BACTERIOLOGÍA

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“AÑO DE LA UNIDAD LA PAZ Y EL DESARROLLO”

INSTITUTO DE EDUCACION SUPERIOR TECNOLOGICO PRIVADO

“ANTONIO LORENA”

TEMA: BACTERIOLOGÍA

PROGRAMA PROFESIONAL DE ENFERMERIA TECNICA

UNIDAD DIDACTICA: MUESTRAS BIOLOGICAS

DOCENTE: EDGAR MIGUEL ARDILES SAMATA

GRUPO: 6

INTEGRANTES:

 MIRIAN YOVANA TTITO FLORES

 YOSELIN ESTEFANY GUTIERREZ MEZA

 ELVIRA RAMOS MAMANI

 SHADE XIOMARA GUEVARA SERRANO

 MILUSKA HUAMAN OROSCO

 UBALDINA RODRIGUEZ LLACTA

 GAYS CCANA CONDORI

SEMESTRE: IV

TURNO: MAÑANA “A”

CUSCO-PERU - 2023
INTRODUCCION

Las infecciones microbianas cada vez más constituyen un serio problema de salud pública, ya sea
por su efecto sobre la salud de los pacientes, como por los costos que este problema implica.

Esto hace que en el país se estén aunando esfuerzos para implementar sistemas de vigilancia,
prevención y control, orientados a enfrentar este problema, lo cual a su vez repercutirá en la
calidad de atención de los servicios hospitalarios. Los pacientes con procesos infecciosos
intrahospitalarios pueden presentar una gran variedad de signos y síntomas, algunos de ellos
pueden ser evidentes y fáciles de reconocer, mientras otros pueden pasar inadvertidos; por lo que
el clínico debe basar su diagnóstico en otras evidencias disponibles, como son los aspectos
epidemiológicos y la importante contribución del laboratorio que, además de permitir el
diagnóstico etiológico, orienta el manejo clínico terapéutico del paciente.

En este contexto, el Instituto Nacional de Salud, en su rol de Centro de Referencia Nacional,


establece procedimientos de laboratorio que se realizan en los diferentes establecimientos y
niveles de la Red de Laboratorios, ha aprobado, previa validación con los expertos de
microbiología de los principales hospitales nacionales del Ministerio de Salud

Se tiene por objetivo establecer los procedimientos de diagnóstico bacteriológico y


susceptibilidad antimicrobiana de los agentes más frecuentes de las infecciones intrahospitalarias,
como Staphylococcus spp, Enterococcus spp, Enterobacter, Escherichia coli, Klebsiella
pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa siendo su propósito estandarizar los procedimientos
bacteriológicos en los establecimientos de salud que desarrollan actividades vinculadas al manejo
de las infecciones intrahospitalarias.

Se establece los objetivos, los campos de aplicación, responsabilidades y definiciones; se orienta


sobre la bioseguridad; está referida a los procedimientos de obtención de muestras; sobre el
envío y transporte de muestras, y la última sobre los procedimientos de diagnóstico
bacteriológico.

El Instituto Nacional de Salud, organismo técnico normativo, pone a disposición del personal de
salud este manual que representa el resultado del esfuerzo de los profesionales de la institución y
otros destacados especialistas en el tema en nuestro país.
BACTERIOLOGÍA

La disciplina de la bacteriología se ocupa de todos los aspectos de la genética, la estructura, la fisiología,


el comportamiento, la patogenicidad, la ecología y la evolución de las especies bacterianas. Las
investigaciones bacteriológicas son esenciales en el diagnóstico clínico y el control de calidad industrial.
La aplicación del microscopio en bacteriología implica la tinción de los microorganismos con métodos
adecuados (por ejemplo, tinción de Gram) para determinar la clasificación bacteriana o para detectar
micobacterias.

 Tinción de Gram
 Tinción de micobacterias
 Tinción para tricomonádidos
 Aplicaciones de la bacteriología en otras industrias
 Tinciones habituales en bacteriología diagnóstica y sus usos

¿Qué es una prueba de cultivo de bacterias?

Las bacterias son organismos unicelulares. Existen muchos tipos de bacterias. Viven en todo el cuerpo y
la piel. Algunos tipos de bacterias son inofensivos e incluso beneficiosos. Otros causan infecciones y
enfermedades.

Una prueba de cultivo de bacterias puede detectar bacterias perjudiciales dentro o sobre el cuerpo que
pueden estar causando enfermedades. Para hacer la prueba, necesitará entregar una muestra de
sangre, orina, piel u otro tejido. El tipo de muestra depende de dónde parece estar localizada la
infección.

Para detectar qué tipo de bacteria puede tener, un profesional de la salud examinará un gran número
de células bacterianas. Para esto, su muestra se enviará a un laboratorio donde se cultivará hasta que
haya suficientes bacterias para la prueba. En general, los resultados están listos en pocos días. Sin
embargo, algunos tipos de bacterias se reproducen lentamente, por lo que sus resultados pueden tardar
varios días o más.

La efectividad de un laboratorio microbiológico y el éxito de los procedimientos dependen en gran


medida del modo de obtención, transporte, rapidez y oportunidad con que las muestras llegan al
laboratorio. Estos procedimientos son prioritarios para que el laboratorio contribuya eficientemente con
el diagnóstico, es por ello que todos los miembros involucrados del equipo de salud deben entender la
naturaleza crítica de mantener la calidad de la muestra durante todo el proceso.

PROCEDIMIENTOS PARA DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO

Las bacterias requieren de sustancias nutritivas cuyos componentes básicos deben satisfacer las
mínimas exigencias nutricionales y condiciones de atmósfera (aerobiosis, anaerobiosis, miroaerofilia),
pH y temperatura óptima para su crecimiento in vitro.

La elección de los medios de cultivo se realiza en función a la localización de las infecciones y las
bacterias a investigar. Los errores cometidos durante este paso del ciclo de procedimientos pueden
invalidar la lectura e interpretación de los cultivos. (minsa, s.f.)
PRINCIPIOS GENERALES

 Las bacterias requieren de medios de cultivo que contengan sustancias nutritivas parecidas en lo
posible al medio natural en el que viven y se reproducen.
 Es importante conocer la procedencia de la muestra, para escoger el medio de cultivo apropiado que
permita el crecimiento del microorganismo que se necesita estudiar.

Las sustancias nutritivas, que contienen los medios de cultivo son:

 Compuestos orgánicos nitrogenados.


 Compuestos inorgánicos.
 Sustancias energéticas, etc.
 Los medios de cultivo se agrupan de acuerdo con
 Su estado físico
 Medio líquido.
 Medio sólido.
 Medio semisólido

Los requerimientos para el diagnóstico son:

Medios nutritivos simples

Se usa para el cultivo de la mayoría de las bacterias. Ejemplo: caldo y agar nutritivo.

Medios nutritivos enriquecidos

Permite el crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos nutritivos. Ejemplo: agar


sangre y agar chocolate.

Medios selectivos o especiales

Permiten solo el crecimiento de la especie que se desea aislar. Contienen sustancias que impiden el
desarrollo de algunos grupos bacterianos, favoreciendo a su vez el desarrollo de otros. Ejemplo: agar
Mac Conkey, agar hipertónico de Chapman, etc.

Medios diferenciales

Ponen de manifiesto la actividad bioquímica de un microorganismo, lo cual permite diferenciado de otro


parecido.

Medios para transporte

Permite el transporte y la viabilidad de microorganismos. Ejemplo: el medio de Stuart es útil para el


transporte y conservación de la viabilidad del gonococo hasta por 24 horas.
PREPARACIÓN DE LOS PRINCIPALES MEDIOS DE CULTIVO

 Se debe asegurar el máximo porcentaje de sustancias nutritivas de crecimiento.


 Debe adaptarse la reacción final del medio de cultivo, a un pH óptimo para los microorganismos
que se van a cultivar, con errores no mayores de 0,1 de la unidad del pH requerido.
 No debe olvidarse que una filtración exagerada del medio puede eliminar las sustancias nutritivas.
 La esterilización debe tener un control minucioso de la temperatura y tiempo de duración. La
prolongación indebida en el tiempo de esterilización destruye las sustancias nutritivas y se
produce una reducción del volumen de los medios.
 Debe usarse durante la preparación de los medios solo recipientes de cristal, de preferencia Pyrex
o similares.
 La repartición de los medios de cultivo se realiza siempre cerca del mechero de Bunsen (o de
alcohol), en tubos o placas Petri. En los tubos se debe formar un plano inclinado y en las placas
se debe tener una distribución homogénea.
 Los medios de cultivo contenidos en tubos se conservan mejor en refrigeración, ya que se
disminuye la evaporación.

Se tiene medios inclinados en tubo y medios en placa Petri:

Medios inclinados en tubo, se emplea principalmente para resembrar cepas aisladas previamente,
con la finalidad de identificarlas.

Medios en placa Petri, se emplea principalmente para permitir el crecimiento de colonias


individualmente aisladas. Las placas se colocan en la estufa con la base hacia arriba.

Debe seguirse al pie de la letra las instrucciones escritas en relación con la preparación de medios
de cultivo, debiendo usarse exclusivamente, productos químicamente puros, a no ser que se
indique lo contrario.

En casas comerciales los medios se adquieren en forma deshidratada. Se debe registrar en el


recipiente del medio deshidratado la fecha de recepción y de apertura. Entre uso y uso, se debe
almacenar como se indica en la etiqueta, con escasa luz, baja humedad ambiental, y con el
recipiente fuertemente tapado.
Antes de empezar a usar un nuevo lote de medios de cultivo, realizar un control de calidad del
medio.

A. MEDIOS NUTRITIVOS SIMPLES


CALDO NUTRITIVO

PREPARACIÓN

 Disolver en agua destilada los ingredientes previamente pesados.


 Someter a la acción del calor, agitando constantemente hasta llegar al primer hervor.
 Ajustar el pH con las tiras indicadoras de pH. Si está por debajo de un pH de 6,8 (ácida)
agregar gota a gota la solución de NaOH, si por el contrario está por encima de 7,4
(a1calino) agregar gota a gota la solución de HCL hasta el pH adecuado (7,0 - 7,4).
 Envasar el medio en tubos y esterilizar en autoclave a 121 °C por 15 minutos.
 Controlar la esterilidad colocando el medio envasado en una incubadora a 37 °C por 24
horas.
 Mantener el medio envasado en la refrigeradora hasta el momento de usarlo.

AGAR NUTRITIVO

PREPARACIÓN

 Disolver los ingredientes previamente pesados en 1 000 mL de agua destilada, cuidando


de disolver primero el agar.
 Someter a la acción del calor y calentar hasta el primer hervor para que se disuelva por
completo, agitando constantemente.
 Ajustar el pH con las tiras indicadoras de pH. Si está por debajo de un pH de 6,8 (ácida)
agregar gota a gota la solución de NaOH, si por el contrario está por encima de 7,0
(alcalino) agregar gota a gota la solución de HCL hasta el pH adecuado (6,8 - 7,0).
 Envasar el medio en tubos o placas de Petri y llevados a esterilizar al autoclave.
 Controlar la esterilidad colocando el medio envasado en una incubadora a 37 °C por 24
horas y mantener el medio envasado en la refrigeradora hasta el momento de usarlo.
 El medio debe ser de color ámbar claro, de transparente a ligeramente opalecente.

B. MEDIOS NUTRITIVOS ENRIQUECIDOS

AGAR SANGRE

 En un frasco licuar 100 mL de agar nutritivo estéril, en baño maría a 55 °C.


 Dejar enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45 °C, es decir, hasta que el calor sea
soportable en el dorso de la mano.
 Agregar 5 mL de sangre citrada o desfibrinada de carnero con una pipeta estéril. Agitar
por rotación en forma suave, con el fin de obtener una buena mezcla y evitar la formación
de burbujas.
 Su color normal debe ser rojo cereza homogénea.
 Repartir el contenido en placas Petri estériles y dejar solidificar.
 Controlar la esterilidad en incubadora a 37 °C, por 24 horas.
 Mantener el medio envasado en la refrigeradora.

AGAR CHOCOLATE

 Preparar agar sangre hasta obtener su color normal rojo cereza.


 Llevar el agar sangre antes de su solidificación al baño maría a 80 °C por 10 minutos. Por
el calentamiento, el color rojo cereza cambiará al chocolate, debido a la ruptura de los
hematíes y la salida de la hemoglobina.
 Durante el calentamiento mezclar constantemente para evitar la formación de
precipitado (grumos).
 Repartir con mucho cuidado en las placas Petri para evitar la formación de burbujas.
 Otra manera de preparar agar chocolate es utilizar como base un agar de Mueller Hinton
mezclado con sangre de carnero.

C. MEDIOS SELECTIVOS O ESPECIALES

PREPARACIÓN

 1.Para rehidratar el medio se suspenden 50 gramos de agar Mac Conkey en 1 000 mL de


agua destilada fría.
 2.Calentar hasta el punto de hervor para disolver el medio completamente.
 3.Esterilizar en la autoclave durante 15 minutos a 121 ºC.
 4.Cuando el medio se ha enfriado a 50 ºC, repartir en placas Petri más o menos 20 a 25
mL por placa.

AGAR SALMONELLA SHIGELLA (SS)

PREPARACIÓN

 Para rehidratar el medio preparado se suspende 60 gramos de agar salmomella shiguella


en 1 000 mL de agua destilada fría.
 Calentar hasta punto de hervor para disolverlo por completo.
 Repartir el medio en placas Petri, más o menos 20 a 25 mL por placa.

AGAR TRIPLE AZÚCAR HIERRO (TSI)

PREPARACION

 Pesar 65 g de agar triple azúcar hierro (TSI) para 1 000 mL de agua destilada.
 Calentar al fuego hasta mezclar completamente.
 Esterilizar a 121 ºC, durante 15 minutos.
 Repartir en tubos, de tal manera que queden con 2,5 cm de fondo y 3,5 cm de tendido (medio
inclinado).

D. MEDIOS DE TRANSPORTE

MEDIO DE CARY Y BLAIR

PREPARACIÓN

 Colocar los ingredientes en un balón con el agua destilada.


 Calentar en baño maría hasta que la solución esté clara (no se permite
 que hierva).
 Enfriar a 50 °C. Agregar 9 mL de solución de cloruro de calcio al l %
 recién preparada y ajustar el pH a 8,4 con NaOH 10 N gota a gota.
 Colocar cantidades de 5 a 7 mL en tubos con tapas de rosca (aflojado)
 estériles de 13 x 100 mm.
 Esterilizar (no en autoclave) a 100 °C en baño maría hirviendo durante
 15 minutos. Se aprietan las tapas después de la esterilización.

MEDIO TRANSGROW – TG

Este medio está compuesto por agar Thayer Martin modificado al cual se le agrega bicarbonato de
amonio hasta lograr una concentración final de 0,1 %.

MÉTODOS DE SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO

 La siembra es el procedimiento por el cual se pone en contacto el microorganismo con un


medio de cultivo, para que en condiciones óptimas de temperatura y tiempo de
incubación pueda desarrollarse y multiplicarse in vitro.
 Siempre debe trabajarse cerca del mechero de Bunsen para flamear la boca del tubo o la
placa Petri con el medio, antes y después de sembrar para evitar contaminaciones.
 Para sembrar en placa Petri es importante que la superficie del medio este
completamente seca, para conseguir esto las placas deben quedar en reposo durante 2
horas.
MATERIALES

 Muestras para cultivar.


 Tubos y placas Petri con medios de cultivo
 Asas de siembra.
 Aguja de platino
 Mechero de Bunsen.

MÉTODOS
A. MÉTODO POR INOCULACIÓN EN MEDIO LÍQUIDO

 El asa de siembra debe ser esterilizada en la llama


(flameada) y enfriada.
 Tomar con el asa de siembra una cantidad suficiente de la
muestra.
 Introducir el asa de siembra con la muestra hasta el fondo
del tubo con medio líquido, sin tocar las paredes del mismo.

B. MÉTODO POR ESTRÍA EN MEDIO SÓLIDO EN TUBO

 El asa de siembra debe ser esterilizada en la llama


(flameada), y enfriada.
 Tomar una pequeña muestra con el asa de siembra.
 Deslizar el asa de siembra suavemente en zigzag en el tubo
con medio sólido, empezando desde el fondo del tubo.

C. MÉTODO POR DISPERSIÓN - AGOTAMIENTO EN MEDIO SÓLIDO EN PLACA


PETRI

 El asa de siembra debe ser esterilizada a la llama (flameada), y enfriada.


 Tomar con el asa de siembra una cantidad suficiente de muestra.
 El asa debe ser sostenida suavemente entre los dedos con cuidado de no hundida en el
medio.
 Sembrar en el medio sólido en placa Petri, dividido en cuatro cuadrantes, inoculando la
muestra en cantidades sucesivamente menores en cada cuadrante. Cada cuadrante
presentará diferente distribución de colonias.

D. MÉTODO POR PUNTURA EN MEDIO SEMISÓLIDO EN TUBO

 La aguja de platino debe ser esterilizada a la llama (flameada), y


enfriada.
 Tomar con la aguja de platino (o alambre recto), una pequeña
cantidad de muestra.
 Sembrar en el agar semisólido introduciendo la aguja en forma
vertical. Debe tenerse cuidado en hacer que el trayecto de salida
sea el mismo que el de entrada.
LECTURA E INFORME DE UNA MUESTRA CULTIVADA

Una vez sembrada, se rotula correctamente para identificarla y se incuba a 37 °C. Algunos
microorganismos requieren atmósfera con un 3 - 5% de CO2 Y otros como los anaerobios que
requieren una atmósfera privada de oxígeno (O2).

El período de incubación para los microorganismos patógenos comunes es de 18 - 24 horas, al


término del cual los cultivos se sacan del incubador, se observa su crecimiento estudiando sus
características.

Entre las características de las colonias se debe detallar:

 Forma Circular, elíptica puntiforme, filamentosa, etc.


 Elevación Plana convexa, umbilicada, etc.
 Borde Entero, ondulado, dentado filamentoso, etc.
 Superficie Lisa, rugosa, granular.
 Tamaño Medida del diámetro en milímetros.
 Consistencia Membranosa, cremosa mucosa, etc.
 Pigmentación Amarilla, blanca, gris negra, etc.
 Olor Pútrido, alcohólico, etc.

En ocasiones esta descripción puede llevar al diagnóstico presuntivo del género y especie de que
se trata.

Posteriormente de una de las colonias, se debe hacer una coloración Gram para determinar:

 Morfología.
 Característica de la tinción.
 Agrupación.

El aislamiento y pureza de la cepa aislada son indispensables. Debe pasarse a distintos sustratos
para:

 Llegar a la identificación por pruebas bioquímicas


 Realizar pruebas de sensibilidad antibiótica.

UROCULTIVO
Los cultivos son esenciales para determinar la identidad y cantidad exacta de las bacterias y para
reconocer si los microorganismos encontrados en una muestra son patógenos o inocuos (no
afectan la salud del hombre y se llaman también "saprofitos").

Para hacer el cultivo de la orina, llamado también urocultivo, el paciente no debe haber recibido
antibióticos por lo menos cinco días antes del examen.

Los cultivos sirven para aislar microorganismos que se encuentran en escasa cantidad y decidir
cuál será el antibiótico más efectivo en el tratamiento de la infección (antibiograma).

Los cultivos bacterianos pueden ser:

 Medios sólidos: agar en placas Petri o en tubos.


 Medios líquidos: tubos con caldos de cultivo.

Los microorganismos que frecuentemente se encuentran en la orina infectada:

 E. coli.
 Pseudomona aeruginosa.
 Enterococo.
 Citrobacter.
 Klebsiella.

Se acepta que un recuento superior de 100 000 bacterias por mL de orina, indica infección de las
vías urinarias.

MATERIALES

 Muestra de orina.
 Microscopio.
 Placas de agar Mac Conkey.
 Placas de agar sangre.
 Asa de siembra estándar (calibrada)

MÉTODO

 Tomar la orina sin centrifugar, con el asa de siembra calibrada, es decir, que cada asada
suministre 0,01 o 0,001 mL de orina.
 Sembrar la orina por dispersión- agotamiento con un asa de siembra calibrada, sobre una
placa de agar sangre y otra sobre una placa de agar de Mac Conkey.
 Rotular e incubar a 37 °C.

LECTURA E INTERPRETACIÓN
Detallar las características de las colonias en el agar Mac Conkey y el agar sangre. Seleccionar
colonias del agar Mac Conkey y replicar (resembrar) en los medios de diferenciación bioquímica
(TSI, citrato, úrea, etc.)

Las interpretaciones se harán de acuerdo con las reacciones bioquímicas de las enterobacterias
(ver Anexos).

Para conocer el número de microorganismos en un 1 mL de orina, se cuentan las colonias y el


resultado se multiplica por 100 si se usó asa de 0,01 mL o por 1 000 si se usó asa de 0,001 mL.

El resultado será el número de bacterias por ml de orina, considerándose:

Cuando el número de colonias sobrepasa el número de 100 000 bacterias por mL de orina, al
informar no interesa precisar el número exacto de bacterias, solo debe informarse "más de
100 000 bacterias por mL de orina".
HEMOCULTIVOS

PRINCIPIOS GENERALES

 Es la prueba más útil y más frecuentemente usada para demostrar la presencia de


bacterias en la corriente sanguínea.
 El método del hemocultivo consiste en obtener sangre con la más rigurosa técnica de
asepsia y añadida a un frasco que contiene un medio de cultivo elegido para aislar un
determinado microorganismo (bacteria).
 Las muestras de sangre para hemocultivo deben obtenerse, antes que el paciente reciba
terapia antimicrobiana.
 Es importante obtener la muestra de sangre, en el momento en que la temperatura del
paciente se encuentra elevada. Esto da una mayor probabilidad de tener resultados
positivos en el hemocultivo.
 Se requiere de un mínimo de tres hemocultivos seriados por paciente antes de considerar
el caso como negativo.

ELECCIÓN DEL MEDIO PARA HEMOCULTIVO

La elección del medio depende del microorganismo que se desea aislar.

Para la mayor parte de hemocultivos, resultan satisfactorios los medios generales:

 Infusión corazón-cerebro con agar, este medio permite el desarrollo de bacterias tanto
aerobias como anaerobias
 El caldo de tioglicolato, que se emplea principalmente para cultivar bacterias anaerobias

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

 Generalmente, se extrae sangre del pliegue del codo, con la


más rigurosa técnica de asepsia.
 Sembrar la mayor cantidad posible de sangre (entre 5 y 10
mL).
 El medio de elección se calienta a 37 °C en una estufa de
cultivo, y el tapón de caucho del frasco se flamea con alcohol
para destruir los microorganismos contaminantes en su superficie.
 Para llevar el frasco a la cabecera del paciente se cubre el tapón con
un algodón mojado de alcohol.
 Obtenida la muestra de sangre, se retira el algodón del frasco y la
aguja de la jeringa se introduce a través del tapón de caucho del
frasco, se expulsa la sangre en el medio, se retira la aguja y se mezcla
el contenido del frasco.
 Cada frasco debe rotularse: nombre del paciente, fecha y hora de
obtención de la muestra.

LECTURA DEL HEMOCULTIVO


 Los frascos de hemocultivos inoculados deben inmediatamente incubarse a 35-37 °C.
 Examinar el frasco diariamente durante la primera semana para detectar la aparición de
turbidez en el medio, hemólisis, signos de producción de gas o crecimiento de colonias
directamente encima de la sangre.
 Si los hemocultivos son negativos deben seguir en observación hasta por 21 días antes de
informarse como negativos.
 Los hemocultivos "visualmente positivos" (turbidez del contenido del frasco) deben
teñirse por el método de Gram y subcultivarse (resiembras).

En los subcultivos (resiembras) se procede de la siguiente manera:

 Retirar una gota del hemocultivo positivo con todas las precauciones de asepsia,
utilizando una jeringa pequeña, con este material se siembra.
 Sembrar en medios de agar sangre, y otros medios selectivos dependiendo de los
resultados de la coloración Gram. Ejemplo: medio de agar Mac- Conkey, para investigar la
presencia de microorganismos entéricos gramnegativos. Las placas deben incubarse tanto
bajo condiciones aerobias como anaerobias (ver Anexos).

Una vez que se han logrado colonias aisladas, debe determinarse su identificación.

Los resultados, tanto positivos como negativos, deben comunicarse lo antes posible al médico que
lo solicitó.

MICROORGANISMOS QUE SE PUEDEN ENCONTRAR EN LOS HEMOCUL TIVOS

 Streptococcus viridans.
 Streptococcus pyogenes.
 Staphilococcus aureus y albus.
 Diplococcus pnemoniae.
 Neisseria meningitidis.
 Brucella sp.
 Proteus-providence.
 Enterococos.
 Estreptococcos anaerobios.
 Salmonella sp.
 Pasteurella tularensis.
 Leptospira sp.
 Streptobacillus monilifonnis.
 Escherichia.
 Citrobacter
 Klebsiella.
 Haemophilus influenzae. (minsa, s.f.)

COPROCULTIVOS
PRINCIPIOS GENERALES

Cada muestra debe contener, por lo menos 4 mL (4 cm3 ). Esta es necesaria para facilitar la
detección de los parásitos cuando se encuentran poco concentrados.

RECIPIENTES PARA HECES

Los recipientes apropiados son:

 Una caja de cartón encerado. Un envase de material plástico.


 Un frasco de vidrio transparente, de boca ancha con o sin una cucharilla fija en la tapa.

Para el examen bacteriológico el recipiente debe estar estéril.

MATERIALES

 Recipientes indicados según el examen solicitado.


 Hisopo rectal estéril si el examen solicitado es bacteriológico y el paciente tiene
problemas en la recolección, o se trata de un niño pequeño.

Para la obtención de huevos de oxiuros se necesita:

 Una cinta adhesiva transparente de 12 cm de largo por 1 cm de ancho.


 Un bajalengua.
 Una lámina portaobjetos.

MÉTODO DE OBTENCIÓN

A. EXAMEN PARASITOLÓGICO

Usar un recipiente limpio para obtener la muestra.

OBTENCIÓN DE HUEVOS DE OXIUROS (TEST DE GRAHAM)

 Pegar la cinta adhesiva en la lámina portaobjeto, dejando que sobresalgan ambos


extremos de la cinta.
 Colocar el lado plano del bajalengua debajo del portaobjeto.
 Separar la cinta adhesiva del portaobjeto con suavidad y doblarla sobre el extremo del
mango del bajalengua, de tal modo que la parte pegante quede hacia fuera.
 Sostener el extremo formado (bajalengua y la cinta adhesiva) con la mano derecha,
presione firmemente el portaobjeto contra el mango del bajalengua
 Separar con la mano izquierda las nalgas del paciente. Aplicar presionando el extremo del
bajalengua cubierto con la cinta adhesiva, en varios sitios de la piel que rodea al ano
 Colocar de nuevo la cinta adhesiva sobre el portaobjeto, con el lado adhesivo hacia abajo.
Para estar seguro que la cinta se adhiere uniformemente y no se forme burbujas de aire,
presionar el portaobjeto con un trozo de algodón.

B. EXAMEN BACTERIOLÓGICO

 Usar un recipiente estéril para obtener la muestra.


 Debe recolectarse antes de la administración de cualquier antibiótico.
 Se prefiere una muestra más que un hisopado rectal.

En el caso de niño su otros pacientes que tengan problemas en la recolección de muestra, obtenerla
directamente, introduciendo en el recto un hisopo previamente embebido en el espesor del medio de
transporte que se va usar y luego se introduce en el recto. Una vez que está dentro del recto (alrededor
de 3 cm), aplicar un movimiento de rotación amplio al hisopo para arrastrar mucosidad de la pared de la
ampolla rectal y luego un movimiento circular pequeño para arrastrar deposición.

MÉTODO

 Colocar el hisopo con la muestra en un tubo estéril o en el tercio superior del tubo con medio de
transporte.
 Cortar la porción sobrante del palo del hisopo y ajustar fuertemente la tapa del tubo.

La parasitología médica es el estudio de los parásitos que causan enfermedades al ser humano.

En el laboratorio se pueden llevar a cabo exámenes de

 Helmintos (gusanos) Que se observan a simple vista.


 Huevos o larvas de helmintos Que son visibles por medio del microscopio.
 Protozoarios (organismos unicelulares) Formas vegetativas Presentan movilidad. Formas quísticas
Carecen de movilidad.

HELMINTOS ADULTOS QUE SE ENCUENTRAN EN HECES

Los helmintos adultos, que son llevados al laboratorio para ser identificados, se pueden haber recogido
de las heces, la ropa personal o de la cama, o durante una operación quirúrgica.

Se debe anotar:

 Su longitud.
 Su forma.

HELMINTOS REDONDOS FRECUENTES

a. Áscaris Helmintos redondos grandes.

Color: rosáceo.

Grosor: 0,3 - 0,5 cm. Longitud: macho: 15 cm (con cola en forma de bucle). hembra: 20 - 25 cm (con
cola recta).

b. Oxiuros Frecuente en heces de niños. También se pueden hallar en los pliegues de la piel que
rodea el ano. Helmintos redondos pequeños

Color: blanco. Longitud: macho: 0,5 cm. hembra: 1 cm (de cola puntiaguda). Capítulo VI Parasitogía y
micología 251

TENIAS O HELMINTOS PLANOS SEGMENTADOS

 Tenias Color: marfil o azul pálido. Longitud: 3 - 10 m (para el examen por lo general llegan los
segmentos maduros separados, de longitud variable).
 Tenias frecuentes

EXAMEN DIRECTO DE HECES

PRINCIPIOS GENERALES
 Si en el laboratorio se recibe muchas muestras en el mismo día, comenzar por examinar las más
líquidas.
 Examinar heces frescas de menos de una hora de eliminadas. Esto aumenta la posibilidad de
encontrar amebas.
 Elegir, preferentemente, para el examen directo una porción de la superficie de la muestra donde
se encuentre el moco.
 Examinar en una solución de cloruro de sodio u observar directamente con el microscopio cuando
las heces son muy líquidas.
 Los trofozoítos se inmovilizan en solución de yodo y puede ser difícil diferenciar entre trofozoítos
y quistes.
 En las heces líquidas los depósitos de moco frecuentemente contienen grupos numerosos de
Giardia lamblia.
 Si las heces se dejan expuestas al aire en un recipiente sin tapa pueden caer en ellas
microorganismos de la atmósfera, como los infusorios. Estos son muy semejantes a Balantidium
coli.

EXAMEN DE TINCIÓN CON YODO Y CON SOLUCIÓN SALINA O CLORURO DE SODIO

MATERIALES

 Portaobjetos o láminas.
 Cubreobjetos o laminillas.
 Aplicadores de madera.
 Solución yodurada de lugo
 Solución salina o de cloruro de sodio.
 Un microscopio.
 Lápiz de cera.

MÉTODO

En un portaobjetos colocar

 Una gota de solución salina o de cloruro de sodio, en la mitad del lado izquierdo del
portaobjetos.
 Una gota de solución yodurada de Lugol, en la mitad del lado derecho del portaobjetos.
 Tomar 1 - 2 mg de material fecal (de preferencia de la parte profunda de la muestra y si
hay moco, elegir esta porción) con el aplicador de madera.
 Mezclar la porción tomada de la muestra con la gota de solución salina o de cloruro de
sodio.
 Tomar otra porción de la muestra y mezclarla con la gota de solución yodurada.
 Colocar un cubreobjeto sobre cada gota.
 Con el lápiz de cera marcar el número de la muestra en el portaobjetos.
 Examinar las preparaciones con el microscopio con objetivos de 10x y 40x, comenzando
en el ángulo superior izquierdo del cubreobjeto.
 Observar con atención las formas, recordando que los quistes y trofozoítos de los
protozoarios se observan en forma natural en el lado sin colorear (solución salina o de
cloruro de sodio).
 Las estructuras internas (núcleos, vacuolas, etc.) se observan en las tinciones con solución
yodurada de lugol.
 Suele encontrarse como elementos normales, estructuras pertenecientes a la ingestión de
alimentos, como fibras vegetales, granos de almidón, esporas de hongos, granos de polen,
fibras musculares lisas o estriadas, cristales de ácidos grasos, cristales de oxalato de
calcio, etc. Capítulo VI Parasitogía y micología

EXAMEN DE HUEVOS DE OXIUROS MÉTODO DE LA CINTA ADHESIVA PRINCIPIOS GENERALES

Los oxiuros (Enterobius vermicularis) afectan frecuentemente a los niños.

Sus huevos se recogen de los pliegues de la piel que rodea al ano, porque raras veces se hallan en las
materias fecales.

MATERIALES

 Material para obtención de huevos de oxiuros.


 Un microscopio.
 Una pipeta Pasteur.
 Portaobjetos.
 Cubreobjetos.

MÉTODO

l. Obtenida la muestra por el método de la cinta adhesiva, esta queda lista para mirarla al microscopio.

2. Si la muestra es obtenida usando un hisopo de algodón aspirar la solución de cloruro de sodio (donde
ha sido sumergido el hisopo) con una pipeta de Pasteur. Colocar una gota en el portaobjeto, poner un
cubreobjeto encima de la gota y queda lista para mirarla al microscopio.

3. Observar con el microscopio utilizando objetivo de 10x, en busca de los huevos de Enterobius
vermicularis.

 Antes de preparar una concentración de parásitos se debe realizar un examen


microscópico directo de las heces.
 El método de concentración hace posible que se detecten parásitos que están presentes
en escaso número.
 Este método se basa en el peso específico de los quistes o huevos.
 En este método de concentración de parásitos no se encuentran formas móviles de
protozoarios.
 En el método de concentración, cuando se usa soluciones de baja densidad, los huevos o
quistes sedimentan y cuando se usa soluciones de alta densidad, los huevos o quistes
flotan.

MÉTODO DE FLOTACIÓN DE FAUST

Es una técnica mixta de centrifugación y flotación que concentra quistes y huevos con la solución
de sulfato de zinc.
El método permite concentrar los quistes, los huevecillos y las larvas.

MATERIALES

 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.


 Portaobjetos.
 Cubreobjetos
 Sulfato de zinc al 33,3% (ver Anexos)
 Lugol (ver Anexos). – Agua corriente tibia.
 Aplicador de madera.
 Una centrífuga.
 Un microscopio

En el tubo de ensayo mezclar, usando el aplicador de madera, 2 g de heces con 8 - 10 mL de agua


corriente tibia, centrifugar a 3 000 RPM durante 3 minutos.

El líquido sobrenadante obtenido en el tubo centrifugado, se elimina. Añadir 2 - 3 mL de agua y


volver a centrifugar según el procedimiento anterior. Repetir 3 - 4 veces esta operación hasta
obtener un líquido sobrenadante claro.

Se añaden 3 - 4 mL de solución de zinc al 33,3%, se centrifuga durante 2 - 5 minutos a 3 000 RPM

Colocar el tubo centrifugado en una gradilla, llenándolo con el sulfato de zinc hasta el borde del
tubo y colocar encima un cubreobjetos, dejar en reposo por 15 minutos. Después de los 15
minutos, sacar el cubreobjetos, levantándolo. Colocarlo en un portaobjetos con una gota de lugol
y observarlo al microscopio con objetivos de 10x y 40x.

MÉTODO DE SEDIMENTACIÓN DE RITCHIE MATERIALES

 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm


 Portaobjetos.
 Cubreobjetos
 Formol al 10% (ver Anexos).
 Éter sulfúrico comercial.
 Lugol (ver Anexos).
 Agua corriente tibia.
 Un aplicador de madera.
 Bagueta.
 Una centrífuga
 Un microscopio.

MÉTODO

Lavar las heces en igual forma que en la técnica de Faust


 Después del último lavado, llenar hasta la mitad el tubo centrifugado, con formol al 10% y
2 mL de éter.
 Tapar con un tapón de jebe y sacudir vigorosamente, teniendo cuidado que el tapón no
salte.
 Retirar el tapón y centrifugar a 3 000 RPM por 3 minutos.
 Se observará que en el tubo quedan cuatro capas que son, de arriba hacia abajo: el éter
con las grasas disueltas, una capa de detritus, el formol y el sedimento.
 Desprender el tapón de detritus de las paredes del tubo, usando una bagueta y eliminar el
resto de las capas, quedando en el tubo, únicamente el sedimento. Diluir el sedimento
con el líquido sobrante que escurre por las paredes del tubo, agitándolo.
 Poner una gota en un portaobjetos, con una gota de lugol. Colocar encima un
cubreobjetos y observar en el microscopio con objetivos de l0x y40x. (mi, s.f.)

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Podemos concluir diciendo que una correcta toma de muestras es un paso clave para la obtención
de óptimos datos de laboratorio. Siguiendo las indicaciones anteriores, se pretende disminuir el
número de muestras rechazadas, evitando el riesgo de malas interpretaciones en el diagnóstico
de los pacientes y las molestias ocasionadas a los pacientes por la repetición de pruebas
analíticas.

CONSIDERACIONES GENERALES QUE DEBE CUMPLIR EL PACIENTE PARA LA TOMA DE MUESTRA

 El ayuno ideal es de 8 a 12 horas.

 No fumar antes ni durante la realización de exámenes de laboratorio clínico.

 Si está tomando algún medicamento debe informar en la toma de muestra el nombre de


la droga y la dosis que está tomando.

 Si sea realizado algún examen de radiología con medio de contraste, no se realice ningún
examen de laboratorio clínico hasta después de tres días.

 No realice ninguna actividad física (trotar, correr, hacer deportes, ejercicios) antes de
realizar los exámenes.

 Las muestras que entrega en el laboratorio clínico, deben estar marcadas con el nombre
completo del paciente a quien pertenecen.

RECOMENDACIONES PARA TOMA DE MUESTRAS DE LABORATORIO CLÍNICO

RECOMENDACIONES GENERALES EL DÍA ANTERIOR AL EXAMEN: ·

 Tomar sus comidas ordinarias o habituales

 No tomar medicamentos innecesarios

 No ingerir bebidas alcohólicas 72 horas antes del examen

 No realice ninguna actividad física (trotar, correr, hacer deportes, ejercicios) antes de
realizar los exámenes.

 No fumar antes ni durante la realización de exámenes de laboratorio clínico.

 Si está tomando algún medicamento debe informar en la toma de muestra el nombre de


la droga y la dosis que está tomando.

 Si sea realizado algún examen de radiología con medio de contraste, no se realice ningún
examen de laboratorio clínico hasta después de tres días.

 Las muestras que entrega en el laboratorio clínico, deben estar marcadas con el nombre
completo del paciente a quien pertenecen.

Bibliografía
(s.f.). Obtenido de http://bvs.minsa.gob.pe/local/minsa/3187-2.PDF

(s.f.). Obtenido de
https://antimicrobianos.ins.gob.pe/images/contenido/documentos/nacionales/
Manual___Procedimientos__Bacteriologicos__IIH.pdf

mi. (s.f.). minsa. Obtenido de http://bvs.minsa.gob.pe/local/MINSA/2660-1.pdf

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ANEXOS

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