Practica 3 - Ulloa Nathaly

UNIVERSIDAD DE CUENCA
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

CARRERA DE AGRONOMIA
NOMBRE:
NATHALY ULLOA
CATEDRA:
MICROBIOLOGIA AGRICOLA
DOCENTE:
ING. PATRICIO CASTRO QUEZADA PhD
TEMA:
TINCION DE BACTERIAS
4to Ciclo
2022-2023
1. Introducción
Se denomina tinción al proceso y resultado de teñir y, en el área de la Microbiología

consiste en teñir células o microorganismos. Se trata de una técnica empleada en los
laboratorios con el objeto de optimizar la visión de aquello que se observa a través de un
microscopio, por lo tanto, consiste en aplicar un colorante al material en estudio para
que resulte más simple detectar determinados microorganismos. Las tinciones serán
siempre uno de los aspectos más importantes y el primer paso para la detección de
microorganismos, pues una vez identificadas sus características como morfología
(cocos, bacilos, etc.) y agrupación (tétradas, cadenas, etc.), así como su clasificación
(Gram positivos, Gram negativos, etc.), será posible proceder a realizar las pruebas
bioquímicas pertinentes. Por lo tanto, el primer paso en toda determinación de
microorganismos es realizar una correcta tinción.
Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el

laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Hay una gran variedad
de tinciones, que se han ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes
infecciosos en los que se incluyen bacterias, parásitos y hongos. La tinción de Gram se
considera básica en la valoración inicial de muestras para análisis bacteriológico,
mientras que la tinción de Wright se ocupa para el diagnóstico de enfermedades muy
particulares en el rubro de la parasitología. Hay técnicas tintoriales específicas de gran
utilidad, la tinción de azul de lacto fenol, que preserva e identifica a los componentes
estructurales de los hongos. Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiológico
tienen una utilidad fundamental para el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples
patologías de etiología infecciosa. La tinción de Gram, demostró dos categorías algunas
se teñían de violeta y otras se teñían de rojo. Las bacterias teñidas de azul fueron
conocidas como Gram positivas, y las teñidas de rojo como Gram negativas.
2. Objetivos
 Comprender las bases teórica y química de los procedimientos de
tinción diferencial; la base química de la tinción de Gram; y, el
procedimiento para diferenciar entre dos grupos principales de bacterias:
Gram-positivas y Gram-negativas
3. Revisión Literaria
3.1 Tinciones
Las coloraciones o tinciones en microbiología se constituyen en el primer paso del

proceso del análisis en el laboratorio para la identificación presuntiva de agentes
infecciosos (Salas, 2018). Hay una gran variedad de tinciones que se han ido
desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos como bacterias,
parásitos y hongos (Constansa, 2020).Debido a la naturaleza química de la célula
bacteriana, su afinidad por los colorantes, su propiedad ha sido aprovechada para
estudiar los diferentes tipos morfológicos y estructuras (capsulas, esporas, flagelos, etc.)
que ayudan a la identificación de una especie o grupo en partículas (Jhon, 1998).
3.2 Los colorantes de mayor aplicación son:
 Lugol. - Es una disolución de yodo molecular y yoduro potásico en agua

destilada. Se emplea para la tinción de Gram para el colorante cristal
violeta (violeta de genciana) también se utiliza como contraste visual en
parasitología; se utiliza esta disolución como indicador en la prueba del
yodo, que sirve para identificar polisacáridos como los almidones,
glucógeno y ciertas dextrinas, formando un complejo que se caracteriza
por presentar distintos colores según las ramificaciones que presenta el
polisacárido (Baldyon, 2012).
 Violeta de genciana. - El violeta de metilo son solubles en agua, etanol,
dietilenglicol, y dipropilenglicol. El violeta de metilo es un ingrediente
activo en el colorante de Gram, usado para la clasificación de bacterias.
El violeta de genciana destruye células, y es usado en desinfectante de
intensidad moderada externo (Sahm, 2007).
 Safranina. - Este es un colorante biológico también conocido como
dimetil safranina y rojo basico2, se utiliza en la tinción de Gram para
proporcionar un color violeta más intenso a las bacterias Gram + y tiñe
de color rosa a las bacterias Gram-
Actúan mejor mediante la adición de mordientes, porque aumentan la permeabilidad de la

pared celular y membrana citoplasmática (Cisneros, 2020).
3.3 Tinción de bacterias Gram positivas y Gram negativas
La tinción de Gram es una tinción diferencial empleada en microbiología para la

visualización de bacterias que se basa en el uso de un colorante (tinción). Debido a que
las bacterias y otros microorganismos tienen un tamaño pequeño se requiere de
tinciones biológicas para visualizarlos y demostrar detalles de su estructura interna o de
algunas funciones fisiológicas (Rodriguez, 2018). La tinción de Gram permite distinguir
la morfología celular bacteriana y es útil para diferenciar bacterias Gram positivas de las
baterías Gram negativas. Se basa en las diferencias entre las paredes celulares de las
bacterias Gram positivas y Gram negativas (López L. , 2014). La pared de las Gram
positivas posee una capa gruesa de peptidoglicano y polímeros, e impermeable, que
hace que resista la decoloración, sin embargo, las Gram negativas tiene una capa
delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. Estos dos
grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificación de la amplia
mayoría de las bacterias (González, 2020). Este proceso de tinción diferencia a las
bacterias en dos grandes grupos. Se llama bacterias Gram positivas a aquellas que
retienen la tinción azul-violeta, y se denomina bacterias Gram negativas a las que se
decoloran y después se tiñen con safranina (López E. , 2014).
4. Materiales y Métodos
4.1 Materiales
 Vaso de precipitación de 600 ml
 Vaso de precipitación de 250 ml
 Mechero
 Una caja Petri con bacterias
 Aza
 Porta objetos
 Safranina
 Lugol
 Violeta de genciana
 Alcohol al 48%
 Agua
4.2 Métodos
Primero se procede a poner una gota de agua en la porta objetos luego se coloca una
muestra de bacterias, seguidamente se expone al mechero para que la muestra seque,
luego de eso se procede a colocar la violeta de genciana y se mantiene por 1 minuto, y
se procede a lavar, después se coloca el lugol en la muestra se mantiene allí por 15
segundos, se coloca alcohol esto para que se destiñan las bacterias gran positivas se
lava nuevamente y finalmente se coloca la safranina por 1 minuto después lavar y se
procede a secar la muestra, se observa en el microscopio con lentes de 10,20 y 40.
5. Resultados
Al observar la muestra en el microscopio se puede dar cuenta de lo siguiente. En
Bacterias Gram positivas los complejos insolubles se quedan entre los filamentos de
peptidoglicano de la pared bacteriana y por tanto no se disuelven, dejando las bacterias
teñidas de morado, pero en las bacterias Gram negativas esto es diferente puesto que
estos compuestos si se disuelven y pierden su color, por ello pueden diferenciarse un
tipo bacteriano de otro. Las bacterias Gram negativas se observan normalmente
incoloras, pero al colocar la safranina como colorante secundario se puede observar
como las bacterias Gram negativas se ven rosas o rojas, ya que el violeta de enjuaga a
través de las delgadas paredes celulares donde ingresa el colorante segundario rosado.
Figura 1. Bacterias Gram negativas
6. Conclusión
Tras realizar la práctica e investigar a cerca de la tinción de bacterias se llegó a la
conclusión de que esto es de suma importancia en nuestra carrera ya que de esta forma
se puede diferenciar los tipos de bacterias, y ahora que ya se sabe cómo diferenciar
podremos identificar las Gram positivas y Gram negativas e analizar que daños
provocaría a los diferentes organismos.
7. Referencias
Baldyon, G. (2012). Tincion de Gram y Tinciones especiales. HUANCAYO: U.CONTINENTAL.
Cisneros, C. (2020). Tinción de Gram. Bolivar: UEB.
Constansa, L. (2020). Principios físicoquímicos de los colorantes utilizados en microbiologia.

NOVA, 1-28.
González, R. (2020). Las tinciones basicas en el laboratorio de microbiologia. Mexico: Facultad

de Estudios Superiores Zaragoza.
Jhon, L. (1998). Introduccion a la Microbiología. Barcelona: REVERTÉ.
López, E. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio. Medigraphic, 1-9.
López, L. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio en laboratorio de microbiología.

Mexico: CENIAQ.
Rodriguez, P. A. (2018). Hans Christian Gram and His Staining. Carta Al Editor, 1-3.
Sahm, D. (2007). Diagnostico Microbiológico. Bogota: PANAMERICANA.
Salas, D. (2018). PROCEDIMIENTO OPERATIVO PARA LA REALIZACIÓN DE TINCIONES

PROTOZOARIAS. GBS, 1-4.

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ING. PATRICIO CASTRO QUEZADA PhD

Se denomina tinción al proceso y resultado de teñir y, en el área de la Microbiología

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el

Las coloraciones o tinciones en microbiología se constituyen en el primer paso del

3.2 Los colorantes de mayor aplicación son:

 Lugol. - Es una disolución de yodo molecular y yoduro potásico en agua

Actúan mejor mediante la adición de mordientes, porque aumentan la permeabilidad de la

La tinción de Gram es una tinción diferencial empleada en microbiología para la

Figura 1. Bacterias Gram negativas

Baldyon, G. (2012). Tincion de Gram y Tinciones especiales. HUANCAYO: U.CONTINENTAL.

Cisneros, C. (2020). Tinción de Gram. Bolivar: UEB.

Constansa, L. (2020). Principios físicoquímicos de los colorantes utilizados en microbiologia.

González, R. (2020). Las tinciones basicas en el laboratorio de microbiologia. Mexico: Facultad

Jhon, L. (1998). Introduccion a la Microbiología. Barcelona: REVERTÉ.

López, E. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio. Medigraphic, 1-9.

López, L. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio en laboratorio de microbiología.

Sahm, D. (2007). Diagnostico Microbiológico. Bogota: PANAMERICANA.

Salas, D. (2018). PROCEDIMIENTO OPERATIVO PARA LA REALIZACIÓN DE TINCIONES

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