Bienvenidos A Análisis Microbiologico

Universidad Tecnológica Nacional Dra. Ivana M.
Aiassa Martínez
Facultad Regional Córdoba
BIENVENIDOS A ANÁLISIS MICROBIOLOGICO

Universidad Tecnológica Nacional Dra. Ivana M. Aiassa Martínez
NATURALEZA DE LOS
MICROORGANISMOS
Sistemas de Clasificación
Árbol filogenético de la vida
Las Arqueobacterias poseen rutas

metabólicas más cercanas a las de
los eucariotas (transcripción y la
traducción).Explotan una variedad de
recursos (usan azucares, amoniaco,
iones metálicos e hidrógeno como
nutrientes).
Vertebrados
Reino Animal
(pluricelulares) Helmintos
Invertebrados
Artrópodos
Eucariotas
Algas
Reino Protistas
(unicelulares) Hongos (unicelulares)
Protozoo (flagelados-ciliados)
Archaea (arquerobacterias)
Procariotas Reino Procaryotal
(unicelulares) Cyanobacterias (bacterias fotosintéticas)
Bacterias
La célula Procariota
Estructura bacteriana
Constantes Variables
(Esenciales para la vida) (No esenciales)
Nucleoide (ADN) Cápsula o Glucocálix
Citoplasma Flagelos
Ribosomas Fimbrias
Membrana plasmática Pilis
Pared celular Esporas
Plásmidos
Morfología bacteriana
La célula Eucariota
Algas: Cloroplastos
2-300 μm
0,5-10 μm
Las células más pequeñas realizan intercambios con el medio en condiciones más
ventajosas. Por ello, los Procariotas poseen mayor tasa de crecimiento que los
Eucariotas.
El ritmo con el que los nutrientes y las sustancias de desecho pasan

respectivamente al interior y al exterior celular es generalmente inversamente
proporcional al tamaño
Bacillus megaterium
1,5 x 4 μm
Escherichia coli
1 x 3 μm
Streptococcus pneumoniae
0,8 μm diámetro
Haemophilus influenzae
0,25 x 1,2 μm
Oscillatoria
(cianobacteria)
8 x 50 μm
Célula Eucariota Célula Procariota

Pared celular NO (salvo plantas, SI
algas y hongos)
Peptidoglicano NO SI
Membrana Citoplasmática SI SI
Retículo Endoplasmático SI NO
Aparato de Golgi SI NO
Lisosomas SI NO
Mitocondrias SI NO
Cloroplastos SI NO
Ribosomas SI SI
Membrana Nuclear SI NO
Cromosomas Varios Uno
Nucleolo SI NO
División por mitosis SI NO
Estructura de la membrana plasmática
Barrera selectiva de 8 nm de espesor.
Bicapa lipídica.
Proteínas total o parcialmente embebidas.
Se estabiliza mediante puentes hidrógenos, interacciones hidrofóbicas, interacciones iónicas entre
Ca2+ y Mg2+ y los grupos polares de carga negativa presentes en los fosfoípidos.
Estricta organización y alta movilidad.
La capa externa interacciona con proteínas periplasmáticas (unión de sustratos y procesamiento de
macromoléculas).
Lipoproteínas con anclaje lipídico.
La capa interna interacciona con proteínas involucradas en funciones celulares.
Proteínas integrales de membrana.
Proteínas receptoras.
Proteínas de transporte.
Eucariotas Esteroles: Rigidez y Estabilización, esto es

importante ya que la mayoría de los eucariotas
carecen de pared celular blanco de ATB
Procariotas Hopanoides: Su síntesis no requiere oxígeno
Los enlaces éster son responsables de la unión entre el glicerol y los

ácidos grasos
Los enlaces éter son responsables de la unión entre el

Archaea glicerol y las cadenas laterales hidrofóbicas. Carecen de
ácidos grasos, tiene cadenas laterales compuestas por
unidades repetitivas de isopreno

Función de la membrana plasmática
Permeabilidad selectiva Las cadenas hidrofóbicas impiden

el paso libre de compuestos
polares.
Proteínas de transporte Uniportadores
(Integrales de membrana)
Cotransportadores Simportadores
Antiportadores
Por qué se requiere de

un transporte mediado
por un transportador?
Si la difusión fuera el único mecanismo de transporte, las células no serían

capaces de alcanza las concentraciones de solutos necesarias.
En la difusión, tanto el ritmo de paso como la concentración interna
alcanzada, son proporcionales a la concentración de soluto en el exterior.
Los mecanismos de transporte activo permiten a la célula acumular solutos
en contra del gradiente de concentración.
Los procesos de transporte tienen una alta especificidad (similar a una
reacción enzimática).
E + S  ES  E + P
 Transporte asociado al consumo Translocación de grupo: Se

de energía transporta la sustancia y se
la modifica químicamente
mediante fosfotransferasas
(fosforilación)
Transporte activo: No se
ENERGÍA modifica químicamente
Adenina
ATP
Ribosa
Fosfatos
Gradiente preexistente de iones (reacciones celulares)

H+ ó Na+
Fuerza motriz de protones
Pared celular de procariotas (Bacteria)
Pared celular Resistencia a la presión interna.
Forma y rigidez
Diferencias
estructurales
Bacterias Gram Positivas: 90% Peptidoglicano + Ácidos teicoicos
Gram Negativas: 10% Peptidoglicano + capa compleja

Peptidoglicano (mureína): Principal componente de la pared bacteriana

(sólo en dominio Bacteria)
Formado por dos derivados de azúcares:
N-acetilglucosamina
N-acetilmurámico
Y un pequeño grupo de aminoácidos:
D-alanina, L-alanina, D-glutámico, lisina ó ácido Diaminopimélico (DAP)
Estos componentes se unen para formar una estructura que se repite

llamada tetrapéptido de glicano
La estuctura básica del peptidoglicano está formada por una lámina fina
donde las cadenas de azúcares se conectan por puentes (aminoácidos) que
se entrecruzan y le dan rigidez a la estructura.
En Gram negativas los puentes se establecen por enlaces peptídicos directos

del grupo amino del ácido DAP y el grupo carboxilo de la D-alanina terminal.
Puente de
Pentaglicina
En Gram positivas los puentes se establecen por enlace de varios

aminoácidos cuyo número y tipo dependen de los diferentes organismos
Membrana externa de bacterias Gram positivas
Gram Positivas: 90% Peptidoglicano + Ácidos teicoicos

Ácidos teicoicos
Son polialcoholes de glicerol ó ribitol unidos mediante enlaces

fosfodiéster, que se encuentran unidos a otros azúcares.
Aportan la carga negativa a la superficie celular.
Algunos se unen a lípidos de membrana.
Controlan el tránsito de algunos cationes como el Mg2+.
Fomentan la adherencia bacteriana a epitelios.

Membrana externa de bacterias Gram negativas
Gram Negativas: 10% Peptidoglicano + capa compleja
LIPOPOLISACARIDO: LPS Fosfolípidos, polisacáridos, proteínas

(segunda bicapalipídica)
Polisacárido: Núcleo de polisacárido
Polisacárido O (azucares de 6 C)
Parte lipídica: Lípido A
Polisacárido O-específico Núcleo de polisacárido Lípido A

Exterior
Interior
Capa de LPS bacteriano

ENDOTOXINA
El LPS (Lípido A) posee un componente toxico. La membrana externa
de muchas Gram negativas resulta tóxica para los animales (síntomas
de infección).
PORINAS
La membrana externa de las Gram negativas posee proteínas llamadas
porinas, son canales de entrada y salida de sustancias hidrofilicas de
bajo PM (específicas e inespecíficas).
ATB Resistencia a ATB: Cierre de porinas
PERIPLASMA
Contiene generalmente tres tipos de proteínas: Enzimas hidrolíticas (que

participan en la degradación inicial de nutrientes), proteínas de unión (
inician el proceso de transporte de sustratos) y quimiorreceptores
(implicados en la respuesta quimiotáctica).
Relación de la estructura de la pared celular con la tinción de Gram
lipoproteína
Tres capas principales: Dos capas principales:
Interna Cubierta externa gruesa (Peptidoglicano)
Delgada capa media (Peptidoglicano) Membrana plasmática
Externa Ácidos teicoicos

En la tinción de Gram se forma un complejo de cristal de iodo

insoluble en el interior de la célula, que en el caso de las bacterias
Gram negativas, puede extraerse con alcohol, pero no en las
bacterias Gram positivas.
El alcohol deshidrata las bacterias Gram positivas que poseen
paredes celulares muy gruesas, se cierran los poros de las paredes
impidiendo el escape del complejo.
En las bacterias Gran negativas, el alcohol penetra en la capa
externa que es rica en lípidos, permitiendo la eliminación del
complejo.
Cristal Lugol
Alcohol/ Safranina
Violeta I2/ I- Aectona
COLORACIÓN GRAM
Gram Negativa Gram Positiva
Alcohol/acetona
Gram Negativos: SE DECOLORAN Gram Positivos: NO SE DECOLORAN

La mezcla de alcohol/acetona Paredes celulares más espesas (tienen
disuelve la membrana exterior de más peptidoglicano y menos lípido),
la pared de la célula. La delgada no son permeables al disolvente,
capa de peptidoglicano es incapaz provocando que el de complejo cristal
de retener el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de
violeta-yodo y la célula se la pared celular.
decolora.
Bacilos Gram negativos Cocos Gram positivos

Escherichia coli Staphylococcus aureus
Cocos Gram negativos Bacilos Gram positivos

Neisseria meningitidis Listeria monocytogenes
Síntesis de la pared celular y división celular
División celular Bacterias: Fisión binaria.
Requiere de la síntesis de pared celular.
Las autolisinas generan orificios donde se adiciona el nuevo

material.
La síntesis de peptidoglicano nuevo implica el corte controlado por

autolisinas y la inserción de las nuevas porciones.
Dos transportadores participan en la síntesis del peptidoglicano:

Difosfato de uridina y Bactoprenol.
Bactoprenol: Recoge unidades precursoras de peptidoglicano y las

lleva hacia la pared.
Transpeptidación: Formación de uniones peptidicas entre las

cadenas de glucanos. (Penicilina)
ATB Penicilina: Inhibe la Transpeptidación

Estructura del ADN (Ácido desoxirribonucleico) y

ARN (ácido ribonucleico)
Ácidos nucleicos Macromoléculas formadas por gran número de nucleótidos.
Una base nitrogenada (Púrica ó Pirimídica)

Nucleótidos Nucleósidos
Un monosacárido de 5 C (Aldopentosa: D-2-
desoxirribosa)
Ácido fosfórico
El ADN dirige la biosíntesis de todo el material de la célula

BASES
El ADN está formado por
cadenas complementarias
antiparalelas
ADN
Esqueleto
azúcar fosfato
NUCLEÓTIDOS Doble hélice

El ADN (material genético de todos

los organismos celulares y casi
todos los virus) lleva la información
necesaria para dirigir la síntesis de
proteínas y la replicación.
Eucariotas
Núcleo
ADN + Proteínas: Cromosomas
Procariotas
Nucleoide (sin ribosomas)
ADN Desnudo (con algunas proteínas): Cromosoma Procariótico (único)
Molécula circular cerrada superenrrollada (compacta)
Plásmidos: ADN extracromosomal circular que se duplica de forma independiente.

Contienen genes de resistencian a ATB y se transfieren de una bacteria a otra
ADN circular ADN superenrrollado

Intercambio genético en bacterias
CONJUGACIÓN
Transferencia de material genético entre una célula procariota

donadora y una receptora mediante el contacto directo o una conexión
que las una.
TRANSFORMACIÓN
Alteración genética de una bacteria resultante de la absorción

directa, incorporación y expresión del material genético exógeno. El
ADN exógeno se encuentra en el ambiente y se introduce a través
de la membrana de la célula bacteriana.
TRANSDUCCIÓN
Proceso mediante el cual el ADN es transferido

desde una bacteria a otra mediante la acción de
un virus.
Flagelos y movilidad en procariotas
Apéndice móvil con forma de látigo.

Filamento
El filamento del flagelo está compuesto
por subunidades de flagelina (proteína).
El gancho une el filamento a la parte
motora (cuerpo basal) que se encuentra
anclado a la membrana citoplasmática y a Gancho
la pared celular.
Las proteínas Mot producen la rotación Anillo L
del filamento (hélice). Anillo P
Las proteínas Fli actúan como un
Membrana externa
conmutador invirtiendo la rotación del
Peptidoglicano
flagelo mediante señales intracelulares.
Espacio
Crecimiento desde la punta H+ Vástago Anillo S Anillo M periplásmico
(regeneración). Membrana
La energía requerida para la rotación plasmática
proviene de la fuerza motriz generada por Mot B

Mot A
el gradiente de protones Fli G
Anillo C
Fli M, N
MONÓTRICO
LOFÓTRICO
(POLAR) PERÍTRICO
Velocidad de bacterias: hasta 60 longitudes celulares/s
Leopardos: 110 Km/h (25 longitudes corporales/s)
Humanos: Promedio 1,7 m de altura (100 m /s)

Movilidad en Eucariotas
Los flagelos eucariotas son más

largos que lo procariotas y están
compuestos por estructuras proteicas
denominadas microtúbulos.
El movimiento es de serpenteo.
La energía para el deslizamiento de los microtúbulos es

suministrada por el ATP.
Los cilios son similares pero son más cortos y numerosos.

El funcionamiento de los cilios es similar al de los remos de
un bote ( sincronizado)
Quimiotaxis y Fototaxis
El objetivo de la maquinaria para la movilidad es responder

en sentido positivo o negativo a gradientes fisicoquímicos
Movimientos dirigidos Taxias
Quimiotaxis Respuesta a señales químicas

(quimiorreceptores)
Sistema de respuesta sensorial gobernado
químicamente que afecta la función flagelar
Fototaxis Respuesta a la luz

(fotorreceptores)
Organismos fotosintéticos
Etructuras de superficie bacteriana e inclusiones celulares
Fimbrias y pili
Las fimbrias son más cortas que los flagelos y más numerosas, son hereditarias y
favorecen la adherencia.
Los pili (pelos) son similares a las fimbrias pero más largos, participan en el proceso
de conjugación.
Glicocáliz
Secreción superficial de material viscoso (polisacáridos), juegan un papel importante
en la fijación de microorganismos patógenos a sus hospedadores.
Sustancias de reserva que contienen Carbono

Un cuerpo de inclusión frecuente es el ácido poli-β- hidroxibutírico (PHB), es un
polímero producido por ciertos microorganismos empleado como una forma de
almacenamiento de energía para ser metabolizado cuando otras fuentes de energía
comunes no están disponibles.
Otro producto de reserva es el glucógeno (polímero formado por glucosa)

Endosporas
Son células diferenciadas muy resistentes al calor, la desecación, radiación, ácidos,

desinfectantes químicos y además pueden permanecer en estado latente por largos períodos
de tiempo.
Producidas por algunas bacterias Gram positivas.
Son impermeables y de estructura compleja con múltiples capas.
Poseen ácido dipicolínico (característico de las esporas).
La esporulación no se produce durante el crecimiento exponencial de las células, sino al

cesar el crecimiento debido al gasto de nutrientes esenciales.
La conversión de espora a célula vegetativa es relativamente rápida, implica:
Activación: Se realiza por calentamiento
Germinación: Requiere de nutrientes específicos
Crecimiento
Ciclo vital de un organismo Célula vegetativa

formador de esporas
Célula esporulando
Espora
Germinación
de la espora
Crecimiento
Célula
Orgánulos: células eucariotas
Mitocondrias
Se produce la respiración y la fosforilación oxidativa (formación de ATP)
Cloroplastos
Son orgánulos que contienen clorofila, están presentes en organismos eucariotas
capaces de realizar fotosíntesis.
Núcleo: células eucariotas
La información biológica se procesa en dos fases: la replicación del ADN y la síntesis

del ARN (transcripción) ocurren en el núcleo, mientras que el proceso de síntesis de
proteínas ( traducción ) ocurre en el citoplasma.
Durante la división celular, después de la duplicación del los cromosomas, el núcleo

se divide dando lugar a dos células hijas (MITOSIS)
ADN ARN Proteínas

Transcripción Traducción
Replicación
El ADN realiza El ADN realiza copias El mensaje de los

copias idénticas de su información genes sirve para
de sí mismo como ARN producir proteínas
Duplicación celular en Procariotas y Eucariotas
PROCARIOTAS FISIÓN BINARIA
MITOSIS
EUCARIOTAS
MEIOSIS
FISIÓN BINARIA
Reproducción asexual que

consiste en la división del ADN,
seguidas de la división del
citoplasma, dando lugar a dos
células hijas.
 Elongación
 Auto duplicación de ADN
cromosómico
 Tabicado central
 Invaginación membrana celular
 Síntesis de pared
MITOSIS
Reproducción asexual que

consiste en la división de los
cromosomas y en la división
del núcleo y citoplasma.
Es el proceso que sigue a la replicación del ADN mediante el cual los
cromosomas se condensan, se dividen y se separan en dos juegos
idénticos.
Este tipo de división ocurre en las células somáticas y normalmente

concluye con la formación de dos núcleos separados (cariocinesis),
seguido de la separación del citoplasma (citocinesis).
Como resultado se generan dos células hijas idénticas con el mismo

número de cromosomas y la misma información genética que la célula
madre. Cada hija posee una dotación completa de cromosomas.
MEIOSIS
Reproducción sexual que consiste en la división celular y es propio

de las células reproductoras.
Es el proceso por el cual se lleva a cabo el cambio de estado diploide

al estado haploide (se reduce a la mitad el número de cromosomas).
La célula experimenta dos divisiones sucesivas, y genera cuatro

células haploides hijas con la mitad de los cromosomas
Las células germinales o gametos son células haploides que

contienen un solo juego (o n) número de cromosomas y las
células somáticas son células diploides que contienen el número
de cromosomas 2n. El número de cromosomas (n) difiere en
diferentes organismos.

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BIENVENIDOS A ANÁLISIS MICROBIOLOGICO

Árbol filogenético de la vida

Las Arqueobacterias poseen rutas

Nucleoide (ADN) Cápsula o Glucocálix

Membrana plasmática Pilis

Pared celular Esporas

El ritmo con el que los nutrientes y las sustancias de desecho pasan

Célula Eucariota Célula Procariota

Estructura de la membrana plasmática

Barrera selectiva de 8 nm de espesor.

Proteínas total o parcialmente embebidas.

Estricta organización y alta movilidad.

Lipoproteínas con anclaje lipídico.

La capa interna interacciona con proteínas involucradas en funciones celulares.

Proteínas integrales de membrana.

Estructura de la membrana plasmática

Eucariotas Esteroles: Rigidez y Estabilización, esto es

Procariotas Hopanoides: Su síntesis no requiere oxígeno

Los enlaces éster son responsables de la unión entre el glicerol y los

Los enlaces éter son responsables de la unión entre el

Estructura de la membrana plasmática

Función de la membrana plasmática

Permeabilidad selectiva Las cadenas hidrofóbicas impiden

Por qué se requiere de

Si la difusión fuera el único mecanismo de transporte, las células no serían

 Transporte asociado al consumo Translocación de grupo: Se

Gradiente preexistente de iones (reacciones celulares)

Pared celular de procariotas (Bacteria)

Pared celular Resistencia a la presión interna.

Gram Negativas: 10% Peptidoglicano + capa compleja

Peptidoglicano (mureína): Principal componente de la pared bacteriana

Y un pequeño grupo de aminoácidos:

D-alanina, L-alanina, D-glutámico, lisina ó ácido Diaminopimélico (DAP)

Estos componentes se unen para formar una estructura que se repite

En Gram negativas los puentes se establecen por enlaces peptídicos directos

En Gram positivas los puentes se establecen por enlace de varios

Membrana externa de bacterias Gram positivas

Gram Positivas: 90% Peptidoglicano + Ácidos teicoicos

Son polialcoholes de glicerol ó ribitol unidos mediante enlaces

Aportan la carga negativa a la superficie celular.

Algunos se unen a lípidos de membrana.

Controlan el tránsito de algunos cationes como el Mg2+.

Fomentan la adherencia bacteriana a epitelios.

Membrana externa de bacterias Gram negativas

Gram Negativas: 10% Peptidoglicano + capa compleja

LIPOPOLISACARIDO: LPS Fosfolípidos, polisacáridos, proteínas

Parte lipídica: Lípido A

Polisacárido O-específico Núcleo de polisacárido Lípido A

Capa de LPS bacteriano

ATB Resistencia a ATB: Cierre de porinas

Contiene generalmente tres tipos de proteínas: Enzimas hidrolíticas (que

Tres capas principales: Dos capas principales:

Interna Cubierta externa gruesa (Peptidoglicano)

Delgada capa media (Peptidoglicano) Membrana plasmática

Externa Ácidos teicoicos

En la tinción de Gram se forma un complejo de cristal de iodo

Gram Negativa Gram Positiva

Gram Negativos: SE DECOLORAN Gram Positivos: NO SE DECOLORAN