BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE

PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LIC. EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

LABORATORIO DE HISTOLOGÍA

NRC: 34229 GRUPO: 11L

PRACTICA 7. TINCIÓN HEMATOXILINA-EOSINA

ESTUDIANTE:

JOSÉ ESTEBAN PELÁEZ ROSAS

PROFESORA:

VIOLETA ABURTO LUNA

Fecha:03 de Mayo del 2022

Investiga en se basan las siguientes técnicas de tinción, cual es el tipo de
microtomia sugerido y cuál es su función:
 Hematoxilina y eosina
Tinción general. Una de las tinciones más comúnmente usada en histología
es la hematoxilina-eosina sobre cortes de parafina. Se usa un
colorante básico (hematoxilina) y otro ácido (eosina) para teñir de diferente
color a las estructuras ácidas y básicas de la célula.

Antes de proceder a la tinción, si partimos de cortes de parafina, tenemos

que llevar a cabo unos tratamientos previos sobre las secciones
como es el desparafinado y la hidratación, puesto que estos colorantes
son hidrosolubles. Si partimos de cortes de criostato esto no se lleva a cabo
esto.
 Tinción rojo oleoso
La “tinción con rojo oleoso “ sirve para la demostración de los lípidos
“grasas neutras” en diversos tejidos, es decir, aquellas que se encuentran
en el interior de las células, en forma de depósito o almacenamiento,
esta técnica tiene un fundamento físico y no químico; no se trata de
técnica de coloración sino de solubilización.

El principio físico en que se basan en el producto de solubilidad. En efecto,

si el colorante es más soluble en los componentes grasos de tejidos y
células, que en el líquido en el que van disueltos, cuando la solución del
colorante se ponga en contacto con el tejido habrá una transferencia de la
sustancia colorante, desde la solución hacia los componentes grasos del
tejido.

La técnica consiste en sumergir el corte en una caja Petri con agua

destilada por dos minutos, posteriormente se trasladó el mismo corte a otra
caja Petri que contenía alcohol de 50° por dos minutos; una vez
transcurrido el tiempo se sumergió la muestra en el reactivo de rojo oleoso
por un periodo de 10minutos.

En seguida se lavó el tejido en alcohol de 50° por un minuto, luego

entonces se realizó la tinción en hematoxilina por dos minutos y se enjuago
en agua corriente por otros dos minutos. Después se viro el corte en agua
amoniacal en dos segundos y se sumergió en agua destilada por dos
minutos. Finalmente se montó el tejido en el agua destilada sobre un
portaobjeto al que se le monto un cubreobjetos con una gota de Gelatina
(Fijador de albumina).
Lípidos: presentan un color rojo Núcleos: presenta un color azul
 Negro de mason
No se encuentra información de esta tinción
 Tinción tricrómica de Masson
Esta tinción es muy útil para poner de manifiesto las fibras de
colágeno, y el conectivo en general, en comparación células
musculares o epitelios. Se emplea mucho en la diagnosis de procesos
tumorales. Hay muchas variantes de esta tinción adaptadas a las
necesidades particulares de cada laboratorio. Partimos de muestras que
han sido fijadas en solución de Bouin e incluidas en parafina. Se han
obtenido secciones de unas 8 µm adheridas aporta objetos
recubiertos con gelatina.
Esta modalidad de tinción se utiliza sobre todo para tejido conjuntivo. Las
fibras de colágeno se tiñen de azul/verde, el citoplasma se
vuelve rojo/rosa, los eritrocitos rojos y los núcleos se colorean en negro.
 (IMH de receptores tumorales)
Es una técnica de laboratorio que consiste en la detección de
antígenos específicos indicadores de lesión o enfermedad (proteínas
susceptibles de ser reconocidas por anticuerpos).Es muy útil para la
detección de agentes infecciosos o caracterización de enfermedades y
procesos tumorales.
 Impregnación argéntica
Es utilizada para teñir cortes histológicos. Este tipo de tinción es
importante especialmente para revelar la ubicación de proteínas (por
ejemplo, colágeno tipo III) y ADN. Es utilizada para demostrar ambos tipos
de sustancia tanto dentro como fuera de las células. La tinción
argéntica es utilizada también en las electroforesis en gel con
gradiente de temperatura en geles de poliacrilamida.
La tinción argéntica se utiliza en microscopía óptica. Las partículas de
plata metálica se depositan en las fibras de reticulina sensibilizadas y son
fácilmente observables en los preparados microscópicos. La tinción
argéntica tiene utilidad ayudando a revelar las fibras reticulares.

La tinción argéntica es especialmente útil para resaltar la presencia de

algunos microorganismos que son muy difíciles de observar por otros
medios tales como Pseudomonas,2Legionella, Leptospira, Helicobacter
pylori, y hongos tales como Pneumocystis y Candida.

Existen varias tinciones argénticas que incorporan metenamina, entre las

que se encuentran:
Tinción de metenamina plata de Grocott, ampliamente utilizada
para revelar microorganismos fúngicos. Tinción de Jones, una tinción
de metenamina-plata-Ácido periódico de Schiff que tiñe membranas
 basales, permitiendo ver la membrana basal glomerular "espinada"
asociada con glomerulonefritis membranosa. Tiñe las fibras reticulares y las
nerviosas de color negro
 Inmunofluorescencia
La inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcación que hace uso
de anticuerpos unidos químicamente a una sustancia fluorescente para
demostrar la presencia de una determinada molécula. Es una técnica
que tiene variantes cuantitativas y cualitativas.

La inmunofluorescencia, como técnica de tinción, puede ser utilizada en

cortes de tejidos, líneas celulares cultivadas, células individuales y
secreciones que contengan células en suspensión (por ejemplo,
esputo) con la finalidad de analizar la presencia y distribución de
proteínas, glúcidos y moléculas pequeñas tanto de origen biológico
como no. Esta técnica puede ser utilizada en combinación con
otras técnicas de coloración fluorescente que no hagan uso de anticuerpos,
como por ejemplo DAPI para marcar ADN.

La inmunofluorescencia como técnica inmunoquímica de cuantificación se

puede utilizar tanto en muestras de origen biológico como en muestras no
biológicas ,siempre que se encuentren en un medio favorable
para la unión de los anticuerpos.

En general se utiliza una solución PBS (Buffer fosfato salino) como medio
de reacción. Un ejemplo de este tipo de técnicas es la FPIA.

En el caso de células fijadas, dependiendo de la técnica de fijado utilizada,

puede ocurrir que las proteínas de interés queden unidas por enlaces
cruzados a otras proteínas, lo que puede causar tanto falsos positivos,
como falsos negativos debidos a unión inespecífica.

Una técnica alternativa es aprovechar la síntesis de proteínas

recombinantes que contengan dominios fluorescentes, por ejemplo,
dominios de la proteína verde fluorescente (GFP). Estas proteínas
recombinantes funcionan como una marca interna que permite seguir
todo el proceso de síntesis y localización de la proteína original
en una célula viva. Existen dos tipos de técnicas de
inmunofluorescencia; primaria (o directa) y secundaria (o indirecta)
 Tinción de Giemsa
La tinción de Giemsa es un tipo de coloración de muestras clínicas, basada
en la mezcla de colorantes ácidos y básicos. Su creación estuvo inspirada
por el trabajo realizado por Romanowsky, donde Gustav Giemsa,
 químico y bacteriólogo originario de Alemania, la perfeccionó
agregando glicerol para estabilizar los compuestos.
Por ser una técnica sencilla de realizar, de gran funcionabilidad y
económica es actualmente muy utilizada en el laboratorio clínico para
frotis hematológicos, muestras de médula ósea y cortes de tejido.
 Tincion de Wright
Esta técnica de tinción se usa para el teñido de células sanguíneas. Los
gránulos de neutrófilos adquieren un color púrpura o rosa, los gránulos de
eosinófilos se tiñen de rojo brillante o anaranjado, los gránulos de basófilos
se quedan en un púrpura intenso y los gránulos de plaquetas se colorean
de rojo.
Fue desarrollada por el patólogo James Homer Wright en 1902
a partir de modificación de la ya existente tinción de Romanowsky,
utilizada para diferenciar elementos formes de la sangre .Es la tinción más
empleada en frotis de sangre periférica o de médula ósea. Está clasificada
como tinción policromática, ya que tiñe compuestos básicos y ácidos de las
células.

El colorante BASICO (azul Metileno) se une a los componentes ácidos de

las células, ácidos nucleicos, gránulos en neutrófilos y proteínas acidas.
Mientas que la Eosina (colorante acido) se une a la hemoglobina,
componentes básicos de las estructuras celulares y los gránulos de los
eosinófilos.
¿Cómo se hace la tinción?
1.- Cubrir el frotis sanguíneo con el colorante de Wright por un tiempo de 1-
3 minutos.
2.- Cubrir la preparación con una solución buffer de fosfato (pH: 6.8-7.2) por
un tiempo de 3 minutos o más, mezclar suavemente hasta
formarse un brillo metálico en la superficie de la preparación (“basura”
verde).
3.- Lavar a chorro de agua (pH neutro) la preparación y dejar secar el frotis
al aire.
 Histoquímica
El objetivo de la histoquímica es poner de manifiesto una molécula o familia
de moléculas presentes en una sección histológica y estudiar su
distribución tisular "in situ". Estas moléculas son difícilmente discernibles
con técnicas generales y por tanto es necesario realizar pasos previos para
poner de manifiesto dichas moléculas. Vamos a dividir las técnicas
histoquímicas en dos grupos: reacciones químicas e histoquímica
enzimática.
Las reacciones químicas consisten en la modificación química de moléculas
del tejido para posteriormente poder colorearlas. Existen técnicas
 histoquímicas para detectar glúcidos, proteínas y nucleótidos. La técnica
histoquímica más empleada es la reacción de PAS (Periodic Acid Schiff).
 Papanicolaou
La tinción de Papanicolaou es un método de tinción policrómico que consta
de una tinción nuclear y un contraste citoplásmico. Tiene como ventaja una
buena definición del detalle nuclear, evidenciando el patrón de cromatina;
un aspecto transparente del citoplasma, que permite apreciar los grados de
diferenciación celular y actividad metabólica.
La tinción de Papanicolaou utiliza tres colorantes: la Hematoxilina
que tiñe selectivamente los núcleos, el Orange G y la Eosina Alcohol 50
que tiñe los citoplasmas. Los pasos de la tinción están entremezclados con
soluciones que hidratan, deshidratan y enjuagan las células.

La hidratación antes de la inmersión en Hematoxilina puede ser gradual,

usando alcohol en concentraciones decrecientes (80, 70, 50%) o abrupta,
sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de alcohol y al
agua directamente.
 PAS
Se utiliza para la detección de hidratos de carbono, libres o
conjugados, cuando están en cantidades relativamente grandes en los
tejidos.
La modificación química del tejido consiste en la oxidación mediante el
ácido periódico de los enlaces entre los carbonos próximos que
contienen grupos hidroxilos. Esto provoca la formación de grupos
aldehídos que serán reconocidos por el reactivo de Schiff, el cual se
combinará con ellos para dar un color rojizo brillante. Entre los
componentes del reactivo de Schiff está la pararosanilina (un componente
de la fucsina básica) tratada con ácido sulfúrico. Una gran ventaja
de la tinción histoquímica PAS es su capacidad de discriminación de
tipos de glúcidos con pequeñas modificaciones de la técnica.
El Kit de PAS se compone de todos los reactivos que intervienen en esta
tinción. El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un
laboratorio de diagnóstico clínico. Si se utiliza un aparato automático
de tinción, deben tenerse en cuenta las instrucciones de empleo del
fabricante del aparato y del software.

Resultados: Núcleo Violeta-negro

Polisacáridos simples (glucógeno), mucopolisacáridos neutros,
mucoproteínas, membrana basal, glucolípidos Rojo-Púrpura
¿En qué consiste la iluminación de Köhler y su función?
La iluminación Köhler elimina la iluminación dispareja en el campo de observación
para que todas las partes de la fuente de luz contribuyan a la iluminación del
espécimen. Existen dos tipos de iluminación Köhler, un método en el cual la luz es
transmitida a través del espécimen (transmitida) y otro método cuando la luz es
reflejada desde el espécimen (incidente). La iluminación Köhler transmitida es
usada para especímenes transparentes o semitransparentes, mientras que
la iluminación Köhler incidente es útil para objetivos como el metal, los cuales no
transmiten luz.
¿A qué nos referimos con el término de “diferenciar” tras la tinción?
¿Significa lo mismo que decolorar la muestra?
Permitir que las células se visualicen de mejor manera y se puedan
diferenciar las distintas especies por su coloración.
No
¿En qué consiste el aclarado de las muestras?
Luego de deshidratar el tejido, se pasa a una solución de una sustancia que es
miscible tanto con el alcohol como con el medio de inclusión a utilizar (en la
mayoría de los casos se utiliza como medio de inclusión en parafina líquida). Las
sustancia comúnmente utilizada es el Xileno o Xilol. De la misma manera se
coloca la muestra de tejido en un recipiente de Xilol, el Xilol solo es soluble en
alcohol al 100%. Se llama aclaramiento ya que el tejido se torna transparente o
claro en el xileno, esto se debe a que cambia su índice de refracción. También se
pueden utilizar Tolueno, Benzol o Cloroformo como medios de aclaramiento.
NOTA: El alcohol y el xileno disuelven los lípidos de la célula y por lo cual al
extraerse también se extraen las grasas y los lípidos de la célula.
Menciona los tipos de medio de montaje que existen y cuál es su función
dependiendo de la tinción utilizada
El medio de montaje es la solución en la que se incrusta la
muestra, generalmente bajo una cubierta de vidrio. Los preparados en fresco o en
seco, son métodos de análisis que nos van a permitir, gracias al microscopio y
otras herramientas de laboratorio, la visualización de una complejidad de
elementos que simple vista no son captados por el ojo humano.
Preparados en fresco permiten observar los organismos suspendidos en
un líquido en condiciones debida normal, sin sufrir alteraciones ocasionadas por
algunos colorantes; permite apreciar la movilidad, los cambios citológicos durante
el proceso de división celular en la formación de esporas. Se
emplean las siguientes técnicas:
1. Técnica del Montaje Húmedo: Las preparaciones húmedas se
efectúan colocando una gota del líquido que contiene los microorganismos en
estudio sobre una lámina portaobjeto y cubriéndolo con una laminilla, evitando la
formación de burbujas. Si el material es sólido o muy rico en gérmenes, se coloca
sobre la lámina portaobjeto una gota de solución salina y en ella se emulsiona la
muestra en estudio y se cubre con una laminilla.
2. Técnica de la gota pendiente: Se deposita la muestra de agua estancada en un
cubreobjetos colocando en el cubreobjetos agua destilada en sus
extremos, y colocar encima un portaobjetos excavado, para poder visualizarlo
microrganismo agua estancada en el microscopio óptico.
Montaje en seco
En un montaje en seco, el tipo más sencillo de montaje, el objetivo no es más que
colocar en la diapositiva la muestra a analizar. Un cubreobjetos se
puede colocar en la parte superior para proteger la muestra y el objetivo del
microscopio. Este montaje se puede utilizar con éxito para ver las muestras como
el polen, plumas, pelos, muestras de plantas, insectos y esporas. También se
utiliza para examinarlas partículas atrapadas en los filtros de membrana
transparente. La preparación en seco es ideal para muestras que no necesitan
hidratación. Pasos para preparar una muestra:
1. Si la muestra es totalmente opaca el primer paso consistirá en
cortar primero una sección muy fina de la muestra. Esto permitirá observarla en el
microscopio mediante luz transmitida.
2. Colocamos la sección que hemos cortado en el centro del portaobjetos conla
ayuda de una pinza. Si la muestra tiene un cierto volumen es
recomendable utilizar un portaobjetos con una cavidad cóncava.
Medios de montaje no acuosos
Las muestras completamente deshidratadas, como los cortes de tejidos para
histología, deben montarse con un medio de montaje anhidro y un cubreobjetos.
Estos medios de montaje anhidros protegen la muestra y aseguran el
brillo óptimo del colorante.
Preparación con tinción: Existen distintas técnicas para aplicar una tinción que se
adecuan a los distintos tipos de muestras. Si hemos preparado una muestra en
fresco, podemos aplicar un tinte siguiendo los siguientes pasos.
1. Depositamos unas gotas del tinte sobre uno de los bordes del cubreobjetos.
2. Colocamos papel absorbente al lado opuesto del cubreobjetos para forzar el
movimiento del tinte a través de la muestra.
3. Una vez la muestra ha absorbido el tinte retiramos el papel absorbente
Aceite de inmersión
El objetivo de inmersión (100X) está compuesto por un complejo sistema delintes.
Para observar a través de este objetivo es necesario el uso de
aceite de inmersión entre el objetivo y la preparación, de esta manera la lente
frontal entraen contacto con el aceite.