Caso 2 BCM

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ESTUDIO DE CASOS 2022.

Informe de Caso Nº2


Biología Celular y Molecular.

Grupo 24.

Integrantes:
Lautaro Ferraro
Cecilia Caiafa
Pilar Esteves
Joaquín Gril
Objetivos:

● Comprender el funcionamiento de las técnicas de Biología Molecular: PCR y Electroforesis.

● Interpretar y analizar los resultados de los microsatélites TH01 y D7S820 obtenidos en los
PCR por medio de electroforesis.

● Determinar el parentesco de los niños encontrados con la familia del Zar.

Marco Teórico:

Los microsatélites o STRs (cadenas cortas repetidas en tándem) son secuencias cortas de ADN,
generalmente de 1 a 6 pares de nucleótidos, que se repiten en bloque a lo largo de la molécula de
ADN. Estos repetidos, son utilizados como marcadores moleculares en una gran variedad de
aplicaciones en el campo de la genética, como pueden ser parentescos y estudios de poblaciones.
Esto se debe a su capacidad para generar una huella genética personal o perfil genético. Para
poder identificar parentesco, realizar estudios genéticos o análisis forenses, se necesitan ciertas
técnicas para dar paso a los resultados que se buscan. Estas técnicas o métodos para analizar al
ADN, incluyen: la manipulación enzimática de ácidos nucleicos (enzimas asociadas a la replicación,
transcripción y degradación del ADN), la hibridación de ácidos nucleicos (complementar las
cadenas de nucleótidos) y por último la síntesis y amplificación de ácidos nucleicos. Esta última
puede darse mediante la secuenciación de ADN o mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa
(PCR).

La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) permite obtener in vitro millones de copias de un


fragmento de ácido desoxirribonucleico (ADN) a partir de una sola molécula. La PCR se basa en la
replicación celular en la que actúan varias proteínas para sintetizar dos nuevas hebras de ADN a
partir de otra que funciona como molde. Generalmente, la PCR inicia con la desnaturalización o
separación de la doble hélice de ADN mediante el calentamiento de la muestra a una temperatura
entre 94 y 96 °C para romper los puentes de hidrógeno que las unían, de esta manera cada cadena
queda como molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria de ADN. Una vez
separadas las cadenas del ADN, se alinean los iniciadores a sitios específicos complementarios de
las cadenas sencillas de la región que se va a amplificar, para que esto suceda se baja la
temperatura entre 40 y 60 °C lo que permite la unión (alineamiento) de los iniciadores. Finalmente,
se sintetiza una nueva cadena en sentido 5’ a 3’ para lo cual se incrementa la temperatura, por lo
general a 72°C, porque es la temperatura óptima a la
cual la Taq ADN Polimerasa (ADN Polimerasa
termorresistente utilizada en PCR) se une a los
iniciadores y comienza la replicación (extensión). Estas
tres etapas: 1) desnaturalización, 2) alineamiento y 3)
extensión del ADN, se repiten sucesivamente, en cada
nuevo ciclo se amplifica simultáneamente la región de
interés de las dos cadenas complementarias. Los
productos generados aumentan su concentración de
manera exponencial porque cada nueva copia sirve de
molde en los ciclos subsecuentes.

Los resultados obtenidos de una reacción de PCR, generalmente, se visualizan y analizan por
medio de una técnica llamada electroforesis. La electroforesis es una técnica de biología
molecular que permite la separación de fragmentos de ADN en un gel de agarosa utilizando un
campo eléctrico, de acuerdo al tamaño y la carga eléctrica neta.
Una corriente eléctrica impulsa fragmentos de ADN a través de una matriz de gel y los fragmentos
de ADN se separan según su tamaño. Habitualmente, se incluye un marcador de peso molecular,
para que pueda determinarse el tamaño de los fragmentos en la muestra de PCR. Los fragmentos
de ADN migrarán a través del gel debido a que el propio ADN consta de carga neta negativa;
aquellos fragmentos de menor pares de bases migrarán más lejos en la placa de agarosa (debido a
que pasan fácilmente por los poros del gel), mientras que los fragmentos con mayor cantidad de
pares de bases migrarán menos (debido a la dificultad de pasar a través de los poros del gel de
agarosa). Los fragmentos de ADN de la misma longitud forman una "banda" en el gel que se puede
identificar a simple vista si el gel se tiñe con un pigmento que se une al ADN. Una banda de ADN
contiene miles de millones de copias de la región blanco de ADN. Dado que el ADN es
microscópico, deben existir muchas copias de este para poder verlo a simple vista; he aquí radica la
importancia de la cantidad de ciclos productores de copias de la secuencia de ADN dentro del PCR:
el PCR produce suficientes copias de una secuencia de ADN para poder ver o manipular esa región
de ADN.

De forma resumida, los pasos para la realización de una electroforesis son los siguientes: 1. Se
prepara la solución gel de agarosa. 2. Se coloca el gel en un molde. 3. Se arma la cuba y carga de
las muestras. 4. Se coloca la muestra, se aplica electricidad y migran los fragmentos. 5. Se
visualizan los fragmentos separados por medio de tinción fluorescente.

Discusión:

Cuando se pretende identificar a personas y detectar parentesco, como es en este caso, es


adecuado el análisis de los microsatélites (STR), ya que las repeticiones de éstos varían entre
individuos. Por esto, se vuelve eficiente la utilización de la técnica de PCR para poder analizarlas.
Esto es, porque en la muestra que se obtiene está contenido todo el genoma; y los STR a estudiar,
una porción relativamente pequeña, se encuentran “mezclados”, o perdidos, entre todo el genoma.
Dicha reacción utiliza primers para delimitar la muestra, específicamente en el locus en donde se
encuentran los STR; cuantos más locis se examinen más seguro será el resultado. Cabe resaltar
que la PCR, por sí sola, brinda poca -o nada- de información nueva, pero, por lo ya discutido, es
una herramienta crucial para esta investigación.

Llevado a cabo este proceso, se puede realizar la técnica de electroforesis para visualizar las
diferentes variantes STR materna y paterna de cada uno de los individuos estudiados. La
electroforesis es de utilidad porque, como ha sido mencionado, las repeticiones de los STR son
diferentes en cada persona; exceptuando a las personas con relación de parentesco, ya que se
heredan a la descendencia. En tal caso, se posee al menos una variante del STR del padre o la
otra variante de la madre. Cuando se observan los resultados de la electroforesis, si el tamaño de
los STR son iguales entre dos muestras, indicando que están relacionadas por parentesco, las
bandas van a coincidir, porque las muestras se desplazarán uniformemente.
Para analizar el caso en particular, utilizando un simulador, se ha emulado una electroforesis con
los resultados esperados de las diferentes muestras.

En las figuras, una por cada STR estudiado, a la izquierda se ve el marcador de peso molecular,
cada banda está separada por dos unidades. En los diferentes individuos (carriles), se observa una
banda por cada cromosoma homólogo; en los heterocigotas hay dos, porque tienen dos alelos, que
resultan en tamaños diferentes, no así en los homocigotas, en los que hay una sola banda.

El objetivo es comparar a los dos niños encontrados con sus potenciales progenitores, el Zar y la
Zarina. Para el STR TH01, a las 10 unidades, hay coincidencia entre las bandas de la niña con las
del Zar, así como con sus probables hermanas María y Olga. A las 8 unidades, tanto la niña como
el niño tienen un patrón igual al de todos sus hermanos y la Zarina. A su vez, el niño, a las 7
unidades, coincide con Tatiana y el Zar. Estos resultados ya sugieren cierto grado de seguridad
frente al parentesco de ambos niños con la familia real; aún así, se analiza otro STR, el D7S820
para confirmarlo concluyentemente1.

En dicha muestra, a las 10 unidades, el niño presenta las mismas repeticiones que Tatiana y la
Zarina. Asimismo, es notable que todos los individuos, incluidos los niños en cuestión, presentan al
menos un alelo con el repetido 12 veces.
Una vez más, y sumados los dos resultados, todo indicaría que los niños son hijos del Zar y la
Zarina, ya que es extremadamente improbable que el patrón coincidente sea casualidad; al
contrario, es una prueba contundente.

Conclusión:

Se logró comprender el funcionamiento de las técnicas PCR y electroforesis, permitiendo interpretar


y analizar los resultados de las muestras de ADN mencionadas en el caso; determinando que los
niños encontrados son parientes directos (hijos) del Zar y la Zarina.

1
Probablemente, se hayan analizado muchos más STR en la realidad; estos dos son los que se
estudiarán en esta ocasión.
Referencias Bibliográficas:

1. Cross Pacheco, I; Rebordinos González, L. Universidad de Cádiz. Simulador de


electroforesis de ADN en un gel virtual. 2014 Disponible en:
https://rodin.uca.es/handle/10498/14689

2. Magaña JJ, Arenas-Sordo M de la L, Gómez R. La electroforesis capilar como una nueva


estrategia en la medicina y el diagnóstico clínico. Rev Med Chil [Internet]. 2009 [citado el 21
de agosto de 2022];137(7):946–56. Disponible en:
https://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0034-98872009000700014&script=sci_arttext&tlng=pt

3. Demarchi DA. MICROSATELITES, DISTANCIAS GENETICAS Y ESTRUCTURA DE


POBLACIONES NATIVAS SUDAMERICANAS [Internet]. Edu.ar. [citado el 21 de agosto de
2022]. Disponible en:
http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/6024/Documento_completo.pdf?sequence=
1&isAllowed=y

4. Serrato Díaz A, Flores L, Aportela Cortez J, Palacios ES. PCR: reacción en cadena de la
polimerasa [Internet]. Gob.mx. [citado el 21 de agosto de 2022]. Disponible en:
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/pcr.pdf

5. Pierce B.A. GENETICA. 2a Edición (2005). Editorial: Panamericana.

Aportes de autores:

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Búsqueda de bibliografía Todos.

Organización de los aportes realizados en el


Todos.
foro del EVA

Organización de los aportes efectuados en los


Todos.
distintos subgrupos e instancia plenaria

Objetivos: Todos.
Redacción de alguna o todas las secciones Marco Teórico: Lautaro Ferraro y Cecilia Caiafa
(especificar cual/es) Discusión: Pilar Esteves y Joaquín Gril
Conclusión: Todos.

Revisión y corrección del informe Todos.

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