INMUNOHEMATOLOGÍA

Cátedra de Bioquímica Clínica I

Bioq. Natalia Álvarez Asensio
 SISTEMAS DE GRUPO SANGUÍNEOS
• Eritrocitarios.
• Leucocitarios .
• Plaquetarios.

 Antígenos Específicos Ej: Rh y Kidd

Ej.: ABO, Kell, Lutheran (Lu)

 Antígenos Pluritisulares entre otros
 ANTÍGENOS ERITROCITARIOS

Estructuras moleculares, Anticuerpos (Ac)

localizadas en la específicos.
membrana del GR

Glucídicos: ABO,
Lewis entre otros
Estos Antígenos tienen distintas
composiciones bioquímicas.
Proteicos: diego, Duffy ,
Rh entre otros.
 Reacción Antígeno (Ag)- Anticuerpo (Ac) Eritocitaria
Las determinaciones de Ag del GR y el estudio de Ac en suero se basan
principalmente en pruebas que tienen como punto final la reacción de
aglutinación de GR.

Hemoaglutinación

Aglutinante Ig M
Anticuerpo

Formado en respuesta a
un Ag ( sensibilización) No Aglutinante

 Aloinmune Ig G
 Autoinmune
 Reacción de Hemaglutinación
Sensibilización Aglutinación

Ag -Ac
Ag + Ac
 FACTORES QUE AFECTAN A LA SENSIBILIZACIÓN

Temperatura.
Afinidad.
pH.
Fuerza iónica del medio.
Tiempo de incubación.
Concentración relativa del Ag
y del Ac (Fenómeno de
prozona)
 Factores que afectan a la aglutinación

 Proximidad de los glóbulos

rojos.
 Densidad del Ag
 Naturaleza del Ac interviniente
 Métodos para detectar los Ac
NO aglutinantes

Métodos basados en modificaciones físico- químicas:

• Aumento de la constate dieléctrica
• Tratamiento enzimático de GR
• PEG
• Reactivos de baja fuerza iónica

Métodos inmunológicos
• SAGH
 Control de Calidad de Reactivos
Reactivos Hemo-clasificadores = antisueros
Anti A; anti B, anti AB, anti D.

POLICLONALES: mezcla de Ac contra distintos epitopes de

una misma molécula.

MONOCLONALES: Ac dirigido
contra un único epitope.
 1) TÍTULACION DE ANTISUEROS

Lavar GR
3 veces

GR 5%
Anti A GR A 5%
Anti B GR B 5%
Anti AB GR A o B o AB 5%
 El título es la INVERSA de la dilución del ÚLTIMO
TUBO que presenta AGLUTINACIÓN POSITIVA

Tubo N°1 Tubo N°2 Tubo N°3 Tubo N°4 Tubo N°5 Tubo N°6 Tubo N°7 Tubo N°8 Tubo N°9 Tubo N°10
1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512

-
+ Sistema Título
ABO > 128
Rh > 32
 2) SCORE DE ANTISUEROS
Aglutinatos Graduación en
tubo
Grumo único ++++ 10
2- 3 grumos +++ 8
Hasta 10 grumos ++ 5
Muchos, finos + 2
ninguno - 0

Sistema Score
ABO > 50
Rh > 50
++++ +++ ++ + -
10 8 5 2 0
 3) AVIDEZ DE ANTISUEROS

Lavar GR
3 veces

GR 10% → ABO
GR 50% → Rh

Sistema Avidez
ABO < 8 segundos
Rh < 30 segundos
 4) ESPECIFICIDAD SISTEMA ABO
Antisuero A
ABO

Reactivo
Anti-A Anti-B Anti-A,B

GR “A” + - +
GR “B” - + +
GR “AB” + + +
GR A GR B GR O
GR “O” - - -
5% 5% 5%
 4) ESPECIFICIDAD SISTEMA Rh

Anti D

Rh
Reactivo
Anti-D
GR “O” Rh D (+)
+ DCe/dce
R1r
GR “O” Rh D (-)
- dce/dce
GR O Rh (D) GR O Rh (D)
positivo al 5% Negativo al 5%
rr
(genotipo (genotipo
Dce/dce) dce/dce)
Determinación de los
grupos sanguíneos

ABO y Rhce
 Tipificación ABO
DIRECTA INVERSA

En Placa En Tubos En Tubos

Anti-A Anti- B
GR GR GR
Anti- B Anti-AB Anti-A “O” “A” “B”

A B O
GR 5% A B O

A B AB

GR 5%
 INTERPRETACIÓN

Grupo PRUEBA DIRECTA PRUEBA INVERSA

sanguí-
neo Anti - A Anti - B Anti - AB GR A GR B GR O

O - - - + + -
A + - + - + -
B - + + + - -
AB + + + - - -
 DISCREPANCIA ABO
• Muestra mal identificada
• Reactivos no controlados
• Muestra coagulada
• Dilución de Ig por trasfusión masiva de plasma
• Subgrupos ABO
• Expresión antigénica eritrocitaria disminuida (leucemia y
otras neoplasias)
• Actividad antiaglutinínica escasa o nula
(inmunodeficiencia)
• Lactantes < 4-6 meses dan reacciones débiles o nulas
• Presencia de autoanticuerpos (crioaglutininas)
 Sistema Rh (Ag D)
Differences between normal D, D-weak and partial-D phenotypes

D parcial o
común
Antígeno D Normal D Débil Variante D
Epitope: Normal Normal Mutados
Cantidad de Ag: Normal Reducida Normal o Reducida
Ac --- --- ---

Epitope Antígeno
 Tipificación Rh
En Placa En Tubo
GR 5%
D C

Aglutina No Aglutina No Aglutina Aglutina

Rh D (-)
Rh D (+) D débil Investigar Rh D (+)
D parcial antígenos D débiles
D parcial débil
 Determinación de antígenos D débiles

P Paciente Control C
GR 5% GR 5%
Anti-D Soluc.Fisiol.
Centrifugar y Leer
Aglutina No aglutina No debe aglutinar
Rh D (+)
Incubar 37ºC 30 min (SENSIBILIZACIÓN)
Centrifugar y Leer
Aglutina No aglutina No debe aglutinar
Rh D (+)
Lavar 3 veces con solución fisiológica
SAGH SAGH
Centrifugar y Leer
Aglutina No aglutina No debe aglutinar
Rh D débil (+) Rh D (-)
¿Cómo se informa un grupo
sanguíneo?
Nombre y Apellido:
Fecha:

AB
B
GRUPO SANGUÍNEO: O

FACTOR Rh D: Positivo
Negativo
 Prueba de Coombs
Prueba que permite demostrar la presencia de
anticuerpos y/o componentes del complemento unidos a
GR que no pueden ser detectados por otros métodos.
El reactivo de Coombs ó SAGH reconoce
fracción Fc de las Ig o las fracciones de C
específicas.

+
Suero Coombs
AGLUTINACIÓN
A) PRUEBA DE COOMBS DIRECTA (PCD)
• Detecta Ac y/o componentes del C´ fijados
“in vivo” a los GR.

B) PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA (PCI)

• Detecta Ac y/o componentes del C´ fijados
“in vitro” a los GR.
 A) PRUEBA DE COOMBS DIRECTA
Detecta los Acs y/ó componentes del Complemento
fijados in vivo a los hematíes del paciente.

Descartar el plasma
rpm

Separar una alícuota

Sangre entera para lavar con SF
anticoagulada con EDTA

Muestra: GR del paciente en estudio

 A) PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

 Lavar 3 veces con solución fisiológica

 Preparar suspensión globular al 5%
100 µL de GR + 1900 µL de SF

1 gota de
suspensión
1 gota del Rvo de
de GR al 5%
Coombs
(SAGH) rpm
LEER
1´ a 1000rpm
 A) PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

 Resultado positivo: presencia de

aglutinación. Se debe indicar la intensidad
de la positividad: +, ++, +++, ++++.

 Resultadonegativo: dejar a temperatura

ambiente 10 minutos, centrifugar y leer.
 APLICACIÓN DE PCD

• Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal

(EHFN)
• Reacción Hemolítica Postransfusional
• Anemia Hemolítica Autoinmune (AHAI)
• Anemia Hemolítica Inducida por
Fármacos
 A) PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

EHFN
Reactivo de
Coombs

MUESTRA: GR del
bebé lavados (2-5%)
Sensibilización de los
GR in vivo con Acs
maternos
 B) PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA

Detecta los Acs y/ó componentes del Complemento

presentes en el suero del paciente, los cuales serán
fijados in vitro a los hematíes.

MUESTRA:
REACTIVOS:
• GR O Rh+ ó Paneles Selectores
• Reactivo de Coombs (SAGH)
• SF ó LISS (solución salina de baja fuerza
iónica)
 B) PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA

Ag - Ac
100 µL SUERO Incubar 30’
+ a 37°C
50 µL GR O al 5% en SF Lavar 3 veces
con SF
100 µL SUERO Incubar 15’
+ a 37°C
50 µL GR al 5% en LISS
1 gota del
Rvo de
rpm Coombs
LEER
 B) PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA

Si la reacción es positiva se debe ser titular

Diluciones: 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64

 APLICACIÓN DE PCI
• Pruebas de compatibilidad
• Detección de anticuerpos irregulares en sueros de
embarazadas, de donantes de sangre y de
pacientes con anemias hemoliticas
• Tipificación de antígenos en el GR
 Glóbulos rojos autoaglutinados o
poliaglutinados
 Partículas, contaminantes, precipitados o
fibrina presentes en tubos que producen
agregación de GR
 Sobrecentrifugación
 Lavado inadecuado
 Prueba interrumpida o diferida
 Interpretación errónea de pruebas positivas débiles
 Omitir el agregado de SAGH
 Pérdida de actividad de SAGH por mala
conservación
 Centrifugación inadecuada
 Concentración de GR alta o baja
 Concentración alta de IgG en suero en estudio
 pH de solución fisiológica 6.0 disminuye
sensibilidad
MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN!!!