. La transferencia de electro-
ER a E nes desde N-2 a la ubiquinona, que se encuentra en el brazo situado en
Ú la membrana, genera QH,, el cual difunde por la bicapa lipídica. Esta
transferencia de electrones también promueve la expulsión desde la
l |
bo] ) matriz de cuatro protones por par de electrones.
uce un potencial electroquímico a través de la membrana
El flujo de protones
mitocon-
ICUO)
NADH Q SuccinatoQ Q Cytc Cytc 0% A JP ; / negativo, p lado positivo). El mecanismo detallado
la transferencia de electrones y de protones en el
Reacciones catalizadas por fracciones aisladas in vitro ! Complejo | todavía no se conoce, pero tres de las subunidades de la
membrana están relacionadas estructuralmente a un cotransportador
FIGURA 19-7 Resolución de los complejos funcionales de la cadena antiparalelo Na*-H* y la ruta del movimiento de protones puede ser
respiratoria. Se elimina primero la membrana mitacondrial externa por similar en ambos casos. La cuarta posible ruta de los protones es a tra-
tratamiento con el detergente digitonina. A continuación se obtienen vés de una subunidad integral más próxima al sitio de unión de Q. Una
fragmentos de la membrana interna por rotura osmótica de la mitocon- hélice larga (no visible en esta vista) que yace a lo largo de la superficie
dria disolviéndose suavemente los fragmentos en un segundo deter- del brazo de la membrana puede coordinar la acción de las cuatro bom-
gente, La mezcla resultante de proteínas de la membrana interna se bas de protones cuando Q está reducido. [Fuerte: PDB ID r4HEA, B.
resuelve mediante cromatografía de intercambio-iónico en varios corm- Baradaran et aj., Nature 494:443, 3013.]
plejos (l a IV) de la cadena respiratoria, cada uno con su composición
proteica distintiva (véase la Tabla 19-3), y en el enzima ATP sintasa (a
ca hacia la ubiquinona de un ión hidruro del NADH y un
veces llamado Complejo Y). Los Complejos | a 1Y aislados catalizan
protón de la matriz expresado por:
transferencias entre dadores (NADH y succinato), transportadores inter-
medios (Q y citocromo c) y O, tal como se muestra. In vitro, la ATP sin-
NADH + H* + Q —— NAD* + QH, (19-1)
tasa sólo tiene actividad hidrolizadora del ATP (ATPasa) y no sintetiza-
dora de ATP.
y (2) la transferencia endergónica de cuatro protones
desde la matriz al espacio intermembrana. En este pro-
ceso se desplazan protones contra un gradiente de
Complejo l: NADH a ubiquinona En los mamíferos el
protones transmembrana. Por tanto, el Complejo 1 es
Complejo I, también llamado NADH:ubiquinona oxi-
una bomba de protones impulsada por la energía de la
dorreductasa o NADH deshidrogenasa, es un enzi-
transferencia electrónica, y la reacción que cataliza es
ma enorme compuesto por 45 cadenas polipeptídicas
vectorial: mueve los protones en una dirección especí-
diferentes, entre las que se encuentra una flavoproteína
fica desde una localización (la matriz, que se carga
que contiene FMN y como mínimo 8 centros ferro-sul-
negativamente con la salida de los protones) a otra (el
furados. El Complejo | tiene forma de L, con un brazo
espacio intermembrana, que se carga positivamente).
incrustado en la membrana interna y el otro prolongán-
Para resaltar la naturaleza vectorial del proceso, la reac-
dose hacia la matriz. Estudios comparativos del Com-
ción global se expresa a menudo con subíndices que
plejo 1 en bacterias y otros organismos muestran que 7
indican la localización de los protones: p para la cara
polipéptidos en el brazo de la membrana y 7 en la matriz
positiva de la membrana interna (el espacio intermem-
están conservados y son esenciales (Figura 19-8).
brana) y n para la cara negativa (la matriz):
El Complejo I cataliza dos procesos simultáneos
forzosamente acoplados: (1) la transferencia exergóni- NADH + 5H; + Q—— NAD* + QH, + 4H; (19-2)
ANEMIA a ao ee
Tipo de interferencia Compuesto? Diana/modo de acción |
o o |
Inhibición de la transferencia Cianuro - . . |
electrónica Monóxido de carbono Inhibe la citocromo oxidasa
Antimicina A Bloquea la transferencia electrónica desde

el citocromo b al citocromo c,
Mixotiazol
Rotenona Impide la transferencia electrónica desde
Amital un centro Fe-$S a la ubiquinona
Piericidina A
Inhibición de la ATP sintasa Aurovertina Inhibe F, |

Oligomicina . |
Venturicidina inhibe F, y CF,
DCCD Bloquea el flujo de protones a través de F,
Desacoplamiento de la fosforilación FCCP A ] ,

y el transporte electrónico DNP Transportadores protónicos hidrofóbicos
Valinomicina lonóforo del K*
Proteína Forma poros conductores de protones en la

desacoplante 1 membrana interna de la mitocondrias del |
tejido adiposo marrón
Inhibición del intercambio ATP-ADP Atractilósido Inhibe la nucleótido de adenina translocasa

*DCCD, diciclohexilcarbodiimida; FCCP, cianuro-p-trifivorometoxifenilhidrazona; DNP 2,4-dinitrofenol.
El amital (un barbiturato), la mero AR ATAN. deshidrogenasa; es el único enzima del ciclo
tal utilizado habitualmente como insecticida) y el anti- del ácido cítrico ligado a membrana. El Complejo H aco-
biótico piericidina A inhiben el flujo electrónico desde pla la oxidación del succinato en un sitio con la reducción
los centros Fe-S del Complejo l a la ubiquinona (Tabla de la ubiquinona en otro sitio alejado del primero unos
19-43, con el consecuente bloqueo del proceso global de 40Á. Aunque más pequeño y más sencillo que el Comple-
la fosforilación oxidativa. jo 1, el Complejo II contiene cinco grupos prostéticos de
Tres de las siete subunidades proteicas integrales dos tipos y cuatro subunidades proteicas diferentes (Fig.
del brazo de la membrana están relacionadas con un 19-93. Las subunidades € y D son proteínas integrales de
cotransportador antiparalelo Na*-H* y se cree que son membrana, cada una de ellas con tres hélices transmem-
responsables del bombeo de tres protones; una cuarta brana. Contienen un grupo hemo, hemo b, y un sitio de
subunidad en el brazo de la membrana, la más cercana unión para Q que es el aceptor final de electrones en la
al sitio de fijación de Q, es responsable probablemente reacción catalizada por el Complejo If. Las subunidades A
del bombeo del cuarto protoón (Fig. 19-8). y B se extienden hacia la matriz; contienen tres centros
¿Cómo se acopla la reducción de la ubiquinona con 2Fe-25, FAD unido y un sitio de unión para el sustrato
el bombeo de protones? La reducción de Q tiene lugar suceinato. Aunque la ruta global de transferencia de
lejos del brazo de la membrana de la proteína, donde se electrones es larga (desde el sitio de unión del succina-
produce el bombeo de protones, por lo que el acopla- to al FAD, a continuación a través de los centros Fe-S
miento es claramente indirecto. Probablemente, la hasta al sitio de unión de Q), ninguna de las distancias de
reducción de Q induce un cambio conformacional de transferencia electrónica individuales excede unos 11 Á,
largo alcance en el Complejo 1. La imagen de alta reso- una distancia razonable para una transferencia electróni-
lución del Complejo 1 a partir de estudios cristalográfi- ca rápida (Fig. 19-9). La transferencia de electrones a
cos sugiere un posible mecanismo de acoplamiento: través del Complejo UI no va acompañada de bombeo de
una hélice larga que se encuentra a lo largo del brazo protones a través de la membrana interna, aunque el QH,
de la membrana puede transmitir cambios alostéricos a producido por la oxidación del succinato será utilizado
través de este brazo. Parece probable que los cuatro por el Complejo HI para impulsar la transferencia protó-
protones se bombeen de manera simultánea, por lo que nica. Debido a que el Complejo II funciona en el ciclo del
la energía de una reacción fuertemente exergónica (la ácido cítrico, los factores que afectan su actividad (tales
reducción de Q) se rompa en pequeños paquetes, una como la disponibilidad de (Y) oxidado) sirven, probable-
estrategia común empleadas por los organismos vivos. mente, para coordinar dicho ciclo con la transferencia
electrónica mitocondrial.
Complejo 1: Succinato a ubiquinona En el Capítulo 16 ya El hemo b dei Complejo II no se encuentra, apa-
encontramos el Complejo H bajo un nombre diferente: rentemente, en la ruta directa de transferencia
Espacio
intermembrana (lado P) Proteína ferro-sulturada
Fostatidiletanolamina de Rieske
Sitio de
unión del
succinato
FIGURA 19-9 Estructura del Complejo il (succinato deshidrogenasa), FIGURA 19-10 Estructura del Complejo 1 (complejo del citocromo
Este complejo (porcino) tiene dos subunidades transmembrana, C y D y bc). El complejo (bovino) es un dímero de monómeros idénticos, cada
las subunidades A y B se extienden hacia la matriz. Inmediatamente uno constituido por 11 subunidades diferentes. El núcleo funcional de
detrás del FAD de la subunidad A se encuentra el sitio de unión del suc- cada monómero consta de tres subunidades: el citocromo b (en verde)
cinato. La subunidad B tiene trescentros Fe-S; la ubiguinona está unida a con sus dos hemos (b, y b,); la proteína ferro-sulfurada de Rieske (púr-
la subunidad B y el hemo b está entremedio de las subunidades C y D. pura) con sus centros 2Fe-25 y el citocromo c, (en azul) con su hemo.
Dos moléculas de fosfatidiletanolamina están unidas de manera tan En esta ilustración esquemática se muestra corno el citocromo a y la
fuerte a la subunidad D que se observan en la estructura eristalina. Los oteina ferro-sulturada de Rieske se proyectan desde la superficie p, y
electrones se desplazan (flechas azules) desde el alfa P Art r con el citocromo c del espacio intermembrana
seguidamente a través de los tres centros Fe-S a la ubiqu A m (Soya del complejo funcional). El complejo presenta
b no se encuentra en la ruta principal de transferencia de los electrones dos sitios de unión diferenciados para la ubiquinona, Q, Y Q, que son
pero protege contra la formación de especies de oxígeno reactivas (ROS) los sitios de imhibición por dos fármacos que bloquean la fosforilación
por electrones que se desvían en el camino. [Fuente: PDB 1D 1ZOY, F. oxidativa. La antimicina A, que bloquea el flujo de electrones desde el
Sun et al., Celí, 121:1043, 2005,] citocromo b al citocromo c,, específicamente desde el hemo b, a Q, se
une a Q,, cercano al hemo b, en el lado n (matriz) de la membrana. El
electrónica; en su lugar podría servir para reducir la mixotiazol, que impide el flujo de electrones desde QH, a la proteína
frecuencia con la que los electrones “se pierden” fuera ferro-sulfurada de Rieske, se une en Q, cercano al centro 2Fe-25 y al
del sistema, desplazándose del succinato al oxígeno herno b, del lado p. La estructura dimérica es esencial para la función del
molecular para producir las especies reactivas de Complejo lil. La interfase entre monómeros forma dos cavernas, cada una
con un sitio Q, de un monómero y un sitio Q, del otro. Los intermedios
oxígeno (ROS) peróxido de hidrógeno (H,O,) y el
de la ubiquinona se mueven en el interior de estas cavernas protegidas,
radical superóxido (O,”) descritas más adelante.
El Complejo ll cristaliza en dos conformaciones distintas (no mos-
Algunos individuos con mutaciones puntuales en subu-
tradas). En una, el centro Fe-S de Rieske está cercano a su aceptor elec-
nidades del Complejo II próximas al hemo b o al sitio de
trónico, el hemo del citocromo c, pero a relativa distancia del citocromo
unión de quinona sufren paraganglioma hereditario
b y del sitio de unión de QH, en el que el centro Fe-S de Rieske recibe
caracterizado por tumores benignos de la cabeza y cue-
electrones, En la otra conformación, el centro Fe-S se ha desplazado del
llo, normalmente en el cuerpo carotídeo, un órgano que
citocromo c, hacia el citocromo b, Se piensa que la proteína de Rieske
mide los niveles de O, en la sangre. Estas mutaciones oscila entre estas dos conformaciones al ser primero reducida y a conti-
conducen a una mayor producción de ROS y quizás una nuación oxidada. [Fuente: POB ID 1BGY, S. Iwata et al, Science 281:64,
mayor lesión tisular durante la oxidación del succinato. 1998.]
Las mutaciones que afectan la región de unión del sue-
cinato en el Complejo ll pueden conducir a cambios
citocromo c oxidorreductasa), acopla la transferen-
degenerativos en el sistema nervioso central mientras
cia de electrones desde el ubiquinol (QH,) al citocromo
que algunas mutaciones están asociadas con tumores de
c con el transporte vectorial de protones de la matriz al
la corteza suprarrenal,
espacio intermembrana. La unidad funcional del Com-
plejo Il! (Fig. 19-10) es un dímero. Cada monómero
Complejo III: Ubiquinona a citocromo € Los electrones de
conta de tres proteínas importantes para la acción del
la ubiguinona reducida (ubiguinol, QH,) pasan a través
complejo: citocromo b, citocromo c, y la proteína
de otros dos complejos proteicos más grandes de la
ferro-sulfurada de Rieske. (Otras proteínas asociadas
membrana mitocondrial interna antes de alcanzar el
con el Complejo IM en vertehrados no se han conserva-
último aceptor electrónico, O,. El Complejo HL, (tam-
do a lo largo de los fila y, presumiblemente, juegan
bién llamado complejo citocromo bc, o ubiquinona:-
papeles secundarios). Los ds monómeros del citocromo
(b) Etapa 2
QH) + Q + cit ctoxidado) — QH2+*Q + 2Hf + cit c (oxidado) —.
Q + "Q7+2HfÍ + cit (reducido) Q + 2H7 + QH, + cit e (reducido)

r
Ecuación neta: QH, + 2 cit (oxidado) + 2HK —= Q+2citc(reducido) + 4HF
FIGURA 19-11 El ciclo Q, mostrado en dos etapas. La ruta de los Fe-S de Rieske) al citocromo c, y un electrón (vía citocromo b) a una
electrones a través del Complejo 1! se muestra con flechas azules. El molécula de Q cerca del lado n, reduciéndolo en dos pasos a QH,. Esta
movimiento de varias formas de la ubiquinona se muestra con flechas reducción también utiliza dos protones por Q, tomados de la matriz
negras. (a) En el primer paso, Q en el lado n, se reduce a radical semi- (lado m). El cit c, reducido pasa electrones de uno en uno al cit e, que se
quinona que vuelve a su posición anterior para aceptar otro electrón. (b) disocia y transporta electrones al Complejo 1Y. En cada ciclo, una reduc-
En el segundo paso, el radical semiquinona se convierte en QH,. Mien- ción de Q en el sitio Q, está acoplada con dos oxidaciones de QH, en el
tras tanto, en el lado p de la membrana, se oxidan dos moléculas de QH, sitio Q, mediante el consumo de dos protones de la matriz y la liberación
a Q liberando dos protones por molécula de Q (cuatro protones en tata de cuatro protons al espacio intermembrana.
SPATION
en el espacio intermembrana. Cada QH, cede ctrón (vía
b rodean una caverna en el centro de la membrana, en oxida a Q al tiempo que se reducen dos moléculas de
la que la ubiquinona tiene libertad para moverse desde citocromo c y se desplazan dos protones del lado p al
el lado de la matriz de la membrana (sitio Q, en un lado n de la membrana mitocondrial interna.
monómero) al espacio intermembrana (sitio (), del otro El citocromo c es una proteína soluble del espacio
monómero) a medida que lanza electrones y protones a intermembrana, que se asocia reversiblemente con el
través de la membrana mitocondrial interna. lado p de la membrana interna. Después de que su
Para explicar el papel de Q en la conservación de único hemo acepte un electrón del Complejo III, el cito-
energía, Mitchell propuso el “ciclo Q” (Fig. 19-11). A cromo c se desplaza en el espacio intermembrana hacia
medida que los electrones se desplazan desde QH, a el Complejo TV para ceder el electrón a un centro de
través del Complejo III, QH, se oxida con liberación de cobre binuclear,
protones en un lado de la membrana (en (Q),), mientras
que en el otro sitio (Q,), Q se reduce y se captan proto- Complejo IV: Citocromo c a O, En el último paso de la
nes. El producto de un sitio catalítico se convierte así en cadena respiratoria, el Complejo IV, también llamado.
el sustrato del segundo sitio, y viceversa. La ecuación citocromo oxidasa, transporta electrones desde el
neta de las reacciones redox del ciclo (QQ es citocromo c al oxígeno molecular, reduciéndolo a H,O.
El Complejo IVY es un enzima dimérico muy grande
QH, + 2 cyt e, (oxidado) + 2H; —— (cada monómero tiene 13 subunidades y una M, de
Q + 2 cyt e, (reducido) + 4H; (19-3) 204.000) de la membrana mitocondrial interna. Las bac-
terias contienen una forma mucho más sencilla con sólo
El ciclo Q adapta el cambio entre el transportador de 3 o 4 subunidades por monómero, pero que sigue siendo
dos electrones ubiquinol (la forma reducida de la ubi- capaz de catalizar tanto la transferencia de electrones
quinona) y los transportadores de un electrón, los como el bombeo de protones. La comparación de los
hemos b, y b, del citocromo b y los citocromos c, y €, y complejos mitocondrial y bacteriano sugiere que estas 3
resulta en la captación de dos protones en el lado n y la subunidades se han conservado durante la evolución; en
liberación de cuatro protones en el lado p por cada par organismos multicelulares, las otras 10 subunidades
de electrones que pasan del Complejo III al citocromo c. pueden contribuir a ls formación o estabilidad dei Com-
Dos de los protones liberados en el lado p son electro- plejo IV (Fig. 19-12).
génicos; los otros dos son electroneutros, equilibrados La subunidad II del Complejo IV contiene dos iones
por las dos cargas (electrones) pasadas al citocromo c Cu que forman complejo con los grupos -SH de dos
en el lado p. Aunque la vía de los electrones a través de residuos Cys en un centro binuclear (Cu,; Fig. 19-12b)
este segmento de la cadena respiratoria es complicada, que se parece a los centros 2Fe-28 de las proteínas
el efecto neto de la transferencia es simple: QH, se ferro-sulfuradas. La subunidad 1 contiene dos grupos
(b)
go 4Cite y
2H": de— É
Espacio C
intermembrana
(lado r)
Herno ay
intro
Fe-Cu
Subunidad |.
HI “y a
Matriz
(lado n)
2H* A
(sustrato)
2H" H¿0
(bombeados)
FIGURA 19-12 Estructura de la citocromo oxidasa (Complejo IV). (a) FIGURA 19-13 Paso de los electrones a través del Complejo WV. Por
Este complejo (bovino) tiene 13 subunidades en cada monómero idén- razones de simplicidad solo se muestra un monómero del Complejo 1V
tico de su estructura dimérica., pero aquí sólo se muestran cuatro proteí- dimérico bovino. Las subunidades !, 1l y Jli son tres proteínas esenciales
nas núcleo. La subunidad | (en amarillo) tiene dos grupos hemo, a y a, en el flujo electrónico. La estructura verde mayor incluye las 10 proteínas
cerca de un único ión cobre, Cu, (no visible). El herno a, y Cu, forman un restantes de cada monómero del complejo dimérico. La transferencia
centro Fe-Cu binuctear. La subunidad |! (púrpura) contiene dos iones Cu lectrónica a través del Comptejo 1Y comienza con el citocromo c (parte
formando complejo con los grupos -S5H de dos residuos rior moléculas de citocromo c reducidas donan un electrón
tro binuciear, Cu,. que se parece a los centros 2Fe-25 d cc Cu, A partir de aquí los electrones pasan a
ferro-sulfuradas. Este centro binuclear y el sitio de unión del citocromo e 'avés del hemo a al centro Fe-Cu (citocromo a, y Cup). El oxígeno se
se localizan en un dominio de la subunidad || que sobresale desde el une ahora al hemo a, y se reduce a su forma peroxi (O,?; no mostrada
lado r de la membrana interna (hacia el espacio intermembrara). La aquí) gracias a dos electrones del centro Fe-Cu. La aportación de dos
subunidad S!i (en azul claro) es esencial para el movimiento rápido de electrones adicionales del citocromo c (arríba,) por un total cuatro elec-
protones a través de la subunidad !!. El papel de ¡as otras 10 subunidades trones convierte el O,” en dos moléculas de agua, consumiendo cuatro
del Complejo 1WY de mamiferos (en verde) no se conoce aún aunque protones “sustrato” de la matriz. Simultáneamente, se bambean dos
algunas funcionan en la formación o estabilización del complejo. (b) El protones desde la matriz por cada par de electrones que pasan a través
centro binuclear de Cu,. Los iones Cu (esferas azules) comparten elec- del Complejo IV, por un mecanismo todavía desconocido. Obsérvese
trones de forma equitativa. Cuando el centro está reducido los iones tie- que la reducción de O, a 2H,0 requiere cuatro electrones, o dos pares
nen las cargas formales Cu'**Cu'; en la forma oxidada, Cu'**Cu'*". Seis de electrones.
residuos aminoácidos son ligandos alrededor de los jones Cu: , Glu, Met
dos His y dos Cys. [Fuente: PDB ID 10CC, T. Tsukihara et al, Science,
272.136, 1996.] plejos 1 y II. La reacción global catalizada por el com-
plejo TV es:
hemo, designados a y a,, y otro ión cobre (Cu,). El 2 cyt e (reducido) + 4H;, + 0, ——
hemo a, y el Cu, forman un segundo centro binuclear 2 cyt e (oxidado) + 2H;, + H,O (19-4)
que acepta los electrones del hemo a y los transfiere al
O, unido al hemo a,. El papel detallado de la subunidad Esta reducción de 0, por dos electrones requiere la
III no está claro, pero su presencia es esencial para el oxidación de QH,, la cual, a su vez, requiere la oxida-
funcionamiento del Complejo HI. ción de NADH a succinato. En el Complejo IV, el O, se
La transferencia de electrones a través del comple- reduce en centros redox que transportan solo un elec-
jo TV va del citocromo c al centro Cu,, al hemo a, al trón a la vez. Normalmente los intermediarios oxigena-
centro hemo a,-Cu,, y finalmente al O, (Fig. 19-13). dos incompletamente reducidos permanecen fuerte-
Por cada cuatro electrones que pasan a través del com- mente unidos al complejo hasta que se han convertido
plejo, el enzima consume dos H* “sustrato” de la matriz completamente en agua, si bien se escapa una pequeña
(lado n) convirtiendo el 440, en H,O. También utiliza la fracción de intermediarios del oxígeno. Estos interme-
energía de esta reacción redox para bombear dos proto- diarios son especies de oxígeno reactivo que pueden
nes hacia el espacio intermembrana (lado p) por cada dañar los componentes celulares a menos que se elimi-
par de electrones que pasan, añadiéndose al potencial nen por medio de mecanismos de defensa descritos
electroquímico producido por el transporte de protones más adelante.
impulsado por el potencial redox a través del los Com-
Los complejos mitocondriales se pueden asociar La cardiolipina, el lípido que es especialmente

abundante en la membrana mitocondrial interna (véan-
formando respirasomas se las Figs. 10-8 y 11-2) puede ser de importancia críti-
Aunque los cuatro complejos transferidores de electro- ca para la integridad de los respirasomas; su eliminación
nes pueden separarse en el laboratorio, en la mitocon- con detergentes o su ausencia en ciertos mutantes de
dria intacta, los complejos respiratorios se asocian levaduras da lugar a una transferencia de electrones
fuertemente entre sí en la membrana interna formando mitocondrial defectuosa y a una pérdida de afinidad
respirasomas, combinaciones funcionales de dos o entre los complejos respiratorios. Algunas de las proteí-
más complejos diferentes de transferencia electrónica. nas “auxiliares” de los complejos, sin un papel claro en
Por ejemplo, cuando se extrae suavemente el Complejo la transferencia de electrones, pueden servir para man-
MI de las membranas mitocondriales, se encuentra aso- tener unidos los respirasomas.
ciado con el Complejo 1 y permanece asociado durante
la electroforesis suave. También pueden aislarse grega-
Otras rutas ceden electrones a la cadena respiratoria
dos purificados de los Complejos IU y IV y cuando se
observan utilizando la potente técnica de ls croipmi- a través de la ubiquinona
cropscopia electrónica, aparecen como supercomplejos Otras reacciones de transferencia de electrones pueden
del tamaño y contorno adecuados para acomodar las reducir la ubiquinona de la membrana mitocondrial inter-
estructuras cristalinas conocidas de ambos (Fig. na (Fig. 19-15). En el primer paso de la 4-oxidación de
19-14). La cinética del flujo electrónico a través de la los acil-CoA grasos, catalizada por la flavoproteína acil-
serie de complejos respiratorios sería muy diferente en CoA deshidrogenasa (véase la Fig. 17-8), los electro-
los dos casos extremos de asociación muy fuerte y de no nes pasan desde el sustrato al FAD de la deshidrogenasa
asociación entre ellos: (1) si los complejos estuviesen y, a continuación, a la flavoproteína transferidora de
fuertemente unidos, las transferencias electrónicas ten- electrones (ETF). La ETF pasa sus electrones a la ETF:
drían lugar esencialmente a través de un estado sólido, ubiguinona oxidorreductasa, la cual reduce Q de la
y (2) si los complejos funcionasen separadamente, los membrana mitocondrial interna a QH,. El glicerol 3-fosfa-
electrones serían transportados entre ellos por la ubi- to, formado ya sea por degradación de triacilgliceroles o
quinona y el citocromo e. Las pruebas cinéticas apoyan por reducción de la dihidroxiacetona fosfato de la glucó-
la transferencia a través de un estado sólido y, por con- lisis, es oxidado por la glicerol 3-fosfato deshidroge-
siguiente, el modelo del respirasoma. nasa (véase la Fig. 17-4), una flavoproteína localizada en
la parte exterior de la membrana mitocondrial interna. El
SA 10 N e
(a) Dihi idroorotato
deshidrogenasa .
to 2 Glicero! Gliceral
Espac fosfato 3-fosfato
intermembrana deshidrogenasa (citosólico)
oxidorreductasa |
ETF
Acil-CoA
deshidrogenasa
Enoil-CoA
FIGURA 19-15 Rutas de transferencia electrónica a la ubiquinona en

la cadena respiratoria. Los electrones del NADH de la matriz pasan a
través del FMN de una flavoproteína (NADH deshidrogenasa) a una
serie de centros Fe-S (en el Complejo 1) y, seguidamente, a Q. Los elec-
trones de la oxidación del succinato en el ciclo del ácido cítrico pasan a
FIGURA 19-14 Un respirasoma compuesto por los Complejos !li y IV. través de una flavoproteina, con varios centros Fe-5 (Complejo 1) en su
(a) Supercomplejos purificados que contienen los Complejos (Il y IV (de camino hacia Q. La acil-CoA deshidrogenasa, primer enzima de la $-oxi-
tevadura) visualizados mediante microscopia electrónica después de una daxción de los ácidos grasos, transfiere electrones a la flavoproteína
cpongelación rápida. Se promediaron las densidades electrónicas de transferidora de electrones (ETF), desde la que pasan a Q vía la ETF-ubi-
centenares de imágenes para obtener esta vista compuesta (véase el quinona oxidorreductasa. El dihidroorotato, un intermediario en la ruta
Recuadro 19-1). (b) Las estructuras por rayos X de un Complejo tl (rojo; de síntesis de nucleótidos pirimidínicos (véase la Fig. 22-38), dona dos
de levadura) y dos Complejos 1V (verde; de corazón bovino) pudieron electrones a Q a través de una flavoproteína (dihidroorotato deshidroge-
ajustarse al mapa de densidad electrónica sugiriendo una manera posí- nasa). Y el glicerol 3-fosfato, un intermediario de la glucólisis en el cito-
ble de interacción de estos complejos en un respirasoma. Esta vista se sol, cede electrones a una flavoproteína (glicerol 3-tostato deshidroge-
encuentra en el plano de la bicapa (amarilloFuente: Cortesía de Egbert nasa) en la cara exterior de la membrana mitocondrial interna, desde la
Boekema.] que pasan a Q.
RECUADRO 19-1 MÉTODOS RARAS NA SR

CNI
ANNE AN
Para nuestra comprensión de un proceso muy com-

plejo tal como la fosforilación oxidativa mitocondrial
es de gran ayuda el conocimiento de las estructuras
moleculares detalladas de las proteínas que partici-
pan en el proceso. No obstante, a veces es difícil
determinar la estructura molecular de grandes com-
plejos macromoleculares tales como los complejos de
la cadena respiratoria o la ATP sintasa. Las proteínas
integrales de membrana a menudo se resisten a la
cristalización una vez se han extraido de su entorno
lipídico, de modo que sus estructuras no pueden
resolverse mediante difracción de rayos x. En princi-
pio, objetos discretos del orden de 100 a 300 Á de
diámetro pueden visualizarse mediante microscopia
electrónica (ME). En la práctica, la elevada intensi-
dad del haz de ME a menudo daña el objeto antes de
que pueda obtenerse una imagen de alta resolución.
En la criomicrosopia electrónica, una muestra
que contiene muchas copias individuales de la estruc-
tura de interés se congelan rápidamente y se mantie-
nen congeladas mientras se observan en dos dimen-
siones con el microsopio electrónico, lo que reduce
grandemente el daño de la muestra por el haz de
electrones. El desarrollo del detector directo de elec-
trones, con mayor sensibilidad y menos o, fue
también una mejora clave, lo que permitió
nes más cortas de la muestra al haz de electornes. FIGURA 1 Estructura de la proteína chaperona GroEL tal como se
Partículas tales como los complejos mitocondria- determina por crio-ME de una sola partícula. (a) Imágenes ME de
les purificados, dispuestos al azar en la rejilla del muchas partículas individuales de GroEl. (b) Vistas lateral y superior
microscopio se visualizan con el criomicroscopio elec- de la estructura tridimensional proveniente del análisis de las imáge-
trónico. Cuando se combina la crio-ME con poderosos nes de ME. [Fuentes: (a) O Alberto Bartesaghi, PhD. (b) PDB ID
algoritmos para transformar las estructuras bidimen- 3E76, P. D. Kaiser et al, Acta Crystallogr, 65:967, 2009].
sionales de decenas de miles de complejos individua-
les orientados al azar en un compuesto tridimensional, molecular a un nivel comparable al obtenido por la
es, a veces, posible la determinación de la estructura cristalografía de rayos x (Fig. 1). En casos favorables,
aceptor electrónico en esta reacción es QQ; el QH, produ- Esta reacción neta es muy exergónica. Para el par
cido entra en el fondo de QH, de la membrana. El impor- redox NAD"/NADH, E” es -0,320 V, mientras que para el
tante papel de la glicerol 3-fosfato deshidrogenasa en par 0,/H,0, E” es 0,816 V. El AE” de esta reacción es,
lanzar equivalentes de reducción desde el NADH citosó- por tanto, 1,14 V siendo la variación de energía libre
lico a la matriz mitocondrial se describe en la Sección estándar (véase la Ec. 13-7; p. 521)
19.2 (véase la Fig. 19-32). La dihidroorotato deshidro-
AG” —nF AE”?
genasa, que actúa en la síntesis de pirimidinas (véase la (19-6)
Fig. 22-38), tamhién se encuentra en el exterior de la —2(96,5 kJ/V-moD (1,14 V)
membrana mitocondrial interna y cede electrones a Q en —220 kJ/mol (de NADH)
la cadena respiratoria. El QH, reducido pasa sus electro-
nes a través del Complejo Il y, finalmente, al O,. Esta variación de energía libre estándar se basa en la
suposición de que las concentraciones de NADH y NAD*
La energía de la transferencia de electrones se conserva son iguales (1 m). En las mitocondrias que respiran
activamente, la acción de muchas deshidrogenasas
eficientemente en un gradiente de protones mantiene el cociente [NADHY[ NAD*] real muy por enci-
La transferencia de dos electrones desde el NADH a ma de la unidad, por lo que la variación real en la ener-
través de la cadena respiratoria al oxígeno molecular se gía libre mostrado en la Ecuación 19-5 es sustancial-
puede escribir: mente mayor (más negativo) que -220 kJ/mol. Un cál-
culo similar para la oxidación del succinato muestra que
NADH + H* + 440, —— NAD* + H,O (19-5) la transferencia de electrones desde el succinato (E”
se pueden automatizar los aspectos repetitivos, tales grafía de rayos x (véase la Fig. 19-25), se pueden
como la elección de los objetos a incluir en el análisis, encajar los modelos atómicos en los contornos del
la obtención de la imagen individual de cada objeto y complejo para confirmar la estructura obtenida por
cálculos que dan lugar a una estructura tridimensional crio-ME (Fig. 2). El EMDataBank (emdatabank.org)
a partir del gran número de imágenes bidimensionales. es una fuente unificada para acceder a los mapas de
Si se conocen las estructuras de los componentes pro- estructura ME depositados en bancos de datos y a los
teicos individuales de un gran complejo por cristalo- que se les asignan códigos de acceso EMD.
FIGURA 2 (a) Estructura tridimensional! de la ATP sintasa bovina obtenida por crio-ME de una sola partícula, Este método proporcionó más
información de la estructura de las subunidades a y b en la porción del complejo incrustada en la membrana que la que era disponible por crista-
Jografía de rayos x. La estructura de la parte inferior izquierda incluye la subunidad a y una extensión de la b, al igual que varias proteínas peque-
ñas asociadas con la estructura F, pero que no es visible en las estructuras cristalográficas. (b) Un modelo atómico consistente con las estructu-
ras cristalinas de rayos x puede encajarse con el contorno deducido por crio-ME lo que properciona una imagen muy mejorada del conjunto de la
estructura de la ATP sintasa. [Fuentes: (a) EMD-3164 y (b) PDB IS 5ARA, A. Zhou et al., eLife 4:e10180, 2015.]
para el fumarato/succinato = 0,031 V) al O, tiene una cia en concentración de una especie química (H*) entre
variación de energía libre estándar menor, aunque aún las dos regiones separadas por la membrana, y (2) la
negativa, de unos -150 kJ/mol. energía eléctrica potencial que se origina con la sepa-
Gran parte de esta energía se usa para bombear ración de cargas cuando un protón cruza la membrana
protones fuera de la matriz. Por cada par de electrones sin un contraión (Fig. 19-17).
transferidos al O, se bombean afuera cuatro protones Tal como se mostró en el Capítulo 11, la variación
por el Complejo I, cuatro por el Complejo TH y dos por en energía libre para la generación de un gradiente elec-
el Complejo IV (Fig. 19-16). Por lo tanto, la ecuación troquímico por una bomba iónica es
vectorial del proceso es
AG = RTIn(Cy4C,) + ZF Ay (19-8)
NADH + 11H; + 40, ——
NAD" + 10H; + H,O (19-7) donde C, y C, son las concentraciones de un ión en dos
regiones siendo C, > €C,; Z es el valor absoluto de su
La energía electroquímica inherente en esta diferencia carga eléctrica (1 para un protón) y Ay es la diferencia
de concentración de protones y en la separación de en potencial eléctrico transmembrana, medido en vol-
cargas, representa una conservación temporal de gran tios.
parte de la energía de la transferencia electrónica. La Para protones,
energía almacenada en este tipo de gradiente, denomi-
nada fuerza protón-motriz, tiene dos componentes: In (C¿/C,) = 2,3(l0g[H*]» — log[H*]w)
(1D) la energía química potencial debida a la diferen- = 2,3(pHy — pHp) = 2.3 ApH
pa PTC
Cite En
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00) OOOO 'Q| DOOCOCODJY
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Matriz (lado ») 2 Po
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Succinato
Ei ia Fumarato
e
NADH + H* NAD*
FIGURA 19-16 Resumen del flujo de electrones y protones a través - las proporciones aproximadas de los Complejos i:H:HHkIW son
de los cuatro complejos de la cadena respiratoria. Los electrones llegan 11:1,3:3,0:6,7. Las líneas a trazos indican la difusión de Q en el plano de
a Q vía Complejos | y Il (así como a través de otras vías mostradas en la la membrana interna y del citocromo c a través del espacio intermem-
Fig. 19-15). Q reducido (QH,) actúa de transportador móvil de electrones brana. [Fuentes: Complejo |, PDB ID 4HEA, A, R. Baradaran et al,
y protones. Pasa electrones al Complejo !!l, el cual los pasa a otro esla- Nature 494:443, 2013. Complejo !l: PDB ID 1Z0Y, F. Sun et al,, Cel!
bón de conexión móvil, el citocromo c. A continuación el Complejo IV 121:1043, 2005. Complejo lil: PDB ID 1BGY, S. Iwata et al,, Science,
transfiere electrones desde el citocromo c reducido al O,. El lujo etectró- 281:64, 1998. Citocromo c. PDB ID 1HRC, G. VW. Bushnell et al., J. Mol.
nico a través de los Complejos l, 1H y (Y va acompañado del flujo de pro- Biol. 214:585, 1990. Complejo IV: PDB 1D 10CC, T. Tsukihara et al.,
tones desde la matriz al espacio intermembrana. En el corazón bovino Science, 272:1136, 1996.]
y la Ecuación 19-8 se reduce a cadena respiratoria desde el NADH al oxígeno. Suponga

quered es 0, 15 V y la diferencia de pH es 0,75 unidades
AG = 2.3RT ApH + FAy Carter atura corporal de 37*C.
En las mitocondrias que respiran activamente, la AY A La Ecuación 19-9 da la variación de energía

medida es de 0,15 a 0,20 Y y el pH de la matriz es unas 0,75 libre estándar cuando se transporta un mol de protones
unidades más alcalino que el del espacio intermembrana. a través de la membrana interna. Sustituyendo los valo-
res de las constantes R y F, 310 K para 7 y los valores
EJEMPLO PRÁCTICO 19-1 Energética de la transferencia medidos para ApH (0,75 unidades) y Ay (0,15 V) en
esta ecuación da AG = 19 kJ/mol (de protones). Debido
electrónica a que la transferencia de dos electrones desde el NADH
Calcule la cantidad de energía conservada en elgradien- hasta el O, va acompañada del bombeo hacia afuera de
te de protones a través de la membrana mitocondrial 10 protones (Ec. 19-7), se conservan en el gradiente
interna por par de electrones transferidos a través de la protónico unos 190 kJ (de los 220 kJ liberados en la
oxidación de 1 mol de NADH).
lado»
[HF =C) HH OH? At H+ o qu4qe 0H
Cuando los protones fluyen espontáneamente a
Bomba favor de su gradiente electroquímico, hay energía dis-
de protones
ponible para producir trabajo. En mitocondrias, cloro-
plastos y bacterias aeróbicas la energía electroquímica
en el gradiente protónico impulsa la síntesis de ATP a
partir de ADP y P,. En la Sección 19.2 volveremos a la
> energética y estequiometría de la síntesis de ATP impul-
sada por el potencial electroquímico del gradiente pro-
lado n a" tónico.
[H*Jx =C, OHT OHT OH” OH” OH" OHT OH7
AG = RT In (C¿/C/) + ZFAN
Durante la fosforilación oxidativa se producen especies
= 2,3RT ApH + FAY de oxígeno reactivas
Diversos pasos en la ruta de reducción del oxígeno en la
FIGURA 19-17 Fuerza protón-motriz. La membrana mitocondrial
mitocondria tienen el potencial para producir radicales
interna separa dos compartimientos de diferente [H*], produciendo dife-
libres muy reactivos que pueden dañar las células. En el
rencias en la concentración química (ApH) y en la distribución de carga
paso de electrones desde QH, al Complejo II y en el
CA”) a través de la membrana. El efecto neto es la fuerza protón-motriz
paso de electrones desde los Complejos 1 y ll a QH,,
(AG) que se puede calcular en la forma indicada aquí. Todo ello se
explica de manera más detallada en el texto,
interviene el radical "'Q- como intermedio. El 'Q” puede,
con una probabilidad baja, pasar un electrón al O, en la estrés oxidativo, y se reduce mucho la producción de
reacción ROS. Aunque la producción en exceso de ROS es clara-
mente perjudicial, concentraciones bajas de ROS pue-
Oz e — “Oz den ser utilizadas por la célula como señal que refleja un
suministro insuficiente de oxígeno (hipoxia) para poner
El radical superóxido libre así generado es muy reacti- en marcha ajustes metabólicos (véase la Fig. 19-34)
vo; su formación también conduce a la producción del Para impedir el daño oxidativo por *O,”, las células
radical hidroxilo libre, “OH, aún más reactivo (Fig. tienen el enzima superóxido dismutasa, que cataliza
19-18). la reacción
Las especies de oxígeno reactivas pueden causar
estragos reaccionando con enzimas, lípidos de membra- 2*07 +2H* —> H202 + Oz
na y ácidos nucleicos dañándolos, En mitocondrias que
respiran activamente desde un 0,1 que reducen la El peróxido de hidrógeno (H,0,) así generado se vuelve
velocidad del flujo de electrones a través de la cadena inocuo por acción de la glutatión peroxidasa (Fig.
respiratoria aumentan la formación de superóxido, qui- 19-18). La glutatión reductasa recicla el glutatión oxida-
zás porque prolongan el tiempo de vida del 'O,” generado a su forma reducida, utilizando electrones del NADPH
do en el ciclo Q. La formación de ROS está favorecida formado por la nicotinamida nucleótido transhidrogenasa
cuando se dan dos circunstancias: (1) las mitocondrias (en la mitocondria) o por la vía de las pentosas fosfato
no están sintetizando ATP (por falta de ADP Oy O,) y, (en el citosol; véase la Fig. 14-21). El glutatión reducido
por tanto, tienen una elevada fuerza protón-motriz y también sirve para mantener los grupos sulfhidrilo de la
una razón QH,/Q alta y (2) hay una razón NADH/NAD* proteína en su estado reducido, impidiendo algunos de
elevada en la matriz. En estas situaciones la mitocon- los efectos deletéreos del estrés oxidativo.
dria está bajo estrés oxidativo (hay más electrones dis-
pomibies para entrar en la cadena respiratoria de los que Las mitocondrias de plantas tienen mecanismos
pueden pasar inmediatamente al oxígeno). Cuando el
alternativos para oxidar el NADH
suminstro de dadores electrónicos (NADH) se corres-
ponde con el de aceptores electrónicos, hay menos Las mitocondrias de plantas proporcionan ATP a la
célula durante periodos de poca iluminación o en la
oscuridad, mediante mecanismos completamente aná-
logos a los utilizados por los organismos no fotosintéti-
Nucleótida Membrana
de nicotinamida mitocondrial Cit e cos. En presencia de luz, la fuente principal de NADH
AA
transhidrogenasa
AA mn AID
a eo pea
TIA ial es una reacción en la que la glicina genera-
A proceso denominado fotorrespiración se con-
í vierte en serina (véase la Fig. 20-48):
toa 2 - E ANaca ul
O, 2 glicina + NAD* —=>

“0: serina + CO, + NHz + NADH + H?
NADH — NAD*» 4 Debido a las razones que se discuten en el Capítulo 20,
las plantas han de realizar esta reacción incluso cuando
no necesitan NADH para producir ATP. Para regenerar
NAD* a partir del NADH que no se necesita, las mito-
condrias de plantas (y de algunos hongos y protistas)
transfieren electrones directamente del NADH a la ubi-
0 y quinona, y de la ubiquinona directamente al O,, sin
Ena 2 G5H
pasar por los Complejos 111 y IV y sus bombas protóni-
estrés reducción de cas. En este proceso se disipa en forma de calor la ener-
oxidativo tioles proteicos gía que contenía el NADH, lo cual en algunos casos es
G55G útil para la planta (Recuadro 19-2). La oxidación del
activo
NADH resistente al cianuro es, por lo tanto, la carac-
terística principal de esta vía de transferencia electróni-
FIGURA 19-18 Formación de ROS en mitocondrias y defensas mito- ca única en plantas; a diferencia de la citocromo oxidasa
condriales. Cuando la velocidad de entrada de electrones en la cadena (Complejo IV), la QH, oxidasa alternativa no es inhibida
respiratoria y la velocidad de transferencia de electrones a través de la por el cianuro.
cadena no está ajustadas aumenta la formación de radical superóxido
CO,) en los Complejos | y 1li, a medida que el radical ubiquinona parcial- RESUMEN 19.1 La cadena respiratoria mitocondrial
mente reducido (Q”) cede un electrón al O,, El superóxido actúa sobre
la aconitasa, una proteína 4Fe-4S (no mostrada), liberando Fe?" En pre- ME” La teoría quimiosmótica proporciona el marco inte-
sencia de Fe”, la reacción de Fenton conduce a la formación del radical lectual para comprender muchas transducciones bioló-
hidroxilo libre (OH) muy reactivo. Las reacciones mostradas en azul gicas de energía entre ellas la fosforilación oxidativa y la
defienden la célula frente a los efectos lesivos del superóxido. El gluta- fotofosforilación. La energía del flujo de electrones se
tión reducido (GSH; véase la Fig. 22-29) cede electrones para la reduc- conserva mediante el bombeo concomitante de proto-
ción del H,O, y de residuos Cys oxidados (-5-5-) en enzimas y otras nes a través de la membrana, lo que produce un gra-
proteínas y el GSH se regenera a partir de la farma oxidada (GS5G) por diente electroquímico, la fuerza protón-motriz.
reducción con NADPH.
RECUADRO 19-2 CORSA ES NONE

| Muchas plantas con flores atraen insectos polinizado-
res liberando moléculas olorosas que mimetizan las
| fuentes de alimentación naturales de los insectos o
| los sitios potenciales para la puesta de los huevos.
| Las plantas polinizadas por moscas o escarabajos,
que normalmente se alimentan o hacen la puesta de
los huevos en estiércol o en carroña, utilizan, a veces,
compuestos malolientes para atraerlos.
Una de las familias de plantas malolientes es la
de las Aráceas, que incluye filodendros, un tipo de
lirios y las coles mofeta. Estas plantas tienen flores
pequeñas agrupadas densamente en una estructura
erecta (espádice) y están rodeadas por una hoja
modificada (espata). Aquélla libera olor a carne
»
podrida o estiércol. Antes de la polinización la espá-
dice se calienta, en algunas especies hasta 20-40 *C FIGURA 1 Col moteta oriental
por encima de la temperatura ambiente. La produc-
ción de calor (termogénesis) ayuda a evaporar las
moléculas olorosas para que se dispersen mejor, y ¿Cómo calienta una col mofeta oriental su espádi-
debido a que tanto la carne podrida como el estiércol ce? Aunque las mitocondrias de plantas, hongos y
están generalmente calientes como consecuencia del eucariotas unicelulares tienen cadenas respiratorias
metabolismo hiperactivo de los microorganismos que son básicamente los mismos que los de animales,
| carroñeros, el calor por sí mismo también podría también tienen una vía respiratoria alternativa. Una
| atraer a los insectos. En el caso de la col mofeta QH, oxidasa resistente al cianuro transfiere directa-
| oriental (Fig, 1), que florece al final del invierno o al mente los electrones desde la reserva de ubiquinona al
principio de la primavera cuando la nieve todavía oxígeno, evitando los dos pasos de translocación de
cubre el suelo, la termogénesis permite que la espá- protones de los Complejos III y IV (Fig. 2). La energía
(Copy ATION 2
dice crezca a través de la nieve. e se podría haber conservado en forma de ATP se
El” En la mitocondria, iones hidruro eliminados de sus tión peroxidasa. Niveles bajos de ROS actúan como
sustratos (tales como el a«—cetoglutarato y el malato) señales para coordinar la fosforilación oxidativa mito-
por la acción de deshidrogenasas ligadas al NAD ceden condrial con otras rutas metabólicas,
sus electrones a la cadena respiratoria que los transfiere M Las plantas, hongos y eucariotas unicelulares tie-
al O, molecular reduciéndolo a H,O. nen, además de la ruta típica de transferencia electróni-
Mi Los equivalentes de reducción del NADH pasan a ca acoplada a la síntesis de ATP, una ruta alternativa
través de una serie de centros Fe-S a la ubiquinona que que recicla el exceso de NADH a NAD*.
transfiere los electrones al citocromo b, primer trans-
portador del Complejo III. En este complejo los electro- 19.2 Síntesis de ATP
nes pasan por dos caminos diferentes a través de dos
citocromos de tipo b y el citocromo c, a un centro Fe-S. ¿Cómo se transforma un gradiente de concentración de
El centro Fe-S pasa electrones, de uno en uno, a través protones en ATP? Hemos visto que la transferencia
del citocromo c, al Complejo IV, la citocromo oxidasa. electrónica libera, y la fuerza protón-motriz conserva,
Este enzima que contiene cobre y que también contiene energía más que suficiente (unos 190 kJ) por “mol” de
citocromos a y a,, acumula electrones pasándolos al O, par de electrones para impulsar la formación de un mol
que se reduce a H,O. de ATP, que requiere unos 50 kJ. La fosforilación oxida-
Ml” Algunos electrones entran en esta cadena de trans- tiva mitocondrial no plantea, por tanto, ningún proble-
portadores por rutas alternativas. El succinato es oxida- ma termodinámico. Pero, ¿qué mecanismo químico
do por la succinato deshidrogenasa (Complejo ID) que acopla el flujo de protones con la fosforilación?
contiene una flavoproteína que pasa los electrones a
través de varios centros Fe-S a la ubiquinona. Los elec- En el modelo quimiosmótico, la oxidación y la fosforilación
trones procedentes de la oxidación de ácidos grasos están obligatoriamente acoplados
pasan a la ubiquinona vía la flavoproteína transferidora
El modelo quimiosmótico propuesto por Peter Mit-
de electrones. La oxidación del glicerol fosfato y del
chell es el paradigma del acoplamiento energético.
dihidroorotato también envía electrones a la cadena
Según el modelo (Fig. 19-19), la energía electroquími-
respiratoria a nivel de QH,.
ca inherente a la diferencia en la concentración de pro-
Ml” Las especies de oxígeno reactivas, que son poten-
tones y a la separación de cargas a través de la membra-
cialmente dañinas, producidas en la mitocondria se
na mitocondrial interna, la fuerza protón-motriz, impul-
inactivan por un conjunto de enzimas protectores entre
sa la síntesis de ATP a medida que los protones fluyen
los que se cuentan la superóxido dismutasa y la gluta-
de manera pasiva de vuelta hacia la matriz a través de
19.2 Síntesis de ATP 725
NADH N AD(P)y* NAD(P)H Ja

Espacio deshidrogenasa deshidrogenasa externa ( Cite |
intermembrana alternativa y
(lado r) f /
¡
j
! | t
Y " ,
E l
Iv | 1
Matriz (lado n)
Oxidasa
alternativa
FIGURA 2 Transportadores de electrones de la membrana interna de las mitocondrias de plantas. Los electrones pueden fluir a través de los
Complejos |, !!l y 1V, al igual que en las mitocondrias de animales, o a través de transportadores alternativos específicos de plantas mediante las |
vías mostradas con flechas azules
libera, en cambio, en forma de calor. Las mitocondrias membrana a la ubiquinona, igualmente sin utilizar el
de plantas también tienen una NADH deshidrogenasa Complejo 1 De este modo, cuando los electrones
alternativa, insensible a la rotenona, inhibidor del pasan por la vía respiratoria alternativa gracias a la
Complejo 1 (véase la Tabla 19-4), que transfiere elec- NADH deshidrogenasa insensible a la rotenona, a la
trones desde el NADH de la matriz directamente a la NADH deshidrogenasa externa, o a la succinato deshi-
ubiquinona, sin utilizar el Complejo I ni el bombeo drogenasa (Complejo 1) y pasan al O, vía la oxidasa
protónico asociado. Las mitocondrias de plantas tie- alternativa resistente al cianuro, la energía no se con- ;
nen además otra NADH deshidrogenasa, en la cara serva como ATP, sino que se libera en forma de calor.
externa de la membrana interna, que transfiere elec- Una col mofeta puede utilizar el calor para fundir la
PATIO —— —
trones desde el NADPH o NADH de int nieve, producir mal olor o atraer escarabajos y moscas.
un poro de la ATP sintasa. Para resaltar el papel cru-

cial de la fuerza protón-motriz, la ecuación de la síntesis
de ATP se escribe algunas veces como
ADP + P, + nH$? —> ATP + H20 + nHf (19-10)
Mitchell utilizó el término “qui-

miosmótico” para describir las
reacciones enzimáticas en. las
que intervienen, simultánea-
mente, una reacción química y
un proceso de transporte. El
proceso global se conoce en
ocasiones como “acoplamiento
quimiosmótico”. Aquí, “acopla-
Henry Lardy, 1917-2010 [Fuente: O Cortesía de D. L. Nelson.]
miento” hace referencia a la
conexión obligada entre la sín-
Peter Mitchell, 1920-1992
tesis mitocondrial de ATP y el Debido a que la oxidación del sustrato impulsa la
[Fuente: AP Photo.]
flujo electrónico a través de la síntesis de ATP los inhibidores de la transferencia elec-
cadena respiratoria; ninguno de los dos procesos puede trónica bloqueen la síntesis de ATP (Fig. 19-20a). Lo
actuar sin el otro. En la Figura 19-20 se muestra la contrario también se cumple: la inhibición de la síntesis
definición operativa de acoplamiento. Cuando se sus- de ATP bloquea la transferencia electrónica en mitocon-
penden mitocondrias aisladas en un tampón que contie- drias intactas. Cuando se proporciona O, y sustratos
ne ADP, P, y un sustrato oxidable tal como el succinato, oxidables pero no ADP a mitocondrias aisladas (Fig.
tienen lugar tres procesos que pueden medirse fácil- 19-20b) no puede haber síntesis de ATP y no se da la
mente: (1) se oxida el sustrato (el succinato da fumara- transferencia electrónica al O,. Henry Lardy, pionero en
to), (2) se consumue O, y (3) se sintetiza ATP. El consu- el uso de antibióticos para explorar la función mitocon-
mo de oxígeno y la síntesis de ATP dependen de la drial, demostró el acoplamiento entre la oxidación y la
presencia de un sustrato oxidable (en este caso el sue- fosforilación utilizando oligomicina o venturicidina,
cinato), así como de ADP y P.. antibióticos tóxicos que se unen a la ATP sintasa de la
Succinato Fumarato
NAD*
Fuerza protón-motriz
== 16 ] mal
ApH A+ DA E
(alcalino
en el interior) | — |Cnegativo
en el interior)
FIGURA 19-19 Modelo quimiosmótico. En esta representación senci- gradiente eléctrico (Ay) que, combinados constituyen la fuerza pro-
lla de la teoría quimiosmótica aplicada a la mitocondria, los electrones tón-motriz. La membrana mitocondrial interna es impermeable a los
del NADH y otros sustratos oxidables pasan a través de una cadena de protones; los protones sólo pueden volver a penetrar en la matriz a tra-
transportadores distribuidos asimétricamente en la membrana interna. vés de canales específicos de protones (F,). La fuerza protón-motriz que
El lujo electrónico está acompañado de transferencia de protores a tra- impulsa el retorno de los protones a la matriz proporciona la energía
vés de la membrana que producen un gradiente químico (ApH) y un para la síntesis de ATP catalizada por el complejo F, asociado con F..
mitocondria. Estos compuestos son inhibidores poten- el coste (energía libre) del bombeo de protones fuera de
tes tanto de la síntesis de ATP como de la transferencia lá matriz en contra de este gradiente es igual o superior
de electrones a través de la cadena de transportadores a la energía liberada por la transferencia de electrones
al O, (Fig. 19-20b), Dado que se sabe que la oligomicina desde el NADH al O,. Llegado este punto, el flujo de
no interacciona directamente con los transportadores electrones ha de parar; la energía libre del proceso glo-
electrónicos sino con la ATP sintasa, se des al del flujo de electrones acoplado al bombeo de proto-
la transferencia de electrones y la síntesis de (0; 1 W sistema está en equilibrio.
obligatoriamente acopladas; una reacción no tiene lugar ay, no obstante, ciertas condiciones y reactivos
sin la otra. que desacoplan la oxidación y la fosforilación. Cuando
La teoría quimiosmótica explica fácilmente la se rompen mitocondrias intactas mediante tratamiento
dependencia de la transferencia electrónica de la sínte- con detergente o corte mecánico, los fragmentos mem-
sis de ATP en la mitocondria. Cuando se bloquea el flujo branosos resultantes aún puede catalizar la transferen-
de protones hacia la matriz a través del canal protónico cia electrónica desde el succinato o el NADH al O, pero
de la ATP sintasa (por ejemplo con oligomicina), no hay no hay síntesis de ATP acoplada a esta respiración.
una vía de retorno de los protones a la matriz, y la salida Ciertos compuestos químicos también producen el des-
continua de protones impulsada por la actividad de la acoplamiento sin romper la estructura mitocondrial.
cadena respiratoria genera un gran gradiente de proto- Entre los desacopladores químicos se encuentran el
nes. La fuerza protón-motriz va aumentando hasta que 2,4-dinitrofenol (DNP) y el carbonilcianuro-p-trifluoro-
Se adiciona Se adiciona Se adiciona

CN- venturicidina
u Desacoplamiento
oligomicina
ATP sintetizado
ATP sintetizado
O, consumido
O, consumido
Se adiciona Se adiciona
succinato ADP +P;
Se adiciona Se adiciona
ADP +P; succinato
(a) Tiempo (b) Tiempo
FIGURA 19-20 Acoplamiento de la transferencia electrónica con la sintetiza ATP. La adición de cianuro (CN), que bloquea la transferencia
síntesis de ATP en la mitocondria. En experimentos para demostrar el de electrones entre la citocromo oxidasa (Complejo 1V) y el O,, inhibe
acoplamiento, se suspenden las mitocondrias en un medio tamponado y tanto la respiración como la síntesis de ATP. (b) Las mitocondrias que
se utiliza un electrodo de O, para seguir el consumo de O,. A intervalos contienen succinato sólo respiran y sintetizan ATP cuando se añaden
se toman muestras que se analizan para determinar la presencia de ATP. ADP y P.. La adición posterior de venturicidina u oligomicina, inhibidores
(a) La adición de ADP y P, solos no da lugar a ningún incremento, a muy de la ATP sintasa, bloquea tanto la síntesis de ATP como la respiración.
poco, de la respiración (consumo de O,; negro) o síntesis de ATP Crojo). El dinitrofenol (DNP) actúa como desacoplante, ya que permite que con-
Cuando se añade succinato empieza inmediatamente la respiración y se tinúe la respiración sin síntesis de ATP.
0H No e ¿N (a)
NO, xr Matriz [H+] =10-2M
1 [K+] = [CI] = 0,1M
NO,
dNH:
HA
2,4-Dinitrophenol | ? a FF, eN
(DNP)
1
E-C—F
Le [H+] = 1072 M
Í
CarbonyIcyanide-p- pH disminuido de 9 a 7;
trifluoromethoxyphenylhydrazone valinomicina presente; sin K*
(FCCP)
FIGURA 19-21 Dos desacoplantes químicos de la fosforilación oxida- (b)>

tiva. DNP y FCCP contienen un protón disociable (rojo) y son muy
hidrofóbicos. Transportan protones a través de la membrana mitocon- (k*]<< tar] MUI T07M
drial interna disipando el gradiente de protomes. Los dos también des-
acoplan la fotofosforilación.
metoxifenilhidrazona (FCCP) (Tabla 19-4; Fig. 19-21).

Estos desacoplantes son ácidos débiles con propiedades
hidrofóbicas que les permiten difundir fácilmente a tra-
vés de la membrana mitocondrial. Una vez la forma
protonada ha entrado en la matriz mitocondrial pueden
liberar el protón, disipando de este modo el gradiente FIGURA 19-22 Demostración del papel de un gradiente de protones
de protones. La estabilización por resonancia deslocali- en la sintesis de ATP. Un gradiente electroquímico impuesto artificial-
za la carga de las formas aniónicas haciendo que sean lo mente puede impulsar la síntesis de ATP en ausencia de un sustrato Oxi-
suficientemente hidrofóbicas para volver a difundir a dable como dador electrónico. En este experimento en dos pasos (a) se
incuban primeramente mitocondrias aisladas en un tampón a pH 9 que
través de la membrana en donde pueden captar un
contiene KCI 0,1 m. La lenta entrada de tampón y KC! a la mitocondria
tón y repetir el proceso. Los ionófor pen a a
valinomicina (véase la Fig. 11-42) peta q circundante.
almente
No
la matriz se encuentre en equilibrio con el medio
se encuentran presentes sustratos oxidables. (b) Las
iones inorgánicos atraviesen fácilmente las membranas.
mitocondrias se separan ahora del tampón de pH 9 y se resuspenden en
Los ionóforos desacoplan la transferencia de electrones
tampón de pH 7 que contiene valinomicina pero no KCI. El cambio de
de la fosforilación oxidativa disipando a través de la
tampón crea una diferencia de dos unidades de pH a través de la mem-
membrana mitocondrial la contribución eléctrica al gra-
brana interna de la mitocondria. El flujo de K* hacia el exterior, llevado a
diente electroquímico.
cabo por ta valinomicina a favor del gradiente de concentración de ión K*
Una predicción de la teoría quimiosmótica es que, pero sin un contraión, crea un desequilibrio de carga a través de la mem-
dado que el papel de la transferencia de electrones en brana (matriz negativa). La suma del potencial químico proporcionado
la síntesis mitocondrial de ATP es simplemente borm- por la diferencia de pH y el potencial eléctrico debido a la separación de
bear protones para crear el potencial electroquímico de cargas constituye una fuerza protón-motriz suficientemente grande para
la fuerza protón-motriz, un gradiente de protones crea- permitir ¡a sintesis de ATP en ausencia de un sustrato oxidable.
do artificialmente debería poder reemplazar la transfe-
rencia de electrones como impulsor de la síntesis de
una proteína integral de membrana. La letra del subín-
ATP. La predicción se ha confirmado experimentalmen-
dice o en F, indica que es sensible a la oligomicina. F,,
te (Fig. 19-22). Las mitocondrias manipuladas para
primer factor identificado como necesario para la fosfo-
imponer una diferencia en concentración de protones y
rilación oxidativa, fue identificado y purificado por
una separación de cargas a través de la membrana inter-
Efraim Racker y colaboradores a principios de la década
na sintetizan ATP en ausencia de un sustrato oxida-
de 1960.
ble; la fuerza protón-motriz es por sí sola suficiente para
En el laboratorio, las peque-
impulsar la síntesis de ATP.
ñas vesículas membranosas for-
madas a partir de la membrana
La ATP sintasa tiene dos dominios funcionales, F, y F, mitocondrial interna llevan a
La ATP-sintasa mitocondrial, es una ATPasa de tipo F cabo la síntesis de ATP acoplada
(véase la Fig. 11-37b), similar en estructura y mecanis- a la transferencia electrónica.
mo a las ATP sintasas de bacterias y (Lal como veremos Cuando se extrae cuidadosamen-
en el Capítulo 20) de cloroplastos. Este gran complejo te la F, las vesículas “desnudas”
enzimático de la membrana mitocondrial interna catali- aún contienen cadenas respirato-
za la formación de ATP a partir de ADP y P,, acompaña- rias intactas y la porción F, de la
Efrairn Racker, 1913-1991 ATP sintasa. Las vesículas pue-
do por el flujo de protones desde el lado p al n de la
[Fuente: Division of Rare den catalizar la transferencia de
membrana (Ec. 19-10). La ATP sintasa, también deno-
and Manuscript
minada Complejo V, tiene dos componentes distintos: electrones del NADH al O,, pero
Collections, Cornell
F,, una proteína periférica de membrana, y F,, que es no producen un gradiente de
University Library.]
protones: F, tiene un poro protónico a través del cual Á partir de esta K”, , la AG” aparente calculada es
los protones se escapan tan rápidamente como son próxima a cero. Ello contrasta con la Po de unos 10*
bombeados por la transferencia electrónica, y, sin un (AG” = -30,5 kJ/mol) para la hidrólisis del ATP libre en
gradiente de protones, las vesículas que carecen de F, solución (es decir, no en la superficie del enzima).
no pueden sintetizar ATP. F, aislada cataliza la hidrólisis ¿A qué se debe esta gran diferencia? La ATP sintasa
de ATP (reacción inversa a la síntesis) lo cual hizo que estabiliza el ATP respecto al ADP + P, uniendo el ATP
inicialmente se la denominara ATPasa F,. Cuando se más fuertemente, liberando la energía suficiente para
añade una preparación de F, aislada a tales vesículas contrarrestar el efecto de fabricar ATP. Las inedidas cui-
desnudas, se reasocia con F,, tapando su poro protónico dadosas de las constantes de unión muestran que F,P,
y se restaura la capacidad de las membranas de acoplar une ATP con una afinidad muy alta (K, s 10m) y el
la transferencia electrónica y la síntesis de ATP. ADP con una afinidad mucho menor (XK, = 10% m). Esta
diferencia en K, se corresponde a una diferencia en ener-
En la superficie de F, el ATP está estabilizado gía de unión de unos 40 kJ/mol, y esta energía impulsa el
equilibrio hacia la formación del producto ATP.
en relación al ADP
Los experimentos de intercambio isotópico con F, puri-
ficada muestran un hecho notable sobre el mecanismo
E! gradiente de protones impulsa la liberación del ATP
catalítico del enzima: en la superficie del enzima, la de la superficie del enzima
reacción ADP + P, + ATP + H,O es fácilmente reversi- Aunque la ATP sintasa equilibra el ATP con ADP + P,, el
ble: la energía libre de la síntesis de ATP es cercana a ATP recién sintetizado no abandona la superficie del
cero. Cuando F, hidroliza ATP en agua marcada con YO, enzima en ausencia de un gradiente de protones. Es el
el P, formado contiene un átomo de '0. La medida cui- gradiente protónico el que provoca que el enzima libere
dadosa del contenido en 'O del P, formado in vitro por el ATP formado en su superficie. El diagrama de la coor-
la hidrólisis de ATP catalizada por F, muestra que el P, denada de la reacción del proceso (Fig. 19-24) mues-
contiene, no uno, sino tres o cuatro átomos de 90 (Fig. tra la diferencia entre el mecanismo de la ATP sintasa y
19-23). Ello indica que el enlace pirofosfato terminal el de muchos otros enzimas que catalizan reacciones
del ATP se rompe y rehace repetidamente antes de que endergónicas.
el P, abandone la superficie del enzima. Con el P, líbre Para que la síntesis de ATP sea continua, el enzima
para dar tumbos en su sitio de unión, cada hidrólisis debe ciclarse entre una forma que une ATP muy fuerte-
inserta '*O al azar en una de las cuatro posiciones del P.. mente y una forma que libera el ATP. Los estudios quí-
Esta reacción de intercambio se da en co os F F icos> cristalográficos de la ATP sintasa revelan la
sin energía (sin gradiente protónico) y con AA 1 de esta alternancia en la función.
intercambio no requiere el aporte de energía”
Los estudios cinéticos de las velocidades iniciales
de la síntesis e hidrólisis del ATP confirman la conclu-
sión de que la AG” de la síntesis del ATP sobre el
enzima es cercana a cero. A partir de las velocidades
de hidrólisis medidas (k, = 10 s”) y de síntesis (k_, =
24 s, la constante de equilibrio calculada para la
ATP + H20 +
reacción
Enz-ATP == Enz-(ADP + P;)

MAA ADP
Y
|
+
Yo
es
y Le =10 /
Mar J
pS dl
(b)
FIGURA 19-23 Mecanismo catalítico de F.. (a) Experimento de intercambio de YO. F, solu-
bilizado a partir de membranas mitocondriales se incuba con ATP en presencia de agua mar-
cada con '0. A intervalos, se toma una muestra de la solución y se analiza la incorporación de
*O en el P, producido en la hidrólisis del ATP. En unos minutos, el P, contiene tres o cuatro
átomos de “O, lo que indica que tanto la hidrólisis como la síntesis de ATP han tenido lugar
varias veces durante la incubación. (b) Probable complejo del estado de transición para la sín-
tesis e hidrólisis del ATP por la ATP sintasa (de PDB ID 18MP). La subunidad a se muestra en
gris, la $ en púrpura. Los residuos cargados positivamente 8-Arg*? y a-Arg?” coordinan dos
oxígenos del intermedio tosfato pentacovalente; f-Lys'** interacciona con un tercer oxígeno y
el ión Mg?" estabiliza aún más el intermedio. La esfera azul representa el grupo saliente (H,0).
Estas interacciones tienen como resultado un rápido equilibrio de ATP y ADP + P, en el sitio
activa. [Fuente: (b) de PDB 1D 1BMF, J, P. Abrahams et al., Nature 370:621, 1994.]
19.2 Síntesis
de ATP 729
80 FIGURA 19-24 Diagramas de las coordenadas de reacción

Enzima típico ATP sintasa ATP para la ATP sintasa y para un enzima más típico. En una reac-
(en solución) ción catalizada por un enzima típico (izquierda), alcanzar el
60| +
estado de transición (4) entre sustrato y producto es la principal
z Pp ADP+P; barrera energética que se ha de superar. En la reacción catalizada
2 40p- por la ATP sintasa (derecha), la principal barrera es la liberación
> ES [E-ATP]
del ATP del enzima, mo su formación. La variación de energía libre
z
“ 20+ E-ADP+P; para la formación de ATP a partir de ADP y P, en solución acuosa
es grande y positiva, pero en la superficie del enzima la muy
fuerte unión del ATP proporciona suficiente energía de unión para
0 rr
hacer que la energía libre del ATP ligado al enzima sea próxima a
E+S la del ADP + P, por lo que la reacción es fácilmente reversible. La
constante de equilibrio es próxima a 1. La fuerza protón=motriz
Coordenada de reacción proporciona la energía libre necesaria para la liberación del ATP
Cada subunidad /3 de la ATP sintasa puede adoptar tres mos. La subunidad c es un poli-
péptido pequeño (M_8.000), muy
conformaciones diferentes hidrofóbico que consiste casi
La F, mitocondrial tiene nueve subunidades de cinco exclusivamente en dos hélices
tipos distintos, con la composición a,8,yóe. Cada una de transmembrana, con un pequeño
las tres subunidades f tiene un sitio catalítico para la bucle que se extiende desde el
síntesis de ATP. La determinación cristalográfica de la lado de la matriz de la membrana.
estructura de la F, por John E. Walker y sus colegas La estructura cristalográfica de la
muestra detalles estructurales muy útiles para explicar F,F, de levadura, resuelta en
el mecanismo catalítico del enzima. La porción en forma 1999, muestra el ordenamiento
de pomo que sobresale de F, es una esfera aplanada de de las subunidades c. El complejo
8 nm por 10 nm formada por subunidades «a y 8 alterna- de levadura tiene 10 subunidades John E. Walker [Fuente:
das, con una ordenación a modo de gajos de naranja c, cada una de las cuales contiene O Findlay Kember/
(Fig. 19-25a-c). Los polipéptidos que constituyen el dos hélices iransmembrana apro- Associated Press.)
tallo se ordenan de manera asimétrica en la estructura ximadamente perpendiculares al
cristalográfica de F,, con un dominio d única s plano de la membrana, que se ordenan en dos círculos
nidad y actuando como un eje central q
otro dominio de -y asociado principalme ARO subuni
. Los extremos amino de las hélices de cada
c forman el círculo interno; el círculo externo,
las tres subunidades $, la designada P-vacía (19-25b). de unos 55 Á de diámetro, se forma con las hélices car-
Aunque la secuencia de aminoácidos de las tres subuni- boxilo terminales. Las subunidades c en este anillo c
dades f es idéntica, sus conformaciones difieren en giran conjuntamente como una unidad alrededor de
parte por la asociación de la subunidad y con sólo una un eje perpendicular a la membrana. Las subunida-
de las tres. des e y y forman una especie de pie y de pierna que
Las diferencias en conformación entre las subuni- sobresalen desde el lado de abajo de F, (membrana),
dades / se extienden a diferencias en sus sitios de unión sujetándose fuertemente en el anillo que forman las
de ATP/ADP. Cuando se cristaliza la proteína en presen- subunidades c. La subunidad a está formada por varias
cia de ADP y App(NB)p, un análogo estructural muy hélices hidrofóbicas que abarcan la membrana en asocia-
parecido al ATP pero que no puede ser hidrolizado por ción estrecha con una de las subunidades c del anillo c.
la actividad ATPasa de F., se encontró App(NH)p en el Se puede combinar la información estructural obtenida
sitio de unión de una de las tres subunidades 8, ADP en en los estudios de F, bovina, de F_F, de levadura y el
otra, mientras que la tercera se encontraba vacía. Las anillo c del anaerobio estricto Iiyobacter tartaricus
correspondientes conformaciones de la subunidad 4 se para obtener el dibujo esquemático de la Figura 19-25a.
denominan P-ATP, 6-ADP y f-vacía (19-25b). Esta dife-
rencia en la unión de nucleótidos entre las tres subuni-
La catálisis rotacional es la clave en el mecanismo
dades es esencial en el mecanismo del complejo.
de unión y cambio de la síntesis de ATP
NH) Sobre la base de estudios
B
o 0 0 N cinéticos y de unión detalla-
ud
O—PqN—P—0—P—0—CHa
7 si
J dos de las reacciones catali-
zadas por F,F,, Paul Boyer
propuso un mecanismo de
catálisis rotacional en el
Enlace 3-y
no hidrolizable que los tres sitios activos
OH OH situados sobre F' alternan en
App(NH)p (8,y-imidoadenosina 5'-trifosfato) la catálisis de la síntesis de
Paul Boyer [Fuente: Lacy
ATP (Fig. 19-26). Una subu-
El complejo F,, con su poro protónico, está com- Atkins/Associated Press/ nidad 4 determinada empie-
puesto por tres subunidades, a, b, y c, en la proporción AP images.] za en conformación 3-ADP,
ab,c . en donde » oscila entre 8 y 15 en diversos organis- que une ADP y P, del medio.
FIGURA 19-25 Complejo de la ATP sintasa mitocondrial. (a) Dibujo (b) Vista inferior de F, e
esquemático del complejo FF. (b) F, en visión superior (es decir, desde
el lado n de la membrana), mostrando las tres subunidades 8 (tonalida-
des púrpura) y las tres subunidades «r (tonalidades de gris) y el eje cen- a A A lo B-ATP
tral (subunidad y, verde). Cada subunidad $, cerca de su interfase con la ye ñ
subunidad e vecina, tiene un sitio de unión a nucleótidos esencial en la
actividad catalítica. La Única subunidad y se asocia principalmente con
uno de los tres pares ef, provocando que cada una de las tres subunida- e y
des 8 tenga una conformación ligeramente diferente con diferentes E > : A ATP
sitios de unión a nucleótidos. En el enzima cristalino, una subunidad,
f-ADP, contiene ADP (amarillo) en su sitio de unión, la siguiente, 6-ATP,
contiene ATP (rojo), y la tercera, 8-vacía, no contiene nucleótido unido,
(c) Visión lateral del enzima completo (en el plano de la mem- . JE , . >
brana). La porción F, tiene tres subunidades a y tres 4 ordenadas a 1 a A a
modo de gajos de naranja alrededor de un eje central, la subunidad y E
tverde). (Se han omitido dos subunidades e y una $ para poder visuali-
zar la subunidad y y los sitios de unión del ATP y ADP en las subunida-
des M4). La subunidad á confiere sensibilidad a la ofigomicina sobre la
ATP sintasa y la subunidad e puede servir para inhibir la actividad
ATPasa del enzima en algunas circunstancias. La subunidad F, está com-
puesta por una subunidad a y dos subunidades b que anclan el complejo
F,F, en la membrana y actúan como un estátor, manteniendo las subuni-
dades a y f en su sitio. E, también incluye el anillo c formado por subu- (c) Vista lateral de F¿F,
nidades c idénticas (entre 8 y 15, según la especie) que son proteinas
pequeñas e hidrofóbicas. El anillo e y la subunidad a interaccionan y pro-
porcianan un paso transmembrana para los protones. Cada subunidad c
tiene un residuo Asp crítico cerca del centro de la merbrana que eperi-
menta protonación/desprotonación durante el ciclo catalítico de la ATP
sintasa. Aquí se muestra el anillo c,, homólogo perteneciente a la Na”-
ATPasa de /lyobacter tartaricus, de la que se conoce bien su estructura.
En él, los sitios de unión de Na”, que se corresponden con los sitios de
unión de protones del complejo F,F, se muestran con sus Na" uni-
dos (esferas rojas). (d) Visión de F, perpendicular a la (et
igual que en (c), las esferas rojas representan los sitios de
o sitios de unión de protones en los residuos Asp. [Fuentes: F: PDB ID
18MF, 4. P. Abrahams et al, Nature 370:621, 1994, PDB ID 1JNV, A. C.
Hausrath et al., J Biol Chem. 276:47.227, 2001; PDB 1D 2A7U, 5.
Wilkens et al, Biochernistry 44:11.786, 2005; PDB ID 2CLY, V. Kane Dic-
kson et al, EMBO /. 25:2911, 2006; F, PDB ID 189U, O. Dmitriev et al, J
Biol. Chern. 274:15.598, 1999; anillo c: PDB 1C 1YCE, T. Meier et al,
Science 308:659, 2005.
j— de protones
en [f.,
de
>
(d) Vista inferior de F,,
Sitios de unión
de Na*o
protones en
residuos Ásp
y* (ci en mitocondrias de levadura)

A continuación la subunidad cambia de conformación, observando como, al hidrolizarse ATP, se mueve en

adoptando la forma f-ATP que une y estabiliza fuerte- relación a a,6, que había sido inmovilizada previamente
mente el ATP, lo que comporta el rápido equilibrio del en un portaobjetos del microscopio. (La esperada inver-
ADP + P, con el ATP en la superficie del enzima. Final- sión de la rotación cuando se estaba sintetizando ATP no
mente, la subunidad cambia hacia la conformación se pudo probar en este experimento; no existe un gra-
B-vacía, que tiene una afinidad muy baja por el ATP, por diente protónico que impulse la síntesis de ATP). Cuan-
lo que el ATP recién sintetizado se libera de la superficie do se realizó el mismo experimento con el complejo FF,
del enzima. Cuando esta subunidad vuelve a adoptar la completo (no únicamente F') la totalidad del anillo for-
conformación fP-ADP y une ADP + P, se inicia otra mado por subunidades c rotó junto con y (Fig. 19-27).
ronda de catálisis. La “varilla” rotó en la dirección predicha los 360”. La
Los cambios de conformación, esenciales en este rotación no fue suave, sino que se dio en tres pasos dis-
mecanismo, están impulsados por el paso de protones a cretos de 120”. La eficiencia de este mecanismo al con-
través de la porción F', de la ATP sintasa. La corriente vertir energía química en movimiento es cercana al
de protones a través del poro F, hace que el cilindro 100%, como se puede calcular a partir de la velocidad de
formado por las subunidades c y la subunidad y anclada hidrólisis conocida de ATP por una molécula de F, y la
giren alrededor del eje mayor de y, que es perpendicu- fuerza de fricción sobre el largo polímero de actina. En
lar al plano de la membrana. La subunidad y pasa a palabras de Boyer “¡una máquina molecular espléndida!”
través del centro del esferoide a,8,, que se mantiene
quieto respecto a la superficie de la membrana gracias a ¿De qué modo el flujo protónico a través del Complejo F,
las subunidades b, y 6 (Fig. 19-25a). Con cada rotación
produce movimiento rotatorio?
de 120”, y se pone en contacto con una subunidad $
diferente, y el contacto provoca el cambio de la subuni- En la Figura 19-28 se muestra un modelo posible que
dad Ba la conformación P-vacía. explica de qué modo el flujo electrónico y el movimien-
Las tres subunidades $ interaccionan de tal modo to rotatorio están acoplados en el Complejo F,. Las
que cuando una adopta la conformación P-vacía, la yeci- subunidades individuales de F, están dispuestas en un
na de un lado ha de adoptar la conformación 4-ADP, y círculo alrededor de un núcleo central que está relleno,
la del otro la £-ATP. Por lo tanto, una rotación completa probablemente, de lípidos de membrana. En cada subu-
de la subunidad y provoca que cada subunidad 4 se nidad c hay un residuo Asp (o Glu) crítico localizado
cicle a través de sus tres conformaciones posibles, y en aproximadamente en el centro de la membrana. Los
cada rotación se sintetizan y se liberan de la superficie protones cruzan la membrana a través de una ruta for-
del enzima tres moléculas de ATP. mada por subunidades a y c. La subunidad a tiene un
Una predicción importante de (epa as TUN protónico que va desde el lado p (citosol) al
unión y cambio es que la subunidad y la membrana, donde termina cerca del resi-
un sentido cuando FF, sintetiza ATP, y en el sentido duo Asp de la subunidad c vecina. Un protón difunde
opuesto cuando lo hidroliza. Está predicción se demos- desde el lado p (en donde la concentración de protones
tró con los elegantes experimentos realizados en los es relativamente elevada) a través de este semicanal y
laboratorios de Masasuke Yoshida y Kazuhiko Kinosita, se une al residuo Asp, eliminando la carga negativa del
Jr. La rotación de y en una única molécula de F, se visua- grupo carboxilo y desplazando, de este modo, un resi-
lizó en un microscopio gracias a la unión a y de un polí- duo Arg cargado positivamente que había estado asocia-
mero de actina fluorescente, molécula larga y delgada, y do al Asp. Este residuo Arg bascula lateralmente y
FIGURA 19-26 Modelo de cambio de unión para la ATP sintasa. E!

complejo F, tiene tres sitios de unión de nucleótidos de adenina no equi-
valentes, uno por cada par de subunidades a y $. En un momento deter-
minado, uno de estos sitios está en la conformación $-ATP (que une
ATP fuertemente), un segundo está en la conformación 4-ADP (unión
débil) y un tercero está en la conformación fG-vacía (unión muy débil).
En esta vista desde el lado n la fuerza protón-motriz hace que el eje cen-
tral, subunidad «y, mostrada como una flecha verde, se ponga en con-
tacto con cada par de subunidades af de forma sucesiva. Ello produce
un cambio de conformación cooperativo en el que el sitio $-ATP se con-
vierte en la conformación fP-vacía y el ATP se disocia; el sitio B-ADP se
convierte en ta conformación f$-ATP, que promueve la condensación del
ADP y P, unidos para formar ATP; y el sitio S-vacío se convierte en un
sitio $-ADP, que une débilmente ADP y P que difunden desde el disal-
vente. Este modelo, basado en observaciones experimentales, requiere
que al menos dos de los tres sitios catalíticos alternen en actividad; el
ATP no se puede liberar de uno de los sitios hasta que se fijen ADP y P,
al otro. Observe que la dirección de rotación cambia de sentido cuando
la ATP sintasa actúa corno una ATPasa como, por ejemplo, en el experi-
mento mostrado en la Figura 19-27.
FIGURA 19-27 Demostración experimental de la rotación de F, y y. F, rediseñado

por técnicas de ingeniería genética para contener una serie de residuos His se une
fuertemente a un portaobjetos de microscopio recubierto con un complejo de Ni; se
Filamento de actina une biotina covalentermente a una subunidad c de F,, La proteína avidina, que se une
muy fuertemente a la biotina, está unida covalentemente a largos filamentos de actina
marcados con una sonda fluorescente. La unión de biotina-avidina une ahora los fila-
mentos de actina a la subunidad c. Cuando se aporta ATP como sustrato de la activi-
dad ATPasa de F,, se observa que el filamento marcado gira continuamente en una
dirección, y ello demuestra que gira el citindro F, de subunidades c. En otro experi-
mento, el filamento de actina fluorescente se unió directamente sobre la subunidad y.
La serie de micrografías de fluorescencia (leídas de izquierda a derecha) muestra la
posición del filamento de actina a intervalos de 133 ms. Observe que, a medida que
gira el filamento, se produce un salto discreto cada once marcos. Probablemente el
cilindro y el eje se mueven como una unidad. [Fuentes: Cartoon Information de
Y. Sambongi et al., Science 286:1722, 1999. Micrografías: Cortesía de Riohel Yasuda y
Kazuhiko Kinosita, de Yasuda et al., Cel! 93:1117, 1998,0 Elsevier.]
ATP
- ADP+P,
His
His
Complejo de Ni
establece una interacción con el Asp de la subunidad c resultado del movimiento térmico (browniano), que se
vecina en el anillo al tiempo que desplaza el protón del hace unidireccional debido a la gran diferencia en la
Asp; este protón sale a través del segundo semicanal al concentración de protones a través de la membrana. El
lado n, en donde las concentración de protones es rela- número de protones que han de ser transferidos para
tivamente baja, lo que completa la transferencia de un producir una rotación completa del anillo c es igual al
equivalente de prones desde el exterior al interior de la número de subunidades c del anillo. Estudios del anillo
matriz. En este momento otro protón ha entra
semicanal en el lado p, se ha desplazado hast: Lay ST é os X han demostrado que el número de
la siguiente subunidad c, la ha protonado subunidades c es diferente en organismos diferentes.
(de nuevo desplazando Arg), la cual desplaza a su (Fig. 19-29). En mitocondrias bovinas el número es 8,
vez un protón de la siguiente subunidad c, y así sucesi- en mitocondrias de levadura y E. coli es 10 y el número
vamente. El movimiento rotacional del anillo e es el de subunidades c puede ser tan elevado como 15 en la
FIGURA 19-28 Modelo de rotación del anillo c impulsada por proto-

O ElH' desplazado
sale por el lado N. )1+ nes. La subunidad a del complejo F, de la ATP sintasa (véase la Fig.
O El anillo cry gira, 19-253) tiene dos semicanales hidrofílicos para protones, uno que va
—— Arg” vuelve al desde el lado P ai centro de la membrana, el otro desde el centro de la
semicanal del lado p. membrana al lado y (matriz). Las subunidades c individuales en F, (10
en el enzima de levadura) se disponen en un círculo alrededor de un
núcleo central. Cada subunidad c tiene un residuo Asp crítico aproxima-
damente a medio camino a través de la rmembrana que puede ceder o
aceptar un protón (H” rojo). La subunidad tiene una cadena lateral de
Arg cargada positivamente que establece una interacción electrostática
O Arg?” gira y con el carboxilato cargado negativamente del Asp de la subunidad c
desplaza H* 1 vecina. Esta subunidad c está posicionada inicialmente de modo que un
del Asp.
protón que entra en el semicanal por el lado P (en donde la concentra-
ción de protones es relativamente alta) encuentra y protona el residuo
Asp debilitando su interacción con la Arg. La cadena lateral de la Arg
gira hacia el residuo Asp protonado de la siguiente subunidad c y des-
plaza su protón del carboxilo, al tiempo que se forma una nueva interac-
ción electrostática Arg-Asp. El protón desplazado se mueve a través del
segundo semicanal en la subunidad a y se libera en el lado n. La subuni-
dad c con su residuo Asp desprotonado se mueve de modo que su par
Semicanal (lado r)
Arg-Asp queda orientado al semicanal del lado P con lo que se inicia un
O) Elprotón desplaza la + (1) El protón entra en el segundo ciclo: entrada de un protón, protonación de Asp, desplazamiento
Arg?” a la subunidad c semicanal del lado ?. de Arg y salida del protón. La rotación del anillo tiene lugar por moción
adyacente.
térmica (browniana) y se engrana de manera efectiva. La orientación del
gradiente de protones dicta la dirección del flujo protónico con lo que se
consigue una rotación del anillo c prácticamente unidireccional. [Fuente:
PDB 1D 10HH, E. Cabezon et al., Nature Struct. Bio! 10:744, 2003.]
RECUADRO 19-3 MÉTODOS MNAE

ERA NE
|
| En la microscopia de fuerza atómica (AFM), la
punta fina de una sonda microscópica unida a un Láser
brazo de palanca flexible se desplaza por una superfi-

| cie desigual como, por ejemplo, una membrana (Fig. ) | (detecta la deflección
del brazo de palanca)
|. 1). Las interacciones electrostáticas y de van der
| Waals entre la punta y la muestra produce una fuerza
| que mueve la sonda arriba y abajo (en la dimensión 2)
| a medida que encuentra colinas y valles en la muestra.
¡Un rayo láser reflejado por el brazo de palanca detec-
7 E SA
ta movimientos muy pequeños, del orden de 1 Á. En TT MuestaQ 2 O >,
un tipo de microscopio de fuerza atómica, se mantie- z
ne constante la fuerza sobre la sonda (relativa a una
¡ fuerza estándar, del orden de piconewtons) mediante
| un circuito de retroalimentación que que hace que la
plataforma que sostiene la muestra suba o baje para La platatorma bascula para mantener
constante la presión de la punta del brazo
mantener la fuerza constante. Una serie de barridos de palanca. Se representan desviaciones
| en las dimensiones x e y (el plano de la membrana) en la dimensión z en función de x, y.
| proporciona un mapa de contorno tridimensional de
| la superficie con una resolución próxima a la escala AÑ >"
atómica (0,1 nm en la dimensión vertical, 0,5 a 1,0 nm
en las dimensiones laterales). .
«NR An Je>
En casos favorables la AFM se puede utilizar A
para estudiar moléculas proteicas de membrana indi-
Cord
FIGURA 1 Principio de la microscopia de fuerza atómica.
viduales, tales como las subunidades c del complejo
F, (Fig. 19-29c, d).
cianobacteria Spirulina platensis. Se ha calculado que

ATION
siendo siempre el valor de x, algunas veces llamado la
la velocidad de rotación en mitocondrias intactas es de razón P/O o razón P/2e-, un número entero, Tanto la
unas 6.000 rpm (unas 100 rotaciones por segundo). síntesis de ATP como el consumo de O, se pueden
El acoplamiento quimiosmótico permite que las

(a) Vista superior
estequiometrías del consumo de O, y de la síntesis
de ATP no se correspondan con números enteros
Antes de la aceptación general del modelo quimiosmó-
tico de la fosforilación oxidativa se pensaba que la ecua-
ción de la reacción global tendría la siguiente forma:
zZADP + xP, + 140, + H* + NADH —>

xATP + H20 + NAD” (19-11)
FIGURA 19-29 Diferencias entre especies en el número de subunida-

des c en el anillo c del complejo F_. Se han determinado las estructuras
del anillo c de diversas especies mediante cristalografía de rayos X. Cada
hélice del anillo interior constituye la mitad de uma subunidad c que
tiene forma de horquilla. El residuo Asp esencial en la posición 61 se
muestra como un punto rojo. Las vistas del anillo c perpendiculares a la
membrana muestran el número de subunidades c para (a) la mitocon-
dria bovina (8 subunidades) y (b) la mitocondria de levadura (10). Se ha
utilizado la microsccopia de fuerza atómica (véase el Recuadro 19-3)
para visulizar los anillos c de (c) una bacteria termofilica Bacillus espe-
cies TA2.A1 (13) y (d) espinaca (14). Según el modelo de la Fig. 19-28
diferentes números de subunidades c en el anillo c deberían rendir razo»
nes diferentes de ATP formado por par de electrones que pasan a través
de la cadena respiratoria (es decir, diferentes razones P/O). [Fuentes: (a)
PDB 1D 10HH, E. Cabezon et al., Nature Struct. Biol 10:44, 2003, (c) D.
Matthies et al., 4 Mol. Biol. 388:611, 2009. (d) H. Seelert et al., Nature
405:418, 2000. Reproducido con permiso de Macmillan Publishers Ltd.]
medir si se suspenden mitocondrias intactas en una cotransportador antiparalelo transporta cuatro cargas
solución con un sustrato oxidable, tal como el succina- negativas hacia fuera a cambio de tres que entran, su
to o el NADH, y se aporta O,. En principio, estas dos actividad viene favorecida por el gradiente electroquí-
medidas habrían de proporcionar el número de ATP mico transmembrana que proporciona a la matriz una
sintetizados por Y+0, consumido, la razón P/O. La carga neta negativa; la fuerza protón-motriz impulsa el
mayor parte de los experimentos daban una razón P/O intercambio ATP-ADP. La nucleótido de adenina trans-
(ATP a 40,) de entre 2 y 3 cuando se utilizaba NADH locasa es inhibida específicamente por el atractilósido,
como dador de electrones, y entre 1 y 2 cuando se uti- un glucósido tóxico producido por una especie de
lizaba succinato. Dando por sentado que P/O había de cardo. Si se inhibe el transporte de ADP al interior y de
dar un número entero, la mayor parte de los científicos ATP al exterior de la mitocondria, no se puede regene-
creyeron que la razón P/O debía ser de 3 para el NADH rar el ATP citosólico a partir del ADP, lo que explica la
y 2 para el suecinato, y durante muchos años estos toxicidad del atractilósido.
valores se han encontrado en artículos de investigación Un segundo sistema de transporte de la membrana
y en libros de texto. esencial para la fosforilación oxidativa es la fosfato
Con la introducción del paradigma quimiosmótico translocasa, que promueve el cotransporte paralelo de
del acoplamiento de la síntesis de ATP con la transfe- un H,PO/ y un H- al mterior de la matriz. Este proceso
rencia electrónica, no había ninguna necesidad teórica de transporte también está favorecido por el gradiente
de que la razón P/O fuera un número entero. Las pre- de protones transmembrana (Fig. 19-30). Observe que
guntas pertinentes sobre la estequiometría se transfor- el proceso requiere que un protón pase del lado p al
maron en: ¿cuántos protones se bombean hacia afuera lado n de la membrana interna, consumiendo parte de
por la transferencia electrónica desde un NADH al O,? y la energía de la transferencia electrónica. Mediante
¿Cuántos protones han de entrar a través de complejo disección suave de la mitocondria con detergentes
F,F, para impulsar la síntesis de un ATP? La medida de puede aislarse un complejo de la ATP sintasa y las dos
los flujos de protones es técnicamente complicada; se translocasas, el ATP sintasoma, lo que sugiere que las
han de tener en cuenta la capacidad amortiguadora de funciones de estas tres proteínas están fuertemente
las mitocondrias, las pérdidas no productivas de proto- integradas.
nes a través de la membrana interna y el uso de gradien- ATP y ADP cruzan la membrana mitocondrial exter-
tes de protones en funciones diferentes de la síntesis de na vía un canal aniónico dependiente de voltaje (VDAC)
ATP, tales como el transporte de sustratos a través de la
membrana mitocondrial interna (descrito más adelan-
NN Nucleótido de Fostato
nina translocasa ATP sintasa translocasa
q AT (| (0) transportador (cotransportador
> A antiparalelo) paralelo) _
Espacio ATP*- _H
experimental más aceptado para el número de protones
intermembrana ADP?- He H2PO4
necesarios para impulsar la síntesis de una molécula de EF AF 4 ++ +++ +++ : +
ATP es de 4, de los cuales uno se utiliza en el transpor- ARAS AIDA IAMAAA! ALIAGA LU
te de P,, ATP y ADP a través de la membrana mitocon-

OOOO LOcuUA JUCaCO Focomsaa po cc
drial (véase más adelante). Si por cada NADH se bom-
bean hacia afuera 10 protones y para producir un ATP Matriz
han de entrar 4, la razón P/O basada en los protones es
de 2,5 cuando el NADH es el dador y 1,5 (6/4) cuando
lo es el succinato. No obstante, tal como veremos en el
Ejemplo práctico 2, la estequiometría protónica de la
H¿POZ H'
síntesis de ATP por la ATP sintasa depende del número
de unidades c en F,, que va de 8 a 15 según la especie.
La fuerza protón-motriz suministra energía

para el transporte activo FIGURA 19-30 Nucleótido de adenina y fosfato translocasas. Siste-
Aunque el papel principal del gradiente de protones en mas de transporte de la membrana mitocondrial interna transportan
la mitocondria es suministrar energía para la síntesis de ADP y P, al interior de la matriz y ATP recién sintetizado al citosol. La
ATP la fuerza protón-motriz también sirve para impul- nucleótido de adenina translocasa es un sistema de cotransporte antipa-
sar varios procesos de transporte esenciales para la ralelo; la misma proteína lleva ADP a la matriz y ATP al exterior. El efecto
fosforilación oxidativa. La membrana mitocondrial de reemplazar ATP* por ADP> en la matriz es la salida neta de una
interna es generalmente impermeable a las especies carga negativa, lo que está favorecido por la diferencia de carga a través
cargadas, pero hay dos sistemas específicos que trans- de la membrana interna (exterior positivo). A pH 7, el P se halla pre-
portan ADP y P, a la matriz y ATP hacia el citosol exte- sente tanto en forma de HPO,? como de H,PO,; la fosfato translocasa
rior (Fig. 19-30). es específica para H,PO,”. No hay flujo neto de carga durante el cotrans-
La nucleótido de adenina translocasa, integral porte paralelo de H,PO, y H” pero la concentración de protones relati-
de la membrana interna, une ADP* en el espacio inter- vamente baja en la matriz favorece el movimiento de H” hacía el interior.
membrana y lo transporta a la matriz en intercambio De este modo la fuerza protón-motriz es responsable tanto de propor-
con una molécula de ATP* transportada simultánea- cionar la energía para la síntesis de ATP como del transporte de sustra-
tos (ADP y P) al interior y del producto (ATP) fuera de la matriz mito-
mente hacia el exterior (véase la Fig. 13-11 para las
condrial. Estos tres sistemas de transporte se pueden aislar como un
formas iónicas del ATP y ADP). Debido a que este
único complejo ligado a la membrana (ATP sintasoma).
19,2 Síntesis de ATP 735
que es un barril $ de 19 hebras (véase la Fig, 11-11) con NAD* por el O, vía la cadena respiratoria? Sistemas
una apertura de unos 27 Á de anchura que conecta el especiales de lanzadera transportan equivalentes de
citososl con el espacio intermembrana. Cada VDAC, reducción desde el NADH citosólico a las mitocondrias
cuando está abierto, puede transportar 10% moléculas mediante una ruta indirecta. La lanzadera de NADH
de ATP por segundo. La apertura está accionada por más activa, que funciona en las mitocondrias de hígado,
voltaje, tal como indica su nombre, y en algunas condi- riñón y corazón, es la lanzadera del malato-asparta-
ciones VDAC está cerrado al ATP. to (Fig. 19-31). Los equivalentes de reducción del
NADH citosólico se transfieren en primer lugar al oxala-
EJEMPLO PRÁCTICO 19-2 Estequiometría cetato citosólico obteniéndose malato por acción de la
malato deshidrogenasa citosólica. El malato así formado
de la producción de ATP:
pasa a través de la membrana interna mediante el siste-
Efecto del tamaño del anillo C ma de transporte del malato-a-cetoglutarato. Dentro de
la matriz los equivalentes de reducción pasan por acción
(a) Si la > ATP sintasa de mitocondrias bovinas tiene 8
de la malato deshidrogenasa mitocondrial al NAD* for-
subunidades e por cada anillo c ¿Cuál es la razón predi-
mando NADH; este NADH puede pasar electrones de
cha de ATP formado por NADH oxidado? (b) ¿Cuál es el
forma directa a la cadena respiratoria. En el paso de
valor predicho para la mitocondria de levadura con 10
este par de electrones al O, se generan unas 2,5 molé-
subunidades e por ATP sintasa? (c) ¿Cu<les son los
culas de ATP. El oxalacetato citosólico debe regenerarse
valores correspondientes para los electrones que entran
mediante reacciones de transaminación así como
en la cadena respiratoria a partir del FADH,?
mediante la actividad de los transportadores de mem-
brana para empezar otro ciclo de la lanzadera,
Solución: (a) La pregunta nos pide determinar cuantos
El músculo esquelético y el cerebro utilizan una
ATP se producen por NADH. Esta es otra manera de
lanzadera diferente del NADH, la lanzadera del glice-
pedirnos que calculemos la razón P/P, o x en la Ecua-
rol-3-fosfato (Fig. 19-32). Difieere de la lanzadera del
ción 19-11. Si el anillo ec tiene 8 subunidades c, una
malato-aspartato en que cede los equivalentes de
vuelta completa transferirá 8 protones a la matriz y
reducción desde el NADH a través del FAD de la glicerol
producirá 3 moléculas de ATP. Pero esta síntesis tam-
3-fosfato deshidrogenasa a la ubiquinona y de ella al
bién requiere el transporte de 3 P, al interior de la
Complejo TIT, no al Complejo 1 (Fig. 19-15) con lo que
matriz, a un coste de ] protón por cada P,, por lo que se
sólo proporciona energía para la síntesis de 1,5 molécu-
han de sumar 3 protones más al número total requerido.
las de ATP por par de electrones.
Esto hace que el coste total sea (11/pro AN A
= 3,7 protones/ATP. El valor gene ÁNfO 28 DA
Dal / (A
; i :
Las mitocondrias de las plantas tienen una NADH
Neenasa orientada hacia el exterior que puede
para el número de protones bombez des -
electrones directamente desde el NADH cito-
par de electrones transferidos desde el NADH es 10
sólico a la cadena respiratoria al nivel de la ubiquinona.
(Ec. 19-7). Por tanto, la oxidación de 1 NADH produce
Debido a que esta vía no utiliza el paso por la NADH
(10 protones)/(3,7 ATP) = 2,7 ATP.
deshidrogenasa del Complejo 1 y el movimiento de pro-
(b) Si el anillo e tiene 10 subunidades c, una rota-
tones asociado, la cantidad de ATP producida a partir
ción completa transfiere 10 protones a la matriz y pro-
del NADH citosólico es menor que la producida a partir
duce 3 moléculas de ATP.La suma de los 3 protones
del NADH generado en la matriz (Recuadro 19-2).
para transportar 3 P, a la matriz lleva el coste total a (13
protones)/ (3 ATP) = 4,3 protones/ATP. La oxidación de
1 NADH produce (10 protones)/(4,3 protones/ATP) = RESUMEN 19.2 Síntesis de ATP
2,3 ATP.
El” El flujo de electrones a través de los Complejos 1, II
(9) Cuando los electrones entran en la cadena respi-
y IV da lugar al bombeo de protones a través de la mem-
ratoria desde el FADH, (en la ubiquinona), sólo hay 6 pro-
brana mitocondrial interna haciendo que la matriz sea
tones disponibles para impulsar la síntesis de ATP. Esto
alcalina con respecto al espacio intermembrana. Este
modifica el cálculo para la mitocondria bovina a (6 proto-
gradiente de protones suministra la energía, en la forma
nes)/(3,7 protones/ATP) = 1,6 ATP por par de electrones
de fuerza protón-motriz, para la síntesis del ATP a partir
desde el FADH,. Para la mitoconbdria de levadura, el cál-
del ADP y P, por la ATP sintasa, (complejo F_F) de la
culo es (6 protones)/(4,3 protones/ATP) = 1,4 ATP por
membrana interna.
par de electrones desde el FADH,
Mi La ATP sintasa lleva a cabo “catálisis rotacional” en
Estos valores calculados de x o la razón P/O define
la que el flujo de protones a través de F, hace que cada
una gama que incluye los valores de 2.5 ATP/NADH y
uno de los tres sitios de unión de nucleótidos de F, cicle
1,4 ATP/FADH,, por lo que utilizaremos estos valores a
desde la conformación que une (ADP + P,) a la que une
lo largo de este libro.
ATP y finalmente a la vacía.
Ml La formación del ATP por el enzima requiere poca
energía; el papel de la fuerza protón-motriz es empujar
Sistemas de lanzadera envían indirectamente NADH el ATP fuera de su sitio de unión en la sintasa.
citosólico a la mitocondria para su oxidación La proporción de ATP sintetizado por 40, reducido
La NADH deshidrogenasa de la membrana mitocondrial a H,0 Qa razón P/O) es de unos 2,5 cuando los electro-
interna de células animales sólo puede aceptar electrones pt en la cadena respiratoria en el Complejo 1 y
nes del NADH de la matriz. Dado que la membrana de 1,5 cuando los electrones entran en la ubiquinona.
interna no es permeable al NADH, ¿cómo puede reoxi- Esta proporción varía entre especies según el número
darse el NADH generado por la glucólisis en el citosol a de subunidades c en el complejo F...
736 — Fosforilación oxidativa
Transportador roo
intermembrana
br H
(lado p) o malato-a-cetoglutarato OH
"QOC—CH)—C—CO0O7 |
a cad
NAD”
NAD*
Malato
2
e
GQ
4
O ma NADH +H*
7 deshidrogenasa deshidroge
i
7O00C—CH)—E—COO7 7O00C—CH7E-—COO—
Oxalacetato NH NH
Oxaloacetate
“00C—CH CH 000” A ASE
H H
Glutamato Glutamato
aspartato aspartato
aminotransferasa aminotransferasa
o-Cetoglutarato a-Cetoglutarato
0
1
=00C—CH¿—CH¿—É—C007 cooc—e cd aop-
he
Q
he
NH Aspartato se
4%
Aspartato NHI
POSEEN 007 DO
H H
Transportador
glutamato-aspartato E
| Efecto neto: NADH), ===> NADH,, |
FIGURA 19-31 Lanzadera del malato-aspartato. Esta lanzadera para la matriz el malato pasa dos equivalentes de reducción al NAD*; el NADH
transportar equivalentes de reducción desde el NADH ci esultante es oxidado por la cadena respiratoria; (O) el oxalacetato formado
matriz mitocondrial se utitiza en higado, riñón y corazón. o puede pasar directamente al citoso!. (BH El oxalace-
citosol entra en el espacio intermembrana a través de rimero a aspartato que puede salir vía el transporta-
membrana externa (porinas), y a contin vación pasa dos equivalentes de
reducción al oxafacetato produciendo malato.Q) El malato atraviesa ta con lo que completa el ciclo y el glutamato producido en la misma reac-
membrana interna por el transportador de malato-a-cetoglutarato. 6) En ción entra en la matriz mediante e! transportador de glutamato-aspartato.
Mi La energía conservada en un gradiente de protones E” La membrana mitocondrial interna es impermeable

puede impulsar el transporte de solutos contra gradien- al NADH y al NAD", pero se transportan equivalentes de
te a través de una membrana. NADH desde el citosol a la matriz por una de dos lanza-
deras. Los equivalentes de NADH que se transportan
mediante la lanzadera del malato-aspartato entran en la
Espacio Glucólisis cadena respiratoria por el Complejo 1 dando una razón
intermembrana P/O de 2,5; los que se transportan por la lanzadera del
(lado »>
glicerol 3-fosfato entran por la ubiquinona y dan una
NAD* gilceral NADH +H' razón P/O de 1,5
J4ostato destidragenasa
citosólica
19.3 Regulación de la fosforilación
Epa
oxidativa
Glicerol Dihidroxiacetona > La fosforilación oxidativa sintetiza la mayor parte del
3-fostato fosfato A ) ATP que se produce en las células aeróbicas. La oxida-
CH,0H
CHOH glicerol 3-fosfato

FIGURA 19-32 Lanzadera del glicerol-3-fostato. Este medio alterna-
deshidrogenasa
mitocondrial tivo para transportar equivalentes de reducción desde el citosol a la
cadena respiratoria actúa en músculo esquelético y en cerebro. En el
citosol, la dihidroxiacetona fosfato acepta dos equivalentes de reducción
del NADH en una reacción catalizada por la glicerol 3-fosfato deshidro-
genasa citosólica. Un isozima de la glicerol 3-fostato deshidrogenasa
unido a la cara exterior de la membrana interna transfiere dos equivalen-
Matriz (lado n) tes de reducción desde el glicero!-3-fosfato del espacio intermembrana a
la ubiquinona. Observe que esta lanzadera no necesita sistemas de
transporte de membranas.
19.3 Regulación de la fosforilación oxidativa 137
ción completa de una molécula de glucosa a CO, da que la razón de acción de masas vuelve a su valor eleva-
lugar a la formación de 30 ó 32 ATP (Tabla 19-5). En do normal, punto en el que la respiración vuelve a
comparación, la glucólisis en condiciones anacróbicas hacerse más lenta. La velocidad de oxidación de los
(fermentación láctica) genera sólo dos ATP por glucosa. combustibles celulares está regulada con tal sensibili-
Resulta evidente que la evolución de la fosforilación dad y precisión que la razón [(ATPD/([ADP][PD fluctúa
oxidativa originó un enorme incremento en la eficiencia sólo ligeramente en la mayoría de tejidos, incluso duran-
energética del catabolismo. La oxidación completa a te variaciones extremas en la demanda de energía. En
CO, del derivado del coenzima A y del palmitato (16:0), pocas palabras, el ATP se forma a la misma velocidad en
que también se da en la matriz mitocondrial, da un ren- que es requerido por las actividades celulares.
dimiento de 108 ATP por palmitil-CoA (véase la Tabla
17-1). Se puede realizar un cálculo similar del rendi- Una proteína inhibidora impide la hidrólisis de ATP
miento en ATP para la oxidación de cada uno de los
aminoácidos (Capítulo 18). Las vías oxidativas aeróbi-
durante la hipoxia
cas que acaban en la transferencia de electrones al O, Ya hemos encontrado la ATP sintasa como una bomba de
junto a la fosforitación oxidativa son las responsables de protones impulsada por ATP (véase la Fig. 11-37) catali-
la mayor parte del ATP que se produce en el catabolis- zando el inverso de la síntesis de ATP. Cuando una célu-
mo. Por lo tanto, es absolutamente esencial que se la está hipóxica (privada de oxígeno), tal como sucede
regule la producción de ATP en la fosforilación oxidati- en un infarto de miocardio o un ictus, see hace más lenta
va para adaptarse a las necesidades fluctuantes de ATP la transferencia de electrones al oxígeno y lo mismo
de la célula. sucede con el bombeo de protones. La fuerza pro-
tón-motriz desaparece al poco rato. En estas condicio-
nes la ATP sintasa podría operar en sentido inverso,
La fosforilación oxidativa está reguiada por las
hidrolizando ATP producido por la glucólisis para bom-
necesidades celulares de energía bear protones hacia el exterior y causando una disminu-
La tasa respiratoria (consumo de O,) en la mitocondria ción desastrosa en los niveles de ATP. Esto no se produ-
está bajo una regulación precisa; está limitada general- ce gracias a un inhibidor proteico pequeño (84 aminoá-
mente por la disponibilidad de ADP como sustrato de la cidos), IF, que se une simultáneamente a dos moléculas
fosforilación. La dependencia de la velocidad de consu- de ATP sintasa inhibiendo su actividad ATPasa
mo de O, con la concentración de ADP, el aceptor del P, (Fig. 19-33). IF, sólo es inhibidora en su forma diméri-
(Fig. 19.20b), denominada control por aceptor de la ca, que está favorecida a un pH inferior a 6,5. En una
respiración, puede ser espectacular. E unos tej célula sin oxígeno, la principal fuente de ATP es la glucó-
animales la razón del control por ERORN> que los ácidos pirúvico o láctico así formados
ción de la velocidad máxima de consumo de 0, induc j yen el pH en el citosol y la matriz mitocondrial.
por ei ADP a la velocidad basal en ausencia de ADP, es Esto favorece la dimerización de IF, que lleva a la inhibi-
al menos de 10. ción de la actividad ATPasa de la ATP sintasa, impidiendo
La concentración intracelular de ADP es una medi- de este modo la hidrólisis despilfarradora de ATP. Cuan-
da del estatus energético de la célula. Otra medida do se reanuda el metabolismo aeróbico se hace más lenta
relacionada con ella es la razón de la acción de masas la formación de pirúvico, el pH del citosol aumenta, se
del sistema ATP-ADP: (ATP//C[ADP][P). Normalmente desestabiliza el dímero de 1F, y desaparece la inhibición
este cociente es muy elevado de modo que el sistema de la ATP sintasa. IF, es una proteína intrínsecamente
ATP-ADP está casi completamente fosforilado. Cuando desordenada, sólo adquiere su conformación favorecida
aumenta la velocidad de algunos procesos que requie- cuando interacciona con la ATP sintasa.
ren energía (síntesis de proteínas, por ejemplo), se
produce un aumento en la velocidad de degradación del La hipoxia conduce a la producción de ROS
ATP a ADP y P, disminuyendo la razón de la acción de
masas. Con más ADP disponible para la fosforilación
y varias respuestas de adaptación
oxidativa aumenta la velocidad de la respiración, lo que En las células hipóxicas se produce un desequilibrio
da lugar a la regeneración de ATP. Ésta continúa hasta entre la entrada de electrones procedentes de la oxida-
INMENSA Mo
Proceso Producto directo ATP finales
ho. ña ==
| Glucólisis 2 NADH Ccitosólico) 305

| 2 ATP 2
| Oxidación del piruvato (dos por glucosa) 2 NADH (matriz mitocondrial) 5
Oxidación del acetil-CoA en el ciclo del ácido cítrico 6 NADH (matriz mitocondrial) 15
(dos por glucosa) 2 FADH, 3
2 ATP 02 GTP 2
| Rendimiento total por glucosa
*Si se utiliza la lanzadera malato/aspartato para transferir equivalentes de reducción a la mitocondria, el rendimiento es 5 ATP. Si se utiliza la
lanzadera del giicerol 3-fosfato, el rendimiento es 3 ATP.
dos líneas de defensa contra las ROS (Fig. 19-34). Una

es la regulación de la piruvato deshidrogenasa (PDH),
enzima que aporta acetil-CoA al ciclo del ácido cítrico
(Capítulo 16). En condiciones hipóxicas, la PDH quina-
sa fosforila la PDH mitocondrial inactivándola y dismi-
nuyendo el suministro de FADH, y NADH del ciclo del
ácido cítrico a la cadena respiratoria. Una segunda
forma de impedir la formación de ROS es el reemplazo
de una subunidad del Complejo IV, conocida como
COX4-1 por otra subunidad, COX4-2, que está mejor
FIGURA 19-33 Estructura de la F'-ATPasa bovina en un complejo con adaptada a las condiciones hipóxicas. Con COX4-1, las
su proteína reguladora IF. Se ven aquí dos moléculas de F, desde el propiedades catalíticas del Complejo IV son óptimas
tado P al igual que en la Figura 19-25c. El inhibidor IF, (rojo) se une a la para la respiración con concentraciones normales de
interfase af de las subunidades en la conformación difosfata (ADP) oxígeno; con COX4-2, se optimiza el Complejo IV para
(a-ADP y B-ADP), congelando los dos complejos F, y, por tanto, blo- operar en condiciones hipóxicas. .
queando la hidrólisis del ATP Cy la síntesis). (Partes de !F, que no se Los cambios en la actividad PDH y en el contenido
pudieron resolver en los cristales de F, se muestran (rojo claro) tal como de COX4-2 del Complejo IV están promovidos por HIP-
aparecen en cristales de IF, aislado). Este complejo sólo es estable al bajo 1, el factor mducibie por la hipoxia. HIF-1 (otra proteína
pH citosólico característico de las células que están produciendo ATP por intrínsecamente desordenada) se acumula en las célu-
glucólisis; cuando se reanuda el metabolismo aeróbico, el pH citosólico las hipóxicas y, actuando como factor de transcripción,
aumenta, se desestabiliza el inhibidor y se activa la ATP sintasa [Fuente: desencadena un aumento en la síntesis de PDH quinasa,
De PDB ID 10HH, E. Cabezon et al., Nature Struct. Biol. 10:744, 2003.1 COX4-2 y una proteasa que degrada COX4-1. HIF-1 es
un regulador general de la homeostasis del O,. Recuer-
de que también interviene en loscambios en el transpor-
ción de combustibles en la matriz mitocondrial y la te de glucosa y en los enzimas glucolíticos que producen
transferencia de electrones al oxígeno molecular lo que el efecto Warburg, la dependencia de la glucólisis (no de
da lugar a un incremento en la formación de especies de la respiración mitocondrial) para la producción de ATP,
oxígeno reactivas (ROS). Además del sistema de la glu- incluso en presencia de oxígeno suficiente (véase el
tatión peroxidasa (Fig. 19-18), las células tienen otras Recuadro 14-1).
Cort paro la transcripción

de HIF-1.
Air
HIF-1 aumenta la transcripción
de otros enzimas y proteínas.
Transportador |
de glucosa
Es
Glucosa
bl
nzimas
yMos
glucolíticos holPU) ATP L Degrada
| Aumenta la producción Proteasa —+» la subunidad
lactato E de ATP por la glucólisis. COX4-1
4 deshidrogenasa “M E
Lactato A, Piruvato mk aora
FIGURA 19-34 El factor inducible por la hipoxia lpiruvato
(HIF-D regula la expresión génica para reducir la ) deshidrogenasa Las propiedades del
s de ROS.
formación ei
En condiciones de baja: concen - 4 pon A, a (POE Complejo
pler [Y se adaptan
tración de oxigeno (hipoxia), se sintetiza HIF-1 en a Acetil-CoA ale baja pO,.
mayor cantidad y actúa como factor de transcripción 7 Se 0,
a i y
que incrementa la sintesis del transportador de glu- 1 Ciclo del y cadena respiratoria
sa des . . 4 ácido --+---> NADH, 922 >-=<—=—> Complejo Wv
cosa, enzimas glucolíticos, piruvato deshidrogenasa 4 cítrico ; FADH) y sx
quinasa (PDH quinasa), lactato deshidrogenasa, una Y Y : y
proteasa que degrada la subunidad COX4-1 de la >---" Desciendeel flujo O 0,'0H H20
citocromo oxidasa y la subunidad COX4-2 de la cito- NADH y PSFADH)> a Disminuye la
cromo oxidasa. Estos cambios contrarrestan la for- ala cadena producción de ROS.
mación de ROS al disminuir el suministro de NADH respiratoria.
y FADH, y hacer que la citocromo oxidasa del Com-
plejo IV sea más efectiva. [Fuente: Información de D. Aurnento de imei - ES Aumento del flujo
A Harris Bioenergetics at a Glance p. 36, Blackwell la transcripción ' Pr Ú 7 através de la ruta
Science, 1995.]
19.3 Regulación de la fosforilación oxidativa 739
Cuando estos mecanismos para contrarrestar las

ROS son msuficientes, debido a mutación genéti- ¡
ca que afecta una de las proteínas protectoras o en hera la S A P
condiciones de muy elevada producción de ROS, la í
función mitocondrial está en peligro. Se cree que las > e Glucosa 6-fostato ]
lesiones mitocondriales intervienen en el envejecimien-
to, fallo cardíaco, ciertos casos raros de diabetes (des-
critos más adelante) y varias enfermedades genéticas (A) AMP, ADP
fosfofructoquinasa-1
heredadas por vía materna que afectan al sistema ner- 6%) ATP, citrato
vioso, Glucólisis <
Fructosa 1,6-bisfosfato '
Las rutas de formación de ATP están reguladas de forma múltiples pasos
coordinada Fosfoenolpiruvato ]
Las principales rutas catabólicas tienen mecanismos
a ADP
reguladores solapados y concertados que les permiten plruvato quinasa
funcionar conjuntamente en uma forma económica y ($) ATP, NADH
autorreguladora para la producción de ATP y precurso- G Piruvato
res biosintéticos. Las concentraciones relativas de ATP
complejo de (A) AMP, ADP, NAD*
y ADP controlan no sólo las velocidades de transferen-
cia electrónica y fosforilación oxidativa sino también pais 2) |) ATRNADH
las velocidades del ciclo del ácido cítrico, oxidación del
piruvato y glucólisis (Fig. 19-35). Donde quiera que
haya un incremento en el consumo de ATP aumenta la (8) ADP
velocidad de transferencia electrónica y de fosforila- (6%) ATP, NADH
ción oxidativa. Simultáneamente, aumenta la velocidad
de oxidación del piruvato vía ciclo del ácido cítrico, con
lo que aumenta el flujo de electrones hacia la cadena
respiratoria. Estos procesos pueden, a su vez, provocar
|
D ADP
un aumento en la velocidad de glucólisis aumentando la
6%) ATP
velocidad de formación del piruvato ndo la a NON del
sión del ADP a ATP disminuye
ADP, el control por aceptor hace enta
IS de
la traTBfe-
O -- ae-cetoglutarato
[a-Cetoglutarato
rencia de electrones y con ello la fosforilación oxidati- deshidrogenasa 6) ATP, NADH

_
va. La glucólisis y el ciclo del ácido cítrico también
'Succinil-CoA
disminuyen su velocidad porque el ATP es un inhibidor
alostérico del enzima glucolítico fosfofructoquinasa-1 l múltiples pasos
(véase la Fig. 15-16) y de la piruvato deshidrogenasa
(véase la Fig. 16-19). U Oxalacetato
La fosfofructoquinasa-1 es también inhibida por el r ADP, P;
citrato que es el primer intermediario del ciclo del ácido
cítrico. Cuando el ciclo está “en reposo” el citrato se Fostorilación )
oxidativa
acumula en la mitocondria y a continuación se transpor-
ta al citosol. Cuando se elevan las concentraciones cito-
sólicas de ATP y citrato se produce una inhibición C ADP+P, (ATP:
alostérica concertada de la fosfofructoquinasa-1 que es
FIGURA 19-35 Regulación de las vías productoras de ATP. Este dia-
mayor que la suma de sus efectos individuales, disminu-
grama muestra la regulación coordinada de la glucólisis, oxidación del
yendo la velocidad de la glucólisis.
piruvato, ciclo del ácido cítrico y fosforilación oxidativa por las concen-
traciones relativas de ATP, ADP y AMP y por NADH. Alta [ATP] (o baja
RESUMEN 19.3 Regulación de la fosforilación oxidativa [ADP] y [AMPD disminuyen ia velocidad de glucólisis, oxidación del
piruvato, oxidación del acetato vía ciclo del ácido cítrico y fosforilación
Mi La fosforilación oxidativa está regulada por las
oxidativa. Las cuatro rutas están aceleradas cuando hay un aumento en
necesidades energéticas celulares. La [ADP] intracelu-
la velocidad de utilización del ATP con un incremento en la formación de
lar y la razón de acción de masas [ATPY([ADPJ[P) son
ADP, AMP y P. La capacidad del citrato de inhibir tanto la glucólisis
indicadores del estatus energético de la célula. como el ciclo del ácido cítrico refuerza la acción del sistema de los
A En células hipóxicas (privadas de oxígeno), un inhi- nucleótidos de adenina. Además, el aumento de [NADH] y [acetil-CoA]
bidor proteico bloquea la hidrólisis de ATP por la ATP también inhiben la oxidación del piruvato a acetil-CoA y razones
sintasa operando en sentido inverso, impidiendo así una [NADHI/[NAD7 elevadas inhiben las reacciones de las deshidrogena-
caída drástica en la [ATP]. sas del ciclo del ácido citrico (véase la Fig. 16-19).
Ml Las respuestas de adaptación a la hipoxia, a través
de HIF-1, hacen más lenta la transferencia de electro-
E” Las concentraciones de ATP y ADP marcan la velo-
nes a la cadena respiratoria y modifican el Complejo TV
para que actúe de manera más eficiente en condiciones cidad de transferencia electrónica a través de la cadena
de baja concentración de oxígeno. respiratoria, vía una serie de controles entrelazados
sobre la respiración, glucólisis y ciclo del ácido cítrico.
19.4 Las mitocondrias en la Espacio

intermembrana (lado »)
termogénesis, síntesis de esteroides UCP1
y apoptosis
Aunque la producción de ATP es una función central de
las mitocondrias, estos orgánulos tienen otras funciones
que, en tejidos específicos o en determinadas circuns-
tancias , también son cruciales. En el tejido adiposo, las
mitocondrias generan calor para proteger órganos vita-
les de la baja temperatura ambiente; en las glándulas
suprarrenales y en las gónadas, las mitocondrias son el Matriz (lado 1)
sitio de la síntesis de hormonas esteroideas y en la
mayoría de tejidos son participantes clave en la apopto- FIGURA 19-36 Generación de calor por mitocondrias desacopladas.
La proteina desacoplante de las mitocondrias del tejido adiposo marrón
sis (muerte celular programada).
al proporcionar una ruta alternativa para que los protones vuelvan a
entrar en la matriz mitocondrial, hace que la energía conservada por el
Las mitocondrias desacopladas del tejido adiposo marrón bombeo de protones se disipe en forma de calor,
producen calor
Hemos visto anteriormente que la respiración se hace átomo se reduce a H,O, lo que hace que los citocromos
más lenta cuando la célula tiene un suministro adecua- P450 sean enzimas monooxigenasas:
do de ATP. Existe una excepción notable e instructiva a
esta regla general. En la mayoría de mamíferos, incluido R—H + O, + NADPH + H?* —> R—OH + H20 + NADP*
el hombre, los recién nacidos tienen un tipo de tejido
adiposo denominado tejido adiposo marrón (BAT, p. En esta reacción se oxidan dos especies: NADPH y
923) en el que la oxidación de combustibles no sirve R—H.
para producir ATP sino para generar calor y mantener Existen docenas de enzimas P-450, situados todos
caliente al recién nacido. Este tejido adiposo especiali- ellos en la membrana mitocondrial interna con su sitio
zado es marrón debido a la presencia de grandes canti- catalítico expuesto a la matriz. Las células esteroidogé-
dades de mitocondrias y, por consiguiente, de citocro- nicas están rellenas de mitocondrias especializadas en
mos cuyos grupos hemo absorben fuertem la luz síntesis de esteroides; las mitocondrias son general-
visible. Cop que las de otros tejidos y tienen mem-
Las mitocondrias del tejido adiposo Ón son internas más extensas y replegadas (Fig. 19-37).
igual que las demás mitocondrias de otras células de La ruta del flujo electrónico en el sistema P-450
mamíferos en todos los aspectos, a excepción de que mitocondrial es complejo y en él intervienen una fla-
tienen una proteína particular en su membrana interna. voproteína y una proteína ferro-sulfurada que trasporta
La proteína desacoplante 1 (UCP1) proporciona electrones desde el NADPH al hemo del P-450
una vía para que los protones vuelvan a la matriz sin (Fig. 19-38). Todos los enzimas P-450 tienen un grupo
pasar por el complejo FF, (Fig. 19-36). El resultado hemo, que interacciona con el O,y un sitio de unión de
de este cortocircuito de protones es que la energía de sustrato que le confiere especificidad.
oxidación no se conserva mediante la formación de ATP En el retículo endoplasmático de los hepatocitos
sino que se disipa en forma de calor que contribuye al se encuentra otra gran familia de enzimas P-450.
mantenimiento de la temperatura corporal (véase la Estos enzimas catalizan reacciones similares a las reac-
Fig. 23-16). Los animales hibernantes también depen- ciones de los P-450 mitocondriales, pero entre sus sus-
den de las mitocondrias desacopladas del BAT para tratos se incluye una gran variedad de compuestos
generar calor durante sus largos períodos de letargo hidrofóbicos, muchos de los cuales son xenobióticos,
(véase el Recuadro 17-1). Volveremos al papel de la compuestos que no se encuentran en la naturaleza pero
UCP1 cuando discutamos la regulación de la masa cor- que se sintetizan industrialmente. Los enzimas P-450
poral en el Capítulo 23 (pp. 940-941). del RE tienen especificidades de sustrato muy amplias
y solapadas. La hidroxilación de los compuestos hidro-
Las monooxigenasas P-450 mitocondriales catalizan fóbicos los hace más hidrosolubles con lo que pueden
ser eliminados por los riñones y excretados en la orina.
las hidroxilaciones de esteroides
Entre los sustratos de estas P-450 oxigenasas se
La mitocondria es el sitio de reacciones biosintéticas encuentran muchos medicamentos comunes. El meta-
que producen hormonas esteroideas, entre ellas las hor- bolismo por parte de los enzimas P-450 limita el tiempo
monas sexuales, glucocorticoides, mineralocorticoides y de vida del medicamento en el torrente circulatorio y
hormona de la vitamina D. Estos compuestos se sinteti- sus efectos terapéuticos. Los humanos difieren en su
zan a partir del colesterol o un esterol relacionado en dotación genética de enzimas P-450 en el RE y en la
una serte de hidroxilaciones catalizadas por enzimas de extensión en la que se han inducido ciertos enzimas
la familia del citocromo P-450 (véase el Recuadro P-450, corno por ejemplo debido a una historia de con-
21-1) que poseen todos ellos un grupo hemo crítico (su sumo de alcohol. En principio, por tanto, la genética y la
absorción a 450 nm da el nombre a esta familia). En las historia personal de un individuo podrían figurar en la
reacciones de hidroxilación, se incorpora un átomo del determinación de la dosis terapéutica de un mediea-
oxígeno molecular al sustrato mientras que el segundo mento; en la práctica esta adaptación precisa de la
19.5 Genes mitocondriales: su origen y efectos de las mutaciones 741
apertura y cierre están afectados por varias proteínas

que estimulan o suprimen la apoptosis. Cuando se libera
al cilosol, el citocromo c interacciona con monómeros
de la proteína Apaf-1 (factor 1 activador de la pro-
teasa de la apoptosis), lo que lleva a la formación de
un apoptosoma compuesto por siete moléculas de
Apaf-1 y siete moléculas de citocromo c. El apoptosoma
proporciona la plataforma sobre la que el proenzima
procaspasa-9 se activa a caspasa-9, un miembro de una
familia de proteasas muy específicas, las caspasas,
implicadas en la apoptosis. Estas proteasas comparten
un residuo Cys crítico en su sitio activo y todas cortan
proteínas sólo en el lado carboxilo terminal de residuos
Asp, de ahí el nombre de “caspasas”. La caspasa-9 inicia
FIGURA 19-37 Mitocondrias de la glándula suprarrenal, especializa- una cascada de activaciones proteolíticas, con una cas-
das en la síntesis de esteroides. Tal como se ven en esta micrografía pasa activando una segunda caspasa y ésta, a su vez,
eletrónica de una sección fina de la glándula suprarrenal, las mitocon- activando una tercera y así sucesivamente (véase la Fig.
drias son abundantes y tienen crestas abundantes lo que proporciona 12-40). (Esta función del citocromo c en la apoptosis es
una gran superficie para los enzimas P-450 de la membrana interna un caso claro de segunda actividad “tenue”, “moonligh-
[ Fuente: Don Fawcett /Science Source.] ting”, en la que una proteína tiene dos funciones dife-
rentes en la célula; véase el Recuadro 16-1).
dosificación no es aún factible económicamente, si bien
podría llegar a serlo. Y RESUMEN 19.4 Papel de la mitocondria en la termogénesis,
síntesis de esteroides y apoptosis
Las mitocondrias son de importancia crucial en el inicio
MB En el tejido adiposo marrón de los recién nacidos, la
de la apoptosis transferencia de electrones está desacoplada de la sín-
La apoptosis, también llamada muerte celular pro- tesis de ATP por lo que la energía de la oxidación de los
gramada, es un proceso mediante el que células indivi- combustibles se disipa en forma de calor. Los animales
duales mueren por el bien del organismo por ca que hibernan utilizan esta estrategia para evitar la con-
en el transcurso de un desarrollo embrigna 104
tiempo que el orgarismo conserva ls asos de reacciones de hidroxilación en la sín-
moleculares de la célula (aminoácido a las hormonas esteroideas en los tejidos esteroi-
etc.). La apoptosis pede ser provocada por una e Abipidicos (glándula suprarrenal, gónadas, hígado y
externa que actúa sobre un receptor de la membrana riñón) tienen lugar en mitocondrias especializadas.
plasinática o mediante procesos internos tales como EM” El citocromo c mitocondrial, liberado al citosol, par-
lesiones en el DNA, una infección vírica, estrés oxidati- ticipa en la activación de la caspasa-9, una las proteasas
vo por la acumulación de ROS u otro estrés tal como el que intervienen en la apoptosis.
choque térmico.
Las mitocondrias juegan un papel crucial en el
desecadenamiento de la apoptosis. Cuando un agente
19.5 Genes mitocondriales:
estresante da la señal para la muerte celular, una conse- su origen y efectos de las mutaciones
cuencia temprana es un aumento de la permeabilidad
Las mitocondrias tienen su propio genoma, una molécula
de la membrana mitocondrial externa que permite la
circular de DNA de doble cadena (mtDNA). Cada una de
salida del citocromo c del espacio intermembrana al
las cientos o miles de mitocondrias de una célula típica
citosol (Fig. 19-39). El aumento de la permeabilidad se
tierre unas cinco copias de este genoma. Hay 37 genes
debe a la apertura del complejo del poro de transi-
(16.569 pb) en el cromosoma mitocondrial humano (Fig.
ción de la permeabilidad (PTPC), una proteína con
19-40) incluidos 13 que codifican subunidades de proteí-
múltiples subunidades de la membrana externa; su
a NADPH Adrenodoxina Adrenodoxina P-450 R—OH

+H* reductasa [2Fe-25] hidroxilasa
(FAD) (reducida) (oxidada) H20
0,
* Adrenodoxina Adrenodoxina P-450

NADP reductasa [2Fe-25] hidroxilasa
(FADH)) (oxidada) (reducida)
FIGURA 19-38 Ruta del flujo de electrones en las reacciones del citocromo P-450 mitocondrial de la glándula suprarrenal. Se transfieren dos elec-
trones desde el NADOH a la adrerodoxina reductasa, una flavoproteína que contiene FAD, la cual pasa los electrones, de uno en uno,a la adrenodaxina,
una pequeña proteina 2Fe-25 soluble, La adrenodoxina pasa electrones individuales a la citocromo P-450 hidroxilasa, que interacciona directamente con
el O, y el sustrato (R-H) formando tos productos H,O y R-OH.
A
Lesión Estrés ROS Señal FIGURA 19-39 Papel del citocromo c en la apoptosis. El citocromo c
en el DNA 1 / de desarrollo es una pequeña proteína mitocondrial soluble, localizada en el espacio
intermembrana, que transporta electrones entre los Complejos ll y 1V
durante la respiración, En un papel totalmente diferente, tal como se
Citocomo e A describe aquí, actúa como desencadenante de la apoptosis al estimular
PA la activación de una familia de proteasas denominadas caspasas.
ys
[Fuente: Información de S. j. Riedl y G. S. Salvesen, Nature Rev.Mol. Cell
Biol. 8:409, 2007, Fig. 3.7
Se abre el complejo del poro
de la transición de permeabilidad,
las mitocondrias tienen sus propios ribosomas, claramen-
te diferentes de los del citoplasma. La gran mayoría de
proteínas mitocondriales, unos 1.100 tipos diferentes,
están codificadas por genes nucleares, se sintetizan en
ribosomas citoplasmáticos y seguidamente se importan y
El citocromo e se organizan dentro de la mitocondria (Capítulo 27).
desplaza al citosol.
Apat-1 (factor-1
Las mitocondrias evolucionaron a partir de bacterias
activador de la La unión del citocromo c endosimbióticas
proteasa de la y ATP induce Apaf-1 para
apoptosis) ATP que forme el apoptosoma. La existencia del DNA mitocondrial, ribosomas y tRNA
apoya la hipótesis sobre el origen endosimbiótico de las
mitocondrias (véase la Fig. 1-40) que supone que los
Apoptosoma primeros organismos capaces de metabolismo aeróbico,
incluida la producción de ATP ligada a la respiración,
eran bacterias. Los eucariotas primitivos que vivían
anaeróbicamente (por fermentación) adquirieron la
Monómeros capacidad de llevar a cabo la fosforilación oxidativa
de procaspasa-9 cuando establecieron una relación simbiótica con bacte-
Ginactivos)
rías que vivían en su citosol. Tras un larg período de
El apoptosoma produce evolución y traslado de muchos genes bacterianos al
la dimerización de la llo
procaspasa-9, formando 00 Dímeros úcleo del eucariota “huésped”, las bacterias endosim-
dímeros de caspasa-9 dul de caspas Pp formaron finalmente en mitocondrias.
activos. A06: (activos)
EEN Me supone que bacterias primitivas que
vivían libremente tenían la maquinaria enzimática para
la fosforilación oxidativa. Además, predice que sus des-
La caspasa-9 cataliza la
activación proteolítica cendientes bacterianos modernos han de tener cadenas
Procaspasa-3) de la caspasa-3 y la pS s respiratorias muy similares a las de los eucariotas
caspasa-7.
modernos. Ello es así. Las bacterias aeróbicas llevan a
aspasa7) cabo la transferencia de electrones ligada a NAD desde
sustratos al O, acoplada a la fosforilación del ADP cito-
sólico. Las deshidrogenasas están localizadas en el cito-
Estas caspasas llevan a la sol bacteriano, y la cadena respiratoria en la ineembrana
muerte y resorción de la céluta, plasmática. Los transportadores electrónicos translocan
protones al exterior a través de la membrana plasmática
Muerte celular
al tiempo que transfieren electrones al O,. Bacterias
tales como E. coli tienen complejos F,F, en sus mem-
nas de la cadena respiratoria (Tabla 19-6); los restantes branas plasmáticas; la porción F, sobresale en el citosol
genes codifican moléculas de rTRNA y (RNA esenciales y cataliza la síntesis de ATP a partir de ADP y P, a medi-
para la maquinaria sintetizadora de proteínas de la mito- da que los protones fluyen de nuevo hacia el interior de
condria. Para smtetizar estas 13 subunidades proteicas, la célula a través del canal protónico de F..
TABLA 19-6 Proteínas respiratorias codificadas en el cromosoma mitocondrial humano

Número Número de subunidades codificadas
| Complejo de subunidades en el DNA mitocondrial
F | NADH destidrogenasa 45 7 7
| TI Succinato deshidrogenasa 4 0
| TM Ubiquinona-citocromo e oxidorreductasa 11 1
IV Citocromo oxidasa 13 K£
| V ATP sintasa 8 2
FIGURA 19-40 Genes mitocondriales y mutaciones.

(a) Mapa del DNA mitocondrial humano en el que se
muestran los genes que codifican proteínas del Complejo
|, la NADH deshidrogenasa (ND?7 a ND6); el citocromo b
del Complejo lil (cyt b); las subunidades de la citocromo
oxidasa (Complejo ¡W) (CO/ a CON, y dos subunidades
LHON de la ATP sintasa (ATPase6 y ATPase8). Los colores de
(15,257) los genes corresponden a los colores de los complejos
mostrados en la Fig. 19-7 También se muestran aquí los
genes de los RNA ribosómicos (rRNA) y de una serie de
U Complejo | RNA de transferencia específicos de la mitocondria; la
TU Complejo il especificidad de los tRNA está indicada mediante el
O Complejo Iv código de una letra para los aminoácidos. las flechas
D ATP sintasa
[DD RNA de transferencia indican las posiciones de mutaciones que provocan la
[O RNA ribosómico neuropatía óptica hereditaria de Leber (LHON) y la epi-
O Región contro! del DNA lepsia mioclónica y la enfermedad de las fibras rojas ras-
gadas (MERRP). Los números en paréntesis indican la
posición de los nucleótidos alterados (el nucleótido
número1 está en la paste superior del círculo y la nume-
ración transcurre en sentido antihorario). [Fuente: infor-
mación de M. A. Morris. J Clin. Neuroophthalmol.
10:159, 1990.]
La salida de protones ligada a la respiración a través copias de su propio genoma (Fig. 19-2b). Los animales
de la membrana plasmática bacteriana también suminis- heredan esencialmente todas sus mitocondrias del pro-
tra la fuerza motora para otros procesos. Ciertos siste genitor hembra. Los huevos son grandes y contienen
de transporte bacterianos llevan a entre 10* y 10% mitocondrias mientras que los esperma-
nutrientes extracelulares (lactosa, p son mucho más pequeños y contienen muchas
un gradiente de concentración en co-transporte parale menos mitocondrias, del orden de 100 a 1.000. Además,
con protones (véase la Fig. 11-39). Y el movimiento rota- existe un mecanismo activo para marcar las mitocon-
cional de los flagelos bacterianos lo proporcionan “turbi- drias procedentes de los espermatozoides para su
nas de protones”, motores rotatorios moleculares impul- degradación en el huevo fertilizado. Inmediatamente
sados no por el ATP sino directamente por el potencial después de la fertilización, los fagosomas maternos
electroquímico transmembrana generado por el bombeo migran hacia el sitio de entrada del espermatozoide,
protónico ligado a la respiración (Fig. 19-41). Parece rodean las mitocondrias masculinas y las degradan.
probable que los mecanismos quimiosmóticos aparecie-
ron pronto, antes de la aparición de los eucariotas.
e
En el DNA mitocondrial se acumulan mutaciones
a lo largo de la vida del organismo
La cadena respiratoria es el principal productor de espe- 3
RE
] Membrana externa
cies de oxígeno reactivas en las células por lo que el z añ
Membrana interna
contenido mitocondrial, incluido el genorma mitocon-
YA
drial, está sujeto a la máxima exposición, y a las lesiones,
por ROS. Además, el sistema de replicación del DNA
mitocondrial es menos efectivo que el sistema nuclear
en la corrección de errores producidos durante la repli- A Motor rotatorio A
cación así como en la reparación de las lesiones del DNA.
f
En consecuencia, los defectos en el mtDNA se acumulan ¡
]
Cadena de transterencia
:
E
Peptidoglucano
a lo largo del tiempo. Una teoría sobre el envejecimiento / electrónica y espacio
es que esta acumulación gradual de defectos es la causa p 4 ¿ periplasmático
principal de muchos de los “síntomas” del envejecimien-
to entre los que se cuentan, por ejemplo, una debilita- FIGURA 19-41 Rotación de los flagelos bacterianos por la fuerza
ción progresiva de los músculos esquelético y cardíaco. protón-motriz. El eje y anillos de la base del flagelo constituyen un
Una característica exclusiva de la herencia mito- motor rotatorio que se ha denominado una «turbina de protones». Los
protones lanzados al exterior por la transferencia electrónica fluyen de
condrial es la variación entre células individuales, y
nuevo a la célula a través de la turbina haciendo que gire el eje del fía-
entre un organismo individual y otro, en los efectos de
gelo. Este movimiento difiere fundamentalmente del movimiento del
una mutación en el miDNA. Una célula típica tiene cien-
músculo y del d s flagelos y cilios eucarióticos en tos que la hidrólisis
tos o millares de mitocondrias, cada una con múltiples
de ATP es la tuéñte de energía.
Suponga que en un organismo hembra, se produce Algunas mutaciones en los genomas mitocondriales
una lesión en un genoma mitocondrial de una célula
germinal de la que se desarrollan oocitos, de modo que
producen enfermedades
la célula germinal contiene principalmente mitocon- Alrededor de 1 por cada 5.000 personas tienen
drias de tipo silvestre pero también hay una mitocon- una mutación en una proteína mitocondrial que
dria con un gen mutante. Durante la maduración del da lugar a una enfermedad al reducir la capacidad de la
oocito, a medida que esta célula germinal y sus descen- célula para generar ATP. Cada vez hay un número mayor
dientes se dividen repetidamente, la mitocondria defec- de estas enfermedades que se pueden atribuir a muta-
tuosa se replica y su progenie, todas defectuosas, se ciones de los genes mitocondriales (Fig. 19-43). Algu-
distribuyen al azar en las células hijas. Finalmente, las nos tejidos y tipos celulares (neuronas, miocitos tanto
células huevo maduras contienen diferentes proporcio- del músculo esquelético como del cardíaco y las células
nes de la mitocondria defectuosa. Cuando se fertiliza 6 del páncreas) toleran menos que otras la disminución
una Célula huevo y experimenta la multitud de divisio- en la producción de ATP por lo que se ven más afectadas
nes del desarrollo embrionario, las células somáticas por mutaciones de las proteínas mitocondriales.
resultantes difieren en su proporción de mitocondrias Un grupo de enfermedades genéticas, conocidas
mutantes (Fig. 19-42a). Esta heteroplasmia (en con- como encefalomiopatías mitocondriales, afectan
traposición con la homoplasmia, en la que cada geno- principalmente al cerebro y al músculo esquelético.
ma mitocondrial es el mismo en todas las células) da Estas enfermedades se heredan invariablemente de la
lugar a fenotipos mutantes con diversos grados de gra- madre ya que, tal como se ha dicho anteriormente, todas
vedad. Las células (y tejidos) que contienen mayorita- las mitocondrias del embrión en desarrollo provienen del
riamente mitocondrias de tipo silvestre tienen el fenoti- huevo. La rara enfermedad neuropatía óptica heredi-
po silvestre; son esencialmente normales. Otras células taria de Leber (LHON) afecta al sistema nervioso
heteroplásmicas tendrán fenolipos intermedios, algu- central, incluidos los nervios ópticos, con pérdida de la
nos casi normales, otros anormales (con una elevada visión bilateral, al principio de la adolescencia. Un solo
proporción de mitocondrias mutantes) (Fig. 19-42b). Si cambio de base en el gen mitocondrial ND4 (Fig. 19-40)
el fenotipo anormal está asociado con una enfermedad cambia un residuo Arg por un residuo His en un polipép-
(véase más adelante), los individuos con la misma tido del Complejo 1 siendo el resultado que las mitocon-
mutación del mtDNA pueden tener síntomas de grave- drias son parcialmente defectuosas en la transferencia
dad diferente, según el número y distribución de las de electrones desde el NADH a la ubiquinona. Aunque
mitocondrias afectadas. estas mitocondrias son capaces de producir algo de ATP
T transferencia de electrones desde el succinato, apa-
0 E ON pueden suministrar ATP en cantidad
ent mantener el metabolismo neuronal,
incluido el nervio óptico, que es muy activo. Un solo
cambio de base en el gen nitocondrial del citocromo b,
FIGURA 19-42 Heteroplasmia en los genomas mitocondriales. (a)

Cuando se fertiliza una célula huevo madura, todas las mitocondrias de
Mitocondrias la célula diploide resultante (zigota) son de origen materno; nunca pro-
mutantes
e ceden del esperma. Si una parte de las mitocondrias maternas tienen un
ss SE ;
0,E
gen mutante, la distribución al azar de las mitocondrias durante las divi-
siones celulares posteriores producen algunas células hijas que contienen
mayoritariamente mitocondrias mutantes, algunas con mitocondrias
Mitocondrias mayoritariamente de tipo salvaje y algunas entre un extremo y el otro;
de tipo salvaje así, las células hijas muestran diversos grados de heteroplasmía. (b) Gra-
Célula parental
dos diferentes de heteroplasmia producen diferentes fenotipos celulares.
Esta sección de tejido muscular humano es de un individuo con cito-
la célula cromo oxidasa defectuosa. Las células se han teñido de modo que las
células de tipo salvaje sean azules y las células con citocromo oxidasa
mutante sean marrones. Tal como muestra la micrografía, diferentes célu-
las del mismo tejido están afectadas en grados diferentes por ja mutación
mitocondrial. [Fuente: Cortesía de Rob Taylor. Reproducido con permniso
de R. W. Taylor y D. M. Turmbull, Nature Rev. Genet. 6:389, 2005. Fig. 2a.]
a PE - DoS a
Mayoritariamente Mayoritariamente Completamente

mutante de tipo salvaje de tipo salvaje
Heteroplasmia Hornoplasmia
Ictus, descoordinación, cleado de un donante con mitocondrias sanas y, a conti-

epilepsia y migrañas nuación, se fertiliza el huevo in vitro y se transplanta el
| embrión resultante al útero de la madre. Este y otros
Ceguera y pérdida Sordera procedimientos similares de “niño con tres padres”, que
de movimiento ocular se aprobaron en el Reino Unido en 2015, provocan dis-
cusiones éticas que son objeto de fuerte polémica.
Mutaciones en cualquiera de los aproximadamente
=—— Defectos estructurales 1.100 genes nucleares que codifican proteínas mitocon-
| y eléctricos del corazón
driales también pueden tener como resultado enferme-
Fallo hepático —
dades mitocondriales. Por ejemplo, una mutación en
Diabetes mellitus una de das proteínas codificadas en el núcleo del Com-
Anemia —$ Fallo renal plejo IV, COX6B1, produce defectos graves en el desa-
Defecto rrollo del cerebro y paredes engrosadas del músculo
de contracción cardíaco. Otros genes nucleares codifican proteínas
intestinal y diarrea
———— Debilidad muscular, esenciales para la formación de los complejos mitocon-
intolerancia al ejercicio, driales. Mutaciones en estos genes pueden dar lugar a
rampas, atrofia enfermedades mitocondriales graves Y
Daño del y bajo tono muscular
nervio periférico
Defectos en las mitocondrias de las células 3
pancreáticas pueden ser causa de diabetes
El mecanismo que regula la liberación de insulina
de las células 4 pancreáticas depende de la con-
FIGURA 19-43 Mutaciones que producen enfermedades centración de ATP en esas células. Cuando la concentra-
mitocondriales. Las mutaciones en genes que codifican proteí- ción de glucosa sanguínea es elevada, las células 8 cap-
nas mitocondriales pueden producir enfermedades que afectan a tan glucosa que oxidan mediante la glucólisis y el ciclo
muchos órganos y sistemas orgánicos. [Fuente: información de S. B. del ácido cítrico, aumentando la [ATP] por encima de un
Vafai y V. K. Mootha, Nature 491:374, 2012.] nivel umbral (Fig. 19-45). Cuando la [ATP] excede este
umbral, se cierra un canal de K* regulado por ATP de la
un componente del Complejo Il, también produce membrana plasmática, despolarizando la membrana y
LHON lo que demuestra que la patología O desencadenando la liberación de insulina (Fig. 23-28).
dad es el resultado de una reducción BengR PA iria pancreáticas con defectos en la fosforila-
ción mitocondrial y no específicamente de E PSA 8) iva no pueden aumentar la [ATP] por encima
la transferencia electrónica a través del Complejo 1. del umbral con lo que el déficit en la liberación de insu-
Una mutación (en ATP6) que afecta el poro de pro- lina produce diabetes. Por ejemplo, defectos en el gen de
tones de la ATP sintasa produce velocidades bajas de la glucoquinasa, el isozima hexoquinasa TY presente en
síntesis e ATP mientras que la cadena respiratoria per- las células $, da lugar a una forma rara de diabetes,
manece intacta. El estrés oxidativo debido al suministro denominada MODY2 (véase el Recuadro 15-3); la baja
continuo de electrones desde el NADH aumenta la pro- actividad de la glucoquinasa impide la generación de una
ducción de ROS y las lesiones causadas por ROS a las [ATP] por enzima del umbral lo que bloquea la secreción
mitocondrias establecen un círculo vicioso. La mitad de de insulina. Mutaciones en los genes del RNA!” o tRNA-
individuos con este gen mutante mueren a los pocos le" mitocondriales también impiden la producción mito-
días o meses después del nacimiento. condrial de ATP por lo que la diabetes mellitus tipo 2 es
La enfermedad de la epilepsia mioclónica y de frecuente en individuos con estos defectos (aunque
la fibra roja rota (MERRF) está producida por una estos casos sólo constituyen una fracción muy pequeña
mutación en el gen mitocondrial que codifica un tRNA de todos los casos de diabetes).
específico para lisina (tRNA”). Esta enfermedad,
caracterizada por sacudidas musculares incontrolables,
es el resultado de la producción defectuosa de varias
de las proteínas sintetizadas utilizando tRNA mitocon-
driales. Las fibras del músculo esquelético de los indi-
viduos con MERRF tienen mitocondrias con formas
anormales que, a veces, contienen estructuras para-
cristalinas (Fig. 19-44). Se piensa que otras mutacio-
nes en los genes mitocondriales son las responsables del
debilitamiento muscular progresivo que caracteriza la
miopatía mitocondrial, así como del aumento de tamaño
y deterioro del músculo cardíaco en la cardiomiopatía
hipertrófica.
Si se sabe que una futura madre es portadora de un
FIGURA 19-44 inclusiones paracristalinas en una mitocondria
gen mitocondrial patogénico, la técnica de la donación
MERRF. Micrografía electrónica de una mitocondria anormal We! mús-
de mitocondrias puede evitar el pase del gen mutante a
culo de un individuo con MERRÉf, en la que se ven las inclusiones protei-
su descendiente. Se transplantan microscópicamente cas paracristalinas presentes, 'a vétes, en las mitocondrias mutantes.
los genes nucleares de la futura inadre al huevo enu- [Fuente: D. Wallace et ál, Cel! 55:601, 1988. O Elsevier]
Ml” Es posible combinar las mitocondrias de una mujer

con los genes nucleares de otra para crear un huevo sin
una mutación que daría lugar a una enfermedad mito-
condrial.
Hp. Célula f pancreática Canal de
, K* regulado
2 Términos clave
Glucosa
Kk —b-
UN por ATP
K'
Todos los términos en negrita están definidos en el glosario.
teoría citocromo oxidasa 716

| El ATP cierra el quimiosmótica 707 criomicroscopia
há canal de K”; la electrónica 720
hna cadena respiratoria 708
hentai Canal de Ca?* fuerza protón-motriz 721
resul abre regulado por flavoproteína 710
el canal de Ca?*. voltaje equivalente ATP sintasa 725
de reducción 710 F, ATPasa 728
y cl Ca?* ubiquinona catálisis rotacional 729
CO 00(a (coenzima Q, Q) 710 modelo del cambio
Gránulos de O4 09 citocromos 711 de fijación 731
insulina (DO proteína razón P/O 738
ferro-sulfurada 712 'azónP/le 738
proteína ferro-sulfurada lanzadera del
de Rieske 712 malato-aspartato 739
Complejo 1 714 lanzadera del glicerol
FIGURA 19-45 Un defecto mitocondrial impide la secreción de insu- NADH 3-fosfato 739
lina. En la situación mormal aquí descrita, cuando aumenta la glucosa deshidrogenasa 714 control por aceptor 737
sanguínea, aumenta la producción de ATP en las células 8, El ATP, al blo- vectorial 714 razón de acción
quear los canales de K”, despolariza la membrana plasmática abriendo Complejo H- 715 de masas (Q) 737
así los canales de Ca” regulados por voltaje. La entrada de Ca” resul- succinato tejido adiposo marrón
tante desencadena la exocitosis de vesículas secretoras que contienen deshidrogenasa 715 (BAT) 740
insulina, liberando insulina. Cuando la fosforilación oxidativa es defec-
especies reactivas de proteína desacopladora 1
tuosa en las células £, la [ATP] nunca es suficiente para desencadenar (UCP1) 740
oxígeno (ROS) 716
este proceso con lo que no se libera insulina. citocromo P-450 740
ical superóxido
xenobióticos 740
Cuando la nucleótido de nicotinamida A SIERION: apoptosis 741
nasa, que es parte de la defensa mitocondrial contra las complejo del apoptosoma 741
ROS (véase la Fig. 19-18), es genéticamente defectuosa, citocromo bc, 716 —caspasa 741
la acumulación de ROS daña la mitocondria, disminuye la cicloQ 721 heteroplasmia 744
producción de ATP y bloquea la liberación de insulina por ComplejoIV 721 homoplasmia 744
las células 8 (Fig. 19-45). Las lesiones causadas por ROS,
entre las que se encuentran las lesiones en el mtDNA,
también pueden estar en la base de otras enfermedades 2 Problemas
humanas; hay algunas pruebas de su intervención en las
enfermedades de Alzheimer, Parkinson y Huntington y 1. Reacciones de oxidación-reducción El complejo I, la
en el fallo cardíaco, así como en el envejecimiento. Y NADH deshidrogenasa de la cadena respiratoria mitocondrial,
promueve la siguiente serie de reacciones de oxidación-reduc-
RESUMEN 19.5 Genes mitocondriales: ción, en las que Fe” y Fe?* representan el hierro de los centros
ferro-sulfurados, Q es la ubiquinona, QH, el ubiquinol y E es el
su origen y efectos de las mutaciones
enzima:
MH Una pequeña proporción de las proteínas mitocon-
(D NADH + H* + E-FMN —> NAD? + E-FMNH,
driales humanas, 13 en total, están codificadas en el
genoma mitocondrial y se sintetizan en el interior de la (2) E-FMNHz + 2Fe?* —> E-FMN + 2Fe?* + 2H*
mitocondria. Unas 1.100 proteínas mitocondriales están (3) 2Fe?* + 2H* + Q —> 2Fe** + QH,
codificadas en genes nucleares y se importan a la mito-
Suma: NADH + H* + Q —> NAD* + QH>
condria después de su síntesis.
Mi” Las mitocondrias surgieron de bacterias aeróbicas
que establecieron una relación endosimbiótica con Para cada una de las tres reacciones catalizadas por el
eucariotas primitivos. complejo de la NADH deshidrogenasa, identifique (a) el dador
E” En el genoma mitocondrial s acumulan mutaciones electrónico, (b) el aceptor electrónico, (c) el par redox conju-
a lo largo de la vida del organismo. Mutaciones en los gado, (d) el agente reductor y (e) el agente oxidante.
genes nucleares o mitocondriales que codifican compo- 2. Todas las partes de la ubiquinona tienen una
nentes de la cadena respiratoria, ATP sintasa y el siste- función En la transferencia electrónica sólo la porción qui-
ma de eliminación de ROS, e incluso en los genes de nona de la ubiquinona experimenta óxido-reducción; la ca-
tRNA, producen diversas enfermedades humanas que, a dena isoprenoide permanece sin cambios. ¿Cuál es la función
menudo, afectan con mayor severidad al músculo, cora- de esta cadena? mm?
zón, células $ pancreáticas y cerebro.

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CAPÍTULO 19

Canales de porina + ATP, ADP, P, Mg?*, Ca?*, K*

* Muchos intermediarios metabólicos

TABLA 19-1 A reo ee

| a-Cetoglutarato + CoA + NAD* == succinil-CoA + CO, + NADH + H* M

B-Hidroxiacil-CoA + NAD* == Pcetoacil-CoA+ NADH + H* M

L-GLutamato + H,O + NAD(P) == o-cetoglutarato + NH; + NAD(P)H M

29mH (Fe?) tiene tres bandas de absorción en el espectro

CH; CH¿CH¿C007 CM CHCH,COO”

”y características de las formas reducidas. Longitud de onda (nm)

(a) cb) $=Cys

TABLA 19-2 Potenciales de reducción estándar de los transportadores electrónicos de la cadena

Citocromo a, (FE*) + e: —- citocromo a, (FE?) 0,35 '

Q —> Citb —=> Cite —= Cite ——> Cit(a +0) ——> O,

2 > Cito USAR 1] —— O,

¡NADH ——>Q ——> Citb ——= Cite, —— Cite —> Cilla+a)

“Número de subunidades de los equivalentes bacterianos en paréntesis.

Antimicina A Bloquea la transferencia electrónica desde

Inhibición de la ATP sintasa Aurovertina Inhibe F, |

DCCD Bloquea el flujo de protones a través de F,

Desacoplamiento de la fosforilación FCCP A ] ,

Valinomicina lonóforo del K*

Proteína Forma poros conductores de protones en la

Inhibición del intercambio ATP-ADP Atractilósido Inhibe la nucleótido de adenina translocasa

QH) + Q + cit ctoxidado) — QH2+*Q + 2Hf + cit c (oxidado) —.

Q + "Q7+2HfÍ + cit (reducido) Q + 2H7 + QH, + cit e (reducido)

Ecuación neta: QH, + 2 cit (oxidado) + 2HK —= Q+2citc(reducido) + 4HF

Los complejos mitocondriales se pueden asociar La cardiolipina, el lípido que es especialmente

FIGURA 19-15 Rutas de transferencia electrónica a la ubiquinona en

RECUADRO 19-1 MÉTODOS RARAS NA SR

Para nuestra comprensión de un proceso muy com-

00) OOOO 'Q| DOOCOCODJY

y la Ecuación 19-8 se reduce a cadena respiratoria desde el NADH al oxígeno. Suponga

En las mitocondrias que respiran activamente, la AY A La Ecuación 19-9 da la variación de energía

O, 2 glicina + NAD* —=>

RECUADRO 19-2 CORSA ES NONE

NADH N AD(P)y* NAD(P)H Ja

un poro de la ATP sintasa. Para resaltar el papel cru-

ADP + P, + nH$? —> ATP + H20 + nHf (19-10)

Mitchell utilizó el término “qui-

Se adiciona Se adiciona Se adiciona

(a) Tiempo (b) Tiempo

FIGURA 19-21 Dos desacoplantes químicos de la fosforilación oxida- (b)>

metoxifenilhidrazona (FCCP) (Tabla 19-4; Fig. 19-21).

Enz-ATP == Enz-(ADP + P;)

80 FIGURA 19-24 Diagramas de las coordenadas de reacción

(d) Vista inferior de F,,

y* (ci en mitocondrias de levadura)

A continuación la subunidad cambia de conformación, observando como, al hidrolizarse ATP, se mueve en

FIGURA 19-26 Modelo de cambio de unión para la ATP sintasa. E!

FIGURA 19-27 Demostración experimental de la rotación de F, y y. F, rediseñado

FIGURA 19-28 Modelo de rotación del anillo c impulsada por proto-

RECUADRO 19-3 MÉTODOS MNAE

brazo de palanca flexible se desplaza por una superfi-

cianobacteria Spirulina platensis. Se ha calculado que

El acoplamiento quimiosmótico permite que las

zZADP + xP, + 140, + H* + NADH —>

FIGURA 19-29 Diferencias entre especies en el número de subunida-

te de P,, ATP y ADP a través de la membrana mitocon-

Canales de porina + ATP, ADP, P, Mg?, Ca?, K*