Biokam Labo 1

BIOQUÍMICA
o Semestre-2022
Departamento Académico de Cursos Básicos

Espectrofotometría
Semana 01
Sesión 01
Contenido
o Espectrofotometría
o Espectro de absorción de luz
o Espectrofotómetro: Definición y función
o Aplicación del espectrofotómetro
o Componentes del espectrofotómetro
o Ley de Lambert y Beer
o Métodos de determinación la concentración de una muestra
o Procedimientos experimentales
Resultado de aprendizaje de la sesión
Resultado de aprendizaje de la sesión
Al finalizar la sesión, el estudiante puede
1. Manipular el espectrofotómetro
2. Describir las aplicaciones del
espectrofotómetro
3. Describir la ley de Lambert-Beer
4. Determinar una curva de calibración,
factor de calibración usando solución de
https://acortar.link/u7BXS0
azul de metileno 1 mg/dL
a través de diferentes procedimientos
experimentales. 04
Reflexión desde la experiencia
Reflexión desde la experiencia
Participemos en las siguientes preguntas
¿Qué es espectrofotometría?
¿Qué importancia tiene la

espectrofotometría en el área de
la salud?
05
https://acortar.link/I4be7b
Espectrofotometría
Espectrofotometría
o Método cuantitativo de análisis químico que se utiliza la luz

para medir las concentraciones de una sustancia.
o Es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe

o trasmite un sistema químico en función de la longitud de
onda.
07
Espectrofotometría
08
https://acortar.link/wxQD58
Espectrofotómetro
Instrumento usado en la física óptica que

sirve para medir, en función de la
longitud de onda, la relación entre
valores de una misma magnitud
fotométrica relativos a dos haces de
radiaciones.
https://acortar.link/EFTVNn
Funciones:
1. Ofrece información de una muestra sobre la naturaleza de

la sustancia que contiene.
2. Señala indirectamente la cantidad de una sustancia a 09
investigar que se encuentra presente en la muestra.

Espectrofotómetro
Aplicaciones:
1. Análisis cuantitativo y
cualitativo de una sustancia.
2. Estandarización de colores de
ciertos materiales.
3. Determinación de impurezas
en alimentos y reactivos.
4. Detección de contaminación.
010
https://acortar.link/EFTVNn
Componentes del espectrofotómetro
Cubetas Fuente de luz
Detector Portacubetas
Componentes del espectrofotómetro
https://acortar.link/BzpUoS 012
Ley de Lambert y Beer
Concentración:
Curva de calibración
Factor de calibración
A=E x C x L (1 cm)
A/E x L=C
A= -Log T
Luz incidente (Io) Luz transmitida (It)

013
https://acortar.link/0mdsVi
Ley de Lambert y Beer
La cantidad de luz absorbida depende:

o Tipo de sustancia que atraviesa la luz
o Distancia que recorre la luz
o Concentración de la sustancia
https://acortar.link/fcTd1S
014
Determinación de concentración de una
sustancia (analito, parámetro)
a. Curva de calibración
b. Factor de calibración (Fc) único o promedio
a.
b. Fc= Concentración del estándar
Absorbancia
o ESTÁNDAR
o PATRÓN
o CALIBRADOR
(mg/dL; mEq/L, U/L)

015
C1 X V1= C2XV2
Determinación de concentración de una
sustancia (analito, parámetro)
Cx del St de azul de metileno: 1 mg/dL
B ST Mx
0.375 0.475
Fc= 1 mg/dL/0.375= 2.66 mg/dL
Cx Azul metileno: Fc x abs la mx
Cx del azul de metileno= 2.66 mg/dL x 0.175 016
Cx de la Mx= 0.461 mg/dL

Procedimiento experimental:
Espectro de absorción
Determinación del pico de máxima
absorción del azul de metileno
1. Adicionar 4 mL de agua
2. Adicionar 1 mL de solución de azul de metileno 1mg/dL
3. Mezclar
4. Realizar lecturas (realizar tablas para colocar datos obtenidos
a las diferentes longitudes de ondas.
Longitud 560 580 600 620 640 660 680 700

de onda
(nm)
Lectura 0.160 0.195 0.230 0.350 0.460 0..485 0.380 0.360
(abs)
5. Realizar una gráfica en el papel milimetrado, en donde

en el eje de las ordenadas se colocan las Abs (eje Y) y en el 018
eje de las abscisas las longitudes de ondas (eje X).
6. Determinar el pico con máxima absorción en función de
las longitudes de ondas.
Determinación del pico de máxima
absorción del azul de metileno
Curva de absorción de la solución de azul de metileno 1 mg/dL
019
Procedimiento experimental:
Curva de calibración
Determinación de curva de
calibración
1. Identificar los tubos de ensayos (13x100 mm)
1
1 2 3 4 5
mg/dL
0,5 mL de azul de 1 mL de azul de 2 mL de azul de 3 mL de azul de 4 mL de azul de

metileno 1 mg/dL metileno 1 mg/dL metileno 1 mg/dL metileno 1 mg/dL metileno 51 mg/dL
+ 1 2 3 4
+ + + +
4,5 mL de agua 4 mL de agua 3 mL de agua 2 mL de agua 1 mL de agua
destilada destilada destilada destilada destilada
Mezclamos, ajustamos el espectrofotómetro con el blanco y se leen las Abs a 660 nm

020
Luego, realice la curva de calibración en papel milimetrado
Determinación de curva de
calibración
C1 x V1= C2 x V2
C1= 1 mg/dL
V1= 0,5 mL
C2=?
V2= 5 mL
021
Factor de calibración único (cuando se tiene un solo estándar)
Fc= Concentración del estándar

Absorbancia
Ccx= Fc x abs
Factor de calibración Promedio (cuando se tiene más de un estándar)
Fc= Fc1+Fc2+Fc3+Fc4+Fc5
n (número de Fc)
Fc1= Concentración del estándar Fc3= Concentración del estándar

Absorbancia Absorbancia
Fc2= Concentración del estándar Fc4= Concentración del estándar
Absorbancia Absorbancia
Fc5= Concentración del estándar 022
Absorbancia
Apliquemos lo aprendido
Apliquemos lo aprendido
¿Para qué sirve el espectro de

absorción?
Explique cómo determinaría la

concentración de la solución del azul de
metileno
https://acortar.link/NhlLlJ
024
Integremos lo aprendido
Integremos lo aprendido
¿Para qué sirve el espectro de absorción?

¿Qué
¿Cómo graficar una curva de calibración?
aprendiste
hoy? ¿Cómo se calcula el factor de calibración?
¿Cómo se puede determinar la concentración

de un analito?
026
Actividad asincrónica
Actividad asincrónica
Realizar un informe de espectrofotometría (trabajo colaborativo).

Este informe debe presenter las siguientes partes:
Portada (titulo: Espectrofotometría, persona quien lo realizó)
o Introducción
o Objetivos
o Materiales y métodos (Procedimieto experimental)
o Discusión
o Conclusiones
o Recomendaciones
o Referencias
028
Fecha y hora dde entrega será establecida por el docente

Referencias Bibliográficas
DE CONSULTA
Cuadros Trillos, G. (2019). Mapas conceptuales en bioquímica (1.a ed.). El Manual Moderno
http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/128368
Melo, V. y Cuamatzi, O. (2019). Bioquímica de los procesos metabólicos. Reverté, S.A.

https://elibro.net/es/ereader/ucsur/127790
Müller-Esterl, W. (2020). Bioquímica: fundamentos para medicina y ciencias de la vida. Reverté, S.A.
Piña Garza, E., Martínez Montes, F., Riveros Rosas, H., Laguna, J. y Pardo Vázquez, J.P. (2018).
Bioquímica de Laguna y Piña (7.a ed.). El Manual Moderno.
Pulido Villamil, X. C. (2019). Prácticas de bioquímica y estudios de casos en ciencias de la salud.

Universidad de Tolima. http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/142510 029
Simes, L. E. (2020). Introducción a la bioquímica: interpretación de análisis clínicos. Universitas.

Referencias Bibliográficas
OBLIGATORIAS
Bittencourt, J. (2018). The Power of Carbohydrates, Proteins, and Lipids (4.a ed.). CreateSpace, An
Amazon.com Company. https://www.researchgate.net/publication/322473648
Macías Alvia, A., Hurtado Astudillo, J. R., Cedeño Holguín, D. M., Cedeño Holguín, F. A., Scott ÁLava,
M., Vallejo Valdivieso, P. A., Macías Alvia, M. J., Santana Sornoza, J. W., Espinoza Macías, M. J.,
Ubillús Saltos, S. P., Arteaga Espinoza, S. X., Torres Macías, O. E., Pigüave Reyes, J. M., Pigüave
Reyes, Chavarría Cedeño, D. I., & Intriago Sánchez, K. J. (2018). Introducción al estudio de la
bioquímica (1.a ed.). Área de Innovación y Desarrollo, S.L https://doi.org/10.17993/CcyLl.2018.28
Nelson, D. L., y Cox, M. M. (2017). Lehninger Pinciples of Biochemistry (7.a ed.). W.H Freeman
Macmillan Learning.
Navarro, M., Salazar, J., Salazar, Y. Zarkovic, G. (2022). Manual de prácticas de laboratorio.
Bioquímica. Universidad Científica del Sur. 030

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BIOQUÍMICA

Departamento Académico de Cursos Básicos

o Espectro de absorción de luz

o Espectrofotómetro: Definición y función

o Aplicación del espectrofotómetro

o Componentes del espectrofotómetro

o Ley de Lambert y Beer

o Métodos de determinación la concentración de una muestra

¿Qué importancia tiene la

o Método cuantitativo de análisis químico que se utiliza la luz

o Es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe

Instrumento usado en la física óptica que

1. Ofrece información de una muestra sobre la naturaleza de

investigar que se encuentra presente en la muestra.

Cubetas Fuente de luz

Luz incidente (Io) Luz transmitida (It)

La cantidad de luz absorbida depende:

(mg/dL; mEq/L, U/L)

Fc= 1 mg/dL/0.375= 2.66 mg/dL

Cx Azul metileno: Fc x abs la mx

Cx del azul de metileno= 2.66 mg/dL x 0.175 016

Cx de la Mx= 0.461 mg/dL

Longitud 560 580 600 620 640 660 680 700

5. Realizar una gráfica en el papel milimetrado, en donde

0,5 mL de azul de 1 mL de azul de 2 mL de azul de 3 mL de azul de 4 mL de azul de

Mezclamos, ajustamos el espectrofotómetro con el blanco y se leen las Abs a 660 nm

Fc= Concentración del estándar

Factor de calibración Promedio (cuando se tiene más de un estándar)

Fc1= Concentración del estándar Fc3= Concentración del estándar

Fc5= Concentración del estándar 022

Participemos en las siguientes preguntas

¿Para qué sirve el espectro de

Explique cómo determinaría la

Participemos en las siguientes preguntas

¿Para qué sirve el espectro de absorción?

¿Cómo se puede determinar la concentración

Realizar un informe de espectrofotometría (trabajo colaborativo).

Fecha y hora dde entrega será establecida por el docente

Melo, V. y Cuamatzi, O. (2019). Bioquímica de los procesos metabólicos. Reverté, S.A.

Pulido Villamil, X. C. (2019). Prácticas de bioquímica y estudios de casos en ciencias de la salud.

Simes, L. E. (2020). Introducción a la bioquímica: interpretación de análisis clínicos. Universitas.

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