Microbiología PDF

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TEMA 1. INTRODUCCIÓN AL MUNDO MICROBIANO.

• Prólogo:
à Descubrimiento del microbio y el mundo microbiano.
à La microbiología está asociada a la capacidad de visualizar los
microbios. Es una ciencia relativamente moderna a causa de la tardía
existencia del microscopio y la falta de recursos.

1664 – Robert Hooke.


Primera persona en describir hongos microscópicos. Fue uno de los
creadores del microscopio óptico llegando a alcanzar los 50 aumentos.

1632 – Leeuwenhoek.
Comerciante de tejidos y naturalista aficionado. Construyó un
microscopio extraordinariamente simple con el que llegó a conseguir
más de 200 aumentos. Se le atribuye a ser el primero en observar
bacterias y otros organismos unicelulares que denominó genéricamente
“animáculos”.

Estos primeros microscopios tenían el problema de producir


aberraciones ópticas en sus lentes. Por ese efecto, los objetos pequeños
aparecían rodeados de anillos de color (aberraciones cromáticas), que
impedían observar los detalles con claridad y deformaban la imagen de
lo observado.

Siglo XIX – factores que contribuyeron al desarrollo de la microbiología.


1) Microscopio óptico à como el que conocemos en la
actualidad.
2) Teoría de la generación espontánea.
3) Naturaleza de la enfermedad contagiosa: se descubren
microorganismos y se preguntan si pueden ser causantes de
enfermedades. Koch (1976) estudia una enfermedad ligada al
ganado (la de las vacas locas). Anthrax=Carbunco. Es causada
por Bacillus anthracis, presente en la sangre de animales
enfermos, no en los sanos.
Postulado de Koch: criterio válido en la medicina actual en la definición
de nuevas enfermedades microbianas. Los postulados son los
siguientes:
1) El microorganismo debe hallarse en los animales enfermos y
no en los sanos.
2) El microorganismo debe poder ser aislado del individuo
enfermo y obtenido su cultivo puro.
3) El microorganismo aislado del cultivo puro debe causar la
misma enfermedad en otro animal sano.
4) Los microorganismos deben poder ser aislados de nuevo en el
laboratorio y deben ser el mismo que el original.
• Pilares de la microbiología:
- Cultivo puro: conjunto de microorganismos idénticos constituidos
por una o más colonias (solo contiene una clase de
microorganismo).
- Colonia bacteriana: conjunto de microorganismos procedentes de
un mismo microorganismo.
- Esterilización: cabinas: en ellas el aire sube hacia arriba y es
expulsado al exterior de manera que la persona que está
trabajando no se pone en contacto con el microorganismo. En
caso de que el microorganismo sea patógeno se limpia con
alcohol, se enciende el UV y después el aire.

• Concepto de microbiología:
a) Objetivo de estudio: seres vivos que no se distinguen a simple
vista. En sentido estricto: organismos unicelulares <0.1mm. En
sentido amplio (sensu lato): organismos 1mm. Protozoos, algas,
hongos unicelulares (eucariotas), bacterias, virus.
b) Por método de estudio: estudio de poblaciones. Cultivo puro:
población microbiana desarrollada a partir de un único individuo.
Todos son idénticos.

Técnicas: aislamiento à cultivo puro à identificación.

En 1993 se descubren 2 organismos que son grandes (macro) pero


están en la escala de procariotas. Epulopiscium fishelsoni y
Thiomargarita namibiensis. ARN ribosomal de la subunidad 16S:
molécula para establecer si es procariota o eucariota. Se extrae y si es
eucariota tendría ARNr 18S (secuencia distinta).

Microorganismo: seres vivos dotados de individualidad con una


organización biológica elemental y por lo general de tamaño
microscópico.
• Sistema de clasificación de los seres vivos:

Dominios: nivel superior de clasificación.


Reinos
Filo
Clase
Orden
Familia
Género (siempre Mayúscula)
Especie (siempre minúscula)
• Dominio Arquea.
Arquea o archea. Antiguo, aunque se descubrió después de las
bacterias (aún no se conoce ninguna enfermedad causada por este
dominio). Características:
- Procariotas.
- La mayoría son anaerobios.
- Desarrollo en ambientes extremos:
• Fuentes termales: elevada temperatura (100ºC).
termófilos. PCR: conseguir copias de moléculas de ADN.
Tienen una polimerasa que aguanta hasta 70ºC. así se
mantienen todo el tiempo las enzimas abiertas.
• Aguas extraordinariamente salinas: halófilos.
• Suelos y agua muy ácidos o alcalinos: basófilos y
acidófilos.
• Dominio bacteria.
- Aerobios y/o anaerobios.
- Todos los procariotas causantes de enfermedades conocidas.
- Hábitat:
• Suelos
• Aguas
• Tracto digestivo
- Fuentes de energía:
• Luz
• Materia orgánica
• Materia inorgánica.

La microbiología estudia grupos de microorganismos: bacterias, algas,


hongos, protozoos y virus. Sólo tienen una propiedad en común: su
pequeño tamaño. La diversidad de forma y función entre los grupos de
microorganismos es tan grande como la diversidad total de todos los
seres vivos.
TEMA 2. TAMAÑO Y FORMA.

Forma: la forma de las bacterias depende tanto del plano de decisión


como de su configuración genética.

Coloquialmente hablando, se les puede designar por este nombre,


aunque realmente deban nombrarse en latín: bacillus, coccus, etc. Las
bacterias pueden ser, morfológicamente hablando:

a) Esféricas: cocos (coccus).


• Cocos: aislados.
• Micrococos: pequeños y aislados.
• Diplococos: en parejas.
• Estreptococos: formando cadenas.
• Estafilococos: grupo irregular.
• Tétrada (4): estructuras bien organizadas.
• Sarcinas (8 o más): estructura bien organizada.

- Forma intermedia entre coco y bacilo: Cocobacillus (más largo


que ancho pero muy poco).

b) Cilíndricas: Bacilo (bacillus-baston) más largos que anchos.


• Cilindro recto: bacilo (normativo). Clostridium tetani,
Mycobacterium tuberculosis, Escherichia coli (5µm).
• Cilindro ondulado: Espirilo.
• Cilindro curvado: Vibrio (forma de coma) bacilo con una
parte más ancha que la otra. Vibrio cholerae.
• Diplobacilos: bacilos de tipo cilindro recto en parejas.
• Estreptobacilos: cadena de bacilos.

c) Modificaciones: cuando no son ni cocos ni bacilos:


ramificaciones, micelios, filamentos, bacterias en forma estrella,
cuadradas.

- 1ª foto: Inclusiones: esferas refringentes: cúmulos de azufre que


utilizan para producir energía.

- Haloarcula: “halo” es salino y “árcula” es arquea. Por ende,


arquea de ambiente salino. Es cuadrada. Tamaño: 5µm.
Arqueobacteria por así decirlo.

- Saccharomyces cerevisiae: para fermentación cerveza y pan.

TAMAÑO:
1mm = 103 µm = 106 nm

- Bacterias esféricas: cocos diámetro 0,5 micrómetros (µm)

- Bacterias cilíndricas: 5 µm largo y 1 µm ancho (tamaño estándar).

- Bacterias gigantes (x25, x50 tamaño normal).

1993: Epulopiscium fhishelsoni (proviene del intestino de un pez).


Procariota Gram positivo. 600µm largo y 80 µm ancho.

1999: Thiomargarita namibiensis. De 100-300µm hasta 700µm de


diámetro.
Thio = azufre
Margarita = perla
Nambiensis = Namibia (lugar)

VENTAJAS FISIOLÓGICAS “PEQUEÑO TAMAÑO”:

- La proporción de nutrientes que atraviesan la célula es


inversamente proporcional al tamaño celular.

La relación superficie volumen (SV) es mayor en organismos más


pequeños, lo que indica que estos difunden mejor los nutrientes y
presentan un metabolismo más activo. Por ende, tendrán un mayor
crecimiento.

- S/V es mayor en organismos pequeños


ß
- Mayor difusión de nutrientes
ß
- Metabolismo más activo
ß
- Mayor crecimiento.
• REPRODUCCIÓN BACTERIANA:

Por división binaria, en la mayoría de los casos se forma un


septum d paredes transversales (hay gemación y otros). Al
dividirse la célula, esta presenta la mitad de la célula vieja y la
otra mitad es nueva.

• Septum: viene de septo que significa separación.

(insertar dibujo cuaderno)

Glucocáliz(x) generalidades:

Material viscoso secretado por los microorganismos y que se ubica en la


superficie de éstos.
Compuesto por exopolímeros celulares que pueden ser:
·Exopolipéptidos: repeticiones de un mismo aminoácido; por
ejemplo: de ácido glutámico.
·Exopolisacáridos: subunidades de glucosa: b-glu(glucosa)-
1,4-bglu; b-glu-1,2-bglu; otros como subunidades de
glucosa – ramnosa-ac.glucurónico

Características:
- No todas las bacterias lo poseen.
- Síntesis: provienen del metabolismo intermediario de la bacteria.
Se sintetizan en el citoplasma y salen al exterior.

Tipos: cápsula, limos, vainas y pedúnculos.


Diferencias entre la cápsula y los limos (capa de mucosa).

PREGUNTA EXAMEN!!!!!

Criterios de Cápsula Limos


laboratorio

Tras la
centrifugación SÍ NO
permanecen unidas
a la
bacteria.
Dan tinción SÍ, no se tiñe NO, se tiñe
negativa con
tinta china. (no se
tiñe)

Cápsula más unida a la bacteria que los limos.


La cápsula es tan densa que no permite entrar el tinte. Sin embargo, los
limos, al estar separados y contener moléculas de agua, permite el paso
del tinte.

• Cápsula= antígeno K (alemán “Kapsule”).


La cápsula es un cuerpo extraño para el sistema inmune humano. Es
un antígeno que es reconocido por los anticuerpos. Los humanos
creamos anticuerpos para la cápsula. La cápsula es más patógena que
los limos ya que es más compacta.
Un antígeno es un cuerpo extraño.

Todas las estructuras que encontremos, cualquier estructura que tenga


la bacteria y que entre en el torrente sanguíneo, el sistema inmune
debería detectarlos, pero no los k.
Los capsulados son

Los flagelos o cualquier estructura externa son antigénicos.

• Limos (o capa mucosa de menor consistencia). Entre cada cadena hay


agua retenida
Leuconostoc mesenteroides (bacteria láctica heterofermentativa).

Transglucosidación: Si la bacteria tiene enzimas en el exterior


(exoenzimas), la dextrano sacarasa rompe la sacarosa y polimeriza la
glucosa (procedente de la rotura de la molécula) formando la dextrosa,
mientras que la fructosa se ingresa en la bacteria para utilizarla como
fuente de carbono y energía. No usa ATP. Como fuente de energía se
usa la energía liberada en la ruptura de enlaces de los disacáridos.

N-sacarosa à [Glucosa]n + n Fructosa= fuente de C y energía


También hay bacterias que hacen los polímeros con la fructosa y
como esta es levógira, los microorganismos toman el nombre de
levanos. Es un proceso que forma ATP ya que se usa la energía de la
ruptura de los enlaces de los disacáridos: Transglucosidaciones.
El ATP se produce en la membrana citoplasmática (interior). Pero este
no puede salir hacia las exoenzimas. Por tanto, aprovechan la energía
liberada de la lisis de las moléculas de sacarosa.

N-sacarosa à [Fructosa]n + n glucosa= fuente de C y energía

Streptococcus salivarius:
· Caries: levanos que se fijan en la superficie dental (por eso usamos el
cepillo de dientes, para rascar y eliminar dichas bacterias). Proceso de
fermentación.
Ácidos = caries porque rompen la dentina de los dientes.

Lo rojo sale en el examen!!!

- Vainas: cubiertas tubulares de exopolisacáridos. Polímero


transparente donde en el interior hay cadenas de bacterias
(estreptobacterias).

- Pedúnculos: exopolisacáridos (o estructuras proteicas) que sirven


como punto de anclaje para las bacterias. Tiene forma de cadena.

FUNCIONES: Mecanismos de anclaje:


(glucocáliz)
Habitat Función
Bacterias Aguas dulces Adhesión al medio
(roca).
Bacterias Intestino Adhesión al medio
(epitelio)

- Dificultan el reconocimiento de la bacteria por los leucocitos e


impide que puedan llegar a los componentes básicos de la
bacteria para destruirla.
- Ofrecen resistencia a la fagocitosis a causa de la presencia de
estas estructuras.
- Favorecen resistencia a la desecación (material muy hidrofílico).
TEMA 3. EXTERIOR DE LA CÉLULA BACTERIANA.

• CAPA S (“S LAYERS”):

Capas monomoleculares de proteínas o glicoproteínas con simetría o


trimérica, o tetragonal o hexagonal presentes tanto en el dominio
Arquea, como Bacteria.

- Dominio Arquea: casi todas las Arquea poseen capa S y están


unidas a la membrana celular.

- Dominio Bacteria: presentes en bacterias Gram positivas y Gram


negativas, en casi todos los grupos filogenéticos se encuentran
representantes.

• Bacterias Gram negativas: Las capas S están unidas a la


membrana externa.
• Bacterias Gram positivas: Las capas S están unidas al
peptidoglucano (porque no tiene
ninguna membrana externa).

Función: barrera de permeabilidad entre el exterior y el interior celular


y de defensa ante patógenos.

Pared bacteriana:

Presente en el dominio de Bacteria Gram negativa y está constituida


por:
a) Una zona más interna de la bacteria:
Membrana de estructura similar ala membrana unitaria
(citoplasmática)
· Bicapa lipídica= Fosfolípidos.
· Proteínas integrales o periféricas
(8nm de grosor).

Dos bicapas: citoplasmática y peptidoglucano (Gram negativa)


b) Una zona más externa:
Cadenas de Lipopolisacáridos (LPS)
Lipo: hidrofóbica
Polisacárido: hidrofílica.
Exterior
· Cadena O
· Core polisacarídico
· Lípido A.
Interior (membrana lipídica de la membrana externa)

- Cadena O: repeticiones de varios componentes, de distintos tipos


de glúcidos como manosa, galactosa, etc.
Carácter antigénico à Man= Manosa; Rha= Ramnosa;
(Antígeno O) Abe= Abequosa; Gal= galactosa.

Bacterias mutantes sin cadena O son O ---.


Bacterias O--- no son virulentas.

¿Es el LPS antigénico? Sí porque tiene a cadena O que es


antigénica

- Core polisacarídico: no se repiten los componentes.

· Polisacáridos 6 carbonos y 7 carbonos.


· NAG= N-acetilglucosamima.
· 2 Hep= Heptosas
· 3 KDO= 2aceto-3deoxioctanoico.

- Lípido A: EL LPS se une a la membrana externa por e lípido A


· Estructura: Dímero fosforilado de glucosamina al que se unen
ácidos grasos saturados.
Esquema Kauffmann-White “tipado del antígeno O”:

Seguimiento epidemiológico.
Permite conocer si un conjunto de casos constituyen un foco o
varios para seguir la cadena de infección hasta su origen y así
determinar el mapa de la región y saber si es un brote autóctono
o importado.

(todas las S. de la imagen son Salmonella)


El antígeno O nos puede servir para ver que tipo de Salmonella es
por el orden de los glúcidos.

- Lipoproteína: dominio Bacteria (Gram negativa).

· Proteína más abundante en la célula. Pm= 7,5 Kdaltons


· Se une al peptidoglucano formando uniones entre el extremo
carboxiterminal de la lisina y un grupo amino de ácido
diaminopimélico (DAP) del peptidoglucano.

- Porinas: Dominio bacteria Gram negativa.


¿Cómo atraviesen los nutrientes la membrana externa?
· Porinas: son trímeros que se autoensamblan. Forman poros,
canales de 1nm.
Permiten el paso de pequeñas moléculas hidrófilas, azúcares,
aminoácidos, di-tri péptidos, iones inorgánicos.
Son canales de la membrana externa

Proteínas__________________________Función_________
Porinas
OmpC : Poros 1,1nm. Inespecíficos
OmpF : Poros 1,2nm Inespecíficos
PhoE : Poros 1,1nm Entrada de fosfato (Pho)

El fosfato inorgánico atraviesa entra. Sin embargo, el fosfato orgánico


se cinde en el periplasma, se rompe la molécula y entra en forma de
fosfato inorgánico.
Ante las bajas concentraciones de fosfato en el medio, aumenta la
cantidad de poros PhoE para permitir una mayor entrada de fosfato
garantizando la viabilidad celular.

DNAà gen porina PhoE


ß
Transcribe
ß
Traduce
ß
Porina PhoE en la membrana
- Canales específicos:

· Lamb B: poro específico para la entrada de maltosa, maltodextrina. Se


induce su síntesis por la maltosa. Lugar de adsorción (no absorción) del
bacteriófago Lambda.

· Tsx: poro específico para la entrada de nucleósidos. Lugar de


adsorción del bacteriófago T6.

· TonA: poro específico para la entrada de compuestos de hierro. Lugar


de adsorción del bacteriófago T6 y T1.

- Adsorción: cuando el bacteriófago establece contacto con la


célula.

Hay una estructura bacteriana que equivale evolutivamente al virus


pero al revés.
En el periplasma hay enzimas de adsorción para poder facilitar el paso.
Lo que unen el periplasma con la membrana externa son las
lipoproteínas.

- Periplasma: dominio bacteria G. negativa

Zona situada entre las dos membranas externa e interna.


En el periplasma se dan reacciones anabólicas y catabólicas.
Papel: tampona el medio, estabiliza la presión osmótica, conserva
el medio estable.
Zona de paso, entrada y salida de compuestos
Enzimas hidrólicos: Proteasas = péptidos
Nucleasas = nucleótidos (enzimas de
restricción)
Fosfatasas = hidrólisis de polifosfatos (ver
ejemplo de PhoE)
Presencia de proteínas transportadoras: “Binding proteins”
relacionadas con los quimioreceptores de la Membrana
citoplasmática.
Precursores del peptidoglucano.
Nucleasas: Eco R 1, Eco R 2 (en Escherichia coli)
Binding proteins: Porque cogen al compuesto que viene desde el exterior
y lo llevan hasta la membrana.

Peptidoglucano= Glucopeptido: dominio bacterias g. + y –

Molécula propia de procariotas. Constituido por:

a) Aminoazúcares acetilados: N-acetilglucosamina “G” y N-


acetilmurámico “M” (éter láctico de “G”).
b) Tetrapéptido (4aa): algunos aa no presentes en proteínas (DAP).
Alanina, Ácido glutámico, DAP, L-Alanina.
Características del peptidoglucano:
- Enlace entre G-M son b1-4 (los aminoácidos salen siempre de la
M, no la G).
- Los enlaces entre los aminoácidos son peptídicos.
- El tercer aminoácido es el ácido diaminopimélico (DAP) =
(Lisina+COOH).

La unión es entre el tercer aminoácido (DAP) de un tetrapéptido con el


cuarto aminoácido (L-Al) del otro tetrapéptido.

Hay variaciones del peptidoglucano según los microorganismos.


Escherichia coli Gram negativa. Sin puentes de pentglicinas.
Staphylococcus aureus Gram positiva. Con puentes de pentaglicinas.

- Tinción de Gram:

Gram (1884), estableció un método empírico de tinción diferencial. La


tinción de Gram es utilizada como una importante característica
taxonómica.

Fundamento: se basa en teñir células en crecimiento. Se parte de


bacterias en suspensión que se fijan por calor y se añade colorante
(Cristal violeta + Lugol = Laca (complejo insoluble en agua)).
Finalmente, se eliminan los restos.

Si en la tinción de Gram no añadimos un colorante contraste, las


bacterias Gram negativas no las veríamos ante el microscopio.
Se mira al microscopio óptico:

GRAM POSITIVA GRAM NEGATIVA


ß ß
No pierden el Pierden el Cristal
Cristal Violeta Violeta.
(quedan violetas) Incoloras
ß
Colorante de contraste:
Safranina (rosa)

50 años después, Fleming 1922 descubre un enzima: LISOZIMA= N-


acetil-Muramidasa presente en lacrimales, saliva y huevo.
Actúa sobre los enlaces b1-4, M-b1-4-G
Si rompe el enlace
Lo que provoca que no se sintetice el peptidoglucano bacteriano =
obtener células sin peptidoglucano:
a) Esferoplastos, sin la mayor parte de peptidoglucanopared, es decir,
le quedan fragmentos de éste. No se dividen.
b) Protoplastos, totalmente sin peptidoglucano. No se dividen.

- Experimento de Weibull.

Solución hipotónica: se añade la bacteria y lisozima, que rompe el


peptidoglucano produciendo la lisis de la bacteria por la absorción del
agua del medio.
Solución isotónica: la lisozima rompe el peptidoglucano quedándose
sin este.

La tinción de Gram NO está relacionada con los componentes


químicos de las bacterias. SI está relacionada con la estructura física
del peptidoglucano.
Levaduras con pared distinta composición química también se tiñen
de violeta.

Diferencias:
Gram negativas: peptidoglucano constituye el 5-10% peso seco de la
bacteria.
Capa monomolecular o bimolecular.
Grosor 2nm.
Gram positivas: peptidoglucano 40-90% peso seco de la bacteria.
Ácidos Teicoicos: polímeros hidrofílicos constituidos por unidades
repetidas de ribitol fosfato o glicerol fosfato unidos por enlaces
fosfodiester. Aminoácidos como D-ala y azúcares como la glucosa se
unen a los grupos glicrol y ribitol.

Peptidoglucano Gram positivas: los ácidos teicoicos se unes a lapared.


También pueden unirse a lípidos de la membrana son los Ácidos
Lipoteicoicos.
Los ácidos teicoicos constituyen los antígenos (porque es lo que más
sobresale) mayoritarios en bacterias Gram positivas.

Pared en Dominio Arquea:


Las Arqueas presentan gran diversidad de paredes celulares.

a) Pseudomureína sustituye a N-acetilmurámico= “M” del dominio


Bacteria.
“G”-N acetil-taloaminouronico (psudomureína)
N- acetilglucosaminta-N acetil-taloaminouronico.
Los enlaces son b1,3. La lisozima actua sobre b1,4, no sobre b1,3.
Ejemplo Methanobacterium.
b) Halococcus. Formada por pseudomureína + ácidos urónicos +
grupo sulfato.
c) Capas S. La pared más común. Barrera de permeabilidad.
d) Sin pared (ejemplo= Thermoplasma).

Papel general de la pared en todos los casos:


- Determina la forma de la bacteria.
- Mantiene la turgencia de la célula evitando la lisis.
- No regula la presión osmótica y celular.
- Interviene en el movimiento y en la división celular. Los flagelos
tienen varios discos que se enganchan a la batería para que no
salgan volando.

• Biosíntesis de peptidoglucano. (ponemos la bacteria de lado)

Citoplasma Membrana Pared celular


Síntesis de citoplasmática.
precursores Polimerización
Transporte
G
|
M Udp-G-M
| |
5aa 5aa

En la membrana citoplasmática se encuentra el transportador:


bactoprenol o undecaprenol, lípido (isoprenoide C55). Udp.
Paso final es la formación de puentes peptídicos entre las cadenas
adyacentes del glucopéptido = TRANSPEPTIDACIÓN.
El precursor peptidoglucano tiene 5aa con 2 D-ala.
Se establece la unión peptídica entre dos aminoácidos sin la
intervención de ribosomas.

Transpeptidación: se escinde la D-Ala produciendo la energía suficiente


para poder crear nuevos enlaces peptídicos. (buscar más).

ANTIBIÓTICOS INTRODUCCIÓN:

Agente químico producido por un microorganismo y que es dañino


para otros microorganismos (mata o inhibe el crecimiento de otro
microorganismo).

Distintos modos de acción de los antibióticos:


- Unos actúan sobre la síntesis de la pared.
- Otros sobre el DNA (inhiben la enzima girasa o la RNA
polimerasa).
- A nivel de síntesis proteica (subunidades 30S o 50S).
- A nivel membrana.

Se caracterizan porque actúan sobre la bacteria y no sobre nosotros.


- A, fosfomicina y B Alafosfina: inhiben la producción de
precursores citoplasmáticos.
- C, Vancomicina: impide polimerizar el disacárido pentapéptido.
- D, Penicilina: impide la transpeptidación.
- E, Cicloserina: impide la transpeptidación.
- E, cicloserina: impide la racemización de L-Ala a D-Ala.
- F, Bacitracina: inhibe la regeneración de Bactoprenol.

Racemización: el paso de L a D.

- Ácidos micólicos: de micobacterias. Sistemas de secreción tipo 7


también son característicos de este tipo de bacterias.
- Bacteria Ácido alcohol resistentes: se tiñen rápidamente con
ácidos. Su pared es más gruesa (igual que la de una G+) pero
contiene un 60% de lípidos (ácidos micólicos) y menos
peptidoglucanos. Esta cubierta hidrofóbica hace al organismo
impermeable a la mayoría de tinciones y los protegen de los
ácidos y álcalis. También son resistentes a los leucocitos. Crecen
lentamente debido a que los nutrientes entran lentamente y
además se requiere mucha energía para sintetizar estos ácidos
micólicos. Crece 100-1000 veces más lento que E. coli. Tiempo de
duplicación Mycobacterium tuberculosisà 24h. Difícil de teñir.
(Conviene sabérsela)

Mycobacterium tuberculosis y semejantes protegen sus membranas


con paredes celulares q contiene elevadas cantidades de caras con
hidrocarburos ramificados y en elevado número (60-90 carbonos de
largo) llamadas ácidos micólicos. Se organizan formando una doble
cadena enfrentando sus colas hidrofóbicas. Son muy gruesas y se
unen a las capas inferiores (capas de azúcares complejos y la pared
de mureína) por enlaces covalentes.
TEMA 4. MEMBRANA CITOPLASMÁTICA.
M. citoplasmática = unitaria = interna

En eucariotas la obtención de energía se da en las mitocondrias y


cloroplastos (orgánulos intracelulares).
Mientras que en las procariotas la obtención de energía se da en la
membrana citoplasmática.

Función: barrera osmótica selectivamente impermeable.

Pasan libremente: moléculas pequeñas no polares y sustancias


hidrófobas.
- Moléculas no polares hidrofóbicas: CH4, N2O, H2, N2, O2, benzeno.
- Moléculas polares pequeñas no cargadas: H2O, Urea, glicerina.
- Moléculas apolares: CO2.

No pasan libremente: moléculas cargadas, ácidos orgánicos,


aminoácidos, sales inorgánicas = sustancias hidrofílicas, son
repelidas por la naturaleza hidrofóbica de la membrana.
- Son repelidos:
a) Iones: Na+, K+, Mg2+, Ca2+, HCO3-, Cl-.
b) Moléculas grandes no cargadas: glucosa, sacarosa.
c) Moléculas polares grandes cargadas.
d) Glucosa-6-fosfato, ATP, aminoácidos.

- Necesario un transporte específico:


Binding proteins + permeasas
(periplasma) (membrana interna)

- Transporte: permeasas
a) ácidos orgánicos.
b) compuestos inorgánicos.
Ej.: aminoácidos, glúcidos, iones.

- Reacciones Biosintéticas:
a) Síntesis de las etapas finales de los compuestos propios de la
membrana: fosfolípidos y glucolípidos.
b) Macromoléculas del peptidoglucano (etapas finales). Ver síntesis
del peptidoglucano (tema 3).
c) Polímeros extracelulares

- Reacciones Bioenergéticas:
a) Microorganismos con metabolismo respiratorio: cadena
transportadora de electrones (teoría quimiosimbiótica fuerza
protón motriz).
b) Microorganismos fotosintéticos:
Centros fotosintéticos. Pigmentos fotosintéticos:
· Bacterioclorofilas
Citocromos y Ubiquinonas
· Carotenoides tienen carácter taxonómico, es
· Citocromos decir, se utiliza para diferenciar
· Ubiquinonas. las bacterias.

Hay bacterias que lo que hacen es hacer vueltas y vueltas de sí misma


para colocar el sistema fotosintético. Apilan membranas para poder
colocarlo.

La membrana interna sirve de punto de unión para el DNA. Interviene


en la división de las células hija y sirve, además, de punto de anclaje de
los flagelos bacterianos ya que tiene que cederle energía para que se
pueda mover.

- Pigmentos celulares: de carácter taxonómico, son de colores


vistosos como rojo, amarillo y púrpura. Su función es de
protección frente la luz, las radiaciones UV y radicales libres de
oxígeno y como pigmentos fotosintéticos. A través de pruebas
experimentales se demostró que las bacterias sin pigmentos,
mueren antes.
En bacterias fotosintéticas presentan clorofila. Son heterociclos de
dobles enlaces tanto las clorofilas, carotenos, etc.

Fosfolípidos: constituyen una bicapa de ácidos grasos no ramificados


unidos por enlace éster.

ARQUEAS.
- La membrana de las Arqueas permite establecer agrupaciones
filogenéticas.
- Son químicamente únicas.
- Sus enlaces son éter.
- No tienen ácidos grasos, están constituidas por lípidos llamados
fitanilos.
- La membrana puede ser monocapa o bicapa.
La monocapa es más estable. Lo que convierte una bicapa en monocapa
son los enlaces covalentes.
Citoplasma, características generales:
- 90% agua.
- No existe compartimentación.
- En laboratorio, al microscopio electrónico se ve: citoplasma de
apariencia granular (presencia de ribosomas) y zona central de
aspecto fibrilar (nucleoplasma).

En el citoplasma se dan la mayoría de las reacciones metabólicas:


biosintéticas, síntesis de azúcares, nucleótidos, vitaminas, cofactores,
ATP.
Apariencia granular:
80% RNA bacteriano à Ribosomas
Polisoma = 20 ribosomas junto con RNAm y RNAt.

Apariencia fibrilar: DNA genómico y a veces DNA plasmídico.

• Relación entre antibióticos - Ribosomas - teoría endosimbiótica.


Cloranfenicol = antibiótico que actúa sobre los ribosomas 70S,
inhibiendo la síntesis proteica en procariotas.
Procariotas = muerte bacteriana.
Utilización en humanos (ribosomas 80S) frente a infecciones
microbianas. Aparentemente posee un efecto inocuo en humanos.

Se suministró cloranfenicol a un humano y causó su muerte. ¿Por qué?


El cloranfenicol actúa sobre las células que se multiplican activamente=
células de médula ósea donde la síntesis de mitocondrias es elevada.
Los ribosomas de las mitocondrias son de origen procariótico.
Otros antibióticos, Eritromicina inhiben la actividad de ribosomas 70S,
pero no son captados por las células eucariotas y por tanto, no afectan
a las mitocondrias.
TEMA 5. CITOPLASMA:

Las bacterias tienen mayor densidad que el agua donde se depositan.


Por tanto, tienen dos opciones:
1) Nadar = elevado coste energético.
2) Flotar = ¿más económico?
Aspecto de las vesículas:
- Microscopio óptico: formas refringentes de contorno irregular.
- M. electrónico: número variable de vesículas individuales
Cilindros huecos de composición proteica de 2nm de grosor.

La composición de los gases de la vesícula gaseosa es la misma que


la de los gases disueltos en agua.
El tamaño de los poros de la vesícula solo permite la entrada de gases
de menor tamaño que las moléculas de agua.
La concentración de los gases presentes en la vesícula está en
equilibrio con los gases disueltos en agua. Al estar confinadas en la
vesícula disminuyen la densidad celular.

Número de vesículas: pocas a cientos.


Función: permite al microorganismo colocarse en la zona más
adecuada:
- Intensidad de luz
- Presión de oxígeno
- Concentración de nutrientes
Están presentes en microorganismos metabólicamente muy distintos
pero que comparten un hábitat acuático.
Ejemplos: bacterias fotótrofas (D. Bacteria), halobacterias (Dominio
Arquea), clostridios (D. Bacteria).
• Clorosomas = vesículas de Chlorobium.

- Presentes en bacterias fotosintéticas.


- Aparato fotosintético no integrado en la membrana, sino en
vesículas adosadas a la membrana.

• Carboxisomas.

- Inclusiones celulares en las cuales se da la fijación de CO2 a


partir del ciclo de Calvin. Presencia del enzima Rubisco = ribulosa
bifosfato carboxilasa.
- Tamaño de 100nm de diámetro.
- Forma de incrementar la Rubisco à mayor fijación de CO2 sin
afectar a la presión osmótica del citoplasma. El carboxisoma es
insoluble.

(Rubisco)

Siempre que el contenido esté en una estructura cerrada, no afecta a la


presión osmótica.

• Magnetosoma.

- Ciertas bacterias en presencia de un débil campo magnético se


orientan hacia uno de sus polos (de la Tierra).
- Tienen 40-100 nm y contienen: ferromagnetita (O4Fe3), greigita
(S4Fe3), pirita(S2Fe).
- Los magnetosomas orientan a las bacterias en un campo
magnético determinando hacia donde deben nadar à hacia el
fondo. Implican la presencia de flagelos. Ej.: columna de
sedimento.
Columna de sedimento: zona anóxica (el fondo del mar) y zona óxica
(superficie) y si mueves la arena, esta se va a la superficie junto con las
bacterias, que requieren de la zona anóxica y vuelven a desplazarse
hasta el fondo.

- No es un proceso de atracción aleatorio, las bacterias muertas no


migran (porque si está muerta, los flagelos no se mueven).
- Las bacterias que crecen en bajas concentraciones de hierro no
son magnetotácticas.

Hay magnetosomas en las cabezas de las aves, atunes, delfines,


tortugas verdes y otros animales que le ayudan a su orientación.

• Material de reserva:

- Introducción: ciertas bacterias almacenan sustancias de reserva


formando inclusiones de tipo granular (sustancias de reserva:
polisacáridos, grasas, polifosfatos, azufre).
- Se encuentran bajo una forma osmóticamente inactiva
(compuestos insolubles en agua). En condiciones de necesidad se
usan como fuente de carbono y energía, con la finalidad de
prolongar la vida.
- Por lo general una especie dada solo forma un tipo de material de
reserva.

• Polisacáridos: almidón, glucógenos (procariotas y eucariotas).


• Poli-b-hidroxibutirato (PHB), poliéster (procariotas).

• Gránulos de Cianoficina: son polímeros de arginina y ácido


aspártico.
• Gránulos de Polifosfatos: son polímeros de ortofosfato de distinta
longitud.

• Inclusiones de azufre: Azufre reducido, no oxidado para obtener


energía.

En lugar de hacer la fotosíntesis oxigénica con H2O, se hace la


anoxigénica con H2S.
Fotosíntesis Fotosíntesis
oxigénica anoxigénica

Bacterias no fotosintéticas: Beggiatoa, Thiotrix.

• Ceras: esteres grasos de cadena larga.

• Cristales paraesporales:

Cristales romboidales (bipiramidales) y son tóxicos. Actúan como


protoxina que se disuelve en el intestino de los insectos en la fase
larvaria. Se usa como insecticida que mata a la procesionaria en fase
larvaria. Se ha clonado la proteína. Bacillus thuringiensis tienen estos
cristales.
TEMA 6. Motilidad bacteriana.

Muchas bacterias son móviles.


La estructura de los mecanismos de motilidad son distintos a los de las
eucariotas.
La flagelación es una característica con un valor taxonómico y
antigénico (Antígenos H, “Hauch”).

Denominación de los flagelos:

Excepciones

Los flagelos son filamentos helicoidales impulsados por un motor de


rotación localizado en la membrana citoplasmática. Actúa como
impulsor (hélice de un barco) y empuja a la bacteria a través del medio.
Velocidad de rotación: 3000rpm-16000rpm

Tamaño Velocidad relativa Velocidad absoluta


(desplazamiento de un
cuerpo)
Bacteria (3um) 500x 1,6mm/min
Hombre (1,70m) 500x --¿? km/h
Bacteria 0.00017km/h=50-60 x longitud cuerpo/segundo.

Estructura:
- 1 filamento helicoidal.
- Largos hasta x10 de la longitud de la bacteria
- Finos à 12-18nm.
- Constituidos por la proteína denominada Flagelina = pm 51.000
que se ordena helicoidalmente alrededor del hueco (eje).

Partes:
- Filamento helicoidal (Flagelina).
- Gancho cerca de la superficie.
- Cuerpo basal.

Gram - Gram +
L membrana externa + -
Tipos de a P pared + -
anillos S-M membrana + +
citoplasmática.
- Se conocen 50 proteínas que intervienen en el proceso de la
motilidad.
- Los genes mejor conocidos son los: fla, fli, flg.Mot A, Mot B.
- Funciones:
a) Proteínas estructurales del aparato flagelar
b) Transporte de los componentes flagelares a través de la
membrana al exterior de la célula.
c) Procesos bioquímicos asociados a la síntesis de nuevos flagelos.

Si se rompe un flagelo se regenera. ¿Cómo?


a) Viaja la Flegelina por el hueco hacia el exterior.
b) Crece el flagelo desde su base
La respuesta es la opción A.

Quimiotactismos y motilidad.

Cuando llega una molécula tiene que interactuar con la proteína MCP,
que se puede auto fosforilar. Che= quimiotaxis. Según como actúe
CheY, si está fosforilada o no, el flagelo girará hacia un sentido o hacia
el otro.
- Los atrayentes son moléculas sencillas formadas por azúcares o
aminoácidos.
- Se conocen 40 receptores diferentes para estas sustancias como
el oxígeno, glucosa, maltosa, serina, aspartato, ribosa, galactosa,
maltosa, glicina, indol.
- Un receptor puede unir otras moléculas en un gradiente de
afinidad decreciente. Si en el medio solo hay aspartato, no hay
problema, si hay Asp. y glutamato, cogería primero el Asp.

L-aspartato> L-glutamato> L-metionina


- Necesitan ser transportados: glucosa y maltosa. Se unen
directamente a la proteína receptora (binding protein): Asp y Ser.
Proteína receptora: proteína Quimiotáctica.
Aceptora de Metilos = Methyl accepting chemotaxis proteins
“MCP” en la membrana citoplasmática.

Nivel atrayente alto:


El atrayente metila a MCP lo que provoca un nivel de fosforilación bajo
y por ello hay movimiento flagelar sin cambio de rotación (CCW).
Los atrayentes disminuyen la velocidad de autofoforilación y los
repelentes la aumentan.
Si cheY no se fosforila (nivel de fosforilación bajo), no se une al motor
flagelar y este sigue girando CCW (nadando).

· Sistemas de reguladores de dos componentes:


1) Proteína/s sensora/s (MCP+CheW).
2) Proteína reguladora de la respuesta (CheY).

· Motilidad espiroquetas (Gram -).

Los flagelos se encuentran dentro.


- Poseen un filamento axial que es una ultraestructura igual que la
de los flagelos, pero rodeados de una vaina proteica. Cada
filamento puede tener de 2 a 100 flagelos.
- Estos filamentos se insertan encada uno de los polos del
microorganismo y se superponen en el centro.

- La vaina está ubicada entre el peptidoglucano y la membrana


externa.

- El tipo de movimiento es el de rotación a lo largo de une eje


longitudinal asociado a movimiento de contracción. Es más
eficiente que el de los flagelos en medios viscosos, fangos,
membranas mucosas (Threponema pallidum causante del sífilis).

· Bacterias deslizantes.
- No se distinguen órganos locomotores.
- Se requiere contacto con sustrato sólido.
Ej.: Mixococcus: secreción de una sustancia surfactante (tenso
activo) (polisacárido) que afecta a la tensión superficial entre la
célula y la superficie sólida, por una estructura semejante a un
inyector.
La tasa de excreción de los polisacáridos es similar a la velocidad de
desplazamiento. El movimiento es en el sentido opuesto al de la
salida del mucílago (si está en un polo). También hay bacterias con
inyectores en dos polos. A este proceso se le llama motilidad
aventurera.

- Citophaga: las proteínas se desplazan unas sobre otras,


utilizando energía. Presencia de pequeñas partículas que podrían
actuar como cojinete de bolas en miniatura y girar a expensas de
un potencial de membrana o ATP, este movimiento rodante
desplazaría a la célula a lo largo de una superficie sólida.
(PREGUNTA DE EXAMEN).

- Movimiento de colonias: coordinación del movimiento flagelar en


todos los miembros de la colonia. Ej.: Proteus vulgaris. Cuando
pones a esa bacteria en un cultivo, al pasar 48h, se desplazarían
las colonias del lugar original.

TEMA 7. ESPORULACIÓN.
(insertar iPad)
Las bacterias se dividen en dos células vegetativas. Sin embargo,
algunas bacterias presentan 1 célula no vegetativa que se encuentran
en un estado de reposo (criptobiosis). Son muy resistentes a factores
ambientales durante largos lapsos de tiempo.
Entran en el estado de reposo cuando las condiciones ambientales no
son favorables.

Las ventajas son la supervivencia ante la falta de nutrientes.


Se forman al final de la fase exponencial de crecimiento (fase óptima de
crecimiento).

(insertar iPad)

Tipos de formas de resistencia:


Grupo Nombre
Actinomicetes Exoesporas
Mixobacterias Mixoesporas
Azotobacter Cistos
Bdellovibrio Bdellocistos
Anabaena Esporas
Bacillus Endoesporas
Clostridium y otros

Endoesporas: Gram + son aeróbicos obligados o aeróbicos facultativos.


Géneros bacterianos: Bacillus, Clostridium, Sporolabacillus.
Todos comparten %Guanina/Citosina (%C+G) bajo = 22-27%
Su hábitat mayoritariamente es el suelo.
Hay algunos que son patógenos como el Clostridium botulinum
(Botulismo) y el Clostridium tetani (Tétanos).
Características de las endoesporas:
- Resistentes al calor (termoresistentes). Sus condiciones de
esterilización en autoclave es de 121º- 1,2 Atm – 20 min
- Resistentes a radiaciones ultravioleta e ionizantes
- Resistentes a productos químicos. Reconocimiento en
microscopio ópticoà refringentes.

Formación de esporulación:

Dura entre 8-10h y es el proceso de


morfogénesis más complicado en
bacteriología ya que el paso de
célula vegetativa a espora no es un
estadio obligado del ciclo celular.
Los conocimientos se basan en los
resultados de la observación M.O y
M.E y se reseñan por fases (I-VII).

- Fase 0: al finalizar la fase activa de crecimiento, cada célula tiene


dos cuerpos cromatínicos.
- Fase I: formación del filamento axial (DNA).
- Fase II: formación de un septo transversal (septum). Nos
quedamos con una copia de DNA. (Aquí se añade glucosa si se
quiere revertir el ciclo).
- Fase III: la membrana de la célula mayor recubre a la menor
formando la prespora. En el M.O la zona clara no refringente
representa un estadio IRREVERSIBLE. (PREGUNTA DE EXAMEN)
- Fase IV: síntesis y deposición de estructuras. Córtex entre las dos
membranas.
- Fase V: por encima de la membrana más externa aparecen unas
envueltas concéntricas de multiláminas de proteínas
denominadas: cutícula externa (“spore coat”).
- Empieza a ser refringente, pero todavía no es resistente al calor.
TEMA 11: GENÉTICA BACTERIANA.

Los plásmidos son replicones sin genes esenciales, moléculas que se


puede replicar.
En las bacterias hay replicones: cromosoma y plásmido. Todo lo que
no es cromosoma y se puede replicar es plásmido.
Cromosoma: replicón que tiene genes esenciales

· Gen esencial: aquel que es imprescindible para la vida de un


organismo sea cual sea el ambiente en el que tiene que desarrollarse.
· Gen no esencial: aquel que en una determinada circunstancia no es
necesario desarrollarse.

Terminación transcripcional: Rho independiente y Rho dependiente.

La proteína Rho independiente se ancla al dominio que reconoce al


mRNA que se ha creado. Evita que la RNA polimerasa siga sintetizando
RNA.
La dependiente necesita ATP, energía, es un proceso costoso.
La regulación transcripcional, regulando que un RNA se transcriba o
no.
Y la regulación traducional, donde, por ejemplo, el enzima que hace
una cosa, pasa a hacer otra.
Control negativo de la transcripción: represión e inducción.

Control negativo: la interacción proteína.DNA bloquea la


transcripción. Los efectores: moléculas represoras o inductoras.
Estamos hablando de reguladores específicos de la transcripción,
para ser funcional, tiene que interaccionar con los efectores,
produciendo cambios conformacionales produciendo el anclaje.
El que interacciona con el DNA y la que interacciona con el efector.

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