Propuesta Formato Manual Practicas Cinética

Departamento de Ingeniería Química y
Bioquímica
MANUAL DE PRÁCTICAS PARA

CINÉTICA QUÍMICA Y BIOLÓGICA
(BQF 1005)
AUTORES:
WENDY NETZY HERNÁNDEZ DÍAZ, LEONOR ZAVALETA AVEJAR

Y FRANCISCO JAVIER HERNÁNDEZ CAMPOS.
ZACATEPEC, MORELOS, DICIEMBRE 2021

OBJETIVO DEL MANUAL:
Comprender y utilizar los métodos y técnicas experimentales más relevantes para
el estudio cinético de las reacciones químicas y biológicas.
ÍNDICE
Pág.
Abreviaturas y Símbolos _________________________________________ 3
La importancia de la seguridad e
4
higiene al realizar prácticas _________________________________________
Práctica 1. Objetivo: Utilizar el método integral para

Determinación del orden determinar el órden de
8
De reacción reacción._______________________________________
Práctica 2. Objetivo: Establecer el orden de reacción a

Cinética de reacción entre partir del tiempo de vida
12
Fenolftaleína e hidróxido de media.__________________________________
sodio
Abreviaturas y Símbolos
I
https://www.pinterest.com.mx/pin/759489924644333067/
LA IMPORTANCIA DE LA SEGURIDAD E
HIGIENE AL REALIZAR PRÁCTICAS
(REGLAMENTO, CLASIFICACIÓN
Y MANEJO DE RESIDUOS y EVALUACIÓN).
Reglamento
El laboratorio es un lugar potencialmente peligroso si no se siguen las normas generales de seguridad

que se recomiendan a continuación:
1. Es obligación del alumno revisar LAS HOJAS DE SEGURIDAD, antes de realizar la actividad
experimental, para conocer las propiedades físicas, químicas y toxicológicas de las sustancias que
se utilizan, así como tener conocimiento de su uso, manejo y almacenamiento
(https://quimica.unam.mx/proteccion-civil-facultad-quimica/hojas-de-seguridad/).
2. Se recomienda que el alumno trabaje en el laboratorio solo cuando su profesor o persona
responsable de dicho laboratorio este presente, con el propósito de tener una persona que
supervise posibles riesgos y ayude en caso necesario. En caso de emergencia consultar
acciones.de emergencia o primeros auxilios en LAS HOJAS DE SEGURIDAD.
3. Son requisitos indispensables para el trabajo experimental:
4. Bata (obligatorio).
5. Uso de zapato cerrado de piel, NO tennis, NO tacones, de preferencia bota.
6. Lentes de protección y guantes (opcional), uñas cortas.
7. Aquellos estudiantes que usan lentes de contacto, deberán usar espejuelos de protección de
forma obligatoria o traer anteojos el día de la actividad experimental.
8. Es obligación del alumno revisar en LAS HOJAS DE SEGURIDAD de los reactivos y/o productos
con los que vaya a trabajar, el equipo de protección personal que debe usar en cada sesión
experimental.
9. Prohibido fumar, ya que un descuido puede ocasionar una explosión; por lo general se
encuentran en el ambiente vapores de sustancias volátiles y de bajo punto de flamabilidad .
10. Prohibido encender cerillos o mecheros, a excepción de que así lo requiera la sesión
experimental.
11. El lugar de trabajo debe estar despejado de libros, mochilas, prendas, etc.; sólo estarán el equipo y
las sustancias que se van a usar en el experimento, el manual de prácticas, calculadora y un
cuaderno de anotaciones (Bitácora de trabajo).
12. Prohibido consumir alimentos y bebidas en el laboratorio.
13. Se debe tener cuidado al manejar sustancias peligrosas como ácidos, álcalis, sales venenosas,
disolventes, etc. Deben de manipularse de preferencia en la campana con la protección del vidrio. En caso de
algún percance avisar inmediatamente al profesor.
14. Prohibido pipetear con la boca.
15. Al manejar equipos, materiales y reactivos, se debe ser cuidadoso en su traslado y conexión. Se
recomienda revisar el instructivo antes de la actividad experimental y preguntar al profesor las
dudas que se tengan sobre el particular.
16. La solicitud de los equipos, materiales y reactivos se realiza con el llenado del vale del laboratorioy
presentando la credencial otorgada por el TECNM.
17. Si se rompe o daña material y/o equipo, éste debe reintegrarse al laboratorio antes de concluir el
semestre.
El alumno tiene la obligación de estudiar las ORIENTACIONES ACERCA DEL TRATAMIENTOY
DISPOSICIÓN DE LOS RESIDUOS, con el propósito de saber qué hacer con los residuos o
desechos producidos en cada sesión experimental. Los residuos de los experimentos que deban
almacenarse, deben ser depositados en los recipientes etiquetados que le indique el profesor.Tenga
cuidado de no confundirse y no mezclar.
Una vez terminada la sesión experimental, el alumno deberá dejar limpio su lugar de trabajo y
asegurarse de no dejar basura en las tarjas de las mesas de trabajo ni en las de lavado de material. Cada
equipo debe de llevar su propio material de limpieza (jabón, franela, fibra o esponja, etc).
El alumno debe lavarse las manos con agua y jabón antes de salir del laboratorio.
Clasificación de los residuos en función del tratamiento
Los residuos se clasificarán con base a su disposición como: residuos que requieren tratamiento,
reutilizables y agua o disolventes acuosos con solutos biodegradables, de acuerdo a los colores
en la tabla siguiente:
Tabla 1. Codificación en función del tipo de residuo
Tipo de residuo Abreviación
Residuos que requieren T
tratamiento
Residuos reutilizables R
Agua o Disolventes B
acuosos con solutos
biodegradables o
biotransformables
Dentro de los Residuos que requieren Tratamiento se utiliza la siguiente simbología:

C, corrosivo, R, reactivo, E, explosivo, T, tóxico, Te, tóxico ambiental, Th, tóxico agudo,
Tt, tóxico crónico, I, inflamable, B, biológico infeccioso, de acuerdo a la norma oficial
mexicana, NOM-052-SEMARNAT-2005. Cuando describa un residuo peligroso que no
se encuentre listado en la norma oficial mencionada deberá indicar su CPR de
acuerdo a la manifestación por conocimiento científico o evidencia empírica.
EVALUACIÓN
Se evaluará tanto el reporte de práctica como la conducta del alumno durante el

desarrollo de la misma, y para ello se utilizarán los siguientes instrumentos:
Lista de Cotejo de la práctica

Parámetros Respuesta del Alumno
¿Leiste la práctica antes?
¿Trajiste tu bata, calzado y material de seguridad
necesario?
¿Recuerdas el reglamento del Laboratorio?
¿Llenaste y metiste tu vale de material y reactivos a
tiempo?
¿Traes tu bitacora para abotar todas las observaciones del
experimento?
¿Realizaste las actividades previas señaladas en la
práctica?
Rúbrica de evaluación
Criterios Excelente Bueno Deficiente
100-86 85-70 Menos de 70
Seguridad general Se realizó la práctica Se realizó la práctica Los procedimientos de
con atención a todos con atención a la seguridad fueron
los procedimientos de mayoría de los ignorados.
seguridad. procedimientos de
seguridad.
Dominio de conceptos Domina todos los Domina la mayoría de No domina los
conceptos los conceptos conceptos
relacionados con el relacionados con el relacionados con la
tema de la práctica tema de la práctica práctica.
Análisis de resultados Utilizó la observación y Describió lo observado No da una descripción
y conclusión sus conocimientos de pero no relaciona esto ni una explicación
Cinética Química y con sus coherente de los
Biológica para conocimientos de resultados obtenidos
formular una Cinética Química y en la práctica.
explicación coherente Biológica para
de los resultados formular una
obtenidos en la explicación coherente
práctica. de los resultados
obtenidos en la
práctica.
Informe de Resultados En el reporte incluye En el reporte incluye La práctica no
Objetivo, fundamento Objetivo, fundamento presenta los
teórico, metodología, teórico, metodología, elementos solicitados.
materiales y equipo, la materiales y equipo, la
tablas y gráficas tablas y gráficas
solicitadas en la solicitadas en la
práctica, discusión de práctica, discusión de
resultados, conclusión, resultados, conclusión,
bibliografía y bibliografía pero le
actividades faltan las actividades
complementarias. complementarias.
http://portal.cuautitlan.unam.mx/manuales/CineticaQuimicaAplicandoPrincipiosQV.pdf
PRÁCTICA 1.
DETERMINACIÓN DEL ORDEN
DE REACCIÓN
COMPETENCIA A DESARROLLAR
Comprende los tipos de reacciones químicas. Aplica diferentes métodos para
determinar el orden de una reacción.
TEMAS RELACIONADOS
Equilibrio Químico y Cinética Química, especificamente el método integral para obtener
la ecuación de velocidad de reacción.
INTRODUCCIÓN
La velocidad de hidrólisis del acetato de etilo varia de acuerdo con las diferentes condiciones
de pH presentes en el medio. Cuando la reacción se lleva a cabo en una disolución acuosa de
hidróxido de sodio, los productos generados son acetato de sodio y etanol. El pH de la reacción
depende de la concentración del hidróxido de sodio. A tiempo cero de reacción, el pH lo
determina el NaOH por ser una base fuerte y estar en mayor concentración que el acetato de
sodio. Por tanto si la reacción se sigue en un grado de avance menor al 50%, el pH nos indicará
si queda NaOH sin reaccionar1.
Para conocer el orden de una reacción por ejemplo de A à P, se puede utilizar el método
integral gráfico, este método consiste en dos opciones:
Trazar graficos de concentración del reactante A vs tiempo (orden cero), ln [A] vs tiempo(orden
uno) y 1/[A] vs tiempo (orden dos). Ver Tabla 1.1.
Trazar los gráficos de las funciones obtenidas de la integración de las leyes de velocidad
en función del tiempo (Tabla 1.1), en donde x es la concentración del reactante que ha
reaccionado a tiempo t.
En ambos casos, realizar una regresión lineal y la función que tenga el valor de r2 más cercano
a 1, será el orden de reacción que mejor represente la conducta experimental.
Tabla 1.1 Ecuaciones de velocidad para el método integral2.3.4.

Orden Ecuación Forma Forma integrada en Gráfica
cinética integrada en función de [OH-]
función de
CA
0 𝒅𝑪𝑨 𝑪𝑨𝟎 − 𝑪𝑨 = 𝒌. 𝒕 [𝑶𝑯" ]𝟎 − [𝑶𝑯" ]𝒕 = 𝒌. 𝒕
=𝒌
𝒅𝒕
1 𝒅𝑪𝑨 𝑪𝑨𝟎 [𝑶𝑯" ]𝟎

= 𝒌𝑪𝑨 𝑳𝒏 / 0 = 𝒌. 𝒕 𝑳𝒏 1 2 = 𝒌. 𝒕
𝒅𝒕 𝑪𝑨 [𝑶𝑯" ]𝒕
2 𝒅𝑪𝑨 𝟏 𝟏 𝟏 𝟏
= 𝒌𝑪𝑨𝟐 − = 𝒌. 𝒕 − = 𝒌. 𝒕
𝒅𝒕 𝑪𝑨 𝑪𝑨𝟎 [𝑶𝑯" ]𝒕 [𝑶𝑯" ]𝟎
OBJETIVOS
• Utilizar el método integral para determinar el órden de reacción.
PROBLEMA INTEGRADOR
• Estudiar el mecanismo de la hidrólisis básica del acetato de etilo
• Seguir el avance de reacción a través de la medición del pH.
ACTIVIDADES PREVIAS AL EXPERIMENTO

• Investigar cómo se realiza el cálculo de pH de bases fuertes y de fuerza media.
• Estudiar el método integral.
• Averiguar los mecanismos de reacción para la hidrólisis básica de esteres.
• Revisar en las hojas de seguridad las propiedades químicas, físicas y toxicológicas de
reactantes y productos.
EQUIPOS, REACTIVOS, MATERIALES

MATERIAL EQUIPO REACTIVOS
Por equipo: Por equipo: Por equipo:
1 Potenciómetro con 5 mL de disolución 0.2 M de
1 Potenciómetro con electrodo 5 mL de disolución 0.2 M dehidróxido
1 Tubo de ensaye de 150 electrodo de vidrio hidróxidodede sodio
sodio
de vidrio
mm por 20 mm 1 Parrilla con agitación 5 mL5 mL
dede
disolución
disolución 0.20.2M deM de
acetato
1 Parrilla con agitación
1 Soporte universal con 2 magnética magnética
acetato de etilo.
de etilo, recién preparada
pinzas 1 Termóstato
1 Cronómetro
2 Pipetas volumétricas de 5
mL
2 Vasos de precipitados de
10 mL
1 Piseta
1 Barra de agitación
magnética
1 Termómetro
METODOLOGÍA
1. En el tubo de ensayo perfectamente limpio y seco, colocar una barra de agitación
magnética yadicione 5 mL de disolución de NaOH 0.2 M. Introducir el tubo en un
termóstato a temperatura ambiente y fije el tubo al soporte universal (Figura 1.2).
2. Medir con pipeta volumétrica 5 mL de acetato de etilo y vacíe en un vaso de pp de
10 mL,agregar rápidamente la disolución medida de acetato de etilo al tubo de ensayo
y poner en marcha el cronómetro en el momento en que ha sido agregada la mitad de
la disolución de acetato de etilo. Inmediatamente introduzca el electrodo al tubo.
3. Medir de pH para la reacción a los siguientes tiempos: 1, 1.5, 2, 3, 5, 12,16, 18 y 20 min.

Figura 1.2.- Montaje experimental de la reacción de hidrólisis de acetato de etilo1.
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Guarde los residuos en frasco utilizando las etiquetas del laboratorio, en la siguiente sesión la
reacción se habrá llevado a cabo al 100%. Los residuos son biodegradables y no tóxicos.
Depositarlos en la tarja1.
TABLAS DE RESULTADOS EXPERIMENTALES
1. Colocar lo datos de pH en función del tiempo (Tabla 1.2).
Tabla 1.2 Resultados de pH en función del tiempo de reacción

TIEMPO (min) pH TIEMPO (min) pH
1 12
2 16
3 18
5 20
ELABORACIÓN DEL REPORTE

1. En una hoja de cálculo o en papel milimétrico, elaborar un gráfico de pH en función del
tiempo. Ajuste a una ecuación polinómica y determine el pH a tiempo cero.
2. Plantear la ecuación cinética de la reacción.
3. Desarrollar la tabla de cantidades molares de reacción a tiempo cero y tiempo t.
4. Calcular la concentración de hidróxido de sodio a los tiempos indicados en la tabla de
resultados 1.3.
Tabla 1.3 Cálculo de la concentración remanente de hidróxido de sodio
TIEMPO pH pOH
(min)
10
12
18
20
5. Trace los gráficos de [OH-], ln [OH-] y 1/[OH-] vs tiempo. Realice una regresión lineal a los
gráficos anteriores y determinar el orden de reacción.
6. De acuerdo a la tabla de cantidades molares, calcule la concentración de hidróxido en la
tabla siguiente:
Tabla 1.4 Datos para la determinación del orden de reacción
TIEMPO
(min)
0
1
2
3
5
7
10
16
18
20
7. Determine el orden de reacción por el método integral, utilizando los resultados de la
tabla anterior.
8. Con base al mecanismo de reacción reportado en la bibliografía y a sus resultados de
orden de reacción, ¿por qué se puede considerar la hidrólisis del acetato de etilo como
una reacciónelemental?
9. Discuta sus resultados y concluya
ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS
• Investiga qué proceso industrial utiliza la hidrólisis de ésteres de ácidos grasos por
hidróxido de sodio.
• El metóxido de sodio también hidroliza esterés de ácidos grasos, ¿En qué proceso se
aplica?
BIBLIOGRAFÍA
1. http://portal.cuautitlan.unam.mx/manuales/CineticaQuimicaAplicand
oPrincipiosQV.pdf
2. Vargas, M. & Obaya, A. (2005). Cálculo de parámetros de rapidez en cinética química y
enzimática.
3. Lee, J.M. (1992). Biochemical Engineering. Prentice-Hall. 1ª Edición. Michigan, Estados
Unidos.
4. Fogler, S., Vicente, B, Nori, M. (2005). Elements of Chemical Reaction Engineering. Prentice-
Hall. 4a Edición. Pennsylvanya Estados Unidos
http://portal.cuautitlan.unam.mx/manuales/CineticaQuimicaAplicandoPrincipiosQV.pdf
PRÁCTICA 2.
CINÉTICA DE REACCIÓN ENTRE
FENOLFTALEÍNA E HIDRÓXIDO DE SODIO
Aplica diferentes métodos para determinar el orden de una reacción química y la
constante de velocidad.
TEMAS RELACIONADOS
Cinética Química, especificamente el método de vida media para obtener la ecuación de
velocidad de reacción.
INTRODUCCIÓN
La fenolftaleína es un indicador que a pH básico se decolara con una rapidez
fácilmente medible. La fenolftaleína presenta un máximo de absorbancia a 470 nm,
por lo tanto el avance de la reacción se determina tomando la lectura de absorbancia
en función del tiempo, asumiendo que se está trabajando en concentraciones tan
diluidas que se sigue la ley de Beer-Lambert. Este método tiene la ventaja de ser
directo y rápido.
La reacción entre Fenolftaleína (F) e hidróxido de sodio (Figura 2.1) La fenolftaleína a
pH< 8, es incolora1. Cuando el pH aumenta de 8 a 10, los protones fenólicos se
eliminan y se abre el anillo de lactona, entre 8.2-12 se forma una fenolftaleína
monosódica (FNa) de color rosa, a pH mayores de 12 reacciona con otra molécula de
hidróxido de sodio para formar una fenolftaleína disódica (FNa2) con una coloración
roja, la cual reacciona lentamente con otro molécula de hidróxido de sodio para
formar una fenolftaleína trisódica (FNa3) incolora (Figura 2.2 ).
El tiempo de vida media de una reacción se define como el tiempo en que reacciona
la mitad de la concentración inicial, este método consiste en trazar gráficos del
reactante que se esta consumiendo en función del tiempo y a partir de este,
determinar gráficamente el tiempo de vida media, a diversas concentraciones2.
Posteriormente, comparar los resultados con la tabla 2.1 y/o utilizar las ecuaciones
para orden “n”.
Figura 2.1 Reacción de fenolftaleína con hidróxido de sodio3.
Figura 2.2 Mecanismo de reacción de fenolftaleína en función de pH3.

Tabla 2.1. Características de las especies estables de la fenolftaleína1.
pH 0 0-8.2 8.2-9.7 9.8-12

Especie Carbocatión Lactona Fenolftaleina Fenolftaleina
Trifenilmeta
sódica disódica-
no
trisñodica
Condiciones Fuertement Ácidas o Básicas Fuertement
e ácida neutras e básicas
Color Naranja Incoloro Rosa-Rojo Rojo-
Incoloro
OBJETIVOS
• Establecer el orden de reacción a partir del tiempo de vida media.
PROBLEMA INTEGRADOR
• Estudiar la cinética de la decoloración de la fenolftaleína
• Determinar el grado de avance de reacción por medición espectrofotométrica
• Calcular el orden de reacción respecto a la fenolftaleína utilizando
directamente la absorbancia.
• Determinar el orden de reacción respecto al hidróxido de sodio a partir de la
constante de rapidez específica de pseudo orden.
Tabla 2.2. Ecuaciones para tiempo de vida media y fraccional.1,4,5
Tiempo Orden de reacción

de
vida
parcial
0 1 2 3 n
t 1/4
t 1/3
t 1/2
t 3/4

• Investigar el fundamento de cambio de color en los indicadores ácido base.
• Averiguar la relación entre el tiempo de vida media y orden de reacción.
• Revisar en las hojas de seguridad las propiedades químicas, físicas y
toxicológicas de reactantes y productos.
EQUIPOS, REACTIVOS Y MATERIALES

Material Equipo Reactivos
Por equipo Por equipo Por equipo
4 Vasos de 1 Parrilla con agitación 13 mL de disolución de
precipitados de 10 mL
magnética NaOH 1 M
2 Pipetas volumétrica
de 5 mL 3 mL disolución de
Micropipeta 50 μL
Por grupo NaCl 1 M
Espectrofotómetro 0.2 mL de disolución
UV-VIS con dos celdas alcohólica de
fenolftaleína al 2%
METODOLOGÍA
1. Preparar 25 ml solución de NaOH 1 M
2. Preparar 25 ml de solución de NaCl 1 M.
3. Preparar 25 ml de solución alcohólica de fenolftaleína al 2 %. Pesar 0.5 de
fenolftaleína y disolver en 25 ml de alcohol etílico al 96 %.
4. Etiquetar cuatro vasos de precipitados de 10 mL como I, II, III y IV, agregar a
cada uno de ellos la cantidad de NaOH y NaCl indicadas en la Tabla 2.3.
Tabla 2.3 Cantidad de NaOH y NaCl en el sistema A
Sistema ml de NaOH (1 M) ml de NaCl (1 M)

I 4 0
II 3.5 0.5
III 3.0 1.0
IV 2.5 1.5
5. Colocar al sistema I, una barra de agitación magnética y mantener en

agitación. Adicionar rápidamente a la mezcla del sistema I, 0.05 mL de
fenolftaleína (la reacción inicia en cuanto se hace la mezcla, por tanto accionar
el cronómetro), agitar dos segundos y vaciar en la celda del espectrofotómetro.
6. Transcurridos 10 s medir las absorbancias de la reacción a 460 nm cada 10 s
durante 300 s.
7. Tomar la temperatura de la mezcla de reacción.
8. Repetir el procedimiento para los sistemas II, III y IV.
TABLAS DE RESULTADOS
Anote las absorbancias medidas a cada tiempo de reacción, en la tabla 2.4.
Tabla 2.4 Medidas de absorbancia
Tiempo (s) I II III IV

10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
140
150
160
170
180
190
200
210
220
230
240
TRATAMIENTO Y DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Utilizar los residuos para neutralizar residuos ácidos o guarde cada sistema por
separado y reutilice al menos 10 veces, mida el pH cada vez que se reutilicen las
disoluciones para determinar la concentración exacta de cada una de las
disoluciones.
INSTRUCCIONES PARA LA ELABORACIÓN DEL REPORTE

1. Plantee la ecuación cinética de la reacción.
2. Trace los gráficos de absorbancia en función del tiempo, agregue una línea de
tendencia polinomial, para obtener una ecuación con una r2 lo más cercana al valor
de uno. A partir de la ecuación polinomial determine la absorbancia a tiempo cero.
3. Ajuste los gráficos con el dato de absorbancia cero, obtenida en el punto anterior.
4. Para el sistema I, mida directamente en el gráfico de absorbancia vs tiempo, el
tiempo de vida media a partir de absorbancia cero. Mida nuevamente el tiempo de
vida media a partir de un medio de la absorbancia cero.
5. Con base al resultado anterior, ¿de qué orden, es la reacción de decoloración de
fenolftaleína?
6. Calcule las contantes de pseudo orden de reacción para cada sistema.
7. A partir de las constantes de pseudo orden determine el orden respecto al
hidróxido de sodio y la constante de rapidez específica
8. Trace los gráficos de absorbancia vs tiempo, ln absorbancia vs tiempo y 1/A vs
tiempo y concluya acerca del orden de reacción.
9. Calcular la fuerza iónica de cada uno de los sistemas. ¿Todos los sistemas tienen la
misma fuerza iónica? Si no es así, cómo diseñaría el experimento para que todos los
sistemas tengan la misma la fuerza iónica?
10. Discutir sus resultados y concluir.
1. En el espectro visible ¿qué longitud de onda le corresponde aproximadamente a
cada color?
2. Explica la ley de Beer-Lambert para la absorción de la energía
3. ¿Qué precauciones generales experimentales en cuanto a determinar el tiempo y
el control de temperatura deben considerarse al estudiar la cinética de una reacción
química?
BIBLIOGRAFÍA
oPrincipiosQV.pdf
2. Vargas, M. & Obaya, A. (2005). Cálculo de parámetros de rapidez en cinética química y
enzimática.
3. Nicholson, L. (1989) Kinetics of the fading of phenolphtalein in alkaline solution.
J. Chem. Educ., 66 (2) 725-726.
4. Vargas, M. & Obaya A. (2005). Cálculo de parámetros de rapidez en cinética
química y enzimática. México: Universidad Nacional Autónoma de México.
Hall. 4a Edición. Pennsylvanya Estados Unidos.
http://portal.cuautitlan.unam.mx/manuales/CineticaQuimicaAplicandoPrincipiosQV.
pdf
PRÁCTICA NO. 3
YODACIÓN DE ACETONA
INTRODUCCIÓN
El incremento en la rapidez de una reacción química se logra por la adición de una

sustancia denominada catalizador. El catalizador interacciona con los reactantes
para formar un intermediario, que se regenera en etapas posteriores y al final de la
reacción permanece químicamente inalterado.
Cinéticamente, las reacciones catalíticas se comportan como las reacciones
químicas típicas, es decir, la velocidad de reacción depende de la frecuencia de
contacto de los reactivos en la etapa determinante de velocidad. normalmente, el
catalizador participa en esta etapa lenta, y las velocidades están limitadas por la
cantidad de catalizador.
En función del estado físico del catalizador en la mezcla de reacción, la catálisis se
clasifica en homogénea y heterogénea. Cuando el catalizador se encuentra en la
misma fase que los reactantes se define como catálisis homogénea. Dentro de la
catálisis homogénea se encuentra la catálisis ácido base.
La reacción de yodación de la acetona presenta una cinética lenta en condiciones
normales pero la reacción se acelera considerablemente en condiciones de catálisis
homogénea ácida o básica.
OBJETIVOS
COMPETENCIA ESPECÍFICA A DESARROLLAR
• Estudiar la catálisis homogénea ácido-base

• Determinar el grado de avance de reacción por medición espectrofotométrica.
• Aplicar el método de aislamiento de Ostwald
• Investigar cuál es la etapa lenta en el mecanismo de reacción de la yodación
de acetona y cómo influye en el orden de reacción de cada uno de los
reactantes.
PROBLEMA INTEGRADOR
Establecer los órdenes de reacción parcial de cada uno de los reactantes que
participan en la yodación de la acetona.
• Investigar qué es catálisis ácido base específica y catálisis ácido base general.
• Indagar qué tipo de gráficos se obtienen al graficar la constante de rapidez en
función del pH.
• Revisar el mecanismo de reacción de la halogenación de acetona en medio
ácido y en medio básico.
• Definir el desarrollo del método de aislamiento de Ostwald.
EQUIPO(S), REACTIVO(S), Y MATERIAL(ES)

EQUIPOS REACTIVOS MATERIALES
1 Parrilla con 3.5 mL de disolución 8 vasos de precipitado de
agitación de yodo 10 mL
magnética 0.002M* 4 pipetas graduada de 1
ml
Espectrofotómetro 2 mL acetona 2M 8 barritas magnéticas
VIS
3.5 mL de ácido 1 cronómetro
clorhídrico 2M
5 mL de agua destilada 1 Piseta
*Para una concentración de 0.002M se pesan 0.0506g de I2 y 0.1603g de KI aforándose
a 100 mL.
METODOLOGÍA
1. Etiquetar cinco vasos de precipitados de 10 mL como sistema IA, IIA, IIIA, IVA y
VA, agregar a cada uno de ellos la cantidad solución de acetona, ácido
clorhídrico y cloruro de sodio indicadas en la Tabla 3.1 . Mantener en agitación,
al menos 10 minutos.
Tabla 3.1 ml presentes en el sistema A
Sistema A ml de acetona 2 M ml de HCl 1 M Ml de NaCl 1 M

IA 1.0 0.5 0.5
IIA 1.0 1.0 0.0
IIIA 0.5 1.0 0.5
IVA 0.5 1.0 0.5
VA 0.5 1.5 0
2. Etiquetar cinco vasos de precipitados de 10 mL como sistema IB, IIB, IIIB, IVB y
VB, agregar a cada uno de ellos la cantidad de solución de yodo y agua
indicados en la tabla 3.2.
Tabla 3.2 ml presentes en el sistema B
Sistema B Yodo (0.002) H20
IB 1.0 1.0
IIB 1.0 1.0
IIIB 1.0 1.0
IVB 0.5 1.5
VB 1.0 1.0
3. Agregar rápidamente la mezcla del sistema IB en la del sistema IA, (la reacción
inicia en cuanto se hace la mezcla, por tanto accionar el cronómetro), agitar
durante 2 segundos y vaciar en la celda del espectrofotómetro.
4. Medir las absorbancias de la reacción a 460 nm cada 30 s durante 5 min.
5. Tomar la lectura de temperatura de la mezcla de reacción.
6. Repetir el procedimiento para los sistemas II, III y IV.
TABLA DE RESULTADOS
Anotar las absorbancias medidas a cada tiempo de reacción.
Tabla 3.3 Resultados de absorbancia para los sistemas I-V
Tiempo I II III IV V
(s)
0
30
60
90
120
150
180
210
240
270
300
TRATAMIENTO Y DISPOSICIÓN DE RESIDUOS

Neutralizar con el NaOH hasta pH 7, guardar en frasco etiquetado.
INSTRUCCIONES PARA LA ELABORACIÓN DEL REPORTE

1. Plantear la ecuación cinética de la reacción de la yodación de acetona.
2. Calcular las concentraciones iniciales de cada componente en los sistemas I-
IV.
3. Determinar la fuerza iónica de cada una de las mezclas de reacción.
Tabla 3.4 Tabla de fuerza iónica.
Sistema [CH3COCH [HCl]o [I2]o ro pH Fuerza

iónica
3]o
I
II
III
IV
V
4. Elaborar la tabla de cantidades molares y determinar a partir de los valores de

absorbancia la concentración a tiempo t.
5. Trazar los gráficos de concentración en función de tiempo para cada sistema
6. Determinar la rapidez inicial de cada sistema.
7. Calcular la constante de rapidez catalítica para cada sistema y realizar un grafico
de constante catalítica vs pH. ¿Qué relación observa?
8. ¿Qué parámetros se deben modificar para incrementar la rapidez de la reacción?
9. ¿Cómo afectan la fuerza iónica en el experimento?
10. Concluir acerca del experimento
Calcular la disminución de la energía de activación por un catalizador para triplicar
la rapidez de reacción a 300 K.
BIBLIOGRAFÍA
1. Birk, J. P & Walters, D. L. (1979) Three methods for studying the kinetics of the
halogenation of acetone, J. Chem. Educ. 69, 585-587.
2. Obaya, A., Vargas-Rodríguez, Y. M. (2011) La Enseñanza Experimental de la
Química desde una
3. Perspectiva Interdisciplinaria y Ecológica En Química Verde Experimental (27-
34). México. Universidad Nacional Autónoma de México.
4. Smith, M. B. & March, J. (2007) March’s Advanced organic chemistry: Reactions,
Mechanisms, and Structure (6th Ed.). Hoboken, New Jersey: John Wiley & Sons,
Inc.
5. Vargas, M & Obaya, A. (2011). Cinética Química y Catálisis Verde. En Química
Verde Experimental (pp. 189-215). México: Universidad Nacional Autónoma de
México.
6. Vargas, M. & Obaya, A. (2005). Cálculo de parámetros de rapidez en cinética
química y enzimática. México: Universidad Nacional Autónoma de México.
7. Vargas, R. Y. M.; Obaya, V. A. E.; Vargas, R. G. I.; Rodríguez, P. A. (2013). Cinética
Química Aplicando los principios de la química verde (actividades
experimentales para química industrial). Universidad Nacional Autónoma de
México.
oPrincipiosQV.pdf
https://www.pinterest.com.mx/pin/361976888794975715/
PRÁCTICA 4.
DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS DE LA
ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN Y EFECTO DE LA
CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO
INTRODUCCIÓN
Las enzimas enzimas son catalizadores biológicos de naturaleza proteica, que poseen una alta
especificidad a su sustrato. Debido a que su actividad catalítica depende de su estructura la
velocidad de consumo de ese sustrato (-rs) o de formación del producto (rP) depende de la
temperatura, el pH, la concentración del sustrato, la concentración de la enzima, presencia de
inhibidores, etc. La ecuación de Michaelis-Menten nos permite evaluar el comportamiento
cinético de las enzimas para una temperatura y pH constantes (ver ec. 1):
(1)
Los parámetros de la ecuación de Michaelis-Menten nos permiten conocer la afinidad de la

enzima por su sustrato (kM), el número de moléculas de sustrato convertidas en producto por
molécula de enzima (kcat) en condiciones de saturación de sustrato y el valor máximo de rP
cuando todos los sitios activos están ocupados por el sustrato (rmax). Estos parámetros son muy
importantes para el diseño de reactores enzimáticos y para la selección de la enzima para
determinado proceso. Para determinar estos parámetros podemos valernos de las
linearizaciones mostradas en la siguiente tabla:
Tabla 4.1 Linearizaciones de la ecuación de Michaelis-Menten.
Propuesta por: Ecuación Gráfica
Langmuir
Lineweaver-Burk
Eadie-Hofstee
En la siguiente práctica evaluaremos los parámetros de la ecuación de Michaelis-

Menten para la enzima invertasa que cataliza la hidrólisis de la sacarosa.
OBJETIVOS
• Estudiar el mecanismo de la hidrólisis de la sacarosa.
• Calcular los valores de KM y rmax para la hidrólisis de sacarosa por las 3 dieferentes
linearizaciones.
Evaluar los parámetros cinéticos de la ecuación de Michaelis-Menten.
PROBLEMA INTEGRADOR
Evaluar los parámetros cinéticos de la enzima invertasa y. el efecto de altas concentraciones de
sustrato sobre la velocidad de reacción.

• Investigar los mecanismos de biocatálisis y la cuantificación de azúcares
reductores por el método de DNS.
• Leer el instructivo de uso del espectrofotómetros de UV-Visible.
• Preparar los reactivos de DNS, invertasa, glucosa, sacarosa y el amortiguador de pH
7.
• Realizar la curva estándar de glucosa.
reactivos y productos.

1 Balanza analítica. Reactivo de DNS (ácido
16 Tubos de ensaye de 150 1 espectrofotómetro UV- 3,5-dinitrosalisílico).
de sodio
de vidrio
mm por 20 mm Visible. Tartrato de Sodio0.2y MPotasio
5 mL de disolución de acetato
1 gradilla. 2 termobaños.
magnética
tetra hidratado
de etilo, recién preparada
1 Cronómetro 1 parrilla de (KNaC4H4O6.4H2O)
5 Pipetas volumétricas de 5 calentamiento con Invertasa.
mL agitación magnética. Glucosa.
2 Vasos de precipitados de 1 agitador magnético. Sacarosa.
500 mL 1 vortex. para la preparación de las
4 Vasos de precipitados de soluciones amortiguadoras
50 mL de pH 7 al 0.05 M se
1 Piseta requieren:
1 Barra de agitación CH3COOH
magnética CH3COONa
2 Termómetros H3PO4
3 matraces volumétricos KH2PO4
de 1000 mL. K2HPO4.3H2O
1 agitador de vidrio
METODOLOGÍA
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
Reactivo de DNS
Calentar 200 mL de agua en la parrilla hasta alcanzar los 45ºC (verificar con el
termómetro) se añade el agitador magnético y se ajusta la velocidad de agitación
media de la parrilla. Posteriormente se adicionan 150 g de tartrato de sodio y potasio
tetra hidratado y 5 g de DNS (ácido 3,5-dinitrosalisílico). Esta mezcla se afora a 500
mL con agua destilada y se almacena en un frasco ámbar a 4°C.
Solución Amortiguadora de Fosfatos pH 7

Solución A: Pesar 9.5 g de fosfato sódico dibásico agregar a un vaso de precipitado y
añadir una pequeña cantidad de agua destilada, agitar con el agitador de vidrio
hasta disolver. Una vez disuelta la sal verter el contenido en un matraz volumétrico
de 1 L y agregar agua hasta aforar. Mezclar bien y guardar en frasco rotulado.
Solución B: Pesar 9.2 g de fosfato sódico monobásico agregar a un vaso de
precipitado y añadir una pequeña cantidad de agua destilada, agitar con el agitador
de vidrio hasta disolver. Una vez disuelta la sal verter el contenido en un matraz
volumétrico de 1 L y agregar agua hasta aforar. La solución amortiguadora se prepara
a partir de estas dos soluciones mezcladas en proporciones para producir un pH en
el rango de 7.0 a 7.2. Mezclar 39 mL de la Solución A con 61 mL de la solución B en un
matraz volumétrico y afora a 1 L con agua destilada.
Solución de Sacarosa
Preparar 50 mL de una solución de Sacarosa de concentración 50g/L y 50 mL de
concentración 200 g/L
.
Solución de glucosa
Preparar 50 mL de una solución de glucosa de concentración 10 g/L.
Solución de enzima
Disolver 0.4 g de la enzima invertasa en un volumen pequeño de solución amortiguadora pH
7 y posteriormente verter en un matraz volumétrico y aforar a 1 L con la misma solución
amortiguadora. Posteriormente volver a diluir con solución amortiguadora para obtener una
solución de enzima de 0.15 g/L.
OBTENCIÓN DE LA CURVA ESTÁNDAR DE GLUCOSA

1. Tomar 8 tubos de ensaye y agregar los volumenes de agua destilada y de solución de
glucosa mostradas en la tabla 4.2. Agitar los tubos con un vortex y posteriormente
agregar a cada tubo 3 mL de reactivo de DNS y poner los tubos a baño María (90ºC) por
10 minutos y leer en el espectrofotómetros a 540 nm. Anotar los valores de absorbancia
correspondientes a cada tubo.
Tabla 4.2 Preparación de curva estándar.
Tubo Soln. Agua Soln. Absorbancia
Glucosa destilada Reactivo leida a 540
(mL) (mL) de DNS nm
1 0 3.0 3.0
2 0.5 2.5 3.0
3 1.0 2.0 3.0
4 1.5 1.5 3.0
5 2.0 1.0 3.0
6 2.5 0.5 3.0
7 3 0 3.0
2. Con los datos de absorbancia obtenidos graficar y ajustar la recta que pase por
los datos experimentales. Los datos de absorbancia serán las abscisas y el de
la concentración de glucosa en las ordenadas. La ecuación de la recta obtenida
es la curva estándar y servirá para medir la concentración de producto
formado durante la reacción enzimática. Debe incluir la ecuación de la recta y
el valor de r2 obtenido en su reporte.
DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS CINÉTICOS.

1. Tomar 14 tubos de ensaye, colóquelos en la gradilla y agregar los volumenes de solución
de sacarosa, y agua mostrados en la tabla 2.2 y preincube a 55ºC en el baño por 5
minutos.
2. Posteriormente agregue 3 mL de soln. De enzima y deje reaccionar por 5 minutos
(cronometrar el tiempo).
3. Agregar a cada tubo 6 mL de reactivo de DNS y poner los tubos a baño María por 10
minutos hasta observar el cambio de color causado por el reactivo de DNS y leer en el
espectrofotómetros a 540 nm. Anotar los valores de absorbancia correspondientes a
cada tubo en la tabla 4.3.
Tubo Soln. Agua Soln. De Soln. Concentración Absorbancia
Sacarosa destilada enzima Reactivo final de leida a 540
(mL) (mL) de DNS sacarosa. Cs nm
(g/L)
1 0 (50g/L) 3.0 3.0 6.0
2 0.5(50g/L) 2.5 3.0 6.0
3 1.0(50g/L) 2.0 3.0 6.0
4 1.5(50g/L) 1.5 3.0 6.0
5 2.0(50g/L) 1.0 3.0 6.0
6 2.5(50g/L) 0.5 3.0 6.0
7 3(50g/L) 0 3.0 6.0
8 0 (200 g/L) 3.0 3.0 6.0
9 0.5 (200 2.5 3.0 6.0
g/L)
10 1.0 (200 2.0 3.0 6.0
g/L)
11 1.5 (200 g/L) 1.5 3.0 6.0
12 2.0 (200 1.0 3.0 6.0
g/L)
13 2.5 (200 0.5 3.0 6.0
g/L)
14 3 (200 g/L) 0 3.0 6.0
4. Introducir los valores de absorbancia leidos a la ecuación de la curva estándar

obtenida y determinar la concentración del producto (Cp) liberado por la
reacción de hidrólisis en equivalentes de glucosa (g/L) llenando la tabla 2.4:
Tabla 4.4 Resultados Experimentales de rp y Cs.
Tubo Cp (g/L) rp (g/L.min) Tubo Cp (g/L) rp (g/L.min)
1 8
2 9
3 10
4 11
5 12
6 13
7 14
5. Para calcular el valor de rp de la tercera columna de la tabla 2.4, divida la

concentración de producto liberado entre los 5 minutos que duró la reacción.
Con los datos rp y Cs obtenidos determine utilizando las 3 linearizaciones los
valores de rmax y KM. Separe los datos de los rubos 1 a 7 y de 7 a 14 para su análisis
cinético.
6. Compare los parámetros cinéticos obtenidos con la solución de sacarosa de 50
g/L (tubos 1 a 7) con los obtenidos para la solución de sacarosa a 200 g/L (8 a
14).
• Las soluciones de enzima, el reactivo de DNS y la solución amortiguadora de pH
sobrantes deben de etiquetarse y guardarse en refrigeración para la siguiente práctica.
• Los residuos de DNS deben de ser vaciados en el frasco específico de residuos de DNS
utilizando las etiquetas del laboratorio para su adecuada disposición.
• Las soluciones de sacarosa y glucosa sobrantes son biodegradables y no tóxicos por lo
que pueden depositarlos en la tarja.

1. Obtenga las gráfica de CS contra rP y analiza el comportamiento para discriminar los datos.
2. En una hoja de cálculo o en papel milimétrico, elabore los gráficos para las diferentes
linearizaciones utilizadas para calcular rMAx y KM.
3. Llene la siguiente tabla con los resultados de sus cálculos:
Tabla 4.5 Cálculo de parámetros cinéticos.
No de
Linearización KM rMax R 2
Tubos
(g/L (g/L.mi
) n)
Langmuir 1a7
Lineweaver- 1a7
Burk
Eadie-Hofstee 1a7
Langmuir 8-14
Lineweaver- 8-14
Burk
Eadie-Hofstee 8-14
4. Compare los valores de KM y rMax obtenidos para los 2 comportamientos ¿Qué podemos
concluir sobre la actividad enzimática y las altas concentraciones de sacarosa?
5. Compare sus resultados con los reportados en la literatura y concluya
• Explicar que es un azúcar reductor y por que podemos usar el reactivo de DNS para
cuantificar los productos de la hidrólisis de la sacarosa .
• Investigar por qué se diluyó la enzima en solución amortiguadora y no en agua.
• Investigar el fenómeno de inhibición enzimática.
BIBLIOGRAFÍA
1. Lee, J.M. (1992). Biochemical Engineering. Prentice-Hall. 1ª Edición. Michigan, Estados
Unidos.
3. Vargas, M & Obaya, A. (2011). Cinética Química y Catálisis Verde. En Química Verde
Experimental (pp. 189-215). México: Universidad Nacional Autónoma de México.
4. Vargas-Rodríguez, Y. M., Obaya, A, Vargas, G. I. (2012) Regresión polinomial una
competencia indispensable para el tratamiento de datos en cinética química. 4º
Congreso Internacional Sobre la Enseñanza y Aplicación de las Matemáticas. FES C
UNAM 2012.
5. http://portal.cuautitlan.unam.mx/manuales/CineticaQuimicaAplicandoPrincip
iosQV.pdf
https://es.slideshare.net/friveroll/enzimas-presentation-600486
PRÁCTICA 5.
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE
LA VELOCIDAD DE REACCIÓN ENZIMÁTICA
INTRODUCCIÓN
La hidrólisis enzimática de la sacarosa ocurre en la presencia de invertasa. La

mayoría de las reacciones incrementan con la temperatura, sin embargo, en las
reacciones enzimáticas el fenómeno común de aumento en la rapidez de
reacción ocurre sólo a bajas temperaturas, dada la mayor energía de las moléculas,se
sobrepone a la desnaturalización de la enzima debido a su origen proteico. El resultado
global de estas dos interacciones da como resultado un perfil con un máximo de
rapidez a una temperatura dada, que se le denomina temperatura óptima. Como se
representa en la figura 5.1.
Figura 5.1. Intervalo de Temperatura óptimo.
Sin embargo, en el intervalo de temperaturas antes de la máxima actividad, las

reacciones enzimáticas, al igual que la mayoría de las reacciones químicas, ajustan su
comportamiento a la ecuación de Arrhenius :
(1)
En esta práctica, se realiza una serie de reacciones a diferentes temperaturas,

manteniendo constante la concentración de sacarosa y enzima, para obtener la
temperatura de máxima actividaddel catalizador.
OBJETIVOS
• Evaluar el efecto de la temperatura sobre la velocidad de reacción en la catálisis enzimática.
Evaluar el efecto de la temperatura sobre la velocidad de reacción enzimática.
PROBLEMA INTEGRADOR
Obtener la temperatura de máxima actividad de la enzima invertasa.

• Investigar el efecto de la temperatura sobre la estructura y la actividad catalítica
de las enzimas.

1 Balanza analítica. Reactivo de DNS
8 Tubos de ensaye de 150 1 espectrofotómetro UV- Solución de
desodio
Invertasa.
de vidrio
mm por 20 mm Visible. Solución de 0.2Sacarosa
5 mL de disolución M de acetato
1 gradilla. 1 parrilla
magnética
de (50g/L). de etilo, recién preparada
1 Cronómetro calentamiento
3 Pipetas volumétricas de 5 1 vortex.
mL
50 mL
1 Piseta
2 Termómetros
METODOLOGÍA
Preparar 100 mL de una solución de Sacarosa de concentración 50g/L.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
1. Poner agua de grifo a hervir y mezclar con agua a temperatura ambiente hasta tener 8
vasos de precipitado de 50 mL con agua a 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 y 90 ºC.
2. Tomar 8 tubos de ensaye y agregar a cada uno 3 mL de solución de sacarosa (50 g/L) y
colocar un tubo en cada uno de los vasos de precipitado a diferentes temperaturas y
esperar unos minutos que el líquido en los tubos equilibre su temperatura.
7. Agregar 3 mL de soln. De enzima y deje reaccionar por 5 minutos (cronometrar el
tiempo).
minutos y leer en el espectrofotómetros a 540 nm. Anotar los valores de absorbancia
correspondientes a cada tubo en la tabla 3.1.
Tubo Temperatura Soln. Soln. Soln. Absorbancia
(ºC) Sacarosa De Reactivo leida a 540
50g/L enzima de DNS nm
(mL)
1 20 3.0 3.0 6.0
2 30 3.0 3.0 6.0
3 40 3.0 3.0 6.0
4 50 3.0 3.0 6.0
5 60 3.0 3.0 6.0
6 70 3.0 3.0 6.0
7 80 3.0 3.0 6.0
8 90 3.0 3.0 6.0

Tabla 5.2 Resultados Experimentales de rp y Cp.
Tubo Cp (g/L) rp (g/L.min)
1
2
3
4
5
6
7
8

Con los datos rp determine la temperatura óptima de hidrólisis de la sacarosa.
• Las soluciones de sacarosa sobrantes son biodegradables y no tóxicos por lo que pueden
depositarlos en la tarja.

• En una hoja de cálculo o en papel milimétrico, elabore el gráficos de Temperatura
contra rp.
• Compare sus resultados con los reportados en la literatura y concluya.
•
• Investiga qué características presentan las enzimas termófilas.
BIBLIOGRAFÍA
1. Lee, J.M. (1992). Biochemical Engineering.Prentice-Hall. 1ª Edición. Michigan, Estados

Unidos.
UNAM 2012.
iosQV.pdf
https://curiosoando.com/invertasa-en-la-industria-alimentaria
PRÁCTICA 6.
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN
DE LA ENZIMA SOBRE LA
VELOCIDAD DE REACCIÓN
ENZIMÁTICA
INTRODUCCIÓN
La velocidad enzimática depende directamente de la concentración de enzima

inicial como se representa en la figura 6.1. Para una concentración de sustrato
inicial constante a mayor concentración de enzima obtenemos una mayor
concentración de producto en menos tiempo, pues existen una mayor
cantidad de sitios activos disponibles para interactuar con el sustrato. Este
comportamiento se puede apreciar sobre todo al inicio de la reacción
cuando la concentración de sustrato es alta. Sin embargo una vez que todo
el sustrato está interactuando con la enzima resulta inútil aumentar la
cantidad de enzima.
Figura 3.1. Intervalo de Temperatura óptimo.
En esta práctica, se mantiene constante la concentración de sacarosa y se evalúa el

efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de hidrólisis de la sacarosa.
OBJETIVOS
• Evaluar el efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción en la catálisis
enzimática.
Evaluar el efecto de la concentración de invertasa sobre la velocidad de hidrólisis de la sacarosa.
PROBLEMA INTEGRADOR
Obtener la concentración óptima de la enzima invertasa para la hidrólisis de la sacarosa.

• Investigar el efecto de la concentración inicial de la enzima sobre el valor de rMax.

1 Balanza analítica. Reactivo de DNS
8 Tubos de ensaye de 150 1 espectrofotómetro UV- Solución de
desodio
Invertasa.
de vidrio
mm por 20 mm Visible. Solución amortiguadora
5 mL de disolución 0.2 M de acetato
1 gradilla. 1 parrilla
magnética
de pH 7. de etilo, recién preparada
1 Cronómetro calentamiento Solución de Sacarosa
3 Pipetas volumétricas de 5 1 vortex. (50g/L).
mL
50 mL
1 Piseta
2 Termómetros
METODOLOGÍA
Preparar 50 mL de una solución de Sacarosa de concentración 50 g/L.
1. Tomar 8 tubos de ensaye y agregar los mL de solución de enzima y de soln.
Amortiguadora de pH mostradas en la tabla 6.1.
2. Preincubar los tubo a 55 ºC por 5 minutos y agregar 3 mL de soln. De sacarosa (50 g/L)
y dejar reaccionar por 5 minutos (cronometrear el tiempo).
minutos y leer en el espectrofotómetros a 540 nm. Anotar los valores de absorbancia
correspondientes a cada tubo en la tabla 6.1.
Tabla 6.1 Preparación de soluciones con diferentes concentraciones de enzima.
Tubo Solución Soln. Soln. Soln. Conc. Absorbancia
de Amortiguadora Sacarosa Reactivo Final de leida a 540
invertasa de pH (mL) 50g/L de DNS Invertasa nm
(mL) (mL) (g/L)
1 0.0 3.0 3.0 6.0
2 0.1 2.9 3.0 6.0
3 0.5 2.5 3.0 6.0
4 1.0 2.0 3.0 6.0
5 1.5 1.5 3.0 6.0
6 2.0 1.0 3.0 6.0
7 2.5 0.5 3.0 6.0
8 3.0 0.0 3.0 6.0

Tubo Cp (g/L) rp (g/L.min)
1
2
3
4
5
6
7
8

Con los datos rp determine la concentración óptima de invertasa.
• Las soluciones de sacarosa sobrantes son biodegradables y no tóxicos por lo que pueden
depositarlos en la tarja.

• En una hoja de cálculo o en papel milimétrico, elabore el gráficos de concentración
de enzima contra rp, concentración de enzima con CP.
• Comparar los resultados obtenidos de Concentración de Enzima inicial óptima
con los reportados en la literatura y concluir.
• Investigar la clasificación de la enzima invertasa con su número de catálogo.
• Investigar los usos industriales de la invertasa y las fuentes microbianas de ésta.
BIBLIOGRAFÍA
Unidos.
UNAM 2012.
iosQV
6. http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/201
9/QuimicaBiol/1555895234.pdf
Manual de Laboratorio de Cinética Química y Biológica
PRÁCTICA 7.
EFECTO DEL pH EN LA VELOCIDAD
DE REACCIÓN ENZIMÁTICA
1
INTRODUCCIÓN
La actividad de un enzima se ve afectada por el pH al cual se lleva a cabo la reacción.
La curva actividad-pH puede ser diferente para cada tipo de enzima (Figura 7.1 ). En
el caso más general la curva tiene forma de campana. El valor de pH al cual la
actividad es máxima se denomina pH óptimo; dicho pH no tiene por qué coincidir
con el pH intracelular. La relación entre el pH y la actividad depende del
comportamiento ácido-base de la enzima y del propio sustrato. Sustrato y enzima
(centro activo) pueden contener grupos funcionales ácidos y básicos, siendo su
grado de disociación dependiente del pH, lo que determinará, entre otros aspectos,
la conformación de la proteína, la capacidad de unión del sustrato al centro activo
del enzima (Km) y la capacidad de transformación del sustrato (kcat). Los estudios
cinéticos a diferentes valores de pH nos proporcionan información sobre el
mecanismo catalítico de los enzimas y la naturaleza de los aminoácidos más
directamente implicados en la catálisis.
Figura 7.1 Efecto del pH sobre la actividad de diversos enzimas
OBJETIVO
Evaluar el efecto del pH sobre la velocidad de reacción enzimática empleando un
sistema invertasa-sacarosa.
COMPETENCIA
2
Conocer el efecto del pH sobre la velocidad de reacción
PROBLEMA INTEGRADOR
Determinar la región de pH óptimo para una reacción enzimática empleando un
sistema invertasa-sacarosa.
• Investigar el efecto del pH sobre la estructura y la actividad catalítica de las

enzimas.
• Investigar como prepara soluciones amortiguadoras (fosfatos y acetatos) a

diferentes valores de pH.
• Revisar en las hojas de seguridad las propiedades químicas, físicas y

toxicológicas de los reactivos empleados.
EQUIPO(S), REACTIVO(S), MATERIAL(ES)

• 17 Tubos de ensaye de
• 1 Potenciómetro con • Solución de
150 mm por 20 mm.
electrodo de vidrio. invertasa 0.4 g/L
• 1 Gradilla
• 2 termobaños (o bien • Solución de
• 1 Cronómetro.
2 Parrilla con sacarosa 50 g/L
• 6 Pipetas de 5 mL.
agitación y 2 baños • Solución
• 3 Pipeta de 10 mL.
María). amortiguadora de
• 3 Vasos de precipitado fosfatos (0.1 M) a
• Espectrofotómetro
de 100 mL. diferentes valores
.
• 10 vasos de precipitado de pH (Ver Tabla
• Balanza analítica.
de 250 mL. 7.1).
3
• 1 Piseta. • Solución
• Termómetro de mercurio. amortiguadora de

acetatos (0.1 M) a
• 4 matraces volumétricos
diferentes valores
de 500 mL.
de pH (Ver Tabla
• 2 matraces volumétricos
X).
de 1 L.
• Agua desionizada
• 1 matraz volumétrico de
o destilada.
100 mL
• Parafilm.
METODOLOGÍA
1. Preparar soluciones amortiguadoras (0.1 M) en un rango de valores de pH entre
2 a 9, con incrementos de 1 unidad de pH.
2. Preparar soluciones de invertasa 0.15 g/L diluyendo la solución stock de
invertasa (0.4 g/L) con cada una de las soluciones amortiguadoras a los
diferentes valores de pH.
3. Colocar 3 mL de cada una de las soluciones de invertasa (0.15 g/L) de diferente
valor de pH en cada uno de los tubos etiquetados como se indica en la Tabla
7.1 y pre-incubar por al menos 5 minutos a 55 ºC.
4. Iniciar la reacción mediante la adición de 3 mL de solución de sacarosa (50 g/L)
de manera secuencial en cada uno de los tubos de ensayo, permitiendo que la
reacción se lleve a cabo por exactamente 5 minutos manteniendo la
temperatura constante en 55 ºC.
5. Después de transcurrido el tiempo de reacción, detenerla mediante la adición
de 6 mL de solución de DNS.
6. Permitir el desarrollo de color de acuerdo con la metodología descrita en la
práctica No. 4 y tomar lecturas de absorbancia en un espectrofotómetro a una
longitud de onda de 540 nm.
4
Tabla 7.1 Efecto del pH sobre la velocidad de reacción
Tubo Invertasa Sacarosa Absorbancia Velocidad de

(0.15 g/L) (50 g/L) reacción
A 3.0 mL (pH 2) 3.0 mL
B 3.0 mL (pH 3) 3.0 mL
C 3.0 mL (pH 4) 3.0 mL
D 3.0 mL (pH 5) 3.0 mL
E 3.0 mL (pH 6) 3.0 mL
F 3.0 mL (pH 7) 3.0 mL
G 3.0 mL (pH 8) 3.0 mL
H 3.0 mL (pH 9) 3.0 mL
• Las soluciones de sacarosa y glucosa sobrantes son biodegradables y no tóxicos por lo
que pueden depositarlos en la tarja.

1.- Calcular las velocidades de reacción obtenidas a cada valor de pH.
2.- En una hoja de cálculo o en papel milimétrico, elaborar una gráfica del
comportamiento que tiene la velocidad de reacción con respecto al cambio de pH e
identificar la región de pH óptimo.
3.- Discutir los resultados obtenidos y concluir.
Investigar el efecto que tienen el cambio de pH sobre la interacción de los residuos
de aminoácidos presentes en el sitio activo con el sustrato.
5
BIBLIOGRAFÍA
1.- Lee, J.M. (1992). Biochemical Engineering. Prentice-Hall 1a edición. Michigan,
Estados Unidos.
2.- Tena Aldave, M., & Jorrín NovoJ. V. (2008). Extracción y ensayo de la actividad
invertasa de levadura de panadería [Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular, Universidad de Córdoba]. https://www.virtualpro.co/biblioteca/extraccion-
y-ensayo-de-la-actividad-invertasa-de-levadura-de-panaderia.
3.- Hestrin S, Feingold D.S., Schramm M (1955) b-Fructofuranosidade (invertase)from
yeast. Methods in Enzymology 1: 251-257.
4.- Lampen J.O. (1971), Yeast and Neurospora invertases. En Boyer P.D. (ed) The
Enzymes, 3 ed. Vol. V. Academic Press. New York, USA, 291-305
6
PRÁCTICA 8.
FERMENTACIÓN DE LEVADURAS Y
DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS
DE LA ECUACIÓN DE MONOD
7
INTRODUCCIÓN
La levadura del pan es uno de los productos más antiguos de la industria de las
fermentaciones y para su fabricación es necesario llevar a cabo un proceso
fermentativo aeróbico que depende fuertemente de la transferencia de oxígeno y
nutrientes al microorganismo (Parakulsuksatid, 2000). En la producción de levadura
S. cerevisiae la mayor fuente de energía es la glucosa y la glucólisis es la principal vía
para la conversión de la glucosa a piruvato. En fermentaciones aeróbicas S. cerevisiae
se alimenta, respira y se multiplica. Bajo condiciones anaeróbicas, la tasa de consumo
de azúcar es mas alta que la tasa de transporte del piruvato a la mitocondria y el
metabolismo favorece la producción de etanol y CO2, con una tasa de consumo
limitado de oxígeno y un bajo rendimiento en la producción de biomasa
(Parakulsuksatid, 2000).
La producción de biomasa y el crecimiento de las células se puede describir

cuantitativamente como la duplicación del número de células o biomasa por unidad
de tiempo. La velocidad de crecimiento se correlaciona con la velocidad de
crecimiento específico μ y la concentración de células X [células/ mL] según la
ecuación 1.
(1)
La velocidad de crecimiento específico μ , es generalmente una función de tres

parámetros: la concentración del sustrato limitante S , la tasa de crecimiento máxima
μmax , y la constante especifica de sustrato Ks , en cuya concentración se obtiene la
mitad de la máxima velocidad específica de crecimiento ( μ = 0.5 μmax ). Esta relación
puede ser expresada por medio de la ecuación de Monod (2):
8
(2)

La velocidad máxima de crecimiento específico μmax es de considerable
importancia a nivel industrial, debido a que es en este punto donde se obtiene el

valor máximo de μ a niveles de saturación de sustrato, relacionando la dependencia
de los microorganismos con las condiciones del fermentador, donde a medida que
aumenta la densidad de población decrece la concentración del sustrato limitante
del crecimiento, causando un descenso de μ .
En esta práctica, se estudiara la fermentación aeróbica de la levadura y e l c á l c u l o d e l o s

parámetros cinéticos de la ecuación de Monod.
OBJETIVOS
• Determinar los parámetros cinéticos de crecimeinto de levadura en

condiciones aeróbicas.
• Evaluar parámetros cinéticos de la ecuación de Monod.
PROBLEMA INTEGRADOR
Obtener los parámetros cinéticos de la ecuación de Monod para la levadura S. cerevisiae.

• Investigar el efecto del oxígeno y altas concentraciones de azúcares en el
crecimiento de las levaduras.
9

Por equipo: Para todo el grupo: Por equipo:
1 Balanza analítica. Levadura de panaderia (1
15 Tubos de ensaye de 150 1 espectrofotómetro UV- cucharada)de sodio
de vidrio
mm por 20 mm Visible. Reactivo de DNS
5 mL de disolución 0.2 M de acetato
1 gradilla. 2 celdas magnética Solución de
deetilo,
NaOH (1 N)
recién preparada
1 Cronómetro 1 incubadora con Solución de H3PO4 (1 N)
15 Pipetas graduadas de 10 agitación Para preparar 1 L de medio
mL 1 termobaño de cultivo.
3 pipetas pasteur 1 autoclave Glucosa 100g
2 perillas 1 Microscopio Extracto de levadura 8.5 g
2 Vasos de precipitados de 2 mecheros Fisher NH4Cl 1.32 g
500 mL Cerillos MgSO4 0.11 g
1 Piseta 1 bomba de vacío CaCl2 0.06 g
2 Termómetros 1 estufa Agua destilada
1 agitador de vidrio Azul de metileno.
8 cubre objetos Aceite de inmersión
1 Matraz kitasato con tapón
1 embudo de porcelana de
10 cm de diámetro
15 membranas Millipore de
tamaño de poro de 0.8 µm
2 pinzas de precisión
1 espátula
3 vidrios de reloj
50 g de Algodón
1 porta pipetas de metal
2 pliegos de papel destraza
1 m2 de tela de pañalina
Alcohol y Benzal para
desinfectar.
1 Matraz volumétrico de 1 L
1 cámara de Neubauer
METODOLOGÍA
Preparación del medio de cultivo
Para preparar 1 L de medio de cultivo pesar todos los reactivos en las cantidades mencionadas
en la tabla anterior y mezclarlos con un poco de agua hasta disolverse en 1 vaso de precipitado
10
de de 500mL. Ajustar el pH del medio a 4.5 con las soluciones de NaOH y ácido fosfórico.
Posteriormente verter el medio en el matraz volumétrico de 1 L y aforar.
Vaciar 800 mL del medio de cultivo al matraz Erlenmeyer de 2 L y el resto en el matraz
Erlenmeyer de 500 mL. Tapar ambos matraces con un tapones hechos de algodón y tela de
pañalina. Cubrir los tapones con aluminio.
Esterilización del material y el medio de cultivo

A las pipetas graduadas debe de ponérseles un tapón de algodón en la parte superior y el
tapón debe de quemarse. Las pipetas despues deben de ser enrolladas con papel destraza y
colocadas en el portapipetas de metal.
Las pipetas y los 2 matraces con el medio deben de colocarse en el autoclave que ya contiene
agua hasta el nivel. El autoclave se enciende y se deja calentar hasta alcanzar los 121 ºC, y
mantener esta temperatura por 15 minutos por lo menos. Una vez transcurrido este tiempo
debe de apagarse el autoclave y dejar enfriar hasta que la temperatura y presión bajen y se
pueda sacar el material.
1. Esterilizar la mesa con alcohol y benzal y encender los 2 mecheros Fisher.

2. Colocar el matraz de 500 mL entre ambos mecheros y nunca alejarlo a más de
20 cm de la periferia de ambos mecheros.
3. Preparar el preinóculo adicionando 1 cucharada sopera de levadura de
panaderia en condiciones estériles.
4. Una vez inoculado el matraz debe de taparse e introducirse a una incubadora
con agitación a 150 RPM y a 37 ºC por 12 horas, al cabo de las cuales el cultivo
será vertido en el erlenmeyer de 2 L bajo las mismas condiciones de agitación
temperatura y tiempo.
5. Cada hora es necesario volver a encender los mecheros, sacar el matraz de la
incubadora y tomar 1 alicuota de 10 mL de medio que fue agitado previamente.
Después de tomar la alícuota el matraz debe de introducirse denuevo a la
incubadora.
11
6. Verter 1 mL de medio en 1 tubo de ensaye y agregar una gota de azul de

metileno. Tomar una alícuota y verterla en la cámara de Neubauer y tapar con
1 cubre objeto y observar en el objetivo de aceite de inmersión en el
microscopio contando el número de celulas totales y teñidas en los 4
cuadrante centrales y externos. La viabilidad del cultivo se mide dividiendo el
número de células No teñidas entre el número de celulas totales.
Verter el medio teñido en

el centro de la
cuadrícula.
Contar las células en los 4

cuadrantes centrales y en los 4
extremos.
Figura 8.1 Cuantificación de células y análisis de viabilidad.
7. Los 9 mL restantes se deben de verter en el embudo al que previamente se le

colocó una membrana millipore y que esta montado sobre matraz kitasato
conectado a la bomba de vació como se muestra en la figura de abajo. Las
membranas deben de ser manipuladads con pinzas unicamente. Una ves que
todo el líquido a escurrido se quita la membrana con las pinzas, se coloca en el
vidrio de reloj y se mete a la estufa a menos de 60ºC por 2 horas . Después de
este tiempo la membrana se pesa en la balanza analítica y se vuelve a meter a
la estufa y el proceso se repite hasta alcanzar un peso constante.
12
Quitar la
membran
a con
pinzas y
Se conecta el llevar a
matraz a la peso
bomba de constante
vacío para
eliminar todo el
líquido
Figura 8.2 Cuantificación de Biomasa por peso seco.
8. Se toman 3 mL del medio filtrado y se le determinan la concentración de

glucosa residual por el método del DNS agregando 3 mL de éste reactivo y
calentandolo a baño María por 10 minutos y leyendo en el espectro a 540 nm.
9. Transcurridas las 12 horas llenar la siguiente tabla con la información solicitada.
Tabla 8.1 Cinética de crecimiento de la LEvadura

Tiempo Número Número Viabilidad Peso Peso Peso Absorbancia
(h) de de Membranas Membranas Levaduras a 540 nm
células células limpias (g) con en 9 mL
teñidas totales levaduras (g)
(g)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
10. Calcular la concentración de biomasa X generada a diferentes tiempos y la

concentración de glucosa sustituyendolas absorbancias en la ecuación de la
13
curva estandar de glucosa. Aplicando regresión polinómica y derivando el

polinomio obtenido de graficar X contra tiempo obten dX/dt y llenar la tabla
8.2. Para calcular m divide dX/dt entre X.
Tiempo S (g/L) X (g/L) dX/dt µ (h-1)
(h)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
11. El valor mas alto de µ es el correspondiente a µmax. Grafique µ contra S, el valor

de S que corresponda a la mitad de µmax es igual a Ks.
• Las soluciones de glucosa y de medio de cultivo sobrantes son biodegradables y no
tóxicos por lo que pueden depositarlos en la tarja.

• En una hoja de cálculo o en papel milimétrico, elabore el gráficos de µ contra S.
• Compare los valores de µmax y de Ks obtenidos en la práctica con los reportados
en la literatura y concluya.
• Investigar que es el efecto Crabtree y que importancia tiene en la fermentación
anaeróbica de levadura.
14
• Investiga por que algunas levaduras se tiñen con azul de metileno y otras no y
como se relaciona esto con las etapas de crecimiento celular lag, exponencial y
estacionaria.
BIBLIOGRAFÍA

Unidos.
UNAM 2012.
iosQV.pdf
15

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