LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA

INFORME 5

CROMATOGRAFÍA DE COMPUESTOS ORGÁNICOS

Integrantes del Grupo 02:

● Espíritu Olivares, José Daniel

● Porras Reaño, Patrick Fabian
● Casana Casimiro, Frank Antony
● Rodriguez Falcón, Cristhina Flavia

Docente:

Dr. Mario Carhuapoma Yance

25/04/2023
 Índice

Introducción 3
Fundamentos teóricos: 4
CROMATOGRAFÍA: 4
Tipos de cromatografías: 5
PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRÁFICO: 5
MATERIAL Y MÉTODOS: 7
PROCEDIMIENTOS: 7
CUESTIONARIO: 10
RESULTADOS: 10
Conclusiones 11
Referencias Bibliográficas 11
 Introducción
La cromatografía es una técnica para separación de los distintos componentes de una
mezcla, permite la separación de trozos de impurezas o bien de las fracciones importantes. El
fundamento de la cromatografía es la separación de diferentes tipos de moléculas cuando
desciende por una columna o atraviesa una delgada capa de material inerte.

En ambos casos, existe una sustancia que proporciona una superficie elevada y que
interacciona físicamente con el compuesto a analizar. Si las moléculas son absorbidas por la
superficie, el fenómeno se llama cromatografía de absorción, y si se disuelven en una delgada
superficie líquida, cromatografía de reparto.

El nacimiento de la cromatografía de absorción se remonta hacia el año 1903, cuando

el botánico ruso Mikhail S. Tswett estableció los primeros fundamentos. Este científico
observó que filtrando soluciones que contenían pigmentos vegetales a través de una columna
de carbonato de calcio en polvo fino, los pigmentos quedaban retenidos.

El objetivo del informe es proporcionar información adecuada para el estudio

experimental de la cromatografía de compuestos orgánicos dentro de la universidad de la
facultad de Farmacia y Bioquímica, dirigido a los estudiantes que se encuentran en primeros
semestres de la universidad y que cursen ciencias básicas como la química o aquellas
personas que desean investigar o saber un poco más del tema sin tener necesariamente
estudios universitarios.
Fundamentos teóricos:

CROMATOGRAFÍA:

Es un procedimiento físico-químico que consiste en separar los componentes o las sustancias

integrantes de una mezcla en movimiento por medio del reparto o absorción sobre una
superficie estacionaria o inmovil. La razón por la que es posible conseguir separaciones
difíciles de lograr por otros métodos estriba en que pequeñas diferencias en el coeficiente de
reparto o de absorción-desorción de cada uno de los componentes se va multiplicando a lo
largo del sistema.

La cromatografía es una técnica muy versátil que se utiliza en muchos campos de la química,
incluyendo la química orgánica, la bioquímica, la farmacología y la química ambiental. Por
ejemplo, en la síntesis de nuevos compuestos orgánicos, la cromatografía se utiliza para
purificar los productos finales y separar los subproductos y los residuos.

En la identificación de compuestos orgánicos desconocidos, la cromatografía se utiliza para

separar los componentes de una mezcla y luego analizar cada componente por separado. Esto
permite identificar los compuestos individuales y determinar su estructura y propiedades.

Se puede establecer dos mecanismos:

1. Reparto o partición : Es la distribución de una sustancia o mezcla de sustancias entre

la fase móvil y la fase estacionaria soportada sobre un sólido adecuado.
2. Absorción: Fenómeno de superficie que consiste en el aumento de concentración de
una sustancia en la superficie de un sólido. El proceso inverso, o sea la separación de
las moléculas absorbidas en la superficie de un sólido, se denomina desorción .

Importancia: Una vez separada la muestra de sus componentes cromatográficamente , cada

uno de ellos puede ser caracterizado e identificado. También es posible determinar la cantidad
de cada componente en la muestra,lo que hace de la cromatografía una herramienta analítica
no solo cualitativa sino cuantitativa.
Tipos de cromatografías:

- Cromatografía en papel.
- Cromatografía en capa fina.
- Cromatografía en fase gaseosa.
- Cromatografía líquida de alta performance (HPLC).

PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRÁFICO:

1. Fase móvil: Lo constituyen los solventes,que son

sustancias fluidas de diferente polaridad, ejemplo:
metanol, cloroformo, etanol, etc.La polaridad de la
fase móvil está relacionada con su capacidad de
elución o desorción . Los solventes deben tener un
elevado grado de pureza.
2. Fase estacionaria o soporte: Lo constituyen las
sustancias absorbentes que generalmente se
depositan sobre la placa de vidrio o columna de
vidrio. en el caso de C. en papel , el papel
Whatman. Debe ser insoluble en el disolvente que
se va a utilizar para la separación y no debe reaccionar con las sustancias que se van a
separar.
3. Cámara de saturación: Es un recipiente con una tapa que cierra herméticamente
donde se realiza el cromatograma.
4. Reveladores: Si todos los compuestos son coloreados, bastará la inspección ocular
para distinguir las manchas, pero en la mayoría de los casos,los compuestos son
incoloros y por ello invisibles en el cromatograma, siendo necesario utilizar métodos
físicos (Luz UV) o químicos, como los vapores de Iodo, otros reactivos especiales que
permitan la visibilidad de los compuestos.
5. Aplicadores: Son micropipetas utilizadas en la aplicación o “sembrado” de las
sustancias o cromatografía.
 6. Muestras: Son las sustancias a cromatografiar y pueden ser: la sustancia patrón o
estándar y la sustancia problema o muestra problema.

Relación de flujo (Rf): La relación entre la velocidad de flujo de la fase móvil y la velocidad
de flujo de la fase estacionaria. Esta relación es un factor importante en la separación de los
componentes de una mezcla mediante cromatografía.

En general, se busca mantener una relación de flujo constante durante la cromatografía para
lograr una separación eficiente de los componentes de la mezcla. Si la relación de flujo es
demasiado alta, es decir, la fase móvil se mueve demasiado rápido en relación con la fase
estacionaria, la separación puede ser menos eficiente. Por otro lado, si la relación de flujo es
demasiado baja, la separación puede ser muy lenta.

La relación de flujo puede ajustarse variando la velocidad de flujo de la fase móvil,

cambiando el tipo de fase estacionaria o cambiando el tipo de disolvente utilizado como fase
móvil. Es importante optimizar la relación de flujo en la cromatografía para obtener la mejor
separación posible de los componentes de la mezcla.

𝐹𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑅𝑓 = 𝐹𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

Frente de soluto: Es la distancia que alcanza o recorre 1 muestra problema en una

cromatografía.

Frente de solvente: Es la distancia que alcanza o recorre la fase móvil en una cromatografía.
MATERIAL Y MÉTODOS:

- Tubo de prueba
- Beaker
- Capilares
- Mechero
- Trípode
- Portaobjeto
- Papel filtro
- Rejilla
- Cámara de Revelado
- Lápiz

PROCEDIMIENTOS:
Utilizar muestra de la práctica de purificación.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

1. A 1cm del borde inferior del cromatograma marcar dos puntos equidistantes
entre sí con un lápiz.
2. Con un capilar aplicar la MUESTRA PROBLEMA y la MUESTRA PATRÓN
DE IDENTIFICACIÓN de 3 a 5 veces. Dejar secar.
3. Introducir el cromatograma en la cámara de saturación el que a su vez contiene
2ml del sistema del solvente.

4. Cuando el solvente esté por llegar al borde superior retirarla de la cámara,

marcar el frente del solvente , dejar secar, revelar con los vapores de yodo, y
hallar el RF de ambas sustancias.
CUESTIONARIO:

1. ¿Qué es una serie eluotrópica?

Una serie eluotrópica es una lista de disolventes ordenados según su poder de elución para
un adsorbente determinado. Esta serie es importante para determinar los disolventes
necesarios en la cromatografía de una mezcla de compuestos. Normalmente comienzan con
disolventes no-polares, como el n-hexano, y finalizan en disolventes polares como el agua. El
orden de disolventes en una serie eluotrópica depende a la vez de la fase estacionaria, así
como del compuesto empleado para determinar el orden. La fuerza de elución, fuerza
eluyente, o fuerza eluotrópica, (εº), de un disolvente es una medida de la energía de adsorción
del disolvente tomando como referencia el sistema pentano-sílice pura al que se asigna el
valor 0,00. Por ejemplo, la serie de Snyder cuantifica la fuerza de elución de cada disolvente
en alúmina. Dicha fuerza indica la facilidad del disolvente para formar enlaces de hidrógeno
con las moléculas que queremos extraer, la cual depende de su constante dieléctrica o de su
momento dipolar.

2. Mencione las aplicaciones de la cromatografía por HPLC y la cromatografía por

gases.

Aplicaciones de la cromatografía por HPLC:

Las aplicaciones prácticas de la cromatografía se encuentran por ejemplo en la producción,

donde se usa la cromatografía para la limpieza y aislamiento de sustancias. Por otro lado, en
la analítica química se usa la cromatografía para separar mezclas en compuestos
homogéneos. La cromatografía juega un papel importante en muchos sectores, como la
química orgánica, la bioquímica, la química inorgánica, la química ambiental y la química
alimenticia.

Aplicaciones de la cromatografía por gases:

La cromatografía de gases es una técnica de separación que existe desde hace más de un
siglo. En ese tiempo, se abrió camino en una serie de industrias con muchos usos. Se puede
combinar con una gama de técnicas de detección como la espectrometría de masas y el
infrarrojo de transformada de Fourier para mejorar el análisis, lo que lo hace adecuado para
aún más aplicaciones.

Alimento

Se puede utilizar para el análisis cualitativo y cuantitativo de productos alimenticios,

cuantificación de aditivos, identificación de compuestos de sabor y aroma, y ​detección de
contaminantes como pesticidas y toxinas naturales.

Fabricación

Las compañías farmacéuticas, en particular, necesitan saber que sus productos contienen la
cantidad exacta de medicamento requerida sin inconsistencias ni impurezas.

La cromatografía de gases puede hacer exactamente eso, identificando y cuantificando cada

componente que constituye un producto en particular. También se usa en la industria química
para hacer lo mismo con solventes y emulsionantes. En ambos casos, asegura que la
producción pueda escalarse sin el riesgo de productos inseguros o deficientes.

Prevención

La cromatografía de gases se puede utilizar para identificar y cuantificar sustancias químicas

específicas que estos productos liberan al aire. Eso brinda a los fabricantes una mejor
oportunidad de eliminarlos por completo o, al menos, asesorar a los consumidores sobre
prácticas como la ventilación para reducir su impacto.

Prueba de drogas

Debido a que la cromatografía de gases puede identificar componentes específicos dentro de

una sustancia, también se puede usar para detectar drogas a partir de muestras de fluidos
corporales.

3. Diga que es la electroforesis y cuál es su fundamento.

La electroforesis es una técnica de laboratorio que se usa para separar moléculas de ADN,
ARN o proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica. Se usa una corriente eléctrica
para mover las moléculas a través de un gel o de otra matriz. Los poros del gel o la matriz
actúan como un tamiz, lo cual permite que las moléculas más pequeñas se muevan más
rápido que las moléculas más grandes. Para determinar el tamaño de las moléculas de una
muestra, se usan estándares de tamaños conocidos que se separan en el mismo gel y luego se
comparan con la muestra.

4. Diga usted qué método cromatográfico se puede aplicar en su carrera.

A nivel industrial la cromatografía de gases tiene amplia aplicación, en las industrias se

enfoca principalmente a evaluar la pureza de los reactantes y productos de reacción o bien a
monitorear la secuencia de la reacción, para los fabricantes de reactivos químicos su
aplicación para la determinación de la pureza es lo más importante.

RESULTADOS:

1. ¿Qué precauciones tuvo que tener en cuenta en el desarrollo del cromatograma?

Se debe tener precauciones al preparar una cromatografía en columna; al empaquetar la

columna adicionando adecuadamente la fase estacionaria, en nuestro caso la sílice gel, con
el hexano asegurándose de mantener un goteo constante y revisando que el hexano fluya por
la columna cromatográfica y por el embudo de separación. También se debe estar revisando
que la columna no se “seque” es decir que siempre haya, por lo menos 0.5 cm por el nivel de
la fase estacionaria, del disolvente usado el hexano. Mantener un goteo uniforme en la llave
de salida del disolvente, pero hay que tener cuidado de no dejar la sílice gel sin disolvente, ya
que se puede agrietar. La columna se llena hasta tres cuartas partes de su
capacidad. Es importante conocer la polaridad del adsorbente para así elegir la polaridad del
disolvente

2. Qué debe tener en cuenta para que la muestra sea aplicada en el cromatograma.

Se debe de tener en cuenta que al empaquetar la columna adicionando adecuadamente

la fase estacionaria, en nuestro caso la sílica gel, con el hexano asegurándose de
mantener un goteo constante y revisando que el hexano fluya por la columna
cromatográfica y por el embudo de separación.

3. Qué precauciones se debe tener en cuenta durante el sembrado de la muestra en

el cromatofolio .
- Tener en claro la diferenciación entre la muestra problema y la muestra
estándar, para la futura contrastación.
 - Usar capilares distintos para la siembra de las respectivas muestras.
- Dejar secar el cromatofolio luego de hacer el sembrado.

4. El Rf de la muestra en la cromatografía en capa fina es:

Muestra estándar: 6 cm

Muestra problema: 1,5 cm

Podemos decir en conclusión:

Rf= Relación de flujo

𝑑.𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎(𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎) 1,5 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = 𝑑.𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎(𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟)
= 6 𝑐𝑚
= 0, 25

La relación de flujo es baja, por lo que la separación va a ser lenta.

Conclusiones
● Luego de almacenar la cromatoplaca dentro de la cámara de yodo, se pudo observar
que la elución de la muestra problema se encontraba al mismo nivel que el estándar
por lo cual pudimos concluir que se trataba del ácido acetil salicílico.
● En un análisis experimental es importante tener dos muestras para la comparación de
los resultados como en este caso, nuestra base fue la muestra patrón (muestra
químicamente pura).

Referencias Bibliográficas
- Álvarez, D. O. (s/f). Cromatografía. Concepto. Recuperado el 2 de mayo de

2023, de https://concepto.de/cromatografia/

- Herr�ez, A. (s/f). Cromatografía. Uah.es. Recuperado el 2 de mayo de 2023,

de https://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm
 - Pizarro, P. (2022, marzo 8). ¿Qué es Cromatografía? Cientec; Cientec S.A.

https://cientecinstrumentos.cl/que-es-cromatografia/