ALBENDAZOL
ALBENDAZOL
ALBENDAZOL
UNAN – LEÓN
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE FARMACIA
AUTOR:
- Br. Eliu Rafael Machado Hernández.
TUTOR:
- M.Sc. César Antonio Peralta Mayorga.
AGRADECIMIENTOS.
Primero dar gracias a Dios por haber sido su voluntad culminar con este trabajo una
importante etapa en mi vida de formación profesional y por haberme brindado salud,
conocimientos y entendimiento a lo largo de mis 5 años de carrera.
También agradecerle por haber mantenido a mis padres y mis hermanos con vida y que
pudieran ver en mí el fruto del esfuerzo y dedicación mutua ya que gracias al apoyo,
motivación, educación y ejemplo que me brindaron hasta el día de hoy he podido terminar
esta meta de manera satisfactoria.
Agradecer a cada uno de los docentes que tuvo la paciencia y dedicación de transmitirme sus
conocimientos y experiencias en especial aquellos que me dejaron más que una lección de
un componente, me dejaron lecciones de vida con lo cual se convirtieron ejemplos a seguir.
De igual manera a mis compañeros de clases y en especial a los que se llegaron a convertir
en mis amigos con los cuales compartí durante 5 años momentos de estrés y momentos risas
en las aulas de clases y en los pasillos de la facultad ya que ellos son la familia que uno
escoge.
Por último pero no menos importante a mi tutor M.Sc. César Peralta por haber aceptado
trabajar conmigo y siempre haberme brindado su apoyo y conocimientos en esta experiencia
donde hemos aprendido juntos.
ÍNDICE DE CONTENIDO.
1. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................... 1
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................................... 4
3. OBJETIVOS .................................................................................................................. 5
3.1. OBJETIVO GENERAL ....................................................................................... 5
3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS............................................................................... 5
4. FUNDAMENTO TEÓRICO ........................................................................................ 6
ALBENDAZOL
4.1. PROPIEDADES FISICO-QUÍMICAS ................................................................ 6
4.2. PROPIEDADES FARMACOLÓGICAS ............................................................ 8
VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS
4.3. ¿QUÉ ES VALIDACIÓN? ................................................................................ 13
4.4. PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS QUE SON OBJETOS DE VALIDACIÓN
............................................................................................................................ 17
4.5. PASOS PARA LA VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO ............. 33
GENERALIDADES DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA
4.6. CONCEPTOS GENERALES DE ESPECTROFOTOMETRÍA ....................... 37
4.7. LEY DE BEER .................................................................................................. 41
4.8. INSTRUMENTACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA .................................... 46
5. HIPÓTESIS .................................................................................................................. 50
6. DISEÑO METODOLÓGICO .................................................................................... 51
6.1. TIPO DE ESTUDIO .......................................................................................... 51
6.2. ALCANCE ......................................................................................................... 51
6.3. ÁREA DE ESTUDIO ........................................................................................ 51
6.4. POBLACIÓN DE ESTUDIO ............................................................................ 51
6.5. MUESTRA ........................................................................................................ 51
6.6. UNIDAD DE ANÁLISIS .................................................................................. 52
6.7. PLAN DE ANÁLISIS ........................................................................................ 52
6.8. VARIABLES DE ESTUDIO ............................................................................. 52
6.9. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES ................................................. 53
6.10. EQUIPO E INSTRUMENTAL ANALÍTICO................................................... 55
6.11. REACTIVOS ..................................................................................................... 57
ÍNDICE DE TABLAS.
ÍNDICE DE FIGURAS.
1. INTRODUCCIÓN.
Con el presente trabajo monográfico se logró validar la metodología analítica propuesta para
la cuantificación del producto de albendazol 200 mg/5 mL en suspensión oral fabricado en
el Laboratorio de producción de medicamentos Mauricio Díaz Müller de la UNAN – León
por la técnica de espectrofotometría UV/Visble, en el cual se describe el método analítico
para la evaluación de los parámetros de desempeños establecidos en el Reglamento Técnico
Centroamericano RTCA 11.03.39:06 Productos farmacéuticos. Validación de métodos
analíticos para la evaluación de la calidad de los medicamentos y la Farmacopea de los
Estados Unidos de América USP36/NF31 para procedimientos analíticos de categoría I
(Ensayos de cuantificación del (los) principio(os) activo(os)), igualmente la evaluación de
parámetros adicionales como son Robustez, Idoneidad y Estabilidad de las soluciones. Para
la evaluación de los parámetros de desempeño de dicho método analítico se utilizaron
muestras de placebo de albendazol suspensión oral producidas en el Laboratorio de
producción de medicamentos Mauricio Díaz Müller de la UNAN – León cargadas con
estándar de trabajo.
3. OBJETIVOS.
4. FUNDAMENTO TEÓRICO.
ALBENDAZOL
H
N
NH CH3
H3C
S N O
O
metil-5-(propiltio)-2-benzimidazolcarbamato
- FÓRMULA MOLECULAR.
C12H15N3O2S (23)
- PESO MOLECULAR.
- PUNTO DE FUSIÓN.
- SOLUBILIDAD
Insoluble en agua y etanol; soluble en dimetilsulfóxido, ácido acético, ácidos y bases fuertes.
- PORCENTAJE DE RECUPERADO
- IDENTIFICACIÓN
el frente de la fase móvil, dejar que el disolvente se evapore y examinar la placa bajo una luz
UV de longitud de onda corta.
- VALORACIÓN
La modificación en las posiciones 2 y 5 del sistema anular benzimidazol dio origen a nuevas
drogas como son el mebendazol y el albendazol demostrando un mayor espectro de acción
contra helmintos, mayor eficacia y un menor grado de toxicidad. (2)
4.2.1. FARMACODINÁMIA.
4.2.2. FARMACOCINÉTICA.
Después de su administración oral, se absorbe en forma irregular (en mayor grado con una
comida grasosa) y luego experimenta con rapidez metabolismo de primer paso en el hígado
para convertirse en el metabolito activo sulfóxido de albendazol. Alcanza concentraciones
plasmáticas máximas variables unas 3 h después de una dosis oral de 450 mg y su semivida
plasmática es de 8 a 12 h. El sulfóxido se une sobre todo a proteína, se distribuye bien en los
tejidos y penetra en la bilis, líquido cefalorraquídeo y quistes hidatídicos. Los metabolitos
del albendazol se excretan en la orina. (11)
4.2.3. INDICACIONES.
El albendazol es el fármaco más indicado para tratar el quiste hidatídico por Echinococcus
granulosus. Con dicho fármaco se obtiene un índice pequeño de curación si se usa solo, pero
Es el único fármaco obtenible con actividad útil contra la equinococosis alveolar causada por
Echinococcus multilocularis pero es parasitostático y no parasiticida y a veces se necesita el
tratamiento permanente para erradicar la infección, con intervención quirúrgica o sin ella. (11)
- Neurocisticercosis.
- Otras infecciones.
El albendazol ocasiona pocos efectos adversos cuando se utiliza por corto tiempo contra
helmintosis de las vías gastrointestinales, incluso en quienes tienen un número importante de
vermes. En cerca del 1% de personas tratadas se observan síntomas leves y transitorios de
En el empleo a largo plazo las reacciones adversas más frecuentes son molestias
(11)
abdominales, cefalea, fiebre, fatiga, alopecia, pancitopenia y disfunción hepática que
suele manifestarse por aumento de las concentraciones de transaminasas séricas; en
ocasiones excepcionales aparece ictericia, pero las actividades enzimáticas se normalizan una
vez terminado el tratamiento. (2)
4.2.5. INTERACCIONES.
4.2.7. PRECAUCIONES.
Dependiendo del campo de aplicación de una validación se pueden tener diferente conceptos
sobre ella, un concepto generalizado que sobre validación es la obtención de pruebas con
arreglo a las Normas de Correcta Fabricación, de que cualquier procedimiento, proceso,
equipo, material, actividad o sistema produce en realidad el resultado previsto. (1)
Los términos "validación, cualificación y calibración", son conceptos que suelen emplearse
de forma indistinta, sin embargo conceptualmente son diferentes. (1)
- Validar: verificar documentalmente que un método o proceso hace lo que tiene que
hacer. (1)
- Cualificar: dotar o verificar las cualidades o características inherentes a un aparato
(máquina. equipo, instrumento, etc.). (1)
- Calibración: es una parte de la cualificación. (1)
Por consiguiente se puede decir que los métodos deben ser validados y los aparatos deben,
ser cualificados. (1)
- Demostrar que los métodos son adecuados a los análisis propuestos en las condiciones
descritas. La validación es la herramienta que permite obtener las pruebas
documentales al respecto.
- Trabajar con métodos que ofrezcan confianza y seguridad en los resultados, lo cual a
su vez minimizará el número de fallos y repeticiones permitiendo un importante
ahorro del costo.
Un método debe ser validado cuando es necesario demostrar que sus características de
desempeño son adecuadas para el uso previsto. Los métodos que serán validados son:
- Métodos no normalizados.
- Métodos diseñados/desarrollados por el laboratorio.
- Métodos normalizados usados fuera de su ámbito de aplicación.
La validación debe ser tan amplia como sea necesaria para cumplir con los requisitos en
relación con el uso dado o la aplicación. El alcance de la validación dependerá de la
aplicación, la naturaleza de los cambios realizados y de las circunstancias en que el método
se va a utilizar.
- Ensayos de identificación.
- Ensayos para la determinación del analito de interés de una materia prima o de una
especialidad farmacéutica.
- Ensayos para la determinación de características farmacotécnicas inherentes
- Ensayos de límite de impurezas y de cuantificación de impurezas
- Ensayos para la determinación de analitos en fluidos biológicos y en productos
naturales.
- Ensayos microbiológicos.
Categoría I: Pruebas cuantitativas del contenido del (los) principio(s) activo(s), constituyen
procedimientos químicos o microbiológicos que miden el (los) analito(s) presente(s) en una
muestra determinada.
Categoría II: Pruebas para la determinación del contenido de impurezas o de valores límites
para el control de impurezas. Pueden ser pruebas cuantitativas o una prueba cualitativa para
determinar si la impureza está presente en la muestra por encima o por debajo de un valor
límite especificado. Cualquiera de los dos pretende reflejar con exactitud las características
de pureza de la muestra. Los parámetros de validación requeridos por una prueba cuantitativa
son diferentes a los de una prueba cualitativa de cumplimiento de límite.
Categoría IV: Pruebas de identificación. Aquellas que se realizan para asegurar la identidad
de un analito en una muestra. Esto normalmente se realiza por comparación de una propiedad
de la muestra, contra la de un estándar de referencia, por ejemplo espectros, comportamiento
cromatográfico, reactividad química y pruebas microcristalinas.
Prueba de Prueba de
Principio(s) Fisicoquímico
límite límite Identificación
Parámetros de activo(s) de desempeño
cuantitativa cualitativa
desempeños
Exactitud SI SI * * NO
Precisión SI SI NO SI NO
Especificidad SI SI SI * SI
Límite de detección NO NO SI * NO
Límite de cuantificación NO SI NO * NO
Linealidad SI SI NO * NO
Rango SI SI * * NO
* Puede requerirse dependiendo de la naturaleza del ensayo. (16)(23)
4.4.1.1.Exactitud.
Definición (1)
Determinación (23)
Los documentos ICH recomiendan que se evalúe la exactitud utilizando un mínimo de nueve
determinaciones sobre un mínimo de tres niveles de concentración, cubriendo el intervalo
especificado (es decir, tres concentraciones y tres determinaciones repetidas de cada
concentración).
4.4.1.2.Precisión. (1)
Definición
El objetivo del estudio de la precisión es conocer la variabilidad del método de ensayo. Esta
variabilidad es debida a errores aleatorios inherentes a todo método de ensayo. Como
consecuencia de la existencia de estos errores, los análisis efectuados sobre muestras
idénticas, en las mismas circunstancias, no conducen generalmente a resultados idénticos.
Los factores susceptibles de influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser siempre
controlados (analista, equipo instrumental, reactivos, tiempo, etc.) de aquí la importancia del
estudio de la precisión.
En la siguiente tabla se resumen los factores que pueden o no pueden variar en el estudio de
la repetibilidad, precisión intermedia y la reproducibilidad.
Tabla 2. Factores que pueden o no pueden variar en el estudio de la repetibilidad, precisión intermedia
y la reproducibilidad.
Precisión
Repetibilidad Reproducibilidad
intermedia
Instrumento Igual diferente diferente
Día Igual diferente diferente
Analista Igual diferente diferente
Otros factores (reactivos, condiciones
Igual diferente diferente
ambientales, etc.)
Laboratorio Igual igual diferente
Determinación
- Repetibilidad
Uno de los factores que más pueden influir en la repetibilidad del método de análisis es la
concentración del analito, ya que la desviación estándar de las respuestas obtenidas aumenta
al disminuir la concentración del analito.
- Precisión intermedia
Para estudiar los factores de una manera aleatoria se recomienda un estudio matricial y para
cada combinación de éstos, las muestras deben ser preparadas independientemente como
mínimo por triplicado.
4.4.1.3.Especificidad. (1)
Definición
Capacidad de un método analítico para medir y/o identificar simultánea o separadamente los
analitos de interés, de forma inequívoca, en presencia de otras sustancias químicas que
puedan estar presentes en la muestra.
Determinación
selectivo posible, en el caso de presencia de otros componentes estos deben de tener escasa
influencia en los resultados. Se debe tener la máxima información sobre impurezas,
potenciales productos de degradación y posible interferencia de excipientes presentes en la
muestra.
- Adición de interferencias
Se aplica a aquellos analitos para los que se tienen identificadas las posibles interferencias y
éstas se encuentran disponibles de forma aislada. En estos casos se puede comprobar la
selectividad comparando los resultados del análisis de muestras con y sin analito en presencia
o ausencia de dichas interferencias. Se evaluar a que nivel se producen y si es preciso
modificar el método o añadir alguna técnica complementaria.
Para una forma farmacéutica y una materia prima los grupos de muestras que se preparan
normalmente serían los siguientes:
Tabla 4. Grupos de muestras que normalmente se preparan las formas farmacéuticas y materia prima.
Di - Ds
% de discrepancia = * 100
Ds
Donde:
4.4.1.4.Linealidad y Rango.
Definición (1)
La linealidad es la capacidad del método para proporcionar resultados que son directamente
(o por medio de transformaciones matemáticas) proporcionales a la concentración del analito
en la muestra dentro de un rango establecido. Siempre que sea posible se buscará una
respuesta de tipo lineal que facilitará su trazado, interpelación e interpretación.
El rango se define como el intervalo entre la concentración superior e inferior de analito para
el cual se ha demostrado la correcta precisión, exactitud y linealidad del método descrito.
Aunque el proceso lógico consistiría en evaluar cuáles son los límites de concentración en
los que el método analítico pierde su linealidad, normalmente se toma como punto de partida
un intervalo de concentraciones ya establecido de acuerdo con la experiencia, el
conocimiento analítico de la técnica empleada y principalmente en función de las
especificaciones.
Determinación (23)
4.4.1.5.Robustez. (1)
Definición
mismas muestras bajo una variedad de condiciones tales como diferentes laboratorios,
diferentes analistas, diferentes instrumentos, lotes de reactivos, días, tiempos, diferentes
temperaturas, etc. Es decir, se sigue el método analítico dentro de los parámetros
especificados en él, pero introduciendo en las condiciones experimentales las variaciones
habituales de laboratorio a laboratorio. Da una idea de la influencia que tienen las variables
ambientales y operacionales del método en los resultados, por lo que podría asimilarse al
término reproducibilidad.
Determinación
Todos los métodos, sea cual sea la técnica empelada, son susceptibles de ser sometidos a un
estudio de robustez, algunos pueden tener muchos parámetros sobre los que actuar y otros
menos, además estos no tiene por qué ser solo factores relacionados con la medida final, sino
que pueden ser de cualquier etapa del procedimiento analítico, como por ejemplo la
preparación de la muestra. Por esto, la primera etapa del estudio es precisamente analizar
todo el método y definir qué factores son los que se esperan que influyan más en el resultado.
Antes de definir los factores de variación, hay que establecer donde se quieren estudiar su
influencia. Dicho de otra forma, que parámetros se van a medir en cada ensayo.
varios parámetros nunca implica la realización de más ensayos, si no que puede hacer a partir
de los mismos.
Los factores a evaluar en cualquier método de análisis puede ser cuantitativos (influencia del
valor de pH del solvente, valor de la temperatura ambiental, en algunos casos influencia de
la luz, etc.) como cualitativos (fabricante de la celda de validación, fabricante de un
determinado reactivo o cristalería, etc.).
- Factores que pueden variar para la técnica analítica UV-Vis para determinar la
robustez:
La celda de validación.
El equipo UV-Vis.
El solvente (proporción de mezcla de solvente, concentración del solvente, pH
del solvente, ect.).
La longitud de onda de máxima absorción del analito.
Es por eso que la robustez es un parámetro relativo en los cambios de las condiciones
internas, sin embargo, la resistencia (flexibilidad) es uno de los parámetros que describe la
utilidad de un determinado método de análisis en diferentes condiciones, puede ser estimado
a partir de la reproducibilidad.
4.4.1.6.Idoneidad.
Definición (1)
Determinación (1)
Este test no so1o debe circunscribirse al ámbito de la determinación final sino que puede
diseñarse con el fin de comprobar la idoneidad de cualquier etapa del procedimiento, como
por ejemplo la preparación de la muestra.
Los ensayos de idoneidad del sistema que se establezcan vendrán dados por el conocimiento
adquirido del método y la viabilidad de su empleo en rutina debiendo corresponderse con los
valores mínimos para los que los parámetros estudiados permanecen dentro de las
especificaciones establecidas.
Estos ensayos no sólo demuestran que el sistema se encuentra en perfectas condiciones para
realizar el análisis sino que también permiten establecer el criterio por el que modificar las
condiciones analíticas descritas en el procedimiento con el fin de alcanzar la idoneidad.
Los parámetros para determinar la idoneidad del sistema en ensayos de cuantificación por
métodos espectrofotométricos se pueden agrupar en 2 categorías:
Se evalúa mediante el cálculo del coeficiente de variación de los resultados obtenidos tras el
análisis de una serie de replicados de una muestra. La USP 24 establece como criterio un
coeficiente de variación igual o inferior al 2% en las lecturas de 5 replicados (o realizarlo
sobre 6 replicados si el requerimiento es superior al 2%). (1)
- Parámetros espectrofotométricos
Precisión fotométrica: es la medida de la dispersión de una serie de mediciones
(4)
de absorbancia o transmitancia alrededor de la media. Se puede determinar
leyendo una solución estándar de 60 mg de dicromato de potasio en 1000 mL
de ácido sulfúrico 0.005 M a longitudes de onda de 235 nm, 257 nm, 313 nm y
350 nm y calcular el coeficiente de variación que debe ser menor que 1.0%. (6)
Luz dispersa: luz detectada a cualquier longitud de onda que cae fuera de la
anchura de banda de la longitud de onda seleccionada. (19) Se puede comprobar
la luz dispersa determinando la absorbancia de una solución estándar de cloruro
de potasio de 12 g/L en una celda de 1 cm a 200 nm siendo mayor que 2,0
cuando se compara con el agua como líquido de compensación. (6)
R= Aλmáx/Aλmin
Tabla 7. Criterio de aceptación para la resolución.
Preparación de reactivos
Preparación de estándares
Preparación de la muestra
Procedimiento
Cálculos
La radiación electromagnética puede describirse como una onda electromagnética que posee
las siguientes características:
- Amplitud: es una cantidad vectorial con la que se mide la fuerza del campo eléctrico
o magnético en un punto máximo de la onda.
- Periodo: es el tiempo en segundos necesarios para que máximos o mínimos sucesivos
crucen un punto en el espacio.
La absorción de radiación ultravioleta por parte de las moléculas ocurre en una o más bandas
de absorción electrónicas, cada una de las cuales se compone de muchas líneas muy juntas
pero discretas. Cada línea surge de la transición de un electrón del estado fundamental a uno
de los muchos estados de energía vibratorio y rotario relacionados con cada estado de energía
electrónica excitado.
directa en la formación de enlace o que se localizan en torno a átomos como los de oxígeno,
azufre, nitrógeno y halógenos.
La longitud de onda a la que absorbe una molécula orgánica depende de la fortaleza de los
enlaces de sus electrones. Los electrones compartidos en los enlaces simples carbono-
carbono o carbono-hidrógeno están sujetos con tal firmeza que su excitación requiere
energías que corresponden a la longitud de onda de la región ultravioleta al vacío inferior a
180 nm.
Los electrones de enlaces dobles y triples de moléculas orgánicas se sujetan con menos
fuerza, por tanto, se excitan mediante radiación con más facilidad. Los grupos funcionales
orgánicos no saturados que absorben en las regiones ultravioleta se llaman cromóforos, como
por ejemplo alquenos, alquinos, carbonilos, carboxilos, amino, nitroso, nitrato, aromáticos,
etc.
Los compuestos orgánicos saturados que contiene heteroátomos, como el oxígeno, nitrógeno,
azufre o halógenos poseen electrones no compartidos que se pueden excitar mediante
radiación en el intervalo de 170 a 250 nm.
Los factores por los cuales puede variar la absorción de luz en un analito son:
Es importante que estos parámetros sean los mismos para las soluciones estándar y la
solución de muestra. Si no es así, pueden producirse errores significativos en las
determinaciones cuantitativas.
Cuando es imposible producir soluciones estándar dentro del mismo disolvente y pH como
en la solución de muestra, la calibración es ligeramente más complicada. Esto se debe a que
la absortividad de la sustancia en la solución patrón puede ser diferente de la de la solución
de muestra. En tales situaciones debe utilizarse una adición estándar. En una adición estándar
se añade una cantidad conocida de una sustancia de referencia química del analito a la
solución de muestra y la absorbancia se mide tanto antes como después de la adición de la
sustancia de referencia. Entonces, la concentración de analito se calcula de acuerdo con la
ley de Beer. Con una adición estándar, la calibración se realiza directamente en la solución
de muestra para evitar cualquier variación experimental entre las soluciones muestras y las
soluciones estándar de disolvente, el pH y la posible presencia de otras sustancias.
del haz se reduce de Po a P (donde Po es la intensidad del haz de luz incidente en la muestra
y P es la intensidad del haz de luz incidente transmitida por la muestra).
T = P⁄Po
Ecuación de la transmitancia.
- Absorbancia
A = ɛ𝑏𝑐
4.7.2.2.Desviaciones químicas.
4.7.2.3.Desviaciones instrumentales.
- Radiación policromática
La ley de Beer se aplica en sentido estricto sólo cuando se realizan medidas con radiación
monocromática. En la práctica se utilizan las fuentes policromáticas, con distribución
continua de longitudes de onda, junto con una rendija, o un filtro para aislar una banda casi
simétrica de longitudes de onda en torno a la longitud que se requiere.
- Luz parásita
4.7.2.4.Celdas distintas.
Si las celdas que contienen las soluciones del analito y del blanco no son de igual longitud
de trayecto ni equivalentes en sus características ópticas, ocurre un intersección en la curva
de calibración, éste error puede evitarse empleando celdas iguales o con un procedimiento
de progresión lineal para calcular la pendiente e intersección de la curva de calibración. En
la mayoría de los casos, esta última es la mejor estrategia, ya que también puede presentarse
este tipo de error si la solución blanco no compensa por completo las interferencias. Otra
forma de evitar el problema de celdas ópticamente distintas es instrumentos de un solo haz
consiste en emplear sólo una celda y mantenerla en la misma posición para las medidas del
blanco y el analito. Después de obtener la lectura del blanco, se vacía la celda por aspiración,
se lava y se llena con la solución del analito.
Para la región ultravioleta, en general se usa como fuente un tubo de descarga de hidrógeno
o de deuterio a baja presión. Los dos se pueden usar desde 185 hasta 375 nm, pero la fuente
de deuterio tiene unas tres veces la salida espectral de la de hidrógeno. Las fuentes de
ultravioleta deben tener una ventana de cuarzo, porque el vidrio no es transparente a esa
radiación. Con frecuencia tienen enfriamiento por agua para disipar el calor generado.
4.8.2. MONOCROMADOR.
Un monocromador está formado principalmente por lentes o espejos que enfocan la radiación
por rendijas de entrada y salida que restringen radiación indeseable y ayudan a controlar la
pureza espectral que emite el monocromador, y por un medio dispersante para “separar” las
longitudes de onda de la radiación policromática procedente de la fuente. Hay dos tipos
básicos de elementos dispersores: el prisma y la rejilla de difracción.
- Prismas
- Rejillas de difracción
Se componen de una gran cantidad de líneas (ranuras) paralelas trazadas en una superficie
muy pulida, como de aluminio; para las regiones ultravioleta y visible son de 15000 a 30000
líneas por pulgada. Las ranuras funcionan como centros de dispersión para los rayos que
llegan a la rejilla. El resultado es una dispersión igual para todas las longitudes de onda, con
determinado orden; esto es, la dispersión es lineal. El poder de resolución depende de la
cantidad de ranuras trazadas, pero en general el poder de resolución de las rejillas es mejor
que el de los prismas, y las rejillas se pueden usar en todas las regiones del espectro. Se
La celda que contiene a la muestra (en general una solución), naturalmente debe ser
transparente en la región de longitudes de onda que se esté midiendo. El material más
utilizado para celda que se van a utilizar en la región ultravioleta es el cuarzo. Las celdas que
usan los espectrómetros en visible y ultravioleta suelen ser prismas rectangulares huecos de
1 cm de ancho entre sus paredes paralelas internas, aunque pueden usarse celdas de diversas
longitudes de paso y volúmenes.
- Fototubo
Un fototubo o fotocelda es de uso común en las regiones ultravioleta y visible. Éste consiste
de un cátodo fotoemisor y un ánodo. Se aplica un alto voltaje entre ánodo y cátodo. Cuando
un fotón entra por la ventana del tubo y llega al cátodo se emite un electrón que es atraído
hacia el ánodo, haciendo que pase una corriente que se puede amplificar y medir. La respuesta
del material fotoemisor depende de la longitud de onda, y se dispone de diversos fototubos
para las diferentes regiones del espectro.
- Fotomultiplicador
la superficie del dinodo causa la liberación de muchos electrones secundarios, que a su vez
son acelerados hacia el siguiente electrodo, donde cada electrón secundario libera más
electrones, y así sucesivamente, hasta alcanzar unas10 etapas de amplificación. Por último,
los electrones se colectan en el ánodo. A su vez, la salida final del tubo fotomultiplicador se
puede amplificar electrónicamente. Los distintos tubos fotomultiplicadores tienen diferentes
características de respuesta que dependen de la longitud de la onda.
- Serie de diodos
5. HIPÓTESIS.
6. DISEÑO METODOLÓGICO.
Experimental prospectivo.
6.2. ALCANCE.
6.5. MUESTRA.
Se requirieron 26 frascos de placebo de albendazol suspensión oral lote 100517 de los cuales
13 fueron destinados como muestras de análisis y 13 fueron muestras retenidas (contra
muestras). (15)
- Especificidad
- Exactitud
- Precisión
- Linealidad y Rango
- Robustez
- Idoneidad
- Estabilidad de las soluciones
Tabla 9. Equipos.
EQUIPOS DESCRIPCIÓN
Espectrofotómetro UV-Vis Marca: Varian Inc.
Modelo: Cary 50
Balanza analítica Marca: A&D
Modelo: HM-120
Campana de vacío Marca: Labconco
Modelo: -
Horno Marca: Fisher Scientific
Modelo: Isotemp Oven
Desecador Marca: -
Modelo: -
Agitador magnético y magneto Marca: SYBRON
Modelo: 7200
Refrigeradora Marca: Oster
6.11. REACTIVOS.
REACTIVOS
NOMBRE FÓRMULA QUÍMICA GRADO
Ácido clorhídrico HCl 12.1 N Reactivo
Ácido perclórico HClO4 Reactivo
Ácido acético glacial CH3COOH Reactivo
Anhidro acético C4H6O3 Reactivo
Ácido sulfúrico H2SO4 Reactivo
Dicromato de potasio K2Cr2O7 Reactivo
Azul de oracet B C21H16N2O2 + C20H14N2O2 Reactivo
Cristal violeta C25H30ClN3 Reactivo
Biftalato de potasio C8H5KO4 Reactivo
Cloruro de potasio KCl Estándar
Dicromato de potasio K2Cr2O7 Estándar
Tolueno en hexano 0.002% C6H5CH3 + C5H12O Estándar
Perclorato de holmio Ho(ClO4)3 Estándar
Agua H2O Destilada
Albendazol C12H15N3O2S Potencia determinada: 100.6%
6.12. MATERIALES.
g de biftalato de potasio
N=
(0.20423)(mL gastado de ácido perclórico corregido por el blanco)
6.16.2. PROCEDIMIENTO.
La suspensión oral de albendazol contiene no menos del 90.0 % y no más del 110.0 % de la
cantidad declarada de albendazol.
6.17.1. IDONEIDAD.
Especificaciones
6.17.2. ESPECIFICIDAD.
(Di - Ds)
%D= * 100
Ds
Donde:
Especificaciones
6.17.3. EXACTITUD.
Solución 1
- Pesar con exactitud 24 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.
Solución 2
- Pesar con exactitud 40 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.
Solución 3
- Pesar con exactitud 56 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.
- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 1 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 12.8 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 2 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 16 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 3 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 19.2 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
Especificación
6.17.4. PRECISIÓN.
Especificaciones
Especificaciones
Especificaciones
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
Especificaciones
Parámetros Especificación
Coeficiente de variación < 2.0%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
Ecuación de regresión lineal y = bx + a.
Significación estadística del intercepto (a) t exp < t tab, el intervalo de confianza debe de
incluir el 0.
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > t tab, el intervalo de confianza no debe
de incluir el 0.
Análisis de varianza F1 exp > F1 tab, demuestra que la pendiente es
distinta de 0.
F2 exp < F2 tab, demuestra que existe linealidad
entre los resultados.
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de
(Test de Cochran) las concentraciones son homogéneas.
Análisis residuales (gráfico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio
y no reflejar ninguna tendencia.
Especificaciones
Parámetros Especificación
Coeficiente de variación < 2.0%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
Ecuación de regresión lineal y = bx + a.
Significación estadística del intercepto (a) t exp < t tab, el intervalo de confianza debe de
incluir el 0.
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > t tab, el intervalo de confianza no debe
de incluir el 0.
Análisis de varianza F1 exp > F1 tab, demuestra que la pendiente es
distinta 0.
F2 exp < F2 tab, demuestra que existe linealidad
entre los resultados.
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de
(Test de Cochran) las concentraciones son homogéneas.
Análisis residuales (gráfico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio
y no reflejar ninguna tendencia.
6.17.6. ROBUSTEZ.
Especificaciones
Especificaciones
7. RESULTADOS.
Elaborado por:
Fecha/firma: ___/___/___ _____________________
Gerencia de producción
Revisado por:
Fecha/firma: ___/___/___ _____________________
Regencia
Aprobado por:
Fecha/firma: ___/___/___ _____________________
Gerencia de control de calidad
INFORMACIÓN GENERAL
FECHA INICIAL DE VALIDACIÓN: Junio 2017
FECHA FINAL DE VALIDACIÓN: Diciembre 2017
VIGENTE DESDE: Enero 2018
REVISIÓN Nº: 1
COPIA Nº: 1
TIPO DE MÉTODO
MÉTODO NORMALIZADO:
MÉTODO NO NORMALIZADO:
MÉTODO INTERNO: X
CATEGORÍA DE VALIDACIÓN A EVALUAR
CATEGORIA I
Pruebas cuantitativas: Físico-Químicas X Microbiológicas
CATEGORÍA II
Análisis de impurezas: Cualitativas Cuantitativas
CATEGORÍA III
Pruebas de desempeño: Disolución Uniformidad de contenido
CATEGORIA IV
Pruebas de identificación
OBJETIVO
Comprobar que el método analítico propuesto para la cuantificación de albendazol 200 mg/5
mL suspensión oral permite obtener de forma reproducibles resultados que cumplan con las
especificaciones establecidas.
ALCANCE
JUSTIFICACIÓN
RESPONSABILIDAD
- Gerencia de producción
- Departamento de control de calidad
- Regencia
PARÁMETROS A VALIDAR
- Especificidad
- Exactitud
- Precisión
- Linealidad y Rango
- Robustez
- Idoneidad
- Estabilidad de las soluciones
MUESTREO
Se requirieron 26 frascos de albendazol suspensión oral lote 100517 de los cuales 13 fueron
destinados como muestras de análisis y 13 fueron muestras retenidas (contra muestras).
EQUIPOS
EQUIPOS DESCRIPCIÓN
Espectrofotómetro UV-Vis Marca: Varian Inc.
Modelo: Cary 50
Balanza analítica Marca: A&D
Modelo: HM-120
Campana de vacío Marca: Labconco
Modelo: -
Horno Marca: Fisher Scientific
Modelo: Isotemp Oven
Desecador Marca: -
Modelo: -
Agitador magnético y magneto Marca: SYBRON
Modelo: 7200
Refrigeradora Marca: Oster
INSTRUMENTAL ANALÍTICO
INSTRUMENTAL ANALÍTICO DESCRIPCIÓN
Celda 1 Marca: Varian
Uso: UV-Visible
Tamaño: 1 cm.
Cuarzo
Celda 2 Marca: PerkinElmer
Uso: UV-Visible
Tamaño: 1 cm.
Cuarzo
Matraces volumétricos clase A Marca: Pyrex
Capacidad: 100, 250, 500 y 1000 mL.
Nombre: Albendazol
Características organolépticas:
- Aspecto: Líquido homogéneo.
- Color: Anaranjado.
- Olor: Fresa
- Sabor: Fresa
pH: 4.5 – 5.5
Almacenamiento: 30 ºC ± 2 ºC
Presentación: Frasco plástico blanco de polietileno de alta densidad de 10 mL, tapa plástica
de polietileno de alta densidad color blanco con sello de seguridad y etiqueta autoadhesiva.
Reactivos
REACTIVOS
NOMBRE FÓRMULA QUÍMICA GRADO
Ácido clorhídrico HCl 12.1 N Reactivo
Ácido perclórico HClO4 Reactivo
Ácido acético glacial CH3COOH Reactivo
Anhidro acético C4H6O3 Reactivo
Ácido sulfúrico H2SO4 Reactivo
Dicromato de potasio K2Cr2O7 Reactivo
Azul de oracet B C21H16N2O2 + C20H14N2O2 Reactivo
Cristal violeta C25H30ClN3 Reactivo
Biftalato de potasio C8H5KO4 Reactivo
Cloruro de potasio KCl Estándar
Dicromato de potasio K2Cr2O7 Estándar
Tolueno en hexano 0.002% C6H5CH3 + C5H12O Estándar
Perclorato de holmio Ho(ClO4)3 Estándar
Materiales
Medidas de seguridad
Leer las precauciones para el uso de los materiales. Tome las precauciones necesarias durante
el desarrollo del estudio. La seguridad del personal incluye el uso adecuado de los equipos
de protección, vestimenta, así mismo deben manipular y almacenar adecuadamente los
reactivos empleados. Los desechos generados durante los análisis deben de colocarse en el
lugar correspondiente para evitar accidentes laborales.
Preparación de reactivos
Transferir 6.6 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL con
aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.
Transferir 8.2 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL con
aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.
Transferir 9.8 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL con
aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.
Condiciones de análisis
Idoneidad
- Seguir las indicaciones del equipo utilizando las soluciones estándar de stray light
blank, potassium chloride, sodium iodide, hexane blank, toluene in hexane, potassium
dichromate black, potassium dichromate 60 mg/L y holmium marca Starna.
- Al finalizar el equipo dará el resultado de cada una de las pruebas.
Especificaciones
Especificidad
(Di - Ds)
%D= * 100
Ds
Donde:
Especificaciones
Exactitud
Solución 1
- Pesar con exactitud 24 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.
Solución 2
- Pesar con exactitud 40 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.
Solución 3
- Pesar con exactitud 56 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.
- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 1 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 12.8 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 2 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 16 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 3 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 19.2 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
Especificación
Precisión
Especificaciones
Especificaciones
Precisión intermedia.
Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.
Especificaciones
Linealidad Y Rango
Linealidad del sistema.
Preparación de la solución estándar de albendazol al 80 %
Especificaciones
Parámetros Especificación
Coeficiente de variación < 2.0%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
Ecuación de regresión lineal y = bx + a.
Significación estadística del intercepto (a) t exp < t tab, el intervalo de confianza debe de
incluir el 0.
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > t tab, el intervalo de confianza no debe
de incluir el 0.
Análisis de varianza F1 exp > F1 tab, demuestra que la pendiente es
distinta de 0.
F2 exp < F2 tab, demuestra que existe linealidad
entre los resultados.
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de
(Test de Cochran) las concentraciones son homogéneas.
Análisis residuales (gráfico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio
y no reflejar ninguna tendencia.
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 17.6
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
Especificaciones
Parámetros Especificación
Coeficiente de variación < 2.0%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
Ecuación de regresión lineal y = bx + a.
Significación estadística del intercepto (a) t exp < t tab, el intervalo de confianza debe de
incluir el 0.
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > t tab, el intervalo de confianza no debe
de incluir el 0.
Análisis de varianza F1 exp > F1 tab, demuestra que la pendiente es
distinta 0.
F2 exp < F2 tab, demuestra que existe linealidad
entre los resultados.
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de
(Test de Cochran) las concentraciones son homogéneas.
Análisis residuales (gráfico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio
y no reflejar ninguna tendencia.
Robustez
Preparación de las soluciones estándar de albendazol.
Especificaciones
Especificaciones
ANEXO
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ALBENDAZOL
200 mg/5 mL SUSPESIÓN ORAL POR LA TÉCNICA DE ESPECTROFOTOMETRÍA
UV/Visible.
PROCEDIMIENTO.
La suspensión oral de albendazol contiene no menos del 90.0 % y no más del 110.0 % de la
cantidad declarada de albendazol.
7.2. IDONEIDAD.
7.3. ESPECIFICIDAD.
7.4. EXACTITUD.
y = 0.0352x + 0.0292
0.7 R² = 0.9979
0.65
Absorbancia
0.6
0.55
0.5
0.45
12 13 14 15 16 17 18 19 20
Concentración (µg/mL)
7.5. PRECISIÓN.
Concentración Absorbancia
Niveles y2 x2 yx (S y)2/n y/x
(µg/mL) (x) (y)
80% 12.8 0.48240 0.23270976 163.84 6.17472 0.687652563 0.0377
80% 12.8 0.47820 0.22867524 163.84 6.12096 0.0374
80% 12.8 0.47570 0.22629049 163.84 6.08896 0.0372
90% 14.4 0.531100 0.28206721 207.36 7.64784 0.85386675 0.0369
90% 14.4 0.535700 0.28697449 207.36 7.71408 0.0372
90% 14.4 0.533700 0.28483569 207.36 7.68528 0.0371
100% 16 0.59400 0.352836 256 9.504 1.03934988 0.0371
100% 16 0.58330 0.34023889 256 9.3328 0.0365
100% 16 0.58850 0.34633225 256 9.416 0.0368
110% 17.6 0.65470 0.42863209 309.76 11.52272 1.279749453 0.0372
110% 17.6 0.64720 0.41886784 309.76 11.39072 0.0368
110% 17.6 0.65750 0.43230625 309.76 11.572 0.0374
120% 19.2 0.71960 0.51782416 368.64 13.81632 1.50889392 0.0375
120% 19.2 0.70540 0.49758916 368.64 13.54368 0.0367
120% 19.2 0.70260 0.49364676 368.64 13.48992 0.0366
Promedio 0.0371
Desviación estándar 0.0003
Coeficiente de variación 0.93%
Coeficiente de determinación 0.9961
Coeficiente de determinación lineal 0.9980
Intercepto (a) 0.0121
Pendiente (b) 0.0363
y = 0.0363x + 0.0121
0.70000 R² = 0.9961
0.65000
Absorbancia
0.60000
0.55000
0.50000
0.45000
12 13 14 15 16 17 18 19 20
Concentración (µg/mL)
Gráfico de residuales
0.012
0.007
Residuos
0.002
12 13 14 15 16 17 18 19 20
-0.003
-0.008
-0.013
Concentración (µg/mL)
Concentración Absorbancia
Niveles y2 x2 yx (S y)2/n y/x
(µg/mL) (x) (y)
80% 12.8 0.47300 0.223729 163.84 6.0544 0.682587 0.0370
80% 12.8 0.48280 0.23309584 163.84 6.17984 0.0377
80% 12.8 0.47520 0.22581504 163.84 6.08256 0.0371
90% 14.4 0.542400 0.29419776 207.36 7.81056 0.865858963 0.0377
90% 14.4 0.531600 0.28259856 207.36 7.65504 0.0369
90% 14.4 0.537700 0.28912129 207.36 7.74288 0.0373
100% 16 0.59540 0.35450116 256 9.5264 1.071974963 0.0372
100% 16 0.59510 0.35414401 256 9.5216 0.0372
100% 16 0.60280 0.36336784 256 9.6448 0.0377
110% 17.6 0.65050 0.42315025 309.76 11.4488 1.28511075 0.0370
110% 17.6 0.66000 0.4356 309.76 11.616 0.0375
110% 17.6 0.65300 0.426409 309.76 11.4928 0.0371
120% 19.2 0.71040 0.50466816 368.64 13.63968 1.510028853 0.0370
120% 19.2 0.70940 0.50324836 368.64 13.62048 0.0369
120% 19.2 0.70860 0.50211396 368.64 13.60512 0.0369
Promedio 0.0372
Desviación estándar 0.003
Coeficiente de variación 0.79%
Coeficiente de determinación 0.9976
Coeficiente de determinación lineal 0.9988
Intercepto (a) 0.0130
Pendiente (b) 0.0364
0.60000
0.55000
0.50000
0.45000
12 13 14 15 16 17 18 19 20
Concentración (µg/mL)
Gráfico de residuales
0.008
0.006
0.004
0.002
Residuos
0
12 13 14 15 16 17 18 19 20
-0.002
-0.004
-0.006
-0.008
Concentración (µg/mL)
7.7. ROBUSTEZ.
Tabla 45. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico 0.08 N.
Tabla 47. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico 0.1 N.
Tabla 49. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico 0.12 N.
Condición de Absorbancia/tiempo de
Concentración obtenida (µg/mL)
almacenamiento almacenamiento
de las soluciones Inicial 24 hrs. 48 hrs. Inicial 24 hrs. 48 hrs.
0.5973 0.5901 0.5838 16.0970 15.9030 15.7332
Ambiente 0.5904 0.5932 0.5848 15.9111 15.9865 15.7601
0.6054 0.5957 0.5855 16.3153 16.0539 15.7790
0.6077 0.5902 0.5874 16.3773 15.9057 15.8302
40 ºC 0.5968 0.5904 0.5884 16.0835 15.9111 15.8572
0.5926 0.5851 0.5902 15.9704 15.7682 15.9057
0.5966 0.5957 0.5864 16.0782 16.0539 15.8033
Refrigerado 0.5958 0.5962 0.587 16.0566 16.0674 15.8194
0.5933 0.5955 0.5876 15.9892 16.0485 15.8356
8.1. IDONEIDAD.
8.2. ESPECIFICIDAD.
8.3. EXACTITUD.
8.4. PRECISIÓN.
A través de este ensayo se logró demostrar que no existe variabilidad significativa provocada
exclusivamente por el instrumento. Se demuestras a través del porcentaje de recuperado
obtenido de la cuantificación de una solución estándar de albendazol a concentración nominal
de 100.4% encontrándose dentro del parámetros (100.0 ± 2.0%) (Tabla 31) y un coeficiente
de variación de 1.0979% (menor al 2.0%) (Tabla 31).
Por medio de este ensayo de demostró que no existe una variación significativa provocada
por el proceso de la preparación de las soluciones muestras, que en este caso sería las
soluciones de placebo cargado, hasta la lectura de la misma, confirmándose a través del
En este ensayo se demostró a través del tratamiento estadístico de las absorbancias obtenidas
por dos analistas en diferentes días, teniendo un porcentaje de recuperado de 100.4% y
100.5% respectivamente por analista y un porcentaje de recuperado global de 100.5%
encontrándose dentro del parámetro (100.0 ± 2.0%) (Tabla 36), además de un coeficientes
de variación de 0.6980% y 0.7699% respectivamente para cada analista y un coeficiente de
variación global de 0.7339% (menor al 2.0%) (Tabla 36) que no existe variación significativa
en la precisión alcanzada por los dos analistas en diferentes días bajo distintas condiciones
de trabajo.
fue de 57.3441 (mayor que la t tabla 2.14) (Tabla 40) para un nivel de significancia de 0.05,
donde los intervalos de confianza no incluyen el 0 (0.0349 a 0.0376).
Se realizó un análisis de varianzas en la que se demuestra que existe una relación lineal entre
la variable dependiente (absorbancia) y la variable independiente (concentración) ya que F1
experimental es de 3288.3443 (mayor que F1 de tabla 4.600) (Tabla 40) demostrando que la
pendiente es distinta de 0 y F2 experimental fue de 0.9132 (menor que F2 de tabla 3.739)
(Tabla 40) demostrando que existe linealidad entre los resultados.
Se realizó un análisis de varianzas en la que se demuestra que existe una relación lineal entre
la variable dependiente (absorbancia) y la variable independiente (concentración) ya que F1
experimental es de 5360.2545 (mayor que F1 de tabla 4.600) (Tabla 44) demostrando que la
pendiente es distinta de 0 y F2 experimental fue de 0.7831 (menor que F2 de tabla 3.739)
(Tabla 44) demostrando que existe linealidad entre los resultados.
8.6. ROBUSTEZ.
Se demostró que la variación en factores determinante del método como son longitud de onda
de máxima absorción, concentración del ácido clorhídrico o utilizar distintas celdas no afecta
significativamente en los resultados obtenidos ya que se obtuvo un porcentaje de recuperado
de 100.2% encontrándose dentro del parámetro (100.0 ± 2.0%) (Tabla 52) y un coeficiente
de variación de 0.3204% (menor al 2.0%) (Tabla 52).
9. CONCLUSIONES.
10. RECOMENDACIONES.
A LOS ESTUDIANTES
- Que las autoridades estimulen e incentiven en conjunto con el personal docente a los
alumnos al desarrollo científico de nuevos métodos de análisis que minimicen los
costos.
- Crear instalaciones y ambientes debidamente equipados con material analítico y
equipos calibrados para el desarrollo de investigaciones científicas propuestas en el
área de control de calidad.
11. BIBLIOGRAFÍA.
1. Aguirre Ortega, L., García García F. J., García Junca T., lllera Fontanet M.,
Juncadella Roca M., Lizondo Carbó M., Lluch Sanfeliu A. M., Martin Pomar M.,
Mateos Pérez B., Ochoa de Echayuen Aguilar C., Ortega Sánchez M. A., Pujol Forn
M., Reig Serrat M., Torres Gonfaus M., Antúnez Moreno S., Carro Viñarás A. M.,
García Ávila A., Niubó Prats C., Oliver Agüera M. P., Caturla Perales M. C., Celma
Lezcano C., Encima García G., Jansat Rufach J. M., Nieto Abad C., Pérez Cuadrado
J. A., Rovira Guerín M., Tost Robusté D. y Cortes Loras R. (2001). Validación de
métodos analíticos. Asociación española de farmacéuticos de la industria.
Barcelona, España.
2. Brunton, L. L., Chabner, B. A. y Knollmann, B. C. (2012). Goodman & Gilman.
Las bases farmacológicas de la terapéutica (12ª Ed.). México, D. F.: The McGraw-
Hill Companies, Inc.
3. Christian, G. D. (2009). Química analítica (6ª Ed.). México, D. F.: International
Thomson Editores, S. A
4. Duymovich C., Acheme R., Sesini S. y Mazziotta D. (2005). Guía práctica de
actualización. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana. Programa de Control de
Calidad Instrumental: Espectrofotómetros y Fotocolorímetros, 39 (4).
5. Equipo técnico de la Oficina Nacional de Acreditación (ONA) (2012). Política para
la validación de métodos de laboratorios de ensayos y calibración. DOC-ONA-12-
011. Versión №:01.
6. European pharmacopoeia (8th Ed.). Electronic version.
7. Hansen S., Pedersen-Bjergaard S. & Rasmussen K. (2012). Introduction to
pharmaceutical chemical analysis (1st Ed.). United Kingdom: John Wiley & Sons
Ltd.
8. Harris, D. C. (2013). Análisis químico cuantitativo (3a Ed.). Barcelona: Reverté.
9. Hernández Sampieri R., Fernández Collado C. y Baptista Lucio M. P. (2010).
Metodología de la investigación (5ª Ed.). México, D. F.: The McGraw-Hill
Companies, Inc.
10. Herrera Santi1 M. T., García Peña C. M., Pérez Valdés D., Martínez Espinosa V.,
Suárez Pérez Y. y García Pulpeiro O. (2017). Desarrollo y validación de un método
analítico por espectrofotometría aplicable al control de la calidad del albendazol 200
mg/5 ml, polvo para suspensión. Revista de Ciencias Farmacéuticas y Alimentaria,
2396 (3).
11. Katzung, B. G., Masters, S. B. y Trevor, A. J. (2012). Farmacología básica y clínica
(12a Ed.). México, D. F.: The McGraw-Hill Companies, Inc.
12. Magnusson, B. y Ornemark, U. (2016). La adecuación al uso de los métodos
analíticos – Una Guía de laboratorio para la validación de métodos y temas
relacionados. Guía Eurachem (1ª Ed.). España. Disponible en www.eurachem.org
13. Martínez Osorio F. S. y Pérez Espinoza I. A. (2009). Calibración de un
espectrofotómetro UV-Visible y evaluación de la Incertidumbre. León, Nicaragua.
14. Miller N. J. y Miller J. C. (2002). Estadística y quimiometría para química analítica
(4ª Ed). Madrid, España: Pearson educación S. A.
15. MINECO, CONACYT, MIFIC, SIC y MEIC. Reglamento técnico
Centroamericano: Productos farmacéuticos. Medicamentos para uso humano.
Verificación de la calidad. RTCA 11.03.47:07
16. MINECO, CONACYT, MIFIC, SIC y MEIC. Reglamento técnico
Centroamericano: Productos farmacéuticos. Validación de métodos analíticos para
la evaluación de la calidad de los medicamentos. RTCA 11.03.39:06.
17. Moffat A. C., Osselton M. D. & Widdop B. (2011). Clarke’s analysis of drugs and
poisons in pharmaceuticals, body fluids and postmortem material (4th Ed.). London,
United Kingdom: Pharmaceutical Press
18. Nicaragua. Ministerio de Salud. División General de Insumos Médicos. División de
Uso Racional de Insumos Médicos. (2014). Formulario nacional de medicamentos
(7ª Ed.). Managua, Nicaragua.
19. Owen, T. (2000). Fundamentos de la espectroscopia UV-visible moderna. Agilent
Technologies. Alemania.
12. ANEXOS.
midiendo con termómetro; luego adicionar 0.120 g de Propil parabeno, poco a poco,
una vez disuelto este, agregar 0.440 g de Metil parabeno, poco a poco hasta disolver.
Luego enfriar agregando poco a poco 6 mL de agua destilada, hasta que la solución
aproximadamente 50 ºC. Inmediatamente adicionar a un beaker de 250 mL la
solución que contiene los conservadores, después en ésta y con agitación constante
agregar poco a poco 6.600 g de Avicel RC 591, hasta completa humectación. Luego
adicionarla al mortero para comprobar dicha humectación.
- Adicionar el Avicel RC 591 previamente humectado, al beaker de fabricación que
contiene el jarabe simple ya filtrado, lavando el mortero con el sobrante de la mezcla
(sorbitol más agua destilada), más agua destilada, agregar el enjuague al tanque de
fabricación y continuar agitando.
- Adicionar 60 mL de glicerina al beaker de preparación donde está el jarabe simple.
- Adicionar 0.400 g de Tween 40 al beaker de fabricación, con agitación constante.
- Adicionar en un beaker de 50 mL, 20 mL de agua destilada calentar a (50 a 60 ºC),
en éste agregar poco a poco con agitación constante los 0.200 g de sabor fresa, utilizar
espátula para disolver, una vez disuelto agregar al beaker de fabricación.
- Disolver 0.008 g de colorante anaranjado en 8 mL de agua destilada con ayuda de un
agitador de vidrio, una vez disuelto éste, agregar al beaker de fabricación.
- Agregar 20 mL de Sorbitol al beaker de fabricación y aforar a 400 mL con agua
destilada, continuar agitando durante 15 minutos.
- Medir pH (4.5 – 5.5).
- Filtrar por malla (tamiz redondo), de acero inoxidable.
- Envasar en frasco plástico, color blanco de 120 mL, usando jeringa descartable de 50
mL con tapado manual, usando guantes descartables.
Figura 16. Balanza analítica A&D HM-120 y masas para la verificación de la balanza.
Figura 18. Material de referencia marca Starna para la verificación del espectrofotómetro UV/Vis.
Figura 19. Material de referencia marca Starna para la verificación del espectrofotómetro UV/Vis.