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INFORME DE LABORATORIO N°12
TURNO TEORÍA: TURNO DE LABORATORIO: APELLIDOS Y NOMBRES: CUI:
EXTRACCION DEL ADN DE FRUTAS
I. OBJETIVOS: Extraer y observar el ADN de frutas. Observar la estructura fibrilar del ADN. Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades químico físicas del ADN. II. FUNDAMENTOS TEÓRICO: Cuando hablamos del ADN, recordamos que es el almacén de la información genética y la molécula encargada de transmitirla a la descendencia. Está formado por unidades llamadas nucleótidos cada una de estas poseen ácido fosfórico y un azúcar de cinco carbonos llamada pentosa y una base nitrogenada. El ácido fosfórico forma al grupo fosfato que se une a las bases nitrogenadas que son de cuatro clases como: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T). El ARN es la molécula que extrae la información del ADN y dirige la síntesis de proteínas a partir de esta información. La síntesis de proteínas consta de dos etapas: la transcripción de la molécula del ADN en ARN y la traducción del ARN en proteínas. Mediante este proceso se fabrican las características y funciones dentro del organismo. La extracción de ADN desde una célula requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar se debe romper la pared celular (en caso de que la presenten), luego la membrana plasmática, para finalmente acceder al núcleo celular. A continuación, también se debe fragmentar la membrana nuclear para liberar al ADN, protegerlo de enzimas que puedan degradarlo, y aislarlo por precipitación en alcohol. En nuestro trabajo práctico de laboratorio, la extracción de ADN comenzará por lisar mecánicamente la pared de las células vegetales mediante el uso de una licuadora, posteriormente se agregará un detergente que romperá a la membrana celular y nuclear, liberando el contenido molecular hacia el agua, en ese momento, el agua tendrá disuelto ADN y todo un surtido de restos moleculares tales como: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. El agregado de los iones salinos (NaCl) será atraído por las cargas negativas del ADN, permitiendo una mejor disolución de esta macromolécula. Las proteínas asociadas al ADN, como también aquellas que puedan degradarlo serán destruidas por proteasas presentes en el jugo de frutas. Sólo queda extraer el ADN de esa mezcla acuosa para lo cual se utilizará alcohol. La extracción de ADN es mejor apreciada si todo el proceso se realiza en frío: utilizando agua fría, con temperaturas ideales a 4-8 ºC y colocando en un recipiente con hielo tanto los recipientes como las disoluciones utilizadas.
III. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
A. Extracción del ADN de fresas: 1. Preparar una disolución de rompimiento de células o lisis, mezclando medio vaso de agua fría, una cucharadita rasa de sal, tres cucharaditas rasas de bicarbonato sódico y dos cucharaditas de detergente lavavajillas. Mantenerlo frío hasta su utilización. 2. Triturar la muestra de origen papaya, tomate, manzana, plátano, fresa, etc., con un mortero y un poco de agua fría. 3. Mezclar un volumen del vegetal batido con dos volúmenes de la disolución de lisis. 4. Agitar vigorosamente durante unos dos minutos y dejar reposar en frío hasta que desaparezca más de la mitad de la espuma. 5. Filtrar la mezcla por un colador para retener los restos tisulares y obtener el denominado “caldo molecular”, en el que se encuentran los restos celulares de pequeño tamaño y las biomoléculas como el ADN. 6. En un vaso de precipitados, luego trasvasamos en un tubo de ensayo, añadir un volumen de caldo molecular y dos volúmenes de alcohol frío (ideal a -20 ºC), dejando resbalar lentamente este por la cara interna del recipiente para evitar que se mezclen. 7. Observar cómo se forman unos filamentos blancos y salinos (en los que se encuentra el ADN) en la interfase agua-alcohol. 8. Recolectar el ADN con un palillo y observar.
IV. MATERIALES Y EQUIPOS:
Muestras: Muestra biológica (papaya, tomate, manzana, plátano, fresa, etc.) Materiales: Papel filtro o gasa. Vasos de precipitados, Tubos de ensayo, Mortero, Colador, Pipeta, Probeta 100 ml Cooler o caja de tecnopor. Congelantes o hielo.
V. REACTIVOS: Ácido acético concentrado. Agua destilada. Detergente líquido Cloruro de sodio. Bicarbonato sódico. Alcohol al 96%
VI. REPORTE DE RESULTADOS:
DESCRIBA LAS REACCIONES QUÍMICAS INVOLUCRADAS EN CADA
UNO DE LOS ENSAYOS.
...
VII. CONCLUSIONES: VIII. RECOMENDACIONES: IX. CUESTIONARIO: 1. ¿Por qué es importante mantener una temperatura fría en este proceso? 2. Explica cada una de las reacciones químicas utilizadas en este procedimiento. 3. ¿Por qué las frutas elegidas contienen cierta cantidad de ADN? 4. ¿De qué fruta se extrajo mayor ADN? ¿Cuánta fue la diferencia entre las frutas? 5. ¿Por qué crees que esta fruta tuvo mayor ADN? 6. ¿Cuáles son algunas variables controladas? 2. ¿Cuál es la variable manipulada? 3. ¿Cuál es la variable de respuesta? 7. ¿Cuáles son algunas variables de control? 8. ¿Cuál es la variable manipulada? 9. ¿Cuál es la variable de respuesta?
