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SEMINARIO 1
1. Una preparación de una muestra de DNA lineal se divide en tres alícuotas:

-Una se digiere con la enzima BamHI, generando tres fragmentos de 4 kb,6 kb y 15 kb.
-Otra alícuota se digiere con la enzima SmaI, generando dos fragmentos de 7 kb y 18
kb.
-La tercera, se digiere con ambas enzimas, generando fragmentos de 3 kb, 4 kb, 12 kb
y 6 kb.
a) ¿Cuántas dianas hay en la molécula de DNA para cada una de las enzimas de
restricción?
b) Dibuja un mapa de restricción de la molécula de DNA indicando la posición de las
dianas de las tres enzimas utilizadas. ¿Puede haber más de un mapa que encaje con
estos datos?
2. El plásmido pBR325 se digirió con distintas enzimas de restricción. Se realizó
una electroforesis de los digeridos. El DNA de lambda cortado con BstEII se utilizó
como patrón de tamaños. Deduce el mapa de restricción del plásmido.
Calle 1: Lambda/BstEII. Calle 2: EcoRI. Calle 3: EcoRI + SalI. Calle 4: SalI +
PstI. Calle 5: EcoRI + HindIII. Calle 6: PstI + HindIII. Calle 7: PvuII +
HindIII. Calle 10: BamHI + EcoRI. Calle 11: BamHI + PvuII.
Realizando la curva patrón e interpolando las distancias

recorridas por los diversos fragmentos de restricción
podemos calcular sus tamaños:
EcoRI EcoRI SalI EcoRI PstI PvuII EcoRI HindIII EcoRI PvuII
SalI PstI HindIII HindIII PvuII PvuII BamHI BamHI
6.0 4.1 3 1.3 3.6 3.4 3.3 2.6 4.4 2.6
1.9 4.7 2.4 2.6 2.6 2 1.6 1.7
1.4
3. Un DNA circular se digiere, en tres reacciones separadas, con dos enzimas de
restricción; el análisis por electroforesis de los fragmentos obtenidos da los siguientes
resultados:
a) Digestión con EcoRI: 2 fragmentos de 5030 y 2690 pb.
b) Digestión con BamHI: 1 fragmento de 7720 pb.
c) Digestión con EcoRI y BamHI : 3 fragmentos de 1100, 2690 y 3930 pb.
Dibuja el mapa de restricción.
4. En la tabla se indican los resultados de la caracterización de dos tipos de ácidos
nucleicos extraídos de los bacteriófagos X e Y. Se dan los contenidos en tres de las
bases, la sensibilidad a dos ribonucleasas y dos desoxirribonucleasas distintas y la
absorbancia a 260 nm (A260) de muestras de ácido nucleico antes y después de
calentarlas a 100 ⁰C durante 15 minutos. El signo + indica que el ácido nucleico es
degradado por la nucleasa correspondiente, y el signo -, que no es degradado. Indica la
naturaleza molecular de los ácidos nucleicos de los fagos X e Y, con el mayor detalle
que permitan los datos. ¿Qué posible/s explicación/es justificaría el hecho de que la
desorribonucleasa 2 no actúe sobre el ácido nucleico Y?
5. Las moléculas de DNA bicatenario que se representan en la figura tienen grupos
fosfato en sus extremos 5’ e hidroxilos en los 3’. Indica qué enzimas emplearías y en
qué orden y, en su caso, qué sustratos adicionales serían necesarios, para:
a-convertir en romos los extremos sobresalientes de la molécula A sin acortarla.
b-marcar radiactivamente los extremos 5’ de B.
c-para circularizar D.
e-para marcar radiactivamente la mayor parte de E.
f- para circularizar F de la manera más eficaz posible.
(Las circularizaciones se llevan a cabo in vitro y dan lugar a moléculas de DNA
covalentemente cerradas.)
6. Se desea unir dos fragmentos de DNA, uno con extremos PstI (CTGGA’G) y otro con
extremos BamHI (G’GATCC), recuperando ambas dianas en la molécula final. Se
desea, además, que entre los dos fragmentos exista una diana EcoRI (G’AATTC), una
SspI (AAT’ATT) y otra KpnI (G’GTACC). Diseña la molécula adaptadora para poder
realizar el objetivo.
7. Se desea obtener una molécula de DNA circular que incorpore la región B presente
en p1 y la región Z presente en p2. Para ellos se realizaron distintos tratamientos a p1 y
p2 antes de proceder a la unión de los fragmentos con DNA ligasa. La estabilidad de
una molécula circular requiere la presencia de la región A o de la Z, pero nunca de las
dos. Indica qué moléculas circulares se obtendrán formadas por uno o dos fragmentos
producto y qué tratamiento sería el óptimo para la obtención de la molécula deseada
con el menor número de subproductos. Las enzimas EcoRI y BamHI no rinden
extremos compatibles.
Tratamiento 1: digestión con EcoRI de p1 y p2.
T2: digestión con BamHI de p1 y p2.
T3: + EcoRI y fosfatasa de p1 y digestión con EcoRI p2.
T4: + EcoRI de p1 y doble digestión con EcoRI y BamHI de p2.
T5: doble digestión de p1 y p2 con EcoRI y BamHI.
T6: doble digestión de p1 con EcoRI y BamHI, electroforesis y
selección de la banda B; doble digestión de p2 con EcoRI y BamHI.
T7: doble digestión de p1 y p2 con EcoRI y BamHI, electroforesis y
selección de la banda B; doble digestión de p2 con EcoRI y BamHI y
posterior tratamiento con fosfatasa.
8. La fibrosis quística es una enfermedad autosómica recesiva. Los mapas de las dianas de
EcoRI (R) en los alelos silvestre y mutante del gen de la fibrosis quística se muestran en la
parte superior de la figura. Se obtuvieron muestras de DNA de un feto (F) y sus padres (M y
P), que fueron sometidas a una electroforesis en gel de agarosa seguida de una
transferencia a membrana por el método de Southern. La membrana fue hibridada con una
sonda FQ marcada radiactivamente, obteniéndose la autorradiografía mostrada en la parte
inferior de la figura.
¿Padecerá el feto la enfermedad? Justifica tu respuesta
y haz un esquema del procedimiento.
Los polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP)
representan las diferencias en las secuencias de DNA homólogo a nivel
de variación de fragmentos de restricción de tamaños diferentes tras la
digestión con enzimas de restricción específicas. Pueden utilizarse
como marcadores, ya que ambos alelos pueden ser detectados y son
altamente específicos de locus. El análisis de la variación genética del
DNA genómico genera patrones de bandas muy complejas cuya
interpretación se facilita mediante la utilización de la técnica de
southern blot con sondas marcadas específicas de los alelos que se
quieren detectar.
9. La huella molecular* tiene entre otros usos el de intentar identificar niños robados, con
el propósito de devolverlos a sus padres biológicos. Sarah Sting fue secuestrada cuanto
tenía 4 años, y 12 años después, se acusó del secuestro a Eric y Kristin Neman, que
vivían con su hija Betty de 16 años. Se tomaron muestras de DNA del padre (PS)y la
madre (MS) de Sarah, así como de Betty (BN), Eric (EN) y Kristin (KN) Neman, y se
obtuvieron sus huellas moleculares empleando una sonda multilocus para una familia de
VNTR (Variable Number of Tandem Repeats), cuyo resultado se muestra en la figura.
Explica los pasos necesarios para llevar a cabo este proceso.
¿Crees que los resultados de la autorradiografía
permiten saber si Betty es hija o no de Eric y Kristin?
¿Podríamos concluir con mucha probabilidad o total
certeza si Betty Neman es Sarah Sting?
*La “huella genética (DNA fingerprinting)” es una técnica mediante
la cual se detectan simultáneamente varios minisatélites del
genoma obteniéndose un patrón único para cada individuo. La
probabilidad de que dos personas que no sean gemelos idénticos
tengan la misma huella o patrón es muy pequeña.

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Realizando la curva patrón e interpolando las distancias

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