IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS

Ivan Calvo, Daniela Bautista, Sebastián Polania

Estudiantes de Ing Agroecológica, Facultad de Ingeniería

Universidad de la Amazonia, Bioquímica, 22/10/2019

RESUMEN

Introducción: Las proteínas en los seres vivos tienen 50% de peso total, su
estructura costa de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos, existen 300
aminoácidos de las cuales las proteínas usan solos 20. Los aminoácidos tienen
la capacidad de formar dos tipos de isómeros, D y L, las cuantiosas
combinaciones que se pueden lograr con los 20 aminoácidos en las cadenas
polipeptídicas. En el adulto normal, la excreción urinaria de aminoácidos es
constante; en un periodo de 24 horas se excreta un promedio de 200 mg de
nitrógeno alfa aminado.

Metodología: En el desarrollo de esta práctica se realizaron diferentes ensayos

cualitativos ( ninhidrina, millón, xantoproteico, reacción de sakaguchi, reacción
de Ehlrich, reacción de Hopkins cole y reacción con acetato de plomo alcalino)
con el objetivo de identificar aminoácidos presentes en muestras conocidas
como el huevo, la harina de trigo, de igual forma se siguió una marcha analítica
para caracterizas una muestra problema la cual finalizo en el reconocimiento de
albuminas; debido a la especificidad de cada de esas pruebas y las
características estructurales de cada aminoácidos se consiguió reconocer la
presencia o ausencia de ellos en las muestras analizadas.

Discusión de resultados: La reacción xantoproteica permitió identificara

proteínas que contenían grupos aromáticos, específicamente grupos
fenolp-sustituidosEsta prueba indicó que la albumina contiene una cantidad
significativa de tirosina, posiblemente de otros aminoácidos con
grupos aromáticos como fenilalanina y triptófano.
La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con aminoácidos que
tengan el grupo amino libreLa hidrindantina reacciona a su vez con el
amoniaco y otra molécula de ninhidrina para dar un compuesto de
adición doble que presenta una coloración azul-purpura

Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan

con ácido nítrico concentrado formando nitro derivados de color
amarillo o anaranjado por lo cual esta reacción permite reconocer la
presencia de tirosina, fenilalanina y triptófano

Este aminoácido se condensa fácilmente con varios aldehídos en presencia de

ácidos fuertes para dar compuestos coloreados. En la reacción se utiliza el
reactivo de Ehrlich (p-dimetilaminobenzaldehído al 10% en HCL con c.) que
reacciona con un buen número de compuestos orgánicos tales como índoles,
aminas aromáticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados.
Conclusiones: un resultado positivo o negativo de acuerdo a las
características y composición de cada una de ellas evidenciado en
coloraciones, presencia de anillos las características de estas pruebas y se
logró la identificación cualitativa desustancias que pueden contener
aminoácidos, proteínas o péptidos.

PALABRAS CLAVES: reacción de Hopkins, aminoácidos, albumina, acetato de

plomo, cisteína, ensayo de millón

INTRODUCCION

Las proteínas constituyen el grupo de compuestos más abundante en los seres

vivos; en algunos casos representan hasta 50% del peso total seco. Esta
abundancia se debe a que desempeñan diversas funciones:

Catálisis, en el caso de las enzimas, Transporte, en el de la hemoglobina,

Almacenamiento, como sucede con la ferritina, Movimiento (p. ej., actina y
miosina), Soporte mecánico (colágeno), Protección inmunológica, a través de
los anticuerpos. Regulación de procesos biológicos y comunicación celular,
como algunas hormonas y sus receptores.

Las proteínas son macromoléculas de elevado peso molecular, porque su

estructura consta de cadenas de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos
entre el grupo alfa carboxilo de un aminoácido y el grupo alfa amino de otro.

Aunque en la naturaleza existen más de 300 aminoácidos, las proteínas sólo

utilizan 20, de diferente tamaño, forma, carga, capacidad de formar puentes de
hidrógeno o enlaces disulfuro y reactividad química.

Los aminoácidos tienen la capacidad de formar dos tipos de isómeros, D y L,

que indican si el grupo amino se encuentra a la derecha o a la izquierda del
carbono quiral. En las proteínas, sólo se encuentran los isómeros l-alfa.

Las cuantiosas combinaciones que se pueden lograr con los 20 aminoácidos

en las cadenas polipeptídicas, otorgan gran diversidad a las funciones
proteínicas.
La presencia de grupos químicos ionizados en los aminoácidos permite que las
proteínas presenten características fisicoquímicas específicas en el
microambiente biológico; de allí la importancia de su estudio.

A varios aminoácidos se les denomina esenciales, porque el organismo carece

de la capacidad de sintetizarlos y, por tanto, es necesario ingerirlos en la dieta.
Los aminoácidos no esenciales son los que el cuerpo humano sí puede
sintetizar.

El catabolismo deficiente de los aminoácidos lleva a su acumulación en el

plasma y su excreción excesiva en la orina; a esto se le conoce como
aminoaciduria. En el adulto normal, la excreción urinaria de aminoácidos es
constante; en un periodo de 24 horas se excreta un promedio de 200 mg de
nitrógeno alfa aminado. Existen diversos trastornos en que aumenta la cantidad
de aminoácidos en la orina. El objetivo de esta práctica es identificar algunos
aminoácidos que presentan grupos características en las cadenas laterales
utilizando ensayos cualitativos y específicos para cada función.

METODOLOGIA
Materiales.

 8 tubos de ensayo de ml con gradillas

 Pinza para tubos de ensayo
 Bureta de 25 ml con divisiones de 0.05 ml con soporte universal
 Una pinza de bureta

 Una probeta graduada por 100 ml

 Vasos precipitados de 50 y 300 ml
 Pipeta graduada de 5 ml
 Ph-metro
 Baño maría
 Placa de calentamiento

Ensayo con ninhidrina

Reacción para la detección de aminoácidos, actualmente acoplada a sistemas
de valoración automática. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) es un

oxidante energético que por una desaminación oxidativa de los aminoácidos

conduce a la formación del aldehído correspondiente, con liberación de
amoniaco y gas carbónico y formación de la ninhidrina reducida o
hidrindrantina. La molécula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina,
condensa a través del amoniaco produciendo una estructura denominada
indanona o púrpura de Ruhemann, manifestando un color rojizo, excepto para
la prolina, hidroxiprolina y en menor medida para la histidina. Presenta su
máximo de absorbancia a los 570 nm, exceptuando los tres aminoácidos
reseñados anteriormente.

• Añadir 2ml de:

* Lisina 0,5%

* Aspártico 0,5%
* Prolina 0,5%

 Incorporar 2 ml de ninhidrina 0,2% en etanol 95%

 Calentar al baño maría
 Observar los resultados

Prueba de Millón

Ensayo específico para los aminoácidos fenólicos (tirosina). Esta reacción da

una tonalidad rosa o un precipitado rosa.

 Poner 3 ml de tirosina 0,02%

 Añadir 4 gotas de reactivo de Millón (10 g de mercurio en 10 mL de
ácido nítrico fumante. Se le incorpora 40 ml de agua y se deja reposar.
Finalmente se decanta.)
 Nota: El proceso debe realizarse en campana con extractor

 Calentar en el baño maría

 Observar el cambio de coloración
Prueba de Sakaguchi

Esta prueba es positiva para compuestos que contengan el grupo guanidinio

como la arginina. El reactivo que se utiliza contiene α-naftol e hipoclorito
sódico, en medio alcalino. La aparición de una coloración roja es indicativo de
una reacción positiva.

 Poner 5 mL de arginina al 0,02%

 Añadir 1 mL de NaOH 2M

 Añadir 1 mL de α-naftol al 0,02% en etanol

 Enfriar en hielo
 Añadir 1 mL de disolución alcalina de hipoclorito sódico

 Esperar 30 segundos
 Añadir 1 mL de disolución de urea
  Observar los cambios

Prueba de Hopkin-Cole

Implica la reacción del grupo indol del triptofano con el ácido glioxílico, en
presencia de ácido sulfúrico concentrado.

 Tomar 3 mL de triptofano 0,02%

 Añadir 1 mL de reactivo de Hopkin-Cole (10 g de magnesio más agua
hasta que éste quede cubierto. Mantener lentamente en agitación
continua, añadir 250 mL de disolución saturada y fría de ácido oxálico.
Filtrar y acidificar con ácido acético diluido y enrasar con agua hasta 1 L)
 Añadir el contenido del tubo a otro que contenga 1 mL de ácido sulfúrico
concentrado Si la reacción es positiva se coloreará la zona de contacto

Reacción Xantoprotèica

Se extrae una muestra de leche y de clara de huevo, se pone en tubos de

ensayo por separado se añade 2mL de HNO3 a cada tubo, calentamos y
dejamos enfriar: Posteriormente añadimos hidróxido de sodio al 40% en cada
muestra y observamos los resultados

Rotule 6 tubos de ensayo de la misma manera que para el ensayo de Millon.

Agregue a cada tubo 2 mL. de la solución correspondiente y 2 mL. de ácido
nítrico concentrado. Caliente en baño de agua a ebullición, la aparición de una
coloración amarilla es una prueba positiva para aminoácidos aromáticos. Deje
enfriar y agregue a cada tubo de ensayo 1.5 mL. de NaOH 40%, el cambio de
color a anaranjado confirma la prueba.
Reacción de Ehlrich

En 5 tubos de ensayo rotulados como: blanco, triptófano, problema, albúmina

de huevo, proteína de trigo. Agregue a cada tubo en el siguiente orden: 1 mL
de ácido sulfanilico 0.5% y 1 mL. de Nitrito de sodio, mezcle bien y deje en
 reposo durante 15 min. Luego a cada tubo agregue 1 mL. de la solución
correspondiente al rótulo. Mezcle y adicione a cada tubo 0.5 mL. de NH4OH
10%. Observe y anote los resultados.

Reacción con acetato de Plomo alcalino

Rotule 6 tubos de ensayo como: blanco, metionina, cisterna, problema,

albúmina de huevo y proteína de trigo. En cada uno agregue 2 mL. De la
solución correspondiente, 2 mL. de NaOH 10% y 0.5 mL. de acetato de Plomo
al 10%. Caliente en baño de agua a ebullición por 5 min. La formación de un
precipitado gris oscuro o negro es prueba positiva para aminoácidos azufrados.

Discusión de resultados

ENSAYOS ALBUMINA TRIGO ALANINA BLANCO PROBLEMA TIROSINA ARGINA TIROXINA TRIPTOF
ANO
ENSAYO Obtuvo un No cambio No cambio No cambio de
DEL cambio a de color de color No cambio de color
MILLÓN color morado color
(uva)
ENSAYO Obtuvo un Esta Obtuvo una No hubo Cambio es
DE cambio a muestra coloración cambio decir obtuvo
NIHIDRINA color morado se de café una
(uva) precipito claro precipitación
y obtuvo
una
coloraci
ón turbia
ENSAYO Obtuvo una Obtuvo una Se obtuvo
DE coloración coloración una
EHLRICH naranja en la naranja con coloración
parte superior un anillo roja es decir
y en la parte blanco en la positiva
inferior una parte
coloración inferior pero
blanca el anillo es
muy claro y
pequeño
REACCIÓN Esta muestra Fue Esta
DE resulto negativa ya muestra
SAKAGUC negativa ya que dio una fue
HI que dio una coloración positiva
coloración verde ya que
blanca y en dio una
su fondo café coloraci
oscuro ón roja
REACCIÓ Tiene un No tiene En la
N DE anillo violeta ningún parte
HOPHINS cambio de inferior
color tiene un
color
amarillen
to con
café

La reacción xantoproteica permitió identificara proteínas que contenían

grupos aromáticos, específicamente grupos fenol p-sustituidos. De las
proteínas analizadas sólo la albumina dio un resultado positivo, al igual que el
aminoácido tirosina. Esta prueba indicó que la albumina contiene una cantidad
significativa de tirosina, posiblemente de otros aminoácidos con
grupos aromáticos como fenilalanina y triptófano. Como se muestra en
la Ecuación 1, la proteína al reaccionar con HNO3 produce una proteína
nitrada, la cual adquiere un color amarillo, no obstante, esta técnica solo es útil
para el análisis cualitativo y no para el análisis cuantitativo, porque no
es posible cuantificar compuestos nitrarlo mediante colorimetría

Espectrofotometría debido a la reacción, en cuestión de rendimiento y

presencia de un isómero en posición.
La ninhidrina (hidrato de
tricetohidrindeno)
reacciona con aminoácidos que
tengan el grupo
amino libre. La ninhidrina
es una agente
oxidante de los grupos
alfa-amino, liberando
amoniaco, CO2 y el
correspondiente aldehído,
así como la forma reducida
de la ninhidrina
(hidrindantina). La
hidrindantina reacciona a su
vez con el amoniaco y
otra molécula de
ninhidrina para dar un
compuesto de adición
doble que presenta una
coloración azul-purpura,
con la excepción de la prolina e
hidroxiprolina
que da una coloración
amarillenta (en la prolina
el grupo amino está
sustituido) y café para la
asparagina que tiene un
grupo amido en la
cadena lateral. (Escalante,
2014)
La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con aminoácidos que
tengan el grupo amino libre. La ninhidrina es una agente oxidante de
los grupos alfa-amino, liberando amoniaco, CO2 y el correspondiente
aldehído, así como la forma reducida de la ninhidrina (hidrindantina).
La hidrindantina reacciona a su vez con el amoniaco y otra molécula
de ninhidrina para dar un compuesto de adición doble que presenta una
coloración azul-purpura, con la excepción de la pollina e hidroxiprolinaque da

una coloración amarillenta (en la propínale grupo amino está sustituido) y

café para la asparagina que tiene un grupo amino en la cadena
lateral. (Escalante, 2014)

La reacción es debida a la
presencia del grupo
hidroxifenílico (-C6H4OH)
en la molécula
proteica. El anillo fenólico
tiene un
comportamiento característico
frente a las sales
de mercurio a pH ácido,
formando complejos
color rojo ladrillo con el
anillo fenólico de la
tirosina. (Giraldo, 2010).
La reacción es debida a la presencia del grupo hidroxifenílico (-C6H4OH) en
la molécula proteica. El anillo fenólico tiene un comportamiento
característico frente a las sales de mercurio a pH ácido, formando
complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico de la tirosina. (Giraldo,
2010).

Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan

con ácido nítrico concentrado formando nitro derivados de color
amarillo o anaranjado por lo cual esta reacción permite reconocer la
presencia de tirosina, fenilalanina y triptófano. (Bárcena, 2011)
Los aminoácidos azufrados como metionina, cisteína y cistina se
reconocen por la formación de precipitados de sulfuro de plomo de color gris
oscuro o negro que se forman cuando reacciona con acetato de plomo en
medio alcalino.(Giraldo, 2010)

Este aminoácido se condensa fácilmente con varios aldehídos en presencia de

ácidos fuertes para dar compuestos coloreados. En la reacción se utiliza el
reactivo de Ehrlich (p-dimetilaminobenzaldehído al 10% en HCL con c.) que
reacciona con un buen número de compuestos orgánicos tales como índoles,
aminas aromáticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados.

Conclusión:

Existen diferentes pruebas para la identificación de proteínas y

aminoácido que permiten establecer un resultado positivo o negativo
de acuerdo a las características y composición de cada una de ellas,
evidenciado en coloraciones, presencia de anillos, etc. Se establecieron
las características de estas pruebas y se logró la identificación cualitativa
desustancias que pueden contener aminoácidos, proteínas o péptidos.
Bibliografía

 https://es.wikipedia.org/wiki/Albúmina
 https://blog.nutritienda.com/l-cisteina/
 http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz1.htm
 https://www.ecured.cu/Asparagina
 https://aminoacidos.top/asparagina/
 http://www.ehu.eus/biomoleculas/peptidos/pep2.htm
 https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Hopkins-Cole

 https://cuidateplus.marca.com/alimentacion/diccionario/aminoacidos.html
 https://es.wikipedia.org/wiki/Reactivo_de_Millon