ALBENDAZOL

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA

UNAN – LEÓN
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE FARMACIA

‘‘A la libertad por la Universidad’’

Monografía para optar al título de:

LICENCIADO QUÍMICO FARMACÉUTICO.

‘‘Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


suspensión oral por la técnica de espectrofotometría UV/Visible’’.

AUTOR:
- Br. Eliu Rafael Machado Hernández.

TUTOR:
- M.Sc. César Antonio Peralta Mayorga.

León, Nicaragua noviembre del 2017.


Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua
UNAN – León

AGRADECIMIENTOS.

Primero dar gracias a Dios por haber sido su voluntad culminar con este trabajo una
importante etapa en mi vida de formación profesional y por haberme brindado salud,
conocimientos y entendimiento a lo largo de mis 5 años de carrera.

También agradecerle por haber mantenido a mis padres y mis hermanos con vida y que
pudieran ver en mí el fruto del esfuerzo y dedicación mutua ya que gracias al apoyo,
motivación, educación y ejemplo que me brindaron hasta el día de hoy he podido terminar
esta meta de manera satisfactoria.

Agradecer a cada uno de los docentes que tuvo la paciencia y dedicación de transmitirme sus
conocimientos y experiencias en especial aquellos que me dejaron más que una lección de
un componente, me dejaron lecciones de vida con lo cual se convirtieron ejemplos a seguir.

De igual manera a mis compañeros de clases y en especial a los que se llegaron a convertir
en mis amigos con los cuales compartí durante 5 años momentos de estrés y momentos risas
en las aulas de clases y en los pasillos de la facultad ya que ellos son la familia que uno
escoge.

Por último pero no menos importante a mi tutor M.Sc. César Peralta por haber aceptado
trabajar conmigo y siempre haberme brindado su apoyo y conocimientos en esta experiencia
donde hemos aprendido juntos.

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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ÍNDICE DE CONTENIDO.
1. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................... 1
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................................... 4
3. OBJETIVOS .................................................................................................................. 5
3.1. OBJETIVO GENERAL ....................................................................................... 5
3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS............................................................................... 5
4. FUNDAMENTO TEÓRICO ........................................................................................ 6
ALBENDAZOL
4.1. PROPIEDADES FISICO-QUÍMICAS ................................................................ 6
4.2. PROPIEDADES FARMACOLÓGICAS ............................................................ 8
VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS
4.3. ¿QUÉ ES VALIDACIÓN? ................................................................................ 13
4.4. PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS QUE SON OBJETOS DE VALIDACIÓN
............................................................................................................................ 17
4.5. PASOS PARA LA VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO ............. 33
GENERALIDADES DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA
4.6. CONCEPTOS GENERALES DE ESPECTROFOTOMETRÍA ....................... 37
4.7. LEY DE BEER .................................................................................................. 41
4.8. INSTRUMENTACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA .................................... 46
5. HIPÓTESIS .................................................................................................................. 50
6. DISEÑO METODOLÓGICO .................................................................................... 51
6.1. TIPO DE ESTUDIO .......................................................................................... 51
6.2. ALCANCE ......................................................................................................... 51
6.3. ÁREA DE ESTUDIO ........................................................................................ 51
6.4. POBLACIÓN DE ESTUDIO ............................................................................ 51
6.5. MUESTRA ........................................................................................................ 51
6.6. UNIDAD DE ANÁLISIS .................................................................................. 52
6.7. PLAN DE ANÁLISIS ........................................................................................ 52
6.8. VARIABLES DE ESTUDIO ............................................................................. 52
6.9. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES ................................................. 53
6.10. EQUIPO E INSTRUMENTAL ANALÍTICO................................................... 55
6.11. REACTIVOS ..................................................................................................... 57

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6.12. MATERIALES .................................................................................................. 57


6.13. PREPARACIÓN DE REACTIVOS .................................................................. 58
6.14. DETERMINACIÓN DE LA POTENCIA DE ALBENDAZOL ESTÁNDAR DE
TRABAJO.......................................................................................................... 59
6.15. CONDICIONES DE ANÁLISIS ....................................................................... 60
6.16. PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE
ALBENDAZOL 200 mg/5 mL SUSPESIÓN ORAL POR LA TÉCNICA DE
ESPECTROFOTOMETRÍA UV/Visible .......................................................... 61
6.17. DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO A
EVALUAR ........................................................................................................ 63
6.17.1. Idoneidad ................................................................................................ 63
6.17.2. Especificidad .......................................................................................... 65
6.17.3. Exactitud ................................................................................................ 67
6.17.4. Precisión ................................................................................................. 70
6.17.5. Linealidad y Rango ................................................................................ 73
6.17.6. Robustez ................................................................................................. 79
6.17.7. Estabilidad de las soluciones .................................................................. 82
7. RESULTADOS ............................................................................................................ 83
8. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS ....................................................................... 134
9. CONCLUSIONES ..................................................................................................... 139
10. RECOMENDACIONES ........................................................................................... 140
11. BIBLIOGRAFÍA ....................................................................................................... 141
12. ANEXOS ..................................................................................................................... 144

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ÍNDICE DE TABLAS.

Tabla 1. Parámetros de desempeño de procedimientos analíticos físicos-químicos ............ 18


Tabla 2. Factores que pueden o no pueden variar en el estudio de la repetibilidad, precisión
intermedia y la reproducibilidad ............................................................................. 21
Tabla 3. Variación de los factores: analista, día e instrumento en la determinación de la
precisión intermedia ............................................................................................... 23
Tabla 4. Grupos de muestras que normalmente se preparan las formas farmacéuticas y
materia prima .......................................................................................................... 25
Tabla 5. Criterio de aceptación para la exactitud de la longitud de onda ............................. 31
Tabla 6. Criterio de aceptación para la exactitud fotométrica .............................................. 32
Tabla 7. Criterio de aceptación para la resolución ................................................................ 33
Tabla 8. Operacionalización de las variables........................................................................ 53
Tabla 9. Equipos ................................................................................................................... 55
Tabla 10. Material analítico .................................................................................................. 55
Tabla 11. Reactivos............................................................................................................... 57
Tabla 12. Materiales ............................................................................................................. 57
Tabla 13. Condiciones espectrofotométricas de análisis ...................................................... 60
Tabla 14. Criterio de aceptación para la precisión de la idoneidad del sistema ................... 64
Tabla 15. Criterio de aceptación para la especificidad ......................................................... 66
Tabla 16. Criterio de aceptación para la exactitud ................................................................ 69
Tabla 17. Criterio de aceptación para la repetibilidad del sistema ....................................... 70
Tabla 18. Criterio de aceptación para la repetibilidad del método ....................................... 71
Tabla 19. Criterio de aceptación para la precisión intermedia ............................................. 72
Tabla 20. Criterio de aceptación para la linealidad del sistema............................................ 75
Tabla 21. Criterio de aceptación para la linealidad del método ............................................ 78
Tabla 22. Criterio de aceptación para la robustez ................................................................. 81
Tabla 23. Criterio de aceptación para la estabilidad de las soluciones ................................. 82
Tabla 24. Absorbancias....................................................................................................... 111
Tabla 25. Resultados ........................................................................................................... 111
Tabla 26. Absorbancias del estándar y placebo .................................................................. 113
Tabla 27. Resultados ........................................................................................................... 113
Tabla 28. Absorbancias y porcentajes de recuperado ......................................................... 114

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Tabla 29. Resultados ........................................................................................................... 114


Tabla 30. Absorbancias y porcentajes de recuperado ......................................................... 116
Tabla 31. Resultados ........................................................................................................... 116
Tabla 32. Absorbancias y porcentajes de recuperado ......................................................... 117
Tabla 33. Resultados ........................................................................................................... 117
Tabla 34. Absorbancias por analistas/días .......................................................................... 118
Tabla 35. Porcentajes de recuperado por analistas/días ...................................................... 118
Tabla 36. Resultados ........................................................................................................... 119
Tabla 37. Determinación de los parámetros ....................................................................... 120
Tabla 38. Significación estadística del intercepto y la pendiente ....................................... 121
Tabla 39. Análisis de varianza ANOVA ............................................................................ 121
Tabla 40. Resultados ........................................................................................................... 122
Tabla 41. Determinación de los parámetros ....................................................................... 124
Tabla 42. Significación estadística del intercepto y la pendiente ....................................... 125
Tabla 43. Análisis de varianza ANOVA ............................................................................ 125
Tabla 44. Resultados ........................................................................................................... 126
Tabla 45. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico
0.08 N de la robustez .......................................................................................... 128
Tabla 46. Resultados de la robustez en ácido clorhídrico 0.08 N ....................................... 128
Tabla 47. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico
0.1 N de la robustez ............................................................................................ 129
Tabla 48. Resultados de la robustez en ácido clorhídrico 0.1 N ......................................... 129
Tabla 49. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico
0.12 N de la robustez .......................................................................................... 130
Tabla 50. Resultados de la robustez en ácido clorhídrico 0.12 N ...................................... 130
Tabla 51. Resultados total ................................................................................................... 131
Tabla 52. Resultados de la robustez.................................................................................... 131
Tabla 53. Absorbancias y concentración obtenida por tiempo y condición de almacenamiento
............................................................................................................................ 132
Tabla 54. Porcentajes de recuperado .................................................................................. 133
Tabla 55. Resultados ........................................................................................................... 133
Tabla 56. Fórmula cuali-cuantitativa de albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral .......... 144

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ÍNDICE DE FIGURAS.

Figura 1. Estructura química del albendazol .......................................................................... 6


Figura 2. Variación del espectro de absorción de un mismo analito en distintos solventes . 40
Figura 3. Variación del espectro de absorción de un mismo analito en distintos pH ........... 40
Figura 4. Absorción y trasmisión de luz en una solución ..................................................... 42
Figura 5. Componentes de un espectrofotómetro ultravioleta .............................................. 46
Figura 6. Resultados de la idoneidad del instrumento Varian Cary 50 .............................. 110
Figura 7. Espectros de absorción de la especificidad ........................................................ 112
Figura 8. Curva de calibración ............................................................................................ 115
Figura 9. Curva de calibración ............................................................................................ 122
Figura 10. Gráfico de residuales ......................................................................................... 123
Figura 11. Curva de calibración .......................................................................................... 126
Figura 12. Gráficos de residuales ....................................................................................... 127
Figura 13. Tabla de valores críticos de t. ............................................................................ 146
Figura 14. Tabla de valores críticos de F para un nivel de significancia de 0.05 ............... 147
Figura 15. Espectrofotómetro UV/Vis Varian Cary 50 ...................................................... 148
Figura 16. Balanza analítica A&D HM-120 y masas para la verificación de la balanza ... 149
Figura 17. Verificación de la balanza A&D HM-120 con masa de 50 g. ........................... 150
Figura 18. Material de referencia marca Starna para la verificación del espectrofotómetro
UV/Vis. ............................................................................................................ 151
Figura 19. Material de referencia marca Starna para la verificación del espectrofotómetro
UV/Vis ............................................................................................................. 151

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1. INTRODUCCIÓN.

La validación de un método analítico es el establecimiento de la evidencia documental de


que un procedimiento analítico conducirá con un alto grado de seguridad, a la obtención de
resultados precisos y exactos, dentro de las especificaciones y atributos de calidad
previamente establecidos.

Con el presente trabajo monográfico se logró validar la metodología analítica propuesta para
la cuantificación del producto de albendazol 200 mg/5 mL en suspensión oral fabricado en
el Laboratorio de producción de medicamentos Mauricio Díaz Müller de la UNAN – León
por la técnica de espectrofotometría UV/Visble, en el cual se describe el método analítico
para la evaluación de los parámetros de desempeños establecidos en el Reglamento Técnico
Centroamericano RTCA 11.03.39:06 Productos farmacéuticos. Validación de métodos
analíticos para la evaluación de la calidad de los medicamentos y la Farmacopea de los
Estados Unidos de América USP36/NF31 para procedimientos analíticos de categoría I
(Ensayos de cuantificación del (los) principio(os) activo(os)), igualmente la evaluación de
parámetros adicionales como son Robustez, Idoneidad y Estabilidad de las soluciones. Para
la evaluación de los parámetros de desempeño de dicho método analítico se utilizaron
muestras de placebo de albendazol suspensión oral producidas en el Laboratorio de
producción de medicamentos Mauricio Díaz Müller de la UNAN – León cargadas con
estándar de trabajo.

Se realizó una búsqueda en la base de datos de la biblioteca de la UNAN - León y no se


encontraron estudios publicados acerca de validación de productos de albendazol en
suspensión oral por la técnica de espectrofotometría UV/Visible.

En el año 2015 en la Universidad Nacional de Trujillo, Perú, se realizó el estudio: Validación


del método analítico por espectrofotometría UV/VIS para la cuantificación de albendazol en
suspensiones comerciales, donde la metodología analítica de los ensayos tanto para la
muestra como para el estándar ambos fueron disueltos en metanol acidificado y aforado con
ácido clorhídrico 0.1 N, tomaron una alícuota y aforaron con ácido clorhídrico 0.1 N y se
leyeron en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 310 nm, los resultados que

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obtuvieron para el parámetro de la linealidad fueron un coeficiente de determinación tanto


para el sistema como para el método 0.9977 y 0.9978 respectivamente (mayor que 0.99),
coeficiente de variación del sistema y para el método de 0.694% y 0.720% respectivamente
(menor que 5%); el parámetro de exactitud obtuvieron un porcentaje de recuperado de
99.785% (98-102%), aplicaron test de Cochran y obtuvieron G experimental de menor de la
de tabla (0.636 < 0.8709) y t-student experimental menor que la de tabla (1.3643 < 2.306);
el parámetro de presión lo evaluaron a través de la repetibilidad del sistema y del método los
cuales tuvieron un coeficiente de variación de 1.0829% y 1.1732% respectivamente (menor
que 2%) y precisión intermedia obteniendo un coeficiente de variación de 0.9744% (menor
que 3%). Llegaron a la conclusión de que los valores obtenidos del método
espectrofotométrico para la cuantificación de albendazol en suspensión cumplen con los
criterios establecidos United Stated Pharmacopea (USP) 36, demostrando ser lineal, exacto
y preciso. (21)

En la edición Marzo – Septiembre del 2017 de la Revista de Ciencias Farmacéuticas y


Alimentarias fue publicado el estudio: Desarrollo y validación de un método analítico por
espectrofotometría aplicable al control de calidad del albendazol 200 mg/5 mL, polvo para
suspensión, donde disolvieron y aforaron la muestra de polvo para suspensión de albendazol
y el estándar en metanol – ácido clorhídrico (99 : 1) tomaron una alícuota y aforaron con
hidróxido de sodio 0.1 mol/L y se leyó en el espectrofotómetro a 308 nm. Los resultados que
obtuvieron en el parámetro de linealidad del sistema y del método fue un coeficiente de
variación de 0.683% y 0.802% respectivamente (menor que 5.0%); el parámetro de exactitud
tuvieron un coeficiente de variación de 0.526% (menor que 3.0%) aplicaron estudio de
Cochran tuvieron un valor de G experimental menor que el de tabla (0.87 < 0.693) y estudio
de t-student obteniendo un valor menor que el de tabla (0.495 < 2.3); el parámetro de
precisión lo evaluaron a través de la reproducibilidad con un porcentaje de recuperado de
99.78% y un coeficiente de variación de 0.45% y a través de la precisión intermedia
evaluando el desempeño de dos analistas durante 3 días diferentes obtuvieron un coeficiente
de variación de 0.471% y 0.651% por analista (menor que 3.0%). Llegaron a la conclusión
de que el método que fue válido según el objetivo con el cual se propone, resultó específico

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frente a los restantes componentes de la matriz, lineal, exacto y preciso en el rango de 50 a


150%. (10)

Este trabajo se realizó con el fin de brindarle al Laboratorio de producción de medicamentos


Mauricio Díaz Müller de la UNAN – León un método de análisis de rutina para la
cuantificación de albendazol en suspensión oral alterno a los métodos farmacopéicos que se
ajuste a los recursos que posee, pero que al mismo tiempo se obtengan resultados fiables y
precisos, puesto que los métodos farmacopéicos de cuantificación de albendazol suspensión
oral son por la técnica de cromatografía líquida de alta resolución y el laboratorio no cuenta
con tal equipo, además, una vez validado dicho método facilitará al laboratorio cumplir con
ciertos requisitos solicitados por el Ministerio de Salud para la obtención del registro sanitario
de dicho producto.

Los ensayos de laboratorios requeridos para la validación de dicho método analítico se


realizaron en las instalaciones del Laboratorio de Control de Calidad de Medicamentos
(LCCM) perteneciente a la facultad de Ciencias Químicas de la UNAN – León.

Los resultados obtenidos en la evaluación de los parámetros de desempeño de validación


establecidos en el RTCA 11.03.39: 06 y USP36/NF31 para procedimientos analíticos de
categoría I al igual que los parámetros adicionales que se evaluaron demostraron que el
método propuesta es específico, exacto, preciso y lineal al igual que el método es idóneo para
su aplicación, se verificó que no existe variación significativa en los resultados al realizar
alteraciones en factores importante del método descrito y la solución de placebo cargado es
estable al ser evaluada antes de 48 horas después de su preparación almacenadas a
temperatura ambiente, en horno a 40 ºC y refrigeración.

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2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.

La validación de un método analítico es la evidencia documentada que el método en cuestión


cumple con las especificaciones de los parámetros de validación establecidos, demostrando
que el método ofrece resultados exactos y precisos para el propósito que se propone.
Minimizando el número de fallos y repeticiones en los ensayos, permitiendo al laboratorio
un importante ahorro en costos. Dicho esto se plantea la siguiente interrogante en la
validación de la metodología analítica para la cuantificación del producto de albendazol 200
mg/5 mL suspensión oral por la técnica de espectrofotometría UV/Visible:

¿El desempeño de los parámetros de validación para procedimientos analíticos de categoría


I establecidos en el RTCA 11.03.39: 06 y la USP36/NF31 junto con los parámetros
adicionales: Robustez, Idoneidad y Estabilidad de las soluciones en el método analítico para
la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral por la técnica de
espectrofotometría UV/Visible son óptimos?

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3. OBJETIVOS.

3.1. OBJETIVO GENERAL:

- Validar la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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3.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS:

- Elaborar un protocolo de validación del producto de albendazol 200 mg/5 mL


suspensión oral para el Laboratorio de producción de medicamentos Mauricio Díaz
Müller.

- Evaluar los parámetros de desempeño establecidos en el RTCA 11.03.39: 06 y


USP36/NF31 para procedimientos analíticos de categoría I: Especificidad, Exactitud,
Precisión, Linealidad y Rango en la metodología analítica para la cuantificación del
producto de albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral por la técnica de
espectrofotometría UV/Visible.

- Determinar los parámetros adicionales: Robustez, Idoneidad y Estabilidad de las


soluciones en la metodología analítica para la cuantificación del producto de
albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral por la técnica de espectrofotometría
UV/Visible.

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4. FUNDAMENTO TEÓRICO.

ALBENDAZOL

4.1. PROPIEDADES FISICO-QUÍMICAS.

- FÓRMULA Y NOMBRE QUÍMICO. (23)

Figura 1. Estructura química del albendazol.

H
N
NH CH3
H3C
S N O
O

metil-5-(propiltio)-2-benzimidazolcarbamato

- FÓRMULA MOLECULAR.

C12H15N3O2S (23)

- PESO MOLECULAR.

265.33 g/mol (23)

- ESTADO FÍSICO Y COLOR.

Cristales incoloros (17)

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- PUNTO DE FUSIÓN.

208 – 210 ºC. (17)

- SOLUBILIDAD

Insoluble en agua y etanol; soluble en dimetilsulfóxido, ácido acético, ácidos y bases fuertes.

4.1.1. CONTROL DE CALIDAD PARA MATERIA PRIMA DE ALBENDAZOL. (23)

- PORCENTAJE DE RECUPERADO

El albendazol contiene no menos de 98.0 % y no más del 102.0 % de C12H15N3O2S, calculado


con respecto a la sustancia seca.

- PÉRDIDA POR SECADO

Secar a 105 ºC durante 4 horas: No pierde más de 0.5 % de su peso.

- IDENTIFICACIÓN

Disolver 50 mg de albendazol en 3 mL de ácido acético glacial en un balón aforado de 5 mL,


diluir a volumen con ácido acético glacial y mezclar. Disolver 25 mg de estándar de
albendazol con ácido acético en un balón aforado de 5 mL, se tendrá una solución de 5 mg
de albendazol por mL. Aplicar porciones de 10 mL de la solución de prueba y la solución
estándar a una placa para cromatografía en capa delgada. Recubierta con una capa de 0.25
mm de una mezcla de gel de sílice y dejar que las manchas se sequen. Desarrollar el
cromatograma en una fase móvil constituida por una mezcla de cloroformo, ácido acético
glacial y éter (60 : 10 : 10) hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara, marcar

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el frente de la fase móvil, dejar que el disolvente se evapore y examinar la placa bajo una luz
UV de longitud de onda corta.

El valor RF de la mancha principal observada en el cromatograma de la solución de prueba


corresponde al valor de la mancha principal observada en el cromatograma de la solución
estándar.

- VALORACIÓN

Transferir aproximadamente 250 mg de albendazol, pesados con exactitud, a un matraz


adecuado y disolver en 100 mL de ácido acético glacial, calentando ligeramente si fuera
necesario. Enfriar, agregar 1 gota de azul de oracet B y valorar con ácido perclórico 0.1 N
previamente estandarizado hasta punto final violáceo. Realizar una determinación con un
blanco y hacer las correcciones necesarias.

Cada mL de ácido perclórico 0.1 N equivale a 26.53 mg de C12H15N3O2S.

4.2. PROPIEDADES FARMACOLÓGICAS.

En la década de los años 60 H. D. Brown y su equipo de trabajo a través de ensayos


sistemáticos con benzimidazoles, benzotiazoles y otras sustancias en la búsqueda de nuevos
fármacos antivirales descubrieron una nueva droga llama tiabendazol, posteriormente
descubrieron su actividad específica contra los helmintos intestinales, dando como origen un
nuevo grupo farmacoterapéutico conocido como Benzimidazoles químicamente formado por
un anillo bicíclico de la unión de un anillo benceno en la posición 4 y 5 a un anillo imidazol.

La modificación en las posiciones 2 y 5 del sistema anular benzimidazol dio origen a nuevas
drogas como son el mebendazol y el albendazol demostrando un mayor espectro de acción
contra helmintos, mayor eficacia y un menor grado de toxicidad. (2)

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4.2.1. FARMACODINÁMIA.

El mecanismo de acción del albendazol se da mediante la interacción selectiva con la β-


tubulina intestinal del helminto y no del huésped, proteína del citoesqueleto, inhibiendo de
ese modo la polimerización necesaria para la formación de microtúbulos, ocasionando la
ruptura de las células y la pérdida de funcionalidad secretora y absortiva produciéndose una
acumulación de sustancias secretoras en el aparato de Golgi del helminto, disminuyendo la
captación de glucosa y la disminución de glucógeno en los depósitos. Como muchas de las
sustancias secretoras presentes en el aparto de Golgi son enzimas proteolíticas que se liberan
intracelularmente, la consecuencia final es la inmovilización del parásito y la autolisis de las
células intestinales y finalmente la muerte del parásito. (2) (11)

4.2.2. FARMACOCINÉTICA.

Después de su administración oral, se absorbe en forma irregular (en mayor grado con una
comida grasosa) y luego experimenta con rapidez metabolismo de primer paso en el hígado
para convertirse en el metabolito activo sulfóxido de albendazol. Alcanza concentraciones
plasmáticas máximas variables unas 3 h después de una dosis oral de 450 mg y su semivida
plasmática es de 8 a 12 h. El sulfóxido se une sobre todo a proteína, se distribuye bien en los
tejidos y penetra en la bilis, líquido cefalorraquídeo y quistes hidatídicos. Los metabolitos
del albendazol se excretan en la orina. (11)

4.2.3. INDICACIONES.

- Ascariosis, tricuriosis e infestaciones por anquilostoma y oxiuros. (11)

- Hidatidosis (Echinococcus granulosus y Echinococcus multilocularis). (11)

El albendazol es el fármaco más indicado para tratar el quiste hidatídico por Echinococcus
granulosus. Con dicho fármaco se obtiene un índice pequeño de curación si se usa solo, pero

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es un complemento útil en el periodo perioperatorio para disminuir el peligro de diseminar


la infección como consecuencia del derrame del contenido del quiste en el momento de la
operación o de punción, aspiración, inyección y nueva aspiración no operatorias. (11)

Es el único fármaco obtenible con actividad útil contra la equinococosis alveolar causada por
Echinococcus multilocularis pero es parasitostático y no parasiticida y a veces se necesita el
tratamiento permanente para erradicar la infección, con intervención quirúrgica o sin ella. (11)

- Neurocisticercosis.

El albendazol también es el tratamiento preferido en caso de neurocisticercosis causada por


las formas larvarias de Taenia solium. (11)

Antes de comenzar a administrar albendazol se inician los glucocorticoides y se continúan


durante varios días de haber emprendido el tratamiento, para así disminuir la incidencia de
efectos adversos que son consecuencia de reacciones inflamatorias a los cisticercos muertos
y a los que están en fase agónica. Los glucocorticoides incrementan las concentraciones
plasmáticas de sulfóxido de albendazol. (11)

- Otras infecciones.

El albendazol es el fármaco de elección para tratar la larva migratoria cutánea, la larva


migratoria visceral, la capilariosis intestinal, las infestaciones por microsporidios y la
gnatostomosis. También tiene actividad contra la triquinosis y la clonorquiosis. (11)

4.2.4. REACCIONES ADVERSAS.

El albendazol ocasiona pocos efectos adversos cuando se utiliza por corto tiempo contra
helmintosis de las vías gastrointestinales, incluso en quienes tienen un número importante de
vermes. En cerca del 1% de personas tratadas se observan síntomas leves y transitorios de

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efectos adversos de consideración. Pueden presentarse molestias epigástricas leves y


transitorias, diarrea, cefalea, náusea, mareo, laxitud e insomnio. (11)

En el empleo a largo plazo las reacciones adversas más frecuentes son molestias
(11)
abdominales, cefalea, fiebre, fatiga, alopecia, pancitopenia y disfunción hepática que
suele manifestarse por aumento de las concentraciones de transaminasas séricas; en
ocasiones excepcionales aparece ictericia, pero las actividades enzimáticas se normalizan una
vez terminado el tratamiento. (2)

4.2.5. INTERACCIONES.

Fenitoina, carbamacepina y fenobarbital reducen las concentraciones plasmáticas (de


relevancia clínica si el albendazol es utilizado en enfermedades sistémicas que necesitan altas
dosis). La dexometasona aumenta la concentración del albendazol. (18)

4.2.6. DOSIFICACIÓN. (11)


- Ascariosis, anquilostomiosis y oxiuros: en adultos y niños mayores de dos años de
edad con ascariosis y anquilostomiosis una sola dosis de 400 mg por vía oral que se
repite durante dos a tres días y en dos semanas para las infestaciones por oxiuros.
- Tricuriosis: tres dosis orales de 400 mg al día de albendazol.
- Hidatidosis: La dosis es de 400 mg dos veces al día con las comidas durante un mes
o más. Se ha tolerado bien el tratamiento diario hasta por seis meses. Una medida
terapéutica comunicada consiste en tratar con albendazol y prazicuantel, para valorar
la respuesta después de un mes o más y, según sea la respuesta, se trata luego al
paciente con quimioterapia continuada o tratamiento quirúrgico y farmacológico
combinados.
- Neurocisticercosis: 400 mg dos veces al día hasta por 21 días.
- Larva migratoria cutánea: 400 mg al día durante tres días.
- Larva migratoria visceral: 400 mg dos veces al día durante cinco días.

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- Capilariosis intestinal: 400 mg al día durante 10 días.


- Infestaciones por microsporidios: 400 mg dos veces al día durante dos semanas o
más.
- Gnatostomosis: 400 mg dos veces al día durante tres semanas.
- Triquinosis: 400 mg dos veces al día durante una a dos semanas.
- Clonorquiosis: 400 mg dos veces al día durante una semana.

4.2.7. PRECAUCIONES.

Las biometrías hemáticas y pruebas de función hepática deben vigilarse durante el


tratamiento a largo plazo. El fármaco no se debe administrar a pacientes con hipersensibilidad
conocida a otros benzimidazoles o a los adultos cirróticos. No se ha establecido la seguridad
del albendazol durante el embarazo y en los niños menores de dos años de edad. (11)

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VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS

4.3. ¿QUÉ ES VALIDACIÓN?

El término validación ha sido definido en la literatura, de diversas maneras y por numerosos


autores. Aunque los términos dados son diferentes el significado de las mismas es siempre el
mismo: a) especificar e implementar, b) aprobar y c) documentar.

Dependiendo del campo de aplicación de una validación se pueden tener diferente conceptos
sobre ella, un concepto generalizado que sobre validación es la obtención de pruebas con
arreglo a las Normas de Correcta Fabricación, de que cualquier procedimiento, proceso,
equipo, material, actividad o sistema produce en realidad el resultado previsto. (1)

Según la Farmacopea de los Estados Unidos de América USP36/NF25 validación de un


procedimiento analítico es el proceso que establece, mediante estudios en laboratorio, que
las características de desempeño del procedimiento cumplen los requisitos para las
aplicaciones analíticas previstas. (23)

Desde el punto de vista analítico el término validación significa el establecimiento de la


evidencia documental de que un procedimiento analítico conducirá, con un alto grado de
seguridad, a la obtención de resultados precisos y exactos, dentro de las especificaciones y
los atributos de calidad previamente establecidos. (1)

4.3.1. TERMINOS ASOCIADOS CON LA VALIDACIÓN.

- Cualificación: el termino validación se amplía a veces para incluir el concepto de


cualificación y consiste en la operación por la que se comprueba que un equipo
funciona correctamente y produce en realidad los resultados previstos. (1)
- Calibración: conjunto de operaciones que determinan, bajo condiciones previamente
definidas, la relación entre los valores indicados por el sistema de medición y los
valores conocidos correspondientes a un patrón de referencia. (1)

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Los términos "validación, cualificación y calibración", son conceptos que suelen emplearse
de forma indistinta, sin embargo conceptualmente son diferentes. (1)

- Validar: verificar documentalmente que un método o proceso hace lo que tiene que
hacer. (1)
- Cualificar: dotar o verificar las cualidades o características inherentes a un aparato
(máquina. equipo, instrumento, etc.). (1)
- Calibración: es una parte de la cualificación. (1)

Por consiguiente se puede decir que los métodos deben ser validados y los aparatos deben,
ser cualificados. (1)

- Procedimiento analítico: descripción detallada de los pasos necesarios para aplicar un


método analítico. (1)
- Validación de un procedimiento analítico: procedimiento para establecer pruebas
documentales que demuestren científicamente que un método analítico tiene las
características de desempeño que son adecuadas para cumplir los requerimientos de
las aplicaciones analíticas pretendidas. Implica la demostración de la determinación
de las fuentes de variabilidad y del error sistemático y al azar de un procedimiento,
no sólo dentro de la calibración sino en el análisis de muestras reales. (16)
- Ensayo: operación técnica realizada de acuerdo a un procedimiento específico, que
consiste en la determinación cualitativa y/o cuantificación de una o más
características (propiedades o analitos) en un determinado producto, proceso o
servicio. (5)
- Material de Referencia Certificado: Material de referencia acompañado de un
certificado, en el cual uno o más valores de sus propiedades están certificados por un
procedimiento que establece trazabilidad a una realización exacta de la unidad en la
cual se expresan los valores de la propiedad y en el que cada valor certificado se
acompaña de una incertidumbre con un nivel declarado de confianza. (5)
- Material de Referencia: Material o sustancia en la cual uno o más valores de sus
propiedades son suficientemente homogéneos y bien definidos como para ser

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utilizados en la calibración de aparatos, en la evaluación de un método de medición


o para asignar valores a otros materiales. (5)
- Analito: sustancia contenida en la muestra sometida a análisis. (1)
- Blanco, placebo o matriz de la muestra: muestra preparada para la lectura final pero
que no contiene analitos. Puede ser un blanco de los reactivos o bien un blanco de la
muestra problema que contenga todos los ingredientes de la muestra problema
excepto los analitos. En este último caso se denomina placebo o matriz de la muestra.
(1)

- Parámetros de desempeño analítico, parámetros de mérito o elementos requeridos


para el ensayo de validación: características de validación que necesitan ser evaluadas
y que típicamente corresponden a la siguiente lista: exactitud, precisión,
especificidad, límite de detección, límite de cuantificación, linealidad e intervalo de
linealidad. (16)

4.3.2. ¿CUÁL ES EL OBJETIVO DE UNA VALIDACIÓN?

El objetivo de la validación de un procedimiento de análisis es demostrar que es conveniente


para los fines previstos. Así como dejar en evidencia mediante documentación la veracidad
de dicho procedimiento. (20)

4.3.3. RAZONES QUE JUSTIFICAN LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS


ANALÍTICOS. (1)

- Demostrar que los métodos son adecuados a los análisis propuestos en las condiciones
descritas. La validación es la herramienta que permite obtener las pruebas
documentales al respecto.
- Trabajar con métodos que ofrezcan confianza y seguridad en los resultados, lo cual a
su vez minimizará el número de fallos y repeticiones permitiendo un importante
ahorro del costo.

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- Trabajar con métodos validados permite no sólo el conocimiento del método


analítico: sino también cumplir con las exigencias legales tanto del registro de
especialidades, farmacéuticas como de las Buenas Prácticas de Laboratorio, con el
fin de asegurar la calidad y eficacia del producto.
- La validación es también un paso o requisito previo de los procesos de transferencia
de métodos analíticos.

4.3.4. PARA INICIAR LA VALIDACIÓN ES NECESARIO PREVIAMENTE: (1)

- Tener perfectamente caracterizado el analito.


- Trabajar con una formulación definitiva (en caso de especialidad), puesto que
cambios en la composición incluso a nivel de excipientes afectarán probablemente al
procedimiento analítico.
- Trabajar suficientemente con el método de análisis como para que nuestro
conocimiento acerca de éste, nos ofrezca garantías de que la validación puede ser
satisfactoria. Sólo cuando el procedimiento está definido en todos sus detalles y se
tiene el convencimiento de que las condiciones descritas son idóneas para alcanzar
los resultados esperados debe iniciarse la validación. Por ello en el desarrollo previo
del método, es recomendable llevar a cabo el estudio de robustez para garantizar la
bondad del procedimiento que se quiere validar

4.3.5. ¿CUÁNDO VALIDAR UN METODO? (12)

Un método debe ser validado cuando es necesario demostrar que sus características de
desempeño son adecuadas para el uso previsto. Los métodos que serán validados son:

- Métodos no normalizados.
- Métodos diseñados/desarrollados por el laboratorio.
- Métodos normalizados usados fuera de su ámbito de aplicación.

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- Ampliaciones o modificaciones de métodos normalizados.

La validación debe ser tan amplia como sea necesaria para cumplir con los requisitos en
relación con el uso dado o la aplicación. El alcance de la validación dependerá de la
aplicación, la naturaleza de los cambios realizados y de las circunstancias en que el método
se va a utilizar.

También debe validarse cuando es necesario demostrar la equivalencia de los resultados


obtenidos por dos métodos, por ejemplo, un método recientemente desarrollado y un método
normalizados existente.

4.3.6. MÉTODOS SUSCEPTIBLES A SER VALIDADOS. (1)

Son validables los métodos analíticos clasificados en la siguiente forma:

- Ensayos de identificación.
- Ensayos para la determinación del analito de interés de una materia prima o de una
especialidad farmacéutica.
- Ensayos para la determinación de características farmacotécnicas inherentes
- Ensayos de límite de impurezas y de cuantificación de impurezas
- Ensayos para la determinación de analitos en fluidos biológicos y en productos
naturales.
- Ensayos microbiológicos.

4.4. PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS QUE SON OBJETOS DE VALIDACIÓN.

Se deben validar los siguientes procedimientos analíticos físico-químicos:

Categoría I: Pruebas cuantitativas del contenido del (los) principio(s) activo(s), constituyen
procedimientos químicos o microbiológicos que miden el (los) analito(s) presente(s) en una
muestra determinada.

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Categoría II: Pruebas para la determinación del contenido de impurezas o de valores límites
para el control de impurezas. Pueden ser pruebas cuantitativas o una prueba cualitativa para
determinar si la impureza está presente en la muestra por encima o por debajo de un valor
límite especificado. Cualquiera de los dos pretende reflejar con exactitud las características
de pureza de la muestra. Los parámetros de validación requeridos por una prueba cuantitativa
son diferentes a los de una prueba cualitativa de cumplimiento de límite.

Categoría III: Pruebas físico químicas de desempeño. Constituyen procedimientos de


ensayo que miden características propias del desempeño del medicamento, por ejemplo la
prueba de disolución. Las características de la validación son diferentes a las de las otras
pruebas, aunque las pueden incluir

Categoría IV: Pruebas de identificación. Aquellas que se realizan para asegurar la identidad
de un analito en una muestra. Esto normalmente se realiza por comparación de una propiedad
de la muestra, contra la de un estándar de referencia, por ejemplo espectros, comportamiento
cromatográfico, reactividad química y pruebas microcristalinas.

Cada categoría debe de cumplir con los siguientes parámetros de desempeño:

Tabla 1. Parámetros de desempeño de procedimientos analíticos físicos-químicos.

Categoría de pruebas Categoría I Categoría II Categoría III Categoría IV

Prueba de Prueba de
Principio(s) Fisicoquímico
límite límite Identificación
Parámetros de activo(s) de desempeño
cuantitativa cualitativa
desempeños
Exactitud SI SI * * NO
Precisión SI SI NO SI NO
Especificidad SI SI SI * SI
Límite de detección NO NO SI * NO
Límite de cuantificación NO SI NO * NO

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Linealidad SI SI NO * NO
Rango SI SI * * NO
* Puede requerirse dependiendo de la naturaleza del ensayo. (16)(23)

4.4.1. DESCRIPCIÓN DE LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO DE


VALIDACIÓN.

4.4.1.1.Exactitud.

Definición (1)

La exactitud de un procedimiento analítico expresa la proximidad entre el valor que es


aceptado convencionalmente como valor verdadero o un valor de referencia y el valor
experimental encontrado.

No deben confundirse exactitud y precisión. La precisión está relacionada con la dispersión


de una serie de mediciones, pero no da ninguna indicación de lo cerca que está del valor
verdadero. Se puede tener mediciones muy precisas pero poco exactas; sin embargo, para
que un método sea exacto se requiere un cierto grado de precisión.

Determinación (23)

En la valoración de principio activo en un producto terminado, la exactitud puede


determinarse mediante la aplicación del procedimiento analítico a mezclas sintéticas de los
componentes del producto farmacéutico al que se hayan añadido cantidades conocidas de
analito dentro del intervalo del procedimiento. Si no resulta posible obtener muestras de todos
los componentes del producto farmacéutico, se puede aceptar tanto el agregado de cantidades
conocidas del analito al producto farmacéutico (‘‘spike’’) como la comparación de los
resultados con los de un segundo procedimiento bien caracterizado, cuya exactitud haya sido
comprobada o definida.

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La exactitud se calcula como el porcentaje de recuperación de la cantidad valorada con


respecto a la cantidad conocida de analito añadida a la muestra, o como la diferencia entre la
media de la valoración y el valor verdadero aceptado, considerando los intervalos de
confianza.

Los documentos ICH recomiendan que se evalúe la exactitud utilizando un mínimo de nueve
determinaciones sobre un mínimo de tres niveles de concentración, cubriendo el intervalo
especificado (es decir, tres concentraciones y tres determinaciones repetidas de cada
concentración).

La evaluación de la exactitud puede efectuarse de varias maneras, incluyendo la evaluación


de la recuperación del analito (porcentaje de recuperación) en todo el intervalo de la
valoración, o evaluando la linealidad de la relación entre las concentraciones estimadas y las
reales. El criterio estadístico de preferencia es que el intervalo de confianza para la pendiente
esté comprendido dentro de un intervalo definido alrededor de 1,0; o alternativamente, que
el valor de la pendiente sea cercano a 1,0. En ambos casos, tanto el intervalo como la
definición de cercanía deberían especificarse respectivamente en el protocolo de validación.

4.4.1.2.Precisión. (1)

Definición

La precisión expresa el grado de concordancia (grado de dispersión) entre una serie de


medidas de tomas múltiples a partir de una misma muestra homogénea en las condiciones
prescritas.

El objetivo del estudio de la precisión es conocer la variabilidad del método de ensayo. Esta
variabilidad es debida a errores aleatorios inherentes a todo método de ensayo. Como
consecuencia de la existencia de estos errores, los análisis efectuados sobre muestras
idénticas, en las mismas circunstancias, no conducen generalmente a resultados idénticos.
Los factores susceptibles de influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser siempre

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controlados (analista, equipo instrumental, reactivos, tiempo, etc.) de aquí la importancia del
estudio de la precisión.

La precisión engloba diferentes tipos de estudios:

 Repetibilidad: estudia la variabilidad del método efectuando una serie de análisis


sobre la misma muestra en las mismas condiciones operativas (por un mismo analista,
con los mismos aparatos y reactivos, etc.), en un mismo laboratorio y en un periodo
de tiempo corto. Se evalúa la precisión del sistema instrumental así como la precisión
del método.
 Precisión intermedia: estudia la variabilidad del método efectuando una serie de
análisis sobre la misma muestra pero en condiciones operativas diferentes (diferentes
analistas, aparatos, días, etc.) y en un mismo laboratorio.
 Reproducibilidad: estudia la variabilidad del método bajo condiciones operativas
diferentes y en distintos laboratorios.

La precisión de un método analítico se expresa generalmente como el coeficiente de variación


de una serie de medidas.

En la siguiente tabla se resumen los factores que pueden o no pueden variar en el estudio de
la repetibilidad, precisión intermedia y la reproducibilidad.

Tabla 2. Factores que pueden o no pueden variar en el estudio de la repetibilidad, precisión intermedia
y la reproducibilidad.

Precisión
Repetibilidad Reproducibilidad
intermedia
Instrumento Igual diferente diferente
Día Igual diferente diferente
Analista Igual diferente diferente
Otros factores (reactivos, condiciones
Igual diferente diferente
ambientales, etc.)
Laboratorio Igual igual diferente

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Determinación

Según la ICH Q2B el estudio de la precisión se debe realizar únicamente para la


determinación cuantitativa de principios activos y cuantificación de impurezas. Por lo tanto
la evaluación de la precisión no es necesaria ni en el ensayo de identificación ni en el test
límite de impurezas.

- Repetibilidad

La repetibilidad se expresa matemáticamente por el coeficiente de variación (desviación


estándar relativa) de una serie de medidas.

Uno de los factores que más pueden influir en la repetibilidad del método de análisis es la
concentración del analito, ya que la desviación estándar de las respuestas obtenidas aumenta
al disminuir la concentración del analito.

 Repetibilidad del sistema instrumental: este parámetro estudia la variabilidad


debida únicamente al instrumento, y se determina analizando repetidamente una
misma muestra de forma consecutiva de 6 a 10 veces. En el caso que se desee
analizar el principio activo de una materia prima o de una especialidad
farmacéutica se prepara la muestra a la concentración nominal.
 Repetibilidad del método: el ensayo de repetibilidad del método se efectúa
sobre una serie de alícuotas de una muestra homogénea que se analiza
independientemente desde el principio (preparación de muestra) hasta el final
(lectura de resultados) por el mismo instrumento y el mismo analista.

- Precisión intermedia

El objetivo del estudio de la precisión intermedia es determinar la variabilidad del método


efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra, en un mismo laboratorio pero en
condiciones operativas diferentes.

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En el estudio de la precisión intermedia se deben considerar aquellas circunstancias en las


que se pretende desarrollar el método de ensayo. El analista debe evaluar los efectos causados
al variar una serie de factores. Típicos factores a estudiar incluyen el día, el analista, el
instrumento, etc. No es necesario estudiar cada uno de estos factores individualmente sino
que es suficiente comprobar que la variabilidad aportada por el conjunto de factores está
dentro de los límites establecidos.

Para estudiar los factores de una manera aleatoria se recomienda un estudio matricial y para
cada combinación de éstos, las muestras deben ser preparadas independientemente como
mínimo por triplicado.

El siguiente modelo es un diseño experimental donde se estudia la variación de los factores:


día de análisis, analista e instrumento. En este modelo se presenta el caso particular de
determinar la variación de los resultados obtenidos al considerar dos analistas, dos
instrumentos y realizando el análisis tres días diferentes.

Tabla 3. Variación de los factores: analista, día e instrumento en la determinación de la precisión


intermedia.

Instrumento A Analista X Día 1 Día 2 Día 3


Analista Y Día 1 Día 2 Día 3
Instrumento B Analista X Día 1 Día 2 Día 3
Analista Y Día 1 Día 2 Día 3

La estimación de la precisión intermedia se realiza con el cálculo del coeficiente de variación


global de las respuestas obtenidas, es decir, considerando cada resultado
independientemente.

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4.4.1.3.Especificidad. (1)

Definición

Capacidad de un método analítico para medir y/o identificar simultánea o separadamente los
analitos de interés, de forma inequívoca, en presencia de otras sustancias químicas que
puedan estar presentes en la muestra.

Frecuentemente el término especificidad se utiliza como sinónimo del anterior, aunque


debería reservarse para aquellas situaciones donde la respuesta obtenida sólo se puede
producir con una única entidad química, algo que no es posible cuando se refiere a
procedimientos analíticos que emplean instrumentación no especifica. Como existen muy
pocos métodos que den respuesta solo a un único analito, el término selectividad es
normalmente más apropiado.

La presencia de interferencias puede tener distintos efectos en la determinación del analito


como:

 Imposibilitar su inequívoca identificación (aparición de falsos positivos).


 Distorsionar la respuesta del analito (afectan normalmente a la pendiente y ordenada
en el origen de la recta de calibrado). Este efecto puede delatar la presencia de
interferencias desconocidas, aunque también puede ser consecuencia de
recuperaciones no lineales.

La selectividad de un método analítico se debería determinar antes de iniciar el estudio de


cualquier otro parámetro de validación, dado que debe conocerse en qué grado la respuesta
del método es únicamente proporcionada por el analito, sin interferencia de otras sustancias
relacionadas con él de una u otra forma.

Determinación

El parámetro de la selectividad es uno de los más importante en la validación de métodos ya


que en el análisis farmacéutico la tendencia mayoritaria es la utilización de métodos lo más

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selectivo posible, en el caso de presencia de otros componentes estos deben de tener escasa
influencia en los resultados. Se debe tener la máxima información sobre impurezas,
potenciales productos de degradación y posible interferencia de excipientes presentes en la
muestra.

En la aplicación de la selectividad para ensayos de cuantificación de un compuesto o


principio activo el método debe evitar la interferencia de excipientes, productos de
degradación y/o impurezas en la respuesta proporcionada por el compuesto o el principio
activo objeto de la evaluación analítica.

- Adición de interferencias

Se aplica a aquellos analitos para los que se tienen identificadas las posibles interferencias y
éstas se encuentran disponibles de forma aislada. En estos casos se puede comprobar la
selectividad comparando los resultados del análisis de muestras con y sin analito en presencia
o ausencia de dichas interferencias. Se evaluar a que nivel se producen y si es preciso
modificar el método o añadir alguna técnica complementaria.

Para una forma farmacéutica y una materia prima los grupos de muestras que se preparan
normalmente serían los siguientes:

Tabla 4. Grupos de muestras que normalmente se preparan las formas farmacéuticas y materia prima.

DETERMINACIÓN PARA LA FORMA DETERMINACIÓN PARA LA MATERIA


FARAMACÉUTICA PRIMA
Matriz Blanco
Analito Analito
Matriz + Analito Otra sustancias similares
Matriz + Analito + Impurezas (Disolventes Analitos + Productos de degradación +
residuales, trazas metálicas) + Productos de Impurezas (Disolventes residuales, trazas
degradación… metálicas, reactivos de síntesis)…

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La elección de la concentración en la que se realiza el estudio podría ser la teórica de trabajo


para el principio activo u otros compuestos de interés y las interferencias a su límite máximo
establecido. En caso de que se observen interferencias, su nivel puede evaluarse a partir del
análisis de seis replicados y el grado de discrepancia entre las determinaciones en presencia
o ausencia de las posibles interferencias, mediante la fórmula siguiente:

Di - Ds
% de discrepancia = * 100
Ds

Donde:

Di: Absorbancia con interferencia (solución de placebo cargado).

Ds: Absorbancia sin interferencia (solución estándar).

4.4.1.4.Linealidad y Rango.

Definición (1)

La linealidad es la capacidad del método para proporcionar resultados que son directamente
(o por medio de transformaciones matemáticas) proporcionales a la concentración del analito
en la muestra dentro de un rango establecido. Siempre que sea posible se buscará una
respuesta de tipo lineal que facilitará su trazado, interpelación e interpretación.

El rango se define como el intervalo entre la concentración superior e inferior de analito para
el cual se ha demostrado la correcta precisión, exactitud y linealidad del método descrito.

Aunque el proceso lógico consistiría en evaluar cuáles son los límites de concentración en
los que el método analítico pierde su linealidad, normalmente se toma como punto de partida
un intervalo de concentraciones ya establecido de acuerdo con la experiencia, el
conocimiento analítico de la técnica empleada y principalmente en función de las
especificaciones.

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Determinación (23)

La linealidad debe establecerse en el intervalo completo del procedimiento analítico. Debería


establecerse inicialmente mediante examen visual de un gráfico de señales como función de
concentración de analito del contenido. Si parece existir una relación lineal, los resultados de
la prueba deberían establecerse mediante métodos estadísticos adecuados (por ejemplo,
mediante el cálculo de una línea de regresión por el método de los cuadrados mínimos). Los
datos obtenidos a partir de la línea de regresión pueden ser útiles para proporcionar
estimaciones matemáticas del grado de linealidad. Se deberían presentar el coeficiente de
correlación, la intersección con el eje de ordenadas, la pendiente de la línea de regresión y la
suma de los cuadrados residuales.

El intervalo del procedimiento se valida verificando que el procedimiento analítico


proporciona precisión, exactitud y linealidad aceptables cuando se aplica a muestras que
contienen el analito en los extremos del intervalo, al igual que dentro del intervalo.

La ICH recomienda que, para establecer la linealidad, se utilicen normalmente un mínimo de


cinco concentraciones. También recomienda que se consideren los intervalos especificados
mínimos de 80% a 120% de la concentración de prueba.

4.4.1.5.Robustez. (1)

Definición

La robustez de un método analítico es la medida de su capacidad para permanecer inalterado


ante pequeñas pero deliberadas variaciones en ciertos parámetros, proporcionando idea de su
fiabilidad o "estabilidad" durante su empleo en rutina. Es por tanto la capacidad que
demuestra el procedimiento de análisis para proporcionar resultados válidos en presencia de
pequeños cambios respecto de las condiciones descritas en el método, susceptibles de
producirse durante su utilización.

La robustez (Robustness) no debe confundirse con el término Ruggedness. El termino


Ruggedness es el grado de reproducibilidad de los resultados mediante el análisis de las

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mismas muestras bajo una variedad de condiciones tales como diferentes laboratorios,
diferentes analistas, diferentes instrumentos, lotes de reactivos, días, tiempos, diferentes
temperaturas, etc. Es decir, se sigue el método analítico dentro de los parámetros
especificados en él, pero introduciendo en las condiciones experimentales las variaciones
habituales de laboratorio a laboratorio. Da una idea de la influencia que tienen las variables
ambientales y operacionales del método en los resultados, por lo que podría asimilarse al
término reproducibilidad.

Determinación

La robustez se define junto con los parámetros de validación de un método analítico, no es


considerado, todavía, un requisito necesario para registro de especialidades, sino que se trata
de un estudio que surgió con el fin de resolver los problemas que se planteaban en la
transferencia de métodos analíticos entre laboratorios. En estas circunstancias era frecuente
que algún parámetro del método sufriera una variación que provocaba serias dificultades en
la equivalencia entre los resultados de ambos centros de análisis, de modo que con el fin de
identificar los factores potencialmente críticos surgió la necesidad de evaluar las fuentes de
variación del método de análisis.

Todos los métodos, sea cual sea la técnica empelada, son susceptibles de ser sometidos a un
estudio de robustez, algunos pueden tener muchos parámetros sobre los que actuar y otros
menos, además estos no tiene por qué ser solo factores relacionados con la medida final, sino
que pueden ser de cualquier etapa del procedimiento analítico, como por ejemplo la
preparación de la muestra. Por esto, la primera etapa del estudio es precisamente analizar
todo el método y definir qué factores son los que se esperan que influyan más en el resultado.

Antes de definir los factores de variación, hay que establecer donde se quieren estudiar su
influencia. Dicho de otra forma, que parámetros se van a medir en cada ensayo.

En el caso de un análisis cuantitativo resulta evidente que se debe analizar la influencia de


cada variable sobre la concentración analítica calculada. El estudio de la influencia sobre

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varios parámetros nunca implica la realización de más ensayos, si no que puede hacer a partir
de los mismos.

Los factores a evaluar en cualquier método de análisis puede ser cuantitativos (influencia del
valor de pH del solvente, valor de la temperatura ambiental, en algunos casos influencia de
la luz, etc.) como cualitativos (fabricante de la celda de validación, fabricante de un
determinado reactivo o cristalería, etc.).

- Factores que pueden variar para la técnica analítica UV-Vis para determinar la
robustez:
 La celda de validación.
 El equipo UV-Vis.
 El solvente (proporción de mezcla de solvente, concentración del solvente, pH
del solvente, ect.).
 La longitud de onda de máxima absorción del analito.

La robustez de un método decidido a encontrar la influencia de las fluctuaciones leves de las


condiciones de un determinado método analítico sobre el resultado de la determinación final.
Esta permite identificar las variables que tendrían un efecto significativo en el desempeño de
un método de análisis dado, cuanto mayor es la influencia de pequeños cambios en los
parámetros de los procesos de medición en los resultados de la determinación final, mayor
será la desviación del método.

Es por eso que la robustez es un parámetro relativo en los cambios de las condiciones
internas, sin embargo, la resistencia (flexibilidad) es uno de los parámetros que describe la
utilidad de un determinado método de análisis en diferentes condiciones, puede ser estimado
a partir de la reproducibilidad.

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4.4.1.6.Idoneidad.

Definición (1)

Consiste en un conjunto de ensayos que permiten comprobar en el momento de utilización


del método, que el sistema, (analista, reactivos e instrumental) es adecuado para llevar a cabo
la determinación para la que se ha establecido y validado dicho método. Por lo tanto, el test
de idoneidad del sistema se ha de entender como parte integrante del procedimiento de
análisis y requisito previo a su realización.

Determinación (1)

El test de idoneidad del sistema es susceptible de emplearse en cualquier procedimiento de


medida en el que las condiciones analíticas puedan estar sometidas a variación de las
condiciones operacionales.

Este test no so1o debe circunscribirse al ámbito de la determinación final sino que puede
diseñarse con el fin de comprobar la idoneidad de cualquier etapa del procedimiento, como
por ejemplo la preparación de la muestra.

Los ensayos de idoneidad del sistema que se establezcan vendrán dados por el conocimiento
adquirido del método y la viabilidad de su empleo en rutina debiendo corresponderse con los
valores mínimos para los que los parámetros estudiados permanecen dentro de las
especificaciones establecidas.

Estos ensayos no sólo demuestran que el sistema se encuentra en perfectas condiciones para
realizar el análisis sino que también permiten establecer el criterio por el que modificar las
condiciones analíticas descritas en el procedimiento con el fin de alcanzar la idoneidad.

Los parámetros para determinar la idoneidad del sistema en ensayos de cuantificación por
métodos espectrofotométricos se pueden agrupar en 2 categorías:

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- Precisión de la idoneidad del sistema

Se evalúa mediante el cálculo del coeficiente de variación de los resultados obtenidos tras el
análisis de una serie de replicados de una muestra. La USP 24 establece como criterio un
coeficiente de variación igual o inferior al 2% en las lecturas de 5 replicados (o realizarlo
sobre 6 replicados si el requerimiento es superior al 2%). (1)

- Parámetros espectrofotométricos

 Exactitud de la longitud de onda (Espectral): es el grado de concordancia entre


la longitud de onda de máxima absorción de una sustancia y la longitud de onda
de máxima absorción de referencia de dicha sustancia. (4) Verificar la exactitud
de la longitud de onda utilizando las longitudes de máximas de absorción de la
solución estándar de perclorato de holmio. (6)

Tabla 5. Criterio de aceptación para la exactitud de la longitud de onda.

Región Longitud de máxima absorción teórica Rango de aceptación


241.15 nm 240.15 nm – 242.15 nm
Ultravioleta 287.17 nm 286.17 nm – 288.17 nm
361.5 nm 360.5 nm – 362.5 nm
Visible 536.3 nm 533.3 nm – 539.3 nm

 Linealidad fotométrica: es la capacidad de respuesta lineal de un


espectrofotómetro a diferentes concentraciones de una misma sustancia a la
(4)
misma longitud de onda cumpliendo la ley de Lambert-Beer. Preparar
soluciones estándar de dicromato de potasio a concentraciones de 20, 40, 60,
80 y 100 mg/mL en ácido sulfúrico 0.005 M y determinar los valores de
absorbancia leídas a las longitudes de onda de 235, 257, 313 y 350 nm.
Coeficiente de variación debe ser mayo a 0.99%. (21)

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 Exactitud fotométrica: es el grado de concordancia entre la absorbancia de una


sustancia de referencia y la absorbancia obtenida en la lectura de dicha
(4)
sustancia. Comprobar la exactitud fotométrica utilizando una solución
estándar de dicromato de potasio a las longitudes de onda indicadas en la tabla,
calcular la absortividad específica y comparar los valores para cada longitud de
onda el valor exacto y los límites permitidos de la absortividad específica. (6)

Tabla 6. Criterio de aceptación para la exactitud fotométrica.

Parámetros evaluados Especificación


Longitud de onda (nm) E (1%, 1cm)
235 124.5 122.9 – 126.2
257 144.5 142.8 – 146.2
313 48.6 47.0 – 50.3
350 107.3 105.6 – 109.0


Precisión fotométrica: es la medida de la dispersión de una serie de mediciones
(4)
de absorbancia o transmitancia alrededor de la media. Se puede determinar
leyendo una solución estándar de 60 mg de dicromato de potasio en 1000 mL
de ácido sulfúrico 0.005 M a longitudes de onda de 235 nm, 257 nm, 313 nm y
350 nm y calcular el coeficiente de variación que debe ser menor que 1.0%. (6)

 Luz dispersa: luz detectada a cualquier longitud de onda que cae fuera de la
anchura de banda de la longitud de onda seleccionada. (19) Se puede comprobar
la luz dispersa determinando la absorbancia de una solución estándar de cloruro
de potasio de 12 g/L en una celda de 1 cm a 200 nm siendo mayor que 2,0
cuando se compara con el agua como líquido de compensación. (6)

 Resolución: es la habilidad que tiene el espectrofotómetro para diferenciar


(19)
entre dos longitudes de onda adyacentes. Registre el espectro de una
solución estándar de tolueno en hexano 0.02% V/V. La relación mínima de la
absorbancia en el máximo a 269 nm con respecto a la de mínimo en 266 nm se

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indica en la monografía. Calcular la diferencia de las absorbancia con la


siguiente ecuación: (21)

R= Aλmáx/Aλmin
Tabla 7. Criterio de aceptación para la resolución.

Parámetros evaluados Especificación


R= Aλmáx/Aλmin > 1.5

4.5. PASOS PARA LA VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO. (5)

Cada validación de un procedimiento consiste en tres pasos:

- Establecimiento del protocolo de validación.


- Realización de la validación.
- Elaboración del informe de validación.

4.5.1. ESTABLECIMIENTO DEL PROTOCOLO DE VALIDACIÓN.

El protocolo de validación deberá contener al menos la siguiente información:

1- Debe incluir una identificación única o código.


2- El objetivo y alcance.
3- Responsables de las actividades de validación.
4- La definición del sistema a validar.
5- Procedimiento para la identificación de los parámetros a validar.
6- El diseño del plan experimental (incluyendo el muestreo si aplica).
7- Equipos y su calificación adecuada al uso (incluye trazabilidad).
8- Descripción del método.
9- Los criterios de aceptación.
10- Debe ser específico para cada tipo de muestra y método.
11- Debe ser firmado y fechado por las personas responsables de la validación y aprobación.

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- Objetivo: exposición de la finalidad de la validación y propuestas de fechas de inicio


y finalización de la evaluación.) .
- Alcance: delimitación de tipo de muestra, matriz, analito, rango de concentración,
técnica analítica, etc.) Formula cuali-cuantitativa cuando aplique. Aplica en casos de
análisis de formulación conocida.
- Responsables: personal a cargo de la validación: Analista(s), responsable(s) de la
Validación, Jefe de Laboratorio, Responsable de Calidad. Debidamente autorizado
para tal fin.
- Procedimiento para la determinación de los parámetros a validar: los parámetros de
desempeño a estudiar se seleccionan en función de las características de la muestra,
tipo de método analítico y rango de concentración del analito.
- Muestreo: el muestreo se realiza de acuerdo con procedimientos escritos, (si aplica)
en los cuales se indican los sistemas de identificación y tratamiento previo de las
muestras, si se precisan placebos. (En caso de análisis de formulación conocida).
- Equipos involucrados en la validación: se mencionan los equipos implicados en el
proceso de validación (pHmetros, balanzas, cromatógrafos, etc.), y documentar que
están convenientemente calificados y adecuados a la mediciones a realizarse y
calibrados, referenciando estos datos en el informe de validación.
- Descripción del método analítico: debe describirse el método tal cual será puesto en
el uso rutinario, detallando todos los elementos abajo mencionados, y haciendo
énfasis en puntos críticos de la metodología, condiciones instrumentales y número de
repeticiones, verificación de idoneidad de las condiciones operatorias definidas,
fórmulas para el cálculo de resultados y su tratamiento estadístico si es necesario,
bibliografía y referencias.
 Reactivos
 Estándares
 Materiales
 Instrumentación
 Condiciones ambientales
 Medidas de seguridad para el uso de reactivos

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 Preparación de reactivos
 Preparación de estándares
 Preparación de la muestra
 Procedimiento
 Cálculos

- Criterios de aceptación: se establecerá a priori para cada uno de los parámetros,


basándose en las necesidades o finalidad del método y en la información recogida
durante la fase de desarrollo del procedimiento analítico.

4.5.2. REALIZACIÓN DE LA VALIDACIÓN.

Una vez se ha aprobado el protocolo se procede a hacer la validación de acuerdo al mismo.


Aquí se incluye el proceso de cálculo estadístico de los distintos parámetros evaluados.

4.5.3. ELABORACIÓN DEL INFORME DE VALIDACIÓN.

El informe de validación contendrá la información suficiente para poder concluir acerca de


la validación que se ha desarrollado. Debe incluir:

1- Protocolo de validación (o hacer referencia al mismo a través de un código).


2- Resultados Analíticos.
3- Resultados Estadísticos.
4- Interpretación de resultados.
5- Conclusiones.
6- Declaración de aptitud del Método al uso previsto y
7- Cuando aplique el certificado de validación el cual podrá incluir:
 Analito evaluado
 Matriz o matrices ensayadas
 Técnica utilizada

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 Documentos relacionados (protocolos, procedimientos, instrucciones de


trabajo)
 Rango Validado
 Cuadro resumen con los resultados de los parámetros de desempeño evaluados.
 Analistas autorizados para la realización del ensayo.

Además será autorizado por o las personas asignadas por el laboratorio.

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GENERALIDADES DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA

4.6. CONCEPTOS GENERALES DE ESPECTROFOTOMETRÍA.

La espectroscopia estudia las interacciones de la radiación con la materia, miden la cantidad


de radiación que producen o absorben las especies moleculares o atómicas de interés. (22)

Los métodos espectroscópicos se clasifican según la región del espectro electromagnético


utilizado para las mediciones. Las regiones del espectro que se han utilizado abarcan los
rayos gamma, rayos X, radiación ultravioleta (UV), radiación infrarroja (IR), microondas y
radiofrecuencias. (22)

La espectrofotometría ultravioleta es el conjunto de técnicas que utilizan la luz para medir


concentraciones químicas en la región visible del campo electromagnético. Se utiliza para la
cuantificación de especies orgánicas, inorgánicas y bioquímicas. (8)

La espectrofotometría ultravioleta se basa en la interacción de luz radiante con grupos


funcionales orgánicos no saturados, denominados grupos cromóforos, de las sustancias a
longitudes de 180 a 380 nm en el espectro electromagnético. (22)

4.6.1. PROPIEDADES DE LA LUZ. (22)

La radiación electromagnética es una forma de energía que se transmite por el espacio a


enorme velocidad, en la región ultravioleta a la radiación electromagnética se le denomina
luz.

La radiación electromagnética puede describirse como una onda electromagnética que posee
las siguientes características:

- Amplitud: es una cantidad vectorial con la que se mide la fuerza del campo eléctrico
o magnético en un punto máximo de la onda.
- Periodo: es el tiempo en segundos necesarios para que máximos o mínimos sucesivos
crucen un punto en el espacio.

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- Frecuencia: es el número de oscilaciones que ocurren en 1 s.


- Longitud de onda: es la distancia lineal entre un máximo o mínimo sucesivos de una
onda.
- Número de onda: Es número de ondas por centímetros.

4.6.2. PROCESO DE ABSORCIÓN DE LUZ. (22)

En la espectroscopia se emplea la interacción de la radiación, como se dijo anteriormente en


la región visible se le denomina luz, con la materia para obtener información sobre la muestra,
la muestra es estimulada al aplicar energía en forma de luz en el que pasa de su estado de
energía más bajo o estado fundamental a un estado de mayor energía o estado excitado, se
obtiene información sobre el analito al medir la luz emitida conforme regresa al estado
fundamental o al cuantificar la luz que se absorbe como resultado de la excitación.

En la espectrofotometría de absorción se mide la cantidad de luz absorbida en función de la


longitud de onda lo que proporciona información cuantitativa y cualitativa sobre la muestra,
estos resultados suele expresarse gráficamente como un espectro, que es una gráfica de la luz
absorbida en función de la longitud de onda.

Un espectro de absorción es una gráfica de la absorbancia frente a la longitud de onda.

4.6.3. ESPECIES ABSORBENTES. (22)

La absorción de radiación ultravioleta por parte de las moléculas ocurre en una o más bandas
de absorción electrónicas, cada una de las cuales se compone de muchas líneas muy juntas
pero discretas. Cada línea surge de la transición de un electrón del estado fundamental a uno
de los muchos estados de energía vibratorio y rotario relacionados con cada estado de energía
electrónica excitado.

La absorción de radiación por moléculas orgánicas en la región de longitud de onda entre


180 y 780 nm resulta de la interacción de fotones y electrones que participan de manera

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directa en la formación de enlace o que se localizan en torno a átomos como los de oxígeno,
azufre, nitrógeno y halógenos.

La longitud de onda a la que absorbe una molécula orgánica depende de la fortaleza de los
enlaces de sus electrones. Los electrones compartidos en los enlaces simples carbono-
carbono o carbono-hidrógeno están sujetos con tal firmeza que su excitación requiere
energías que corresponden a la longitud de onda de la región ultravioleta al vacío inferior a
180 nm.

Los electrones de enlaces dobles y triples de moléculas orgánicas se sujetan con menos
fuerza, por tanto, se excitan mediante radiación con más facilidad. Los grupos funcionales
orgánicos no saturados que absorben en las regiones ultravioleta se llaman cromóforos, como
por ejemplo alquenos, alquinos, carbonilos, carboxilos, amino, nitroso, nitrato, aromáticos,
etc.

Los compuestos orgánicos saturados que contiene heteroátomos, como el oxígeno, nitrógeno,
azufre o halógenos poseen electrones no compartidos que se pueden excitar mediante
radiación en el intervalo de 170 a 250 nm.

4.6.4. FACTORES QUE DEPENDE LA ABSORBANCIA. (7)

Los factores por los cuales puede variar la absorción de luz en un analito son:

- Longitud de onda de máxima absorción.


- Solvente.

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Figura 2. Variación del espectro de absorción de un mismo analito en distintos solventes.

- pH (cuando la sustancia es un ácido o una base).

Figura 3. Variación del espectro de absorción de un mismo analito en distintos pH.

- Temperatura (en extensiones relativamente pequeñas).

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Es importante que estos parámetros sean los mismos para las soluciones estándar y la
solución de muestra. Si no es así, pueden producirse errores significativos en las
determinaciones cuantitativas.

Cuando es imposible producir soluciones estándar dentro del mismo disolvente y pH como
en la solución de muestra, la calibración es ligeramente más complicada. Esto se debe a que
la absortividad de la sustancia en la solución patrón puede ser diferente de la de la solución
de muestra. En tales situaciones debe utilizarse una adición estándar. En una adición estándar
se añade una cantidad conocida de una sustancia de referencia química del analito a la
solución de muestra y la absorbancia se mide tanto antes como después de la adición de la
sustancia de referencia. Entonces, la concentración de analito se calcula de acuerdo con la
ley de Beer. Con una adición estándar, la calibración se realiza directamente en la solución
de muestra para evitar cualquier variación experimental entre las soluciones muestras y las
soluciones estándar de disolvente, el pH y la posible presencia de otras sustancias.

4.7. LEY DE BEER. (22)

La ley de la absorción, también llamada ley de Beer-Lambert o simplemente la ley de Beer,


indica cuantitativamente la forma en que el grado de atenuación depende de la concentración
de las moléculas absorbentes y de la longitud del trayecto en el que ocurre la absorción.
Cuando la luz atraviesa un medio que contiene un analito absorbente, disminuye su
intensidad como consecuencia de la excitación del analito. Cuanto más largo sea el medio
por el que pasa la luz (longitud del trayecto de la luz), en el caso de una solución del analito
de concentración dada, existirán más moléculas o átomos absorbentes en el trayecto y, por
tanto, mayor será la atenuación. Además, para una longitud de trayecto dada de la luz, cuanto
mayor sea la concentración de los átomos o moléculas absorbentes, tanto mayor será la
atenuación.

La atenuación de un haz paralelo de radiación monocromática en su paso por una solución


absorbente con un grosor de b cm y con concentración c mol/L es provocado por las
interacciones de los fotones con las partículas absorbentes debido a esto la fuerza radiante

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del haz se reduce de Po a P (donde Po es la intensidad del haz de luz incidente en la muestra
y P es la intensidad del haz de luz incidente transmitida por la muestra).

Figura 4. Absorción y trasmisión de luz en una solución.

La transmitancia T de la solución es la fracción de radiación incidente que se transmite en la


solución. Es frecuente que se exprese como porcentaje, denominado porcentaje de
transmitancia.

T = P⁄Po

Ecuación de la transmitancia.

- Absorbancia

La absorbancia A de una solución se relaciona con la transmitancia de manera logarítmica.

A = -log T = log Po⁄P

La transmitancia se reduce a medida que aumenta la absorbancia de la solución y viceversa.

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- Ecuación de la ley de Beer

Según la ley de Beer, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de la


especie absorbente c y a la longitud del trayecto b del medio de absorción, como se expresa
en la ecuación:

A = log Po⁄P = 𝑎𝑏𝑐

Aquí, a es la constante de proporcionalidad llamada absortividad. Dado que la absorbancia


es una cantidad sin unidad la absortividad debe tener unidades que elimine a las de b y c. Por
ejemplo, si c tiene como unidades g L-1, y b tiene cm, la absortividad posee las unidades de
L g-1 cm-1.

Cuando se expresa la concentración de la ecuación con moles por litro, y b en centímetros,


la constante de proporcionalidad se llama absortividad molar y recibe el símbolo especial ɛ.
Así,

A = ɛ𝑏𝑐

Donde ɛ tiene las unidades L mol-1 cm-1.

4.7.1. APLICACIONES DE LA LEY DE BEER.

La ley de Beer puede emplearse de diversas maneras, es posible calcular la absortividad


molar de especies cuando se conoce la concentración. También puede calcularse la
concentración empleándose el valor de la absorbancia medido si se tienen los valores de la
absortividad y longitud del trayecto. Sin embargo, la absortividad es en función de variables
como el disolvente, la composición de la solución y temperatura. Dadas las variaciones de la
absortividad según las condiciones de medida, no es aconsejable depender de valores de la
literatura para trabajos cuantitativos. Así pues, se utiliza una solución patrón de analito en el
mismo disolvente y a temperatura similar para obtener la absortividad en el momento del
análisis. Lo más frecuente es recurrir a una serie de soluciones patrón del analito para
preparar un curva de calibración de la absorbancia frente a la concentración y así obtener una

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ecuación de regresión lineal. Podría ser necesario duplicar la composición general de la


solución del analito para compensar los efectos de la matriz. En ocasiones se recurre al
método de adición estándar para el mismo propósito.

4.7.2. LIMITACIONES DE LA LEY DE BEER.

4.7.2.1.Limitaciones reales de la ley de Beer.

La ley de Beer describe el comportamiento de absorción sólo en soluciones diluidas y, en


este sentido, es una ley límite. En concentraciones superiores a 0.01 M, la distancia promedio
entre los iones o moléculas de la especie absorbente disminuye hasta tal punto que cada
partícula afecta a la distribución de carga, y por tanto a la magnitud de la absorción, de las
partículas vecinas. La magnitud de la interacción depende de la concentración, por lo que la
aparición de este fenómeno causa desviaciones en la relación lineal de la absorbancia con la
concentración. En ocasiones, ocurre un efecto similar en soluciones diluidas de absorbentes
que tiene concentraciones muy altas de otras especies, en particular de electrolitos. Cuando
los iones están muy ceca unos de otros, la absortividad molar del analito puede alterarse
debido a las interacciones electrostáticas, lo que da lugar a desviaciones respecto de la ley de
Beer.

4.7.2.2.Desviaciones químicas.

Estas aparecen cuando la especie absorbente experimenta asociación, disociación o reacción


con el disolvente y se generan productos cuya absorción es diferente a la del analito. La
magnitud de tales desviaciones puede predecirse a partir de la absortividad molar de las
especies absorbente y de las constantes de equilibrio de las reacciones. Los equilibrios
característicos que originan este efecto abarcan los equilibrios de monómero-dímero, de
complejación metálica con más de un tipo de complejo, los equilibrios ácido-base y de
asociación del disolvente-analito.

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4.7.2.3.Desviaciones instrumentales.

- Radiación policromática

La ley de Beer se aplica en sentido estricto sólo cuando se realizan medidas con radiación
monocromática. En la práctica se utilizan las fuentes policromáticas, con distribución
continua de longitudes de onda, junto con una rendija, o un filtro para aislar una banda casi
simétrica de longitudes de onda en torno a la longitud que se requiere.

- Luz parásita

La radiación parásita, normalmente denominada luz parásita, se define como la radiación


debida al instrumento y que está fuera dela banda de longitud de onda nominal seleccionada
para la medida. Esta radiación parásita proviene de la dispersión y reflexión de la superficie
de las rejillas, lentes o espejos, filtros y ventanas.

4.7.2.4.Celdas distintas.

Si las celdas que contienen las soluciones del analito y del blanco no son de igual longitud
de trayecto ni equivalentes en sus características ópticas, ocurre un intersección en la curva
de calibración, éste error puede evitarse empleando celdas iguales o con un procedimiento
de progresión lineal para calcular la pendiente e intersección de la curva de calibración. En
la mayoría de los casos, esta última es la mejor estrategia, ya que también puede presentarse
este tipo de error si la solución blanco no compensa por completo las interferencias. Otra
forma de evitar el problema de celdas ópticamente distintas es instrumentos de un solo haz
consiste en emplear sólo una celda y mantenerla en la misma posición para las medidas del
blanco y el analito. Después de obtener la lectura del blanco, se vacía la celda por aspiración,
se lava y se llena con la solución del analito.

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4.8. INSTRUMENTACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA. (3)

Un espectrofotómetro es un instrumento que descompone la radiación policromática en


distintas longitudes de onda el cual consta de: 1) una fuente de radiación continua en las
longitudes de onda que interesan; 2) un monocromador para seleccionar una banda angosta
de longitudes de onda del espectro de la fuente; 3) una celda para la muestra; 4) un detector
o transductor, para convertir energía radiante en energía eléctrica, y 5) un instrumento para
interpretar la respuesta del detector. La muestra puede estar antes o después del
monocromador.

Figura 5. Componentes de un espectrofotómetro ultravioleta.

4.8.1. FUENTE DE LUZ.

La fuente debe tener una producción de radiación fácilmente detectable en la región de


longitudes de onda para la cual está diseñado el instrumento. Sin embargo, ninguna fuente
tiene una emisión espectral constante.

Para la región ultravioleta, en general se usa como fuente un tubo de descarga de hidrógeno
o de deuterio a baja presión. Los dos se pueden usar desde 185 hasta 375 nm, pero la fuente
de deuterio tiene unas tres veces la salida espectral de la de hidrógeno. Las fuentes de
ultravioleta deben tener una ventana de cuarzo, porque el vidrio no es transparente a esa
radiación. Con frecuencia tienen enfriamiento por agua para disipar el calor generado.

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4.8.2. MONOCROMADOR.

Un monocromador está formado principalmente por lentes o espejos que enfocan la radiación
por rendijas de entrada y salida que restringen radiación indeseable y ayudan a controlar la
pureza espectral que emite el monocromador, y por un medio dispersante para “separar” las
longitudes de onda de la radiación policromática procedente de la fuente. Hay dos tipos
básicos de elementos dispersores: el prisma y la rejilla de difracción.

- Prismas

Cuando la radiación electromagnética atraviesa un prisma se refracta debido a que el índice


de refracción del material del prisma es diferente al del aire. El índice de refracción depende
de la longitud de onda, y por tanto el grado de refracción también. Las longitudes de onda
cortas se refractan más que las mayores. El efecto de la refracción consiste en “dispersar” la
radiación en sus diferentes longitudes de onda. Al girar el prisma se puede hacer que por una
rendija de salida pasen diferentes longitudes de onda y lleguen a la muestra. Un prisma
funciona en forma satisfactoria en las regiones de ultravioleta y visible, y también se puede
usar en la región infrarroja. Sin embargo, debido a su dispersión no lineal, éste opera con
mayor eficacia en las longitudes de onda menores. En la región ultravioleta se pueden usar
prismas y lentes de cuarzo o sílice fundido.

- Rejillas de difracción

Se componen de una gran cantidad de líneas (ranuras) paralelas trazadas en una superficie
muy pulida, como de aluminio; para las regiones ultravioleta y visible son de 15000 a 30000
líneas por pulgada. Las ranuras funcionan como centros de dispersión para los rayos que
llegan a la rejilla. El resultado es una dispersión igual para todas las longitudes de onda, con
determinado orden; esto es, la dispersión es lineal. El poder de resolución depende de la
cantidad de ranuras trazadas, pero en general el poder de resolución de las rejillas es mejor
que el de los prismas, y las rejillas se pueden usar en todas las regiones del espectro. Se

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adaptan en particular a la región infrarroja debido a su dispersión homogénea de las


longitudes de onda grandes.

4.8.3. CELDAS PARA MUESTRAS

La celda que contiene a la muestra (en general una solución), naturalmente debe ser
transparente en la región de longitudes de onda que se esté midiendo. El material más
utilizado para celda que se van a utilizar en la región ultravioleta es el cuarzo. Las celdas que
usan los espectrómetros en visible y ultravioleta suelen ser prismas rectangulares huecos de
1 cm de ancho entre sus paredes paralelas internas, aunque pueden usarse celdas de diversas
longitudes de paso y volúmenes.

4.8.4. DETECTORES UV-Vis

- Fototubo

Un fototubo o fotocelda es de uso común en las regiones ultravioleta y visible. Éste consiste
de un cátodo fotoemisor y un ánodo. Se aplica un alto voltaje entre ánodo y cátodo. Cuando
un fotón entra por la ventana del tubo y llega al cátodo se emite un electrón que es atraído
hacia el ánodo, haciendo que pase una corriente que se puede amplificar y medir. La respuesta
del material fotoemisor depende de la longitud de onda, y se dispone de diversos fototubos
para las diferentes regiones del espectro.

- Fotomultiplicador

Un tubo fotomultiplicador es más sensible que un fototubo en las regiones visible y


ultravioleta. Se compone de un cátodo fotoemisor con el que choca el fotón, y una serie de
electrodos (dinodos), cada uno a un potencial más positivo (de 50 a 90 V) que el anterior.

Cuando un electrón llega a la superficie fotoemisora, se emite un electrón primario liberado


de la superficie fotoemisora se acelera hacia el primer dinodo. El impacto del electrón sobre

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la superficie del dinodo causa la liberación de muchos electrones secundarios, que a su vez
son acelerados hacia el siguiente electrodo, donde cada electrón secundario libera más
electrones, y así sucesivamente, hasta alcanzar unas10 etapas de amplificación. Por último,
los electrones se colectan en el ánodo. A su vez, la salida final del tubo fotomultiplicador se
puede amplificar electrónicamente. Los distintos tubos fotomultiplicadores tienen diferentes
características de respuesta que dependen de la longitud de la onda.

- Serie de diodos

Se usan para registrar simultáneamente todo un espectro y consiste en cientos de fotodiodos


de silicio, lado a lado, sobre un solo chip o cristal de silicio. Cada uno tiene un capacitor de
almacenamiento correspondiente que recopila e integra la fotocorriente generada cuando los
fotones chocan con el fotodiodo. Su lectura es por descarga periódica, y tardan entre 5 y 100
ms para leer todo el conjunto. Si la radiación dispersa en sus distintas longitudes de onda cae
sobre la superficie del grupo de diodos, puede registrarse un espectro.

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5. HIPÓTESIS.

El método espectrofotométrico UV/Visible para la cuantificación de albendazol 200 mg/5


mL suspensión oral cumple con los parámetros de desempeño de validación establecidos en
el RTCA 11.03.39: 06 y USP36/NF31 para procedimientos analíticos categoría I así como
con los parámetros adicionales evaluados como Robustez, Idoneidad y Estabilidad de las
soluciones.

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6. DISEÑO METODOLÓGICO.

6.1. TIPO DE ESTUDIO.

Experimental prospectivo.

6.2. ALCANCE.

Cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral por la técnica de


espectrofotometría UV/Visible.

6.3. ÁREA DE ESTUDIO.

Laboratorio de Control de Calidad de Medicamentos (LCCM) de la Facultad de Ciencias


Químicas de la UNAN – León.

6.4. POBLACIÓN DE ESTUDIO.

Placebo de albendazol suspensión oral lote 100517 producido en el Laboratorio de


producción de medicamentos Mauricio Díaz Müller.

6.5. MUESTRA.

Se requirieron 26 frascos de placebo de albendazol suspensión oral lote 100517 de los cuales
13 fueron destinados como muestras de análisis y 13 fueron muestras retenidas (contra
muestras). (15)

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6.6. UNIDAD DE ANÁLISIS.

Frascos de placebo de Albendazol suspensión oral lote 100517.

6.7. PLAN DE ANÁLISIS.

Los datos de las absorbancias se ingresaron en la hoja de cálculos estadísticos de Microsoft


Excel, se obtuvieron resultados estadísticos presentados a través de tablas y gráficos que
luego fueron analizados en relación con las especificaciones de los parámetros de desempeño
de validación.

6.8. VARIABLES DE ESTUDIO.

Según el Reglamento Técnico Centroamericano RTCA 11.03.39:06 Productos


farmacéuticos. Validación de métodos analíticos para la evaluación de la calidad de los
medicamentos y la Farmacopea de los Estados Unidos de América USP36/NF31 para
procedimientos analíticos de categoría I (Ensayos de cuantificación del (los) principio(os)
activo(os)) se deben de evaluar los siguientes parámetros de validación:

- Especificidad
- Exactitud
- Precisión
- Linealidad y Rango

También se evaluaron parámetros adicionales:

- Robustez
- Idoneidad
- Estabilidad de las soluciones

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6.9. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES.

Tabla 8. Operacionalización de las variables.

VARIABLE CONCEPTO INDICADORES


Capacidad de evaluar, medir e Identificación de albendazol en preparación de
identificar simultánea o estándar secundario de albendazol. Positivo.
separadamente, los analitos de interés Identificación de albendazol en preparación de
de forma inequívoca sin interferencias placebo de albendazol. Negativo.
Especificidad de impurezas, productos de Identificación de albendazol en preparación de
degradación, compuestos relacionados, placebo cargado de albendazol. Positivo.
excipientes u otras sustancias Porcentaje de discrepancia < 4%.
previsibles presentes en la matriz de la
muestra.
Es la proximidad entre los resultados de Promedio del % Recuperado 100.00 ± 2.0%
la prueba obtenidos mediante ese Coeficiente de variación < 2%
método y el valor verdadero. Comparación de medias (Prueba de t-student)
Exactitud
t exp < t tabla
Test de Cochran. G exp < G tabla

Expresa el grado de concordancia entre Promedio del % Recuperado 100.00 ± 2.0%


una serie de mediciones individuales Coeficiente de variación < 2.0%
obtenidas de múltiples muestreos de
Precisión una misma muestra homogénea
original o bien a partir de varias
muestras obtenidas por dilución de la
muestra bajo condiciones establecidas.
La linealidad es la capacidad para Coeficiente de variación < 2%
Linealidad y obtener resultados de prueba que sean Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
rango proporcionales ya sea directa o por Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
medio de una transformación Ecuación de regresión lineal y = bx + a

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matemática bien definida, a la Significación estadística del intercepto (a)


concentración del analito en la t exp < t tab
muestras en un intervalo dado. Significación estadística de la pendiente (b)
El rango es el intervalo entre las t exp > t tab
concentración superior e inferior de Test de Cochran G exp < G tab
analito para el cual se ha demostrado Análisis de varianza (ANOVA) F1 exp > F1
correcta precisión, exactitud y F2 exp < F2
linealidad del método descrito. Análisis de residuales (gráfico).
Es la medida de su capacidad para Promedio del % Recuperado 100.00 ± 2.0%
permanecer inalterado ante pequeñas Coeficiente de variación < 2.0%
Robustez
pero deliberadas variaciones en ciertos
parámetros.
Conjunto de ensayos que permiten Coeficiente de variación < 2.0%
comprobar en el momento de
utilización del método que el sistema
Idoneidad (analista, reactivos e instrumentos) es
adecuado para llevar a cabo la
determinación para la cual se ha
establecido y validado dicho método.
La estabilidad de los estándares y Promedio del % Recuperado 100.00 ± 2.0%
muestras se establecen en las
condiciones normales de análisis,
condiciones normales de
Estabilidad almacenamiento y a veces en el
instrumento, para determinar si las
condiciones especiales de conservación
son necesarias, por ejemplo,
refrigeración o protección contra la luz

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6.10. EQUIPO E INSTRUMENTAL ANALÍTICO.

Tabla 9. Equipos.

EQUIPOS DESCRIPCIÓN
Espectrofotómetro UV-Vis Marca: Varian Inc.
Modelo: Cary 50
Balanza analítica Marca: A&D
Modelo: HM-120
Campana de vacío Marca: Labconco
Modelo: -
Horno Marca: Fisher Scientific
Modelo: Isotemp Oven
Desecador Marca: -
Modelo: -
Agitador magnético y magneto Marca: SYBRON
Modelo: 7200
Refrigeradora Marca: Oster

Tabla 10. Instrumental analítico.

INSTRUMENTAL ANALÍTICO DESCRIPCIÓN


Celda 1 Marca: Varian
Uso: UV-Visible
Tamaño: 1 cm.
Cuarzo
Celda 2 Marca: PerkinElmer
Uso: UV-Visible
Tamaño: 1 cm.
Cuarzo

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Matraces volumétricos clase A Marca: Pyrex


Capacidad: 100, 250, 500 y 1000 mL.
Beaker Marca: Pyrex
Capacidad: 250 y 500 mL
Erlenmeyer Marca: Pyrex
Capacidad: 250 mL
Bureta clase A de 25 mL Marca: Pyrex
Capacidad: 25 Ml
Tolerancia: a 20 ºC ± 0.03 mL
Probeta Marca: Pyrex
Capacidad: 10, 25 y 50 mL
Pipeta volumétrica clase A Marca: FISHERDbrand
Capacidad: 2, 4, 6 y 8 mL
Pipeta serológica clase A Marca: Kimax
Capacidad: 1, 2 y 10 mL
Frasco de gotero de vidrio Marca: -
Capacidad: 50 mL
Espátula Uso: Analítico
Material: Acero inoxidable
Soporte universal Marca: Fisher Scientific
Pesa filtro Marca: -
Capacidad: -
Computadora laptop Marca: Acer
Modelo: Aspire V5
Software: Windows 8.1 Pro.
Calculadora Marca: Casio
Modelo: Fx-82MS

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6.11. REACTIVOS.

Tabla 11. Reactivos.

REACTIVOS
NOMBRE FÓRMULA QUÍMICA GRADO
Ácido clorhídrico HCl 12.1 N Reactivo
Ácido perclórico HClO4 Reactivo
Ácido acético glacial CH3COOH Reactivo
Anhidro acético C4H6O3 Reactivo
Ácido sulfúrico H2SO4 Reactivo
Dicromato de potasio K2Cr2O7 Reactivo
Azul de oracet B C21H16N2O2 + C20H14N2O2 Reactivo
Cristal violeta C25H30ClN3 Reactivo
Biftalato de potasio C8H5KO4 Reactivo
Cloruro de potasio KCl Estándar
Dicromato de potasio K2Cr2O7 Estándar
Tolueno en hexano 0.002% C6H5CH3 + C5H12O Estándar
Perclorato de holmio Ho(ClO4)3 Estándar
Agua H2O Destilada
Albendazol C12H15N3O2S Potencia determinada: 100.6%

6.12. MATERIALES.

Tabla 12. Materiales.

NOMBRE ORIGEN DESCRIPCIÓN


Placebo de albendazol suspensión oral, lote # Laboratorio Mauricio
Placebo
100517 Díaz Müller
Albendazol materia prima, lote # M-2811029, Estándar de trabajo,
-
Potencia: 100.6%. caracterizado

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6.13. PREPEARACIÓN DE REACTIVOS.

6.13.1. Ácido clorhídrico 0.08 N.


- Transferir 6.6 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL
con aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.

6.13.2. Ácido clorhídrico 0.1 N.


- Transferir 8.2 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL
con aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.

6.13.3. Ácido clorhídrico 0.12 N.


- Transferir 9.8 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL
con aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.

6.13.4. Ácido perclórico 0.1 N.


- Transferir 5.5 mL de ácido perclórico al 60 % medido con exactitud a un balón
aforado de 500 mL, agregar 250 mL de ácido acético glacial, adicionar 15 mL de
Anhidro acético y dejar enfriar la solución. Llevar a volumen la solución con ácido
acético glacial y dejar reposar por 1 día protegido de la luz.

6.13.5. Solución indicadora de azul de oracet B.


- Pesar 125 mg de azul de oracet B y transferirlo a un frasco de gotero de vidrio y
disolver con 25 mL de ácido acético glacial.

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6.13.6. Solución indicadora de cristal violeta.


- Pesar 100 mg de cristal violeta y transferirlo a un frasco de gotero de vidrio y disolver
con 10 mL de ácido acético glacial.

6.14. DETERMINACIÓN DE LA POTENCIA DE ALBENDAZOL ESTÁNDAR DE


TRABAJO.

6.14.1. ESTANDARIZACIÓN DE ÁCIDO PERCLÓRICO 0.1 N.


- En un pesa filtro secar 2 g de biftalato de potasio a 120 ºC durante 2 horas y luego
dejar enfriar en el desecador.
- Realizar el ensayo por triplicado.
- Pesar con exactitud 300 mg de biftalato de potasio seco y disolver en 50 mL de ácido
acético glacial en un erlenmeyer de 250 mL, agregar dos gotas de cristal violeta.
Valorar con la solución de ácido perclórico 0.1 N hasta cambio de color de la solución
de violeta a verde azulado.
- Determinar el volumen de ácido acético glacial que consume 50 mL de solución
blanco de ácido perclórico.

Cada mL de ácido perclórico 0.1 N equivale a 20.42 mg de biftalato de potasio.

g de biftalato de potasio
N=
(0.20423)(mL gastado de ácido perclórico corregido por el blanco)

6.14.2. VALORACIÓN DE ALBENDAZOL ESTÁNDAR DE TRABAJO.


- Secar la materia prima de albendazol en un pesa filtro a 105 ºC durante 4 horas y
luego dejar enfriar en el desecador. Conservar en un envase herméticamente cerrado.
- Realizar el ensayo por triplicado.
- Pesar con exactitud 250 mg de albendazol seco, disolver con 50 mL de ácido acético
glacial en un erlenmeyer de 250 mL, agregar dos gotas de azul de oracet B. Valorar

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con ácido perclórico 0.1 N previamente estandarizado hasta cambio de color de la


solución a violáceo.
- Realizar una determinación con un blanco y hacer las correcciones necesarias en los
volúmenes gastados en la valoración.

Cada mL de ácido perclórico 0.1 N equivale a 26.53 mg de albendazol.

La materia prima de albendazol contiene no menos de 98.0% y no más de 102.0% de


albendazol calculado con respecto a la sustancia seca.

6.15. CONDICIONES DE ANÁLISIS.

Tabla 13. Condiciones espectrofotométricas de análisis.

Concentración nominal de la solución de placebo cargado 16 µg/mL


Concentración nominal de la solución estándar 16 µg/mL
Solución blanco Ácido clorhídrico 0.1 N
Región del espectro de trabajo 200 nm a 390 nm
Longitud de onda de máxima absorción (λmax) 290 nm
Equipo Espectrofotómetro UV/Visible
Celda Cuarzo, 1 cm.

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6.16. PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE


ALBENDAZOL 200 mg/5 mL SUSPESIÓN ORAL POR LA TÉCNICA DE
ESPECTROFOTOMETRÍA UV/Visible.

6.16.1. PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES ESTÁNDAR Y MUESTRA.

Preparación de la solución estándar de albendazol.

- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.

Preparación de la solución muestra de albendazol.

- Agitar vigorosamente el frasco de albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral y


transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL, disolver con 10 mL de
ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una
alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y transferirla a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 16 µg/mL.

6.16.2. PROCEDIMIENTO.

- Ajustar el espectrofotómetro a una longitud de onda de máxima absorción de 290 nm,


leer solución de ácido clorhídrico 0.1 N como blanco para ajustar la línea base.
- Leer por triplicado la solución estándar de albendazol y la solución muestra de
albendazol en celda de 1 cm.

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- Registrar las absorbancias y calcular la cantidad de albendazol presente en la muestra


con la siguiente ecuación:
Am
* Cs
As
Donde:
Am es la Absorbancia promedio de la muestra.
As es la Absorbancia promedio del estándar.
Cs es la concentración del estándar.

- Calcula el % de recobro con la siguiente ecuación:


Cp
* 100
Cd
Donde:
Cp es la cantidad de albendazol encontrada.
Cd es la cantidad de albendazol declarada.

La suspensión oral de albendazol contiene no menos del 90.0 % y no más del 110.0 % de la
cantidad declarada de albendazol.

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6.17. DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO A EVALUAR.

6.17.1. IDONEIDAD.

6.17.1.1. Idoneidad del sistema instrumental.

Verificación del desempeño del espectrofotómetro UV/Vis Varian Cary 50.

- Abrir carpeta ‘Cary win UV’ y ejecutar programa VALIDATE.


- Seleccionar opción PRUEBA.
- Dirigirse a prueba EP/BP, aparecerá en pantalla una ventana donde se señalan las
pruebas y el orden en que se ejecutaran:
 Control de longitud de onda Xenox
 Luz difusa
 Control de absorbancia K2Cr2O7
 Control de longitud de onda Ho(ClO4)3
- Dar OK e INICIAR.
- Seguir las indicaciones del equipo utilizando las soluciones estándar de stray light
blank, potassium chloride, sodium iodide, hexane blank, toluene in hexane, potassium
dichromate black, potassium dichromate 60 mg/L y holmium marca Starna.
- Al finalizar el equipo dará el resultado de cada una de las pruebas.

6.17.1.2. Precisión de la idoneidad del sistema.

Preparación de la solución estándar de albendazol.

- Realizar el ensayo por duplicado.


- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y

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homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16


µg/mL.
- Leer 5 veces la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la solución
de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Especificaciones

Tabla 14. Criterio de aceptación para la precisión de la idoneidad del sistema

Parámetros evaluados Especificación


Coeficiente de variación < 2.0%

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6.17.2. ESPECIFICIDAD.

Preparación de la solución estándar de albendazol.

- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer 6 veces la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la solución
de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo de albendazol.

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a
volumen con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica
de 2 mL y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1
N y homogenizar la mezcla.
- Leer la solución placebo de albendazol utilizando como blanco la solución de ácido
clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y

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homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16


µg/mL.
- Leer 6 veces la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

- Calcular el porcentaje de discrepancia entre la solución estándar y la solución de


placebo cargado con la siguiente ecuación:

(Di - Ds)
%D= * 100
Ds

Donde:

Di: Absorbancia con interferencia (solución de placebo cargado).

Ds: Absorbancia sin interferencia (solución estándar).

Especificaciones

Tabla 15. Criterio de aceptación para la especificidad.

Parámetros evaluados Especificación


Identificación de albendazol en preparación de estándar secundario de
Positivo
albendazol.
Identificación de albendazol en preparación de placebo de albendazol. Negativo
Identificación de albendazol en preparación de placebo cargado de
Positivo
albendazol.
Porcentaje de discrepancia < 4.0%

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6.17.3. EXACTITUD.

El método utilizado fue: muestra problema cargada con el analito.

Preparación de la solución madre de placebo cargado de albendazol suspensión.

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 1 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 40 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N.

Preparación de las soluciones estándar de albendazol.

 Solución 1
- Pesar con exactitud 24 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.

 Solución 2
- Pesar con exactitud 40 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.

 Solución 3
- Pesar con exactitud 56 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.

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Preparación de la solución al 80%

- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 1 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 12.8 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución al 100%

- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 2 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 16 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución al 120%

- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 3 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 19.2 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

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Especificación

Tabla 16. Criterio de aceptación para la exactitud.

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%
Prueba de t-student t exp < t tab, no hay diferencia significativa entre la media
y el 100%
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de las
(Test de Cochran) concentraciones son homogéneas.

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6.17.4. PRECISIÓN.

6.17.4.1. Repetibilidad del sistema.

Preparación de la solución estándar de albendazol.

- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer 10 veces la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Especificaciones

Tabla 17. Criterio de aceptación para la repetibilidad del sistema.

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%

6.17.4.2. Repetibilidad del método.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.

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- Leer 10 veces la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como blanco


la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Especificaciones

Tabla 18. Criterio de aceptación para la repetibilidad del método.

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%

6.17.4.3. Precisión intermedia.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.

- Realizar el ensayo durante 3 días consecutivos. Un segundo analista debe de realizar


este ensayo bajo la mismas condiciones operativas (reactivos, instrumentos,
temperatura, etc) y mismo laboratorio durante 3 días consecutivos diferentes al del
primer analista.
- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de
albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como blanco
la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
- Calcular el % de recuperado por día y por cada analista y el promedio del % de
recuperado para los datos obtenidos por los 2 analistas en los 3 días.

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Especificaciones

Tabla 19. Criterio de aceptación para la precisión intermedia.

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%

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6.17.5. LINEALIDAD Y RANGO.

6.17.5.1. Linealidad del sistema.

Preparación de la solución estándar de albendazol al 80 %

- Pesar con exactitud 64 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 12.8
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución estándar de albendazol al 90%

- Pesar con exactitud 72 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 14.4
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución estándar de albendazol al 100%

- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL

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y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución estándar de Albendazol al 110%

- Pesar con exactitud 88 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 17.6
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución estándar de albendazol al 120%

- Pesar con exactitud 96 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 19.2
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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Especificaciones

Tabla 20. Criterio de aceptación para la linealidad del sistema.

Parámetros Especificación
Coeficiente de variación < 2.0%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
Ecuación de regresión lineal y = bx + a.
Significación estadística del intercepto (a) t exp < t tab, el intervalo de confianza debe de
incluir el 0.
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > t tab, el intervalo de confianza no debe
de incluir el 0.
Análisis de varianza F1 exp > F1 tab, demuestra que la pendiente es
distinta de 0.
F2 exp < F2 tab, demuestra que existe linealidad
entre los resultados.
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de
(Test de Cochran) las concentraciones son homogéneas.
Análisis residuales (gráfico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio
y no reflejar ninguna tendencia.

6.17.5.2. Linealidad del método.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol al 80%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 1.6 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 64 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 12.8


µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol al 90%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 1.8 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 72 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 14.4
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol al 100%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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Preparación de la solución placebo cargado de albendazol suspensión al 110%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2.2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 88 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 17.6
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol al 120%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2.4 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 96 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 19.2
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

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Especificaciones

Tabla 21. Criterio de aceptación para la linealidad del método.

Parámetros Especificación
Coeficiente de variación < 2.0%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
Ecuación de regresión lineal y = bx + a.
Significación estadística del intercepto (a) t exp < t tab, el intervalo de confianza debe de
incluir el 0.
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > t tab, el intervalo de confianza no debe
de incluir el 0.
Análisis de varianza F1 exp > F1 tab, demuestra que la pendiente es
distinta 0.
F2 exp < F2 tab, demuestra que existe linealidad
entre los resultados.
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de
(Test de Cochran) las concentraciones son homogéneas.
Análisis residuales (gráfico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio
y no reflejar ninguna tendencia.

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6.17.6. ROBUSTEZ.

Preparación de las soluciones estándar de albendazol.

 Soluciones de estándar en ácido clorhídrico 0.08 N.


- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.08 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.08 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.08 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y celda 2.

 Soluciones de estándar en ácido clorhídrico 0.1 N.


- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y celda 2.

 Soluciones de estándar en ácido clorhídrico 0.12 N.


- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.12 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2
mL y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.12 N

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y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16


µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.12 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y celda 2.

Preparación de la soluciones placebo cargado de albendazol.

 Soluciones de placebo cargado en ácido clorhídrico 0.08 N.


- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de
albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.08 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.08 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.08 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y
celda 2.

 Soluciones de placebo cargado en ácido clorhídrico 0.1 N.


- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de
albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.

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- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como


blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y celda
2.

 Soluciones de placebo cargado en ácido clorhídrico 0.12 N.


- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de
albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol patrón secundario pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.12 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
trasvasar a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.12 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.12 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y
celda 2.

Especificaciones

Tabla 22. Criterio de aceptación para la robustez.

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%

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6.17.7. ESTABILIDAD DE LAS SOLUCIONES.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.

- Preparar 3 soluciones, transfiriendo a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2


mL de placebo de albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de
trabajo pesado con exactitud, disolver con 10 mL de Ácido acético glacial, llevar a
volumen con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica
de 2 mL y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1
N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL. Una solución almacenarla a temperatura ambiente, otra almacenarla bajo
refrigeración y la última almacenarla a 40 ºC.
- Realizar por triplicado una lectura inicial, a las 24 horas y a las 48 horas de las
soluciones de placebo cargado de albendazol almacenadas en las distintas condiciones
utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de
1 cm.

Especificaciones

Tabla 23. Criterio de aceptación para la estabilidad de las soluciones.

Parámetro evaluado Especificación


Promedio del % de Recuperado 100.0% ± 2.0%

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7. RESULTADOS.

7.1. PROTOCOLO DE VALIDACIÓN DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA


PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ALBENDAZOL 200 mg/5 mL
SUSPENCIÓN ORAL POR LA TÉCNICA DE ESPECTROFOTOMETRÍA
UV/Visible.

Elaborado por:
Fecha/firma: ___/___/___ _____________________
Gerencia de producción

Revisado por:
Fecha/firma: ___/___/___ _____________________
Regencia

Aprobado por:
Fecha/firma: ___/___/___ _____________________
Gerencia de control de calidad

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INFORMACIÓN GENERAL
FECHA INICIAL DE VALIDACIÓN: Junio 2017
FECHA FINAL DE VALIDACIÓN: Diciembre 2017
VIGENTE DESDE: Enero 2018
REVISIÓN Nº: 1
COPIA Nº: 1
TIPO DE MÉTODO
MÉTODO NORMALIZADO:
MÉTODO NO NORMALIZADO:
MÉTODO INTERNO: X
CATEGORÍA DE VALIDACIÓN A EVALUAR
CATEGORIA I
Pruebas cuantitativas: Físico-Químicas X Microbiológicas

CATEGORÍA II
Análisis de impurezas: Cualitativas Cuantitativas

CATEGORÍA III
Pruebas de desempeño: Disolución Uniformidad de contenido

CATEGORIA IV
Pruebas de identificación

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OBJETIVO

Comprobar que el método analítico propuesto para la cuantificación de albendazol 200 mg/5
mL suspensión oral permite obtener de forma reproducibles resultados que cumplan con las
especificaciones establecidas.

ALCANCE

Este protocolo de validación aplica al método de análisis propuesto por la técnica de


espectrofotometría UV/Visible para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL
suspensión oral que contiene como principio activo albendazol.

JUSTIFICACIÓN

El método de análisis propuesto para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 suspensión


oral mL por la técnica de espectrofotometría UV/Visible permite con un alto grado de
confianza realizar la cuantificación del principio activo, minimizando los costos comparado
con otros métodos como por ejemplo por la técnica de cromatografía líquida de alta
resolución.

RESPONSABILIDAD

La realización de la validación es responsabilidad de todo el personal involucrado en la


validación del método de análisis:

- Gerencia de producción
- Departamento de control de calidad
- Regencia

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PARÁMETROS A VALIDAR

Parámetros establecidos por el RTCA 11.03.39:06 y la USP36/NF31 para procedimientos


analíticos de categoría I (Ensayos de cuantificación del (los) principio(os) activo(os)):

- Especificidad
- Exactitud
- Precisión
- Linealidad y Rango

También se evaluaron parámetros adicionales:

- Robustez
- Idoneidad
- Estabilidad de las soluciones

MUESTREO

Se requirieron 26 frascos de albendazol suspensión oral lote 100517 de los cuales 13 fueron
destinados como muestras de análisis y 13 fueron muestras retenidas (contra muestras).

DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO

La espectrofotometría UV/Visible se basa en la interacción de un haz de luz radiante con


grupo funcionales orgánicos no saturados, denominados grupos cromóforos, de una muestra
a longitudes de onda de 180 a 380 nm en el espectro electromagnético para la identificación
o cuantificación de un principio activo presente en la muestra.

En la espectrofotometría de absorción se mide la cantidad de luz absorbida (absorbancia) por


los grupos cromóforos en función de la longitud de onda, lo que proporciona información
cualitativa o cuantitativa sobre la muestra, los resultados obtenidos suelen expresarse
mediante un gráfico denominado espectro de absorción en el cual se refleja la absorbancia
en función de la concentración del analito en la muestra a determinada longitud de onda.

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EQUIPOS

EQUIPOS DESCRIPCIÓN
Espectrofotómetro UV-Vis Marca: Varian Inc.
Modelo: Cary 50
Balanza analítica Marca: A&D
Modelo: HM-120
Campana de vacío Marca: Labconco
Modelo: -
Horno Marca: Fisher Scientific
Modelo: Isotemp Oven
Desecador Marca: -
Modelo: -
Agitador magnético y magneto Marca: SYBRON
Modelo: 7200
Refrigeradora Marca: Oster

INSTRUMENTAL ANALÍTICO
INSTRUMENTAL ANALÍTICO DESCRIPCIÓN
Celda 1 Marca: Varian
Uso: UV-Visible
Tamaño: 1 cm.
Cuarzo
Celda 2 Marca: PerkinElmer
Uso: UV-Visible
Tamaño: 1 cm.
Cuarzo
Matraces volumétricos clase A Marca: Pyrex
Capacidad: 100, 250, 500 y 1000 mL.

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Beaker Marca: Pyrex


Capacidad: 250 y 500 mL
Erlenmeyer Marca: Pyrex
Capacidad: 250 mL
Bureta clase A de 25 mL Marca: Pyrex
Capacidad: 25 mL
Tolerancia: a 20 ºC ± 0.03 mL
Probeta Marca: Pyrex
Capacidad: 10, 25 y 50 mL
Pipeta volumétrica clase A Marca: FISHERDbrand
Capacidad: 2, 4, 6 y 8 mL
Pipeta serológica clase A Marca: Kimax
Capacidad: 1, 2 y 10 mL
Frasco de gotero de vidrio Marca: -
Capacidad: 50 mL
Espátula Uso: Analítico
Material: Acero inoxidable
Soporte universal Marca: Fisher Scientific
Pesa filtro Marca: -
Capacidad: -

DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO

Nombre: Albendazol

Forma farmacéutica: Suspensión oral

Concentración: 200 mg/5 mL

Características organolépticas:
- Aspecto: Líquido homogéneo.
- Color: Anaranjado.

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- Olor: Fresa
- Sabor: Fresa
pH: 4.5 – 5.5

Volumen de entrega: 10 mL ± 2 mL.

Almacenamiento: 30 ºC ± 2 ºC

Presentación: Frasco plástico blanco de polietileno de alta densidad de 10 mL, tapa plástica
de polietileno de alta densidad color blanco con sello de seguridad y etiqueta autoadhesiva.

Tiempo de vencimiento: 2 años.

DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO DE VALIDACIÓN

Reactivos

REACTIVOS
NOMBRE FÓRMULA QUÍMICA GRADO
Ácido clorhídrico HCl 12.1 N Reactivo
Ácido perclórico HClO4 Reactivo
Ácido acético glacial CH3COOH Reactivo
Anhidro acético C4H6O3 Reactivo
Ácido sulfúrico H2SO4 Reactivo
Dicromato de potasio K2Cr2O7 Reactivo
Azul de oracet B C21H16N2O2 + C20H14N2O2 Reactivo
Cristal violeta C25H30ClN3 Reactivo
Biftalato de potasio C8H5KO4 Reactivo
Cloruro de potasio KCl Estándar
Dicromato de potasio K2Cr2O7 Estándar
Tolueno en hexano 0.002% C6H5CH3 + C5H12O Estándar
Perclorato de holmio Ho(ClO4)3 Estándar

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Agua H2O Destilada


Albendazol C12H15N3O2S Estándar

Materiales

NOMBRE ORIGEN DESCRIPCIÓN


Placebo de albendazol suspensión oral, lote Laboratorio Mauricio
Placebo
100517 Díaz Müller
Estándar de albendazol - Estándar de trabajo

Medidas de seguridad

Leer las precauciones para el uso de los materiales. Tome las precauciones necesarias durante
el desarrollo del estudio. La seguridad del personal incluye el uso adecuado de los equipos
de protección, vestimenta, así mismo deben manipular y almacenar adecuadamente los
reactivos empleados. Los desechos generados durante los análisis deben de colocarse en el
lugar correspondiente para evitar accidentes laborales.

Preparación de reactivos

- Ácido clorhídrico 0.08 N.

Transferir 6.6 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL con
aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.

- Ácido clorhídrico 0.1 N.

Transferir 8.2 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL con
aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.

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- Ácido clorhídrico 0.12 N.

Transferir 9.8 mL de ácido clorhídrico concentrado aun balón aforado de 1000 mL con
aproximadamente 500 mL de agua destilada, homogenizar la mezcla y aforar.

Condiciones de análisis

Concentración nominal de la solución de placebo cargado 16 µg/mL


Concentración nominal de la solución estándar 16 µg/mL
Solución blanco Ácido clorhídrico 0.1 N
Región del espectro de trabajo 200 nm a 390 nm
Longitud de onda de máxima absorción (λmax) 290 nm
Equipo Espectrofotómetro UV-Visible
Celda Cuarzo, 1 cm.

Determinación de los parámetros de desempeño

Idoneidad

 Idoneidad del sistema instrumental.

Verificación del desempeño del espectrofotómetro UV/Vis Varian Cary 50.

- Abrir carpeta ‘Cary win UV’ y ejecutar programa VALIDATE.


- Seleccionar opción PRUEBA.
- Dirigirse a prueba EP/BP, aparecerá en pantalla una ventana donde se señalan las
pruebas y el orden en que se ejecutaran:
 Control de longitud de onda Xenox
 Luz difusa
 Control de absorbancia K2Cr2O7
 Control de longitud de onda Ho(ClO4)3
- Dar OK e INICIAR.

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- Seguir las indicaciones del equipo utilizando las soluciones estándar de stray light
blank, potassium chloride, sodium iodide, hexane blank, toluene in hexane, potassium
dichromate black, potassium dichromate 60 mg/L y holmium marca Starna.
- Al finalizar el equipo dará el resultado de cada una de las pruebas.

 Precisión de la idoneidad del sistema.

Preparación de la solución estándar de albendazol.

- Realizar el ensayo por duplicado.


- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer 5 veces la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la solución
de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Especificaciones

Parámetros evaluados Especificación


Coeficiente de variación < 2.0%

Especificidad

Preparación de la solución estándar de albendazol.

- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y

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homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16


µg/mL.
- Leer 6 veces la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la solución
de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo de albendazol.

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a
volumen con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica
de 2 mL y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1
N y homogenizar la mezcla.
- Leer la solución placebo de albendazol utilizando como blanco la solución de ácido
clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer 6 veces la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

- Calcular el porcentaje de discrepancia entre la solución estándar y la solución de


placebo cargado con la siguiente ecuación:

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(Di - Ds)
%D= * 100
Ds

Donde:

Di: Absorbancia con interferencia (solución de placebo cargado).

Ds: Absorbancia sin interferencia (solución estándar).

Especificaciones

Parámetros evaluados Especificación


Identificación de albendazol en preparación de estándar secundario de
Positivo
albendazol.
Identificación de albendazol en preparación de placebo de albendazol. Negativo
Identificación de albendazol en preparación de placebo cargado de
Positivo
albendazol.
Porcentaje de discrepancia < 4.0%

Exactitud

Preparación de la solución madre de placebo cargado de albendazol suspensión.

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 1 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 40 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N.

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Preparación de las soluciones estándar de albendazol.

 Solución 1
- Pesar con exactitud 24 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.

 Solución 2
- Pesar con exactitud 40 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.

 Solución 3
- Pesar con exactitud 56 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N.

Preparación de la solución al 80%

- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 1 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 12.8 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

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Preparación de la solución al 100%

- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 2 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 16 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución al 120%

- Tomar por separado una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL de la solución
madre de placebo cargado de albendazol suspensión oral y una alícuota con una pipeta
volumétrica de 2 mL de la Solución 3 y ambas transferirlas a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 19.2 µg/mL.
- Leer por triplicado la solución utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico
0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Especificación

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%
Prueba de t-student t exp < t tab, no hay diferencia significativa entre la media
y el 100%
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de las
(Test de Cochran) concentraciones son homogéneas.

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Precisión

 Repetibilidad del sistema.


Preparación de la solución estándar de albendazol.

- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer 10 veces la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Especificaciones

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%

 Repetibilidad del método.


Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer 10 veces la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como blanco
la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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Especificaciones

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%

 Precisión intermedia.
Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.

- Realizar el ensayo durante 3 días consecutivos. Un segundo analista debe de realizar


este ensayo bajo la mismas condiciones operativas (reactivos, instrumentos,
temperatura, etc) y mismo laboratorio durante 3 días consecutivos diferentes al del
primer analista.
- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de
albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como blanco
la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.
- Calcular el % de recuperado por día y por cada analista y el promedio del % de
recuperado para los datos obtenidos por los 2 analistas en los 3 días.

Especificaciones

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%

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Linealidad Y Rango
 Linealidad del sistema.
Preparación de la solución estándar de albendazol al 80 %

- Pesar con exactitud 64 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 12.8
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución estándar de albendazol al 90%

- Pesar con exactitud 72 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 14.4
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución estándar de albendazol al 100%

- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


suspensión oral por la técnica de espectrofotometría UV/Visible.
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homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16


µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución estándar de Albendazol al 110%

- Pesar con exactitud 88 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 17.6
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución estándar de albendazol al 120%

- Pesar con exactitud 96 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 19.2
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

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Especificaciones

Parámetros Especificación
Coeficiente de variación < 2.0%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
Ecuación de regresión lineal y = bx + a.
Significación estadística del intercepto (a) t exp < t tab, el intervalo de confianza debe de
incluir el 0.
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > t tab, el intervalo de confianza no debe
de incluir el 0.
Análisis de varianza F1 exp > F1 tab, demuestra que la pendiente es
distinta de 0.
F2 exp < F2 tab, demuestra que existe linealidad
entre los resultados.
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de
(Test de Cochran) las concentraciones son homogéneas.
Análisis residuales (gráfico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio
y no reflejar ninguna tendencia.

 Linealidad del método.


Preparación de la solución placebo cargado de albendazol al 80%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 1.6 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 64 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 12.8
µg/mL.

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como


blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol al 90%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 1.8 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 72 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 14.4
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol al 100%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol suspensión al 110%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2.2 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 88 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con

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exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 17.6
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Preparación de la solución placebo cargado de albendazol al 120%

- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2.4 mL de placebo de


albendazol suspensión oral y 96 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 19.2
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de 1 cm.

Especificaciones

Parámetros Especificación
Coeficiente de variación < 2.0%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99
Ecuación de regresión lineal y = bx + a.
Significación estadística del intercepto (a) t exp < t tab, el intervalo de confianza debe de
incluir el 0.

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Significación estadística de la pendiente (b) t exp > t tab, el intervalo de confianza no debe
de incluir el 0.
Análisis de varianza F1 exp > F1 tab, demuestra que la pendiente es
distinta 0.
F2 exp < F2 tab, demuestra que existe linealidad
entre los resultados.
Homogeneidad de las varianzas G exp < G tab, demuestra que las varianzas de
(Test de Cochran) las concentraciones son homogéneas.
Análisis residuales (gráfico) La distribución de los puntos debe ser aleatorio
y no reflejar ninguna tendencia.

Robustez
Preparación de las soluciones estándar de albendazol.

 Soluciones de estándar en ácido clorhídrico 0.08 N.


- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.08 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.08 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.08 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y celda 2.

 Soluciones de estándar en ácido clorhídrico 0.1 N.


- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y

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homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16


µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y celda 2.

 Soluciones de estándar en ácido clorhídrico 0.12 N.


- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón
aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.12 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2
mL y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.12 N
y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de estándar de albendazol utilizando como blanco la
solución de ácido clorhídrico 0.12 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y celda 2.

Preparación de la soluciones placebo cargado de albendazol.

 Soluciones de placebo cargado en ácido clorhídrico 0.08 N.


- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de
albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.08 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.08 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.08 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y
celda 2.

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 Soluciones de placebo cargado en ácido clorhídrico 0.1 N.


- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de
albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de trabajo pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y celda
2.

 Soluciones de placebo cargado en ácido clorhídrico 0.12 N.


- Transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL de placebo de
albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol patrón secundario pesado con
exactitud, disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido
clorhídrico 0.12 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y
trasvasar a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.12 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.
- Leer por triplicado la solución de placebo cargado de albendazol utilizando como
blanco la solución de ácido clorhídrico 0.12 N a 288, 290 y 292 nm con celda 1 y
celda 2.

Especificaciones

Parámetros evaluados Especificación


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0%
Coeficiente de variación < 2.0%

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Estabilidad de las soluciones


Preparación de la solución placebo cargado de albendazol.

- Preparar 3 soluciones, transfiriendo a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2


mL de placebo de albendazol suspensión oral y 80 mg de albendazol estándar de
trabajo pesado con exactitud, disolver con 10 mL de Ácido acético glacial, llevar a
volumen con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica
de 2 mL y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1
N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL. Una solución almacenarla a temperatura ambiente, otra almacenarla bajo
refrigeración y la última almacenarla a 40 ºC.
- Realizar por triplicado una lectura inicial, a las 24 horas y a las 48 horas de las
soluciones de placebo cargado de albendazol almacenadas en las distintas condiciones
utilizando como blanco la solución de ácido clorhídrico 0.1 N a 290 nm en celda de
1 cm.

Especificaciones

Parámetro evaluado Especificación


Promedio del % de Recuperado 100.0% ± 2.0%

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ANEXO
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ALBENDAZOL
200 mg/5 mL SUSPESIÓN ORAL POR LA TÉCNICA DE ESPECTROFOTOMETRÍA
UV/Visible.

PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES ESTÁNDAR Y MUESTRA.

Preparación de la solución estándar de albendazol.

- Pesar con exactitud 80 mg de albendazol estándar de trabajo, transferirlo a un balón


aforado de 100 mL y disolver con 10 mL de ácido acético glacial, llevar a volumen
con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL
y transferirla a un balón aforado de 100 mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y
homogenizar la mezcla. Se obtendrá una solución con una concentración de 16
µg/mL.

Preparación de la solución muestra de albendazol.

- Agitar vigorosamente el frasco de albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral y


transferir a un balón aforado de 100 mL una alícuota de 2 mL, disolver con 10 mL de
ácido acético glacial, llevar a volumen con ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar una
alícuota con una pipeta volumétrica de 2 mL y transferirla a un balón aforado de 100
mL, aforar con ácido clorhídrico 0.1 N y homogenizar la mezcla. Se obtendrá una
solución con una concentración de 16 µg/mL.

PROCEDIMIENTO.

- Ajustar el espectrofotómetro a una longitud de onda de máxima absorción de 290 nm,


leer solución de ácido clorhídrico 0.1 N como blanco para ajustar la línea base.
- Leer por triplicado la solución estándar de albendazol y la solución muestra de
albendazol en celda de 1 cm.

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- Registrar las absorbancias y calcular la cantidad de albendazol presente en la muestra


con la siguiente ecuación:
Am
* Cs
As
Donde:
Am es la Absorbancia promedio de la muestra.
As es la Absorbancia promedio del estándar.
Cs es la concentración del estándar.

- Calcula el % de recobro con la siguiente ecuación:


Cp
* 100
Cd
Donde:
Cp es la cantidad de albendazol encontrada.
Cd es la cantidad de albendazol declarada.

La suspensión oral de albendazol contiene no menos del 90.0 % y no más del 110.0 % de la
cantidad declarada de albendazol.

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7.2. IDONEIDAD.

7.2.1. IDONEIDAD DEL SISTEMA INSTRUMENTAL.

Figura 6. Resultados de la idoneidad del instrumento Varian Cary 50.

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7.2.2. PRECISIÓN DE LA IDONEIDAD DEL SISTEMA.

Tabla 24. Absorbancias.

Soluciones Concentración (µg/mL) Absorbancia


16 0.59400
16 0.59320
1 16 0.59210
16 0.59340
16 0.59440
16 0.59640
16 0.59600
2 16 0.59650
16 0.59120
16 0.58980
Promedio 0.59370
Desviación estándar 0.0022
Coeficiente de variación 0.38%

Tabla 25. Resultados.

Parámetros evaluados Especificaciones Resultados


Coeficiente de variación < 2.0% 0.38%

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7.3. ESPECIFICIDAD.

Figura 7. Espectros de absorción.

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Tabla 26. Absorbancias del estándar y placebo cargado.

Absorbancia del Absorbancia del


Nº de lectura
estándar placebo cargado
1 0.5949 0.5953
2 0.5963 0.5963
3 0.6026 0.5986
4 0.6005 0.6011
5 0.6008 0.5997
6 0.5933 0.6002
Promedio 0.5981 0.5985
Desviación estándar 0.0037 0.0023
Coeficiente de variación 0.6248% 0.3822%
Porcentaje de discrepancia 0.08%

Tabla 27. Resultados.

Parámetros evaluados Especificaciones Resultados


Identificación de albendazol en preparación
Positivo Cumple
de estándar secundario de albendazol.
Identificación de albendazol en preparación
Negativo Cumple
de placebo de albendazol.
Identificación de albendazol en preparación
Positivo Cumple
de placebo cargado de albendazol.
Porcentaje de discrepancia < 4.0% 0.08%

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7.4. EXACTITUD.

Tabla 28. Absorbancias y porcentajes de recuperado.

Concentración Concentración obtenida % Recuperado


Niveles Absorbancia % Recuperado
teórica (µg/mL) (µg/mL) por niveles
80% 12.8 0.48330 13.0248 81.4 101.8
80% 12.8 0.47900 12.9089 80.7 100.9
80% 12.8 0.48040 12.9466 80.9 101.1
100% 16 0.58360 15.7278 98.3 98.3
100% 16 0.58720 15.8248 98.9 98.9
100% 16 0.59750 16.1024 100.6 100.6
120% 19.2 0.70720 19.0588 119.1 99.3
120% 19.2 0.70340 18.9564 118.5 98.7
120% 19.2 0.70760 19.0696 119.2 99.3
Promedio 99.9%
Desviación estándar 1.23%
Coeficiente de variación 1.23%

Tabla 29. Resultados.

Parámetros evaluados Especificaciones Resultados


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0% 99.9%
Coeficiente de variación < 2.0% 1.23%
Prueba de t-student t exp < 2.31 t exp = 0.296
Homogeneidad de las varianzas
G exp < 0.87 G exp = 0.824
(Test de Cochran)

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Figura 8. Curva de calibración.

Absorbancia vs Concentración (µg/mL)


0.75

y = 0.0352x + 0.0292
0.7 R² = 0.9979

0.65
Absorbancia

0.6

0.55

0.5

0.45
12 13 14 15 16 17 18 19 20
Concentración (µg/mL)

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7.5. PRECISIÓN.

7.5.1. REPETIBILIDAD DEL SISTEMA.

Tabla 30. Absorbancias y porcentajes de recuperado.

Concentración Concentración obtenida


Absorbancia % Recuperado
(µg/mL) (µg/mL)
16 0.58240 15.6955 98.1
16 0.59210 15.9569 99.7
16 0.59470 16.0269 100.2
16 0.59710 16.0916 100.6
16 0.59570 16.0539 100.3
16 0.59240 15.9650 99.8
16 0.59430 16.0162 100.1
16 0.60150 16.2102 101.3
16 0.60330 16.2587 101.6
16 0.60510 16.3072 101.9
Promedio 100.4%
Desviación estándar 1.1%
Coeficiente de variación 1.1%

Tabla 31. Resultados.

Parámetros Especificaciones Resultados


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0% 100.4%
Coeficiente de variación < 2.0% 1.1%

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7.5.2. REPETIBILIDAD DEL MÉTODO.

Tabla 32. Absorbancias y porcentajes de recuperado.

Concentración Concentración obtenida


Absorbancia % Recuperado
(µg/mL) (µg/mL)
16 0.59260 15.9704 99.8
16 0.59200 15.9542 99.7
16 0.59210 15.9569 99.7
16 0.59140 15.9380 99.6
16 0.59290 15.9784 99.9
16 0.59240 15.9650 99.8
16 0.59350 15.9946 100.0
16 0.59170 15.9461 99.7
16 0.59330 15.9892 99.9
16 0.59220 15.9596 99.7
Promedio 99.8%
Desviación estándar 0.11%
Coeficiente de variación 0.11%

Tabla 33. Resultados.

Parámetros Especificaciones Resultados


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0% 99.8%
Coeficiente de variación < 2.0% 0.11%

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7.5.3. PRECISIÓN INTERMEDIA.

Tabla 34. Absorbancias por analistas/días.

Concentración obtenidas por


Analistas Concentración Absorbancia por analistas/días
analistas/días (µg/mL)
(µg/mL)
Día1 Día2 Día3 Día1 Día2 Día3
16 0.59310 0.60230 0.59500 15.9838 16.2318 16.0350
1 16 0.59400 0.60460 0.59390 16.0081 16.2938 16.0054
16 0.59600 0.59340 0.59480 16.0620 15.9919 16.0296
16 0.59730 0.59220 0.59300 16.0970 15.9596 15.9811
2 16 0.60080 0.59390 0.59500 16.1913 16.0054 16.0350
16 0.59760 0.60700 0.59580 16.1051 16.3584 16.0566

Tabla 35. Porcentajes de recuperado por analistas/días.

% Recuperado por analistas/días


Analistas
Día1 Día2 Día3
99.9 101.4 100.2
1 100.1 101.8 100.0
100.4 99.9 100.2
100.6 99.7 99.9
2 101.2 100.0 100.2
100.7 102.2 100.4
Analista 1 Analista 2
Promedio % recuperado por analistas 100.4% 100.5%
Promedio % recuperado total 100.5%
Desviación estándar por analista 0.70% 0.77%
Coeficiente de variación por analista 0.7% 0.77%
Coeficiente de variación total 0.73%

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Tabla 36. Resultados.

Parámetros Especificaciones Resultados


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0% 100.5%
Coeficiente de variación < 2.0% 0.73%

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7.6. LINEALIDAD Y RANGO.

7.6.1. LINEALIDAD DEL SISTEMA.

Tabla 37. Determinación de los parámetros.

Concentración Absorbancia
Niveles y2 x2 yx (S y)2/n y/x
(µg/mL) (x) (y)
80% 12.8 0.48240 0.23270976 163.84 6.17472 0.687652563 0.0377
80% 12.8 0.47820 0.22867524 163.84 6.12096 0.0374
80% 12.8 0.47570 0.22629049 163.84 6.08896 0.0372
90% 14.4 0.531100 0.28206721 207.36 7.64784 0.85386675 0.0369
90% 14.4 0.535700 0.28697449 207.36 7.71408 0.0372
90% 14.4 0.533700 0.28483569 207.36 7.68528 0.0371
100% 16 0.59400 0.352836 256 9.504 1.03934988 0.0371
100% 16 0.58330 0.34023889 256 9.3328 0.0365
100% 16 0.58850 0.34633225 256 9.416 0.0368
110% 17.6 0.65470 0.42863209 309.76 11.52272 1.279749453 0.0372
110% 17.6 0.64720 0.41886784 309.76 11.39072 0.0368
110% 17.6 0.65750 0.43230625 309.76 11.572 0.0374
120% 19.2 0.71960 0.51782416 368.64 13.81632 1.50889392 0.0375
120% 19.2 0.70540 0.49758916 368.64 13.54368 0.0367
120% 19.2 0.70260 0.49364676 368.64 13.48992 0.0366
Promedio 0.0371
Desviación estándar 0.0003
Coeficiente de variación 0.93%
Coeficiente de determinación 0.9961
Coeficiente de determinación lineal 0.9980
Intercepto (a) 0.0121
Pendiente (b) 0.0363

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Tabla 38. Significación estadística del intercepto y la pendiente.

Error Valor Valor Probabilid


Variable Valor t exp t tab Criterio
típico min max ad
Intercepto t exp <
0.0121 0.0102 1.187 2.14 -0.0099 0.0342 -0.009947
(a) t tab
Pendiente t exp >
0.0363 0.0006 57.344 2.14 0.0349 0.0376 5.09E-17
(b) t tab

Tabla 39. Análisis de varianza ANOVA.

Fuente GL SC Variancia Fexp Ftab Especificaciones


F1 F1
Regresión 1 0.1011 0.10109
F1 exp > F1 tab
3288.344 4.600
Residuo 13 0.0004 0.00003
F2 F2
Falta de ajuste 3 0.0001 0.00003
F2 exp < F2 tab
Error exp. 10 0.0003 0.00003 0.913 3.739
Total 14 0.1015 0.00725

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Tabla 40. Resultados.

Parámetros Especificaciones Resultados


Coeficiente de variación < 2.0% 0.93%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98 0.996
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99 0.998
Ecuación de regresión lineal y = bx + a y = 0.0363x + 0.0121
Significación estadística del intercepto (a) t exp < 2.14 t exp = 1.187
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > 2.14 t exp = 57.344
Homogeneidad de las varianzas
G exp < 0.68 G exp = 0.43
(Test de Cochran)
Análisis de varianza (ANOVA) F1 exp > 4.600 F1 exp = 3288.344
F2 exp < 3.739 F2 exp = 0.913

Figura 9. Curva de calibración.

Absorbancia vs Concentración (µg/mL)


0.75000

y = 0.0363x + 0.0121
0.70000 R² = 0.9961

0.65000
Absorbancia

0.60000

0.55000

0.50000

0.45000
12 13 14 15 16 17 18 19 20
Concentración (µg/mL)

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Figura 10. Gráfico de residuales.

Gráfico de residuales
0.012

0.007
Residuos

0.002

12 13 14 15 16 17 18 19 20
-0.003

-0.008

-0.013
Concentración (µg/mL)

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7.6.2. LINEALIDAD DEL MÉTODO.

Tabla 41. Determinación de los parámetros.

Concentración Absorbancia
Niveles y2 x2 yx (S y)2/n y/x
(µg/mL) (x) (y)
80% 12.8 0.47300 0.223729 163.84 6.0544 0.682587 0.0370
80% 12.8 0.48280 0.23309584 163.84 6.17984 0.0377
80% 12.8 0.47520 0.22581504 163.84 6.08256 0.0371
90% 14.4 0.542400 0.29419776 207.36 7.81056 0.865858963 0.0377
90% 14.4 0.531600 0.28259856 207.36 7.65504 0.0369
90% 14.4 0.537700 0.28912129 207.36 7.74288 0.0373
100% 16 0.59540 0.35450116 256 9.5264 1.071974963 0.0372
100% 16 0.59510 0.35414401 256 9.5216 0.0372
100% 16 0.60280 0.36336784 256 9.6448 0.0377
110% 17.6 0.65050 0.42315025 309.76 11.4488 1.28511075 0.0370
110% 17.6 0.66000 0.4356 309.76 11.616 0.0375
110% 17.6 0.65300 0.426409 309.76 11.4928 0.0371
120% 19.2 0.71040 0.50466816 368.64 13.63968 1.510028853 0.0370
120% 19.2 0.70940 0.50324836 368.64 13.62048 0.0369
120% 19.2 0.70860 0.50211396 368.64 13.60512 0.0369
Promedio 0.0372
Desviación estándar 0.003
Coeficiente de variación 0.79%
Coeficiente de determinación 0.9976
Coeficiente de determinación lineal 0.9988
Intercepto (a) 0.0130
Pendiente (b) 0.0364

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Tabla 42. Significación estadística del intercepto y la pendiente.

Error Valor Valor Probabili


Variable Valor t exp t tab Criterio
típico min max dad
Intercepto t exp <
0.013 0.0080 1.618 2.14 -0.0043 0.0303 0.129688
(a) t tab
Pendiente t exp >
0.0364 0.0005 73.214 2.14 0.0353 0.0375 2.14E-18
(b) t tab

Tabla 43. Análisis de varianza ANOVA.

Fuente GL SC Variancia Fexp Ftab Especificaciones


F1 F1
Regresión 1 0.1017 0.10169
F1 exp > F1 tab
5360.254 4.600
Residuo 13 0.0002 0.00002
F2 F2
Falta de ajuste 3 0.0000 0.00002
F2 exp < F2 tab
Error exp. 10 0.0002 0.00002 0.783 3.739
Total 14 0.1019 0.00728

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Tabla 44. Resultados.

Parámetros Especificaciones Resultados


Coeficiente de variación < 2.0% 0.79%
Coeficiente de determinación (r2) > 0.98 0.998
Coeficiente de determinación lineal (r) > 0.99 0.999
Ecuación de regresión lineal y = bx + a y = 0.0364x + 0.013
Significación estadística del intercepto (a) t exp < 2.14 t exp = 1.618
Significación estadística de la pendiente (b) t exp > 2.14 t exp = 71.214
Homogeneidad de las varianzas
G exp < 0.68 G exp = 0.353
(Test de Cochran)
Análisis de varianza (ANOVA) F1 exp > 4.600 F1 exp = 5360.254
F2 exp < 3.739 F2 exp = 0.783

Figura 11. Curva de calibración.

Absorbancia vs Concentración (µg/mL)


0.75000

0.70000 y = 0.0364x + 0.013


R² = 0.9976
0.65000
Absorbancia

0.60000

0.55000

0.50000

0.45000
12 13 14 15 16 17 18 19 20
Concentración (µg/mL)

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Figura 12. Gráficos de residuales.

Gráfico de residuales
0.008

0.006

0.004

0.002
Residuos

0
12 13 14 15 16 17 18 19 20
-0.002

-0.004

-0.006

-0.008
Concentración (µg/mL)

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7.7. ROBUSTEZ.

Tabla 45. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico 0.08 N.

Absorbancias de las soluciones en ácido clorhídrico 0.08 N


Estándar Placebo cargado
Longitudes de onda
Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2
0.5286 0.5293 0.5304 0.534
288 nm 0.5287 0.5289 0.5289 0.5329
0.5278 0.5281 0.5295 0.53
0.5883 0.5883 0.5914 0.592
290 nm 0.5871 0.5845 0.5907 0.5916
0.5872 0.5824 0.5908 0.5905
0.5952 0.5911 0.6012 0.5982
292 nm 0.5939 0.5976 0.5991 0.5996
0.5947 0.6005 0.5999 0.5988

Tabla 46. Resultados en ácido clorhídrico 0.08 N.

Solución en ácido clorhídrico 0.08 N


Promedio % Recuperado Desviación estándar Coeficiente de variación
Longitudes de onda
Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2
288 nm 100.2 100.7 0.1697 0.2749 0.1693 0.2731
290 nm 100.6 101.1 0.0498 0.3989 0.0495 0.3946
292 nm 100.9 100.4 0.0768 0.7456 0.0761 0.7425
Promedio por celda 100.6 100.7 0.0988 0.4731 0.0983 0.4701
Total 100.7% 0.28% 0.28%

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Tabla 47. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico 0.1 N.

Absorbancias de las soluciones en ácido clorhídrico 0.1 N


Estándar Placebo cargado
Longitudes de onda
Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2
0.5293 0.5418 0.5275 0.5356
288 nm 0.5342 0.5421 0.5379 0.5409
0.5332 0.5426 0.5369 0.5445
0.5914 0.6089 0.5923 0.6101
290 nm 0.5897 0.6037 0.5886 0.599
0.5881 0.6028 0.5889 0.5978
0.6048 0.602 0.6071 0.6019
292 nm 0.6025 0.5998 0.6037 0.6005
0.6028 0.6008 0.6043 0.6003

Tabla 48. Resultados en ácido clorhídrico 0.1 N.

Solución en ácido clorhídrico 0.1 N


Promedio % Recuperado Desviación estándar Coeficiente de variación
Longitudes de onda
Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2
288 nm 100.3 99.7 0.5966 0.7541 0.5945 0.7567
290 nm 100.0 99.5 0.1911 0.5785 0.1910 0.5813
292 nm 100.3 100.0 0.0936 0.1018 0.0933 0.1018
Promedio por celda 100.2 99.7 0.2938 0.4781 0.2930 0.4799
Total 100.0% 0.39% 0.39%

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Tabla 49. Absorbancias de las soluciones por celdas/longitudes de ondas/ácido clorhídrico 0.12 N.

Absorbancias de las soluciones en ácido clorhídrico 0.12 N


Estándar Placebo cargado
Longitudes de onda
Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2
0.5324 0.536 0.5323 0.5367
288 nm 0.5305 0.5368 0.5302 0.5361
0.5308 0.5368 0.5313 0.5391
0.59 0.5905 0.5909 0.5906
290 nm 0.5896 0.5925 0.5884 0.5925
0.5979 0.5895 0.5935 0.59
0.5981 0.607 0.5987 0.6034
292 nm 0.5987 0.6073 0.5985 0.6124
0.5981 0.6074 0.5981 0.6039

Tabla 50. Resultados en ácido clorhídrico 0.12 N.

Solución en ácido clorhídrico 0.12 N


Promedio % Recuperado Desviación estándar Coeficiente de variación
Longitudes de onda
Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2 Celda 1 Celda 2
288 nm 100.0 100.1 0.0784 0.2796 0.0784 0.2792
290 nm 99.7 100.0 0.4471 0.0449 0.4483 0.0449
292 nm 100.0 99.9 0.0696 0.8224 0.0696 0.8233
Promedio por celda 99.9 100.0 0.1984 0.3823 0.1988 0.3825
Total 100.0% 0.29% 0.29%

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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Tabla 51. Resultados total.

% Recuperado total 100.2%


Desviación estándar total 0.32%
Coeficiente de variación total 0.32%

Tabla 52. Resultados.

Parámetros Especificaciones Resultados


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0% 100.2%
Coeficiente de variación < 2.0% 0.32%

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7.8. ESTABILIDAD DE LAS SOLUCIONES.

Tabla 53. Absorbancias y concentración obtenida por tiempo y condición de almacenamiento.

Condición de Absorbancia/tiempo de
Concentración obtenida (µg/mL)
almacenamiento almacenamiento
de las soluciones Inicial 24 hrs. 48 hrs. Inicial 24 hrs. 48 hrs.
0.5973 0.5901 0.5838 16.0970 15.9030 15.7332
Ambiente 0.5904 0.5932 0.5848 15.9111 15.9865 15.7601
0.6054 0.5957 0.5855 16.3153 16.0539 15.7790
0.6077 0.5902 0.5874 16.3773 15.9057 15.8302
40 ºC 0.5968 0.5904 0.5884 16.0835 15.9111 15.8572
0.5926 0.5851 0.5902 15.9704 15.7682 15.9057
0.5966 0.5957 0.5864 16.0782 16.0539 15.8033
Refrigerado 0.5958 0.5962 0.587 16.0566 16.0674 15.8194
0.5933 0.5955 0.5876 15.9892 16.0485 15.8356

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Tabla 54. Porcentajes de recuperado.

Condición de % Recuperado por condición de


almacenamiento de almacenamiento/tiempo de almacenamiento
las soluciones Inicial 24 hrs. 48 hrs
100.6 99.4 98.3
Ambiente 99.4 99.9 98.5
102.0 100.3 98.6
102.4 99.4 98.9
40 ºC 100.5 99.4 99.1
99.8 98.6 99.4
100.5 100.3 98.8
Refrigerado 100.4 100.4 98.9
99.9 100.3 99.0
Promedio 99.7%

Tabla 55. Resultados.

Parámetros Especificaciones Resultados


Promedio del % Recuperado 100.0 ± 2.0% 99.7%

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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8. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS.

8.1. IDONEIDAD.

8.1.1. IDONEIDAD DEL SISTEMA INSTRUMENTAL.

Los resultados de los parámetros espectrofotométricos evaluados y emitidos por el


espectrofotómetro UV/Vis Varian Cary 50 para la prueba EP/BP fueron cumplidos
satisfactoriamente, lo que indica que tiene un desempeño adecuado pudiéndose desarrollar la
validación del método de cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral
confiando que el equipo brindó resultados fiables.

8.1.2. PRECISIÓN DE LA IDONEIDAD DEL SISTEMA.

En la evaluación de la precisión de la idoneidad del sistema se cuantificó una solución


estándar de albendazol a la concentración nominal y a través del tratamiento estadístico de
las absorbancias obtenidas, se obtuvo un coeficiente de variación de 0.3781% (menor al
2.0%) (Tabla 25), lo cual indica que el método es apto y se obtendrán datos fiables de él,
pudiéndose llevar a cabo satisfactoriamente la validación del método de cuantificación de
albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral.

8.2. ESPECIFICIDAD.

Los espectros de absorción obtenidos en la identificación de las soluciones de estándar,


placebo y placebo cargo de albendazol en la figura 7, demuestran que los excipientes
utilizados en la formulación del producto no emiten una señal significativa a la longitud de
máxima absorción del principio activo (290 nm). Igualmente se demostró de manera
estadística a través del porcentaje de discrepancia, obteniéndose un resultado de 0.07803%
(menor al 4.0%) (Tabla 27), que se puede medir el analito de interés a la longitud de onda de
máxima absorción de manera inequívoca.

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8.3. EXACTITUD.

Se midió el parámetro de la exactitud a través de método de muestra problema cargada con


analito, a las lecturas obtenidas se le calculó el porcentaje de recuperado que fue de 99.9%
encontrándose dentro de los parámetros (100.0 ± 2.0%) (Tabla 29), lo que indica que el
método recupera satisfactoriamente el analito presente en la muestra, se obtuvo un coeficiente
de variación de 1.2303% (menor al 2.0%) (Tabla 29), se aplicó la prueba de t-student para la
media obteniéndose una t experimental de 0.2963 (menor que la t tabla 2.31) (Tabla 29) para
un nivel de significancia de 0.05 lo que demuestra que no hay diferencia significativa entre
la media y el 100%, de igual manera se le aplico el test de homogeneidad de las varianzas
para los tres niveles de concentración obteniéndose una G experimental de 0.8237 (menor
que la G tabla 0.87) (Tabla 29) lo que demuestra que las varianzas de las concentraciones
son homogéneas, el factor concentración no influye significativamente en la variabilidad de
los resultados.

8.4. PRECISIÓN.

8.4.1. PREPETIBILIDAD DEL SISTEMA.

A través de este ensayo se logró demostrar que no existe variabilidad significativa provocada
exclusivamente por el instrumento. Se demuestras a través del porcentaje de recuperado
obtenido de la cuantificación de una solución estándar de albendazol a concentración nominal
de 100.4% encontrándose dentro del parámetros (100.0 ± 2.0%) (Tabla 31) y un coeficiente
de variación de 1.0979% (menor al 2.0%) (Tabla 31).

8.4.2. REPETIBILIDAD DEL MÉTODO.

Por medio de este ensayo de demostró que no existe una variación significativa provocada
por el proceso de la preparación de las soluciones muestras, que en este caso sería las
soluciones de placebo cargado, hasta la lectura de la misma, confirmándose a través del

Validación de la metodología analítica para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


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porcentaje de recuperado obtenido de la cuantificación de una solución de placebo cargado


de albendazol a concentración nominal de 99.7827% encontrándose dentro del parámetros
(100.0 ± 2.0%) (Tabla 33) y un coeficiente de variación de 0.1138% (menor al 2.0%) (Tabla
33).

8.4.3. PRECISIÓN INTERMEDIA.

En este ensayo se demostró a través del tratamiento estadístico de las absorbancias obtenidas
por dos analistas en diferentes días, teniendo un porcentaje de recuperado de 100.4% y
100.5% respectivamente por analista y un porcentaje de recuperado global de 100.5%
encontrándose dentro del parámetro (100.0 ± 2.0%) (Tabla 36), además de un coeficientes
de variación de 0.6980% y 0.7699% respectivamente para cada analista y un coeficiente de
variación global de 0.7339% (menor al 2.0%) (Tabla 36) que no existe variación significativa
en la precisión alcanzada por los dos analistas en diferentes días bajo distintas condiciones
de trabajo.

8.5. LINEALIDAD Y RANGO.

8.5.1. LINEALIDAD DEL SISTEMA.

Para la determinación de la linealidad del sistema se verificó con soluciones estándar en un


intervalo de concentración de 12.8 µg/mL a 19.2 µg/mL, con estos puntos se realizó una
curva de calibración cuya ecuación de regresión lineal fue y = 0.0363x + 0.0121, coeficiente
de determinación 0.9961, coeficiente de determinación lineal 0.9980 de albendazol. Con el
gráfico de la curva de calibración (Figura 9) se demuestra que se cumple la ley de Beer, ya
que las absorbancias son directamente proporcional a las concentraciones.

Al aplicar el test de significación estadística del intercepto la t experimental fue de 1.1874


(menor que la t tabla 2.14) (Tabla 40) para un nivel de significancia de 0.05, donde los
intervalos de confianza incluyen el 0 (-0.0099 a 0.0342) por lo que no representan sesgo; de
igual manera al aplicar el test de significación estadística de la pendiente la t experimental

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fue de 57.3441 (mayor que la t tabla 2.14) (Tabla 40) para un nivel de significancia de 0.05,
donde los intervalos de confianza no incluyen el 0 (0.0349 a 0.0376).

A los datos experimentales se le aplicó el test de homogeneidad de las varianzas siendo la G


experimental 0.4298 (menor que la G de tabla 0.68) (Tabla 40), lo que demuestra que las
varianzas de las concentraciones son homogéneas, el factor concentración no interfiere en la
variabilidad de los resultados. Se realizó un gráfico (Figura 10) y análisis de residuales en el
que se demuestra que no existe tendencia entre los resultados.

Se realizó un análisis de varianzas en la que se demuestra que existe una relación lineal entre
la variable dependiente (absorbancia) y la variable independiente (concentración) ya que F1
experimental es de 3288.3443 (mayor que F1 de tabla 4.600) (Tabla 40) demostrando que la
pendiente es distinta de 0 y F2 experimental fue de 0.9132 (menor que F2 de tabla 3.739)
(Tabla 40) demostrando que existe linealidad entre los resultados.

8.5.2. LINEALIDAD DEL MÉTODO.

Para la determinación de la linealidad del método se verificó con soluciones de placebo


cargado en un intervalo de concentración de 12.8 µg/mL a 19.2 µg/mL, con estos puntos se
realizó una curva de calibración cuya ecuación de regresión lineal fue y = 0.0364x + 0.013,
coeficiente de determinación 0.9976, coeficiente de determinación lineal 0.9988 de
albendazol. Con el gráfico de la curva de calibración (Figura 11) se demuestra que se cumple
la ley de Beer, ya que las absorbancias son directamente proporcional a las concentraciones.

Al aplicar el test de significación estadística del intercepto la t experimental fue de 1.6179


(menor que la t tabla 2.14) (Tabla 44) para un nivel de significancia de 0.05, donde los
intervalos de confianza incluyen el 0 (-0.0043 a 0.0303) por lo que no representan sesgo; de
igual manera al aplicar el test de significación estadística de la pendiente la t experimental
fue de 71.2138 (mayor que la t tabla 2.14) (Tabla 44) para un nivel de significancia de 0.05,
donde los intervalos de confianza no incluyen el 0 (0.0353 a 0.0375).

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A los datos experimentales se le aplicó el test de homogeneidad de las varianzas siendo la G


experimental 0.3527 (menor que la G de tabla 0.68) (Tabla 44), lo que demuestra que las
varianzas de las concentraciones son homogéneas, el factor concentración no interfiere en la
variabilidad de los resultados. Se realizó un gráfico (Figura 12) y análisis de residuales en el
que se demuestra que no existe tendencia entre los resultados.

Se realizó un análisis de varianzas en la que se demuestra que existe una relación lineal entre
la variable dependiente (absorbancia) y la variable independiente (concentración) ya que F1
experimental es de 5360.2545 (mayor que F1 de tabla 4.600) (Tabla 44) demostrando que la
pendiente es distinta de 0 y F2 experimental fue de 0.7831 (menor que F2 de tabla 3.739)
(Tabla 44) demostrando que existe linealidad entre los resultados.

8.6. ROBUSTEZ.

Se demostró que la variación en factores determinante del método como son longitud de onda
de máxima absorción, concentración del ácido clorhídrico o utilizar distintas celdas no afecta
significativamente en los resultados obtenidos ya que se obtuvo un porcentaje de recuperado
de 100.2% encontrándose dentro del parámetro (100.0 ± 2.0%) (Tabla 52) y un coeficiente
de variación de 0.3204% (menor al 2.0%) (Tabla 52).

8.7. ESTABILIDAD DE LAS SOLUCIONES.

Se determinó que la concentración de la solución de placebo cargado no varía al momento


de su preparación y luego de un lapso de 24 y 48 horas almacenadas en distintos ambientes
como fueron temperatura ambiente, refrigeración y a 40 ºC obteniendo un porcentaje de
recuperado final de 99.7% encontrándose dentro del parámetro (100.0 ± 2.0%) (Tabla 55),
esto indica que la solución de placebo cargado conservará su condición sin que se altere la
potencia del analito en un tiempo no mayor de 48 horas luego de su preparación y sin importar
el ambiente de almacenamiento.

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9. CONCLUSIONES.

Se elaboró un protocolo de validación para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL


suspensión oral por la técnica espectrofotometría UV/Visible para el laboratorio de
producción de medicamentos Mauricio Díaz Müller.

Al evaluar los parámetros de desempeño para procedimientos analíticos categoría I en el


método analítico propuesto para la cuantificación de albendazol 200 mg/5 mL suspensión
oral por espectrofotometría ultravioleta cumple con las exigencias dadas por el RTCA
11.03.39: 06 y USP36/NF31 demostrando que es específico porque detecta el analito de
albendazol de forma inequívoca sin interferencia de los excipientes de la formulación; es
exacto porque permite la recuperación del analito presente en la muestra en su totalidad; es
preciso porque se obtuvieron resultados reproducibles y repetitivos, y es lineal ya que los
resultados son proporcional a la concentración del analito de albendazol en la muestra.

Al evaluar los parámetros adicionales se verificó que el desempeño del equipo


espectrofotométrico y el método son idóneos, obteniéndose resultados confiables; el método
es robusto ya que al realizársele variaciones a factores críticos con respecto a las condiciones
descritas, los cuales son susceptibles de producirse durante el desarrollo de rutina de dicho
método no afecta significativamente en el recuperado del analito de albendazol presente en
la muestra; las soluciones de placebo cargado son estables frente a diferentes condiciones de
almacenamientos y en un lapso menor o igual a 48 horas después de su preparación.

Los resultados de los parámetros de validación evaluados indican que el procedimiento


analítico propuesto para la cuantificación del producto de albendazol 200 mg/5 mL
suspensión oral es exacto y preciso brindándole al Laboratorio de producción de
medicamentos Mauricio Díaz Müller un método de análisis de rutina alterno a los
farmacopéicos para dicho producto que se ajusta a los recursos que posee, además de ser un
método con un bajo costo pero que brinda resultados confiable y reproducibles.

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10. RECOMENDACIONES.

A LOS ESTUDIANTES

- A los estudiantes de la carrera de farmacia de la UNAN - León se interesen y


contribuyan al desarrollo y validación de nuevos métodos de validación que se ajusten
a los recursos que posee el Laboratorio Mauricio Díaz Müller.

A LA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICA

- Que las autoridades estimulen e incentiven en conjunto con el personal docente a los
alumnos al desarrollo científico de nuevos métodos de análisis que minimicen los
costos.
- Crear instalaciones y ambientes debidamente equipados con material analítico y
equipos calibrados para el desarrollo de investigaciones científicas propuestas en el
área de control de calidad.

AL LABORATORIO MAURICIO DÍAZ MÜLLER

- Insistir a los estudiantes a que apoyen en la realización de la validación de los métodos


de análisis de los productos.

AL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDICAMENTOS

- Seguir brindándole a los alumnos sus recursos para la investigación científica y


trabajo monográficos.

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11. BIBLIOGRAFÍA.

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Lezcano C., Encima García G., Jansat Rufach J. M., Nieto Abad C., Pérez Cuadrado
J. A., Rovira Guerín M., Tost Robusté D. y Cortes Loras R. (2001). Validación de
métodos analíticos. Asociación española de farmacéuticos de la industria.
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Las bases farmacológicas de la terapéutica (12ª Ed.). México, D. F.: The McGraw-
Hill Companies, Inc.
3. Christian, G. D. (2009). Química analítica (6ª Ed.). México, D. F.: International
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actualización. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana. Programa de Control de
Calidad Instrumental: Espectrofotómetros y Fotocolorímetros, 39 (4).
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la validación de métodos de laboratorios de ensayos y calibración. DOC-ONA-12-
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7. Hansen S., Pedersen-Bjergaard S. & Rasmussen K. (2012). Introduction to
pharmaceutical chemical analysis (1st Ed.). United Kingdom: John Wiley & Sons
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11. Katzung, B. G., Masters, S. B. y Trevor, A. J. (2012). Farmacología básica y clínica
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Centroamericano: Productos farmacéuticos. Medicamentos para uso humano.
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Centroamericano: Productos farmacéuticos. Validación de métodos analíticos para
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19. Owen, T. (2000). Fundamentos de la espectroscopia UV-visible moderna. Agilent
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12. ANEXOS.

FORMULA CUALI-CUANTITATIVA DE ALBENDAZADOL 200 mg/5 mL


SUSPENCIÓN ORAL.
Tabla 56. Fórmula cuali-cuantitativa de albendazol 200 mg/5 mL suspensión oral.

COMPONENTES FÓRMULA UNITARIA DE 5 mL


Albendazol 200 mg
Avicel RC591 82.5 mg
Metilparabeno 5.5 mg
Propilparabeno 1.5 mg
Azúcar refinada 1g
Sorbitol 1.25 mL
Glicerina 0.75 mL
Tween 40 5 mg
Sabor fresa 2.5 mg
Color anaranjado 0.1 mg
Agua destilada C.S.P. 5 mL

PREPARACIÓN DE PLACEBO DE ALBENDAZOL 200 mg/5 mL.

Técnica de fabricación de 400 mL de placebo de Albendazol 200 mg/5 mL.

- Pesar la materia prima.


- Preparar el jarabe simple, disolviendo 84 g de azúcar refinada en 90 mL de agua
destilada, utilizando beaker de 500 mL, agitar con el agitador eléctrico por 10
minutos.
- Una vez preparado el jarabe simple, filtrar por 3 mantas previamente hervidas.
Enjuagar el beaker, adicionar de nuevo el jarabe pero ya filtrado.
- Preparar una solución de sorbitol más agua destilada (80 mL de sorbitol, más 30 mL
de agua destilada), en un beaker, mezclando con una espátula de acero inoxidable, de
esta mezcla tomar 60 mL y adicionar a un beaker de vidrio y calentar a 85 ºC,

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midiendo con termómetro; luego adicionar 0.120 g de Propil parabeno, poco a poco,
una vez disuelto este, agregar 0.440 g de Metil parabeno, poco a poco hasta disolver.
Luego enfriar agregando poco a poco 6 mL de agua destilada, hasta que la solución
aproximadamente 50 ºC. Inmediatamente adicionar a un beaker de 250 mL la
solución que contiene los conservadores, después en ésta y con agitación constante
agregar poco a poco 6.600 g de Avicel RC 591, hasta completa humectación. Luego
adicionarla al mortero para comprobar dicha humectación.
- Adicionar el Avicel RC 591 previamente humectado, al beaker de fabricación que
contiene el jarabe simple ya filtrado, lavando el mortero con el sobrante de la mezcla
(sorbitol más agua destilada), más agua destilada, agregar el enjuague al tanque de
fabricación y continuar agitando.
- Adicionar 60 mL de glicerina al beaker de preparación donde está el jarabe simple.
- Adicionar 0.400 g de Tween 40 al beaker de fabricación, con agitación constante.
- Adicionar en un beaker de 50 mL, 20 mL de agua destilada calentar a (50 a 60 ºC),
en éste agregar poco a poco con agitación constante los 0.200 g de sabor fresa, utilizar
espátula para disolver, una vez disuelto agregar al beaker de fabricación.
- Disolver 0.008 g de colorante anaranjado en 8 mL de agua destilada con ayuda de un
agitador de vidrio, una vez disuelto éste, agregar al beaker de fabricación.
- Agregar 20 mL de Sorbitol al beaker de fabricación y aforar a 400 mL con agua
destilada, continuar agitando durante 15 minutos.
- Medir pH (4.5 – 5.5).
- Filtrar por malla (tamiz redondo), de acero inoxidable.
- Envasar en frasco plástico, color blanco de 120 mL, usando jeringa descartable de 50
mL con tapado manual, usando guantes descartables.

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Figura 13. Tabla de valores críticos de t.

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Figura 14. Tabla de valores críticos de F para un nivel de significancia de 0.05

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Figura 15. Espectrofotómetro UV/Vis Varian Cary 50.

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Figura 16. Balanza analítica A&D HM-120 y masas para la verificación de la balanza.

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Figura 17. Verificación de la balanza A&D HM-120 con masa de 50 g.

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Figura 18. Material de referencia marca Starna para la verificación del espectrofotómetro UV/Vis.

Figura 19. Material de referencia marca Starna para la verificación del espectrofotómetro UV/Vis.

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