QUÍMICA MEDICINAL

AGENTES ANTIBACTERIANOS

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ORGÁNICA

ÁREA QUÍMICA MEDICINAL

FACULTAD DE CIENCIAS BIOQUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS

Dora Boggian ◦ Patricia Cornier ◦ Carina Delpiccolo ◦ M. Ángeles Laborde ◦

Águstina La Venia ◦ Maitena Martinez Ámezaga ◦ Ernesto Mata ◦
Noelia Medran ◦ Luciana Mendez ◦ Carla Traficante
Química Medicinal : agentes antibacterianos / Ernesto Gabino Mata, Dora Boggian, Patricia
Cornier, Carina Delpiccolo, M. Ángeles Laborde, Agustina La Venia, Maitena Martinez
Amezaga, Noelia Medran, Luciana Mendez, Carla Traficante.

1a ed. - Rosario : Ernesto Gabino Mata, 2018.

170 p. ; 29 x 21 cm.

ISBN 978-987-42-9022-9

1. Química Farmacéutica. 2. Antibióticos. 3. Química Orgánica. I. Mata, Ernesto Gabino

CDD 615.19

IMPRESO EN LA ARGENTINA – PRINTED IN ARGENTINA

CÁTEDRA QUÍMICA MEDICINAL – FACULTAD DE CIENCIAS BIOQUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE ROSARIO

 TABLA DE CONTENIDOS

PREFACIO .................................................................................................................................................... 5

ABREVIATURAS ......................................................................................................................................... 7

CAPÍTULO 1 ................................................................................................................................................. 9
INTRODUCCIÓN A LA ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LA CÉLULA BACTERIANA ..................... 9
1.1. UNA VISIÓN GENERAL DE LAS CÉLULAS COMO LA UNIDAD BÁSICA DE LA VIDA ...... 9
1.2. LAS CÉLULAS EUCARIOTAS Y PROCARIOTAS ............................................................... 10
1.2.1. La célula eucariota ......................................................................................................... 10
1.2.2. La célula procariota ........................................................................................................ 13
1.2.3. Comparación entre células procariotas y eucariotas ..................................................... 13
1.3. CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS ................................................................................ 16
1.3.1. Peptidoglicano ................................................................................................................ 19

CAPITULO 2 ............................................................................................................................................... 27
INTRODUCCIÓN A LOS AGENTES ANTIBACTERIANOS ............................................................ 27
2.1. AGENTES ANTIBACTERIANOS .......................................................................................... 27
2.1.1. Aspectos históricos del desarrollo de agentes antibacterianos ..................................... 27
2.1.2. Clasificación por estructura química .............................................................................. 29
2.1.3. Clasificación por el mecanismo de acción ..................................................................... 33

CAPÍTULO 3 ............................................................................................................................................... 37
ANTIBIÓTICOS β-LACTÁMICOS Y RESISTENCIA BACTERIANA ................................................ 37
3. COMPUESTOS β-LACTÁMICOS ............................................................................................ 37
3.1. ANTIBIÓTICOS β-LACTÁMICOS ......................................................................................... 37
3.1.1. Historia de los antibióticos β-lactámicos ........................................................................ 38
3.1.2. Aspectos estructurales y nomenclatura ......................................................................... 39
3.1.3. Características espectrales ............................................................................................ 40
3.1.4. Mecanismo de acción de los antibióticos β-lactámicos.................................................. 42
3.1.5. Enzimas de unión a penicilinas (PBPs) .......................................................................... 45
3.2. RESISTENCIA BACTERIANA A COMPUESTOS β-LACTÁMICOS..................................... 47
3.2.1. Enzimas β-lactamasas ................................................................................................... 47

CAPITULO 4 ............................................................................................................................................... 51
PENICILINAS Y CEFALOSPORINAS .............................................................................................. 51
4.1. PENICILINAS ........................................................................................................................ 51
4.1.1 Penicilinas Naturales ....................................................................................................... 51
4.1.2. Estabilidad Química de las Penicilinas ........................................................................... 53
4.1.3. Penicilinas semisintéticas ............................................................................................... 54
4.1.4. Penicilinas resistentes a β-lactamasas .......................................................................... 55
4.1.5. Penicilinas de espectro extendido .................................................................................. 56
4.1.6. Penicilinas antipseudomonas ......................................................................................... 57
4.2. CEFALOSPORINAS .............................................................................................................. 58
4.2.1. Cefalosporinas de uso en clínica médica ....................................................................... 59
 2

4.2.2. Mecanismo de acción de las cefalosporinas ................................................................. 60

4.2.3. Clasificación de cefalosporinas en generaciones .......................................................... 60

CAPITULO 5............................................................................................................................................... 71
CARBAPENEMS, MONOBACTAMAS, INHIBIDORES DE β-LACTAMASAS ................................ 71
5.1 CARBAPENEMS .................................................................................................................... 71
5.1.1. Introducción .................................................................................................................... 71
5.1.2. Imipenen ........................................................................................................................ 73
5.1.3. Meropenen ..................................................................................................................... 74
5.1.4. Ertapenem ...................................................................................................................... 74
5.2. MONOBACTAMAS ............................................................................................................... 75
5.2.1. Aztreonam ...................................................................................................................... 75
5.3. INHIBIDORES DE β-LACTAMASAS .................................................................................... 77
5.3.1. Inhibidores reversibles e irreversibles ............................................................................ 78
5.3.2. Ácido Clavulánico ........................................................................................................... 79
5.3.3. Ácido Penicilánico Sulfona (Sulbactama) ...................................................................... 82
5.3.4. Tazobactama ................................................................................................................. 84
5.3.5. Combinaciones de un antibiótico β-lactámico y un inhibidor de β-lactamasas ............. 84
5.3.6. Sultamicilina ................................................................................................................... 84

CAPITULO 6............................................................................................................................................... 85
INHIBIDORES DE BIOSÍNTESIS DE PEPTIDOGLICANO NO β -LACTÁMICOS.......................... 85
6.1. GLICOPEPTIDOS ................................................................................................................. 85
6.2. USOS .................................................................................................................................... 86
6.3. QUÍMICA ............................................................................................................................... 86
6.4. MECANISMO DE ACCIÓN ................................................................................................... 88
6.5. ESPECTRO ANTIBACTERIANO DE VANCOMICINA ......................................................... 90
6.6. RESISTENCIA A GLICOPEPTIDOS .................................................................................... 90
6.7. NUEVOS ANTIBIÓTICOS GLICOPEPTÍDICOS .................................................................. 92
6.8. ANÁLOGOS DE AMINOÁCIDOS ......................................................................................... 94
6.8.1. D-clicoserina (Compuesto Natural) ................................................................................ 94
6.8.2. Fosfomicina (Compuesto Natural) ................................................................................. 94
6.9. POLIPÉPTIDOS .................................................................................................................... 95
6.9.1. Bacitracina ..................................................................................................................... 95
6.10. ANTIBIÓTICOS QUE ALTERAN LA MEMBRANA CITOPLASMÁTICA DE LAS
BACTERIAS ................................................................................................................................. 97
6.10.1. Polimixina B ................................................................................................................. 97

CAPITULO 7............................................................................................................................................... 99
ANTIBIÓTICOS INHIBIDORES DE LA SÍNTESIS PROTEICA I: AMINOGLICÓSIDOS,
TETRACICLINAS ............................................................................................................................. 99
7. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................................... 99
7.1. BIOSÍNTESIS DE PROTEÍNAS ............................................................................................ 99
7.1.1. Etapa de iniciación ....................................................................................................... 100
7.1.2. Etapa de elongación .................................................................................................... 100
7.1.3. Etapa de terminación ................................................................................................... 102
7.2. EFECTO DE LOS ANTIBIÓTICOS SOBRE LA SÍNTESIS PROTEICA EN PROCARIOTAS
................................................................................................................................................... 103
7.3. AMINOGLICÓSIDOS .......................................................................................................... 104
7.3.1. Aminoglicósidos que contienen estreptidina como aminociclitol ................................. 105
 3

7.3.2. Aminoglicósidos que contienen 2-desoxiestreptamina 4,5-disustituida como

aminociclitol ............................................................................................................................ 105
7.3.3. Aminoglicósidos que contienen 2-desoxiestreptomina 4,6-disustituida como
aminociclitol ............................................................................................................................ 105
7.3.4. Farmacología y toxicidad de aminoglicósidos: ............................................................. 107
7.3.5. Resistencia bacteriana ................................................................................................. 108
7.3.6. Nuevos aminoglicósidos ............................................................................................... 110
7.4. TETRACICLINAS ................................................................................................................ 111
7.4.1. Estabilidad química ...................................................................................................... 112
7.4.2. Mecanismo de acción ................................................................................................... 113
7.4.3. Efectos adversos .......................................................................................................... 113
7.4.4. Resistencia ................................................................................................................... 113
7.4.5. Nuevas tetraciclinas ..................................................................................................... 114

CAPITULO 8 ............................................................................................................................................. 117

ANTIBIÓTICOS INHIBIDORES DE LA SÍNTESIS PROTEICA II: MACRÓLIDOS,
ESTREPTOGRAMINAS, LINCOSAMIDAS Y OTROS .................................................................. 117
8.1. MACRÓLIDOS..................................................................................................................... 117
8.1.1. Introducción .................................................................................................................. 117
8.1.2. Actividad Antibiótica ..................................................................................................... 118
8.1.3. Mecanismo de acción ................................................................................................... 118
8.1.4. Clasificación.................................................................................................................. 118
8.1.5. Resistencia a macrólidos .............................................................................................. 122
8.2. NUEVOS MACRÓLIDOS .................................................................................................... 124
8.2.1. Estreptograminas ......................................................................................................... 124
8.2.2. Lincosamidas ................................................................................................................ 126
8.2.3. Cloranfenicol ................................................................................................................. 127
8.2.4. Oxazolidinonas ............................................................................................................. 129

CAPITULO 9 ............................................................................................................................................. 131

INHIBIDORES DE LA SÍNTESIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS ........................................................ 131
9.1. INHIBIDORES DE LA ADN GIRASA: QUINOLONAS ........................................................ 131
9.1.1. Descubrimiento y evolución de las quinolonas ............................................................ 131
9.1.2. Acción antimicrobiana de las quinolonas ..................................................................... 134
9.1.3. Relación estructura-actividad biológica de las quinolonas ........................................... 137
9.1.4. Farmacocinética ........................................................................................................... 140
9.1.5. Perspectivas futuras ..................................................................................................... 140
9.2. INHIBIDORES DE ARN POLIMERASA: RIFAMICINAS ..................................................... 142

CAPITULO 10 ........................................................................................................................................... 145

INHIBIDORES DE LA BIOSÍNTESIS DEL ÁCIDO TETRAHIDROFÓLICO................................... 145
10.1. INHIBIDORES DE LA DIHIDROPTEROATO SINTETASA .............................................. 145
10.1.1. Sulfonamidas o Sulfas ................................................................................................ 145
10.1.2. Antecedentes históricos ............................................................................................. 145
10.1.3. Clasificación de las sulfas .......................................................................................... 146
10.1.4. Mecanismo de acción ................................................................................................. 148
10.1.5. Espectro antimicrobiano ............................................................................................. 149
10.1.6. Resistencia ................................................................................................................. 150
10.1.7. Usos y características de algunas sulfas ................................................................... 150
10.2. INHIBIDORES DE LA DIHIDROFOLATO REDUCTASA. TRIMETOPRIMA .................... 150
 4

10.2.1. Introducción ................................................................................................................ 150

10.2.2. Mecanismo de acción ................................................................................................ 151
10.2.3. Resistencia ................................................................................................................. 151
10.2.4. Usos ........................................................................................................................... 151

CAPITULO 11 .......................................................................................................................................... 153

SÍNTESIS QUÍMICA DE ANTIBACTERIANOS ............................................................................. 153
11.1. INTRODUCCIÓN .............................................................................................................. 153
11.2. MODIFICACIONES QUÍMICAS DE PENICILINAS Y CEFALOSPORINAS ..................... 153
11.2.1. Penicilinas .................................................................................................................. 153
11.2.2. Cefalosporinas ........................................................................................................... 157
11.3. INHIBIDORES DE β-LACTAMASAS ................................................................................ 159
11.4. SULFONAMIDAS O SULFAS ........................................................................................... 160
11.5. QUIRALIDAD EN LOS AGENTES ANTIBACTERIANOS. RELACIÓN ENTRE LA
ESTEREOQUÍMICA Y LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA................................................................. 161
11.5.1. Cloranfenicol .............................................................................................................. 162
11.5.2. Fluoroquinolonas: Ofloxacina .................................................................................... 163
11.6. CONCLUSIONES ............................................................................................................. 165

BIBLIOGRAFÍA GENERAL .................................................................................................................... 167

 5

PREFACIO

Este libro ha sido concebido como un texto introductorio relacionado con los agentes antibacterianos
y su estudio desde el punto de vista de la Química Medicinal. Ofrece una visión general y concisa
sobre los principales temas que permiten al estudiante conocer las bases moleculares de la interacción
del agente antibacteriano con su objetivo biológico.
Luego de una introducción de las características generales de las células bacterianas, se analizan los
distintos agentes antibacterianos utilizando como principal fuente de clasificación su sitio de acción en
la célula. Cuando sea apropiado, se incluirán detalles de mecanismos de acción de los agentes
antibacterianos para ayudar a comprender los principios que subyacen en su acción sobre un objetivo
biológico particular en las bacterias. Además, cada capítulo sobre un grupo y subgrupo de antibióticos
o antibacterianos examina también distintos aspectos de las relaciones estructura-actividad que
permiten entender cómo, variaciones estructurales determinadas, pueden afectar un efecto
farmacológico.
En el área de la lucha contra las bacterias, resulta fundamental la comprensión de los mecanismos de
resistencia a la acción de los fármacos. Los avances producidos en los últimos años en la identificación
de tales mecanismos de resistencia bacteriana, ha abierto el camino para el diseño de nuevos agentes
antibacterianos adaptados para superar dicha resistencia.
Otra característica que se destaca en este libro es la importancia de la síntesis industrial de
antibacterianos, la cual difiere totalmente de la síntesis a escala de laboratorio y en la que deben
tenerse en cuenta tanto los requerimientos económicos como ambientales. La síntesis asimétrica a
gran escala es también un tema crucial para la obtención de fármacos enantioméricamente puros.
Este libro ha sido confeccionado por el cuerpo docente del Área de Química Medicinal, Departamento
de Química Orgánica de la Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas de la Universidad
Nacional de Rosario, a partir de bibliografía actualizada y tomado como base, en algunos aspectos,
los apuntes redactados por el Profesor Oreste A. Mascaretti, anterior Titular del Área. El Dr. Mascaretti
fue el primer Profesor de Química Farmacéutica de la Facultad y uno de los pioneros en el desarrollo
de la Química Medicinal en Argentina. El Dr. Mascaretti falleció el 27 de Noviembre de 2006 y durante
sus más de veinte años en el cargo formó un gran número de docentes-investigadores que hoy en día
desarrollan sus actividades tanto en el ámbito académico como industrial. En 1993 recibió el Premio
Konex-Diploma al Mérito como uno de los cinco más destacados científicos en Química Orgánica de
la década 1983-1993.
 6

Esperamos que este libro sea de utilidad no sólo para estudiantes de Química Medicinal sino también
para quienes están interesados en aprender o ampliar sus conocimientos en un aspecto fundamental
de los fármacos antibacterianos como es la comprensión a nivel molecular de los procesos que
explican sus efectos biológicos.

Plantel Docente del Área Química Medicinal,

Departamento de Química Orgánica,
Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas.
Universidad Nacional de Rosario
2018

*Ilustración de Tapa: Micrografía electrónica de un glóbulo blanco fagocitando una cepa de

Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA).
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ABREVIATURAS

6-APA ácido 6 β-aminopenicilánico

7-ACA ácido 7-aminocefalosporánico
AA aminoácido
ADN ácido desoxiribonucleico
AMP monofosfato de adenosina
ARN ácido ribonucleico
ARNm ácido ribonucleico mensajero
ARNr ácido ribonucleico ribosómico
ARNt ácido ribonucleico de transferencia
ATP trifosfato de adenosina
CAT cloranfenicol acetil transferasas
CIM concentración inhibitoria mínima
DHFR dihidrofolato reductasa
FDA Administración de Alimentos y Medicamentos (del inglés: Food and drug
administration)
FH2 dihidrofolato
FH4 ácido tetrahidrofólico
fMet-ARNt N-formilmetionil- ácido ribonucleico de transferencia
IC50 concentración inhibitoria 50
IM intramuscular
IV intravenosa
Met-ARNt metionil - ácido ribonucleico de transferencia
MLEB macrólidos, lincosamidas y estreptograminas del tipo B
MRSA Staphylococcus aureus resistente a la meticilina
PABA ácido p-amino benzoico
PBP penicillin binding protein /proteína de unión a penicilinas
PEP fosfoenolpiruvato
SAM 5-adenosilmetionina
SAR relación estructura actividad (del inglés: Structure activity relationship)
UDP uridina-5'-difosfato
UDP-GNAc UDP-N-acetilglucosamina
UTP uridina-5'-trifosfato
VRE resistencia de enterococos a vancomicina (del inglés:vancomycin resistant
enterococci)
8
 9

CAPÍTULO 1

INTRODUCCIÓN A LA ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LA CÉLULA

BACTERIANA
Existen una gran diversidad de bacterias que habitan en el cuerpo humano y se pueden encontrar
como componentes normales de la flora, como patógenos oportunistas o patógenos verdaderos. Cada
bacteria tiene su fisiología única y vías metabólicas propias que le permiten sobrevivir y reproducirse
en su hábitat particular. La correcta identificación y la caracterización (intracelular o extracelular) de
las especies de bacterias patógenas que causan infecciones en los seres humanos es crítica para el
correcto tratamiento con agentes antibacterianos. La capacidad de las bacterias para cambiar
rápidamente, adquirir nuevos genes, y producir mutaciones presenta continuos desafíos para el
bacteriólogo en su trabajo de aislar y caracterizar a estos microorganismos que causan enfermedades
en los seres humanos. La taxonomía bacteriana se refiere a la clasificación y agrupamiento de las
bacterias. Se basa en similitudes y diferencias fenotípicas (observables) y genotípicas (genéticas). Los
niveles formales de la clasificación bacteriana en subgrupos, cada vez más pequeños, son: reino,
división, clase, orden, familia, tribu, género y especie. Para ejemplo, Staphylococcus (género) aureus
(especie) pertenecen a la familia Micrococcaceae.

1.1. UNA VISIÓN GENERAL DE LAS CÉLULAS COMO LA UNIDAD BÁSICA DE LA VIDA

Un examen microscópico de cualquier organismo revela que se compone de estructuras contenidas

por membranas llamadas células. La célula es la unidad estructural y funcional fundamental de todos
los organismos vivos. Todas las células tienen, ya sea un núcleo o un nucleoide, en que el genoma
[conjunto completo de genes, compuesto de ADN (ácido desoxirribonucleico)] es almacenado y
replicado.

Los contenidos encerrados por la membrana plasmática constituyen el citoplasma y la porción líquida
del citoplasma se llama citosol. Las células están compuestas de moléculas pequeñas,
macromoléculas y organelas. De los muchos tipos diferentes de moléculas que constituyen las
diversas organelas y el citosol, el agua es la más abundante. Por lo tanto, la mayoría de los
componentes están esencialmente en un entorno acuoso. Excepto por el agua, la mayor parte de las
moléculas que se encuentran en la célula son macromoléculas, que se pueden clasificar en cuatro
diferentes categorías: lípidos, hidratos de carbono, proteínas y ácidos nucleicos.
 10

1.2. LAS CÉLULAS EUCARIOTAS Y PROCARIOTAS

Las células se dividen en dos clases principales, clasificadas dependiendo de la presencia o ausencia
de un núcleo.

Las células eucariotas tienen un núcleo en el que el material genético está separado del citoplasma.
Eucariotas (del griego eu, que significa "verdadero" y karyon, que significa "núcleo") se encuentran en
las algas, hongos (por ejemplo, levaduras, mohos), protozoos, plantas y animales. Las células
procariotas que incluyen los diversos tipos de bacterias (eubacterias) y archae (arqueobacterias) no
tienen una envoltura nuclear definida. Los procariotas (del griego pro, que significa "antes") tienen un
nucleoide (la región de la célula que contiene el ADN) en lugar de un núcleo envuelto. Las procariotas
tienen una estructura relativamente simple y son siempre unicelulares (aunque pueden formar
colonias de células independientes). Las células eucariotas, que pueden conformar organismos tanto
multicelulares como unicelulares, son más complejas que las procariotas.

1.2.1. La célula eucariota

Las células eucariotas incluyen organismos multicelulares y muchas especies unicelulares. Tienen un
diámetro de 10 a 100 µm y por lo tanto poseen un volumen entre mil y un millón de veces más grande
que el de una célula procariota. El examen microscópico de una célula eucariota revela una membrana
denominada membrana celular o membrana plasmática (Figura 1.1).

1.2.1.1 La membrana plasmática.

Todas las células, tanto procariotas como eucariotas, están rodeadas por una membrana plasmática
que define los límites de la célula y separa sus contenidos internos del medio ambiente. La membrana
plasmática es una lámina semipermeable compuesta de lípidos y proteínas. La estructura fundamental
de la membrana es una bicapa de fosfolípidos, que es impermeable a la mayoría de las moléculas
solubles en agua. Por lo tanto, el paso de los iones y la mayoría de las moléculas biológicas a través
de la membrana plasmática está mediado por proteínas, que son responsables de la circulación
selectiva de sustancias dentro y fuera de la célula. La superficie externa de una célula está en contacto
con otras células, el fluido externo, los solutos y las moléculas de nutrientes.

La membrana plasmática de todas las células eucariotas contiene muchos transportadores, o sea,
proteínas que se insertan a través de la membrana y llevan nutrientes al interior de la célula y productos
varios al exterior. Las células eucariotas también tienen proteínas de superficie de membrana
(receptores de señal) con sitios de unión muy específicos para moléculas de señalización extracelular
(ligandos del receptor). Las proteínas integrales de membrana se insertan en la bicapa lipídica,
mientras que las proteínas periféricas están unidas a la membrana por interacciones proteína-proteína.
La mayoría de las proteínas integrales de membrana son proteínas transmembrana, con porciones
 11

expuestas en ambos lados de la bicapa lipídica. Las porciones extracelulares están generalmente
glicosiladas, como lo están las proteínas de membrana periféricas.

Figura 1.1. Célula eucariota

1.2.1.2. Estructuras citoplásmicas

Dentro del citoplasma hay un número de macromoléculas y otras estructuras más grandes y complejas.
Algunas de las estructuras son membranosas y se denominan organelas. Las organelas que se
encuentran comúnmente en células animales incluyen el núcleo, las mitocondrias, el retículo
endoplasmático, el aparato de Golgi, los lisosomas y peroxisomas (ver Figura 1.1). Además de las
organelas, las células animales contienen una colección de estructuras filamentosas denominada el
citoesqueleto, lo cual es importante en el mantenimiento de la integridad tridimensional de la célula.

1.2.1.3. Núcleo

El núcleo de la célula eucariota es bastante complejo en su estructura y la actividad biológica en

comparación con el relativamente sencillo nucleoide de los procariotas. La envoltura nuclear separa
los contenidos del núcleo del citoplasma y proporciona el marco estructural del núcleo.

El núcleo sirve tanto como depósito de información genética como de centro de control de la célula.
Los genomas de la mayoría de los eucariotas son más grandes y más complejos que los de los
procariotas. La comprensión de la estructura y función del gen es fundamental para la apreciación de
la organización nuclear de los eucariotas. En términos moleculares, un gen es toda secuencia de ácido
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nucleico que es necesaria para la síntesis de un polipéptido o un ácido ribonucleico (ARN) [por ejemplo,
ARN ribosomal (ARNr) y de transferencia (ARNt)].

Dentro del núcleo, la información genética (codificada en las secuencias de bases de moléculas de
ADN) se transcribe en moléculas de ARN, que son transportadas a los ribosomas donde tiene lugar la
traducción del ARN en proteínas.

Los cromosomas de las células eucariotas contienen macromoléculas lineales de ADN dispuestas en
forma de doble hélice. El ADN de las eucariotas está asociado con proteínas llamadas histonas que
se unen al ADN en forma de espiral mediante interacciones iónicas que generan una masa densa
llamada cromatina. Las moléculas de ADN sólo son visibles con un microscopio común cuando la
célula está sufriendo la etapa de división.

Una característica única del núcleo es que se desarma y rearma cada vez que la célula se divide. En
el comienzo de la mitosis la envoltura nuclear se rompe, dando por resultado la liberación de la mayor
parte de los contenidos del núcleo al citoplasma. Al final de la mitosis se vuelve a formar la envoltura
nuclear alrededor de los conjuntos separados de los cromosomas hijos.

1.2.1.4. Los lisosomas

Los lisosomas que sólo se encuentran en células animales, son vesículas esféricas limitadas por una
membrana de doble capa. Los lisosomas contienen enzimas capaces de digerir proteínas,
polisacáridos, ácidos nucleicos y lípidos. Estos funcionan como centros de reciclaje celulares,
destruyendo moléculas introducidas en la célula por endocitosis y fragmentos de células extrañas
generadas por fagocitosis. Estos materiales entran selectivamente en el lisosoma y se degradan en
componentes más simples (péptidos pequeños, aminoácidos, monosacáridos, ácidos, etc.).

1.2.1.5. Las mitocondrias

Las mitocondrias (s., mitochondrium) se encuentran en la mayoría células eucarióticas y están

rodeadas por dos membranas, una membrana externa separada por un espacio intermembrana de
una membrana interior. La membrana interna contiene numerosos dobleces llamadas crestas que se
extienden hacia el interior (o matriz) de las organelas. Las mitocondrias son los principales
responsables de la generación de energía derivada de la descomposición de lípidos y carbohidratos.
La principal función de las mitocondrias es la oxidación de metabolitos y la obtención de trifosfato de
adenosina (ATP) mediante la fosforilación oxidativa. Además, la matriz mitocondrial contiene su ADN
específico, que codifica ARNt, ARNr y algunas proteínas. El conjunto de las mitocondrias incluye
proteínas codificadas por sus propios genomas y traducido en la organela, así como proteínas
codificadas por el genoma nuclear, procedentes del citosol.
 13

1.2.1.6. Los ribosomas

Los ribosomas son los sitios de síntesis de proteínas tanto en células procariotas como eucariotas.
Los ribosomas suelen ser designados de acuerdo con sus coeficientes de sedimentación, que son
medidos por la unidad Svedberg, S, y reflejan la velocidad a la que una molécula sedimenta en un
solvente.

Los ribosomas procariotas y eucariotas están compuestos por dos subunidades distintas, conteniendo
cada uno proteínas características y ARNr. Las estructuras ribosómicas generales de procariotas y
eucariotas son similares, aunque difieren en algunos detalles. En la célula eucariota, los ribosomas
tienen un coeficiente de sedimentación de 80S. La subunidad pequeña (40S) de los ribosomas
eucariotas se compone de ARNr 18S y aproximadamente 30 proteínas. La subunidad mayor (60S)
contiene el ARNr 28S, 5.8S y 5S y alrededor de 45 proteínas. En la célula eucariota, los ribosomas
tienen un coeficiente de sedimentación de 70S. La subunidad grande (50S) del ribosoma de las
procariotas contiene dos moléculas de ARNr: 5S y 23S, y aproximadamente 30 proteínas; mientras
que la subunidad pequeña (30S) contiene un ARNr 16S y 21 proteínas.

1.2.2. La célula procariota

Una célula procariota típica presenta una serie de componentes con distintas funciones. La Tabla 1.1
resumen las funciones de los componentes de la estructura bacteriana.

Una célula bacteriana, como la de Escherichia coli, presenta la ventaja de su fácil cultivo en una
solución acuosa de glucosa y algunos iones inorgánicos. En este medio, a 37°C, duplica su masa
celular y se divide en aproximadamente 60 minutos.

Las células bacterianas son extremadamente pequeñas, por lo que solamente pueden observarse al
microscopio óptico y al microscopio electrónico. El tamaño de las células es ampliamente variable. En
el caso de células grandes, tales como el Bacillus anthracis, el tamaño es de 1.0 a 1.3 µm x 3.0 a 10
µm; mientras que células pequeñas, tales como Pasteurella tularensis, el tamaño es de 0.2 µm x 0.2
a 0.7 µm. Las células bacterianas tienen formas características, denominadas cocos (forma esférica
u ovoide), bacilos (forma cilíndrica), algunos bacilos curvados que presentan formas espiraladas se
denominas espiros. A veces las células se presentan en forma de agregados (pares, cadenas,
tétradas, conjuntos o “clusters”, etc). Las formas y tipos de agregados son típicas de un determinado
género y se han usado como criterio para la identificación de bacterias.

1.2.3. Comparación entre células procariotas y eucariotas

Las células procariotas se diferencian de las células eucariotas en una serie de aspectos, mientras
que en otros presentan similitudes. Las diferencias son las que hacen posible la selectividad de acción
de los antibacterianos que afectan las células procariotas sin perturbar significativamente a las células
eucariotas.
 14

Tabla 1.1 Funciones de los componentes de la célula procariota.

Membrana Es la estructura celular que define el límite del citoplasma con el exterior, es
citoplasmática o una barrera selectivamente permeable que permite el paso de nutrientes y
membrana por donde se produce la eliminación de sustancias de desechos.
plasmática

Los ribosomas son pequeñas partículas compuestas de ARN y proteínas.

Ribosomas Los ribosomas constituyen una parte esencial de la síntesis proteica.

En las células procariotas se encuentra una única molécula de ADN. Si bien

el ADN se encuentra en forma más o menos libre, visto al microscopio
Nucleoide
electrónico se detecta en una forma agregada a la que se denomina
nucleoide.

Solamente se encuentra en las bacterias Gram negativas, y contiene

Espacio
enzimas hidrolíticas para el procesamiento de nutrientes y que luego
Periplasmático
atravesarán la membrana citoplasmática e ingresarán al interior de la célula.

Es una estructura rígida situada por fuera de la membrana citoplasmática

que confiere la forma a la célula y la protege de cambios osmóticos. Todas
Pared celular
las bacterias con excepción de los micoplasmas, poseen pared celular y el
componente común es el peptidoglicano o mureína.

Cápsulas Aportan resistencia a la fagocitosis, permiten adherencia a superficies.

Permiten la unión a las superficies, intervienen en el proceso de conjugación

Pilis o fimbrias
entre bacterias.

Muchas bacterias son capaces de desplazarse. Los flagelos son los

Flagelos
responsables de tal movimiento.

En la tabla 1.2 se realiza la comparación entre ambos tipos de células. Entre las principales diferencias
tenemos que las células procariotas no contienen ribosomas 80S ni organelas como mitocondrias,
lisosomas, retículo endoplasmático o el aparato de Golgi. Tampoco contienen un núcleo definido. En
cambio, poseen un ribosoma 70S y un único cromosoma circular bicatenario de replicación amitótica
y una pared celular (peptidoglicano).
 15

Tabla 1.2 Comparación de las células procariotas y eucariotas

PROPIEDADES PROCARIOTAS EUCARIOTAS

(BACTERIAS)

Estructura nuclear y función

Membrana nuclear Ausente Presente

Nucléolo Ausente Presente

Una sola molécula que no

Presente en varios
está acomplejada con
ADN cromosomas, generalmente
histonas (otros ADN se
acomplejados con histonas
encuentran en plásmidos)

División No mitótica Mitosis

Citoplasma (Estructura y organización)

Membrana citoplasmática Carece de esteroides Esteroides presentes

Ribosomas 70S 80S

Organelas membranosas Ausentes Varias

Sistema respiratorio No poseen mitocondrias En las mitocondrias

Pigmentos fotosintéticos No poseen cloroplastos En los cloroplastos

Presente en plantas, algas y

Presente. El peptidoglicano es hongos. Ausente en animales
Pared celular
el componente principal y en la mayoría de los
protozoarios

Formas de movimiento

Flagelos de tamaño
Flagelo o cilia de tamaño
Movimiento flagelar submicroscópico. El flagelo
microscópico. No rota
tiene movimiento de rotación

Microtúbulos Ausentes Presentes

Tamaño Menos de 2μm de diámetro Entre 2 y 100 μm de diámetro

 16

1.3. CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS

Las paredes celulares de las bacterias permiten resistir a la presión de turgencia; consecuencia de la
concentración de solutos disueltos dentro de la célula, además son las responsables de la forma y
rigidez de la célula. Las diferencias que existen en la estructura de las paredes celulares, permite
distinguir a las bacterias en Gram positivas [Gram (+)] o Gram negativas [Gram (-)] mediante una
tinción diferencial denominada tinción de Gram.

El procedimiento de coloración comienza cuando se coloca con un ansa una pequeña cantidad de
células bacterianas sobre un portaobjetos de vidrio y éste se pasa sobre la llama del mechero
(flameado) hasta secarlo. Luego se coloca sobre el portaobjetos una solución del colorante violeta de
genciana, se lava con agua y se agrega solución Lugol (IK + I 2) que actúa como mordiente fijando el
colorante. El portaobjeto se lava nuevamente con agua y se trata con etanol o una mezcla etanol-
acetona. Las células que permanecen violeta se dice que son Gram positivas y las que se decoloran
se dice que son Gram negativas. Pocos años más tarde del desarrollo de la técnica de Gram, el
patólogo alemán Carl Weigert agregó una etapa más, que es la recoloración de la Gram (-) con
safranina (Cuadro 1.1). En dicha tinción se forma dentro de las células un complejo cristal insoluble
violeta-yodo que en el caso de las Gram (-) puede extraerse con alcohol, pero no en las Gram (+).

Cuadro 1.1. Secuencia de pasos en el procedimiento de coloración diferencial de Gram.

BACTERIAS

SECUENCIA Gram positivas Gram negativas

1 - Sin colorear

2 - Violeta de genciana

3 - Ioduro de potasio

4 - Decoloración con una

mezcla de alcohol-acetona

5 - Coloración con
safranina

El alcohol deshidrata las bacterias Gram (+) que poseen una pared celular muy gruesa con varias
capas de peptidoglicano. Esto provoca el cierre de los poros de la pared impidiendo la salida del
 17

complejo cristal violeta-yodo. En las bacterias Gram (-), el alcohol penetra rápidamente en la capa
externa que es rica en lípidos y la fina capa de peptidoglicano no impide el paso del disolvente, por lo
que el complejo se extrae fácilmente.

La clasificación de estos dos grupos de bacterias se debe a la complejidad de la estructura celular de

las bacterias Gram (-), que presentan tres capas principales (Figura 1.3): a) La membrana
citoplasmática, que rodea el citoplasma de la célula y contiene proteínas y fosfolípidos. La membrana
citoplasmática sirve como una barrera de permeabilidad selectiva para las sustancias que entran o
salen de la célula, también se considera el sitio donde se produce la energía de la célula. Dentro del
citoplasma celular también se encuentran los cromosomas, ribosomas y otras estructuras internas, b)
La pared celular (peptidoglicano), es un polímero entrecruzado relativamente delgado y es
responsable de mantener la forma del organismo, y está localizada dentro del espacio periplásmico.

Figura 1.3. Estructura de bacterias Gram negativas

El espacio periplásmico, localizado entre la membrana externa y la membrana citoplasmática contiene

proteínas periplásmaticas que incluyen: proteínas de enlace para sustratos específicos, enzimas
hidrolíticas y enzimas detoxificantes, y c) La capa externa o capa L (Lipopolisacárido), representa
una segunda bicapa lipídica; sin embargo, hay que destacar que no consta solamente de fosfolípidos
como la membrana citoplasmática, sino que contiene polisacáridos y proteínas, lo que justifica su
nombre. También sirve como una barrera de permeabilidad de la célula, ya que ayuda a retener
proteínas en el espacio periplasmático. Contiene proteínas embebidas, llamadas porinas o poros,
 18

estos canales llenos de agua facilitan el transporte de nutrientes y sustancias de bajo peso molecular
dentro de la célula, incluyendo agentes antimicrobianos. Las bacterias varían en el número y tipo de
porinas que contienen.

Los polisacáridos; localizados en la superficie de la célula, son los componentes esenciales de las
endotoxinas (estos contribuyen a la capacidad de la bacteria para causar enfermedad), y son la causa
de la carga neta de las bacterias Gram (-). Las familias representativas de este grupo de bacterias son:
Enterobacteriaceae, No Enterobacteriaceae, Haemophilus spp, Neisseria/Moraxella y Anaerobios.

Por otro lado, las bacterias Gram (+) son menos complejas debido a que únicamente contienen dos
capas: la membrana citoplasmática y la capa de peptidoglicano (Figura 1.4). La membrana
citoplasmática, el citoplasma, y otros componentes internos son similares tanto en bacterias Gram (+)
como en bacterias Gram (-). Sin embargo, la pared celular es más gruesa que la de las bacterias Gram
(-), y es la responsable de mantener la forma del organismo.

Dentro de la pared celular se encuentran los ácidos teicoicos, que son polímeros que están
entrelazados en la capa de peptidoglicano y se extiende en forma de cilios más allá de la superficie de
las células Gram (+). Estos son también antígenos importantes de superficie en aquellos organismos
que los poseen. Las familias representativas de este grupo de bacterias son: Staphylococcus,
Enterococcus spp., y Streptococcus spp.

Figura 1.4. Estructura de bacterias Gram positivas

 19

1.3.1. Peptidoglicano

En ambos tipos de bacterias el principal componente de la pared celular es el polímero peptidoglicano,

que es el responsable de la forma, integridad e insolubilidad de las células bacterianas. En bacterias
Gram (+) el peptidoglicano representa hasta el 80% del peso total de la pared celular. En cambio, en
las bacterias Gram (-), si consideramos también la membrana externa, el porcentaje de peptidoglicano
es mucho menor. La presencia de la membrana externa hacen a las bacterias Gram (-), menos
permeables y tales propiedades de permeabilidad juegan un rol muy importante en la resistencia de
muchas bacterias a los antibacterianos porque impiden el acceso de esas moléculas al interior de la
célula y por ende, la llegada al sitio de acción. La función de la pared celular en ambos tipos de
bacterias es formar un recubrimiento rígido por encima de la membrana plasmática. La membrana
plasmática encierra generalmente un volumen hipertónico con respecto al ambiente en el que se
desarrolla el microorganismo. Aunque la integridad de la membrana citoplasmática es crítica para el
mantenimiento del gradiente osmótico entre el microorganismo y su medio, no es suficientemente
fuerte para mantener por sí sola el contenido citoplasmático frente a un cambio osmótico, de manera
que la pared celular previene la ruptura de la membrana citoplasmática. La consecuencia de la
formación de una pared celular no entrecruzada conduce a que enzimas bacterianas superficiales –
llamadas autolisinas- produzcan la ruptura de las paredes celulares defectuosas, creando puntos
“flojos” por donde se produce el vaciamiento del contenido citoplasmático, para el caso de bacterias
que crecen en medios hipotónicos (Figura 1.5). Cuando la bacteria crece en un medio isotónico con
respecto al contenido citoplasmático, la exposición a un antibacteriano que inhiba la biosíntesis de la
pared celular conduce a la formación de esferoplastos o protoplastos, es decir bacterias que carecen
de dicha pared celular. Por consiguiente, estas bacterias no pueden reproducirse y no son viables
(Figura 1.5).

Se denominan protoplastos las células bacterianas a las que se ha desprovisto totalmente de pared
celular [caso que ocurre con las bacterias Gram (+)], mientras que esferoplastos son aquellas células
bacterianas que poseen restos de pared [caso que ocurre en bacterias Gram (-)].

1.3.1.1. Biosíntesis del peptidoglicano

La biosíntesis de una unidad de peptidoglicano procede por una serie de reacciones que se producen
en el citoplasma, la membrana citoplasmática y el exterior de la célula. Si bien hay variantes menores
de acuerdo al tipo de bacteria, existe una secuencia general válida tanto para Gram (+) como en
bacterias Gram (-). Se pueden distinguir tres etapas en el proceso de síntesis del peptidoglicano. La
primera etapa se lleva a cabo en el citoplasma y se trata de la biosíntesis del componente
monomérico principal del polímero peptidoglicano: la uridina difosfato N-acetil muramil pentapéptido
(UDP-MurNAc-pentapéptido).
 20

Figura 1.5. Acción de las autolisinas o inhibidores de la síntesis de la pared celular sobre la
célula bacteriana.

En la segunda etapa la unidad precursora es llevada a la membrana citoplasmática, produciéndose

allí una serie de modificaciones que completan la estructura del monómero y la unen a la cadena
polimérica en crecimiento para formar la estructura lineal del polímero. La tercera etapa se lleva a
cabo en el periplasma (exterior de la membrana citoplasmática) y en ella se produce el
entrecruzamiento de las cadenas poliméricas para darle rigidez a la estructura de la pared celular.

Primera etapa: La primera etapa es catalizada por enzimas solubles en el citoplasma. La reacción
inicial es la formación de la UDP-N-acetilglucosamina (UDP-NAcG) a partir de N-acetilglucosamina-1-
fosfato y uridina-5'-trifosfato (UTP) (Esquema 1.1).

A continuación, el fosfoenolpiruvato (PEP) se une a la posición 3 del residuo de N-acetilglucosamina,

en una reacción catalizada por una transferasa (UDP-NAcG transferasa), para producir UDP-N-
acetilglucosamina-3-piruvil éter. En una reacción subsiguiente, el resto enolpiruvil éter se reduce al D-
lactato correspondiente, bajo catálisis de una reductasa, para producir ácido UDP-N-acetilmurámico
 21

(UDP-MurNAc) (Esquema 1.2). La conversión a UDP-N-acetilmuramil tripéptido se produce por adición

secuencial al grupo lactil de L-alanina (L-Ala), ácido D-glutámico (D-Glu), L-lisina (L-Lis). En cada caso,
la adición es catalizada por una ligasa específica lo que requiere un catión divalente (Mn 2+ o Mg2+) y
la hidrólisis de ATP para su actividad. En el siguiente paso, el UDP-N-acetilmuramil pentapéptido se
obtiene por adición del dipéptido preformado D-alanil-D-alanina. Para la síntesis de este dipéptido, es
necesario primero la conversión de L-alanina en D-alanina, lo cual es catalizado por la enzima alanina
racemasa; seguida del acoplamiento entra las dos unidades de D-alanina, catalizada por la D-alanil-
D-alanina sintetasa para obtener la D-alanil-D-alanina.

Esquema 1.1. Secuencia de reacciones iniciales de la primera etapa de la

biosíntesis de la pared celular de las bacterias (Representada por S. aureus)

Finalmente, la adición de D-alanil-D-alanina al UDP-N-acetilmuramil tripéptido, catalizada por una

ligasa lleva a la obtención del UDP-N-acetil muramil pentapéptido, compuesto con el que termina la
etapa citoplasmática de la biosíntesis de la pared celular.

Segunda etapa: La segunda etapa de la biosíntesis del peptidoglicano implica la transferencia del
UDP-N-acetil muramil pentapéptido desde los sitios intracelulares a la membrana citoplasmática donde
 22

se producirá la incorporación del peptidoglicano en crecimiento. Los pasos en la membrana implican

primero una translocasa que cataliza la transferencia del UDP-N-acetil muramil pentapéptido al aceptor
undecaprenil pirofosfato unido a la membrana citoplasmática, generando el undecaprenil pirofosfato-
N-acetil-muramil pentapéptido (Esquema 1.3)

El undecaprenol o bactoprenol es un compuesto de once unidades de isopreno cuyo hidroxilo terminal

está esterificado por un fosfato inorgánico. Este fosfolípido está anclado a la membrana citoplásmica
a través de su extremo no polar, actuando como un vehículo lipofílico que juega un papel central en
esta segunda etapa.

A continuación se añade una unidad de N-acetilglucosamina al undecaprenil pirofosfato-N-acetil-

muramil pentapéptido, para formar la unidad disacárida [undecaprenil pirofosfato-N-acetil-muramil
pentapéptido-β-(1-4)-N-acetil glucosamina]. En el caso de S. aureus esta estructura es modificada por
la adición al grupo amino de la cadena lateral de la L-lisina, de cinco moléculas de glicina, de manera
secuencial. De esta manera se completa la unidad disacárida para añadirse al peptidoglicano en
crecimiento.

En el paso siguiente, la molécula del disacárido se separa del fosfolípido y se une covalentemente a
una molécula del peptidoglicano en crecimiento. Esta reacción es catalizada por una transglicosilasa.
Durante este proceso las unidades monoméricas se van uniendo una a otra para formar el polímero
lineal. Se ha postulado que la función del lípido intermediario es transportar las unidades monoméricas
a través de la membrana celular hacia el exterior de la célula donde se completa la biosíntesis por el
entrecruzamiento entre las cadenas de peptidoglicano.

Tercera etapa: La tercera etapa del proceso de biosíntesis de la pared celular tiene lugar en el exterior
de la membrana celular. La enzima transpeptidasa cataliza el entrecruzamiento de las cadenas lineales
del peptidoglicano. Sólo cuando estos entrecruzamientos se llevan a cabo el peptidoglicano se
convierte en una matriz insoluble capaz de mantener la integridad estructural de la pared celular.

Estudios detallados sobre la acción de las transpeptidasas de una serie de bacterias han establecido
que la reacción de transpeptidación comienza con la escisión del enlace entre D-alanil-D-alanina para
formar una acil enzima, liberando la unidad terminal de D-alanina. Esta reacción es seguida por una
segunda reacción en la que esta acil enzima reacciona con el grupo amino terminal de la glicina de la
pentaglicina (ataque nucleofílico) para formar un nuevo enlace peptídico, uniéndose de esta manera
dos cadenas lineales de polímero peptidoglicano (reacción de transpeptidación) (Esquema 1.4).

La compleja serie de reacciones catalizadas por enzimas que están implicadas en la biosíntesis de
peptidoglicano entrecruzado proporcionan muchos sitios potenciales para la inhibición mediante
antibacterianos específicos. Varios de estos agentes antibacterianos serán discutidos en los próximos
capítulos de este libro.
 23

Esquema 1.2. Secuencia de reacciones finales de la primera etapa de la biosíntesis de

la pared celular de las bacterias (Representada por S. aureus)
 24

Esquema 1.3. Secuencia de reacciones de la segunda etapa de la biosíntesis de la pared

celular de las bacterias (Representada por S. aureus)
 25

Esquema 1.4. Secuencia de reacciones de la tercera etapa de la biosíntesis de la pared celular

de las bacterias (Representada por S. aureus)
26
 27

CAPITULO 2

INTRODUCCIÓN A LOS AGENTES ANTIBACTERIANOS

2.1. AGENTES ANTIBACTERIANOS

Los agentes antibacterianos son sustancias químicas capaces de inhibir el desarrollo de las bacterias
(bacteriostáticos), o causar su muerte (bactericidas). Estos agentes comprenden a:

Antibióticos: Son sustancias producidas por microorganismos (hongos, bacterias), que como tal o
modificadas químicamente, inhiben el crecimiento bacteriano (bacteriostáticos) o su supervivencia
(bactericidas). Generalmente son selectivos y ejercen su acción sobre las células procariotas
(bacterias) sin afectar las células del paciente (eucariotas). Ej: Tetraciclinas, aminoglicósidos, β-
lactamas, etc.

Antibacterianos sintéticos: Son compuestos químicos que se obtienen por síntesis total, es decir no
han sido descubiertos de fuentes naturales o por modificación de compuestos obtenidos de fuentes
naturales y que inhiben el crecimiento bacteriano (bacteriostáticos) o su supervivencia (bactericidas).
Ej: Sulfas, fluoroquinolonas, trimetoprima, etc.

Desinfectantes: Son compuestos químicos que se utilizan para eliminar o inhibir el crecimiento de
diversos microorganismos y que se aplican sobre objetos y materiales inanimados, como instrumentos
y superficies (pisos, paredes, etc.). Se caracterizan por ser tóxicos, irritantes, corrosivos. Por este
motivo no pueden utilizarse interna ni externamente en seres vivos.

Antisépticos: son sustancias que destruyen o inhiben el crecimiento de microorganismos y que se

aplican sobre tejidos vivos (uso externo). Ej: agua oxigenada, yodo, alcohol, etc.

2.1.1. Aspectos históricos del desarrollo de agentes antibacterianos

La historia de las enfermedades infecciosas desde el comienzo hasta el final del Siglo XX estuvo
íntimamente relacionada con los compuestos que se utilizaron para su erradicación. Particularmente,
los agentes antibacterianos evolucionaron desde los compuestos organoarsenicales, como el
salvarsan, más tarde las sulfas, y posteriormente en la década del cuarenta, el inicio de la
comercialización de las penicilinas, dio comienzo a la llamada “Era de los antibióticos” (Figura 2.1).

Desde la década del cuarenta hasta el fin de siglo no se produjeron descubrimientos significativos en
esta lucha contra las bacterias. Sólo pueden mencionarse las quinolonas y fluoroquinolonas como
 28

nuevas estructuras químicas con actividad antibacteriana. Esto tiene que ver con el hecho de que, a
partir de la segunda mitad del siglo pasado, se expandió la idea de que las enfermedades infecciosas
habían dejado de ser la principal causa global de mortalidad en los países desarrollados. Sin embargo,
durante los últimos treinta años surgieron una serie de hechos que no permitieron seguir manteniendo
la ideología de una ‘batalla definitiva” contra las bacterias: algunas infecciones extrahospitalarias no
sólo han aumentado, sino que han sufrido una auténtica metamorfosis que las hace más variadas y
de diagnóstico más difícil. Ciertas infecciones nosocomiales, producidas por auténticos “acorazados
microbianos”, están en aumento y la aparición incesante de cepas resistentes, como consecuencia del
uso masivo e indiscriminado de los antibióticos, ha adquirido ya proporciones alarmantes en muchos
casos.

Esto ha llevado a que se

recomiende, por un lado,
un uso más racional de los
agentes antibacterianos, y
por el otro el desarrollo de
nuevos, más potentes y
selectivos agentes
terapéuticos para la lucha
contra las bacterias.

Los avances logrados en

las últimas décadas en
biología molecular y
tecnología genética han
producido cambios
importantes en las ciencias
biomédicas. Los
desarrollos en el área de la
genómica y proteómica han
llevado a la identificación
de un sinnúmero de nuevos
objetivos terapéuticos y
han mejorado
significativamente nuestro
Figura 2.1. Evolución histórica de los agentes antibacterianos
entendimiento sobre los
mecanismos a nivel
molecular que las bacterias utilizan en defensa de su integridad estructural y celular frente a la
 29

presencia de agentes antibacterianos. Las compañías farmacéuticas y los laboratorios académicos

han comenzado desde hace algunos años una serie de programas dirigidos al descubrimiento, diseño
y desarrollo de nuevos agentes antibacterianos que afecten diferentes objetivos biológicos
relacionados con procesos vitales para la supervivencia y/o diseminación de las células bacterianas.

2.1.2. Clasificación por estructura química

Los antibióticos y antibacterianos sintéticos fueron agrupados sobre la base de su estructura química
y su mecanismo de acción.

2.1.2.1. Antibióticos

Esta clasificación es la más útil para establecer las relaciones entre la estructura química y la actividad
biológica (SAR). Frecuentemente un grupo se subdivide en subgrupos con respecto a características
estructurales similares.

Las clases y estructuras químicas de antibióticos y antibacterianos sintéticos de gran importancia

clínica que se discuten en este apunte son los siguientes:

Los β-Lactámicos:

Todos los antibióticos β-lactámicos se

caracterizan estructuralmente por tener una
amida cíclica (lactama) de cuatro miembros.
Penicilinas Cefalosporinas
Dentro de este grupo se encuentran las
peniclinas y cefalosporinas (Figura 2.2). Figura 2.2. Ejemplos de antibióticos β-lactámicos

Los aminoglicósidos:

Estructuralmente, los antibióticos aminoglicósidos

contienen dos o más aminoazúcares y aminociclitoles
unidos por puentes glicosídicos. Miembros
Gentamicina
representativos son estreptomicina, neomicina,
kanamicina, gentamicina (Figura 2.3), tobramicina y Figura 2.3. Ejemplo de antibiótico
amicacina entre otras.
aminoglicósidos

Los macrólidos:

Los antibióticos macrólidos son lactonas macrocíclicas que están unidas a dos monosacáridos (uno
de ellos es un azúcar amino). Los antibióticos macrólidos son sub-agrupados de acuerdo al tamaño
del anillo de la lactona macrocíclica, es decir si son de 14, 15 o 16 miembros. Son representantes de
los macrólidos de 14 miembros la eritromicina A (Figura 2.4), roxitromicina, claritromicina y
fluoritromicina. Los macrólidos de 16 miembros incluyen la miocamicina y midecamicina. La
 30

azitromicina pertenece al subgrupo de 15 miembros. Los antibióticos designados genéricamente como

tetraciclinas son derivados del sistema tetracíclico naftacenocarboxamida. Pertenecen a este grupo la
tetraciclina (Figura 2.5), clorotetraciclina, etc.

Eritromicina A Tetraciclina

Figura 2.4. Ejemplo de antibióticos macrólidos Figura 2.5. Ejemplo de antibiótico tetraciclina

Tetraciclinas:

Lincomicinas o Lincosamidas:

Pertenecen a este grupo la lincomicina y la

clindamicina (Figura 2.6), las cuales se
caracterizan por poseer en sus estructuras Clindamicina
un anillo pirrólinico sustituido y unido a un
Figura 2.6. Ejemplo de Lincomicina
derivado azufrado de una octosa.

Ansamacrólidos:

Este grupo de antibióticos se caracteriza

por poseer una cadena lateral alifática
macrocíclica que conecta dos posiciones no
adyacentes de un núcleo aromático. El
término “ansa” proviene del griego y
significa manija o agarradera. A este grupo
pertenece la Rifampicina (Figura 2.7) y
Figura 2.7. Ejemplo de antibiótico Ansamacrólido,
Rifamicina.
Rifampicina
 31

Glicopéptidos:

Todos los antibióticos de este grupo poseen una estructura peptídica cíclica y azúcares unidos a la
unidad peptídica. La vancomicina y la teicoplanina que pertenecen a este grupo son los únicos que se
usan en clínica médica (Figura 2.8).

Peptídicos:

Este nombre deriva del hecho de que estos antibióticos poseen una estructura cíclica formada por
aminoácidos unidos a través de uniones amida. En este grupo se encuentran las polimixinas y la
bacitracina (Figura 2.9).

Vancomicina

Figura 2.8. Ejemplo de antibiótico Figura 2.9. Ejemplo de antibiótico peptídico

glicopeptídico

Cloranfenicol:

Este antibiótico tiene la peculiaridad, entre los

compuestos naturales, de que contiene una fracción
nitrobenceno y proviene del ácido dicloroacético. La
forma biológicamente activa es la levorrotatoria
(Figura 2.10). Figura 2.10. Cloranfenicol
 32

Estreptograminas:

Estos antibióticos son macrolactonas y contienen algunos aminoácidos no naturales en su estructura.

Entre ellos se encuentran la quinupristina y la dalfopristina (Figura 2.11)

H 3C
N CH3 O
OH
N
O CH3 H
N CH3 O
N H3 C O O
HN CH 2CH3 NH N
O H3 C O N
O CH3 O SO3CH 3 O
O N S S O
H 3C O
O NH O H
N O
OH O H3 C N H
N CH3
SO3 CH 3

Quinupristina Dalfopristina

Figura 2.11. Ejemplos de estreptograminas

D-cicloserina: La cicloserina es la D-4-amino-3-isoxazolidona. Es un antibiótico de amplio espectro

producido por Streptococcus
orchidaceous. Es un antibiótico
estructuralmente análogo al
aminoácido D-alanina (Figura
2.12).
Figura 2.12.
Fosfomicina: Es el ácido 2R-
(3-metil-2-oxiranil)fosfónico. Es un antibiótico activo contra Gram (+) y Gram (-) (Figura 2.12).

2.1.2.2. Antibacterianos sintéticos

Como ya dijimos, los antibacterianos sintéticos son compuestos que se obtienen totalmente por
procesos de síntesis. Entre los más destacados podemos incluir (Figura 2.13):

Sulfas: Son estructuralmente derivados N-monosustituidos de la 4-aminobenceno sulfonamida, por

ejemplo, sulfametoxazol.

Diaminopirimidas: En este grupo se encuentra la trimetoprima.

 33

Sulfametoxazol Trimetoprima Furazolidona

Figura 2.13. Antibacterianos sintéticos destacados

Nitrofuranos: Son 5-nitrofuranos-2-sustituidos, por ejemplo furazolidona.

Quinolonas: Las quinolonas o

fluoroquinolonas son agentes
antibacterianos sintéticos
(Figura 2.14). El ácido nalidíxico
fue descubierto en la década de
1960 como un subproducto de
la purificación del fármaco Ácido Nalidíxico Ciprofloxacina
antimalárico, la cloroquina. Las
(QUINOLONA) (FLUOROQUINOLONA)
fluoroquinolonas se introdujeron
en clínica a mediados de los Figura 2.14. Ejemplo de Quinolonas
años 1980.

Oxazolidinonas: Las oxazolidinonas representan una nueva clase de agentes antibacterianos

sintéticos. El Linezolid fue aprobado en abril de
2000 para su comercialización por la Administración
de Alimentos y Medicamentos (FDA) en los Estados
Unidos (Figura 2.15). Por primera vez en muchos
años una nueva estructura química era utilizada en
terapias antibacterianas.
Figura 2.15. Linezolid

2.1.3. Clasificación por el mecanismo de acción

Los procesos metabólicos bacterianos (es decir, de las células procariotas) son diferentes de los
procesos bioquímicos de las células eucariotas y por esa razón se explica el concepto de toxicidad
selectiva de muchos antibióticos que son tóxicos para el microorganismo pero no para los seres
humanos o animales. Las bacterias para crecer y multiplicarse necesitan sintetizar biomoléculas tales
como proteínas y ácidos nucleicos. Los agentes antibacterianos interfieren con procesos específicos
 34

Figura 2.16. Agentes antibacterianos en base a su mecanismo de acción

que son esenciales para el crecimiento o división celular bacteriana y, en base a su mecanismo de
acción, pueden agruparse de acuerdo a lo que se indica en la Figura 2.16.

Los mecanismos de acción más comunes son:

 Inhibición de la biosíntesis de la pared celular bacteriana

 Inhibición de la biosíntesis de proteínas

 Inhibición de la biosíntesis de ácidos nucleicos, ARN o ADN

 Inhibición de la síntesis del ácido tetrahidrofólico

La inhibición de la biosíntesis de la pared celular bacteriana: Dado que las células bacterianas
tienen una alta presión osmótica interna, requieren de una estructura rígida para protegerse de la lisis,
específicamente esta estructura es un polímero entrecruzado llamado peptidoglicano. Algunos de los
antibióticos que interfieren con la biosíntesis del peptidoglicano son los β-lactámicos (penicilinas,
cefalosporinas, cefamicinas, monobactamas, carbapenems, etc.), glicopéptidos (vancomicina y
teicoplanina), D-cicloserina, fosfomicina y bacitracina. Los agentes antibacterianos más selectivos son
aquellos que interfieren con la biosíntesis de la pared celular bacteriana. Estos agentes antibacterianos
tienen un índice terapéutico alto (la relación entre la dosis tóxica y la dosis terapéutica), debido a que
 35

interfieren en un proceso biosintético que es exclusivo de las células procariotas (biosíntesis de la

pared celular).

La inhibición de la biosíntesis de proteínas: Los antibióticos que interactúan con la unidad 70S del
ribosoma bacteriano alteran la síntesis de proteínas bacterianas. Los aminoglicósidos, tetraciclinas,
cloranfenicol, macrólidos, lincosamidas, quinupristina, dalfopristina y mupirocina inhiben la síntesis de
proteínas mediante la unión al ribosoma de las células procariotas. La selectividad de los inhibidores
de la biosíntesis de proteínas bacterianas surge principalmente a partir de su capacidad para unirse
selectivamente al ribosoma de las células procariotas o para interferir con algún paso en la biosíntesis
proteica bacteriana.

Inhibición de la biosíntesis de ácidos nucleicos: El crecimiento y la división de la célula bacteriana

dependen, entre otros factores, de la síntesis de ADN y ARN. Los agentes antibacterianos que pueden
alterar la síntesis de ácidos nucleicos en forma directa son, por ejemplo, las fluoroquinolonas que
inhiben la ADN girasa.

La inhibición de la síntesis del ácido tetrahidrofólico: En este grupo encontramos a las

sulfonamidas y trimetoprima que inhiben el metabolismo del ácido fólico. La inhibición de la síntesis
del ácido tetrahidrofólico afecta la síntesis de aminoácidos (y por lo tanto de proteínas) y de los ácidos
nucleicos (ADN y ARN).
36
 37

CAPÍTULO 3

ANTIBIÓTICOS β-LACTÁMICOS Y RESISTENCIA BACTERIANA

3. COMPUESTOS β-LACTÁMICOS

Químicamente los compuestos β-lactámicos son amidas cíclicas de cuatro miembros. Este tipo de
moléculas comprenden dos grupos de agentes terapéuticos de considerable importancia clínica, los
antibióticos β-lactámicos y los inhibidores de β-lactamasas.

3.1. ANTIBIÓTICOS β-LACTÁMICOS

Los antibióticos β-lactámicos abarcan una variedad de compuestos naturales y semisintéticos que
poseen como rasgo en común el anillo β-lactámico. La historia comenzó con el descubrimiento del
primer antibiótico β-lactámico, una penicilina, en el año 1929, y el posterior aislamiento, producción
masiva de la penicilina G en la década del ’40. Las cefalosporinas se detectaron por primera vez en el
año 1945, cuando se descubrió un nuevo compuesto β-lactámico aislado de hongos, llamado
cefalosporina C. Este grupo, penicilinas y cefalosporinas constituyen lo que se conocen como
antibióticos β-lactámicos clásicos. Desde 1971 hasta el presente se han descubierto una serie de
estructuras β-lactámicas mono- y bicíclicas de origen natural o semisintético, las que hoy se
denominan antibióticos β-lactámicos no-clásicos o no-tradicionales. Este grupo incluye las
cefamicinas, carbapenems y monobactamas, entre otros (Figura 3.1).

Figura 3.1. Antibióticos β-lactámicos clásicos y no clásicos

 38

3.1.1. Historia de los antibióticos β-lactámicos

Alexander Fleming era un bacteriólogo que trabajaba en el St. Mary’s Hospital Medical School de
Paddington, Londres, Inglaterra que era algo desordenado (Figura 3.2.). En el año 1929, después de
regresar de unas vacaciones de 3 semanas, Fleming se percató de algo extraño en una pila de placas
de petri olvidadas antes de su partida.

En ellas había sembrado cepas de

estafilococos, una bacteria que produce
ampollas, abscesos y, a veces,
infecciones generalizadas y fatales.
Durante sus vacaciones, esporos de un
hongo (quizás provenientes del
laboratorio de micología vecino al de
Fleming o de la calle cercana)
contaminaron las placas y ese hongo
había segregado una sustancia que
producía la inhibición del crecimiento de
Figura 3.2. Alexander Fleming la bacteria. Fleming aisló el hongo y,
luego de cierto tiempo, lo identificó como
Penicillium notatum. Este hongo liberaba un compuesto que, de alguna manera, inhibía el crecimiento
bacteriano. Fleming probó esa sustancia en varios tipos de bacterias y halló que algunas se veían
afectadas y otras no. Los historiadores de la ciencia señalan que no puede afirmarse que Fleming
haya “descubierto” la penicilina. Las evidencias muestran que ni él ni ningún otro investigador del
laboratorio manifestó interés en el uso terapéutico de esa sustancia; sólo les interesaba como medio
para liberar a sus cultivos de bacterias no deseadas, con el propósito de hacer más eficaz la producción
de vacunas que, de alguna manera, aseguraban el financiamiento del laboratorio. Recién diez años
más tarde, otros investigadores de la Universidad de Oxford, entre ellos el alemán Ernst Chain (1906-
1979), el australiano Howard Florey (1889-1968) y el inglés Edward Abraham (1913-1999) prosiguieron
estos estudios y lograron aislar la penicilina y luego usarla como antibiótico.

La purificación de la penicilina se llevó a cabo en 1939, y estuvo a cargo del bioquímico Heatley,
utilizando grandes volúmenes de filtrado mediante un sistema a contracorriente y extracción con
acetato de amilo. Edward Abraham terminó de eliminar el resto de impurezas por cromatografía en
columna de alúmina. Posteriormente se probó la sustancia en ratones infectados con Streptococcus.
El primer ser humano tratado con penicilina purificada fue el agente de policía Albert Alexander en el
Hospital John Radcliffe de Oxford, el 12 de febrero de 1941. El paciente falleció porque no se le pudo
administrar suficiente cantidad del fármaco. A partir de estas investigaciones, en 1939 se pensó en
desarrollar la producción industrial de la penicilina, pero Europa estaba en apuros económicos debido
 39

al comienzo de la Segunda Guerra Mundial. Los científicos británicos buscaron ayuda en los Estados
Unidos, específicamente en los laboratorios de Peoria, Illinois donde sus científicos estaban trabajando
en métodos de fermentación para acelerar el crecimiento de cultivos de hongos. El 9 de julio de 1941
Florey y Heatley partieron de la Universidad de Oxford con una pequeña cantidad del hongo que
producía penicilina hacia los Estados Unidos. Bombearon aire dentro de enormes cubas llenas de
maíz fermentado con otros ingredientes y aditivos claves lo que demostró poder hacer crecer
rápidamente grandes cantidades del hongo en comparación con los antiguos métodos de crecimiento
sobre superficies planas. La cepa de Penicillium que tuvo el mejor rendimiento no fue la importada por
los científicos británicos sino una cepa que crecía sobre un melón en uno de los mercados de Peoria
(Penicillium chrysogenum), mejorando la cantidad de producción en las condiciones de la nueva
técnica de inmersión del laboratorio estadounidense, aproximadamente 70-80 unidades de penicilina
por mililitro de cultivo. Así, hacia fines de 1941 se había logrado mejorar 10 veces la producción de
penicilina, con lo cual se transformaba en un fármaco que podía ser obtenido en cantidad suficiente
para su uso masivo en clínica. Para ese tiempo Estados Unidos había entrado en la guerra y las
Fuerzas Armadas, tanto británicas como norteamericanas, comenzaron a utilizar Penicilina, todo en
un estado de extremo secreto, para evitar que cayera en manos del enemigo. Asimismo, en Inglaterra
se creó la llamada Comisión de la Penicilina, y el propio Florey viajó al norte de África para poner a
prueba los efectos de la penicilina en los soldados heridos. Sus ensayos se consideraron un milagro.
En lugar de amputar las extremidades heridas, sugirió que las heridas de los soldados se debían
limpiar y coser, y luego suministrarles penicilina. Gracias a Florey y su equipo, se lograron salvar miles
de vidas tanto en el desembarco de Normandía, como en la campaña de Italia y el frente del pacifico.
Poco tiempo después, en 1945, Fleming, Chain y Florey compartieron el Premio Nobel de Medicina.

A partir de la Segunda Guerra Mundial, y en ulteriores conflictos bélicos, el empleo sistemático de la

penicilina como antibiótico profiláctico hizo que la mionecrosis clostridiana (gangrena gaseosa) dejara
de ser la primera causa de muerte en los heridos. Durante la Primera Guerra Mundial la mortalidad
provocada por heridas fue del 8,1% (de ello, la mitad por mionecrosis clostridiana). En la Segunda
Guerra Mundial fue del 4,5% y durante la guerra de Corea la frecuencia disminuyó hasta el 2,5%. En
la guerra de Vietnam, la tasa de mionecrosis clostridiana fue prácticamente de cero.

3.1.2. Aspectos estructurales y nomenclatura

Con la excepción de las monobactamas (aztreonam y norcardicinas), los antibióticos β-lactámicos

están fusionados, a través del átomo de nitrógeno y del átomo de carbono tetrahédrico adyacente, a
un segundo ciclo, que puede ser de 5 miembros (por ejemplo, una tiazolidina en penicilinas o una
tetrahidropirrolidina en carbapenems) o de 6 miembros (por ejemplo, una dihidrotiazina en
cefalosporinas y cefamicinas). El anillo β-lactámico se lo designa también como azetidin-2-ona o
simplemente azetidinona. Las penicilinas están constituídas por un sistema bicíclico correspondiente
a la fusión entre un anillo de azetidinona y otro de tiazolidina, lo que en conjunto forman el núcleo
 40

penam (Figura 3.3). Cuando el núcleo penam tiene dos grupos metilos unidos al átomo de carbono de
la posición 2, y un grupo ácido carboxílico como sustituyente del átomo de carbono en posición 3, el
compuesto es el ácido penicilánico, de acuerdo a la nomenclatura tradicional de las β-lactamas.

Por analogía, en la nomenclatura usada para

el núcleo penam, los nombres triviales de
cefem, carbapenem y clavan se usan para las
estructuras mostradas en la Figura 3.4.

Mediante estudios de Rayos X se ha

Figura 3.3. Nomenclatura y numeración de
demostrado que la conformación del núcleo
penicilinas
penam es la que se aprecia en la Figura 3.5.
Los sustituyentes que se ubican sobre la cara cónvaca (por encima del plano imaginario) se los designa

Figura 3.4. Otros núcleos bicíclicos de β-lactamas

como sustituyentes “beta”, mientras que a los que se encuentran sobre la cara convexa, se los designa
como sustituyentes “alfa”. Así, el
ácido 6 β-aminopenicilánico (6-
APA), es el ácido penicilánico con
un grupo amino sustituyendo la
posición 6 y con una configuración
“beta”, es decir por encima del plano
del núcleo penam. La conformación
Figura 3.5. Conformación del ácido 6-β-aminopenicilánico y
del núcleo penam tiene suma
de penicilinas
importancia para la reactividad del
sistema ya que la cara “alfa” menos impedida será la más suceptible frente al ataque de un reactivo
que la cara “beta” más impedida.

3.1.3. Características espectrales

3.1.3.1. Espectroscopía infrarroja (IR)

Hay varias propiedades que son compartidas por algunos de los antibióticos β-lactámicos pero en
otros casos las propiedades son diferentes y, de hecho, es difícil dar una imagen clara de cuales son
 41

propiedades de los miembros individuales y de cómo un miembro difiere de otro. Una de las
características más distintivas de los antibióticos β-lactámicos bicíclicos en el espectro infrarrojo son
las señales de estiramiento del grupo carbonilo de la β-lactama, que se produce a 1770-1815 cm-1 en
las penicilinas y cefalosporinas. Esta señal proporciona información acerca de la integridad del anillo
β-lactámico. Para monobactamas esta señal aparece en 1750-1760 cm-1.

La diferencia en las frecuencias de estiramiento se relaciona con la resonancia del grupo amida en
estos compuestos. En la Figura 3.6 se muestra la resonancia normal de una amida secundaria en la
que el enlace C-N se acorta y se alarga el enlace C-O. Un requisito principal para la maximización de
este tipo de deslocalización de la carga es que los tres átomos conectados al átomo de nitrógeno, se
encuentren en una disposición coplanar, de manera que el par de electrones no compartido del átomo
de nitrógeno pueda estar implicado en un enlace  con el átomo de carbono carbonílico adyacente.

Figura 3.6. Resonancia de amidas secundarias, monobactamas (β-lactamas

monocíclicas) y β-lactamas bicíclicas (penicilinas)

En los compuestos bicíclicos, tal como las penicilinas, el átomo de nitrógeno está fuera de este plano,
lo que significa un aumento en el carácter de doble enlace entre el carbono y el oxígeno y por lo tanto,
un corrimiento de la banda de absorción a una frecuencia mayor. En las cefalosporinas hay otro factor
además de la falta de planaridad del nitrógeno β-lactámico, es la deslocalización de electrones no
compartidos del átomo de nitrógeno sobre el sistema  de la olefina adyacente (resonancia de
enamina).

3.1.3.2. Resonancia Magnética Nuclear de protones (1H RMN)

Las características principales de los espectros de RMN de 1H de las penicilinas y cefalosporinas son
los dobletes y cuartetos debido a los dos átomos de hidrógeno del anillo β-lactámico HA y HB, común
a ambos sistemas (véase la Figura 3.7). HA da lugar a un doblete (JAB (cis) = 4,5 Hz), mientras que HB
da lugar a un doble doblete debido al acoplamineto con HA y HX (JAB = Igual que el anterior, JAX = 8-11
 42

Hz). La adición de una gota de D2O a una solución de una penicilina o cefalosporina en un solvente
orgánico, favorece el intercambio de deuterio de HX a DX, haciendo que el doble doblete HB colapse a
un doblete.
Aparte de estas resonancias, los
espectros de RMN de 1H de los
derivados de penicilinas se
caracterizan por la presencia de dos
singletes correspondientes a los grupos
2α-metilo (δ 1,23-1,66) y 2β-metilo (δ
1,49-1,84) y un protón singlete Figura 3.7. Átomos de hidrógenos en penicilinas y
correspondiente al hidrógeno de cefalosporinas que generan acoplamientos típicos en 1H
posición 3 (δ 4.38-4.92). RMN

3.1.3.3. Espectroscopía ultravioleta (UV)

El núcleo penam de las penicilinas carece de la característica de absorción al UV. Las cefalosporinas
muestran máximos de absorción a alrededor de 260 nm. La saturación del doble enlace o
isomerización (Δ-3 a Δ-2) resulta en la pérdida de absorción ultravioleta. Tienamicina, una
monobactama, tiene máximos de absorción a alrededor de 296 nm.

3.1.4. Mecanismo de acción de los antibióticos β-lactámicos

Como ya se mencionó en el capítulo anterior, los antibióticos β-lactámicos actúan inhibiendo la última
etapa de la biosíntesis de la pared celular: el entrecruzamiento de las cadenas de peptidoglicano.
Básicamente inhiben la enzima transpeptidasa que cataliza el entrecruzamiento de las cadenas
lineales del peptidoglicano.

En ausencia del compuesto β-lactámico (Figura 3.8a), la enzima transpeptidasa se une al anteúltimo
aminoácido de la cadena lateral del peptidoglicano "A" (D-Ala) formándose el complejo acil-enzima y
eliminándose una molécula de D-Ala. De esta manera el carbonilo de la cadena peptídica está activado
para favorecer el ataque del grupo amino de la cadena peptídica de un segundo peptidoglicano "B",
produciéndose el entrecruzamiento de las cadenas de peptidoglicano. A la vez que se produce la unión
de las cadenas peptídicas, se separa la enzima regenerándose el catalizador que se utilizará en un
nuevo entrecruzamiento (para más detalles ver subsección 1.3.1.1. Biosíntesis del peptidoglicano).

Cuando en el medio está presente un compuesto β-lactámico, por ejemplo una penicilina se forma
entonces una unión covalente irreversible entre la enzima y el inhibidor y, por lo tanto, la enzima queda
irreversiblemente inactivada para ejercer su acción catalítica. De esta manera se inhibe el
entrecruzamiento de cadenas de peptidoglicano evitando la formación de la pared celular.
 43

Figura 3.8. (a) Mecanismo de entrecruzamiento de cadenas de peptidoglicano. (b) Mecanismo

de inhibición por β-lactamas.

3.1.4.1. ¿Porqué el grupo hidroxilo de la serina de la enzima es más reactivo frente a la β-lactama
que frente al enlace peptídico?

El anillo β-lactámico (amida cíclica) de las penicilinas y otros antibióticos β-lactámicos es más reactivo
que el enlace peptídico (amida normal) frente al grupo hidroxilo de la serina de la enzima. Gracias a
esa diferente reactividad, la inhibición es eficiente ya que la unión de la serina a la β-lactama tiene
preferencia sobre la unión a la cadena peptídica del peptidoglicano. Pero, ¿cuál es la razón?

En primer término, la tensión del anillo β-lactámico es muy grande y esto lo hace muy reactivo. Un
anillo de cuatro miembros implica que los ángulos de enlace son de 90°, lo que implica una gran tensión
ya que sabemos que los ángulos de enlace normales para carbonos sp3 son de 109,5°, por lo tanto, la
reacción es favorable dado que cuando se abre el anillo se libera esa gran tensión.

En segundo término, el carbono carbonílico de la β-lactama tiene un mayor carácter electrofílico que
el carbono carbonílico del enlace peptídico (amida).

En las amidas normales existen dos estructuras resonantes posibles (a y b, Figura 3.9, I), como
consecuencia de que en la forma "a" se produce la deslocalización del par de electrones no enlazados
del átomo de nitrógeno sobre el grupo carbonilo, se genera la estructura "b", que tiene un carácter de
doble enlace entre los átomos de carbono y nitrógeno y enlace simple entre los átomos de carbono y
de oxígeno.
 44

En el caso del anillo β-lactámico (amida cíclica), esta deslocalización está restringida y la forma "b"
implica la formación de un doble enlace (carbono sp2) en el interior de un anillo de 4 miembros (Figura
3.9, II). Si, como mencionamos antes, un ángulo normal de enlace de 109,5° (carbono sp3) implicaba
una gran tensión en un anillo de 4 miembros, lo es mucho más un enlace de 120° (carbono sp2). Esto
implica que la estructura "b" en sistemas β-lactámicos es una forma mucho menos contribuyente,
dándole a las β-lactamas un carácter
electrónico más cercano al de una
cetona que al de una amida normal. Esto
hace que el carbono carbonílico de la β-
lactama tenga un mayor carácter
electrofílico que el carbono carbonílico
del enlace peptídico y, por lo tanto, sea
más reactivo que éste frente a
nucleófilos como el hidroxilo de serina
de la enzima.
Figura 3.9. Estructuras resonantes de amidas lineales y
Estos dos factores hacen que el anillo β- amidas cíclicas (β-lactamas)
lactámico sea más reactivo que el
enlace peptídico frente a nucleófilos. Se ha demostrado que una reacción con reactivos nucleofílicos
que produzca la apertura del ciclo es 1020 veces más rápida que la misma reacción sobre un sistema
acíclico análogo.

3.1.4.2. Hipótesis del sustrato análogo

Los factores mencionados más arriba no explican totalmente la gran reactividad de los compuestos β-
lactámicos frente a la enzima transpeptidasa. Esta enzima es una macromolécula de gran tamaño que,
para que se produzca una interacción con su sitio activo, en este caso el hidroxilo de serina, debe
existir un proceso de reconocimiento molecular basado en una gran cantidad de interacciones menores
además de la reacción directa con el grupo hidroxilo. Eso se produce naturalmente entre la cadena
peptídica del peptidoglicano y la enzima, por lo tanto debe existir un reconocimiento molecular similar
entre la β-lactama y la enzima.

En 1965 los Dres. Tipper y Strominger propusieron la hipótesis de que las penicilinas actúan imitando
la conformación tetraédrica del estado de transición del residuo terminal D-alanil D-alanina de la
cadena peptídica y eso permite que se unan al sitio activo de la enzima transpeptidasa (Figura 3.10).
Para esto realizaron una comparación de las representaciones tridimensionales de cada una y
observaron que una de las conformaciones de la D-alanil D-alanina es muy similar a la de las
penicilinas.
 45

La distancia ente Na y Nb (3,3 Å) y la

distancia entre Nb y el carbono del
carboxilato son iguales en ambas
moléculas. La distancia entre el Na y el
carbono del carboxilato en las penicilinas
es de 5,4 Å, mientras que en el terminal
D-alanil D-alanina es de 5,7 Å. Esta
similitud permite entonces que el
compuesto β-lactámico encaje perfecta y
selectivamente en el "bolsillo" del sitio
Figura 3.10. Comparación de la estructura de la
activo de la enzima e inhiba la misma, penicilina y la D-Ala-D-Ala del peptidoglicano
gracias a la gran reactividad del
carbonilo β-lactámico.

3.1.5. Enzimas de unión a penicilinas (PBPs)

Las PBPs (penicillin-binding proteins) son, como su nombre lo indica, todas aquellas enzimas
(proteínas) que tienen afinidad por estructuras β-lactámicas, y se encuentran en el espacio
periplasmático. Tienen la capacidad de catalizar la ruptura del anillo β-lactámico y formar una unión
éster con un hidroxilo de serina del sitio activo de la enzima. Cada bacteria contiene toda una serie de
PBPs que tienen un bajo grado de similitud, y todas son blanco de los antibióticos β-lactámicos. Como
las células bacterianas contienen múltiples PBPs, la afinidad por un dado antibiótico β-lactámico es
diferente para cada PBP, y por el contrario, una PBP tiene una afinidad distinta frente a diferentes β-
lactamas. Por lo tanto, las mutaciones puntuales que conducen a una reducción de la afinidad de una
enzima por un antibiótico β-lactámico, no necesariamente afectan la afinidad por el otro compuesto.
La mayoría de las especies bacterianas contienen de cuatro a ocho PBPs con masas moleculares
entre 35 y 120 kDa.

Por convención los PBP se designan numéricamente en orden decreciente de masa molecular, ver
por ejemplo la clasificación de PBPs para E. coli (Tabla 3.1).

La mayoría de las PBPs tiene como objetivo catalizar el entrecruzamiento de cadenas de

peptidoglicano; sin embargo, no todas lo hacen. Hay PBPs cuyos efectos son desconocidos y no son
fundamentales para la vida de las bacterias. Las de mayor peso molecular son también
transglicosilasas, por lo que intervienen también en la etapa de biosíntesis de la pared celular anterior
al entrecruzamiento. A estas enzimas se las llama de acción dual. El efecto de la inactivación varía de
acuerdo al tipo de PBP (ver Tabla 3.1).
 46

Tabla 3.1. Proteínas de unión a penicilinas (PBPs) de E. coli. (El número entre paréntesis indica
el % del total de PBPs por célula)

Número
PESO p or Efecto de la
PBP Función propuesta in vitro
M O L. célula inactivación
(%)

1Aª 92.000 200 (6,5) Transglicosilasa, transpeptidasa en Cuando 1A y 1B se

menor grado compensa parcialmente inactivan se produce
la pérdida de la actividad de la PBP 1B; una rápida ruptura de la
es esencial para la síntesis de la pared célula bacteriana
celular.

1B 90.000 250 (8) Transglicosilasa, transpeptidasa de la Rápida ruptura

elongación celular; es esencial para la
síntesis de la pared celular.

2 66.000 20 (0,7) Se cree que es necesaria para Interviene en la

mantener la forma cilíndrica del bacilo. formación de células
esféricas

3 60.000 50 (16) Transglicosilasa-transpeptidasa, células no-septadas;

necesaria para la síntesis de la pared interviene en la
celular. formación de filamentos

4 49.000 110 (3,6) Transpeptidasa, D,D-carboxipepti- Interfiere en la reacción

dasa o D,D-endopeptidasa que de transpeptidación
interviene en completar la síntesis del
peptidoglicano

5 42.000 180 (59) D,D-carboxipeptidasa No se conocen los

efectos

6 40.000 600 D,D-carboxipeptidasa No se conocen los

(19,6) efectos

Las PBP-1A y PBP-1B actúan como transpeptidasas y su inactivación provoca la formación de

esferoplastos que rápidamente se lisan. La inhibición de las PBP-2 da lugar a formas ovoideas que
se lisan fácilmente. La PBP-3 interviene en la división bacteriana, y su inhibición provoca la aparición
de formas filamentosas sin septos (tabiques que separan lo que serán dos células hijas). Las PBP-4,
PBP-5 y PBP-6 tienen actividad carboxipeptidasa, e intervienen en la liberación del quinto aminoácido
del pentapéptido, necesaria para la polimerización del peptidoglicano.
Es importante conocer las PBPs ya que hay antibióticos que son más activos contra unas que contra
otras. Además, muchas veces los problemas de resistencia están relacionados con variaciones en la
afinidad de los antibióticos por las PBPs.
 47

3.2. RESISTENCIA BACTERIANA A COMPUESTOS β-LACTÁMICOS

3.2.1. Enzimas β-lactamasas

La resistencia bacteriana a los medicamentos es uno de los problemas más importantes en la

quimioterapia antibacteriana actual. Dicha resistencia bacteriana es una condición en la que no hay
susceptibilidad hacia agentes antibacterianos o dicha susceptibilidad ha disminuído significativamente
respecto a la que normalmente causa la inhibición del crecimiento celular bacteriano o la muerte
celular. La resistencia bacteriana puede ser natural (intrínseca) o adquirida. En la resistencia adquirida
la población bacteriana es inicialmente susceptible a agentes antibacterianos, pero las bacterias sufren
cambios, ya sea por adquisición de plásmidos o por mutación, con lo cual emergen cepas resistentes,
que son menos susceptibles o no son susceptibles a esos fármacos antibacterianos.

Una de las más serias amenazas es la proliferación de enzimas que afectan el anillo β-lactámico,
conocidas como β-lactamasas.

En el año 1940, varios años antes de que se determinara la estructura β-lactámica y comenzara a
usarse la penicilina en clínica médica para el tratamiento de infecciones producidas por bacterias,
científicos ingleses identificaron una enzima capaz de hidrolizar el anillo β-lactámico y la denominaron
penicilinasa (Figura 3.11). Posteriormente (1944), se demostró la presencia de la penicilinasa en cepas
de Staphylococcus aureus resistentes a la penicilina G.

Figura 3.11. Sitio de ataque de β-lactamasas sobre penicilinas y cefalosporinas

Se cree que las enzimas β-lactamasas evolucionaron de las diferentes PBP´s (a través de la inclusión
de agua, u otra maquinaria hidrolítica requerida dentro del sitio activo), con las que guardan homología
secuencial y estructural. Es posible que su función natural originaria fuera la de participar en la
biosíntesis de la pared celular o evitar la autolesión en los microorganismos que naturalmente
producen antibióticos β-lactámicos. Las β-lactamasas se han encontrado en prácticamente todas las
especies bacterianas que se conocen. Aunque son características de los organismos que poseen
peptidoglicano en la pared celular, también se han descrito en células eucariotas como Candida
albicans, Candida boidinii, entre otras. El término “penicilinasa” ha quedado en desuso con la aparición
de enzimas que hidrolizan el anillo β-lactámico de las cefalosporinas, de allí que se acuñó el término
“β-lactamasa”. Sin embargo, todavía se emplean los términos penicilinasa, para los casos en que la β-
lactamasa tiene mayor actividad frente a penicilinas; cefalosporinasa, cuando la actividad es
 48

preferentemente frente a cefalosporinas; o β-lactamasas de amplio espectro cuando muestran una

actividad similar frente a ambos grupos. En general, podemos decir que las β-lactamasas hidrolizan el
enlace amida del anillo β-lactámico impidiendo la interacción con las PBPs.

Las bacterias Gram positivas producen una gran cantidad de β-lactamasas que se ubican en el medio
extracelular y están unidas a la membrana citoplasmática. En contraste, la localización y permanencia
de la enzima en el espacio periplasmático de las bacterias gram negativas, hace que la acción de las
β-lactamasas sólo se produzca después que el antibiótico β-lactámico haya atravesado la membrana
externa y llegado al espacio periplasmático.

Las β-lactamasas constituyen un serio problema en infecciones bacterianas. En 1965 se detectó que
la resistencia de Salmonella podía ser transferida a E. coli, esto es una de las características más
preocupantes de las β-lactamasas: pueden ser transferidas entre distintas especies a través de
plásmidos.

Dada la heterogeneidad de las β-lactamasas y su rápida trasmisión a través de plásmidos se ha hecho

sumamente difícil una clasificación exhaustiva. Las β-lactamasas son un grupo complejo de enzimas
que tienen propiedades que las diferencian, tal como el tipo de sustrato que hidrolizan o el tipo de
sustrato que las inhibe (parámetros cinéticos), su localización (intra o extracelular), su codificación
(cromosómica y/o extracromosómica), expresión genética (constitutiva o inducible) y otras propiedades
fisicoquímicas (peso molecular). Estas propiedades se utilizaron para establecer distintas
clasificaciones de β-lactamasas. En 1973, Richmond y Sykes propusieron un esquema formado por
cinco grupos de enzimas basado en sus perfiles de sustrato. Sykes y Matthew en 1976, introdujeron a
esta clasificación las denominadas enzimas plasmídicas que podían diferenciarse además por su
punto isoeléctrico. En 1980, Ambler propuso la primera clasificación basada en la estructura molecular
(Figura 3.12). La clase A, son penicilinasas que poseen un residuo de serina en el centro activo; y la
clase B, son metalo-β-lactamasas que requieren zinc (ión bivalente) como cofactor. Posteriormente
Jaurin y Grundström en 1981 completaron esta clasificación añadiendo la clase C, que son
cefalosporinasas con una serina en su centro activo. A finales de los años 80, se agregó la clase D,
que son enzimas que hidrolizan la oxacilina, que es otra serin-β-lactamasa. La clasificación de β-
lactamasas que se muestra en la Figura 3.12 no es la única, pero sí una de las más simples y adecuada
para los fines de esta monografía.

En la Figura 3.13 puede apreciarse el efecto de las β-lactamasa sobre los compuestos β-lactámicos.
El hidroxilo de serina del sitio activo de la enzima β-lactamasa ataca el carbonilo β-lactámico
generando un complejo acil-enzima transitorio. Es importante tener en cuenta que la vida media del
complejo acil-enzima es muy baja por lo que rápidamente se hidroliza liberando la β-lactamasa intacta
que vuelve a seguir actuando mientras que la penicilina ya ha sido destruida y ya no ejerce su acción
antibiótica. Esta es la gran diferencia respecto a la interacción entre la β-lactama y la enzima
transpeptidasa, donde se forma un complejo estable entre ambas y la enzima queda inactivada.
 49

Figura 3.12. Clasificación estructural de β-lactamasas

Figura 3.13. Mecanismo de acción de las β-lactamasas

En el caso de las β-lactamasas, la unión a la β-lactama no produce un complejo estable y, por lo tanto,
la enzima no queda inactivada.

La resistencia de las bacterias a diversos antibióticos se debe a mutaciones genómicas o la adquisición

de material genético que incluye los determinantes de resistencia. Además de la resistencia por
enzimas inactivadoras, como es el caso de las β-lactamasas, las bacterias tienen otros mecanismos
de resistencia a compuestos β-lactámicos. Entre ellos, los principales son una menor capacidad de
penetración del fármaco por disminución de la permeabilidad y la disminución de la afinidad del
compuesto β-lactámico por la enzima que debe inhibir.

Resulta ampliamente aceptado que la fuerza impulsora en el origen de la resistencia a los antibióticos
es la presión selectiva de los agentes antibacterianos utilizados. La selección favorece a la bacteria
resistente. Se debe tener en cuenta que la población bacteriana es muy grande y en continuo
crecimiento. El tratamiento de un paciente con antibióticos es una fuerte presión selectiva no sólo
sobre el patógeno responsable de la enfermedad, sino también sobre toda la flora bacteriana del
 50

paciente. El relativamente minoritario número de bacterias resistentes que están presentes en forma
natural al iniciar el tratamiento aumenta a medida que éste avanza y elimina las células sensibles a los
antibióticos. Este proceso de enriquecimiento se conoce como selección, y favorece claramente a las
bacterias resistentes.

Por esta razón, el uso indiscriminado de antibióticos aumenta los problemas de resistencia. Esta es
una de las mayores preocupaciones de la Organización Mundial de la Salud respecto a las infecciones
bacterianas. La automedicación es un gran problema en ese sentido ya que lleva a tratamientos con
antibacterianos incompletos (dosis insuficientes o la interrupción prematura) o sin estar seguros de
que la infección es bacteriana. Otro inconveniente es el uso veterinario de antibióticos, especialmente
los empleados como promotores de crecimiento animal. Una práctica muy extendida en la ganadería
intensiva, sobre todo de pollos y cerdos, es la incorporación de antibióticos como promotores de
crecimiento, que favorecen el engorde más rápido de los animales; aunque su mecanismo de acción
no está claro, muy posiblemente sea a través de la disminución de la microbiota intestinal de los
animales. Por un lado, los alimentos procedentes de animales tratados terapéuticamente con estos
agentes antibacterianos pueden contener trazas de éstos que se incorporan al organismo humano a
través de la cadena alimentaria, fomentando igualmente la aparición de microorganismos resistentes
en el hombre. Por otro lado, el consumo continuo de estos antibióticos, aún en concentraciones muy
bajas, fomenta la aparición en los animales de cepas de microorganismos resistentes que, desde estos
animales se difundirán a sus cuidadores, consumidores, aguas residuales, etc.

Garantizar un uso responsable de los antibióticos en humanos y animales es una de las mayores
premisas actuales de los organismos de salud de todo el mundo.
 51

CAPITULO 4

PENICILINAS Y CEFALOSPORINAS

4.1. PENICILINAS

Las penicilinas, como ya fue mencionado en el Capítulo anterior, representan el tipo más antiguo de
antibióticos β-lactámicos, descubiertos por Fleming y perfeccionados para su uso masivo por Chain,
Florey y Abraham. Las penicilinas están constituídas por un sistema bicíclico correspondiente a la
fusión entre un anillo de azetidinona y otro de tiazolidina, lo que en conjunto forman el núcleo penam
(Figura 4.1). En cuanto a la
nomenclatura, la forma más común
es nombrarlos como derivados del
ácido penicilánico, dónde la
numeración de los átomos comienza
en el azufre y termina en el carbono
carbonílico como se muestra en la Figura 4.1. Núcleo penam y numeración de penicilinas
figura.

4.1.1 Penicilinas Naturales

Las penicilinas naturales son la Penicilina G, o Bencilpenicilina (la primera penicilina aislada) y la
Penicilina V, o Fenoximetilpenicilina. Se obtienen por fermentación y son las de más bajo costo, se
comercializan como sales de potasio o sodio. Son activas mayormente contra bacterias Gram positivas
y son sensibles a la presencia de β-lactamasas (ver Tabla 4.1).

Formulaciones: Las penicilinas G y V están disponibles comercialmente mayormente en forma de

sales de potasio y, en menor medida, como sales de sodio. La administración de la Penicilina G por
vía oral se caracteriza por una rápida pero baja absorción y una marcada inestabilidad en medio ácido
(ver más adelante). En cambio, la Penicilina V, en comparación con la variante G, es más estable en
medio ácido y por ello se absorbe mejor en el tubo digestivo.

Empleando dosis equivalentes de Penicilina V y G (ambas sales potásicas) en administración por vía
oral, se obtienen concentraciones plasmáticas dos a cinco veces mayores con la primera que con la
segunda. Una vez absorbidas, ambas penicilinas se distribuyen en el cuerpo y se excretan por vía
renal.
 52

Tabla 4.1. Penicilinas Naturales

Actividad Principalmente Gram (+) Principalmente Gram (+)

antibacteriana

Formas de Intramuscular, Intravenosa Oral

administración

Estabilidad frente Baja Baja

a β-lactamasas

Estabilidad en Mala Buena

medio ácido

Así como la Penicilina G potásica se absorbe poco por vía oral, su administración intramuscular lleva
a que se alcancen, en aproximadamente 30 minutos, las concentraciones máximas en plasma, cifra
que disminuye con rapidez porque la semivida de dicho antibiótico es muy breve (Figura 4.2). Para
prolongar la vida media de este antibiótico, y así disminuir el número y frecuencia de las aplicaciones,
se desarrollaron preparaciones de depósito de Penicilina G, como por ejemplo la Penicilina G
benzatínica. Esta sal libera lentamente Penicilina G y así se logran concentraciones relativamente
pequeñas pero persistentes del antibiótico en la sangre. Tanto la Penicilina G benzatínica como la
Penicilina G procaínica presentan un efecto anestésico local. La Penicilina G benzatínica se absorbe
muy lentamente desde los depósitos intramusculares, y una sola dosis genera concentraciones
constantes en plasma durante aproximadamente 26 días. Esta penicilina se emplea para la profilaxis
de la fiebre reumática cardíaca, administrándose una vez por mes y una sola inyección para tratar la
faringitis estreptocócica.
 53

Figura 4.2. Penicilina G y sus sales. Concentraciones plasmáticas en función

del tiempo de diferentes formulaciones

4.1.2. Estabilidad Química de las Penicilinas

4.1.2.1. Hidrólisis básica

Las penicilinas son rápidamente hidrolizadas por álcalis acuosos para dar ácidos peniciloicos, los
cuales son estables como sales pero se descarboxilan en medios ácidos para dar ácidos peniloicos
(Esquema 4.1). Los alcóxidos, el amoníaco y las aminas reaccionan de una manera similar para dar
ésteres y amidas, respectivamente.
 54

Esquema 4.1. Hidrólisis alcalina de las penicilinas

4.1.2.2. Hidrólisis ácida

Las penicilinas son afectadas por el medio ácido. El átomo de nitrógeno del ciclo se protona y luego
se produce una reacción intramolecular entre el átomo de oxígeno del carbonilo de la amida de la
cadena lateral con el grupo carbonilo de la β-lactama. Si la reacción se produce a pH 2, se genera el
ácido penicílico correspondiente (Esquema 4.2). Si se realiza a pH 4, el producto final es el ácido
penicilénico. De acuerdo a este mecanismo de apertura del anillo β-lactámico, un grupo atractor de
electrones unido al carbonilo de la cadena lateral, disminuye la densidad electrónica sobre el mismo,
reduciendo la posibilidad de que este oxígeno ataque al carbonilo β-lactámico. Por tal motivo, la
Penicilina V, que posee un grupo atractor de electrones como el oxígeno del fenóxido, es menos
susceptible a ácidos que la penicilina G.

Esquema 4.2. Hidrólisis ácida de las penicilinas

4.1.3. Penicilinas semisintéticas

La Penicilina G y la Penicilina V son las únicas penicilinas naturales utilizadas en clínica. El resto de
las penicilinas son semisintéticas, es decir que se obtienen a partir de las penicilinas naturales. La
única posición modificable del sistema penicilánico es el sustituyente unido al grupo carbonilo de la
 55

amida de la cadena lateral de posición 6 (Figura

4.3).

La secuencia sintética por la cual se obtienen las

penicilinas semisintéticas es esencialmente la
misma para todos los casos. Mediante
fermentación se obtiene la penicilina natural, por
ejemplo la penicilina G, luego la reacción con una
enzima (desacilasa) elimina el grupo acilo unido Figura 4.3. Posición modificable de las
penicilinas
a la posición 6 (desacilación). De esta manera se
obtiene el precursor de todas las penicilinas semisintéticas, el 6-APA (Esquema 4.3). Luego, por
química orgánica tradicional se incorpora una nueva cadena lateral que permite obtener el antibiótico
β-lactámico correspondiente. En resumen, esto es un proceso de acilación química que implica la
reacción del 6-APA con agentes acilantes como halogenuros de ácido o anhídridos de ácidos.

Esquema 4.3. Obtención general de penicilinas semisintéticas

4.1.4. Penicilinas resistentes a β-lactamasas

Como ya mencionamos, uno de los grandes problemas de la terapia antibacteriana es la proliferación

de enzimas β-lactamasas que destruyen e inactivan el anillo β-lactámico. En los años cincuenta era
particularmente alarmante la aparición de cepas de Staphylococcus aureus que producían β-
lactamasas y que, por lo tanto, eran inmunes a los antibióticos β-lactámicos. La Meticilina (Figura 4.4)
fue la primera penicilina semisintética resistente a β-lactamasas. Su uso en clínica médica, a partir de
1960, significó un avance muy importante en el tratamiento de las infecciones causadas por bacterias
Gram positivas productoras de penicilanasas. En la estructura de esta penicilina vemos que el átomo
de carbono vecino al grupo carbonilo de la amida de la cadena lateral, forma parte de un anillo
aromático. Además, en posición orto de este anillo aromático la Meticilina tiene 2 grupos metoxilo. El
objetivo de estos grupos metoxilo es producir un impedimento estérico que dificulte el acercamiento
de las β-lactamasas y, por lo tanto, impida la degradación del antibiótico, conservando la actividad
bacteriana de los mismos.
 56

Si bien la aparición de la Meticilina significó un avance muy importante en el tratamiento de infecciones

Gram positivas productoras de β-lactamasas, el problema de la resistencia bacteriana es continuo y
sólo se trata de batallas que se ganan pero la guerra es eterna.

Figura 4.4. Penicilinas resistentes a β-lactamasas

Al tiempo de comenzar a utilizarse la Meticilina en clínica, surgieron las primeras cepas de

Staphylococcus aureus que no eran afectadas por la misma, con lo cual el problema que la Meticilina
solucionaba volvió a surgir. Estas bacterias causan inconvenientes muy serios especialmente en
infecciones intrahospitalarias y se las conoce como Staphylococcus aureus resistentes a Meticilina
(MRSA, del inglés Methicillin-resistant Staphylococcus aureus).

Existen otros antibióticos en el grupo de penicilinas resistentes a β-lactamasas. Un inconveniente de

la Meticilina es que no tiene un oxígeno atractor de electrones en la cadena lateral por lo que es poco
estable a la hidrólisis por ácidos. Este problema se evita en el caso de las isoxazolil penicilinas (Figura
4.4) que contienen el heterociclo isoxazol en la cadena lateral que actúa, a la vez, como atractor de
electrones y como grupo voluminoso para evitar la acción de las β-lactamasas.

Al igual que las penicilinas naturales, las penicilinas resistentes a β-lactamasas son mayormente
activas contra bacterias Gram positivas.

4.1.5. Penicilinas de espectro extendido

En este grupo se encuentran las penicilinas de uso más común, como la Ampicilina y la Amoxicilina
(Figura 4.5). La introducción de un grupo amino en la cadena lateral de la posición 6 es la principal
característica de estos compuestos por lo que se los conoce también como aminopenicilinas. Esta
característica les da una mayor estabilidad en medio ácido y un aumento en su actividad contra
bacterias Gram negativas. A pH fisiológico el grupo amino se encuentra protonado, en forma de catión
amonio (NH4+) lo que le permite a la molécula aumentar su penetración a través de la membrana
externa de las bacterias Gram negativas. La carga positiva sobre el amonio también actúa como
atractor de electrones dándole estabilidad a la hidrólisis ácida.
 57

La primera penicilina de espectro

extendido fue la Ampicilina (1961) y
luego surgió la Amoxilicina.

Esta última es absorbida con mayor

rapidez y de manera más completa en
Figura 4.5. Penicilinas de espectro extendido
el tubo digestivo que la Ampicilina, lo
cual constituye la principal diferencia
entre las dos. Ambos compuestos son sensibles a β-lactamasas y se usan en combinación con
inhibidores de β-lactamasas (ver más adelante).

Como se deduce de lo anteriormente dicho, uno de los problemas de la Ampicilina es su baja absorción
a través de la pared intestinal (sólo un 40% de la dosis administrada oralmente es efectivamente
absorbida) y las relativamente grandes cantidades de antibiótico que permanecen en el intestino
pueden afectar la flora intestinal. La pobre absorción de la Ampicilina tiene que ver con la presencia,
a pH fisiológico, de la carga positiva del amonio y la negativa del carboxilato en la misma molécula
(Figura 4.6). Este es un inconveniente que puede subsanarse mediante el uso de un profármaco que
enmascare una de esas cargas aumentando la absorción. El profármaco no es activo "per se", sino
que está diseñado para que un proceso metabólico en el organismo libere el verdadero compuesto
activo. El objetivo es facilitar la llegada del fármaco al sitio de acción. La Bacampicilina es un éster
doble que se hidroliza por esterasas no específicas luego de atravesar la pared intestinal liberando la
Ampicilina. De esta manera, los niveles en sangre se incrementan dos a tres veces, respecto a los
conseguidos con la administración directa de Ampicilina.

Figura 4.6. Bacampicilina, un profármaco de la Ampicilina

4.1.6. Penicilinas antipseudomonas

El último grupo de estos derivados β-lactámicos son las penicilinas efectivas contra Pseudomonas. El
primer antibiótico de este grupo utilizado en clínica médica fue la Carbenicilina, que se caracteriza por
tener un grupo carboxilo en la cadena lateral de posición 6, lo que le da actividad contra estas bacterias
Gram negativas (Figura 4.7). La mayoría de estas penicilinas antipseudomonas tienen baja estabilidad
frente a la hidrólisis en medio ácido y deben administrarse por vía intramuscular o intravenosa. Las
infecciones por Pseudomonas son oportunistas, es decir las bacterias están siempre presentes en el
 58

organismo, pero no producen problema alguno salvo que el paciente se encuentre inmunodeprimido
por algún motivo (cáncer, HIV, etc.) por lo que son especialmente peligrosas en infecciones
intrahospitalarias.

Figura 4.7. Penicilinas de antipseudomonas

La Ticarcilina como la Carbenicilina no tienen una buena absorción por vía oral y también deben
administrarse por vía intramuscular o intravenosa. Tienen un espectro de acción similar aunque la
Ticarcilina, debido a su mayor actividad, requiere dosis menores. La Piperacilina (perteneciente al
grupo de las piperazin-penicilinas) es una penicilina de mayor espectro que las anteriores y se usa
para tratar infecciones intrahospitalarias donde se han encontrado cepas resistentes a Ticarcilina o en
el caso que se necesite un antibiótico que requiera un amplio espectro antibacteriano. Es la penicilina
antipseudomonas de mayor uso en la actualidad.

4.2. CEFALOSPORINAS

El segundo grupo de los que se conocen como antibióticos β-lactámicos clásicos lo constituyen las
cefalosporinas. En este caso, el anillo β-lactámico o azetidinona está fusionado con un anillo de 6
miembros, una dihidrotiazina; en conjunto forman un sistema conocido como núcleo cefem (Figura
4.8).

La historia de las cefalosporinas comenzó en

1945 cuando un grupo de investigación del
Instituto de Higiene de Cagliari (Italia) aisló de
un hongo (Cephalosporium acremonium)
encontrado en las costas de Cerdeña, una
sustancia que tenía actividad antibiótica Figura 4.8. Estructura básica de las cefalosporinas
contra bacterias Gram positivas y Gram
negativas. Este hallazgo se publicó en una revista científica de poca difusión tres años después. Como
 59

el grupo no tenía recursos para continuar la investigación recurrieron a la industria farmacéutica italiana
que no demostró mayor interés. Finalmente se contactaron con el Servicio de Salud del Reino Unido
que designó al Dr. Florey (quien había trabajado en el desarrollo del proceso de producción de la
penicilina) para continuar los estudios realizados en Italia. Estos estudios confirmaron la actividad de
la sustancia producida por el hongo del género Cephalosporium, de allí que el compuesto fue
denominado Cefalosporina C (Esquema 4.4). Esta sustancia fue aislada de manera pura en 1954.

Esquema 4.4. Cefalosporina C, precursor de cefalosporinas de uso clínico

Si bien la actividad antibacteriana no era tan importante para resultar de utilidad, era interesante su
amplio espectro y que resultaba resiste a las β-lactamasas conocidas en ese momento. De hecho la
Cefalosporina C no se comercializa como antibiótico y su importancia no radica en su actividad, sino
en que la cadena lateral de posición 7 puede hidrolizarse y el producto, conocido como ácido 7-
aminocefalosporánico (7-ACA), es un intermediario versátil para la preparación por semisíntesis de
cefalosporinas de buena actividad y uso clínico.

En cuanto a la nomenclatura de cefalosporinas,

la numeración es similar a las de penicilinas,
pero al tener un carbono más en el sistema, se
parte de 1 en el azufre y se llega a 8 en el
carbono β-lactámico (Figura 4.9). Las Figura 4.9. Ácido cefalosporánico
cefalosporinas se nombran como derivados del
ácido cefalosporánico, por ello al 7-ACA se lo denomina ácido 7-aminocefalosporánico.

4.2.1. Cefalosporinas de uso en clínica médica

Desde la aparición de la primera cefalosporina comercial en 1962, muchas cefalosporinas se han

sintetizado y entre 25 y 30 se comercializan actualmente. De manera general las posiciones que se
pueden variar en la estructura base de las cefalosporinas son la posición 3 y 7 (Figura 4.10).

Las modificaciones en la posición 7 están asociadas principalmente con la actividad biológica y la

resistencia a β-lactamasas. Las variaciones en posición 3, por otro lado, están relacionadas
 60

mayormente tanto con las propiedades farmacocinéticas como también con la actividad biológica. La
posición 7α igualmente puede modificarse con la inclusión de una funcionalidad metoxilo, aunque este
tipo de compuestos se consideran dentro de un grupo diferente, pero muy relacionado con las
cefalosporinas, conocido como Cefamicinas (7α-MeO).

Figura 4.10. Estructura base de las cefalosporinas

4.2.2. Mecanismo de acción de las cefalosporinas

Las cefalosporinas, de modo similar a las penicilinas, inhiben la transpeptidasa y por lo tanto el
entrecruzamiento de cadena del peptidoglicano, constituyente de la pared celular.

4.2.3. Clasificación de cefalosporinas en generaciones

Las cefalosporinas se clasifican en "generaciones" en base a su espectro de actividad antimicrobiana

e indican, en cierto modo, la evolución de la investigación en el área: las de primera generación son
las más viejas y las de quinta generación las más modernas. En líneas generales, a medida que
evolucionan en generaciones ganan actividad frente a microorganismos Gram negativos, reduciéndola
frente a Gram positivos y también mejoran su comportamiento en relación al principal factor de
resistencia (las β-lactamasas).

En la Tabla 4.2 se encuentran clasificadas las cefalosporinas y cefamicinas más relevantes. Además
se detallan las estructuras químicas y las vías de administración de cada una.
 61

Tabla 4.2. Clasificación de las Cefalosporinas

Vía de administración
Generación

Actividad Nombre

Estructura

R1 R2

1era Activas contra Cefalotina IM-IV

Estreptococos
(excepto para
cepas resistentes
Cefazolina IM-IV
a penicilinas) y
Staphylococcus
aureus (excepto
Cefalexina H oral
para cepas
resistentes a la
meticilina).
Cefadroxilo H oral
Poco activas
contra bacterias
Gram (-).
Cefradina H oral-
IM-IV

Cefapirina IM-IV

2da No son tan activas Cefamandol IM-IV

contra los nafato
microorganismos
Gram positivos
 62

como lo son los

Cefuroxima IM-IV
agentes de la
primera genera-
ción, pero en
cambio son un
poco más activas Cefamicina IM-IV
contra C*
microorganismos
(cefamicina)
Gram (-)

Cefoxitina* IM-IV

(cefamicina)

3era Son menos activas Cefotaxima IM-IV

contra cocos Gram
(+) susceptibles a
las cefalosporinas
de 1era generación,
pero más activas Ceftazidima IM-IV
contra Gram (-)
que las de 1era y 2da
generación. Se
utilizan espe-
cialmente para
Cefoperazo- IM-IV
tratar infecciones
na
intrahospitalarias
causadas por
bacterias multirre-
sistentes.

Ceftizoxima H IM-IV
 63

Ceftriaxona IM-IV

Cefodizima IM-IV

Cefixima oral

Ceftibuteno H oral

Cefsulodina IM-IV

Cefprozil oral

4ta Presentan una Cefepime IM-IV

actividad contra
bacterias Gram
negativas un poco
mayor que las
cefalosporinas de
3era generación.
También se
 64

encontró que
Cefpirome IM-IV
tienen una buena
afinidad por la
enzima transpep-
tidasa y una baja
afinidad por una
variedad de β-
lactamasas.(buena
resistencia a β-
lactamasas).

5ta Presenta actividad Ceftarolina IM-IV

frente fosamil
microorganismos
Gram (+) multi-
rresistentes (varias
cepas de S. aureus
resistentes a
meticilina y S.
pneumonia
multiresistente). Es
una prodroga que
mediante
fosfatasas plas-
máticas es
convertida en la
droga activa
ceftarolina.

* tienen un grupo –OCH3 en la posición 7α del núcleo cefem

IM: intramuscular. IV: intravenosa.

 65

Cefalosporinas de 1era generación

La Cefalotina fue la primera cefalosporina de uso en clínica médica (1962) y por 5 años fue la única
cefalosporina comercial. No se absorbe por vía oral, por lo que debe suministrarse por vía
intramuscular o intravenosa.

En el Esquema 4.5 se puede apreciar la metodología de obtención de Cefalotina a partir de

Cefalosporina C. Nuevamente, el principio es el mismo que el empleado para las penicilinas
semisintéticas: primero se desacila enzimáticamente la cadena lateral de posición 7 de la
Cefalosporina C, para obtener el 7-ACA y luego se re-acila químicamente para introducir el grupo
tiofeno presente en la cefalotina, mediante el cloruro de ácido correspondiente.

Esquema 4.5. Síntesis de Cefalotina a partir de Cefalosporina C

La tabla 4.3 muestra la comparación entre las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) de la
Cefalotina y la Bencilpenicilina (penicilina G). Se puede apreciar una actividad similar contra S. Aureus
de cepas no productoras de β-lactamasas; sin embargo, la Cefalotina tiene una mayor actividad contra
S. Aureus de cepas productoras de β-lactamasas.

También se puede ver que la Cefalotina es más activa que la Bencilpenicilina frente a bacterias Gram
(-), por ejemplo, Escherichia coli, Klebsiella pneumonieae o Salmonella typhi. Ambas no son activas
contra pseudomonas y enterobacterias.

Una desventaja de la Cefalotina y de otras cefalosporinas que poseen el grupo acetato en posición 3'
es que la hidrólisis de ese grupo por esterasas, genera un derivado desacetilado que es menos activo
(Esquema 4.6).
 66

Tabla 4.3. Actividad de Bencilpenicilina y Cefalotina frente a diferentes microorganismos.

CIM µG/ml
MICROORGANISMOS
Bencilpenicilina Cefalotina
a
S. aureus (S) 0.02-0.06 0.05-0.2
b
S. aureus (R) 7.5-1.0 0.1-0.8
Streptococcus pyogenes 0.008-0.016 0.003-0.05
S. pneumonia 0.006-0.015 0.02-0.15
S. faecalis 1.25-4 >100
Corynebacterium diphterieae 0.036-3 0.16-0.63
Neisseria gonorrhoeae 0.03-0.1 0.16-0.5
N. meningiditis 0.03 0.12-0.5
Haemophilus influenza 0.5-3 2-8
Escherichia coli 16->125 2-8
Salmonella typhi 2.5-16 0.5-2
Shigella sonnei 16 4-8
Proteus mirabilis 16-32 4
Proteus sp. (indol positivo) 16-200 32->200
Klebsiella pneumonieae 6.3 1-4
Serratia sp. >200 >200
Enterobacter sp. >200 128-256
Pseudomona aeruginosa >200 >200
a
(S) cepas no productoras de beta-lactamasas
b
(R) cepas productoras de beta-lactamasas
CIM: es la concentración más baja a la que un antibacteriano inhibe el crecimiento de un microorganismo después de su incubación.

Esquema 4.6. Hidrólisis del grupo acetato en posición 3' de Cefalotina por esterasas

Ante este problema, se sintetizaron derivados en los que se reemplazó el grupo acetato por un
hidrógeno, lo que, en definitiva, implica que el grupo sustituyente en posición 3 es ahora un metilo. Un
ejemplo de esta modificación se puede apreciar en la Cefalexina (Figura 4.11), la cual es menos
susceptible a la hidrólisis metabólica por esterasas y, a su vez, presenta un aumento en la absorción
a través de la pared intestinal, por lo que puede administrarse por vía oral. El cambio por el metilo
provoca una leve disminución de la actividad biológica, lo cual es compensado en parte por la cadena
 67

lateral de posición 7 (similar a la ampicilina). La Cefalexina es más activa contra Gram (-) que la
Cefalotina y menos activa contra Gram (+) que ésta.

Como hemos visto anteriormente, muchas de las

cefalosporinas comerciales derivan de la cefalosporina
C. Otra vía para la obtención de cefalosporinas
consiste en la transformación, en varios pasos, de una
penicilina en una cefalosporina. En el Esquema 4.7 se
resume la síntesis de ácido 7-amino
Figura 4.11. Cefalexina
desacetilcefalosporánico (7-ADCA) a partir de
Penicilina G o V. Básicamente, consiste en una
apertura del anillo de tiazolidina y luego un nuevo cierre que, genera un anillo de 6 miembros, es decir,
se transforma la tiazolidina en una dihidrotiazina. Una vez obtenido el 7-ADCA, se acila la cadena de
posición 7 por el grupo funcional correspondiente para llegar a la cefalosporina de interés, en este
caso la Cefalexina.

Cefalosporinas de 2da generación

Muchas cefalosporinas se encuentran clasificadas dentro de este grupo, algunas de ellas, las más
destacadas, se comentan a continuación.

El Cefamandol nafato es un profármaco que posee un grupo formiato en la posición C-7 que se
hidroliza en el organismo liberando el Cefamandol que es compuesto activo. Esto evita la
descomposición del medicamento durante su almacenamiento. En la posición C-3' la presencia de un
grupo tiotetrazol aumenta la potencia del medicamento y evita problemas de descomposición
metabólica del mismo.

En el caso de la Cefuroxima, el grupo oximina (metoxiimina) con orientación "syn" la hace resistente a
β-lactamasas por un efecto estérico. Además, presenta mayor estabilidad frente a esterasas por la
presencia del grupo carbamoil en C-3' en vez de un acetato.

Cefamicinas: El grupo de las cefamicinas es un tipo especial de cefalosporinas de segunda

generación que se diferencian por poseer un sustituyente metoxi en la posición 7α. Este grupo
proporciona una mayor resistencia a β-lactamasas por impedimento estérico y ésto les confiere un
mayor espectro de actividad comparado con las cefalosporinas de 1era generación. La Cefamicina C
fue la primera β-lactama aislada de una bacteria, más específicamente de un cultivo de Streptomyces
clavuligerus. La Cefamicina C no es comercial ya que este 7α-OMe baja su actividad antibiótica, por
eso se deben preparar cefamicinas semisintéticas para que, con los cambios en posición 7, compensar
esa pérdida de actividad. En el Esquema 4.8 vemos un ejemplo de modificación de la cadena lateral
de Cefamicina C para la obtención de Cefoxitina. Las cefamicinas presentan una escasa absorción
 68

oral, por lo que se suelen administrar vía parenteral lo cual; sin embargo, es muy doloroso por lo que
se debe co-administrar con un anestésico.

Esquema 4.7. Síntesis del ácido 7-amino desacetilcefalosporánico a partir de penicilina G o V

Esquema 4.8. Obtención de Cefoxitina a partir de Cefamicina C

Cefalosporinas de 3era generación

La incorporación de un anillo aminotiazol en la cadena lateral de posición 7, en varias cefalosporinas

de esta generación, aumenta la actividad sobre bacterias Gram (-), ya que a pH fisiológico este grupo
se encuentra protonado. Por otra parte, los diferentes sustituyentes en la posición 3 del núcleo cefem,
producen diferencias en las propiedades farmacocinéticas de cada uno los compuestos de esta
generación.
 69

En el esquema 4.9 detallaremos las cefalosporinas más relevantes de la 3era generación.

Esquema 4.9. Diferencias y similitudes estructurales entre algunas cefalosporinas de 3 era

generación

La Cefotaxima posee un grupo oxiimina (metoxiimina) de configuración "syn" en la cadena lateral

como la Cefuroxima, lo que le confiere resistencia a β-lactamasas. Como ya fue comentado en el caso
de otras cefalosporinas, la presencia de un grupo acetato en la posición C-3', que se hidroliza
fácilmente por esterasas, hace que su actividad disminuya notablemente. En el caso de Cefoperazona,
un grupo piperazina en la cadena lateral C-7, similar al que se encuentra en la penicilina Piperacilina,
le otorga actividad contra Pseudomonas y el grupo tiotetrazol de la posición C-3' le aumenta su
potencia y evita los problemas de degradación metabólica.

Cefalosporinas de 4ta generación

Cefepime y Cefpirome son también oxiimino cefalosporinas, debido a la presencia de este grupo en la
cadena lateral de posición 7. Son compuestos zwitteriónicos que tienen un sustituyente cargado
positivamente en la posición C-3' y una carga negativa en el grupo carboxilato de la posición 4. Esta
propiedad parece mejorar la capacidad de estos compuestos para penetrar en la membrana externa
de bacterias Gram (-) (comparado con las cefalosporinas de 3era generación). Básicamente, siguen la
tendencia de ser más activas contra Gram (-) que contra Gram (+) y, como generación más nueva,
tienen menos problemas de resistencia debido a β-lactamasas.

Cefalosporinas de 5ta generación

La Ceftarolina fosamil, el profármaco del metabolito activo Ceftarolina, se describe en la literatura como
una cefalosporina de 5ta generación. Aunque esta clasificación sugeriría un mayor perfil de actividad
Gram (-), según lo que hemos visto en la evolución de las cuatro generaciones anteriores, la Ceftarolina
presenta características únicas, debido a su espectro expandido de actividad Gram (+) comparada con
 70

todas las cefalosporinas comerciales existentes (por ejemplo contra MRSA). En la figura 4.12 se
pueden apreciar las características más importantes de relación estructura-actividad de esta nueva
molécula.

Figura 4.12. Grupos funcionales relacionados con la actividad de la prodroga ceftarolina

fosamil
 71

CAPITULO 5

CARBAPENEMS, MONOBACTAMAS, INHIBIDORES DE β-

LACTAMASAS

5.1 CARBAPENEMS

5.1.1. Introducción

Existen distintos tipos de antibacterianos derivados de β-lactamas que podemos denominar “no
clásicos”. Se trata de variaciones en los núcleos "clásicos" penam y cefem. Por ejemplo, si el núcleo
penam tiene un doble enlace entre las posiciones 2 y 3, se conocen como núcleo penem. Por otro
lado, si el átomo de azufre puede ser reemplazado por un oxígeno se denomina oxapenam y si
combina las dos variaciones será un oxapenem. Del mismo modo, se incorpora el prefijo "carba" o
"aza" si el azufre es reemplazado por carbono o nitrógeno, respectivamente. (Figura 5.1). De manera
análoga, derivamos los antibacterianos “no clásicos” del núcleo cefam.

Figura 5.1. Núcleos básicos de derivados β-lactámicos

Figura XX
El primer tipo de β-lactamas no clásicas que estudiaremos son los carbapenems, es decir estructuras
que tienen un doble enlace entre las posiciones 2 y 3 del núcleo penam y donde el átomo de azufre
en posición 1 está reemplazado por un -CH2-. En la Figura 5.2, se observa la comparación con el
núcleo penam.
 72

La historia de los carbapenems comienza en 1976 durante un programa de búsqueda de nuevos

antibióticos que inhibieran la biosíntesis del peptidoglicano a partir de streptomyces del suelo. En esa
búsqueda se aisló un compuesto al que se denominó Tienamicina, el cual tenía una actividad
antibacteriana interesante: era activo contra un amplio rango de bacterias Gram positivas y Gram
negativas, incluyendo
pseudomonas. La determinación de
su estructura fue una gran sorpresa,
ya que, además de tener un núcleo
carbapenem, desconocido hasta
ese momento, poseía otros
Figura 5.2. Comparación entre núcleos penam, penem y
aspectos estructurales llamativos
carbapenem
que lo diferenciaban de las
penicilinas (Figura 5.3). Hasta ese momento se pensaba que había ciertas características de las
penicilinas que eran imprescindibles para lograr una buena actividad antibacteriana: Las penicilinas
comerciales poseen en el carbono 6 del biciclo una cadena acilamino; en cambio en la Tienamicina y
en los carbapenems en general, el grupo acilamino es reemplazado por el grupo hidroxietilo en
posición "alfa", es decir con la cadena lateral por debajo del plano del sistema bicíclico. La
configuración entre los hidrógenos de las posiciones 5 y 6 es entonces trans, contrario a lo que pasa
en penicilinas y cefalosporinas, donde es cis. Además existe un nuevo centro estereogénico en la
cadena lateral (posición 6') cuya
configuración absoluta es R. El doble
enlace entre los átomos de carbono
2 y 3, le confiere mayor rigidez al
núcleo bicíclico e incrementa la
reactividad de la β-lactama.

En resumen, las diferencias Figura 5.3. Comparación entre Penicilina y Tienamicina

estructurales de los carbapenems
comparadas con las penicilinas son: a) No tienen átomo de azufre en posición 1. b) tienen un doble
enlace entre C-2 y C-3. c) No tienen los dos metilos en posición 2. d) No tienen la cadena acilamino
en posición 6. e) tienen configuración C-6/C-5 trans.

Como ya se mencionó, la Tienamicina es activa contra un amplio rango de bacterias Gram positivas
y Gram negativas, incluyendo pseudomonas. Tiene, además, una baja toxicidad y buena estabilidad
frente a β-lactamasas (se cree que esto se debe a la presencia del grupo hidroxietilo en posición 6α).
Sin embargo, en soluciones o al estado sólido es poco estable y no es bien absorbido por la pared
intestinal.
 73

5.1.2. Imipenen

Dado que las características de la Tienamicina no eran las mejores, se continuó investigando en la
búsqueda de antibióticos del tipo carbapenems con mejores características. Así, en 1986 comenzó a
comercializarse el Imipenem (Figura 5.4) aislado de la fermentación de Streptomyces cattleya. Se trata
de un derivado de la Tienamicina que tiene un grupo imino unido al amino terminal de la cadena de
posición C-2.

En estado sólido el Imipenem es estable a temperatura ambiente por aproximadamente 6 meses, no

obstante, en solución a temperatura ambiente se descompone aproximadamente el 10% por hora. Al
igual que todos los carbapenems conocidos no se administra en forma oral.

El Imipenem tiene muy buena actividad contra la mayoría de las especies patógenas de bacterias,
incluyendo las que son resistentes a otros antibióticos. Es un inhibidor de la formación de la pared
celular bacteriana, es rápidamente bactericida contra la mayoría de las bacterias. Ejerce su efecto
antibacteriano mediante la unión a importantes proteínas de unión a penicilinas (PBP) de bacterias
Gram positivas y Gram negativas. A diferencia de
las cefalosporinas y de la mayoría de las
penicilinas, este antibiótico se une
preferentemente a las PBP-2 de bacilos
aeróbicos Gram negativos para producir
esferoplastos; también se une a las PBP-1
produciendo un efecto letal para las bacterias. Figura 5.4. Imipenem
Los demás factores que contribuyen a la excelente actividad del Imipenem son su gran capacidad de
penetrar a través de la membrana externa de las bacterias Gram negativas y su muy buena estabilidad
frente al ataque de β-lactamasas plasmídicas y cromosomales, inclusive aquellas que hidrolizan a
otros antibióticos β-lactámicos.

El Imipenem es muy activo contra la mayoría de las bacterias Gram positivas, especialmente
importante es su actividad contra cepas de Staphylococcus aureus no productoras y productoras de
penicilinasas (β-lactamasas que hidrolizan penicilinas). Son también susceptibles al Imipenem
Streptococcus pneumoniae y β-hemolíticos (por ejemplo: S. pyogenes). También es activo contra la
mayoría de las especies de bacterias Gram negativas, por ejemplo: Neisseria meningitidis, N.
gonorrhoeae, y Haemophilus influenzae. El Imipenem presenta una actividad comparable a la
Ceftazidima, siendo muchas veces una alternativa para las bacterias resistentes a esta cefalosporina,
especialmente en el caso de infecciones por Pseudomonas aeruginosa.

5.1.2.1. Problemas de resistencia del Imipenem

El Imipenem es estable a la hidrólisis de la mayoría de las serin-β-lactamasas, incluyendo las

penicilinasas del grupo 2a (Según la clasificación de Bush-Jacoby-Medeiros) de Staphylococcus
 74

aureus y las del grupo 2b de Bacteroides fragilis. Es hidrolizado lentamente por las β-lactamasas TEM-
1 y TEM-2 de tal modo que las bacterias que poseen esas enzimas siguen siendo susceptibles al
Imipenem.

Sin embargo, a medida que se incrementa el uso del Imipenem van surgiendo los problemas de
resistencia: se generan carbapenemasas que destruyen el Imipenem, mutaciones en las que la
impermeabilidad de la célula está aumentada, o disminución de la afinidad por la PBP. Asimismo el
Imipenem posee un efecto secundario indeseable, es hidrolizado por una dehidropeptidasa-1 localizada
en las células de la superficie luminal del túbulo renal proximal, produciendo metabolitos nefrotóxicos.
Para evitar esa degradación enzimática el Imipenem se
co-administra en una relación 1:1 con Cilastatina (Figura
5.5) un inhibidor específico de la dehidropeptidasa-1 que
no tiene actividad antibiótica pero que, al inhibir la
dehidropeptidasa, permite al Imipenem no ser hidrolizado
y, por lo tanto, no se producen los productos nefrotóxicos.

Es importante tener en cuenta que el Imipenem es un Figura 5.5. Cilastatina

buen inductor de lactamasas, esto es, su uso favorece
la generación de β-lactamasas. Por esta razón solo debe usarse como último recurso para evitar un
incremento en los ya serios problemas de resistencia.

5.1.3. Meropenen

A diferencia de los carbapenems anteriores, el Meropenem es un antibiótico semisintético fue

originalmente desarrollado por Sumitomo Pharma (Japón) y aprobado por la FDA de Estados Unidos
en 1996. Estructuralmente es un 1-metilcarbapenem (Figura 5.6). Su principal característica es su
estabilidad frente a la dihidropeptidasa humana, por lo
tanto no requiere la co-adminstración de Cilastatina.
Meropenem es activo contra un número importante de
bacterias Gram positivas, anaerobios y aerobios Gram
negativos. Respecto al Imipenem, tiene mayor actividad
frente a bacterias Gram negativas, especialmente frente
a Pseudomonas, y es ligeramente menos activo frente a Figura 5.6. Meropenem
las Gram positivas.

5.1.4. Ertapenem

A partir del lanzamiento al mercado del Meropenem, la investigación farmacéutica en esta área se
centró en el desarrollo de 1-metilcarbapenems.
 75

Así, en 2002 surgió el Ertapenem, un nuevo antibiótico semisintético, similar estructuralmente al

Meropenem, y por ende estable frente a la dihidropeptidasa humana. Como diferencia estructural
presenta un grupo benzoato aniónico
en la cadena unida a posición 2 que se
une fuertemente a proteínas (Figura
5.7). Esta variación alarga la vida
media del compuesto permitiendo la
administración mediante una dosis
diaria. Es mayormente utilizado por vía
intravenosa para el tratamiento de Figura 5.7. Ertapenem

infecciones abdominales, ginecológicas, neumonías, infecciones del pie diabético y de la piel.

5.2. MONOBACTAMAS

Las monobactamas son una familia de antibióticos que poseen solo el anillo β-lactámico, es decir son
compuestos monocíclicos, a diferencia de las penicilinas, la cefalosporinas y los carbapenem, cuyo
anillo β-lactámico está fusionado con otro ciclo, formando un sistema bicíclico.

Las primeras monobactamas se descubrieron en 1976 de fuentes naturales y se aislaron de

crecimientos de bacterias (por ejemplo: Gluconobacter, Acetobacter, Chromobacterrium). Dentro de
este grupo se encuentran las Nocardicinas (Figura 5.8) aisladas por la compañía japonesa Fujisawa,
que mostraron moderada actividad contra bacterias Gram negativas, incluyendo pseudomonas. Este
descubrimiento causó un gran desconcierto, dado que, hasta ese momento, la presencia de un
segundo anillo fusionado a la β-lactama era considerado esencial para la actividad, especialmente
porque aumentaba la tensión del sistema
y, por lo tanto, aumentaba la reactividad
del anillo β-lactámico. Se teorizó que la
razón era que procedía por un mecanismo
de acción distinto, pero esto no ha sido
comprobado.
Figura 5.8. Nocardicina A
Si bien la actividad de las Nocardicinas, en
particular de la Nocardicina A, no era extraordinaria, este descubrimiento abrió el panorama de la
investigación farmacéutica hacia compuestos β-lactámicos monocíclicos, los cuales no eran de interés
hasta ese momento. Este tipo de estructuras β-lactámicas monocíclicas se las conoce como
monobactamas.

5.2.1. Aztreonam

De la investigación farmacéutica surgió un compuesto sintético que es el principal referente del grupo
de las monobactamas, el Aztreonam detallado en la Figura 5.9. En esta figura se muestran las
 76

principales características estructurales del Aztreonam y la relación con su actividad antibacteriana.

Como se puede apreciar, la cadena lateral unida a la posición 3, es idéntica a la que presenta la
cefalosporina de 3era generación Ceftazidima en la cadena unida a posición 7 (ver Capítulo 4, Tabla
4.2), además, el grupo metilo en posición 4 y orientación "alfa" le aumenta la resistencia a β-lactamasas
y, por otro lado, el grupo ácido sulfónico mejora el reconocimiento por las PBP.

Figura 5.9. Principales características estructurales del Aztreonam

Del mismo modo que las otras clases de antibióticos β-lactámicos, el Aztreonam es un inhibidor de la
formación de la pared celular bacteriana. El Aztreonam atraviesa fácilmente la membrana externa de
las bacterias aeróbicas Gram negativas y presenta muy buena afinidad por las PBP-3. Esta interacción
produce la filamentacion de la bacteria, inhibe la división celular y, por último, causa la muerte de la
bacteria.

El Aztreonam presenta un espectro de acción antibacteriano reducido y es solamente activo contra

bacterias aeróbicas Gram negativas. Son altamente susceptibles Neisseria meningitidis, N.
gonorrhoeae y hamophilus influenzae incluyendo cepas productoras de β-lactamasas. Tiene también
una potencia similar a las cefalosporinas de tercera generación contra la mayoría de las
enterobacterias, incluyendo cepas que son resistentes a penicilinas, a cefalosporinas de primera
generación y a aminoglicósidos. Es, además, activo frente a la mayoría de las cepas de Pseudomonas
aeruginosa, incluyendo aquellas que son resistentes a otros antibióticos antipseudomonas. El
Aztreonam no posee actividad contra organismos Gram positivos o bacterias anaeróbicas ya que no
se une a las transpeptidasas producidas por estas bacterias.

Debido a que el Aztreonam presenta un bajo potencial alergénico puede ser útil para tratar pacientes
que presentan reacciones alérgicas a las penicilinas y cefalosporinas.

Se utiliza especialmente en infecciones graves producidas por bacterias Gram negativas, muchos de
ellos de origen hospitalarios y en infecciones producidas por cepas bacterianas resistentes a otros
antibióticos. Tiene actividad bastante similar a los aminoglicósidos siendo una buena alternativa a
 77

ellos, especialmente en tratamientos prolongados, ya que tienen mucho menos problemas de toxicidad
respecto a los aminoglicósicos.

Cuando es necesario, el Aztreonam puede combinarse con otros agentes antimicrobianos (por ej.:
penicilinas, glicopéptidos, etc.) y de esa manera extender el espectro antibacteriano (especialmente
hacia las bacterias Gram positivas) para combatir infecciones producidas por varias bacterias, o como
prevención cuando se desconoce el germen productor de una infección.

5.3. INHIBIDORES DE β-LACTAMASAS

En el año 1944 Ernst B. Chain y Edward Abraham (Universidad de Oxford, Reino Unido), durante sus
investigaciones relacionadas con las penicilinas, cuya producción industrial habían ayudado a
desarrollar, observaron además que enzimas de origen bacteriano tenían la capacidad de destruir la
penicilina (penicilina G o V). Dado que en ese momento se desconocían las características
estructurales de las enzimas se las denominaron penicilinasas.

Como ya fue mencionado en capítulos anteriores, las β-lactamasas atacan el carbonilo β-lactámico
generando un complejo acil-enzima transitorio que deriva rápidamente en la liberación de la enzima y
en un compuesto que pierde su anillo β-lactámico y, por lo tanto, su actividad antibiótica (Esquema
5.1).

Esquema 5.1. Inactivación de penicilinas por β-lactamasas

El número, diversidad y complejidad de las enzimas que destruyen compuestos β-lactámicos ahora
llamadas β-lactamasas, ha crecido exponencialmente desde ese descubrimiento. Por lo tanto, fue
necesario que la investigación científica desarrollara modificaciones a las estructuras de los
antibióticos conocidos o encontrar nuevos antibióticos naturales que no fueran destruidos por las β-
lactamasas. Con este objetivo, se realizaron modificaciones químicas que derivaron en antibióticos
estables a la hidrólisis por β-lactamasas, como por ejemplo, los grupos metoxi de la posición orto del
anillo de la cadena lateral en la Meticilina, o la ubicación de grupos metoximina cis en la cadena lateral
de cefalosporinas (especialmente en las de tercera generación) (Figura 5.9). Simultáneamente los
esfuerzos en una gran cantidad de laboratorios farmacéuticos y académicos, estuvieron orientados
hacia compuestos naturales o sintéticos que fueran inhibidores de estas enzimas. Es decir, buscar
 78

compuestos en los que la vida media del complejo acil-enzima del Esquema 5.1 sea lo suficiente alta
como para producir la inactivación de la enzima.

Figura 5.9. Antibióticos estables frente a β-lactamasas

5.3.1. Inhibidores reversibles e irreversibles

Los inhibidores pueden ser reversibles o irreversibles. Los reversibles implican la competencia entre
el inhibidor y el sustrato natural por la enzima (Esquema 5.2). Como en todo proceso reversible, el
equilibro depende de las concentraciones del sustrato (S), del inhibidor (I) y de la enzima (E). Como la
concentración de la enzima es baja y fija, el equilibro depende de la concentración del sustrato y del
inhibidor. Por lo tanto, se debe agregar el fármaco, es decir, el inhibidor, en cantidad suficiente para
que el equilibro se desplace hacia el complejo enzima-inhibidor. De lo contrario predomina el sustrato,
la enzima ejerce su acción y, por lo tanto, no hay inhibición.

Esquema 5.2. Cinética de la inhibición reversible de una enzima

Si bien la inhibición reversible es la más común, generalmente es menos eficiente, ya que requiere la
administración frecuente del fármaco para mantener alta la concentración del mismo.

Por otro lado, los inhibidores irreversibles actúan inactivando la enzima, es decir formando un enlace
estable (generalmente covalente) con la enzima, lo que le impide ejercer su acción. La cinética es, en
este caso, más simple (Esquema 5.3). El complejo inicial enzima-inhibidor deriva luego en la
inactivación de la enzima.
 79

Esquema 5.3. Cinética de la inhibición irreversible de una enzima

5.3.2. Ácido Clavulánico

En el laboratorio farmacéutico SmithKline Beecham (hoy GlaxoSmithKline), en el Reino Unido, se

implementó un programa de búsqueda de sustancias producidas por microorganismos que
presentaran actividad como inhibidores de β-lactamasas. Este programa dio sus frutos y en el año
1976, con el descubrimiento de la actividad inhibidora del ácido clavulánico (Figura 5.10).
El ácido clavulánico es un compuesto β-lactámico aislado de la fermentación del Streptomyces
clavuligerus. Este compuesto presentaba muy poca actividad antibiótica, en cambio poseía potentes
propiedades como inhibidor irreversible de una amplia
variedad de serin-β-lactamasas. Desde el punto de vista
clínico, la aparición del ácido clavulánico creó nuevas formas
de administración de antibióticos β-lactámicos, esto es
asociaciones de un antibiótico susceptible a β-lactamasas y
un inhibidor de las mismas, como el ácido clavulánico. El Figura 5.10. Ácido clavulánico
ácido clavulánico, como los demás inhibidores de β-lactamasas, son llamados “inhibidores suicidas”
ya que son reconocidos por la β-lactamasa y se unen a ella de manera irreversible sacrificándose para
que el antibiótico no se vea afectado y pueda ejercer su actividad antibiótica.
Este descubrimiento marcó un hito en las investigaciones de compuestos β-lactámicos con lo que, a
partir de ese momento, no sólo se pensó en nuevos y más potentes antibióticos, sino también en
nuevos inhibidores de β-lactamasas (guiados por el conocimiento de la estructura del ácido clavulánico
que, evidentemente no era muy similar a la de los antibióticos β-lactámicos conocidos). La estructura
química de este nuevo derivado β-lactámico bicíclico está compuesta por la fusión de un anillo de β-
lactama y un ciclo de oxazolidina. El ácido clavulánico presenta además otras características: a) no
contiene sustituyentes en la posición 6; b) no tiene el gem-dimetilo en la posición 2; c) la configuración
de los carbonos 3 y 5, es la misma que en las penicilinas.

5.3.2.1. Análisis de la actividad inhibidora del ácido clavulánico frente a diferentes cepas de β-
lactamasas
 80

La Tabla 5.1 muestra la actividad hidrolítica de distintas β-lactamasas frente a diversos antibióticos β-
lactámicos (Ampicilina, cefalosporinas de 1era y 3era generación e Imipenem) y finalmente la actividad
inhibidora del ácido clavulánico frente a esas mismas β-lactamasas.

Tabla 5.1. Comparación de actividad hidrolítica de distintas β-lactamasas frente a diversos

antibióticos β-lactámicos y de actividad inhibidora del ácido clavulánico de dichas enzimas
Los valores de hidrólisis representados para los diferentes antibióticos se han tomado en base a asignar arbitrariamente
el valor 100 a la hidrólisis de la bencilpenicilina. a valores de IC50 expresados en M. bInhibida por EDTA; ND=no
determinado;

(Bush-Jacoby-
Clasificación

Clasificación
Clavulánicoa
Cefaloridina
Ampicilina

Ceftazidima
Cefotaxima

Medeiros)
Funcional
Molecular
Imipenem

(Ambler)
Acido
lactamasas

E. cloacae P99 1.3 6.700 >7 <0.7 <0.7 >100 C 1

E.coli AmpC 9.1 290 0.37 ND <0.03 190 C 1

S. aureus PCI 180 1.1 ND ND ND 0.03 A 2a

TEM-1 110 140 0.07 0.01 <0.01 0.09 A 2b

TEM-3 110 120 170 8.3 0.01 0.03 A 2be

TEM-10 130 77 1.6 68 <0.02 0.03 A 2be

SHV-1 150 48 0.18 0.02 <0.01 0.03 A 2b

SHV-4 200 320 120 52 <0.01 0.03 A 2be

Klebsiella K1 61 36 1.8 0.01 <0.01 0.007 A 2be

TEM-31(IRT-1) 250 13 <1 <1 <1 9.4 A 2br

PSE-4 88 40 0.02 0.02 0.01 0.15 A 2c

OXA-10 270 32 1 0.12 0.05 0.81 D 2d

P. vulgaris 100 3000 13 0.17 ND 0.35 A 2e

S. marcescens 1300 1200 18 ND 310 0.28 A 2f

Sme-1

B. fragilis CcrAb 98 22 51 68 100 >500 B 3

P. paucimobilis 62 3.9 ND <0.1 <0.1 19 ND 4

Tomando arbitrariamente como 100 la hidrólisis que la β-lactamasa produce sobre la Penicilina G,
vemos que la Ampicilina (segunda columna) es hidrolizada a valores cercanos a 100, es decir, su
 81

resistencia a la hidrólisis por las β-lactamasas es baja y similar a la de la Penicilina G. Cuando pasamos
a las cefalosporinas, especialmente las de tercera generación (cuarta y quinta columna), los valores
bajan notablemente demostrando la resistencia de estos antibióticos a la hidrólisis. El caso es aún más
notorio con el Imipenem (sexta columna). La séptima columna nos permite apreciar que la mayoría de
estas β-lactamasas son inhibidas por el ácido clavulánico, dado que los valores de concentración del
inhibidor que producen el 50% de la inhibición (IC50) son, en general, muy bajos. Las β-lactamasas de
clase B son metalo-β-lactamasas, estructuralmente diferentes al resto, y actúan por un mecanismo
diferente a las serin-β-lactamasas. Por su mecanismo de acción que veremos en la siguiente sección,
el ácido clavulánico no inhibe las β-lactamasas de clase B (metalo-β-lactamasas), como es el caso de
la cepa B. fragilis CcrA de la Tabla 1.

5.3.2.2. Aspectos mecanísticos de la inhibición de serin-β-lactamasas por el ácido clavulánico

Se ha propuesto un mecanismo para la inactivación de serin-β-lactamasas TEM-2 por el ácido

clavulánico que implica la apertura del anillo β-lactámico por el aminoácido serina de la posición 70 y
la formación del complejo acil-enzima (1), seguido de una apertura del ciclo de la oxazolidina para dar
el derivado cetónico (2) el cual se tautomeriza al β-amino acrilato (3) que es un derivado más estable
(Esquema 5.3).

Esquema 5.3. Mecanismo para la inactivación de serin-β-lactamasas TEM-2 de por el

ácido clavulánico
 82

Estas formas transitoriamente inhibidas se pueden hidrolizar para liberar la enzima o bien sufrir
posteriores transformaciones. Las estructuras 4 y 5 se forman por reacción de un grupo amino de una
lisina de una determinada posición de la enzima, con las estructuras transitorias 2 o 3. De este modo,
al formase 4 y 5, la enzima queda irreversiblemente inhibida por formación de dos uniones covalente
que bloquean dos posiciones del sitio activo evitando que la β-lactamasa hidrolice el anillo β-lactámico
de los antibióticos.

Como fue mencionado y se aprecia en el Esquema 5.3, parte de las moléculas de ácido clavulánico
se descomponen y liberan la enzima, produciendo ciclos de reacción ineficientes. Se cree que
aproximadamente 115 moléculas de ácido clavulánico son destruidas por moléculas de enzimas antes
que la β-lactamasa quede irreversiblemente inactivada.

5.3.3. Ácido Penicilánico Sulfona (Sulbactama)

En el año 1978, en el laboratorio Pfizer de los Estados Unidos, se obtuvo por semisíntesis el ácido
penicilánico sulfona (Sulbactama) (Figura 5.11), que posee muy buena actividad inhibitoria de β-
lactamasas, principalmente frente a enzimas de la clase A, según la clasificación de Ambler. Si bien
tiene un mayor espectro de actividad que el ácido clavulánico presenta
una menor potencia que éste. Del mismo modo que el ácido
clavulánico, la Sulbactama posee muy poca actividad antibiótica pero
presenta muy buena afinidad por β-lactamasas, lo que hace posible
su uso en combinación con penicilinas o cefalosporinas que usadas
individualmente son degradadas por las β-lactamasas. Las Figura 5.11. Sulbactama
características estructurales indican la ausencia de cadena lateral en
el carbono 6 como el ácido clavulánico y una estructura similar a las penicilinas, sólo que el azufre está
oxidado a sulfona. Una característica importante de la sulbactama es que se obtiene de manera más
o menos simple, en pocos pasos, a partir del 6-APA.

5.3.3.1. Aspectos mecanísticos de la inhibición de serin-β-lactamasas por la sulbactama

En el año 1981, Jeremy R. Knowles y sus colaboradores del Departamento de Química de la

Universidad de Harvard (Cambridge, Massachusetts, USA) publicaron un artículo en el que proponen
un mecanismo para la inactivación de la β-lactamasa TEM-1 de Escherichia coli por el ácido
penicilánico sulfona (Sulbactama).

En el Esquema 5.4 se presenta esquemáticamente el proceso antes mencionado. Inicialmente el grupo

hidroxilo (nucleófilo) de la serina 70 de la β-lactamasa ataca al grupo carbonilo de la β-lactama para
formar un intermediario tetrahédrico A mediante una unión covalente, el cual da lugar a la formación
de la peniciloil-enzima (acil-enzima) B, que se produce por la apertura del anillo tiazolidina; aquí el
 83

grupo sulfona actúa como un grupo fuertemente atractor de electrones. Si la acil-enzima B sigue el
curso normal de desacilación, se forma la imina C, la cual espontáneamente se hidroliza para dar el
malono-semialdehído y el sulfonato de penicilamina. El intermediario B puede también dar lugar a una
segunda reacción que conduce a una inhibición transitoria de la enzima (estructura de la enamina D).
El intermediario B sufre también otra reacción, una transiminación con un grupo amino de lisina de
una determinada posición de la enzima, que conduce a una forma irreversiblemente inactivada de la
enzima (estructura E). En esta estructura, la enzima β-lactamasa ha quedado unida en forma covalente
a través de un átomo de oxígeno y un átomo de nitrógeno, a una parte de la estructura original del
inhibidor.

De manera similar a lo que pasa con el ácido clavulánico, muchas moléculas de sulbactama
(aproximadamente 7000) se destruyen antes de que la enzima quede totalmente inactivada.

Esquema 5.4. Mecanismo para la inactivación de la β-lactamasa TEM-1 de Escherichia coli

por el ácido penicilánico sulfona (Sulbactama)
 84

5.3.4. Tazobactama

En el año 1987 Micetich y colaboradores informaron la semisíntesis de tazobactama, (ácido 2β-

triazolilmetilpenicilánico sulfona, Figura 5.12), un inhibidor con buena afinidad para la mayoría de las
β-lactamasas de la clase A y algunas de la clase D y con moderada
afinidad para β-lactamasas de la clase C, especialmente para
Morganella morganii. Al igual que la Sulbactama, la Tazobactama
se prepara a partir del 6-APA, aunque el número de pasos
sintéticos es mayor. Bush y colaboradores propusieron un
mecanismo similar al de Sulbactama, para Tazobactama en su Figura 5.12. Tazobactama

interacción con serin-lactamasas.

5.3.5. Combinaciones de un antibiótico β-lactámico y un inhibidor de β-lactamasas

En clínica médica, el Ácido Clavulánico, la Sulbactama y la Tazobactama se usan en combinación

(simplemente mezclas) en proporciones fijas con una penicilina susceptible a la degradación por
enzimas β-lactamasas. Existen comercialmente varias combinaciones, algunas de las más utilizadas
son: i) Amoxicilina-Clavulanato de potasio; ii) Ticarcilina- Clavulanato de potasio; iii) Ampicilina-
Sulbactama sódica; iv) Piperacilina-Tazobactama.

5.3.6. Sultamicilina

La Sultamicilina es un éster doble en el que la Ampicilina y la Sulbactama se encuentran unidas a

través de un grupo metileno (Figura 5.13).

Este éster doble actúa como un profármaco,

luego de la administración por vía oral y de
su absorción, esterasas no específicas la
hidrolizan liberándose el antibiótico
ampicilina y el inhibidor de β-lactamasas en
una proporción molar de 1:1. La
Figura 5.13. Sulfamicilina
Sultamicilina es comercializada en varios
países con el nombre de Unasyn (Pfizer), mientras que en Argentina se expende como Sultamicilina
Richet y Ampigen SB.
 85

CAPITULO 6

INHIBIDORES DE BIOSÍNTESIS DE PEPTIDOGLICANO NO

-LACTÁMICOS

6.1. GLICOPEPTIDOS

Las β-lactamas no son los únicos agentes antibacterianos que inhiben la biosíntesis de la pared
celular. Los antibióticos glicopéptídicos son una clase de péptidos que contienen azúcares ligados a
aminoácidos, y actúan inhibiendo la síntesis, en un paso metabólico diferente y anterior a los agentes
β-lactámicos.

Este grupo de antibióticos está integrado en la actualidad por dos antibióticos: la vancomicina y el
complejo de 5 teicomicinas, conocido como teicoplanina.

Los antibióticos glicopeptídicos vancomicina y teicoplanina surgieron en su momento como alternativa

terapéutica a la rápida difusión de resistencias a los β-lactámicos en microorganismos Gram positivos.
Son antibióticos bactericidas para la mayoría de las bacterias Gram positivas, pero es inactivo contra
bacterias Gram negativas. Esto se debe a que por su elevado peso molecular (aproximadamente 1000)
es incapaz de atravesar la membrana externa de estas bacterias.

Tanto vancomicina como la teicoplanina son frecuentemente el último recurso en el tratamiento de

pacientes con infecciones resistentes a los medicamentos . Como tales, son antibióticos muy
importantes y actualmente se están llevando a cabo un gran número de investigaciones en esta área.

Vancomicina: Es un antibiótico glicopeptídico obtenido por fermentación de Amycolaptosis orientalis.

Fue descubierto en el año 1955 en el laboratorio de Eli Lilly en Estados Unidos. En el año 1958 se
introdujo en el mercado para el tratamiento de infecciones causadas por Staphylococcus aureus,
resistentes a la penicilina. Sin embargo, el desarrollo de nuevos antibióticos con menos efectos
indeseables limitó su uso hasta que comenzó a ser utilizada nuevamente debido a la aparición de las
cepas de MRSA sumado al aumento en el número de pacientes susceptibles de presentar infecciones
por microorganismos Gram positivos. Hoy en día es usada en clínica médica para el tratamiento de
bacterias Gram positivas multirresistentes como es el caso de MRSA, enterococos resistentes a la
gentamicina o a otros antibióticos β-lactámicos.

Teicoplanina: Este antibiótico glicopeptídico se descubrió en el año 1975 en el laboratorio Lepetit

(Italia). Se obtiene por fermentación de Actinoplanes teichomyceticus como una mezcla de 5
componentes con estructuras muy similares que sólo difieren en la naturaleza de un sustituyente
 86

alquílico. Dicha cadena alquílica cumple la función de anclar el antibiótico a la superficie exterior de la
membrana celular, estando de esta manera perfectamente situada para interactuar con los bloques de
construcción para la síntesis de la pared celular.

6.2. USOS

Son los antibióticos de elección para infecciones severas cuando otros antibióticos no son de utilidad.
Se administran por vía intravenosa (IV). La vancomicina se absorbe poco por vía gastrointestinal. Por
vía oral solo se utiliza para el tratamiento de colitis pseudomembranosa. Para potenciar sinérgicamente
su acción bactericida se administra asociado con gentamicina u otras aminoglucósidos.

6.3. QUÍMICA

La vancomicina y la teicoplanina tienen en su estructura un núcleo central de un heptapéptido lineal

unido a cinco residuos aromáticos. Cada aminoácido se identifica por medio de un número, o sea,
tanto vancomicina como la teicoplanina poseen una cadena de siete aminoácidos (AA) enumerados
del 1 al 7 (Figura 6.1).

Cinco de los siete aminoácidos que forman parte del esqueleto del heptapéptido son comunes a estos
antibióticos:

 Los AA 4 y 5 son derivados de p-hidroxifenilglicinas.

 AA 6 es un derivado de tirosina con un hidroxilo sustituyendo en el metileno.

 AA 2 es un derivado de
tirosina. En el caso de
Vancomicina tiene un hidroxilo en
el carbono unido a la cadena
principal.

 AA 7 tiene el grupo ácido

carboxílico terminal y es una
m,m’-dihidroxifenilglicina.

Los anillos bencénicos sustituidos

de los aminoácidos 2 y 4, y también
los anillos correspondientes a los
AA 4 y 6, están unidos entre sí por Figura 6.1. Estructura de Vancomicina
un átomo de oxígeno (unión éter).
Los restos fenilo de los aminoácidos 5 y 7 están unidos por uniones carbono-carbono de ambos anillos.

Los dos aminoácidos restantes, 1 y 3, son diferentes (no poseen anillos aromáticos en sus cadenas
laterales).
 87

 En las teicoplaninas el AA 1 tiene un grupo amino terminal y es una p-hidroxifenilglicina (Figura

6.2). El AA 3 es una m,m’-dihidroxifenilglicina. Estos dos aminoácidos se encuentran unidos a través
de una unión éter (átomo de oxígeno) formando de ese modo un ciclo adicional. El núcleo central del
heptapéptido está a su vez unido en tres posiciones a tres monosacáridos, también formando uniones
hemiacetálicas: una D-manosa, una glucosamina y una N-acetilglucosamina; y también unidos, por
unión acetálica, con AA 4, AA 6 y AA 7. Las diferentes teicoplaninas, que se obtienen en mezclas,
varían en la cadena.

Figura 6.2. Estructura de Teicoplanina

 En vancomicina los AA 1 y 3 son alifáticos, y corresponden a leucina y aspargina

respectivamente. Al núcleo central del heptapéptido está a su vez unido a un disacárido a través de
una unión hemiacetálica con un OH del anillo bencénico del AA 4.

Los anillos entre AA 5 y AA 7 están unidos por uniones C-C.

Observando las estructuras de esos antibióticos comprobamos que poseen un átomo de cloro en el
anillo del aminoácido 2 y varios grupos hidroxilo en diferentes anillos bencénicos y en diferentes
posiciones.
 88

6.4. MECANISMO DE ACCIÓN

Esta familia de compuestos actúa mediante su unión a precursores de la pared bacteriana, en concreto
al dipéptido D-Ala-D-Ala terminal del glicosilpentapéptido, por lo que inhibe tanto los procesos de
transglicosilación como de transpeptidación (Walsh, 2003; Figura 6.3).

En el año 1961 Reynolds y Jordan demostraron que la vancomicina ejerce su acción por inhibición de
la síntesis de la pared celular interfiriendo en la producción del peptidoglicano, actuando en un paso
metabólico diferente y previo al de los antibióticos β-lactámicos.

El sitio de unión para su diana es un péptido que tiene una alta afinidad por péptidos acetil-D-alanil-D-
alanina y relacionados a través de cinco enlaces de hidrógeno.

La vancomicina actúa en la etapa de transglicosilación en la que la peptidoglicano transglicosilasa

cataliza la unión de un N-acetilglucosamil-N-acetilmuramil pentapéptido a un fragmento de
peptidoglicano en crecimiento (Figura 6.3), pero no sobre la etapa de entrecruzamiento como en el
caso de los antibióticos β-lactámicos (PBP, transpeptidasas, Figura 6.4).

Entre 1981-1984 por resonancia magnética nuclear de hidrógeno ( 1H RMN) se determinó de manera
precisa la estructura de los antibióticos vancomicina y teicoplaninas, demostrando además que se
formaba un complejo 1:1 entre la vancomicina y el N-acetil-N-acetal muramil pentapéptido, a través de
5 enlaces de puente de hidrógeno (Figura 6.5).
 89

Figura 6.4. Reacciones catalizadas por las PBPs

Figura 6.5. Representación del complejo 1:1 entre vancomicina y el residuo D-Ala-D-
Ala del UDP-MUR-N-Ac-pentapéptido

El resultado neto de esa interacción es la inhibición de la reacción catalizada por la enzima

peptidoglicano transglicosilasa de adición del N-acetilglucosamina-N-acetilmuramil pentapéptido a un
 90

fragmento del peptidoglicano en crecimiento (Figura 6.5). Se ha postulado que esa interacción entre
los antibióticos glicopéptidos con D-Ala-D-Ala produce en el UDP-N-acetilmuramil pentapéptido un
impedimento estérico que bloquea la catálisis por la transglicosilasa evitando así la formación final de
la pared celular. Dado que la vancomicina y teicoplanina no transponen la membrana citoplasmática,
no inhiben otras etapas de la biosíntesis de la pared celular (peptidoglicano).

6.5. ESPECTRO ANTIBACTERIANO DE VANCOMICINA

La vancomicina es activa contra bacterias gram positivas. Es uno de los antibióticos más potentes
contra Staphylococcus aureus y S. epidermis, incluyendo cepas que son resistentes a meticilina y
cefalosporinas.

Streptococcus pyogenes y S. pneumoniae (incluyendo cepas resistentes a penicilina G) son altamente

susceptibles. La vancomicina generalmente inhibe el crecimiento de estreptococos vriridans, S. bovis,
S. agalactiae (grupo B) y enterococos (por ejemplo E. faecalis), aunque sobre algunas de estas
especies no tiene acción bactericida. Para potenciar sinérgicamente la actividad bactericida se utiliza
en esos casos, asociado con gentamicina.

Estreptococos anaeróbicos o microaerófilos son generalmente susceptibles. Dentro de los bacilos

Gram positivos para los cuales vancomicina es activa se encuentran los clostridios (incluyendo C.
difficile), corinebacterias (incluyendo el difteroides JK resistentes a las penicilinas), Bacillus anthracis,
Listeria monocytogenes, especies de Actinomyces y los lactobacilos.

6.6. RESISTENCIA A GLICOPEPTIDOS

Treinta años después de que vancomicina se comenzara a usar en clínica aparecieron los primeros
casos de resistencia. La resistencia de enterococos a vancomicina conocida con las siglas VRE
(vancomycin resistant enterococci) ha aumentado más de 20 veces desde entonces.

Estos son organismos que pueden causar infecciones intestinales potencialmente mortales en
pacientes cuyo sistema inmunológico está debilitado. La resistencia de los últimos organismos ha
surgido a partir de una modificación de los precursores de la pared celular donde el grupo terminal D-
alanina de la cadena del pentapéptido se ha sustituido por el ácido D-láctico, resultando en un enlace
terminal éster en lugar de un enlace amida. El D-ala-D-lactato forma sólo 4 puentes de hidrógeno con
la vancomicina/teicoplanina eliminando uno de los grupos NH implicados en la interacción de enlace
de hidrógeno con vancomicina (Comparar Figura 6.5 y Figura 6.6). Esto es suficiente para debilitar la
afinidad de unión y hacer que el antibiótico sea ineficaz. El bloque de construcción modificado sigue
siendo aceptable para las enzimas transglicosilasa y transpeptidasa. En este último caso, los lactatos
actúan como el grupo saliente en lugar de la D-alanina.
 91

Figura 6.6. Interacción entre vancomicina y el peptidoglicano terminal (se ha representado N-acetil-
D-Ala-D-Lactato) en bacterias resistentes a vancomicina

Una única diferencia hace a la vancomicina 1000 veces menos a fin con la cadena de UDP-Mur-N-Ac-
pentapéptido (Figura 6.5). Para producir estas D-Ala-D-lactato las bacterias resistentes realizan
cambios en la biosíntesis con la intervención de otras enzimas.

En el proceso normal, una racemasa transforma la L-Ala en D-Ala y luego forma el enlace peptídico
entre ellos, esta D-Ala-D-Ala se une entonces con el último aminoácido de la UDP-muranil tripéptido
para dar el UDP-muramil pentapéptido (Figura 6.7).

Figura 6.7. Biosíntesis normal del UDP-muramil pentapéptido

 92

En el camino que conduce a la resistencia, la enzima Van H reduce un diceto piruvato a D-lactato y
con ayuda de la enzima Van A forma la unión con la D-Ala para formar la D-ala-D-lactato que luego
sigue el proceso como en el caso normal (Figura 6.8).

Figura 6.8. Mecanismo de resistencia a través de biosíntesis de UDP-muramil pentapéptido

modificado

El problema de la resistencia a vancomicina es uno de los más serios en las infecciones bacterianas.
Dado el creciente aislamiento de cepas resistentes a vancomicina, es imprescindible contar con
alternativas terapéuticas para el tratamiento de infecciones producidas por Gram positivos
multiresistentes. Por ello el gran interés en los últimos años, impulsado por la Organización Mundial
de la Salud, en desarrollar nuevos antibióticos.

Una de las moléculas que han surgido para resolver este nuevo desafío terapéutico es de la familia de
las Estreptograminas. Este tipo de antimicrobianos es producido por Streptomyces pristinaepiralis, del
cual se ha obtenido una familia importante de compuestos, que incluyen a las pristinamicinas, las
virginiamicinas, las mikamicinas y las oestreomicinas. Se puede considerar como representante
prototipo a la combinación quinupristina-dalfopristina (ver Capítulo 8.2.1).

6.7. NUEVOS ANTIBIÓTICOS GLICOPEPTÍDICOS

Más recientemente, se han desarrollado derivados semi-sintéticos de los glicopéptidos naturales, con
el fin de combatir las resistencias emergentes a éstos.

Elli Lilly desarrolló los compuestos semisintéticos LY 264826 y LY 191145 derivados de vancomicina
(Figura 6.9). Estructuralmente LY 264826 difiere de ésta última en que posee una molécula adicional
de un aminoglucósido en X, o sea, en el OH del C de la tirosina (AA 6) y tiene la configuración opuesta
en el C-4 del segundo monosacárido.

LY 264826 es de 4 a 8 veces más activo que vancomicina, pero no es activo contra bacterias Gram
positivas resistentes a vancomicina (VRE).

El compuesto LY 191145 es similar al compuesto anteriormente descripto pero tiene un grupo p-

clorofenil unido al N de la segunda unidad de monosacárido (glucosamina).
 93

LY 191145 posee mayor actividad que vancomicina y es activo contra cepas resistentes a vancomicina
y teicoplanina.

Figura 6.9. Comparación entre Vancomicina y sus derivados semisintéticos

El compuesto semisintético MDL 63,246, derivado del compuesto natural MDL 62,476 posee una base
estructural similar a la de teicoplanina (Figura 6.10).

Figura 6.10. Comparación entre Teicoplanina y compuestos relacionados

Estructuralmente MDL 63,246 posee al igual que Vancomicina el N-terminal metilado, pero no presenta
el grupo monosacárido unido al AA6 y además posee una amida alifática en la posición del C terminal.
 94

En pruebas in vitro resultó más potente que teicoplanina y vancomicina y presentó buena actividad
contra cepas resistentes a glicopéptidos.

6.8. ANÁLOGOS DE AMINOÁCIDOS

6.8.1. D-clicoserina (Compuesto Natural)

D-clicoserina se obtuvo por primera vez en el año 1955 por fermentación de Streptomyces orchidaceus
pero actualmente se produce por síntesis. Químicamente es D-4-amino-3-isoxazolidona y es
considerado un “análogo cíclico” de la D-alanina (Figura 6.11). Es un inhibidor reversible competitivo
de las enzimas alanina racemasa y D-alanil-D-alanina sintetasa (1er etapa síntesis peptidoglicano). Su
mecanismo de acción se basa en la similitud con el
sustrato natural D-alanina. La enzima “confunde” la D-
cicloserina por la D-alanina.

Sin embargo, aunque interfiere la biosíntesis del

peptidoglicano, su uso es muy restringido ya que presenta
neurotoxicidad para los humanos.
Figura 6.11. Comparación entre D-
La resistencia se asocia con una sobreexpresión de la alanina y su analogo cíclico
enzima objetivo.

6.8.2. Fosfomicina (Compuesto Natural)

Fosfomicina es un producto de fermentación de Streptomyces fradae, Streptomyces

viridochromogenes y Streptomyces wedmorensis. En la actualidad se produce por síntesis.

Para mejorar la absorción oral (evita irritación

gástrica) se vende como sal de trometamina
(Figura 6.12).

La Fosfomicina inhibe irreversiblemente la Figura 6.12. Sal de trometamina

enzima fosfoenol piruvato transferasa (1er
etapa síntesis peptidoglicano) evitando la
formación del UDP N-acetil glucosamina enol piruvato precursor muramil (ácido murámico).

6.8.2.1. Mecanismo de acción

Se ha demostrado, que la inactivación de la enzima por Fosfomicina se produce de la siguiente

manera: primero se protona el átomo de oxígeno del ciclo oxirano, y luego se produce un ataque
 95

nucleofílico en el átomo de carbono 2 por un residuo del sitio activo de la enzima, dando lugar a la
formación de una inhibición irreversible de la enzima (Figura 6.13).

Figura 6.13. Mecanismo de acción de Fosfomicina

6.8.2.2. Actividad antimicrobiana

La Fosfomicina tiene un amplio espectro de actividad contra bacterias aeróbicas, incluyendo bacterias
que son responsables de infecciones del tracto urinario, con excepción de la mayoría de cepas de
Pseudomonas aeruginosa.

6.8.2.3. Resistencia

La resistencia a la Fosfomicina se puede producir a través de mutaciones cromosómicas que dan lugar
a la absorción reducida o una disminución de la afinidad hacia el inhibidor. Otro mecanismo de
resistencia es la bioinactivación por conjugación del antibiótico con glutatión (Figura 6.14).

Figura 6.14. Reacción de la fosfomicina con glutatión y conversión a un producto inactivo

6.9. POLIPÉPTIDOS

6.9.1. Bacitracina

La bacitracina es una mezcla de al menos nueve péptidos cíclicos solubles en agua. El componente
principal (60-80%) es la bacitracina A. La estructura de la bacitracina A se muestra en la Figura 6.15.
La bacitracina B es similar a la bacitracina A, excepto en que uno de las unidades de aminoácido
isoleucina es reemplazado por valina.
 96

La bacitracina se aisló en 1943 de una cepa de Bacillus spp, que originalmente fue clasificada como
Bacillus subtilis, pero ahora se conoce como B. licheniformis.

Figura 6.15. Estructura de la bacitracina A

6.9.1.1. Mecanismo de acción

La bacitracina se acompleja con el undecaprenil pirofosfato unido a membrana citoplasmática. La

unión de bacitracina evita la desfosforilación enzimática de este trasportador lipídico a su forma
monofosfato. De esta manera, no se forma el monofosfato evitándose la unión del UDP-N-acetil
muramil pentapéptido al undecaprenil pirofosfato y con ello el transporte del disacárido a través de la
membrana (ver Esquema 1.3, Cap.1). Existe un requisito de metal para la unión de la bacitracina al
sustrato y el zinc es especialmente activo.

6.9.1.2. Espectro de actividad antibacteriana

La bacitracina es altamente activa contra la mayoría de las bacterias Gram positivas, particularmente
Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. Clostridium difficile es generalmente sensible y la
mayoría de las cepas son sinérgicamente inhibidas por la combinación de bacitracina y rifampicina.
Neisseria patógena (meningococos y gonococos) también son sensibles. Al igual que la vancomicina,
sólo son eficaces contra las bacterias Gram positivas por no poder penetrar la membrana externa de
las bacterias Gram negativas.

6.9.1.3. Usos clínicos

Desde 1949 hasta 1960 la bacitracina se utilizó sistemáticamente en clínica, especialmente para el
tratamiento de infecciones debidas a Staphylococcus aureus resistentes a penicilinas. Sin embargo,
debido a su nefrotoxicidad ya no se administra por vía parenteral y, al igual que la polimixina, son poco
absorbidas a través de la piel y las mucosas por lo cual actualmente su uso está principalmente
restringido a aplicaciones tópicas.
 97

La bacitracina de zinc es la forma utilizada en la medicina humana que contiene 2-10% de zinc sobre
una base de peso seco.

6.9.1.4. Resistencia bacteriana

La resistencia bacteriana adquirida a la bacitracina no es muy común.

6.10. ANTIBIÓTICOS QUE ALTERAN LA MEMBRANA CITOPLASMÁTICA DE LAS BACTERIAS

Existe un pequeño grupo de antibióticos cuya acción consiste en alterar la membrana citoplasmática
de las bacterias, se trata de polipéptidos como las gramicidinas y polimixinas, a estas últimas las
veremos en más detalle a continuación.

6.10.1. Polimixina B

Las polimixinas son un grupo de antibióticos polipeptídicos que se obtienen por fermentación de cepas
de Bacillus polymyxa, siendo la polimixina B la más común. La forma comercial es el sulfato de la
mezcla de polimixina B1 (Figura 6.16) y B2.

Figura 6.16. Estructura de la polimixina B1

Las polimixinas se descubrieron en 1947, pero llevó más de diez años elucidar su estructura debido a
la complejidad de la mezcla. Estructuralmente se trata de un péptido cíclico de siete aminoácidos y
una cadena lateral lineal que contiene otros tres aminoácidos y termina en una cadena alifática
correspondiente a un resto 6-metiloctanoico. La polimixina B sólo varía en que el resto terminal es 6-
metilheptanoico.

6.10.1.1. Mecanismo de acción

Las polimixinas interfieren con las funciones de la membrana citoplasmática en las bacterias. Son
compuestos altamente básicos que ejercen su acción por interacción con los componentes
 98

fosfolipídicos de la membrana, el resultado es la alteración de la integridad osmótica de la membrana

citoplasmática.

Se cree que la selectividad hacia las bacterias Gram negativas se debe a que las polimixinas penetran
la membrana externa de bacterias Gram negativas a través de canales de poros para actuar sobre la
membrana citoplasmática, mientras que la pared celular mucho más gruesa de las bacterias Gram
positivas evita la penetración de las polimixinas. Otra teoría indica que esta selectividad se debe a que
las polimiximas interactúan con fosfolípidos exclusivos de la membrana citoplasmática de las bacterias
Gram negativas.

6.10.1.2. Espectro de actividad antibacteriana

Como ya se ha mencionado, las polimixinas son antibióticos polipeptídicos activos contra especies
Gram negativas. Otro tipo de polipéptidos, las gramicidinas son efectivas principalmente contra
bacterias Gram positivas. A diferencia de las polimixinas, las gramicidinas son compuestos neutros
que son mayormente incapaces de penetrar la membrana externa de bacterias Gram negativas.

6.10.1.3. Usos clínicos

Debido a problemas nefro y neutoxicidad, la polimixina B se utiliza generalmente en forma tópica en

infecciones de ojos, oídos y piel, frecuentemente en mezcla con otros antibióticos.

6.10.1.4. Resistencia bacteriana

La resistencia bacteriana adquirida a la polimixina se desarrolla lentamente por lo que la eficacia de

estos antibióticos ha permanecido, en general, bastante constante. Los casos registrados de
resistencia se deben a la variación de la permeabilidad de la membrana externa de las bacterias Gram
negativas que impiden el acceso de la polimixina al sitio de acción en la membrana citoplasmática.
 99

CAPITULO 7

ANTIBIÓTICOS INHIBIDORES DE LA SÍNTESIS PROTEICA I:

AMINOGLICÓSIDOS, TETRACICLINAS

7. INTRODUCCIÓN

Existen varios grupos de antibióticos que son capaces de inhibir la síntesis proteica de las bacterias,
como ser los aminoglicósidos, tetraciclinas, macrólidos, estreptograminas, cloranfenicol, mupirocina y
lincomicinas. Su modo de acción aprovecha las diferencias entre la síntesis proteica de células
procariotas y células eucariotas. Para comprender el mecanismo de acción de estos antibióticos, es
necesario en primer lugar analizar el mecanismo de biosíntesis de proteínas.

7.1. BIOSÍNTESIS DE PROTEÍNAS

La biosíntesis de proteínas puede dividirse en tres etapas: iniciación, elongación y terminación. Luego
de estas etapas ocurre el plegamiento del polipéptido (Esquema 7.1).

Esquema 7.1. Etapas de la síntesis de proteínas

 100

7.1.1. Etapa de iniciación

La síntesis proteica comienza con la activación de los aminoácidos en el citosol, mediante su unión al
ARNt a expensas de energía del ATP. Estas reacciones son catalizadas por la enzima aminoacil-ARNt
sintetasa, específica para cada aminoácido natural. La activación ocurre en dos etapas, primero el
aminoácido se une al ATP mediante formación de un anhídrido mixto y luego este intermediario
activado reacciona con el grupo OH en posición 3’ del residuo terminal del ARNt, dando lugar a la
formación de una molécula de aminoacil-ARNt y otra de AMP.
La iniciación de la síntesis proteica requiere la formación de un complejo de iniciación (Esquema 7.2a).
Este complejo está formado por las dos subunidades del ribosoma, ARN mensajero (ARNm) y el ARNt
de iniciación. En las células procariotas el primer aminoácido que forma la cadena polipeptídica es la
N-formilmetionina, el cual entra al ribosoma en forma de N-formilmetionil-ARNt (fMet-ARNt). En
cambio, en las células eucariotas todos los polipéptidos sintetizados empiezan con un residuo de
metionina (Met-ARNt) (Figura 7.1).
La formación del complejo de iniciación comienza con la unión de los factores de iniciación I-F3 y I-
F1 (proteínas que facilitan la síntesis) a la subunidad 30S
del ribosoma. El otro factor de iniciación, el IF-2, une el
fMet-ARNt y la subunidad 30S al ARNm que tiene la
información genética para la construcción de la proteína.
En el complejo de preiniciación 30S, el anticodón del
fMet-ARNt se une al codón correspondiente del ARNm.
El complejo de iniciación termina de formarse cuando se Figura 7.1. Aminoácidos
une la subunidad 50S para formar el complejo de involucrados en el inicio de la
síntesis proteica
iniciación 70S (Esquema 7.2a).

7.1.2. Etapa de elongación

Durante el alargamiento de la cadena cada aminoácido adicional es agregado a la cadena en

crecimiento en un ciclo repetitivo de tres pasos. Esos pasos son: 1) ubicación del aminoacil-ARNt en
el sitio A del ribosoma, 2) formación de la unión peptídica y 3) desplazamiento del ARNt desacilado
del sitio A del ribosoma (translocación). La ubicación del aminoacil-ARNt en el sitio A del ribosoma se
produce a través de un complejo ternario con un GTP (trifosfato de guanosina) y el factor de elongación
EF-Tu (Esquema 7.2b).
Si el apareamiento entre el anticodón de un aminoacil-ARNt en el complejo ternario y el codón del
ARNm en el sitio A es correcto, el complejo se posiciona, se produce la liberación de EF-Tu-GDP y
simultáneamente el aminoacil-ARNt se coloca en el sitio A.
 101

Esquema 7.2. Etapas de iniciación y elongación de la síntesis proteica

El siguiente paso es la unión peptídica entre los dos aminoácidos catalizada por las peptidil-
transferasas que se encuentran en la subunidad ribosomal mayor (50S) (Esquema 7.3). El grupo amino
del aminoacil-ARNt que se unió al sitio A ataca nucleofílicamente al grupo carbonilo del éster de la
cadena en crecimiento (peptidil-ARNt), el cual está unido a la posición 3´ de la ribosa. La cadena
polipéptidica ha incrementado su longitud en un aminoácido y se transfiere del ARNt en el sitio P al
ARNt en el sitio A. Antes de que se produzca una nueva unión peptídica, es necesario que el ARNt
desacilado se separe y el peptidil-ARNt quede ubicado completamente en el sitio P (Esquema 7.2c).
Esta translocación requiere de los factores de elongación EF-G que son específicos de las células
procariotas,. El sitio A queda entonces libre para la llegada del siguiente aminoacil-ARNt, repitiendo
los tres pasos del ciclo de elongación y, de esta manera, continuando la síntesis de la cadena
polipeptídica. El proceso sigue hasta encontrar el codón terminal, deteniéndose la elongación y
finalizando la síntesis de la cadena.
 102

Esquema 7.3. Formación de la unión peptídica

7.1.3. Etapa de terminación

Después que se ha formado la última unión peptídica, el peptidil-ARNt, que se mantiene unido a la
cadena es translocado desde el sitio A al sitio P, quedando el codón terminal en el sitio A (Esquema
7.4). Los factores de terminación afectan la actividad de la peptidil-transferasa, produciendo la
hidrólisis de la unión éster del peptidil-ARNt, liberando el polipéptido final al medio (Esquema 7.5). En
ese momento, las unidades ribosomales se disocian del ARNm y los factores de iniciación se unen a
la subunidad 30S en preparación para sintetizar la siguiente proteína.

Esquema 7.4. Etapa de terminación de la síntesis proteica

 103

Esquema 7.5. Hidrólisis del éster peptidil-ARNt

7.2. EFECTO DE LOS ANTIBIÓTICOS SOBRE LA SÍNTESIS PROTEICA EN PROCARIOTAS

Los antibióticos que se utilizan para combatir infecciones producidas por bacterias patógenas deben
poseer toxicidad selectiva, es decir, deben inhibir la síntesis proteica en procariotas y no deben alterar
la síntesis proteica en eucariotas.

Estos antibióticos bloquean diferentes etapas de la síntesis proteica interviniendo en la función de los
ribosomas o de los factores citoplasmáticos. Antibióticos que afectan la subunidad 30S son los que
intervienen en la etapa de iniciación, mientras que los que afectan la subunidad 50S intervienen en la
etapa de elongación (Figura 7.2, Tabla 7.1).

Figura 7.2. Inhibidores de la síntesis de proteínas

 104

Tabla 7.1. Efecto de los distintos antibióticos sobre la síntesis proteica en células procariotas.

Antibiótico Efecto sobre la síntesis proteica en procariotas

Se unen irreversiblemente a la subunidad ribosomal bacteriana 30S, evitando la

formación del complejo de iniciación 70S.

Aminoglicósidos Cuando la síntesis proteica ha comenzado, produce una lectura errónea del
ARNm durante el ciclo de elongación, conduciendo a síntesis proteicas
defectuosas que usualmente llevan a la muerte de la bacteria.

Se unen a la subunidad ribosomal 30S y, de ese modo, evitan la unión de

Tetraciclinas aminoacil ARNt al complejo ribosoma-ARNm y, por lo tanto, la incorporación de
nuevos aminoácidos a la cadena peptídica en crecimiento.

Inhiben la síntesis proteica bacteriana uniéndose específica e irreversiblemente

Macrólidos a la subunidad ribosomal 50S, impidiendo el proceso de translocación en la
etapa de elongación.

Las lincomicinas se unen a la subunidad ribosomal 50S inhibiendo la síntesis

Lincomicinas
proteica bacteriana.

Inhiben la actividad de la enzima peptidil-transferasa de la subunidad ribosomal

Cloranfenicol
50S.

7.3. AMINOGLICÓSIDOS

Este grupo de antibióticos se caracteriza por la presencia de aminoazúcares unidos glicosidicamente

a ciclitoles (aminociclitoles). Los ciclitoles son derivados polihidroxilados de ciclohexano. Los
principales aminociclitoles presentes
en este grupo de antibióticos son: 2-
desoxiestreptamina, estreptamina y
estrepdina (Figura 7.3).
De acuerdo a su estructura química,
los aminoglicósicos se dividen en tres Figura 7.3. Aminociclitoles

grupos:

a) aminoglicósidos que contienen estreptidina como aminociclitol

b) aminoglicósidos que contienen 2-desoxiestreptamina 4,5-disustituida
c) aminoglicósidos que contienen 2-desoxiestreptamina 4,6-disustituida.
 105

7.3.1. Aminoglicósidos que contienen estreptidina como aminociclitol

7.3.1.1. Estreptomicina: aislada de Streptomyces griseus en el año 1944, posee 3 grupos básicos (2
grupos guanidinio y un grupo metil-amino) (Figura 7.4). Se comercializa como trisulfato siendo muy
soluble en agua. Se emplea principalmente en terapias antituberculosas. Además se usa en
combinación con penicilinas o vancomicina para el
tratamiento de la endocarditis. Sin embargo, la
aparición de resistencia a estreptomicina en
enterococos ha dado lugar a su reemplazo por
gentamicina. En general, la importancia de la
estreptomicina ha disminuido debido a la aparición
de otros antibióticos aminoglicósidos y de los Figura 7.4. Estreptomicina

antibióticos β-lactámicos.

7.3.2. Aminoglicósidos que contienen 2-desoxiestreptamina 4,5-disustituida como aminociclitol

7.3.2.1. Neomicina: fue aislada en el año 1949 de Streptomyces fradie como una mezcla de 3
antibióticos, a los que se denominó neomicinas A, B y C. Actualmente se comercializa la neomicina B
o Framicetina (Figura 7.5). La neomicina B se expende como sulfato de neomicina.
Su principal uso es para el
tratamiento de infecciones
superficiales producidas por
bacilos Gram (-), por ejemplo
combinaciones
oftalmológicas con un
antiinflamatorio o en cremas
dérmicas, en mezcla con
Figura 7.5. Neomicina B
corticoides. También se usa
en combinación con otros antibióticos como bacitracina o polimixina.

7.3.3. Aminoglicósidos que contienen 2-desoxiestreptomina 4,6-disustituida como aminociclitol

7.3.3.1. Kanamicina: la mezcla de kanamicinas A, B y C (Figura 7.6) fue aislada en Japón de una
cepa de Streptomyces kanamyceticus.
Se utilizó principalmente en las décadas del 60 y 70 pero luego su uso disminuyó debido a la aparición
recurrente de resistencia de las bacterias Gram (-). En general, ha sido reemplazada por gentamicina,
tobramicina y amicacina.
La kanamicina aún se utiliza en el tratamiento de infecciones urinarias severas producidas por Proteus.
 106

Figura 7.6. Derivados de kanamicina

7.3.3.2. Derivados de kanamicina (Figura 7.6).

7.3.3.2.1. Tobramicina

Es un aminoglicósido natural que se diferencia de kamamicina B en que no posee el OH en posición

3´ (R3=H). Este cambio conduce a un mejoramiento de la actividad antibiótica en algunos aspectos:
-Es más activa que la kamamicina contra una serie grande de bacterias, especialmente, es muy activa
contra Pseudomonas.
-Es activa contra algunas de las bacterias resistentes a gentamicina.
Sin embargo, tiene la desventaja que es menos activa que la kanamicina contra especies de Proteus
y Serratia.

7.3.3.2.2. Dibekacina

Es un producto de semisíntesis, obtenido por eliminación de dos grupos OH de la kanamicina B

(Figura 7.6). Tiene menor actividad que la gentamicina contra la mayoría de las bacterias pero es el
aminoglicósido más activo contra Pseudomonas.

7.3.3.2.3. Amikacina

Es un derivado semisintético de la kanamicina, posee un grupo 4-amino-2-hidroxibutirilo unido a la

posición 1. Se usa especialmente contra bacterias Gram (-) resistentes a otros aminoglicósidos
(gentamicina y tobramicina). Es activa contra Mycobacterium tuberculosis y algunas micobacterias
atípicas.
 107

7.3.3.3. Gentamicina

Las gentamicinas C1a, C1 y C2 se obtienen por fermentación (Figura 7.7). El complejo de gentamicina
se administra como sulfato, es muy soluble en agua. La gentamicina es más potente que los otros
aminoglicósidos contra la mayoría de los microorganismos.
Especialmente importante es su actividad
antipseudomonas, siendo entre 5 y 10 veces más
activa que la neomicina o la kanamicina. Los
antibióticos β-lactámicos presentan sinergismo de
acción bactericida con la gentamicina pero no se
pueden administrar en mezcla dado que se inactivan
mutuamente por reacción química. Deben
administrarse por separado, dejando un cierto Figura 7.7. Gentamicinas

intervalo de tiempo entre uno y otro antibiótico.

Es un antibiótico útil para tratar septicemias causadas por Gram (-) o, en combinación con otro
antibiótico activo contra Gram (+), para los casos en que no se conoce el origen de la infección. Sin
embargo, los problemas de toxicidad hacen que se utilice mayormente en aplicaciones tópicas:
infecciones externas, quemaduras, dermatitis, etc.

7.3.4. Farmacología y toxicidad de aminoglicósidos:

7.3.4.1. Absorción

Los antibióticos aminoglicósidos no se absorben por vía gastrointestinal por lo que se deben
administrar por vía intramuscular. Es por esta razón que son utilizados para la profilaxis de la flora
intestinal antes de realizar una cirugía de intestino.

7.3.4.2. Toxicidad

Los aminoglicósidos presentan varios problemas de toxicidad:

Ototoxicidad: afectan el oído interno.
Nefrotoxicidad: en general desaparece cuando se deja de administrar.
Neurotoxicidad: a concentraciones muy altas pueden producir un bloqueo muscular del tipo no
despolarizante.
Es importante tener en cuenta que la gentamicina atraviesa la barrera placentaria y ha llevado a casos
de sordera en bebés, por lo que no se aconseja su administración a embarazadas.
La administración en pacientes con fallas renales debe ser cuidadosamente controlada, debido a los
efectos nefrotóxicos mencionados.
 108

7.3.4.3. Mecanismo de acción

El sitio de acción es la subunidad 30S del ribosoma. Dado que a pH fisiológico estos compuestos se
encuentran cargados, positivamente pasan fácilmente por las porinas de las bacterias Gram (-). En las
bacterias Gram (+) ingresan a la célula a través de su disolución en el agua presente en los intersticios
del peptidoglicano. De esta manera llegan al ribosoma y efectúan su acción sobre la síntesis proteica.

Aunque los aminoglicósidos se clasifican como antibióticos de amplio espectro, su mayor utilidad
radica en el tratamiento de infecciones causadas por bacterias Gram negativas aerobias. Los cocos
Gram-positivos (con la excepción de los estafilococos) tienden a ser menos sensibles.

7.3.5. Resistencia bacteriana

Todos los antibióticos aminoglicósidos presentaron, al cabo de algunos años de uso, resistencia
bacteriana.
Existen 3 mecanismos generales de resistencia a los compuestos antibacterianos:

Mutación: implica una mutación genética en el microorganismo. En el caso particular de los

aminoglicósidos que produce una modificación a nivel del ribosoma, el cual ya no se une al antibiótico
y, por lo tanto, éste no produce su efecto.

Disminución de la permeabilidad: la bacteria no permite la entrada del antibiótico a la célula, ya sea

impidiéndole atravesar la membrana externa, pared celular o la membrana citoplasmática, es decir,
hay dos o tres barreras que el antibiótico debe franquear y si una de ellas es impermeable, el antibiótico
no puede actuar.

Inactivación por enzimas bacterianas: es el mecanismo más importante de resistencia a los agentes
antibacterianos. Este mecanismo de resistencia consiste en la producción por parte de la célula de
enzimas que eliminan o disminuyen la actividad de los antibacterianos.

7.3.5.1. Resistencia bacteriana a aminoglicósidos por inactivación enzimática

Las cepas que tienen plásmidos de resistencia a estos antibióticos sintetizan enzimas
acetiltransferasas, fosfotransferasas, nucleotidiltransferasas, capaces de acetilar, fosforilar y/o
adenilar a los aminoglicósidos. Este ataque básicamente protege y anula grupos OH y NH 2 los cuales
son fundamentales para la actividad de los aminoglicósidos.

Acetilación: la acetilación en posición 6' es especialmente importante en kanamicinas y gentamicinas.

Participan cofactores como la acetil Co-enzima A. En el Esquema 7.6 se describe esta inactivación
para la kanacimina, pero el mecanismo es similar para los demás aminoglicósidos.
 109

Fosforilación: la fosforilación se produce generalmente en las posiciones 3' y 2" de los aminoglicósidos
(Esquema 7.7).
Adenilación: ocurre sobre las posiciones 2" y 4' de kanamicina, gentamicina y tobramicina, según la
enzima que intervenga (Esquema 7.8).

Esquema 7.6. Inactivación por acetilación (ejemplificado para kanamicinas)

Esquema 7.7. Inactivación por fosforilación (ejemplificado para kanamicinas)

 110

Esquema 7.8. Inactivación por adenilación (ejemplificado para kanamicinas)

7.3.6. Nuevos aminoglicósidos

La resistencia y los problemas de toxicidad limitan su uso en bacterias Gram (-). Una forma de combatir
la resistencia sería tener inhibidores de las
enzimas que producen la resistencia, sin
embargo, se ha progresado poco en ese
sentido. Mayormente se han desarrollado
compuestos con menos susceptibilidad hacia
esas enzimas.

Isepamicina: es un análogo de amikacina

cuya principal característica es su
Figura 7.8. Nuevos aminoglicósidos: Isepamina
establilidad frente a 6'-acetil transferasa.
(Figura 7.8).

Arbekacina: es un compuesto semisintético,

activo contra bacterias resistentes a otros
aminoglicósidos (Figura 7.9).
Particularmente contra cepas que contienen
2'-acetil transferasa ya que el producto
acetilado es un buen antibiótico, es decir, Figura 7.9. Nuevos aminoglicósidos: Arbekacina

que la acetiltransferasa no sólo no lo inactiva sino que mejora su actividad.

 111

7.4. TETRACICLINAS

Las tetraciclinas poseen un sistema de 4 anillos de 6 miembros fusionados linealmente y de esta

característica estructural deriva su nombre tetra (cuatro), ciclinas (ciclos) (Figura 7.10).
La primera tetraciclina natural fue la clorotetraciclina, aislada en 1948 por el laboratorio Lederle (USA),
a través de la fermentación de Streptomyces aureofaciens obtenido de muestras de suelo. Esta
tetraciclina era activa por vía oral contra un amplio espectro de bacterias Gram (+), Gram (-) y algunas
micobacterias, incluido el parásito de la malaria. Este hallazgo condujo a una búsqueda sistemática de
nuevos antibióticos a partir de microorganismos aislados del suelo en todo el mundo. Así surgió la
segunda tetraciclina, la oxitetraciclina que se empezó a comercializar en 1950 por Pfizer. La tetraciclina
propiamente dicha se aisló en 1953.

Figura 7.10. Tetraciclinas naturales y semisintéticas

En la actualidad se comercializan principalmente siete tetraciclinas, de las cuales cuatro son naturales:
clorotetraciclina, tetraciclina, oxitetraciclina y demeclocilina. Las otras tres tetraciclinas comerciales
son derivados semisintéticos: la metaciclina y la doxiciclina que son derivados de la oxitetraciclina, y
la minociclina que se prepara por modificación química de la tetraciclina.
Las tetraciclinas se administran por vía oral, como clorhidrato. Las formas inyectables son muy
dolorosas, por lo que no son aconsejables.
Las tetraciclinas son sustancias anfotéricas, esto les permite formar sales tanto con ácidos o bases,
aunque generalmente se expenden como clorhidratos. Poseen tres constantes de acidez, la función
básica es el grupo dimetilamino (estado de clorhidrato para comercializar), el sistema fenólico
conjugado de pKa2=7.7 y el más ácido (pKa1=3.3, similar al ácido acético) es el sistema triona
conjugada entre posición 1 y 3 (Figura 7.11).
 112

Las tetraciclinas pueden formar quelatos

con metales divalentes y trivalentes (Mg+2,
Fe+2, Zn+2, Ca+2, Al+3) (Esquema 7.9). Se
absorben a través del estómago y la parte
superior del tracto gastrointestinal, por lo
que la formación de un complejo insoluble
con cualquiera de esos iones metálicos
Figura 7.11. Constantes de acidez de las
disminuye la absorción del antibiótico. Por tetraciclinas
lo tanto, las tetraciclinas nunca deben
administrarse con leche, con productos
lácteos, con antiácidos que contengan
hidróxido de magnesio o hidróxido de
aluminio ni con vitaminas que contengan
Esquema 7.9. Quelación de las tetraciclinas por
minerales. metales di y trivalentes

7.4.1. Estabilidad química

Las tetraciclinas naturales tienen problemas relacionados con su inestabilidad en medio ácido y básico.
En medio ácido se produce una eliminación antiperiplanar en la que intervienen el hidroxilo terciario
en posición 6 y el hidrógeno 5a, formándose la anhidrotetraciclina que no tiene actividad antibiótica
(Esquema 7.10.A). Además, a pH ácido se puede epimerizar el grupo amino del carbono 4
obteníendose la 4-epianhidrotetraciclina, compuesto cuya degradación genera compuestos tóxicos.

En medio básico se lleva a cabo una reacción entre el oxígeno de la posición 6 y el grupo carbonilo de
la posición 11, con formación de una lactona (isotetraciclina) que carece de actividad antibectariana
(Esquema 7.10.B).

Esquema 7.10. Estabilidad de tetraciclinas

 113

La gran ventaja de las tetraciclinas sintéticas (metaciclina, doxiciclina, minociclina) es que no tienen
ese oxhidrilo beta en posición 6 por lo que no presentan los problemas de estabilidad que tienen las
tetraciclinas naturales.

7.4.2. Mecanismo de acción

Las tetraciclinas son inhibidores bacteriostáticos de la síntesis proteica, por bloqueo de la unión del
aminoacil-ARNt al complejo ribosoma-ARNm. Las tetraciclinas inhiben la unión al sitio A pero no al
sitio P. Bloquean la síntesis proteica en los ribosomas 70S (procariotas) y 80S (eucariotas), aunque
los ribosomas 70S son mucho más sensibles. Las tetraciclinas son activas “in vitro” sobre ribosomas
de células eucariotas pero no ejercen su acción “in vivo” debido a que no penetran la membrana
plasmática de las células eucariotas.

7.4.3. Efectos adversos

Las tetraciclinas absorben luz visible lo que genera radicales libres y potencialmente reacciones
adversas en pacientes sensibles si se exponen mucho al sol. En casos de pacientes que reciben un
tratamiento con tetraciclinas, los médicos deben advertirle no exponerse excesivamente al sol o al uso
de dispositivos de rayos ultravioletas para bronceado de la piel. Sin embargo, este efecto es raro en
tetraciclinas semisintéticas.
Las tetraciclinas se depositan en huesos y dientes en crecimiento, por formación de un quelato con
Ca+2. El crecimiento de los huesos queda temporalmente afectado en el feto y en niños, dependiendo
de la concentración de tetraciclina administrada y de la duración del tratamiento. Por esta razón, no se
recomienda su uso en embarazadas ni en niños menores de 8 años.
Como ya se mencionó, las tetraciclinas no distinguen totalmente entre el ribosoma 70S bacteriano y el
80S en mamíferos, por lo tanto, en altas dosis y situaciones especiales, puede llevar a daños severos
de riñón e hígado.

7.4.4. Resistencia

La resistencia bacteriana a tetraciclinas, como en otros antibióticos, tienen que ver con la emergencia
de cepas resistentes dentro de una población sensible, causada (o acelerada) por el mal uso de los
antibacterianos. Existen dos mecanismos principales de resistencia a las tetraciclinas: eflujo y
protección ribosomal (Tabla 7.2).
Eflujo: los genes de resistencia codifican proteínas que aumentan el eflujo de las tetraciclinas, es decir,
ayudan a eliminar las tetraciclinas del citoplasma. En la Figura 7.12 se compara una célula sensible a
tetraciclinas (arriba) con una célula resistente a las mismas (abajo). Las tetraciclinas ingresan a la
célula a través de las porinas de la membrana externa y luego atraviesan por difusión pasiva la
membrana plasmática alcanzando el citoplasma. En el caso de las células resistentes, éstas producen
 114

una proteína (TET) que se ubica en la membrana citoplasmática y que expulsa las moléculas de
tetraciclina disminuyendo su concentración en el citoplasma.

Figura 7.12. Mecanismo de eflujo

Protección ribosomal: la bacteria genera una serie de proteínas [Tet(M), Tet(O) y Tet(Q)] que,
asociadas al ribosoma, permiten que la síntesis proteica se produzca a pesar de la presencia de la
tetraciclina que bloquea el sitio A. No se conoce aún cómo funcionan pero se cree que actúan como
un factor de elongación alternativo.

7.4.5. Nuevas tetraciclinas

El problema de la resistencia a las tetraciclinas llevó al desarrollo de nuevas tetraciclinas semisintéticas

con el objetivo de evitar ese problema.
Un caso interesante es la tetraciclina I (Figura 7.13) que actúa como inhibidor de las proteínas de eflujo
de las tetraciclinas. De esta manera se usa sinérgicamente con una tetraciclina tradicional sobre cepas
resistentes a tetraciclinas por mecanismo de eflujo.
 115

Tabla 7.2. Clasificación y distribución de determinantes de resistencia a las tetraciclinas.

Clase de
Mecanismo de
proteína Ejemplos representativos de familia, género o especies
Resistencia
TET

A Eflujo Enterobacteriaceae, Aeromonas, Vibrio, Pseudomonas spp

B Eflujo Enterobacteriaceae, Haemophilus, Vibrio, Yersinia spp

C Eflujo Enterobacteriaceae, Vibrio, Pseudomonas spp

D Eflujo Enterobacteriaceae, Aeromonas, Vibrio, Pastereulla spp

E Eflujo Escherichia, Aeromonas spp

F Eflujo Bacteroides fragilis

G Desconocido Vibrio anguillarum

K Eflujo Staphylococcus, Enterococcus, Streptococccusa

L Eflujo Bacillus, Staphylococcus, Streptococcusa, Enterococcus,

Peptostreptocossusa spp

M Protección Neisseria, Mycoplasma, Ureaplasma, Haemophilus,

ribosomal Campylobacter, Clostridium, Enterococcus, Staphylococcus,
Streptococcusa, Gardenella, Kingella, Eikenella, Vellonela,
Fusobacterium, Peptostreptococcusa spp, C. difficile, S.
pneumoniae.

N Desconocido S agalactiae

O Protección Campylobacter, Lactobacillus, Streptococcusa, Enterococcus

ribosomal

P Desconocido Peptostreptococcusa spp

X Modificación del Bacteroides spp

antibiótico

aSe ha informado que ciertas cepas aisladas contienen simultáneamente los determinantes K, L, M y O.

Tigeciclina: es el primer miembro de una nueva clase de antibióticos, las gliciclinas. Corresponde a un
derivado semisintético de la minociclina. La droga exhibe un amplio espectro antibacteriano sobre
patógenos productores de infecciones complicadas de la comunidad e infecciones nosocomiales,
 116

incluyendo bacterias resistentes a los β-lactámicos y a las quinolonas. Su espectro de acción

comprende cepas de estafilococos, incluyendo las resistentes a meticilina (MRSA), Enterococcus
faecalis y Enterococcus faecium, incluyendo cepas resistentes a vancomicina (VRE).

Figura 7.13. Tetraciclinas semisintéticas

 117

CAPITULO 8

ANTIBIÓTICOS INHIBIDORES DE LA SÍNTESIS PROTEICA II:

MACRÓLIDOS, ESTREPTOGRAMINAS, LINCOSAMIDAS Y
OTROS

8.1. MACRÓLIDOS

8.1.1. Introducción

Los macrólidos son una familia de compuestos que se caracterizan por poseer una lactona
macrocíclica, la que está unida a dos monosacáridos (o un disacárido) mediante uniones glicosídicas.
Se dividen en subgrupos de acuerdo al tamaño del macrociclo, pudiendo ser de: 14, 15 y 16 miembros
(Esquema 8.1).

Esquema 8.1. Clasificación de los macrólidos según el tamaño del macrociclo

 118

8.1.2. Actividad Antibiótica

Los macrólidos son antibióticos con una actividad similar a las penicilinas de espectro medio
(ampicilina, amoxicilina). Presentan actividad contra la mayoría de las bacterias Gram (+), algunas
Gram (-) y algunas micobacterias. Son activas contra las cepas bacterianas más comunes y no tienen
problemas de toxicidad serios, por lo que se utilizan habitualmente a nivel pediátrico. Se usan también
contra MRSA.

8.1.3. Mecanismo de acción

Los macrólidos inhiben la síntesis proteica bacteriana uniéndose específica e irreversiblemente a la

subunidad ribosomal 50S, impidiendo la elongación de la cadena peptídica e inhibiendo la etapa de
translocación. No se unen a la subunidad 60S de los mamíferos, de allí se explica su baja toxicidad
(alta selectividad). Se ha determinado experimentalmente que la eritromicina, el cloranfenicol y las
lincosamidas, tienen un mecanismo de acción similar pero no idéntico.

Los macrólidos puede ser bacteriostáticos o bactericidas dependiendo de diversos factores: la muerte
de la bacteria está favorecida en altas concentraciones del antibiótico, una baja densidad bacteriana y
un crecimiento rápido de los microorganismos.

8.1.4. Clasificación

8.1.4.1. Macrólidos de 14 miembros:

8.1.4.1.1. Naturales:

Eritromicina: La eritromicina A fue obtenida en 1952 por fermentación de una cepa de Streptomyces
erythreus, microorganismo obtenido del suelo en Filipinas. Es el producto mayoritario de una mezcla
que contiene otras eritromicinas (B, C, D, E y F). Su estructura consiste en un anillo de lactona
macrocíclica de 14 miembros, unido glicosídicamente a dos monosacáridos. El grupo hidroxilo de C-3
se une a la cladinosa, y el de C-5 a la desosamina (Figura 8.1).

Oleandomicina: es también un macrociclo de 14 miembros que posee un epóxido en su estructura

(Figura 8.1). Es producido por fermentación de Streptomyces antibioticus. El derivado triacetilado se
prepara para mejorar el sabor y la biodisponibilidad con respecto a la oleandomicina. No se
comercializa en USA porque no presenta ventajas sobre eritromicina, pudiendo causar hepatitis
colestásica. Los nuevos macrólidos semisintéticos son mucho más efectivos y menos tóxicos que la
triacetiloleandomicina.
 119

Figura 8.1. Estructura química de algunos macrólidos de 14 miembros

Estabilidad química

Estos macrólidos son inactivados en medio ácido (jugo gástrico) debido a la formación de dos
derivados, en el caso de la eritromicina A: la eritromicina 8,9-anhidro-6,9-hemiacetal y la eritromicina
6,9-9,12-espirocetal (Esquema 8.2), los cuales carecen de actividad biológica. En el Esquema 8.2 se
describe el mecanismo propuesto para la formación de estos dos productos.
Para evitar la degradación en medio ácido se utilizan sales y ésteres relativamente insolubles en agua
y/o formas farmacéuticas que protegen la eritromicina durante su paso por el estómago: la formulación
en comprimidos involucra el recubrimiento del fármaco con una sustancia que lo protege durante su
paso a través del estómago y que se solubiliza al llegar a los intestinos (enterosoluble). Estas
formulaciones son además útiles para enmascarar el sabor amargo de los macrólidos.
Los derivados ésteres más comunes para mejorar la biodisponibilidad y también el sabor amargo, son
el acetato, propionato y etilsuccinato de eritromicina (Figura 8.2), que se obtienen fácilmente por
esterificación del grupo hidroxilo en la posición 2’ del azúcar desosamina. La esterificación selectiva
de este OH, está dirigida por el grupo dimetilamino de posición 3’. Estos ésteres no se unen al ribosoma
bacteriano, por lo que se comportan como profármacos, es decir, luego de ser absorbidos deben ser
hidrolizados por esterasas para liberar el verdadero fármaco, la eritromicina A.

8.1.4.1.2. Semisintéticos

Derivados semisintéticos de la eritromicina

Una opción para evitar la descomposición de la eritromicina en medio ácido, es la modificación química
de los grupos funcionales que pueden dar lugar a la ciclación intramolecular, y originar los productos
indeseados, eritromicina 8,9-anhidro-6,9-hemiacetal y la eritromicina 6,9-9,12-espirocetal. Las
 120

posiciones implicadas en la descomposición son: el carbono cetónico en posición 9, el grupo hidroxilo

unido al átomo de carbono 6 y los grupos hidroxilos unidos a los C-11 o C-12 de la eritromicina.

Esquema 8.2. Inactivación de la eritromicina en medio ácido

Figura 8.2. Estructura de 2’-O-acetil-, 2’-O-propionil- y 2’-O-etilsuccinileritromicina

 121

Modificación del grupo carbonilo de posición 9

Fundamentalmente, este grupo ha sido transformado en oximas e hidrazonas, las cuales son menos
propensas al ataque nucleofílico por parte de los OH de posición C-6, C-11 o C-12. Esta
transformación, en general no es muy útil, ya que produce derivados de menor actividad. Sólo un
derivado mantuvo la actividad biológica de la eritromicina, la 9-[O-(2-metoxietoxi)-metiloxima de la
eritromicina o Roxitramicina (Figura 8.3). Este compuesto, resultó ser más estable a medio ácido,
presentando mejor viabilidad oral y manteniendo una concentración mayor en el tiempo en sueros y
tejidos que la eritromicina.

Una modificación sumamente importante es la que llevó a la obtención de la azitromicina (Figura 8.3).
En este caso la eritromicina sufre un reordenamiento de Beckman, mediante el cual, en medio ácido,
la 9-oxima de la eritromicina es objeto de una migración del C-10 al nitrógeno, formando una amida,
que luego se reduce a la amina correspondiente y finalmente sufre una N-metilación. La azitromicina
es entonces un macrólido de 15 miembros, debido a la expansión del anillo de 14 miembros. Este
compuesto, es más estable al medio ácido que la eritromicina, ya que no forma los derivados cetálicos,
y además tiene una mayor vida media, atribuida a una mayor penetración en tejido, permitiendo la
administración de una sola dosis diaria. Esta característica lo hace uno de los antibióticos preferidos
para tratar infecciones pediátricas comunes (anginas).

Figura 8.3. Estructura química de algunos compuestos provenientes de modificar el grupo

carbonilo de posición 9 de eritromicina

Modificación en otros carbonos del anillo de la macrolactona

Otra posible modificación química es la alquilación del OH de posición 6, dando lugar a un nuevo
macrólido denominado claritromicina, comercializado por Laboratorios Abbott bajo el nombre de
Klaricid (Figura 8.4.A). De esta manera, se evita la cetalización que da lugar a la inactivación, se
aumenta la lipofilicidad y el nivel de la droga en sangre. Utilizando este derivado, se puede aplicar una
 122

dosis más baja y menos frecuente en infecciones leves. La introducción de un flúor en lugar del H de
posición 8, dió lugar a la fluoritromicina (Figura 8.4.B), aunque éste es un macrólido no comercial.

Figura 8.4. Estructuras químicas de: A) claritromicina y B) fluoritromicina

8.1.4.2. Macrólidos de 16 miembros

Los macrólidos de 16 miembros son menos comunes que los de 14 y sólo unos pocos derivados de
esta familia se comercializan en algunos países como Japón, Francia e Italia. Se caracterizan además
por tener un disacárido unido a la posición 5 y un grupo aldehído unido a la posición 6. Entre ellos
encontramos la miocamicina (9,4”-di-O-acetilmidecamicina, Figura 8.5), derivado acetilado de la
midecamicina, la cual es el componente principal, de una mezcla de 5 macrólidos estructuralmente
relacionados producidos por fermentación de Streptomyces Micarofaciens. Las leucomicinas (Figura
8.5) y rokitamicinas son otros derivados de este grupo que se comercializan principalmente en Japón.

Figura 8.5. Estructuras químicas de algunos macrólidos de 16 miembros usados como

antibióticos

8.1.5. Resistencia a macrólidos

La resistencia de bacterias patógenas surgió algunos años después de que los macrólidos se
comenzaran a utilizar en clínica médica. Actualmente se conocen tres tipos principales de resistencia
a macrólidos, y se detallan a continuación.
 123

8.1.5.1. Resistencia por modificación del ribosoma

Este mecanismo de resistencia se desarrolla cuando la bacteria sufre una modificación

postranscripcional, al producirse la mono o dimetilación del grupo amino de la adenina en una posición
específica del ARN ribosomal (Esquema 8.3), catalizado por una enzima N-metil transferasa (metilasa)
y en presencia de 5-adenosilmetionina como fuente de grupos metilos. Esto, si bien hace un poco
menos eficiente la síntesis proteica de la bacteria, produce una gran disminución de la afinidad del
macrólido por el ribosoma 50S y por lo tanto no ejerce su acción antibiótica. Esta modificación química
es común a la eritromicina y a otros macrólidos, y también en las lincosamidas y a las estreptograminas
del tipo B, por lo que se conoce como resistencia MLEB (macrólidos, lincosamidas, estreptograminas
B).

Esquema 8.3. Mono y dimetilación del grupo amino de la adenina del ARNr, mediante el cofactor
5-adenosilmetionina (SAM) y la catálisis de la metil transferasa

8.1.5.2. Resistencia por eflujo activo

Como en el caso de las tetraciclinas, algunas cepas crean una resistencia codificando una proteína
que se une al ATP, funcionando como una bomba de eflujo para estos antibióticos, los cuales son
expulsados de la célula.

8.1.5.3. Resistencia por inactivación enzimática

Varias enzimas presentes en las bacterias producen la inactivación de los antibióticos macrólidos,
lincosamidas y estreptograminas tipo B, por modificación química del macrólido, catalizada por
enzimas. Por ejemplo, la eritromicina es inactivada por las esterasas I y II codificadas por plásmidos
de E. Coli (Esquema 8.4). Estás enzimas, básicamente catalizan la hidrólisis del grupo funcional
lactona.
 124

Esquema 8.4. Hidrólisis de eritromicina catalizada por esterasas

8.2. NUEVOS MACRÓLIDOS

Entre los nuevos macrólidos recientemente desarrollados, merecen ser destacados los de la serie de
los cetólidos que se caracterizan por tener un carbonilo cetónico en posición 3 de los macrólidos de
14 miembros. En esta posición de los macrólidos anteriormente descriptos, estaba unido el
monosacárido L-cladinosa, el cual fue considerado por mucho tiempo esencial para la actividad. Un
ejemplo de esta nueva familia de antibióticos es la telitromicina (Figura 8.6) que fue incorporado al
mercado europeo en el 2001 y al norteamericano en 2004. Este compuesto está diseñado para evitar
la resistencia por eflujo (C=O en posición 3) y la resistencia MLEB (grupos aromáticos nitrogenados
unidos a una cadena lateral alquílica).

Figura 8.6. Estructura química de telitromicina.

8.2.1. Estreptograminas

Las estreptograminas actúan sobre la subunidad ribosomal 50S, se cree que de manera similar a los
macrólidos y las lincosamidas. Son macrolactonas y se producen por fermentación de Streptomyces.
La pristinamicina IA, una estreptogramina de la serie B, es un péptido cíclico de 20 miembros y la
pristinamicina IIA, de la serie A, es una macrolactona de 24 miembros que incluye dobles enlaces
conjugados (Figura 8.7). La mezcla pristinamicina A y B es muy activa contra gram (+), siendo dicha
 125

mezcla 8 veces más potente que la suma de los antibióticos considerados individualmente. Este
sinergismo se cree que es debido a que la pristinamicina IIA, induce un cambio conformacional en el
ribosoma aumentando la afinidad de éste por la pristinamicina IA.

Figura 8.7. Estructura química de estreptograminas

8.2.1.1. Quinupristina y Dalfopristina

La quinupristina y la dalfopristina (Figura 8.8) son derivados semisintéticos solubles en agua de las
estreptograminas de las series B y A, respectivamente. La quinupristina tiene un grupo
quinuclidiltiometil unido al anillo de piperidinona y la dalfopristina un grupo dimetilaminoetilsulfonil unido
al anillo de pirrolidina. La combinación de 30% de quinupristina y 70% de dalfopristina se comercializa
en forma de sal de metansulfonato tanto en EEUU como en Europa. Es especialmente útil para el
tratamiento de MRSA. En general esta mezcla es útil para bacterias con resistencia a otros antibióticos
(-lactamas, vancomicina, eritromicina, etc.).

Figura 8.8. Estructura química de: A) quinupristina y B) dalfopristina

 126

8.2.2. Lincosamidas

Las lincosamidas (Figura 8.9) se caracterizan por contener un monosacárido inusual de 8 carbonos,
que presenta además un grupo tiometil en la posición anomérica. A su vez, este monosacárido está
unido mediante una unión amida a una N-metilpirrolidina. La lincomicina es de origen natural, mientras
que la clindamicina es un compuesto semisintético
derivado del primero.

La clindamicina se diferencia químicamente de la

lincomicina, por la sustitución de un grupo hidroxilo
por un átomo de cloro, utilizando cloruro de tionilo
como agente clorante. Como la reacción transcurre
mediante un mecanismo SN2, el cloruro resultante
presenta una configuración opuesta a la del
hidroxilo de partida. Por esta simple modificación
estructural, la clindamicina incrementa su potencia
antibacteriana y mejora la absorción por el tracto Figura 8.9. Estructura química de
gastrointestinal, luego de su administración por vía clindamicina y lincomicina
oral. Dicho compuesto tiene un espectro de acción
bastante similar a los macrólidos aunque se distribuye mejor en los huesos. Se usa en el tratamiento
de cocos Gram (+) e infecciones por bacterias anaerobias Gram (-).

8.2.2.1. Resistencia

1) Modificación del ribosoma: es el mismo tipo de resistencia que afecta a macrólidos y

estreptograminas (resistencia MLEB). Se produce por metilación de la adenina localizada en un grupo
específico del ARN ribosomal, impidiendo de este modo el acceso del antibiótico a su sitio de unión en
el ribosoma.

2) Inactivación enzimática: la inactivación de la clindamicina por cepas de Staphylococcus

haemolyticus y S. aureus se produce por la adenilación de la posición 4 del azúcar para formar la 4-
(5´-adenilato) de clindamicina. En el caso de lincomicina, la unión se produce en la posición 3 dando
3-(5´-adenilato) de lincomicina (Figura 8.10). Se ha observado resistencia a la clindamicina en cocos
Gram (+) y en el grupo de Bacteroides fragilis.
 127

Figura 8.10. Estructuras químicas de: A) 4-(5´-adenilato) de clindamicina y B) 3-(5´-adenilato) de

lincomicina

8.2.3. Cloranfenicol

El cloranfenicol es un antibiótico de amplio espectro aislado de Streptomyces venezuelae (Figura

8.11.A), pero que actualmente se obtiene de manera sintética. La estructura del producto natural, la
cual es la biológicamente activa, corresponde a la configuración D-treo entre los carbonos quirales C-
1 y C-2, en cambio su enantiómero L-treo carece de actividad biológica. La droga tiene un sabor muy
amargo, por lo que se la formula en profármacos como el palmitato de cloranfenicol (Figura 8.11.B),
siendo éste un derivado inactivo que se hidroliza en el duodeno para liberar el cloranfenicol.

Figura 8.11. Estructura química de: A) cloranfenicol y de B) palmitato de cloranfenicol

Estudios de SAR y del mecanismo de acción, demostraron cuales son los requerimientos estructurales
y estereoquímicos para una buena actividad antibiótica del cloranfenicol: la configuración D-treo entre
los carbonos quirales, la presencia del grupo 1,3-propanodiol y de un fuerte atractor electrónico en la
posición para del anillo aromático (NO2). Los hidroxilos deben estar libres ya que, presumiblemente,
forman puentes de hidrógeno que lo unen al ribosoma y, por lo tanto, son necesarios en el desarrollo
de la actividad biológica.
 128

8.2.3.1. Mecanismo

El cloranfenicol se une a la subunidad 50S del ribosoma bacteriano, inhibiendo la actividad de la

peptidil transferasa ribosomal, y por lo tanto la síntesis de proteínas en las células procariotas.
Macrólidos y lincosamidas, actúan uniéndose en este mismo lugar, por lo que estos fármacos no
pueden administrarse conjuntamente.

El cloranfenicol es activo para bacterias Gram (+) y (-) y se usa para tratar la fiebre tifoidea o para
infecciones en las que los demás antibióticos son inútiles. Su uso ha disminuido debido a los efectos
tóxicos, especialmente sobre la médula ósea (causa anemia).

8.2.3.2. Resistencia

El principal mecanismo de resistencia es la producción de cloranfenicol acetil transferasas (CAT),

enzimas que catalizan la acetilación de los grupos hidroxilos de posición 1 y 3 del cloranfenicol
(Esquema 8.5).

Esquema 8.5. Principal mecanismo de resistencia contra cloranfenicol

Un estudio de la actividad enzimática revela que la introducción de un grupo acetilo en posición 3 del
cloranfenicol es la única reacción catalizada por la enzima CAT, mientras que la formación del 1-O-
acetil cloranfenicol se produce por migración intramolecular no enzimática. Estas transformaciones
estructurales de los residuos hidroxilos derivan en productos acetilados que no pueden unirse al
ribosoma y, por lo tanto, son inactivos. Algunas cepas también presentan resistencia por eflujo activo.
 129

8.2.4. Oxazolidinonas

Las oxazolidinonas, son una nueva clase de compuestos antibacterianos, surgidos a partir de la
necesidad de encontrar nuevos compuestos activos debido a los problemas de resistencia.
Representan la única estructura original encontrada después de las quinolonas.

El componente principal de este grupo es el Linezolid (Figura 8.12) que se prescribe para el tratamiento
de infecciones de piel y tejido blando, para neumonia nocosomial y para infecciones Gram (+)
resistentes a otros antibióticos, especialmente MRSA. Se comercializa en forma de inyectables,
comprimidos y en suspensión oral.

Actúa sobre la síntesis proteica, pero presentan un nuevo mecanismo de acción que implica la
inhibición de la síntesis de proteínas en un estado muy temprano, antes de la iniciación de la cadena.
Impide la formación del complejo de preiniciación entre fMet-ARNt, el ARNm y la subunidad 30S.

Figura 8.12. Estructura química de linezolid

(oxazolidinona)
130
 131

CAPITULO 9

INHIBIDORES DE LA SÍNTESIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

9.1. INHIBIDORES DE LA ADN GIRASA: QUINOLONAS

9.1.1. Descubrimiento y evolución de las quinolonas

9.1.1.1. Quinolonas de primera y segunda generación

En 1962 Lesher y colaboradores trabajaban en la síntesis de la cloroquina, un potente antimalárico,

cuando aislaron e identificaron un subproducto de dicha síntesis: el ácido nalidíxico, el cual presentó
una prometedora actividad antimicrobiana contra bacterias Gram (-). De hecho, ya en 1965, en el
Reino Unido se comercializaba el ácido nalidíxico para el tratamiento de infecciones del tracto urinario.
Dicho ácido posee en su estructura al heterociclo 1,8-Naftiridina como núcleo básico (Figura 9.1).
Numerosas modificaciones fueron realizadas sobre la estructura base de dicha molécula con el fin de
incrementar su actividad biológica y ampliar su espectro de acción, así como también mejorar sus
propiedades farmacocinéticas.

Figura 9.1. Quinolonas de primera generación (1962-1975): Estructura química de los ácidos
Nalidíxico y Pipemídico.

A fines de los ´70, surgieron algunas modificaciones beneficiosas, como por ejemplo la síntesis del
ácido pipemídico, derivado del núcleo pirido-pirimidina, el cual, mediante la incorporación del grupo
piperazina, logró ampliar su espectro y mejorar las propiedades farmacocinéticas (Figura 9.1). Sin
 132

embargo, la mayoría de las modificaciones no representaron grandes avances, quedando algunas de

las drogas de aquel entonces restringidas a uso veterinario. Si bien estos primeros compuestos no
presentan específicamente el núcleo quinolina, por razones de simplicidad, se los agrupa dentro de
las quinolonas, particularmente se los conoce como quinolonas de primera generación.

Afortunadamente, en 1980 se produjo una de las mayores contribuciones en el desarrollo de este tipo
de agentes antimicrobianos la cual consistió en la síntesis de la Norfloxacina, un derivado que combinó
la simultánea incorporación de un átomo de flúor y del grupo piperazina en las posiciones 6 y 7 del
núcleo básico de quinolina, respectivamente (Figura 9.2). El ácido pipemídico y la flumequina pueden
considerarse los predecesores de la norfloxacina, los cuales dieron origen a una nueva generación de
estos agentes microbianos, llamados fluoroquinolonas, 4-quinolonas o simplemente quinolonas de
segunda generación.

Figura 9.2. Quinolonas de segunda generación (1976-1990).

Las quinolonas de segunda generación han resultado más potentes en ensayos in vitro y abarcan un
espectro más amplio que aquellas de primera generación, incrementando el número de cepas
sensibles de bacterias Gram (-), entre ellas, Pseudomonas aeruginosa, como así también extendiendo
su actividad antimicrobiana contra bacterias Gram (+). Este segundo grupo de quinolonas, al igual que
aquellas de primera generación, son eficientemente absorbidas cuando se suministran por vía oral,
habiéndose además logrado mejorías en sus propiedades farmacocinéticas, como por ejemplo: mayor
tiempo de vida media, excelente distribución en los tejidos y buena penetración en las células
humanas. En la actualidad, varias quinolonas de segunda generación son comerciales, tales como
Norfloxacina, Ciprofloxacina, Ofloxacina.
 133

Es importante recordar que, al ser las quinolonas compuestos obtenidos por síntesis, son clasificados
como agentes antibacterianos. De esta manera se diferencian de los antibióticos que se originan por
biosíntesis de hongos o bacterias, o por semisíntesis a partir de esos productos naturales.

9.1.1.2. Quinolonas de tercera generación

Aunque la segunda generación de fluoroquinolonas representó una gran mejoría para esta familia de
agentes terapéuticos, el espectro de acción contra bacterias Gram (+) aún se encontraba restringido.
Para suplir esta falencia, a partir del año 1990 fueron sintetizadas las quinolonas de tercera generación,
las cuales presentaron en general un notable incremento en su potencia contra dichos
microorganismos, y en particular frente a Streptococcus pneumonia, incluyendo cepas altamente
resistentes a penicilina. A continuación, en la Figura 9.3, se detallan algunas estructuras de quinolonas
pertenecientes a este grupo. Modificaciones estructurales claves en el núcleo básico de las
fluoroquinolonas han permitido grandes mejoras en las propiedades farmacocinéticas de esta tercera
generación, como por ejemplo una elevada penetración en los tejidos, una vida media extendida que
permite una única toma diaria, etc.

Figura 9.3. Quinolonas de tercera generación (1990-presente)

En particular, algunas moléculas pertenecientes a este grupo han logrado la mayor actividad contra
bacterias anaerobias, lo cual podría ampliar su uso en infecciones polimicrobianas como las
 134

abdominales y ginecológicas, además de una máxima actividad contra neumococos. Por este motivo,
algunos autores suelen agrupar a estas quinolonas en una cuarta generación, ejemplos de las mismas
son la Trovafloxacina y Moxifloxacina. De hecho, la clasificación de las quinolonas puede realizarse
en base a distintos fundamentos (por ejemplo, estructura química, actividad antibacteriana in vitro,
eficiencia clínica, etc.). En nuestro caso, hemos decidido tomar la clasificación de generaciones (de
primera a tercera generación), basadas en la progresión de nuevas y/o mejoradas actividades
antimicrobianas.

9.1.2. Acción antimicrobiana de las quinolonas

9.1.2.1. Cromosoma bacteriano y topoisomerasas

Los cromosomas y los plásmidos bacterianos consisten en dúplex circulares. En éstos, la doble hélice
de ADN forma primero giros positivos (giros hacia la derecha), y luego es densamente empaquetada,
pues desplegada ocuparía 1000 veces el volumen de la bacteria a la que pertenece. Este
empaquetamiento de alta densidad implica un enrollamiento de orden superior a aquel de la doble
hélice, por ende es llamado superenrollamiento (Figura 9.4). Dicho superenrollamiento se produce con
un sentido de giro contrario (giro negativo) al de la doble hélice, ya que, de lo contrario, no se
producirían cortes en la cadena de ADN. Para realizar cualquiera de los procesos básicos sobre el
ADN (duplicación, recombinación, reparación, transcripción) es necesario desenrollar las cadenas, y
luego compactarlas nuevamente. Sin
embargo, frecuentemente no es necesario el
desenrollamiento completo del cromosoma,
sino que puede producirse en sectores
específicos del mismo a donde sea requerido.

Las topoisomerasas son las enzimas

encargadas de realizar tanto el
desenrollamiento como el superenrollamiento,
necesario para el correcto empaquetamiento
Figura 9.4. Superenrollamiento del ADN
del cromosoma. Dichas enzimas se encargan
de producir cortes en la doble hélice y luego de cambiar su disposición espacial (giro), volver a unirlas
(Figura 9.5). Las topoisomerasas se hallan en todos los organismos vivos y presentan un alto grado
de conservación, debido a su papel crítico en la separación de las hebras de ADN. Sin embargo,
debido a diferencias en el ADN en los distintos tipos de células, las topoisomerasas presentes en
células eucariotas difieren en estructura y función de aquellas pertenecientes a procariotas. Motivo por
el cual es posible utilizar a las topoisomerasas bacterianas como dianas biológicas (“target”) para el
desarrollo de tratamientos quimioterapéuticos en humanos con infecciones bacteriológicas.
 135

Figura 9.5. Modo de funcionamiento de las topoisomerasas durante el

superenrollamiento del ADN

Existen diversas topoisomerasas bacterianas (topoisomerasas I-IV), relacionadas con diferentes

procesos básicos de ADN. Sin embargo, nos centraremos en aquellas que son sensibles a las
quinolonas, la topoisomerasa II o ADN girasa y la topoisomerasa IV. Ambas enzimas consisten en
estructuras tetraméricas. La ADN girasa está compuesta de dos subunidades A y dos subunidades B
(A2B2); mientras que la topoisomerasa IV está constituida por las subunidades C y E, cada una
duplicada. Las subunidades A y C son homólogas y contienen el sitio activo para la apertura y cierre
del ADN, mientras que las subunidades B y E son responsables de la actividad ATPasa, requerida
para proveer la energía necesaria para el proceso biológico.

9.1.2.2. Mecanismo de acción de las quinolonas

En 1977 se demostró que la subunidad A de la ADN girasa de E. Coli es el sitio de acción del ácido
nalidíxico. Posteriores experimentos con diferentes bacterias tales como Bacilus subtilis,
Pseudomonas aeruginosa y Citrobacter freundii condujeron a la misma conclusión. De manera similar,
estudios realizados con quinolonas de las siguientes generaciones (Ciprofloxacina, Norfloxacina,
Oxofloxacina) en diversas especies de bacterias también concluyeron que la subunidad A de la ADN
girasa es el sitio primario de acción de dichos agentes terapéuticos.

En 1989, Shen et al. propusieron un modelo para explicar el mecanismo por el cual las fluoroquinolonas
inhiben la reacción catalizada por ADN girasa. Dicho modelo, conocido como modelo cooperativo de
quinolonas-ADN, plantea una unión cooperativa entre las quinolonas y el ADN durante la inhibición
enzimática. El mecanismo ilustrado por este modelo terciario (3 componentes) inicia con la unión
covalente entre la cadena de ADN y las subunidades A de la enzima ADN girasa (Figura 9.6, A). La
apertura de la doble hélice de ADN produce un cambio topológico (conformacional) en el mismo,
produciendo un bolsillo a donde se introducirán las fluoroquinolonas. Un aspecto fundamental de este
modelo es que cuatro moléculas de quinolonas se asocian para formar una supermolécula tipo micelar
(una estructura esférica formada por una superficie hidrofílica y una parte central hidrofóbica) que se
une con el ADN al ubicarse en dicho bolsillo con alto grado de flexibilidad (Figura 9.6, B). En general,
 136

en bacterias Gram negativas, el principal sitio de acción de las fluoroquinolonas es la ADN girasa; sin
embargo, para bacterias Gram positivas el sitio primario de acción es la topoisomerasa IV.

A)

Subunidad A
de la ADN
girasa

ADN

Subunidad B
de la ADN
girasa

B)

ADN girasa.
Figura 9.6. A) Modelo cooperativo de quinolonas-ADN formado durante la inhibición de ADN
girasa. B) Supermolécula formada por 4-quinolonas (Ofloxacinas).

El mecanismo de inhibición de las quinolonas requiere de diferentes interacciones. Para una

representación simplificada, en la Figura 9.7, se esquematiza el intermediario catalítico ADN-ADN
 137

girasa, donde se ha producido la ruptura las dos cadenas de ADN, en el momento de inhibición por las
quinolonas. Para la formación de la supermolécula de quinolonas, se han propuesto dos interacciones
mayoritarias: el apilamiento π- π (“π -π stacking”) entre los ciclos de las quinolonas y las interacciones
hidrofóbicas tipo cola-cola entre los sustituyentes en el átomo de Nitrógeno-1 (sector hidrofóbico). Para
la eficiente unión de esta supermolécula al sitio de acción, se forman puentes de hidrógeno entre los
carbonilos presentes en las quinolonas con las bases nucleotídicas del segmento de las cadenas
separadas del ADN (puentes de hidrógeno representados con líneas de puntos). Esta interacción por
puente de hidrógeno entre la supermolécula de quinolona y los segmentos cortados del ADN evita
cualquier posterior acción de la enzima inhibiendo el supergiro y, por lo tanto, el proceso de
superenrollamiento; esto impide a la célula bacteriana producir las proteínas necesarias para su
crecimiento y reproducción, y una inhibición prolongada conduciría entonces a la muerte de la bacteria.
En el gráfico se aprecia que las moléculas de quinolonas se encuentran en contacto cercano con las
subunidades B de la ADN girasa (sustituyentes en C-7, cilindro con punta azul). Por su parte, las
subunidades A se encuentran covalentemente unidas a las cadenas de ADN.

Figura 9.7. Representación simplificada del modelo para la inhibición de la ADN girasa

Como ya se mencionó, si bien existen topoisomerasas en todos los organismos vivos, las presentes
en células eucariotas difieren en estructura y función de aquellas pertenecientes a procariotas, lo que
permite a las fluoroquinolonas actuar sobre las bacterias sin serios efectos tóxicos para el paciente.

9.1.3. Relación estructura-actividad biológica de las quinolonas

9.1.3.1. Aspectos generales de los requisitos de la estructura molecular de las fluoroquinolonas

El modelo presentado anteriormente sugiere tres sectores o dominios funcionales en la molécula de

fluoroquinolonas (Figura 9.8): el sector de unión al ADN, el sector que habilita la propia asociación de
las quinolonas entre sí, y finalmente un dominio que establezca las interacciones con la enzima (ver
 138

Figura 9.7). Para alcanzar una correcta actividad antibacteriana, dichos dominios deben cumplir con
determinados requisitos, tales como:

I) Sustituyentes hidrofóbicos en el átomo de nitrógeno en la posición 1 son esenciales para la existencia

de actividad antimicrobiana. El requerimiento de sustituyentes lipofílicos y relativamente pequeños en
N-1 es consistente con su rol en la unión entre dos moléculas de fluoroquinolonas.

II) De manera relacionada, los sustituyentes en la posición 8 deben ser pequeños, disminuyendo
restricciones estéricas para una eficiente asociación de las moléculas terapéuticas.

III) Un carbonilo en la posición 4 es esencial para la existencia de actividad, así como también un ácido
carboxílico en C-3. Ambos grupos carbonilos son coplanares y participan en los puentes de hidrógeno
con las bases de la cadena del ADN en la zona
que es abierta por la ADN girasa. Además,
favorecen a la penetración en la bacteria.

IV) Los sustituyentes en posición 7

interaccionan con la subunidad B de la ADN
girasa, si bien los requerimientos estructurales
no son muy estrictos, se puede observar que en
general las variaciones estructurales de los
compuestos comerciales no difieren Figura 9.8. Numeración y dominios funcionales
de las 4-quinolonas
marcadamente, consistiendo principalmente en
heterociclos nitrogenados.

9.1.3.2. Análisis detallado de la relación estructura – actividad biológica. Ejemplos

La estructura de las fluoroquinolonas, como ya se ha mencionado previamente, es una 4-oxo-1,4-

dihidroquinolina N-1-sustituida, con un grupo ácido carboxílico como sustituyente en la posición 3. A
continuación se analizan posibles diversificaciones de dicha estructura en base a las fluoroquinolonas
que han demostrado mejor desempeño como agentes antimicrobianos:

Posición 1: Como ha sido discutido, para este sector de la molécula es esencial que los sustituyentes
en el átomo de nitrógeno N-1 sean pequeños e hidrofóbicos, brindando una buena interacción entre
las quinolonas sin incrementar el impedimento estérico. Los ejemplos más frecuentes son: grupos etilo
y ciclopropilo presentes, por ejemplo, en la norfloxacina y en la moxifloxacina, respectivamente.
También se han incorporado grupos fluorfenilos que tienden a incrementar la actividad in vitro de las
quinolonas contra bacterias anaeróbicas, como por ejemplo la trovafloxacina.

Posición 2: La sustitución del átomo de hidrógeno por otros sustituyentes no ha resultado ventajosa.
 139

Posición 3: Es indispensable que el sustituyente sea un ácido carboxílico. Derivados esterificados

disminuyen notablemente su actividad. De manera similar, se pierde la actividad antibacteriana al
introducir otros grupos ácidos, tales como ácidos sulfónico o fosfórico.

Posición 4: El carbonilo es imprescindible.

Posición 5: En general la introducción de distintos grupos en esta posición tiende a disminuir la

actividad de la quinolona, en especial si son muy voluminosos. Sin embargo, es posible introducir
grupos pequeños, e incluso favorecer la actividad contra bacterias Gram (+), como ocurre en el caso
de la grepafloxacina, que posee un metilo en esa posición, o para la esparfloxacina, con un grupo
amino en el C-5.

Posición 6: El átomo de flúor es óptimo, de allí nacen las fluoroquinolonas. Se cree que contribuye a
la mejor penetración del antibacteriano en la célula, como así también a la interacción con la enzima
ADN girasa.

Posición 7: Los grupos situados en esta posición interaccionan fundamentalmente con la enzima. En
general, los grupos situados en esta posición regulan la potencia de la actividad, el espectro de acción
y propiedades farmacocinéticas. No hay una estructura exclusiva en esa posición, por lo tanto es una
de las posiciones que ha sido más estudiada en cuanto a variabilidad de sustituyentes. Sin embargo,
los mejores resultados los dan heterociclos, sustituidos o no (por ejemplo: piperazinas en la mayoría
de las fluoroquinolonas).

Posición 8: La presencia de un átomo de hidrógeno es la sustitución más frecuente. Sin embargo, el

reemplazo de dicho átomo de hidrógeno por algún grupo funcional pequeño es factible, como por
ejemplo un átomo de flúor en la lomefloxacina y en la esparfloxacina, o un grupo metoxi en la
moxifloxacina. También es posible el cambio del C-8 por un átomo de nitrógeno, conservando buena
actividad, como es el caso de la trovafloxacina y gemifloxacina. Estas modificaciones pueden mejorar
la actividad contra bacterias anaerobias.

Formación de un ciclo entre las posiciones C-8 y N-1: La unión de estas dos posiciones puede resultar
beneficiosa para la actividad de la quinolona, dicha unión puede realizarse a través de un ciclo oxazina
como en el caso de la ofloxacina, o también es posible encontrar tiazinas como puentes (rufloxacina).

9.1.3.3. Importancia de la estereoquímica

Si observamos con atención la estructura de la ofloxacina, notamos que la presencia de un sustituyente

metilo en el ciclooxacina genera un centro quiral, lo cual da lugar a la existencia de dos enantiómeros
(Figura 9.9). De esos dos enantiómeros se ha determinado que el isómero S posee una actividad entre
8 y 125 veces mayor que el isómero R. Ha sido demostrado que la actividad incrementada del
 140

estereoisómero S se debe a una mayor cantidad de interacciones estabilizantes en la unión al bolsillo

del complejo ADN-ADN girasa. Si bien la ofloxacina se comenzó a comercializar como mezcla
racémica, a partir de 1996 la FDA de Estados Unidos autorizó la comercialización del isómero S puro,
llamado levofloxacina.

Figura 9.9. Enantiómeros de la ofloxacina

9.1.4. Farmacocinética

Las fluoroquinolonas se absorben bien a través del tracto intestinal (administración vía oral) y son bien
distribuidas a los diversos tejidos corporales. En general, no se
recomienda administrar junto a antiácidos ni a productos
lácteos, debido al poder quelante provisto en gran medida por
la función carboxilato en C-3, la cual, junto al grupo carbonilo,
permiten la formación de quelatos metálicos (Figura 9.10.) con
metales de valencias superiores tales como Al(III), Mg(II),
Ca(II), Fe(II y III). Generalmente, estos complejos metálicos son
insolubles en agua, por ende pueden interferir con los niveles
Figura 9.10. Quelato metálico
óptimos de concentración de las quinolonas en sangre. formado por las fluoroquinolonas

Las quinolonas tienen un amplio espectro de acción (bacterias

Gram positivas, Gram negativas, Pseudomonas, etc). Por lo tanto, son indicadas para un abanico de
infecciones, tales como infecciones urinarias, infecciones en las vías respiratorias, infecciones
gastrointestinales, etc

9.1.5. Perspectivas futuras

Dado el origen sintético de la quinolonas podría suponerse que los gérmenes no contarán con
mecanismos de resistencia naturales o propios. Sin embargo, esto no es cierto en absoluto.
Probablemente, al igual que para otros agentes antibacterianos, el uso de antibacterianos para el
engorde de animales sumado a su amplio uso sin control pudieron haber acelerado el fenómeno de
 141

expansión de resistencia. Particularmente, estos problemas de resistencia suelen aparecer en el

tratamiento de infecciones por Pseudomonas, lo que es más frecuente si el paciente recibió
previamente el fármaco y los niveles sanguíneos alcanzados no son los adecuados. Existen cuatro
mecanismos principales de resistencia bacteriana contra quinolonas: tres cromosómicos y uno
trasmitido por plásmidos. Dentro de los cromosómicos, encontramos mutaciones de los genes
codificadores de las subunidades A y B de la ADN girasa. De esta manera, se altera la secuencia
peptídica de las topoisomerasas para disminuir la afinidad por las quinolonas, mediante cambios de
configuración y/o la modificación de residuos de aminoácidos presentes directamente en el sitio de
unión de las mismas. Otro tipo de resistencia a nivel cromosómico se manifiesta en modificaciones en
la cadena respiratoria (propia de bacterias aerobias) que logran expulsar las quinolonas (mecanismo
de eflujo activo), disminuyendo la concentración de las mismas en el citoplasma bacteriano por debajo
de los valores necesarios para lograr actividad. Finalmente, el tercer mecanismo de resistencia
consiste en aumentar la expresión de las enzimas topoisomerasas. La aparición de estos mecanismos
de resistencia exige la administración de mayores concentraciones del fármaco, sin lograr resultados
igualmente eficientes.

Dado el panorama de una continua amenaza de incremento de resistencia bacteriana a estos agentes
terapéuticos, sumado a algunos efectos adversos propios de estos medicamentos, se continúan
buscando derivados mejorados que conserven el núcleo básico de las fluoroquinolonas, pero
modifiquen aquellos sectores permitidos, como fue discutido previamente. De hecho, existen varios
compuestos novedosos de esta familia de antibacterianos en estadíos avanzados del proceso de
aprobación de un nuevo fármaco. A modo de ejemplo podemos nombrar la delafloxacina desarrollada
por la compañía farmacéutica Melinta Therapeutics (previamente Rib-X Pharmaceuticals, EEUU), la
cual se encuentra en Fase III de las pruebas clínicas (Figura 9.11).

Otra quinolona prometedora es la finafloxacina desarrollada por la compañía MerLion Pharmaceuticals

Pte Ltd. (Singapur-Berlín), la cual se encuentra en Fase II para el tratamiento de infecciones urinarias
con complicaciones, infecciones intra-abdominales con complicaciones, infecciones en riñón e
infecciones dérmicas.

Otra alternativa para combatir la resistencia es la síntesis de dímeros simétricos. Por ejemplo, para
contrarrestar la resistencia presentada por Staphylococcus Aureus (resistencia por eflujo activo) se
han desarrollado los dímeros de ciprofloxacina y de norfloxacina (Figura 9.12).
 142

Figura 9.11. Nuevas fluoroquinolonas en desarrollo.

O O
HO2 C F F CO 2H

N N N N
R N Linker N R

R= , Ciprofloxacina

R = Et , Norfloxacina
Figura 9.12. Dímeros de ciprofloxacina y de norfloxacina

9.2. INHIBIDORES DE ARN POLIMERASA: RIFAMICINAS

La ARN polimerasa es una enzima encargada de facilitar la transcripción del ADN a ARN, es decir
formar la cadena de ARN a partir de la información contenida en ADN. Los ansamacrólidos, como la
rifamicina, son inhibidores de la ARN polimerasa bacteriana. Se unen de forma no-covalente a la
enzima (tal vez por puentes de hidrógeno), inhibiendo entonces la síntesis de ARN.

Es importante destacar que, si bien los mamíferos tienen ARN polimerasa, su estructura carece de la
sección específica de la cadena peptídica a la que se une la rifamicina, por lo tanto no se ven afectadas
por la presencia de este fármaco. Obviamente, esa porción de la cadena peptídica se encuentra en
las bacterias; se cree que la misma se perdió en la evolución entre células procariotas y células
eucariotas.

Las rifamicinas se caracterizan por un puente "ansa" alifático que conecta dos posiciones no
adyacentes de un núcleo naftalénico. La rifamicina B (Figura 9.13) se aisló a partir de Amycolatopsis
mediterranei. Sólo la rifamicina B, que representa el 10-15% de la mezca aislada, puede obtenerse
como un compuesto cristalino estable. Una mejora adicional en el rendimiento se logra por el agregado
de dietilbarbiturato de sodio al medio de fermentación, con lo cual rifamicina B es prácticamente el
 143

único antibiótico obtenido. Su estructura se determinó mediante estudios de degradación química y

fue confirmada por cristalografía de rayos X. Rifamicina SV (Figura 9.13) fue obtenida por modificación
química de otras rifamicinas, pero también puede ser obtenido por fermentación de algunas cepas de
A. mediterranei. El sistema naftalénico y los grupos hidroxilo presentes en la estructura de las
rifamicinas son esenciales para la actividad biológica.

La rifamicina se utiliza principalmente para tratar tuberculosis y MRSA. Su uso no está muy
generalizado debido al alto costo. Debido a que desarrolla resistencia rápidamente, la rifamicina no
debe ser utilizada individualmente, de esta manera, este antibiótico normalmente se administra en
combinación con otros fármacos antituberculosos, tales como isoniazida.

Figura 9.13. Rifamicinas más comunes

144
 145

CAPITULO 10

INHIBIDORES DE LA BIOSÍNTESIS DEL ÁCIDO

TETRAHIDROFÓLICO
10.1. INHIBIDORES DE LA DIHIDROPTEROATO SINTETASA

10.1.1. Sulfonamidas o Sulfas

Las sulfonamidas de uso en clínica médica con propiedades antibacterianas, son derivados N-mono
sustituidos de la p-amino bencensulfonamida (Figura 10.1).

Este sustituyente puede

modificarse sin afectar la
actividad antibacteriana.

Figura 10.1. Estructura general de las sulfas

10.1.2. Antecedentes históricos

En el año 1935, el patólogo alemán Gerhard Domagk, notó que el Prontosil, un colorante, presentaba
actividad antibacteriana en animales, pero no era activo in vitro. Además, en el mismo año,
investigadores del Instituto Pasteur de París, llegaron a la conclusión de que la ruptura de la unión azo
del Prontosil generaba p-amino bencensulfonamida, la cual era la sustancia responsable de la
actividad antibacteriana, Esquema 10.1, y demostraron que la p-amino bencensulfonamida era
igualmente efectiva que el Prontosil en ratones infectados con estreptococos. Por lo que Prontosil no
era activo por sí solo, sino que fue el primer ejemplo de una pro-droga.

Esquema 10.1. Transformación del prontosil en p-amino bencenosulfonamida.

 146

En el año 1937, demostraron la presencia de p-amino bencensulfonamida en la sangre, además esta

sulfa fue aislada de la orina de ratones y de seres humanos tratados con Prontosil. Ese mismo año
comenzó la síntesis de derivados de esta sulfa con el objeto de:

 ampliar el espectro antibacteriano

 mejorar el índice terapéutico, y
 mejorar las propiedades farmacocinéticas.

Estos antibacterianos tuvieron su primer auge entre 1937 y 1944 cuando comenzaron a utilizarse los
antibióticos (Penicilina G y Estreptomicina). A partir de 1957 comienzan a utilizarse nuevamente las
sulfas, las cuales presentan el inconveniente de que se metabolizan a productos que suelen ser tóxicos
y esto limitó su uso.

10.1.3. Clasificación de las sulfas

Aunque muchas sulfonamidas se han sintetizado y ensayado para uso clínico, solamente se han
aprobado para la venta 5 sulfas en los Estados Unidos, sulfaisoxazol, sulfacitina, sulfametizol,
sulfadiazina; todas ellas de acción corta y la sulfa de acción intermedia sulfametoxazol (ver Tabla10.1).
Dos sulfas de acción prolongada (sulfametoxipiridasina y sulfameter) no se utilizan más debido a que
manifestaban reacciones de hipersensibilidad.

Esta clasificación de las sulfas se realizó de acuerdo a su absorción y vida media de las mismas
(tiempo necesario para que la concentración del fármaco en sangre se reduzca a la mitad); de este
modo tenemos:

 Acción corta: vida media de hasta 10 horas.

 Acción media: vida media de 10 a 24 horas.
 Acción prolongada: vida media superior a 24 horas.

Las variaciones entre las distintas sulfas radican en sus propiedades farmacocinéticas (absorción,
distribución y eliminación). Algunas sulfas no se absorben por vía oral y son útiles para las infecciones
del tracto gastrointestinal; otras se caracterizan por ser muy solubles y se eliminan muy rápidamente,
a estas se las utiliza para infecciones del tracto urinario. Otro grupo de sulfas tienen la particularidad
de absorberse rápidamente y ser eliminadas lentamente, manteniendo una concentración en sangre
por largos periodos, las cuales son útiles para tratamientos crónicos y profilácticos.

La tabla 10.1 muestra las sulfonamidas de uso corriente en clínica médica, de acuerdo a su vida media
en sangre. La variación en los sustituyentes implica variaciones en su vida media. Si el análogo tiene
gran afinidad por proteínas plasmáticas, el mismo se libera lentamente en el torrente sanguíneo, con
lo cual dura más tiempo.
 147

Tabla 10.1. Estructura de sulfas de uso corriente en clínica médica

Estructuras de sulfas de uso corriente

en clínica médica

Nombre genérico Tipo de acción R

Sulfaisoxazol acción corta

Sulfadiazina acción corta

Sulfametoxazol acción intermedia

Acción corta = vida media de hasta 10 hs

Acción media = vida media de 10 a 24 hs
Acción prolongada = vida media superior a las 24 hs

Por otra parte, las variaciones en “R” pueden disminuir la toxicidad, ya que el problema radica en que
el grupo amino de las sulfonamidas se acetila en el cuerpo, generando productos más insolubles, lo
cual puede ser fatal, debido a que son capaces de obstruir las vías renales (Cristaluria), como por
ejemplo Sulfatiazol.

El reemplazo del anillo tiazol por uno de pirimidina mejora la solubilidad (Sulfadiazina), esto se debe a
que al introducir un grupo más atractor de electrones a pH fisiológico la Sulfadiazina se encuentra
ionizada ya que el protón del grupo amino es más acídico por el efecto atractor de la pirimidina; por lo
que al estar ionizada a pH fisiológio (7.4) es más soluble y por lo tanto presenta menos problemas de
toxicidad. Sin embargo, es recomendable tomar mucha agua para evitar el problema de las cristaluria.
Por otra parte, el Sulfaisoxazol es más acídico que el Sulfadiazina por lo que se presenta como una
buena alternativa.

Luego de ser superadas por la penicilina, las sulfas tuvieron un renacimiento en los últimos años con
la aparición de nuevos derivados como la sulfometoxina. Esta es tan estable en el organismo por lo
que solo requiere una toma semanal, son especialmente útiles para tratamientos crónicos o
profilácticos.
 148

Esquema 10.2. Biosíntesis del ácido tetrahidrofólico en las bacterias

10.1.4. Mecanismo de acción

Las sulfonamidas son bacteriostáticas. Inhiben el crecimiento bacteriano porque interfieren en la

síntesis microbiana del ácido tetrahidrofólico. Las bacterias tienen que sintetizar el ácido
tetrahidrofólico a partir del ácido p-amino benzoico (PABA) y de la pirofosforilmetil dihidropterina,
formándose primeramente el ácido dihidropteroico, el que después incorpora una molécula de ácido
glutámico para producir el ácido dihidrofólico, el cual, en presencia de una dihidrofosfato reductasa,
genera el ácido tetrahidrofólico. (Esquema 10.2)
 149

Las sulfas son análogos estructurales del PABA e inhiben competitivamente la síntesis del ácido
dihidropteroico. El hombre, en cambio, no es afectado por esta inhibición debido a que no lo sintetiza
a partir de sus componentes más simples, sino que lo ingiere en la dieta y luego se reduce por catálisis
enzimática a ácido tetrahidrofólico (FH4).

A partir del ácido tetrahidrofólico se forman a su vez cofactores que intervienen en la síntesis de
timidina (la cual es necesaria para la síntesis de DNA), de purinas (que son componentes esenciales
del DNA y RNA) y de los aminoácidos metionina y glicina. Recordemos que la metionina es el iniciador
de la síntesis proteica. (Figura 10.2)

Figura 10.2. Metabolismo del ácido tetrahidrofólico en bacterias

10.1.5. Espectro antimicrobiano

Las sulfonamidas son activas contra bacterias gram positivas y gram negativas, sin embargo, las
susceptibilidades son variables, aun entre los patógenos sensibles. El espectro in vitro incluye
Streptococcus pyogenes, S. pneumoniae, algunas cepas de Bacillus anthracis y Corynebacterium
diphteriae, Haemophilus influenza, H. ducreyi, Brucella, Pseudomonas pseudomallei, Vibrio cholerae,
Yersinia pestis, Calymmatobacterium granulomatis, Chlamydia trachomatis, Actinomyces, especies de
Nocardia (N. asteroides es muy sensible) y los protozoarios Plasmodium falciparum y Toxoplasma
gondii, los cuales son muy sensibles.
 150

10.1.6. Resistencia

Un gran número de bacterias se han hecho resistentes. El mecanismo de resistencia se puede producir
por:

 Una superproducción de ácido PABA. Como es un inhibidor competitivo el equilibrio

se desplaza ahora hacia el ácido tretrahidrofólico.
 Un cambio estructural en la enzima dihidropteroato sintetasa que conduzca a que
presente una menor afinidad por las sulfonamidas. Mecanismo más frecuente de resistencia.
 Una disminución de la permeabilidad de las bacterias gram negativas al ingreso de las
sulfas.

10.1.7. Usos y características de algunas sulfas

La sulfadiazina es un fármaco de elección para la nocardiosis. El sulfaisoxazol también se usa para

tratar esas infecciones. Aunque la sulfadiazina se ha usado en el tratamiento de infecciones del tracto
urinario, actualmente no se la emplea porque se requieren altas dosis, en estos casos actualmente se
emplea el sulfaisoxazol. La sulfadiazina o el sulfaisoxazol están indicados para el tratamiento
profiláctico de la fiebre reumática en pacientes alérgicos a penicilinas. El sulfaisoxazol en combinación
con una penicilina o eritromicina se usa frecuentemente para el tratamiento de otitis media, producida
por cepas resistentes a la amoxicilina. El sulfaisoxazol se absorbe rápidamente en el tracto
gastrointestinal luego de administrarse por vía oral. El acetato de sulfaisoxazol (que es un derivado
soluble sin sabor) se utiliza para administrar por vía oral en el caso de los niños, en el intestino es
convertido a sulfaisoxazol, el fármaco activo. El sulfametoxazol se prescribe como una alternativa al
sulfaisoxazol y, como muchas sulfas, es recomendable tomar mucha agua durante la terapia para
evitar el problema de las cristaluria. El sulfametoxazol también se comercializa en mezclas con
trimetoprima en proporciones fijas, para administración oral y parenteral.

10.2. INHIBIDORES DE LA DIHIDROFOLATO REDUCTASA. TRIMETOPRIMA

10.2.1. Introducción

La trimetoprima (Figura 10.3) estructuralmente es una 2,4-diamino-5-(3’, 4’, 5’-trimetoxibencil)

pirimidina. Es un poderoso inhibidor de la
dihidrofolato reductasa bacteriana (y también de
protozoarios) pero no de la de humanos.

Su actividad es 50.000 a 100.000 veces mayor

con la dihidrofolato reductasa (DHFR) bacteriana
Figura 10.3. Estructura de trimetoprima
que con la DHFR humana. La razón es que
 151

ambas enzimas hacen el mismo trabajo en bacterias o en humanos pero presentan diferencias
estructurales producidas por mutaciones llevadas a cabo en millones de años de evolución. Estas
diferencias estructurales son reconocidas por la trimetoprima para ejercer su acción selectivamente.

10.2.2. Mecanismo de acción

Como vimos en el Esquema 10.2 del mecanismo de acción de las sulfas, la trimetoprima inhibe la
dihidrofolato reductasa que es la enzima que cataliza la transformación del dihidrofolato (FH 2) a
tetrahidrofolato (FH4); o sea un par de pasos más adelante en la secuencia biosintética que la
dihidropteroato sintetasa, la cual es inhibida por las sulfas.

10.2.3. Resistencia

Los microorganismos pueden desarrollar resistencia a la trimetoprima por alteración de la naturaleza

de la dihidrofolato reductasa (por ejemplo, incrementando la producción de la enzima y/o disminuyendo
la afinidad por la trimetoprima) o por disminución de la permeabilidad de la bacteria al pasaje de la
trimetoprima.

Una estrategia es el uso de una sulfa combinada con trimetoprima, de esta manera, tenemos dos
inhibidores que actúan sobre distintos pasos de la misma biosíntesis, esto se conoce como bloqueo
secuencial. De esta manera la dosis de cada droga es más baja disminuyendo los problemas
potenciales de toxicidad o efectos secundarios. Además, desde el punto de vista de la resistencia, es
poco probable que una misma cepa adquiera resistencia a ambos agentes antibacterianos. La
combinación más común es: Sulfametoxazol – Trimetoprima (Figura 10.4).

10.2.4. Usos

La mezcla de trimetoprima – sulfametoxazol es utilizada como el medicamento de elección o de

alternativa para el tratamiento de varias enfermedades infecciosas. Infecciones del tracto urinario, del
tracto respiratorio, gastrointestinales y enfermedades de transmisión sexual. Esta combinación puede
ser útil también en las infecciones de riesgo, incluyendo meningitis, osteomelitis, bacteriemia y
endocarditis producidas por bacterias Gram negativas, en los casos en que otros agentes
antibacterianos no resulten efectivos o no sean bien tolerados. También se utiliza para neumonías
causada por Pneumocystis carinii, un protozoario oportunista que produce infecciones en pacientes
inmunocomprometidos.
 152

Figura 10.5. Estructura de Sulfametoxazol – Trimetoprima

 153

CAPITULO 11

SÍNTESIS QUÍMICA DE ANTIBACTERIANOS

11.1. INTRODUCCIÓN

El desarrollo de procesos de síntesis a escala industrial es significativamente diferente al utilizado para

preparar los compuestos sintéticos en un laboratorio, en pequeña escala. Primeramente, el escalado
directo de un proceso realizado en el laboratorio para la producción de kilos y hasta toneladas de un
principio activo sintético raramente da buen resultado. Muchas reacciones llevadas a cabo en pequeña
escala no generan un resultado similar cuando se las realiza a gran escala. Por otro lado, la
peligrosidad de los compuestos utilizados depende de la escala, por ejemplo, si una reacción requiere
10 mililitros de ácido nítrico no es lo mismo que una que requiere 1000 litros. De allí que las
precauciones son completamente diferentes. Esto hace también que los procesos sintéticos a gran
escala demanden la utilización de reactivos lo más ambientalmente benignos que sea posible, así
como la reducción de aquellos tóxicos, corrosivos o teratogénicos. Se deben además tener en cuenta
las exigencias de los entes regulatorios para compuestos que se desean introducir en el mercado,
entre ellas, la producción industrial con nulas o mínimas cantidades de impurezas, las cuales, a su
vez, deben ser caracterizadas. Todo esto sin hacer la producción económicamente prohibitiva, la
utilización de reactivos y materias primas baratas es un objetivo altamente deseable. Por ejemplo, una
de las premisas actuales es el uso, en lo posible, de reacciones en solventes acuosos debido a que
los solventes orgánicos deben ser reciclados o tratados encareciendo el proceso. De esta manera,
muchos compuestos promisorios desde el punto de vista de su actividad biológica han sido dejados
de lado por la imposibilidad de desarrollar una síntesis a escala industrial que sea económicamente
conveniente y que, a la vez, cumpla con los requerimientos de los entes regulatorios.

11.2. MODIFICACIONES QUÍMICAS DE PENICILINAS Y CEFALOSPORINAS

11.2.1. Penicilinas

Como ya se mencionó en el capítulo correspondiente, la gran mayoría de las penicilinas y

cefalosporinas comerciales son semisintéticas. Sólo la Bencilpenicilina (Penicilina G) y la
Fenoximetilpenicilina (Penicilina V) son usadas en su forma original, es decir, sin modificaciones
químicas posteriores al proceso de fermentación. Como era de esperar, las modificaciones químicas
del núcleo penam y cefem son innumerables y se siguen realizando aún hoy. Estas modificaciones,
 154

como es lógico, no siempre generan productos que llegan a comercializarse, de hecho de cientos de
miles de compuestos sintetizados sólo algunas decenas han llegado al mercado farmacéutico.

Las penicilinas semisintéticas se obtienen por modificación química del 6-APA, el cual, a su vez se
genera por eliminación (enzimática o química) del resto 6-acilo de las penicilinas naturales,
Bencilpenicilina o Fenoximetilpenicilina (Esquema 11.1). También puede obtenerse por fermentación
en medios de cultivo en que los precursores de las cadenas laterales (bencilo o fenoximetilo) estén
ausentes.

Esquema 11.1. Formación de 6-APA a partir de Penicilina G

La acilación de 6-APA con una variedad de ácidos carboxílicos sustituidos es el método más común
para obtener las penicilinas semisintéticas y se lleva a cabo utilizando el correspondiente cloruro de
ácido o un anhídrido mixto. Las nuevas penicilinas se obtienen con buenos rendimientos y se aislan
generalmente como sales de potasio usando 2-etilhexanoato de potasio. Los cloruros de ácido se
hacen reaccionar con 6-APA en acetona acuosa en presencia de una base, mientras que los
anhídridos mixtos se preparan in situ a partir del cloroformiato de etilo y trietilamina en acetona, antes
de la reacción con el 6-APA. Estos procedimientos se utilizan, por ejemplo, para preparar Meticilina
(Esquema 11.2).

OMe
OMe O H
H2 N 6 S N 6 S
NEt3
Cl
+ N OMe O N
OMe O O
CO2H CO2H
6-APA Meticilina

Esquema 11.2. Síntesis industrial de Meticilina.

Algo más compleja es la síntesis de la Oxacilina, otra penicilina resistente a β-lactamasas. Se sintetiza
haciendo reaccionar el cloruro del ácido 5-metil-3-fenil-4-isoxazol carboxílico (1) con 6-APA en
presencia de bicarbonato de sodio (Esquema 11.3). El cloruro de ácido 1, a su vez, se sintetiza por
reacción de benzaldehído (2) con hidroxilamina (3) para obtener la benzaldoxima (4), que cuando se
oxida con cloro da lugar al cloruro del ácido benzhidroxámico (5). Éste se hace reaccionar con
 155

acetoacetato de etilo (6) en presencia de etóxido de sodio, dando el éster etílico del ácido 5-metil-3-
fenil-4-isoxazol carboxílico (7). La hidrólisis alcalina del éster genera el ácido correspondiente (8), que
se hace reaccionar con cloruro de tionilo para dar el cloruro de ácido (1) necesario para la acilación.

Esquema 11.3. Síntesis de la Oxacilina a gran escala

Las penicilinas de mayor venta y popularidad son las aminopenicilinas, tal como la Ampicilina y la
Amoxicilina. Industrialmente, existen varias alternativas reportadas para la síntesis de la cadena lateral
de la Ampicilina, previa a la acilación del 6-APA. Uno de los métodos más ampliamente utilizados parte
de la reacción de (R)-(−)-2-fenilglicina (9) con cloroformiato de bencilo (10) para formar la
benciloxicarbonilfenilglicina (11) (Esquema 11.4). El tratamiento de 11 con cloroformiato de etilo (12)
en presencia de trietilamina genera un anhídrido mixto (13) el cual reacciona fácilmente con 6-APA en
presencia de bicarbonato de sodio para formar la sal sódica de la Ampicilina N-protegida (14). La
eliminación del grupo protector mediante hidrogenólisis usando un catalizador de paladio sobre
carbonato de bario, produce la Ampicilina deseada.

Otro método para preparar Ampicilina es análogo al método anterior, pero difiere en la protección del
grupo amino de la fenilglicina de partida (9). Para ello, se hace reaccionar acetoacetato de etilo (6) con
la sal sódica de fenilglicina, formando un éster aminocrotónico intermediario (15), más conocido como
sal de Dane (Esquema 11.5).
 156

Esquema 11.4. Síntesis industrial de Ampicilina, opción 1

Esquema 11.5. Síntesis industrial de Ampicilina, opción 2

 157

La transformación subsiguiente de la sal de Dane en el anhídrido mixto 16 seguido de una reacción

con 6-APA en presencia de bicarbonato de sodio, y posterior acidificación para hidrolizar la enamina,
produce directamente la Ampicilina.

Dentro de la penicilinas antipseudomonas, la Carbenicilina es una de las más populares. Se sintetiza

por acilación directa del 6-APA en presencia de bicarbonato de sodio por el ácido fenilmalónico, en
forma de su monoéster bencílico monocloruro de ácido (17), para obtener la Carbenicilina protegida
18 (Esquema 11.6), cuya hidrogenólisis, utilizando paladio sobre carbono o carbonato de calcio como
catalizador, genera el producto deseado.

Esquema 11.6. Síntesis industrial de Carbenicilina.

11.2.2. Cefalosporinas

Actualmente la Cefalosporina C se obtiene por fermentación del hongo Cephalosporium acremonicum.

Como ya hemos mencionado, la Cefalosporina C no es un compuesto comercial, pero sí un material
de partida para la preparación de cefalosporinas semisintéticas.

La hidrólisis química o enzimática de la Cefalosporina C permite obtener grandes cantidades del 7-

ACA que, por acilación del grupo amino crea una serie de cefalosporinas que se utilizan o se han
utilizado en clínica médica. Tal es el caso de la Cefalotina, una cefalosporina de primera generación
(Esquema 11.7).

A diferencia de las penicilinas, las cefalosporinas semisintéticas se sintetizan no sólo modificando la

posición 7, sino también el grupo acetato en posición 3'.
 158

Esquema 11.7. Síntesis de Cefalotina a partir de Cefalosporina C

Este es el caso de la cefazolina, donde el grupo 3-acetoximetilo se sustituye por un grupo 1,3,4-
tiadiazol-2-iltiometilo. Para su obtención se sintetiza primero el anhídrido mixto 19, por reacción del
ácido tetrazolilacético y el cloruro de pivaloílo (cloruro de trimetilacetilo), para luego hacerlo reaccionar
con el 7-ACA (Esquema 11.8). El paso posterior es la reacción del intermediario 20 con 2-mercapto-
5-metil-1,3,4-tiadiazol (21) que da lugar a una sustitución del grupo 3-acetoxi por un grupo
mercaptotiadiazol, generando así la Cefazolina deseada.

Esquema 11.8. Síntesis de Cefazolina a escala industrial.

 159

Otro intermediario utilizado para la preparación de cefalosporinas semisintéticas es el ácido 7-amino

desacetilcefalosporánico (7-ADCA), que se obtiene a partir de Penicilina G o V (ver Capítulo 4). A partir
del 7-ADCA se obtiene la Cefalexina. Se hace reaccionar el 7-ADCA con un anhídrido mixto (22),
obtenido a partir de N- carboxibencilfenilglicina y el cloruro de pivaloílo (Esquema 11.9). La eliminación
del grupo protector N-carboxibencilo del intermediario 23, por hidrogenólisis con paladio sobre
carbonato de bario, produce finalmente la Cefalexina.

Esquema 11.9. Síntesis industrial de Cefalexina.

11.3. INHIBIDORES DE β-LACTAMASAS

Los inhibidores de β-lactamasas más utilizados son el ácido clavulánico, de origen natural y aislado
de Streptomyces clavuligerus y el ácido penicilánico sulfona o Sulbactama, que se sintetiza en pocos
pasos a partir del 6-APA (Esquema 11.10). En primer término, se lleva a cabo la diazotación del 6-
APA gracias al ácido nitroso, generado in situ con nitrito de sodio y el ácido sulfúrico, que reacciona
con el grupo amino libre de posición 6 del 6-APA dando el intermediario ácido 6-diazopenicilánico.

Esquema 11.10. Síntesis a escala industrial de Sulbactama

 160

Este intermediario no se aisla, ya que, en presencia de bromo en el medio de reacción, se halogena

obteniéndose el ácido 6,6-dibromopenicilánico (24). En el siguiente paso, el ácido 24 se oxida en
presencia de permanganato de potasio generándose el ácido 6,6-dibromopenicilánico sulfona (25).
Finalmente, 25 puede convertirse en la Sulbactama por hidrogenación catalítica con paladio sobre
carbono.

11.4. SULFONAMIDAS O SULFAS

Las sulfonamidas son compuestos de origen sintético de uso en clínica médica con propiedades
antibacterianas. Se trata de derivados de la p-amino bencensulfonamida, donde la variación se realiza
solamente en el nitrógeno de la sulfonamida. Se ha sintetizado un gran número de sulfonamidas,
principalmente haciendo reaccionar el cloruro de 4-acetilaminobencenosulfonilo (28) con varias aminas
(predominantemente aromáticas y heteroaromáticas), seguido por la eliminación del grupo acetilo
protector de la amina (Esquema 11.11). Este es el método más utilizado debido a su sencillez. Esta
síntesis se ejemplifica en la preparación del Sulfaisoxazol. El cloruro de 4-acetilaminobencenosulfonilo
(28) se hacer reaccionar con 5-amino-3,4-dimetilisoxazol (27), que a su vez se sintetiza por
heterociclización de 2-metilacetilacetonitrilo (26) con hidroxilamina. Finalmente la hidrólisis con ácido
clorhídrico del grupo protector acetilo en 29 genera el producto deseado Sulfaisoxazol.

Esquema 11.11. Síntesis industrial de Sulfaisoxazol.

 161

11.5. QUIRALIDAD EN LOS AGENTES ANTIBACTERIANOS. RELACIÓN ENTRE LA

ESTEREOQUÍMICA Y LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA

La gran mayoría de las moléculas de importancia biológica son quirales, aminoácidos, azúcares,
proteínas, ácidos nucleicos, etc. Una interesante característica de estas biomoléculas es que en la
naturaleza existen en sus formas enantioméricamente puras. La naturaleza quiral de las biomoléculas
tiene profundas implicaciones en las propiedades de los sistemas biológicos. Las enzimas o proteínas
distinguen entre los dos enantiómeros de un fármaco quiral. Esto se puede entender imaginando una
enzima como teniendo una cavidad en forma de guante a la que se une a un sustrato. Si el guante es
diestro, entonces un enantiómero encajará dentro y se unirá, mientras que el otro enantiómero tendrá
un mal ajuste y es poco probable que se una. De hecho, este otro enantiómero puede conducir a otros
efectos biológicos. La Tabla 11.1 muestra algunos casos en el que los enantiómeros tienen actividades
biológicas marcadamente diferentes.

Un caso paradigmático ha sido el del fármaco talidomida (Figura 11.1) a partir del cual los
requerimientos de los organismos de control de fármacos cambiaron dramáticamente. La talidomida
se comercializó a finales de los años cincuenta como un sedante seguro porque no se pudo establecer
una dosis letal en animales. Al poco tiempo comenzó a utilizarse masivamente en Europa para
contrarrestar las náuseas matutinas durante el embarazo.

Tabla 11.1: Ejemplos de enantiómeros con diferentes actividades biológicas

Entrada Fármaco Enantiómero Actividad o carácterística

S teratogénico
1 Talidomida
R sedante

S tuberculostático
2 Etambutol
R produce ceguera

S antiartrítico
3 Penicilamina
R mutagénico

S amargo
4 Asparagina
R dulce

S aceite esencial de alcaravea

5 Carvona
R aceite esencial de menta verde
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Desafortunadamente, no se previeron los efectos teratogénicos del fármaco en el desarrollo de los

fetos lo que llevó al nacimiento de bebés con miembros atrofiados y con otras deformidades del
desarrollo. Entre 8000 y 12.000 bebés fueron afectados antes que el fármaco se retirara del mercado
en 1961. Si bien el enantiómero R tenía el efecto deseado, el enatiómero S era teratogénico.

Figura 11.1. Enatiómeros de Talidomida

A partir de esta penosa tragedia, la tendencia a la preparación de fármacos enantioméricamente puros

ha ido “in crescendo”. En 1988, la FDA anunció un conjunto de directivas relacionadas con la
estereoquímica de compuestos en futuras aplicaciones para nuevas drogas. Por ello, la preparación
de fármacos y su comercialización como racematos se ha reducido drásticamente. Generalmente este
problema se presenta en el caso de la síntesis de fármacos sintéticos ya que los semisintéticos, como
muchos antibióticos β-lactámicos, si bien tienen centros quirales, los mismos provienen de un material
de partida enantioméricamente puro derivado de la naturaleza (Ej: 6-APA). El porcentaje de fármacos
comercializados en forma enantioméricamente pura ha aumentado del 10% en el año 1990 al 37% en
el año 2005. El interés científico en el tema así como su utilidad práctica han propiciado el auge
observado en lo que en la actualidad se denomina "Chiral Market" y ha permitido acuñar expresiones
como "Chiral Technology", con la que se alude habitualmente al uso de técnicas o procedimientos para
el estudio de la estereoquímica absoluta de un compuesto, así como para lograr la resolución, tanto a
escala analítica como preparativa, de los enantiómeros de compuestos quirales o para provocar
transformaciones asimétricas utilizando, por ejemplo, enzimas, sintones quirales o catalizadores
quirales.

11.5.1. Cloranfenicol

Si bien el Cloranfenicol fue aislado de Streptomyces venezuelae, hoy es económicamente más

beneficioso obtenerlo de manera sintética. Uno de los inconvenientes de su síntesis es que se trata de
un compuestos quiral, con dos centros estereogénicos La estructura del producto natural, la cual es
biológicamente activa, corresponde a la configuración D-treo (R,R) entre los carbonos quirales C-1 y
C-2, en cambio su enantiómero L-treo carece de actividad biológica.
 163

Existen varios procedimientos de síntesis en los que el producto quiral se obtiene por separación de
la mezcla racémica. Por ejemplo, en uno de ellos se parte de 4-nitroacetofenona (30), que se hace
reaccionar con bromo molecular para producir ω-bromo-4-nitroacetofenona (31) (Esquema 11.12).
Este se transforma en ω-amino-4-nitroacetofenona (33) mediante la formación de una sal cuaternaria
con urotropina (32) y posterior ruptura con cloruro de hidrógeno para dar la amina correspondiente. La
aminocetona resultante (33) se acila con anhídrido acético para obtener ω-acetamido-4-
nitroacetofenona (34), y este producto se trata con formaldehído para dar α-acetamido-β-hidroxi-4-
nitropropiofenona (35). La reducción del grupo carbonilo con isopropóxido de aluminio seguida de
hidrólisis del grupo acetilo con ácido clorhídrico genera la mezcla racémica S,S y R,R-2-amino-1(4-
nitrofenil)-1,3-propandiol (36).

Esquema 11.12. Síntesis industrial de Cloranfenicol.

La resolución de mezclas racémicas se lleva a cabo con uno de los métodos más comunes y simples
tal como lo es la formación de sales diastereosoméricas. En este caso, una base racémica (36)
reacciona con un ácido quiral, el ácido alcanfor-D-sulfónico (D-CSA) para generar las correspondientes
sales diastereoisoméricas. A diferencia de los enantiómeros, los diastereoisómeros tienen propiedades
físicas diferentes entre sí, lo que permite separar sus mezclas de manera simple. En el caso de la
mezcla de las sales de 36, dicha separación se lleva a cabo por recristalización. Una vez separados,
se saponifica el isómero deseado para obtener el R,R-2-amino-1(4-nitrofenil)-1,3-propandiol (36), es
 164

decir, en su forma enantioméricamente pura. Finalmente, acilando el grupo amino de este

intermediario con el dicloroacetato de metilo, se obtiene el Cloranfenicol deseado es su forma activa
D-treo (R,R).

Uno de los mayores inconvenientes de la resolución de mezclas racémicas es el desperdicio de

material ya que la mitad del compuesto sintetizado, el enantiómero inactivo, no tiene utilidad y debe
ser descartado.

11.5.2. Fluoroquinolonas: Ofloxacina

Muchas fluoroquinolonas no tienen estereocentros, por lo cual su síntesis resulta relativamente

sencilla. Pero la Ofloxacina es una fluoroquinolona con un amplio espectro de acción antimicrobiana
que posee un centro quiral. Sintetizada por primera vez en 1980, fue comercializada por varios años
en EE.UU., Japón y otros países en su forma racémica, a pesar que pronto se demostró que la S(-)-
Ofloxacina era entre 8 y 125 veces más potente que su enantiómero R(+). Esto llevó a la necesidad
de buscar una manera industrial de obtener sólo el isómero activo para cumplir con las disposiciones
cada vez más rígidas de los organismos de control (FDA, etc.)

La síntesis asimétrica comienza con la condensación de (2,3,4,5-tetrafluobenzoil)acetato de etilo (37)

con ortoformiato de etilo (38) por reflujo en anhídrido acético para producir el 2-(etoximetilen)-3-oxo-3-
(2,3,4,5-tetrafluofenil)propionato de etilo (39) (Esquema 11.13). Este intermediario es inestable por lo
que se lo hace reaccionar inmediatamente con el S(+)-2-amino-1-propanol (40) en una secuencia de
adición/eliminación para obtener el intermediario 41. En presencia de hidruro de sodio en
dimetilsulfóxido, se produce la ciclación de 41 para generar el biciclo 42. El tercer ciclo se forma por
sustitución aromática nucleofílica intramolecular en presencia de hidróxido de potasio, seguida de
hidrólisis del éster etílico para generar el ácido 43. Finalmente, una nueva sustitución nucleofílica, esta
vez intermolecular, con N-metilpiperazina permite obtener el producto quiral S(-)-Ofloxacina. En este
caso no hay desperdicio de material ya que no es necesaria una resolución de racematos para obtener
el producto enantiométicamente puro. En la actualidad la S(-)-Ofloxacina ha reemplazado a la mezcla
racémica y se comercializa bajo el nombre de Levofloxacina.

Analizando el proceso sintético para la obtención industrial de la S (-)-Ofloxacina, la quiralidad de la

molécula proviene del S(+)-2-amino-1-propanol (40). Resulta clave entonces, la producción a gran
escala y económicamente factible de este compuesto. La Compañía japonesa Takasago desarrolló un
proceso para obtener el diol intermediario quiral, (R)-1,2-propanodiol (46), en una escala de 50
toneladas por año (Esquema 11.14). En este procedimiento se logra la reducción estereoselectiva de
la 1-hidroxipropan-2-ona (44), utilizando un catalizador de Rutenio en presencia de un ligando quiral
como el Tol-BINAP (45).
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Esquema 11.13. Síntesis industrial de Levofloxacina

Esquema 11.14. Síntesis asimétrica a gran escala del precursor clave para la síntesis de
Levofloxacina

11.6. CONCLUSIONES

Resulta claro que en el futuro la mayoría de los fármacos se expenderán en su forma

enatioméricamente pura. Esto requerirá del uso de procesos sintéticos más modernos tendientes a
evitar, en lo posible, la utilización de la resolución de la mezcla racémica para aislar el enantiómero,
por ser económica y ambientalmente desfavorable. En la actualidad, sólo el 10% de las síntesis a gran
 166

escala de fármacos enantiopuros se lleva a cabo por síntesis asimétrica. Estos procesos son mucho
más complejos y requieren avances en síntesis que aún no han llegado a la gran escala. Sin embargo,
hay un número creciente de procesos enantioselectivos que se utilizan en la producción de fármacos
quirales y este número seguramente irá en aumento.
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BIBLIOGRAFÍA GENERAL

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