Guia Clase Practica Nro 3

UNIVERSIDAD CATÓLICA “NUESTRA SEÑORA DE LA ASUNCIÓN”
CAMPUS UNIVERSITARIO DEL GUAIRÁ

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD-CARRERA DE MEDICINA
Cá tedra de Microbiología – Parte Prá ctica
PRACTICA NRO 3
NOMBRE Y APELLIDO: Oliver Euribiades González CÓDIGO: Y17199

Espínola
GRUPO NRO: G2 DIA Y FECHA: 19/04/2022
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVOS:
1. Operar el autoclave para esterilización

2. Identificar los diferentes tipos de medios de cultivo para el desarrollo
microbiano
3. Conocer la utilidad de los medios de cultivos para la obtención de productos
biológicos
4. Valorar la importancia de evitar la contaminación de los medios de cultivo
como de los materiales que deben permanecer estériles durante los
procedimientos
ESTRATEGIA DE EVALUACIÓN: lista de cotejo, pruebas escritas sobre la práctica,

entrega, presentación y defensa de los resultados obtenidos al final de la práctica
FUNDAMENTO DEL ENSAYO:
Es necesario que el estudiante que se inicia con los procedimientos microbiológicos,

conozca los diferentes medios de cultivo utilizados en un laboratorio de
microbiología, su preparación, utilización en un laboratorio de rutina, además, la
utilidad que tienen los medios de cultivo en la industria para la producción de
sustancias biológicas que son utilizados para tratamiento de diferentes
enfermedades del ser humano.
MARCO TEÓRICO
Los microorganismos necesitan para su desarrollo de sustancias nutritivas y físicas

para que puedan sintetizar sus enzimas metabólicas y poder multiplicarse, además
de condiciones ambientales adecuadas que les permita desarrollarse. Es decir, un
medio de cultivo es aquel que proporcione no solo las sustancias nutritivas, sino
también, las condiciones ambientales como temperatura, pH, humedad, presión,
aerobiosis, anaerobiosis, etc., que permitan la actividad metabólica de los
Dr. César Monges Alonso Página 1

microorganismos. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, por

ello, la variedad de medios de cultivo también lo es, no existiendo un medio de
cultivo universal adecuado para todos ellos.
Los géneros y especies bacterianas tienen particularidades en cuanto a sus

necesidades nutricionales y atmosféricas, y, de acuerdo a ellas se clasifican de
diferentes maneras, por ejemplo, existen bacterias acidófilas, acidúridcas,
acidógenas, alcalófilas, halófilas, capnófilas, aerobias, anaerobias, facultativos,
microaerófilos, heterótrofas, autótrofas, fotótrofas, psicrófilos, mesófilos, termófilos.
Clasificación de los medios de cultivo:
1. Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza, por ejemplo,
sangre, suero sanguíneo, plantas, huevos, leche, componentes orgánicos y
minerales de la tierra, agua, etc.
2. Artificiales: Son medios producidos por el hombre en un laboratorio,

normalmente en forma liofilizada, las que pueden ser completamente sintéticos
porque se conocen con exactitud sus componentes y concentración o artificiales
complejos, este último, cuando se conoce en parte la concentración y su
composición química, aunque no de manera completa.
Clasificación de los medios complejos según su finalidad:
1. Medios no selectivos: Permiten el desarrollo de una gran variedad de

microorganismos, como el Agar sangre, Mueller-Hinton.
2. Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna manera para
que, en una flora mixta, permitan el desarrollo de determinadas especies y al mismo
tiempo inhiban la proliferación de otras bacterias o de la flora acompañante. Para
esto último se busca establecer condiciones desfavorables de pH, nutrientes y de
temperatura, o por el agregado de inhibidores: azida, antibióticos, eosina, azul de
metileno, cristal de violeta, verde brillante. Ejemplo: Agar McConkey en la que crece
solo la mayoría de los Gram negativos (contiene eosina), Agar Sabouraud tiene un
pH de 5,6 favoreciendo el desarrollo de hongos e inhibiendo con ese pH el
desarrolllo de la mayoría de las bacterias.
Aunque dos o más tipos de microorganismos pueden crecer en este medio, algún
elemento presente en él permite diferenciarlos, por ejemplo un indicador. Estas
diferencias se basan en alguna propiedad bioquímica que unos poseen y otros no.

Un ejemplo de este tipo es el agar EMB o eosina con azul de metileno que diferencia
Escherichia coli, que en este medio se muestran con colonias oscuras y brillo
metálico, mientras las de Enterobacter aerogenes son rosadas con un centro azul y
rara vez presentan brillo.
Componentes y condiciones habituales de un medio de cultivo:
- pH adecuado
- Estéril
- Sin sustancias inhibidoras del microorganismos que se desea aislar
- Agua destilada
- Sales minerales
- Agar, que se utiliza como agente gelificante para que el medio adquiera
solidez. El agar es un polisacárido que se obtiene a partir de algas marinas.
- Fuente de aminoácidos: peptona (se obtiene por digestión enzimática o
química de proteínas animales o vegetales (soja, carne, gelatina, caseína,
sangre total, plasma, suero, etc)
- Fuente de carbono: citrato, lactosa, sacarosa, glucosa
- Sistemas amortiguadores: para mantener el pH dentro del rango óptimo del
crecimiento bacteriano
- Indicadores de pH: Indicadores ácido-base se añaden a menudo a los medios
de cultivo con objeto de detectar variaciones del Ph
- Agentes reductores: Cisteína, tioglicolato y otros son agentes reductores que
se añaden a los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el
desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios
- Agentes inhibidores para la selección del desarrollo del microorganismos de
interés
MATERIALES, REACTIVOS E INSTRUMENTALES:
- Ansas bacteriológicas
- Heladera
- Balanza
- Varilla de vidrio
- Vaso de precipitado
- Placas de Petri
- Tubos de 5, 10 ml con tapa a rosca
- Gradillas
- Calentador eléctrico

- Autoclave
- Erlenmeyer de 250, 500, 1000 ml
- Cintas de control químico de esterilización
- Esporas de Bacillus stearotermophilus
- Sangre de carnero, conejo o humana
- Medios de cultivos: Agar Base Sangre, Agar McConkey, Agar Müeller-Hinton,
Agar SS, Agar CLED, TSI, LIA, UREA, MIO, CITRATO, SIM.
BIOSEGURIDAD:
Se debe tener especial cuidado en los siguientes puntos:
• Especial cuidado, atención y control al operar con el Autoclave. El manómetro

debe ser observado periódicamente de tal manera que no sobrepase la presión de
1,5 atm
• El calentador eléctrico que se utilizará para calentar y disolver los medios
deben controlarse antes de su uso, pues es frecuente que se encuentre averiado en
su sistema eléctrico y generar un corto circuito
• Mechero: Si es mechero de Bunsen manipular correctamente la perilla de la
válvula de cierre/apertura del flujo de gas. Si es mechero con alcohol, evitar los
derrames ubicando en un lugar que no esté bajo la manipulación constante de ansas
ansas y placas.
• Placas de Petri y otros materiales de vidrio: si son de vidrio manipularlos con
cuidado para evitar roturas
• Cultivos bacterianos: sean líquidos o sólidos, para ser eliminados deben ser
previamente autoclavados.
• En casos de derrame, primero desinfectar con solución de hipoclorito de sodio
y luego limpiar.
• Luego de realizar cualquier procedimiento microbiológico, lavarse bien las
manos con agua y jabón. Luego desinfectarse con alcohol de 70 grados.
PROCEDIMIENTO:
En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados,

normalmente liofilizados, por lo que es preciso rehidratar. En general, la preparación
de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad deseada del
mismo y disolverla con agua destilada, siguiendo las instrucciones del fabricante y
luego esterilizarlo.

Preparación de los medios de cultivo:
1. Realizar los cálculos de acuerdo a las instrucciones del fabricante

2. Colocar un Erlenmeyer de volumen acorde a la cantidad de medio de cultivo a
ser preparado
3. Tarar el Erlenmeyer
4. Agregar el medio de cultivo en polvo previamente pesado
5. Agregar el volumen de agua destilada o desionizada que se ha calculado
6. Llevar a ebullición agitando periódicamente
7. Si se va preparar medios de cultivos que irán en tubos, distribuir en estos en
esta etapa con los volúmenes apropiados según necesidad
8. Esterilizar en autoclave 20 minutos a 1,3 atm y 121°C. No olvide que el tiempo
debe controlarse recién luego de que se alcance la presión indicada
9. Desinfectar la mesada sobre la que se procederá a realizar el plaqueado
10. Dejar enfriar hasta unos 45°C y distribuirlas en las placas de Petri excepto
aquellas que requieren agregados de sustancias o sangre. En esta etapa los medios
de cultivos agarizados que se encuentran en tubos y que se requieren picos de
flauta, deben inclinarse con el ángulo adecuado usando un paño u otro material
sobre la que se dispondrán los tubos hasta su solidificación
11. No dejar destapadas las placas de Petri una vez agregados los medios de
cultivos para evitar contaminación con esporas micóticas o bacterianas. Se puede
colocar la tapa de la placa dejando que el vapor sea eliminado para evitar mucha
condensación de agua
12. Identificar los medios y escribir la fecha de preparación con marcador
indeleble
13. Guardar los medios de cultivo en heladera a 8°C - 10°C de manera invertida.
Los medios que se encuentran en tubos con tapas de algodón o con rosca deben
guardarse en frascos con tapa para evitar contaminaciones prematuras posteriores
CÁLCULOS:
AS. Agar sangre Agar McCankey
40 gr ---------- 1000 ml 50 gr ---------- 1000 ml
X: gr ---------- 200 ml X: gr ---------- 200 ml
X: 8 gr X: 10 gr
Agar Mueller Hinton Agar sangre: Medio no selectivo
38 gr ---------- 1000 ml Agar McCankey: Medio selectivo (gram negativo)
Dr.
X:César Monges
gr ---------- Alonso
200 ml Página
Agar Mueller 5 Para hacer antibiograma
Hinton:
X: 7,6 gr
RESULTADOS CON EVIDENCIAS FOTOGRÁFICAS:
Medios de cultivo
Agar Mueller Hinton - Agar McCankey – Agar sangre Agar de chocolate
Agar de McCankey

Esterilización de los cultivos Medios de cultivos solidificados

CONCLUSIÓN:
En conclusión, en esta práctica logramos conocer diferentes tipos de medios de

cultivos que contienen los nutrientes necesarios para el crecimiento de determinadas
bacterias, virus, hongos que nos permitan aislar con el objetivo de realizar estudios
complementarios a los mismos.
Descubrimos que los medios de cultivos pueden clasificarse según su consistencia

en líquidos, sólidos y semisólidos. Según el origen pueden ser medios naturales
(sangre, suero sanguíneo, huevo, leche, plantas) y medios artificiales sintetizados
por el hombre en un laboratorio (caldo nutritivo, agar blando). Según su finalidad son
medios no selectivos (agar sangre, Muller Hilton) y selectivos (agar McCankey en la
que crece la mayoría de los gram negativos y agar Sabourand).
Para la preparación de los medios de cultivos debemos primeramente hacer el

cálculo de los gramos que necesitamos para el volumen que se desea preparar con
regla de tres simple, en segundo lugar, esterilizamos los medios de cultivo en la
autoclave.
La importancia del estudio de los medios de cultivo en el área clínica es muy

importante pues gracias a este se pueden detectar cuales son los causantes de
ciertas infecciones en el organismo y así mismo crear métodos de prevención de las
mismas ya sea mediante vacunas o antibióticos.

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1. Operar el autoclave para esterilización

ESTRATEGIA DE EVALUACIÓN: lista de cotejo, pruebas escritas sobre la práctica,

FUNDAMENTO DEL ENSAYO:

Es necesario que el estudiante que se inicia con los procedimientos microbiológicos,

Los microorganismos necesitan para su desarrollo de sustancias nutritivas y físicas

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microorganismos. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, por

Los géneros y especies bacterianas tienen particularidades en cuanto a sus

Clasificación de los medios de cultivo:

2. Artificiales: Son medios producidos por el hombre en un laboratorio,

Clasificación de los medios complejos según su finalidad:

1. Medios no selectivos: Permiten el desarrollo de una gran variedad de

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Componentes y condiciones habituales de un medio de cultivo:

MATERIALES, REACTIVOS E INSTRUMENTALES:

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Se debe tener especial cuidado en los siguientes puntos:

• Especial cuidado, atención y control al operar con el Autoclave. El manómetro

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados,

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Preparación de los medios de cultivo:

1. Realizar los cálculos de acuerdo a las instrucciones del fabricante

40 gr ---------- 1000 ml 50 gr ---------- 1000 ml

X: gr ---------- 200 ml X: gr ---------- 200 ml

Agar Mueller Hinton Agar sangre: Medio no selectivo

38 gr ---------- 1000 ml Agar McCankey: Medio selectivo (gram negativo)

RESULTADOS CON EVIDENCIAS FOTOGRÁFICAS:

Agar Mueller Hinton - Agar McCankey – Agar sangre Agar de chocolate

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Esterilización de los cultivos Medios de cultivos solidificados

En conclusión, en esta práctica logramos conocer diferentes tipos de medios de

Descubrimos que los medios de cultivos pueden clasificarse según su consistencia

Para la preparación de los medios de cultivos debemos primeramente hacer el

La importancia del estudio de los medios de cultivo en el área clínica es muy

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