Articulo Final Biotecnología

Biodegradación de fosfatos en aguas contaminadas por fertilizantes utilizando Chlorella vulgaris
Biodegradación de fosfatos en aguas contaminadas por fertilizantes utilizando

Chlorella vulgaris
Biodegradation of phosphates in contaminated water by fertilizers using Chlorella vulgaris
Fabian Castañeda1, Edwin Mancipe1, Angie Velasco1

1
Universidad Distrital Francisco José de Caldas, Facultad del Medio Ambiente y los Recursos Naturales
Ingeniería Sanitaria
Resumen
El uso de microorganismos para combatir la contaminación de los cuerpos de agua es una alternativa
viable y prometedora debido a su alta capacidad para recuperar o remover nutrientes de los mismos.
Chlorella vulgaris es una microalga fotosintética, que se encuentra ampliamente en aguas de reutilización
y usada como bioremediación en dichos cuerpos contaminados. El objetivo fundamental de la aplicación
de esta microalga para el tratamiento de aguas eutrofizadas por fertilizantes es la utilización y
biotransformación de los nutrientes a biomasa. Para contrarrestar el efecto negativo de estas sustancias
sobre los cuerpos de agua, se diseñó un fotobiorreactor el cual, a condiciones controladas de luz, aireación
y a temperatura ambiente, permitió determinar mediciones tales como el aumento de la biomasa, remoción
de sustrato y pH. Los resultados obtenidos, con base a diversos autores, determina una remoción del
80,46% del fósforo total presente en la muestra de agua, un aumento en el pH a 7,4 y un crecimiento
celular de hasta 4 veces su concentración inicial, siendo este de 1,096x107 cel/mL. Con esto se afirma la
capacidad que tiene la microalga en biotratamientos de aguas contaminadas por diferentes compuestos
como los fertilizantes. ssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssss
Palabras clave
Microalga, Fotobiorreactor, Biodegradación, Fosfatos, Fertilizantes.
Abstract
The use of microorganisms to combat the contamination of water bodies is a viable and promising
alternative due to their high capacity to recover or remove nutrients from them. Chlorella vulgaris is a
photosynthetic microalgae, which is widely found in reuse waters and used as bioremediation in said
contaminated bodies, the fundamental objective of the application of this microalgae for the treatment of
eutrophied waters by fertilizers is the use and biotransformation of nutrients to biomass. To counteract the
negative effect of these substances on water bodies, a photobioreactor was designed which under
controlled conditions of light, aeration and at room temperature, allowed to determine measurements such
as the increase in biomass, removal of substrate and pH. The results obtained, based on various authors,
determine a removal of 80.46% of the total phosphorus present in the water sample, an increase in pH to
7.4 and a cell growth of up to 4 times its initial concentration, being this of 1,096x107 cells / mL. This affirms
the capacity of the microalgae in biotreatment of water contaminated by different compounds such as
fertilizers.
Key words
Microalgae, Photobioreactor, Biodegradation, Phosphates, Fertilizers.
Introducción microalgas y formas superiores de vida vegetal,

provocando pérdida de especies y de función del
La eutrofización es el proceso de contaminación más ecosistema a causa, en su mayoría, de la actividad
importante de las aguas en lagos, balsas, ríos, humana. Los fertilizantes artificiales cuya
embalses, etc. Salgueiro (2016) expone que esta composición es rica en dichos compuestos, son a
problemática se derivada de los altos niveles de menudo aplicados en cantidades más allá de lo que
nutrientes, produce un enriquecimiento del agua, los cultivos necesitan para crecer, donde el
especialmente en compuestos de nitrógeno y excedente se transporta mayormente por efecto de
fósforo, originando un rápido crecimiento de las lluvias y el riego de las tierras agrícolas a los
Nestor Fabian Castañeda Aguilar, 20192781020, nfcastanedaa@correo.udistrital.edu.co, Jhon Edwin Mancipe Bohorquez,
20192781022, jemancipeb@correo.udistrital.edu.co, Angie Paola Velasco Mendez, 20192781023,
anpvelascom@correo.udistrital.edu.co
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cuerpos de agua, produciendo su eutrofización. Las Se halló utilizando la ecuación de crecimiento de

microalgas ofrecen un enfoque eficaz y de bajo costo Guillard (1973), en la cual se tienen en cuenta
para eliminar el exceso de dichos nutrientes y otros variables como concentración inicial de células (X0),
contaminantes al tiempo que producen biomasa la velocidad específica de crecimiento (μ) y el tiempo
potencialmente valiosa, debido a su alta capacidad de estudio en horas (t).
de absorción de nutrientes inorgánicos.
Chlorella vulgaris es una microalga eucariota verde Para poder calcular μ se utilizó:
típica, se distribuye ampliamente en agua de
reutilización, estanques, lagos e incluso océanos.
Este tipo de microalga se produce a alta velocidad
renovándose en cuatro nuevas células cada 17-24 Donde: (T) Tiempo de generación y (n) Número de
horas (Liao, J. 2013), gracias a esto es posible generaciones
generar una cantidad suficiente en poco tiempo para
tratar gran cantidad de agua dando así mayor
efectividad con menores costos; generalmente estas Determinación del sustrato diariosssssssssssss
microalgas son cultivadas en biorreactores o en este Al precisar la cantidad del sustrato inicial y final se
caso en un fotobiorreactor que acelera la puede determinar el valor diario de sustrato. Primero
productividad de la misma gracias a que es posible se halla el rendimiento general del sustrato para así
controlar todos los factores físicos y químicos dentro poder cuantificar el valor diario (Sf) el cual se
del mismo. determinó mediante el despeje de la fórmula 1,
dentro de la cual se tienen en cuenta diversas
variables como: el rendimiento del sustrato (y), la
La investigación realizada, tuvo como objetivo concentración inicial de células (Xo), la
principal comprobar la efectividad de remoción de concentración final de células (X) y el sustrato inicial
fosfatos haciendo uso de la microalga Chlorella (So). El sustrato final (Sf) fórmula:
vulgaris, con el fin de disminuir la eutroficación de
cuerpos de agua, asegurando una mejor calidad
para las especies vivientes en el medio y los
individuos beneficiados directamente, así mismo se
realizó el diseño de un fotobiorreactor que actuó
como medio para degradar fosfatos y se analizó la
cinética de crecimiento de la microalga.
Materiales y métodos Muestra de agua

La muestra de agua empleada fue de solución
Microalga hidropónica residual con las siguientes
Se utilizó una cepa de microalga Chlorella vulgaris características fisicoquímicas (tabla1.)
proveniente del Laboratorio de Microbiología y
Biotecnología ambiental de la Universidad Distrital Tabla 1. Características físico-químicas de la
Francisco José de Caldas, la cual fue entregada en solución hidropónica residual
medio líquido llamado MCHP6 modificado (sin
ningún suministro complementario de fosfatos), con
pH 7 y con una concentración aproximada a 1X106
células por mililitro. Las células se contaron en el
cuadro central (25 cuadros) de la cámara Neubauer,
considerando solo los 5 cuadros menores del cuadro
central marcado, la concentración celular se calcula
promediando el conteo de estos 5 cuadros y
finalmente multiplicando por 250000 para obtener
una concentración en células/mililitro.
Medición Biomasa
Para la medición de Chlorella vulgaris se utilizó un
Hemocitómetro y el conteo se realizó de la misma
forma anteriormente explicada (cámara Neubauer).
Al definir la biomasa inicial y la final se procede a
Fuente: Cleber et al. (2007)
estimar la concentración de células/mililitro diarias.
Nestor Fabian Castañeda Aguilar, 20192781020, nfcastanedaa@correo.udistrital.edu.co, Jhon Edwin Mancipe Bohorquez, 20192781022,
jemancipeb@correo.udistrital.edu.co, Angie Paola Velasco Mendez, 20192781023, anpvelascom@correo.udistrital.edu.co
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Para eliminar bacterias y protozoos, se filtró y en agua por digestión ácida (método del ácido
esterilizó en autoclave durante 20 minutos a una ascórbico) trabajado por el IDEAM (2004) ya que en
temperatura de 121 ºC así como lo realizaron Chia, su composición química los fertilizantes pueden
et al. (2013). contener este nutriente de diferentes formas como lo
son: fosfato monoamónico, fosfato diamónico, fosfo-
Cultivo sulfato de amonio, superfosfato simple, superfosfato
Se toma del precultivo a la fase exponencial triple, ácido ortofosfórico y/o ácido super fosfórico
2,74x106 células/mL trabajado por Chia, et al. (2013) (Marasas, 2020).
y muy similar al utilizado por Marchello, et al. (2015)
que sirvió como inóculo el cual se transfirió al Medición de pH
biorreactor con un volumen del 5% (volumen Para la medición de pH se empleó un phmetro
inoculación / volumen medio) el cual contenía 2700 digital. Dado a las condiciones de tiempo del
mL de la muestra de agua a tratar. experimento, se opta por lo ya mencionado en el
cultivo, que es hacer toma de muestra al inicio y final
del experimento.
Los parámetros manejados fueron: temperatura
ambiente trabajada por Chang et al. (2018)
mostrando ser adecuada ya que diferentes autores Fotobiorreactor
tales como Venckus, et al (2017), Cabral de Araújo, De acuerdo con lo descrito por los autores González
et al. (2017) y Zheng et al. (2019) emplean valores et al., (2019) el diámetro del contenedor cilíndrico de
cercanos. La luminosidad de 3600 Lux con un ciclo acrílico transparente del fotobiorreactor discontinuo
claro/oscuro 12hD/12hN, tal como lo expresa (ver imagen 1) fue de 12 cm, una altura de 35.4 cm
González et al. (2019), Hussein, et al. (2017) y y un volumen total de 4 L. Para evitar la
Zheng et al. (2019). El potencial de hidrógeno fue 7 contaminación se implementó un cierre hermético,
inicialmente, un valor de pH neutro suministrado debido a que el flujo de aire debe salir por la tapa de
directamente del laboratorio y que fue utilizado por acrílico transparente, se proporcionó una abertura
Chia, et al. (2013), así mismo, valores de pH cercano con un filtro de poliuretano con una porosidad de 30
a 7 son usados en la mayoría de estudios guías para ppi (poros por pulgadas) a la entrada y a la salida
el presente proyecto como lo son el de Cabral de que impidió la contaminación por partículas. Para el
Araújo, et al. (2017), Ramos & Pizarro (2018) y el de suministro de aire se usó una bomba eléctrica que
Cleber et al. (2007). El tiempo de duración fue de 7 succiona el aire ambiente y lo incorpora al
días, siguiendo lo recomendado en el estudio de biorreactor, la salida del mismo consta de 10
Cleber et al. (2007), y teniendo en cuenta el poco agujeros de 2 mm de diámetro distribuidos en la
tiempo disponible del grupo de trabajo por tratarse tapa. Para la luminosidad se usaron 4 lámparas led
de una investigación universitaria a nivel de de luz blanca de 3600 lux con soporte en acero
laboratorio. inoxidable, para la agitación se diseñó una paleta
giratoria que funciona mecánicamente con ayuda de
A diario se tomaron muestras de 60 mL para realizar un motor eléctrico y regulador de velocidad, por
la medición de fósforo total, concentración de último se cuenta con una llave de paso plástica que
biomasa y se hizo un control de luz; el pH se midió permitió la toma de las muestras para la medición
al inicio y al final del experimento. Así mismo se diaria.
realizó una agitación mecánica una vez al día antes
de tomar las mediciones a 2 rpm durante 5 minutos Imagen 1. Diseño Fotobiorreactor
ya que Venckus, et al (2017) afirma que con esta
técnica se logra una mejor homogeneidad de la
mezcla y una toma de parámetros más exacta.
Finalmente, al tratarse de un estudio en el cual se
busca emplear aguas contaminadas con
fertilizantes, hay que considerar como expresa
Chang et al. (2018) el amonio en el medio de cultivo,
ya que este según los autores debe tener una
concentración menor a 50 mg / L para que no impida
a las células de las microalgas realizar su función de
recuperación de nutrientes.
Medición de fosfatos
Al tratarse el estudio sobre la remoción de fosfatos
causados por fertilizantes se realizó la medición de
fósforo total empleando el método de Fósforo Total Vista perspectiva
3
estas investigaciones trabajan con muestras de

aguas eutrofizadas, aguas residuales y aguas con
fertilizantes. De esta manera, se obtiene de estos
trabajos un dato promedio para definir la remoción
de fósforo total con un resultado de 80.46% (ver
tabla 1) para el proyecto en curso.
Los resultados obtenidos para la remoción de fósforo

total diaria se pueden ver en la tabla 2 y el
comportamiento de la disminución de sustrato se
puede evidenciar en la imagen 2 .
Tabla 1. Medición de parámetros iniciales
Vista Frontal
Fuente: Autores Fuente: Autores
Resultados y discusión de resultados
Tabla 2. Crecimiento celular y remoción de
Biomasa sustrato
En la investigación realizada por Cleber et al. (2007)
el crecimiento celular fue de 2,5x106cel/mL a
5,7x106cel/mL, es decir, 2,3 veces
aproximadamente en 7 días de medición; Peltroche
et. al (2018) indica que la densidad celular inicial
medida, presentó un incremento alrededor de 6
veces con respecto a la densidad inicial, esto es que
de (2,50±0,51 x106 cel/mL) aumentó a (17,67±2,81
x106 cel/mL) en un tiempo de 10 días, el trabajo
desarrollado por Wang et al. (2013) refleja un
aumento de la microalga de casi 1,5 veces con Fuente: Autores
respecto al inóculo, pasando así de tener una
densidad algal de 2,83x109 a 4,25×109 cel/l. Por
esto, de manera comparativa entre los diversos
autores, se procede a promediar y se define para
este estudio un valor final de biomasa de 3,26 veces
aproximandolo a 4 veces con relación al inóculo, lo
que corresponde a una concentración final de
1,096x107 cel/mL (ver tabla 1).
Los resultados obtenidos para el crecimiento diario

se evidencian en la tabla 2 y el comportamiento de
crecimiento se puede evidenciar en la imagen 1.
Remoción de fósforo
Según estudios realizados por Zheng et al. (2019),
Cleber et al. (2007), Chang et al (2018), Salgueiro et
al. (2016) y Peltroche et. al (2018), indican una
eficiencia de remoción de fósforo total en
porcentajes de 95%, 52%, 72,1%, 99,2%, y 84%
respectivamente, donde los tiempos de trabajo de
los reactores fueron de 9 7, 8, 9 y 10 días
respectivamente. Los valores se tomaron como base Imagen 2. Crecimiento celular (arriba) y
para calcular la remoción de fósforo total, ya que remoción de fósforo total (abajo)
Fuente: Autores
4
Dada la interpretación de datos usados cuerpos contaminados por compuestos como los
comparativamente entre los autores mencionados fertilizantes, mostrando así una reducción
en los resultados, estos permitieron determinar unos considerable, superando en un tiempo
valores cercanos a lo esperado en el laboratorio. medianamente corto el 70% de remoción esperado
Esto se evidencia en la interpretación gráfica del en análisis previos. sssssssssssssssssssssssssss
aumento de concentración de células y además, la
remoción de fósforo total, que al cabo de 7 días - Con el diseño del fotobiorreactor se comprueba
mostró resultados concisos con base a los artículos que, con las condiciones adecuadas como
mencionados como se muestran en la imagen 2. temperatura, luz, aireación y un volumen de trabajo
Dicho esto, es fundamental precisar que los datos ideal, el aumento de células de Chloella Vulgaris es
promediados, son reflejo de la proyección equivalente con la disminución de fósforo en el
experimental esperada en este artículo. medio, sirviendo como alimento de la microalga
dando una solución a diferentes problemáticas
A partir de los resultados obtenidos se puede ambientales como lo es la eutrofización en los
evidenciar el potencial de adaptación de la microalga cuerpos de agua.
al medio, como se puede apreciar en la imagen 2 el
crecimiento que tiene Chlorella vulgaris en los siete - Es posible afirmar que la cinética de crecimiento de
días de tratamiento comprueba de esta manera su la microalga Chlorella vulgaris es la adecuada ya que
condición biológica de asimilar nutrientes como lo es en todo proceso biológico lo esperado es que a
el fósforo, incorporarlos a su biomasa como lo medida que aumenta el número de células,
menciona Cleber et al. (2007) en su investigación. disminuya la concentración de sustrato.
Dicho potencial de crecimiento se logra por la
influencia de factores como la temperatura, que Bibliografía
como lo menciona Chang et al. (2018), Venckus, et
al (2017), Cabral de Araújo, et al. (2017) y Zheng et ● Cabral de Araújo. N, Tavares de Sousa. J,
al. (2019) muestra una temperatura óptima para el Duarte. V, Cavalcante de Paula e Silva. M.
aumento en la densidad celular. (2017). Potencial de remoção de fósforo em
biorreator operado com células de chlorella
El valor de pH aumentó durante el crecimiento de las sp imobilizadas em matriz de alginato de
algas alcanzando un valor de 7,4 (Hanumantha, et cálcio. Universidade Estadual da Paraíba,
al. 2011). Este comportamiento era el esperado, ya Brasil. Recuperado de:
que el incremento de la densidad celular de las https://www.researchgate.net/publication/32
microalgas aumenta la actividad fotosintética, que se 7487533_Potencial_de_remocao_de_fosfor
veía favorecida por las lámparas led reduciendo el o_em_biorreator_operado_com_celulas_de
contenido de CO2 en el medio de cultivo, _Chlorella_sp_imobilizadas_em_matriz_de
aumentando consecuentemente el pH (Cleber et al. _alginato_de_calcio
2007). Salazar, M. (2005) también aclara que el ● Chang, H., Quan, X., Zhong, N., Zhang, Z.,
aumento del potencial de hidrógeno favorece la Lu, C., Li, G., Cheng, Z., & Yang, L. (2018, 1
precipitación de los fosfatos, la oxigenación del agua octubre). High-efficiency nutrients
y la oxidación de la materia orgánica, reduce los reclamation from landfill leachate by
organismos patógenos y la recuperación del O2 microalgae Chlorella vulgaris in membrane
liberado en el proceso fotosintético, entre otros photobioreactor for bio-lipid production.
beneficios. Así mismo al incorporar el sistema de ScienceDirect.https://www.sciencedirect.co
aireación en el biorreactor, se incrementa la m/science/article/abs/pii/S09608524183085
productividad de la biomasa y a su vez se eleva la 63.
biorremoción de nutrientes, tal como lo afirma ● Chia, M; Lambordi, A; Melao, M. (2013).
Marchello, et al.(2015), que explica que la reducción Growth and biochemical composition of
de fosfato es más intensa en el tratamiento aireado Chlorella vulgaris in different growth media.
y se asocia con el consumo de las microalgas, Anais da Academia Brasileira de Ciências
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Biodegradación de fosfatos en aguas contaminadas por fertilizantes utilizando Chlorella vulgaris

Biodegradación de fosfatos en aguas contaminadas por fertilizantes utilizando

Biodegradation of phosphates in contaminated water by fertilizers using Chlorella vulgaris

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cuerpos de agua, produciendo su eutrofización. Las Se halló utilizando la ecuación de crecimiento de

Materiales y métodos Muestra de agua

estas investigaciones trabajan con muestras de

Los resultados obtenidos para la remoción de fósforo

Tabla 1. Medición de parámetros iniciales

Los resultados obtenidos para el crecimiento diario

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environmental engineering and landscape ● Zheng, Yi; Qiang, C; Fangzhi, J; Shitao, P;

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