MEDIOS DE CULTIVO

Medio Fundamento

El medio Eosina Azul de Metileno se emplea para el aislamiento, cultivo y diferenciación de bacilos
entéricos Gram-negativos.
Varios autores han reportado el empleo del medio para la identificación de Candida albicans en
EMB material clínico y para la detección de Staphylococcus coagulasa positivos .
El medio contiene eosina y azul de metileno estos ejercen una acción inhibitoria limitada sobre las
bacterias Gram-positivas y actúan como indicadores de la fermentación de la lactosa.

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano,
la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son
los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. El agar es el
McConkey agente solidificante. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la
precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen
colonias incoloras.

La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite
el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente
exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante. El
agregado de 5-10 % sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep) promueve el desarrollo de

Gelosa bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales y la adecuada observación de las

reacciones de hemólisis.

sangre
• hemolisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos = halo de color verdoso alrededor de la colonia
(debido a la oxidación de la hemoglobina a metahomglobina por el peróxido de hidrógeno
generado)
• hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos = halo calor brillante alrededor de la colonia
• hemolisis gamma: ausencia de glóbulos rojos = medio de cultivo no presenta modificaciones de
color y aspecto alrededor de la colonia de estudio

La lactosa permite la diferenciación de organismos entéricos; los organismos que fermentan lactosa
producen ácido, que en presencia del indicador rojo neutro, propicia la formación de colonias de
color rojo, mientras que los organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. Este
último grupo incluye a la mayoría de los patógenos intestinales, incluidas Salmonella y Shigella.
Agar SS El tiosulfato de sodio y el citrato férrico permiten la detección de producción de ácido sulfhídrico, al
producir colonias con centros de color negro. En el medio de cultivo la pluripeptona y el extracto de
carne aportan los nutrientes para el desarrollo microbiano. Las sales biliares y el verde brillante
inhiben el desarrollo de una amplia variedad de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los
coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.

En el medio de cultivo, el extracto de carne, la peptona de carne y la tripteína, constituyen la fuente de carbono,
nitrógeno, vitaminas y minerales que promueven el desarrollo microbiano. El manitol es el hidrato de carbono
fermentable. El cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el
desarrollo de la flora acompañante, el rojo fenol es el indicador de pH y el agar es el agente solidificante. Se trata
de un medio altamente selectivo por la alta concentración salina y diferencial debido a la capacidad de

Agar Sal fermentación del manitol por los microorganismos. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración
de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del

Manitol
color rojo al amarillo. Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una
zona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas
de una zona del mismo color o púrpura. Este medio de cultivo es recomendado para el aislamiento de estafilococos
patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos farmacéuticos, cosméticos y otros materiales de
importancia sanitaria. También puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio si no se dispone de
TCBS Medio aunque algunas especies pueden no desarrollar.
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Medio Fundamento

Su base nutritiva constituida por tripteina, extracto de levadura y glucosa permite el crecimiento
de una amplia variedad de microorganismos que involucran los escasos requerimientos
nutricionales y los nutricionalmente exigentes.

Medio La presencia de grupos-SH (aportados por la cisteína y el tioglicolato de sodio) en medios de

cultivos con digestos proteicos, disminuye el potencial de oxido reducción facilitando así el

tioglicolato
desarrollo de diversas bacterias anaerobias y además se neutralizan los efectos bacteriostáticos
de los derivados mercuriales, arsenicales y de otros metales pesados. La resazurina es el
indicador de oxido-reducción. En presencia de oxigeno es de color rosado-fucisa y es incoloro es
ausencia de oxigeno. El bajo contenido de agar le otorga la propiedad de ser un medio fluido y
retarda la dispersión de CO2 y O2.

Medio no selectivo, contiene pluripeptona (una mezcla de partes iguales de peptona de carne y de caseína) y

Caldo carne extracto de carne que constituyen la fuente de carbono y nitrógeno necesarias para el adecuado desarrollo
bacteriano. Puede ser utilizado además, como preenriquecimiento en la búsqueda de Salmonella spp. a partir
de alimentos, ya que permite recuperar células dañadas, diluir metabolitos tóxicos y sustancias inhibitorias.

Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La infusión de
cerebro de ternera, la infusión de corazón vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrógeno, y
vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y
el fosfato disódico otorga capacidad buffer. El agar es el agente solidificante. El agar cerebro corazón mantiene

BHI los mismos principios que el caldo para el cultivo de estreptococos y otras bacterias exigentes. Puede ser
suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril o con sangre equina desfibrinada estéril, permitiendo así
Brain-Heart-Infusion el desarrollo de hongos de difícil crecimiento. Con el agregado de 10% de sangre de caballo desfibrinada, fue
utilizado para el crecimiento de Histoplasma capsulatum y de hongos patógenos. Por tratarse de un medio que
contiene glucosa, no es un agar sangre apropiado para la observación de reacciones de hemólisis. Con el
agregado de 20 Ul de Penicilina y 40 µg/ml de estreptomicina, se utiliza este medio para el aislamiento
selectivo de hongos patógenos.

La molécula del almidón es muy compleja y para su asimilación por las bacterias, éstas deben descomponerla
(hidrolizarla) en sustancias más simples y fácilmente asimilables. Un gran número de bacterias son capaces
de elaborar una enzima amilasa que hidroliza el almidón con formación de maltosa. La maltosa puede
ingresar a la célula para ser utilizada. La enzima amilasa es también una enzima extracelular, por lo tanto la

Agar almidon demostración de la hidrólisis del almidón puede hacerse tanto en medio líquido como en medio sólido.
El reactivo lugol se utiliza para reconocer la presencia de almidón, porque esta sustancia adsorbe el yodo
produciendo una coloración azul intensa, coloración que desaparece al calentar, porque se rompe la estructura
que se ha producido, pero vuelve a aparecer al enfriar.
En el medio sólido (sobre las placas) al agregar la solución de lugol, se formará un color azul si no hubo
hidrólisis; la aparición de una zona clara alrededor de las colonias significa la hidrólisis del almidón.

La Gelatina Nutritiva se utiliza para investigar la presencia de microorganismos proteolíticos, como lo

demuestra la licuefacción de la gelatina, especialmente en el análisis bacteriológico del agua. La tasa de

Gelosa licuefacción es importante en la caracterización de grupos familiares de enterobacterias y otros grupos de

microorganismos.

gelatina
La identificación de bacilos Gram-negativos fermentativos y no fermentativos incluye la prueba de
licuefacción de gelatina. Si la enzima proteolítica gelatinasa está presente, la gelatina se hidroliza y pierde su
característica de gelificación.
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Pruebas bioquímicas Fundamento

La capacidad de una bacteria de metabolizar un hidrato de carbono específico incorporado en

Kligler un medio de crecimiento básico. Producción o no de gases CO2 e H2 como productos del
metabolismo de los hidratos de carbono. Producción de ácido sulfhídrico (SH2).

Determinar si una bacteria es capaz de utilizar citrato como fuente de carbono y compuestos
Citrato de Simons amoniacales como fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del
medio.

Detecta la presencia del sistema citocromooxidasas que activa la oxidación del citocromo que
Prueba de oxidasa es reducido por el oxígeno molecular produciendo agua o peróxido de hidrogeno

Prueba de Detecta la presencia de la enzima catalasa que se encuentra generalmente en

microorganismos que poseen citocromos. Las bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan el
catalasa peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno que se libera en forma de burbujas.

La capacidad de un organismo para causar la fermentación de un carbohidrato específico

incorporado a un medio de base, cuyo resultado es la producción de ácido o ácido y gas, se ha
utilizado para caracterizar una especie específica o grupos de bacterias, además de favorecer la
Prueba:Caldo diferenciación de los géneros y de las especies.
La peptona de caseína podía utilizarse con el rojo fenol indicador de pH en las pruebas de
base rojo de fermentación con un alto grado de exactitud.
El digerido pancreático de caseína proporciona nutrientes y presenta un nivel bajo de
fenol con carbohidratos fermentables. El indicador de pH, rojo fenol, se utiliza para detectar la producción
de ácido. Los caldos de rojo fenol, preparados con una concentración final de 0,5% de
campana de carbohidrato, son apropiados para la determinación de reacciones de fermentación. La mayoría
de los productos finales de fermentación de carbohidratos son ácidos orgánicos que, en
Durham presencia de rojo fenol, producen un cambio de color en el medio de rojo a amarillo. Si se
produce gas durante la reacción de fermentación, se recoge en el tubo Durham invertido. No
debe aparecer color amarillo en el tubo de control. En tal caso, los resultados no pueden
interpretarse correctamente, dado que el ácido se ha producido sin fermentación.

El sistema integrado de BBL GasPak de BD produce una atmósfera adecuada para soportar el
aislamiento primario y el cultivo de bacterias anaerobias, microaerofílicas y capnofílicas
utilizando sobres generadores. Método para cultivar bacterias que mueren o no crecen en

Gaspak presencia de oxígeno (anaerobios).

El sistema de jarra GasPak consta de un recipiente de policarbonato durable diseñado con una
tapa especial que se asegura para generar un intercambio adecuado de gases en el interior del
recipiente.
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Pruebas bioquímicas Fundamento

El triptófano es metabolizado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso intervienen
enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de

SIM Ehrlich, para originar una coloración roja. A partir del tiosulfato de sodio las bacterias pueden
generar ácido sulfhídrico que reacciona con el hierro presente formándose un compuesto de
color negro.

En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo

bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. La glucosa puede ser
metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía
Caldo triptona utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o
productos finales neutros (acetil metil carbinol). Esta diferencia en el metabolismo bacteriano
para rojo de podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo de metilo, para revelar la
presencia de productos ácidos, y por la adición de alfa naftol e hidróxido de potasio para
metilo evidenciar la presencia de productos finales neutros.

Prueba del rojo de metilo: Resultado positivo: color rojo.

Resultado negativo: color amarillo

Detecta la presencia del sistema citocromooxidasas que activa la oxidación del citocromo que
es reducido por el oxígeno molecular produciendo agua o peróxido de hidrógeno
Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparecía después de adicionar
hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta
Caldo triptona coloración se debe a la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo, el cual reacciona con la
peptona del medio para dar un color rojo.
para VP Prueba de Voges Proskauer:

Resultado positivo: desarrollo de un color rojizo en pocos minutos después de una completa
agitación del tubo.
Resultado negativo: ausencia de color rojo.

La leche tornasolada es un medio diferencial utilizado para determinar diversas funciones

metabólicas de un microorganismo: a) fermentación de la lactosa, b) caseólisis y c)
coagulación de la caseína. El tronasol incorporado en la leche indica tanto pH como (oxidación-

Leche reducción); por eso, el medio puede denotar diversas funciones metabólicas. La leche sola
contiene únicamente el hidrato de carbono lacotsa junto con tres proteínas pricnipales:

tornasolada
caseína, lactoalbúmina y lactoglobulina. Por consiguiente, un microorganismo puede exhibir
una o varias propiedades metabólicas en la leche tornasolada, cada una específica para una
especie particular, hecho que ayuda a la identificación bacteriana: a) fermentación de la
lactosa, b) reducción del tornasol, c)formación de un coágulo, d) peptonización y e) formación
de gas.

Tripticasa
Es un medio selectivo que puede usarse en tubos o placas para la identificación y enumeración
de Clostridium perfringens en alimentos y otros materiales, especialmente de flora
contaminante mixta. La peptona de caseína proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y
sulfato de aminoácidos esenciales para el crecimiento. El extracto de levadura es fuente de vitaminas,
particularmente del grupo B. El citrato férrico y el sulfito sódico son indicadores H2S. C.
neomicina y perfringens reduce el sulfito a sulfuro que reacciona con el hierro y forma un precipitado de
sulfuro de hierro negro, resultando en colonias negras. Los sulfatos de polimixina y neomicina

polimixina inhiben el crecimiento de la mayoría de la flora secundaria, como las enterobacterias y

Clostridium bifermentans
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Pruebas bioquímicas Fundamento

Su participación juega un papel en la eliminación de la acción nociva del radical superóxido O2,

Superóxido estas están presentes frecuentemente en organismos aeróbicos, aerotolerantes y algunos

anaerobios obligados; son esenciales para su defensa contra la toxicidad producida por los

dismutasas
metabolitos parcialmente reducidos, generados durante la reacción biológica normal del
oxígeno molecular. Estas enzimas catalizan la conversión del radical superóxido en peróxido de
hidrógeno y oxígeno molecular.

Es un sistema simple para la incubación anaerobia de hasta cuatro placas de Petri o un panel
de identificación. El sistema consiste en una funda de plástico y un sobre de papel, el sobre
contiene ácido ascórbico y carbón activado que reaccionan en contacto con el aire. El oxígeno

Anaerogen es rápidamente absorbido y se produce dióxido de carbono como resultado de la reacción.

Cuando el sobre de papel se coloca en una jarra hermética especial, la reacción crea las
condiciones atmosféricas ideales para el crecimiento de microorganismos anaerobios. El
sistema no requiere catalizadores, por lo que no es necesaria la adición de agua para activar la
reacción.