TEMA 4: AMINOÁCIDOS

1. AMINOÁCIDOS.

Las proteínas son polímeros de aminoácidos, en los que cada residuo aminoácido está unido al siguiente a través de
un tipo específico de enlace covalente. Los aminoácidos son las unidades estructurales de las proteínas. Son
moléculas orgánicas formadas, al menos, por un grupo amino y un grupo carboxílico.

Existen 20 aminoácidos proteicos codificados por el DNA para formar las proteínas. Es por ello que estos
aminoácidos se denominan aminoácidos proteinogénicos. Además de estos 20 aminoácidos, existen la
selenocisteína y la pirrolisina en arqueobacterias.

Muchas proteínas contienen aminoácidos modificados. Hay aminoácidos que son intermedios de rutas
metabólicas. Otra característica es que los aminoácidos son precursores de sustancias biológicas con nitrógeno
(coenzimas, hormonas, neurotransmisores...)

2. ESTRUCTURA GENERAL DE UN AMINOÁCIDO

Los 20 aminoácidos estándar encontrados en las proteínas son α-aminoácidos. Todos tienen un grupo carboxilo y un
grupo amino unidos al mismo átomo de carbono (el carbono α). Difieren entre ellos en sus cadenas laterales,
radicales o grupos R, que varían en estructura, tamaño y carga eléctrica y que influyen en la solubilidad en agua de
los aminoácidos. El carbono α o carbono quiral tiene estos 4 sustituyentes diferentes.

Forma no iónica f. zwitteriónica

Los aminoácidos en solución acuosa están ionizados y pueden actuar como ácidos cediendo protones (COO-) o como
bases aceptando protones (NH3+). A pH neutro suelen estar como iones dobles (zwitterion)

Cuando los aminoácidos están doblemente ionizados, aparece una forma dipolar iónica llamada zwitterión, donde
su carga neta es cero. Esto permite definir el concepto de punto isoeléctrico (pI) de un aminoácido, como el valor
de pH en el cual se encuentra la máxima concentración de zwitterión. Cuando un aminoácido sin un grupo R
ionizable se disuelve en agua a pH neutro, se encuentra en solución en forma de ion dipolar, que puede actuar
como ácido o como base.
3. ESTEREOISOMERÍA DE LOS AMINOÁCIDOS.

En todos los aminoácidos estándar excpeto la glicina, el carbono α está unido a cuatro grupos diferentes: un grupo
carboxilo, un grupo amino, un grupo R y un átomo de hidrógeno. El átomo de carbono α es por tanto, un centro quiral.
La presencia de este carbono quiral, hace que los cuatro grupos diferentes puedan ocupar dos ordenamientos
diferentes en el espacio, por lo que los aminoácidos pueden aparecer en forma de dos estereoisómeros. Al ser
imágenes especulares no superponibles entre sí, las dos formas constituyen un tipo de estereoisómeros, los
enantiómeros.

• Si el grupo AMINO está a la derecha son “D” aminoácidos, si está a la izquierda son “L” aminoácidos.
• Todos los aminoácidos naturales que forman parte de las proteínas son enantiómeros “L”
4. LOS AMINOÁCIDOS SE CLASIFICAN SEGÚN SU GRUPO R.

En las proteínas, la naturaleza química de la cadena lateral de los aminoácidos es la que va a condicionar su solubilidad,
su reactividad y el tipo de interacciones que se puedan establecer. Por tanto, los grupos R, es lo que establece
diferencias entre los aminoácidos.

Las cadenas laterales de los diferentes aminoácidos pueden ser HIDROFÓBICAS, AROMÁTICAS, POLAR SIN CARGA o
PRESENTAR CARGA a determinados pH.

Existe una nomenclatura de códigos para los aminoácidos. El código de tres letras es transparente: las abreviaturas
consisten generalmente en las tres primeras letras del nombre del aminoácido. El código de una letra consiste en
asignar una letra determinada a un aminoácido. Por ejemplo, para la glicina:

➢ Grupos R apolares alifáticos: Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro

➢ Grupos R aromáticos: Phe, Tyr, Trp.
➢ Grupos R que contienen azufre: Cys, Met
➢ Grupos R polares sin carga: Ser, Thr, Asn, Gln
➢ Grupos R cargados positivamente: Lys, Arg, His
➢ Grupos R cargados negativamente: Glu, Asp

GRUPOS R ALIFÁTICOS APOLARES O HIDROFÓBICOS

Las cadenas R alifáticas son estructuras hidrocarbonadas, lineales o ramificadas, con enlaces sencillos. Son grupos R
apolares e hidrofóbicos.

Los aminoácidos que tienen estos grupos R, poseen un fuerte carácter hidrofóbico (excepto la Gly, pues, aunque es
formalmente apolar, su muy pequeña cadena lateral no tiene una contribución real en las interacciones hidrofóbicas)
dado por la naturaleza hidrocarbonada de sus cadenas laterales. El hecho de que las cadenas laterales
hidrocarbonadas sean hidrofóbicas se debe a que los electrones se comparten por igual entre los átomos de Carbono
e Hidrógeno en estas cadenas laterales y no pueden establecerse enlaces de hidrógeno con el agua.

Estos aminoácidos contribuyen al plegamiento de la proteína mediante interacciones hidrofóbicas y se encuentran

principalmente en el interior de la proteína. Es decir, este tipo de aminoácidos con estos grupos R, al ser cadenas
hidrofóbicas se establecen relaciones entre ellas, se agrupan, hacen que la proteína se pliegue estabilizando su
estructura a través de interacciones hidrofóbicas.

Aminoácidos con grupos R alifáticos apolares peculiares:

• Glicina (Gly): Aunque sea un aminoácido formalmente apolar, su muy pequeña cadena lateral formada
solamente por un H, hace que la glicina no sea un aminoácido realmente hidrofóbico. Es por ello, que la glicina
en las proteínas contribuye a la flexibilidad estructural, por su no polaridad y su único H en la cadena lateral.
El motivo de esta flexibilidad es que tiene alta libertad de rotación
• Prolina (Pro): también tiene una cadena lateral de naturaleza alifática, pero difiere de los demás aminoácidos
en que su cadena lateral está unida tanto al carbono alfa como al nitrógeno del grupo amino, formando el
anillo de pirrolidina, por lo que tiene una estructura cíclica especial.
− El grupo amino de los residuos de prolina tiene una conformación rígida que reduce la flexibilidad estructural
de las regiones polipeptídicas que contienen este aminoácido. Por tanto, la prolina aporta rigidez, dificulta el
plegado y por tanto es frecuente en los codos de las proteínas.
 • Metionina (Met): es uno de los aminoácidos que contiene azufre, es hidrófobo y tiene una cadena lateral con
un grupo tioéter apolar en su cadena lateral. Al ser hidrófobo no puede ser polar.

GRUPOS R AROMÁTICOS.

Son grupos R o cadenas laterales que consisten en estructuras cíclicas con propiedades semejantes, aunque su
polaridad es muy diferente. Estas cadenas son relativamente apolares (hidrofóbicos). Todos ellos pueden participar
en interacciones hidrofóbicas.

• Fenilamina (Phe): el anillo benceno no tiene sustituyentes, los electrones se comparten por igual (apolar) y
es una estructura hidrofóbica muy apolar en la que los anillos pueden apilarse uno sobre otro.

Los anillos de los grupos R de la fenilalanina se apilan uno sobre otro, a través de una
interacción hidrofóbica.

• Tirosina (Tyr): el grupo –OH del anillo fenol participa en enlaces de H y la cadena lateral es más polar.
• Triptófano (Trp): el anillo indol (compuesto orgánico heterocíclico, que consiste en un anillo de seis carbonos,
unido a un anillo de cinco carbonos) donde el N participa en enlaces de H, por lo que es una cadena lateral
polar.

Los grupos R-aromáticos en los aminoácidos absorben la luz ultravioleta con una absorbancia máxima de 280 nm. La
capacidad de las proteínas de absorber la luz ultravioleta es predominante debido al triptófano. El triptófano y la
tirosina, y en mucho menor grado la fenilalanina, absorben a luz ultravioleta. Esto explica la fuerte absorbancia de la
luz característica de las proteínas a una longitud de onda de 280nm.
GRUPOS R POLARES SIN CARGA.

Los grupos R de estos aminoácidos son más solubles en agua, o más hidrofílicos, que los de los aminoácidos apolares,
debido a que contienen grupos funcionales que forman puentes de hidrógeno con el agua. La polaridad de la serina
y treonina proviene de sus grupos hidroxilo; en el caso de la cisteína de su grupo sulfhidrilo, que es un ácido débil y
puede establecer puentes de hidrógeno débiles con el oxígeno o el nitrógeno; y en el de la asparagina y de la glutamina
de sus grupos amida

• Serina (Ser) y treonina (Thr): en sus grupos R aparecen grupos hidroxilo, haciendo que sean polares. Son
hidroxiaminoácidos.
• Asparagina (Asn) y Glutamina (Gln): son apolares debido a su grupo amida. Ambos son las amidas de
otros dos aminoácidos que también se encuentran en las proteínas, el aspartato y el glutamato,
respectivamente, a los que se hidrolizan fácilmente por ácido o base.
• Cisteína (Cys): la cisteína es polar debido al grupo sulfhidrilo (-SH) de su cadena lateral. Este grupo
sulfhidrilo aparece predominantemente sin disociar y sin carga al pH fisiológico.

La cisteína se oxida con suma facilidad formando un aminoácido dimérico unido covalentemente llamado cistina, en
el que dos moléculas de cisteína están unidas a través de un enlace disulfuro. Los residuos unidos por un enlace
disulfuro son fuertemente hidrófobos (apolares).

Explicación alternativa: la cisteína puede formar un enlace covalente disulfuro con otra molécula de cisteína por
oxidación espontánea, no enzimática, de sus grupos sulfhidrilo, dando lugar a un aminoácido dimérico llamado cistina,
que no es codificado en el DNA. Se trata, por tanto, de la formación reversible de un puente disulfuro por oxidación
de dos moléculas de cisteína.

Los enlaces disulfuro desempeñan un papel especial en la estructura de muchas proteínas puesto que forman uniones
covalentes entre partes de una molécula de proteína o entre dos cadenas proteicas diferentes.

puentes de H

Estos grupos laterales polares forman puentes de Hidrógeno con el agua, entre ellos o con otros grupos polares de
la proteína.
GRUPOS R CARGADOS NEGATIVAMENTE, AMINOÁCIDOS ÁCIDOS (por el carboxilo, no t rayes con el pH)

Los dos aminoácidos que tienen grupos R con una carga neta negativa a pH 7,0 (el pH fisiológico); son el aspartato y el
glutamato, cada uno de los cuales tiene un segundo grupo carboxilo. Por tanto, son aminoácidos dicarboxílicos.

El grupo carboxilo de sus grupos R tienen carga negativa al pH fisiológico.

GRUPOS R CARGADOS POSITIVAMENTE O AMINOÁCIDOS BÁSICOS.

Los grupos R más hidrofílicos son aquellos que están cargados positivamente o negativamente. Los aminoácidos en
los que los grupos R tienen una carga neta positiva a pH fisiológico son la lisina, la arginina y la histidina.

Estos tres aminoácidos tienen cadenas laterales con Nitrógeno que puede protonarse y cargarse positivamente.

Lisina (Lys): aminoácidos con un grupo amino primario adicional en el carbono sexto o ε.

Arginina (Arg): aminoácido que contiene un grupo guanidinio cargado positivamente.

Histidina (His): aminoácido con un anillo nitrogenado de imidazol.

Las cargas positivas de los aminoácidos básicos les permiten formar enlaces iónicos (enlaces electrostáticos) con
grupos con carga negativa, como las cadenas laterales de los aminoácidos ácidos.
5. AMINOÁCIDOS ESENCIALES.

Los aminoácidos esenciales son aquellos aminoácidos que necesitan ser ingeridos con la dieta ya que no se pueden
biosintetizar. Son diferentes en cada especie, en la especie humana son nueve:

• Alifáticos ramificafos: valina, leucina, isoleucina.

• Con azufre: metionina
• Aromáticos: fenilalanina y triptófano
• Alcohol: treonina
• Básicos: lisina e histidina.

La arginina es un aminoácido semiesencial pues es necesario para los niños, pues la arginina es importante en el
crecimiento celular, pero no es tan necesario en el adulto.

6. MODIFICACIONES POST-TRADUCCIONALES DE AMINOÁCIDOS:

Además de los 20 aminoácidos estándar, las proteínas pueden contener residuos modificados después de la síntesis.
Algunos de los residuos aminoácidos de una proteína pueden ser modificados de forma transitoria para alterar la
función de la proteína (aumentar o disminuir su actividad).

A continuación, se muestran una serie de reacciones que ocurren en aminoácidos específicos, y que producen su
modificación post-traduccional.

Oxidación: ocurre en Pro, Lys. Se encuentran en el colágeno.

Fosforilación.

Fosforilación: En –OH de Ser, Thr y Tyr. La fosforilación es un mecanismo importante para regular la actividad de la
proteína. Consiste en la unión de un grupo fosfato a H del grupo –OH de cualquiera de estos aminoácidos.

Acetilación: En –NH3+ de Lys. La acetilación de proteínas como las histonas regula la estructura de la cromatina.
Consiste en la adición de un grupo acetilo o etanol al grupo NH3+ de la lisina.

Metilación: Lys, Arg. Al igual que la acetilación, también regula la estructura de la cromatina. Consiste en la adición de
un grupo -CH3

ADP-ribosilación: Arg, Gln, Cys.

O-glucosilación: Ser, Thr, Tyr. Se encuentran en proteínas glucosiladas. Consiste en la unión de uno de estos
aminoácidos a un glúcido a través de un enlace O-glucosídico.

N-glucosilación: Asn. En proteínas glucosiladas. Consiste en la unión a través de un enlace N-glucosídico del grupo
NH2 de la asparagina a un glúcido.

O-glucosilacón. N-glucosilación.

• UNIÓN DE LÍPIDOS A PROTEÍNAS UNIDAS A MEMBRANAS. EJ

Palmitilación: -SH de una Cys. Consiste en la unión de un ácido graso de un lípido, al grupo –SH de la cisteína.

Miristilación: -NH3 de una Gly terminal. El ácido graso se une al NH3+ de una glicina

Prenilación: SH de una Cys. El ácido graso se une al grupo –SH de la cisteína.

Palmitilación Miristilación Prenilación

7. AMINOÁCIDOS QUE NO ESTÁN EN PROTEÍNAS.

Aparte de los 20 aminoácidos que forman parte de las proteínas (aminoácidos proteinogénicos). Existen otros que no
están en las proteínas, pero tienen una importante función biológica en el organismo.

La ornitina y la citrulina son intermediarios clave (metabolitos) en la biosíntesis de la arginina y en el ciclo de la urea.
Es importante, menciona también la tiroxina que es una hormona hidrófoba tiroidea.

8. NEUROTRANSMISORES DERIVADOS DE AMINOÁCIDOS.

Existen neurotransmisores que derivan de aminoácidos. Los neurotransmisores son biomoléculas que se encargan
de transmitir la información de una neurona a otra.

• Gamma-aminobutirato (GABA), deriva de la descarboxilación del glutamato (Glu):

• Serotonina: deriva del triptófano (Trp)
• Dopamina: deriva de la tirosina (Tyr)
• Adrenalina: deriva de la tirosina y de la fenilalanina (Tyr y Phe)
• Histamina: deriva de la histidina (His)

9.
PROPIEDADES ÁCIDO-BASE DE LOS AMINOÁCIDOS.

El conocimiento de las propiedades ácido-base de los aminoácidos es esencial para comprender las propiedades físicas
y biológicas de las proteínas. Los grupos amino y carboxilo de los aminoácidos, junto con los grupos R ionizables de
algunos aminoácidos, actúan como ácidos y bases débiles.
Cuando un aminoácido sin grupo R ionizable se disuelve en agua a pH neutro, se encuentra en solución en forma de
ion dipolar, o zwitterion, que puede actuar como ácido o como base. Por tanto, puede estar el aminoácido en su forma
no-iónica o en su forma zwitterion.

Los aminoácidos en soluciones acuosas neutras se presentan siempre como iones híbridos o zwitterion, nunca están
en la forma no iónica.

El hecho de que puedan actuar como ácidos (cediendo un protón) o como bases (aceptando un protón) dependiendo
del medio en el que se encuentren, hace que sean los aminoácidos sean moléculas anfóteras.

10. DISOCIACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS. CURVAS DE TITULACIÓN DE AMINOÁCIDOS

Los grupos carboxilo y amino son capaces de disociarse aceptando o cediendo protones. Un aminoácido sencillo,
monoamínico y monocarboxílico, es un ácido diprótico cuando está totalmente protonado; tiene dos grupos; el grupo
–COOH y el grupo NH3+, que pueden liberar protones:

Tanto el grupo carboxílico como el grupo amino, tienen un valor característico de constante de equilibrio (Ka),
expresado como pKa= -log Ka. Cuanto mayor sea esa Ka, mayor tendencia a ceder un protón. Puesto que hay dos
grupos disociables, habrá dos reacciones de disociación, cada una con su pKa.

En primer lugar, todos los aminoácidos con un solo grupo amino, un grupo carboxilo y un grupo R no ionizable tienen
una curva de titulación de dos etapas, una que corresponde a la desprotonación del grupo carboxilo y otra que
corresponde a la desprotonación del grupo amino. Los aminoácidos así, tienen valores de pKa1 y pKa2 muy similares
entre sí.

• El pKa del grupo –COOH es aproximadamente 2 (dependiendo de cada aminoácido) y se suele denominar
pKa1.
• El pKa del grupo –NH3+ es aproximadamente 9-10 (dependiendo de cada aminoácido) y se suele denominar
pKa2.

En segundo lugar, los aminoácidos con un grupo amino, un grupo carboxilo y, además, un grupo R ionizable tienen
curvas de titulación más complejas, con tres etapas correspondientes a los tres pasos de ionización posibles: la
desprotonación del grupo carboxilo, deprotonación del grupo amino y desprotonación del grupo R
ionizable/disociable. Por tanto, habrá un tercer valor de pKa (pKaR)

El paso de la forma protonada a la forma desprotonada estará regido por una constante de disociación (Ka)

La disociación del grupo carboxilo sería:

La disociación del grupo amino sería:

pKa= -log [Ka], de forma que cuanto más fuerte sea un ácido más bajo será su pKa. El pKa es una medida de la
tendencia de un grupo a ceder un protón, tendencia que disminuye si pKa aumenta.

VALORES DE pKa DE LOS AMINOÁCIDOS (COMPARACIONES)

De la tabla de pKa para los grupos ionizables de los aminoácidos se deduce:

• Todos los aminoácidos con grupos R no ionizables poseen valores de pKa1 y pKa2 muy parecidos entre sí.
• El grupo α-COOH es un ácido más fuerte, es decir, tiene un menor valor de pKa, que el – COOH de la cadena
lateral de la Asp y Glu.
• El grupo α-NH3+ es menos básico que el de la cadena lateral de Lys y Arg. Estos dos últimos aminoácidos con
fuertemente básicos.
• Los aminoácidos no poseen capacidad de taponamiento significativa al pH fisiológico, sino en las zonas
próximas a sus pKa. Excepto la Histidina que proporciona poder tamponante significativo al pH cercano a la
neutralidad presente normalmente en los fluidos extra e intracelulares de la mayoría de animales y bacterias,
siendo un importante tampón biológico.

11. CURVA DE TITULACIÓN DE LA GLICINA (explicación detallada)

La titulación ácido-base implica la adición o eliminación gradual de protones. En esta gráfica se muestra la curva de
titulación de la forma diprótica de la glicina. Los dos grupos ionizables de la glicina, el grupo carboxílico y el grupo
amino, se titulan con una fuerte base como el NaOH. Por tanto, la titulación se realiza partiendo de una solución de
aminoácido a pH ácido y se va añadiendo una base y midiendo el pH.

En la gráfica de la curva de titulación se va a representar el pH (ordenadas) frente al volumen o concentración de base

añadidos (abscisas). Dividimos la curva de titulación en etapas:

PRIMERA ETAPA: a pH muy bajo, la especie iónica predominante de la glicina es +H3N—CH2—COOH, la forma
totalmente protonada. En la primera etapa de la titulación, el grupo –COOH de la glicina pierde su protón. En el punto
medio de esta etapa existen concentraciones equimolares del dador de protones (+H3N—CH2—COOH) y del aceptor
de protones (+H3N—CH2—COO-). En este punto medio se alcanza un punto de inflexión en el que el pH es igual al pKa
del grupo protonado que se está titulando (-COOH). Para la glicina, el pH en el punto medio es 2,34 y por tanto, el pKa
del grupo –COOH es 2,34.

Al haber en ese punto la misma concentración del dador de protones y del aceptor de protones se forma una región
de tamponamiento, donde los cambios de pH son muy pequeños gracias a su acción tamponante. En este caso para la
glicina, si pKa1 es 2,34, la región tamponante de la glicina estará en el rango de pH de 1,34-3,34. Esto significa que la
glicina puede tamponar siempre y cuando se encuentre en un medio de pH de ese rango.
PUNTO ISOELÉCTRICO (punto en el que vamos a notar un cambio drástico en el pH). A medida que avanza la titulación
de la glicina se alcanza otro punto importante a un pH de 6. En este punto la eliminación del protón del grupo –COOH
es completa y se empieza a iniciar la eliminación del protón del grupo amino. A este pH la glicina se encuentra
mayoritariamente en forma del ion dipolar (zwitterion) +H3N—CH2—COO-. Por tanto, la glicina se encuentra en su
forma totalmente ionizada, pero sin carga eléctrica neta. El pH característico en que la carga eléctrica neta es cero de
denomina punto isoeléctrico o pH isoeléctrico (pI). El punto isoeléctrico es la media aritmética de los dos valores de
pKa (para curvas de dos etapas, como en este caso, con la glicina).

pI= ½ (pK1+pK2) = ½ (2,4+9,8) =6

Este punto, es el punto de inflexión entre las dos etapas de la curva de titulación.

SEGUNDA ETAPA: tras el punto de inflexión y a medida que avanza la titulación con NaOH, llegamos a la siguiente
región de taponamiento. Esta etapa corresponde a la eliminación de un protón del grupo –NH3+. El pH en el punto
medio de esta etapa es 9,60 que equivale al pKa del grupo amino (pKa2=9,60).

Esto se debe a que la concentración de la forma zwitterónica y la forma H2N—CH2—COO- es igual, por lo que habrá
una región de taponamiento a ese pH. Es decir, si pKa2 en este punto es 9,60, la región de tamponamiento de la glicina
estará en el rango de pH de 8,60-10,60. La titulación es prácticamente completa a un pH alrededor de 12, en donde la
forma predominante de la glicina es H2N—CH2—COO- (la desprotonada).

Por tanto, cuando la glicina se encuentre en un medio básico, con un pH alto, se encontrará en su forma desprotonada
y con una carga neta negativa (por el –COO), pues cede los protones al medio en el que se encuentra. Entonces, aquí
la glicina es con carga neta negativa y es ÁCIDA, cuando se encuentra en un medio BÁSICO. En la primera etapa, la
glicina se encuentra en un medio ácido, con un pH bajo, y estará en su forma protonada, pues recibe los protones de
este medio. Aquí tendrá carga neta positiva (por el NH3+) y será básica en un medio ácido.

• Gly negativa=gly ácida=medio básico (2a etapa)

• Gly positiva= gly básica=medio ácido (1era etapa)

“dependiendo del pH del medio en el que se encuentren los aminoácidos, serán neutros, tendrán carga positiva
o negativa”
“Las regiones de pH cercanas a los valores de pKa son las regiones de máximo poder tamponante o
amortiguador de los aminoácidos”

12. CURVA DE TITULACIÓN DEL GLUTAMATO (ÁCIDO DICARBOXÍLICO)

Los aminoácidos con un grupo amino, un grupo carboxilo y, además, un grupo R ionizable tienen curvas de titulación
más complejas, con tres etapas correspondientes a los tres pasos de ionización posibles: la desprotonación del grupo
carboxilo, deprotonación del grupo amino y desprotonación del grupo R ionizable/disociable. Por tanto, habrá un
tercer valor de pKa (pKaR). Esto pasa por con los ácidos dicarboxílicos.
En esta gráfica se muestra la curva de titulación del glutamato. Los tres grupos ionizables del gluamato, el grupo
carboxílico, el grupo amino y el grupo R con un grupo –COOH ionizable, se titulan con una fuerte base como el NaOH.
Por tanto, la titulación se realiza partiendo de una solución de aminoácido a pH ácido y se va añadiendo una base y
midiendo el pH.

En la gráfica de la curva de titulación se va a representar el pH (ordenadas) frente al volumen o concentración de base

añadidos (abscisas). Dividimos la curva de titulación en etapas:

PRIMERA ETAPA: a un pH muy bajo, el glutamato se encuentra en su forma protonada. En esta primera etapa el grupo
α-COOH pierde un protón. En el punto medio de esta etapa, la concentración de la forma protonada y la forma neutra
es la misma. En este punto se alcanza un punto de inflexión en el que el pH es igual al pKa del grupo protonado que se
está titulando (α-COOH). Por ello, se origina una zona de tamponamiento del glutamato en regiones de pH con valores
muy cercanos al pKa1.

PUNTO ISOELÉCTRICO: en este punto se produce, se ha completado la eliminación del protón del grupo α-COOH y se
empieza con la eliminación del protón del siguiente grupo ionizable, el –COOH de la cadena lateral. En este pH, el
glutamato se encuentra en su forma neutra, con una carga neta igual a 0. El pI para los ácidos carboxílicos es:

pI= 1/2 (pKa1+pKaR). pH al cual la carga neta es cero, el pH que está en el medio de los valores de pKa de
ambos lados de la especie isoeléctrica.

SEGUNDA ETAPA: con el avance de la titulación llegamos a la siguiente región de tamponamiento. Esta etapa
corresponde a la eliminación del protón del grupo –COOH. En el punto medio, la concentración de Glu neutro y Glu
con carga neta negativa (por el grupo –COO- ya ionizado), es la misma y se da en un pKaR determinado. La región de
tamponamiento será con valores de pH cercanos a ese pKaR.

TERCERA ETAPA: tras salir de esa región de tamponamiento de la segunda etapa, se produce un cambio drástico en el
pH. Esta etapa corresponde a la eliminación de un protón del grupo H3N+. Se va a producir una región de
tamponamiento a medida que avance la titulación, cuando la concentración de Glu con carga negativa se iguale al
glutamato incluso más básico, Glu 2- (por el grupo H3N+ ya ionizado a H2N). En el punto medio, se dará un valor de
pKa2 que se igualará al pH debido a las concentraciones igualadas. La titulación acaba a un pH aproximadamente de
11.
PEQUEÑA CONCLUSIÓN: AL SER UN ÁCIDO DICARBOXÍLICO, EL PUNTO ISOELÉCTRICO SE DARÁ A UN PH ÁCIDO, porque
como tiene dos grupos –COOH, una vez que se desprotona el grupo α-COOH ya está en su forma neutra. Por lo que
primero aparece el pKa1 (del grupo α-COOH), luego el pKaR (del grupo R) y luego el pKa2 (del grupo amino)

13. TITULACIÓN DE LA LISINA (AMINOÁCIDO DIBÁSICO). (forma igualita a la histidina)

En esta gráfica se muestra la curva de titulación de la lisina. Los tres grupos ionizables de la lisina, el grupo carboxílico,
el grupo amino y el grupo R con un grupo –NH3+ ionizable, se titulan con una fuerte base como el NaOH. Por tanto, la
titulación se realiza partiendo de una solución de aminoácido a pH ácido y se va añadiendo una base y midiendo el pH.

En la gráfica de la curva de titulación se va a representar el pH (ordenadas) frente al volumen o concentración de base

añadidos (abscisas). Dividimos la curva de titulación en etapas:

PRIMERA ETAPA: a un pH muy bajo, la lisina se encuentra en su forma protonada. En esta primera etapa el grupo α-
COOH pierde un protón. En el punto medio de esta etapa, la concentración de la forma protonada (2+) y la forma Lys+
(por los grupos NH3+) es la misma. En este punto se alcanza un punto de inflexión en el que el pH es igual al pKa1 del
grupo protonado que se está titulando (α-COOH). Por ello, se origina una zona de tamponamiento de la lisina en
regiones de pH con valores muy cercanos al pKa1.

SEGUNDA ETAPA. Una vez salimos de la región de tamponamiento de la primera etapa, se produce un cambio drástico
en el pH, pues a medida que avanza la titulación, hay cada vez más concentración de Lys neutra. En esta etapa se
producirá la eliminación de un protón del grupo α-NH3+ para dar NH2. Se originará de nuevo, una región de
tamponamiento en la que la concentración de Lys+ y Lys neutra será la misma, a un pH igual al pKa2. La titulación irá
avanzando hasta que la concentración de Lys neutra sea mayoritaria (punto isoeléctrico).

PUNTO ISOELÉCTRICO. En esta etapa se ha producido la eliminación completa del protón del grupo α-NH3+ para dar
NH2, haciendo que la concentración de Lys neutra sea mayoritaria, con una carga neta de 0. En este punto se empieza
con la eliminación del protón del siguiente grupo, el NH3+ de la cadena lateral. El pI para los aminoácidos dibásicos es:

pI= 1/2 (pKa2+pKaR).

TERCERA ETAPA. Con el avance de la titulación, llegamos a la siguiente región de tamponamiento. En esta etapa se
producirá la eliminación del protón del grupo –NH3+ de la cadena lateral para dar NH2. En el punto medio de esta
etapa, la concentración de la Lys neutra y la Lys - (por el grupo –COO-), es igual, dándose a un pKaR y originándose una
región de tamponamiento en valores de pH cercanos al valor de pKaR. La titulación termina a un pH de
aproximadamente 11.

PEQUEÑA CONCLUSIÓN: EL PUNTO ISOELÉCTRICO SE DA A UN PH BÁSICO AL SER LA LISINA UN AA DIBÁSICO, pues al

tener dos grupos –NH3+, se tiene que desprotonar el primer grupo (α-NH3+), después el grupo NH3+ de la cadena
lateral y ya se llega a la lisina neutra y por consiguiente al punto isoeléctrico.
 “El punto isoeléctrico o pH isoeléctrico, será ácido o básico, dependiendo del aminoácido que estamos
titulando”. “En este punto, el aminoácido tiene carga neta neutra, que igualmente depende de este aminoácido,
si tendrá su forma neutra a un medio básico o en un medio ácido”

14. EL IMIDAZOL DE LAS PROTEÍNAS ACTÚA COMO TAMPÓN INTRACELULAR.

La curva de titulación de la histidina es igualita a la de la lisina pues ambas poseen dos grupos cargados
positivamente.

Los aminoácidos no poseen capacidad de taponamiento significativa al pH fisiológico, sino en las zonas próximas a sus
pKa. Excepto la Histidina que proporciona poder tamponante significativo al pH cercano a la neutralidad.

El pI de la histidina, con dos grupos cargados positivamente cuando están protonados, es de 7,59, en una zona
ligeramente básica pero cerca a la neutralidad. En condiciones generales de exposición libre y abierta al entorno
acuoso, sólo la histidina tiene un grupo R, el imidazol, (pKa=6.0) que proporciona poder tamponante significativo al
pH cercano a la neutralidad presente normalmente en los fluidos extra e intracelulares de la mayoría de animales y
bacterias, siendo un importante tampón biológico.

La hemoglobina de eritrocitos es la principal proteína tamponadora de la sangre, gracias a la presencia de aminoácidos

de histidina (con un grupo R imidazol) en su composición. La hemoglobina debe ser SI o SI una proteína tamponadora,
pues está expuesta continuamente a cambios en el pH, pues transporta O2 y CO2.

Aparte de estar el imidazol presente en la hemoglobina, también se encuentra en otras proteínas en el resto de las
células.

15. RESUMEN IONIZACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS.

“Dependiendo del pH en que se encuentren los aminoácidos, serán neutros o tendrán carga neta positiva o
negativa”
“A pH fisiológico (~7,1) en medio acuoso los aminoácidos monoamino/monocarboxílicos (sin grupo R ionizable)
no tienen carga (forma zwitterion)”
“La carga de los aminoácidos ácidos o básicos depende del pKa de la cadena lateral”. A un pKa menor, el pH del
medio es menor y mayor es la ácidez, por lo que la carga neta del aa es positiva, pues recibe los protones del
medio. A un pKa mayor, el pH del medio es mayor y el medio es más básico, por lo que la carga neta del aa es
negativa, pues cede protones al medio”
“La carga neta que tenga un péptido o proteína dependerá del número de cargas positivas y negativas que sus
aminoácidos ionizables presenten a un pH determinado”. Si la proteína tiene más aa con carga neta positiva,
será una proteína con carga neta positiva, si tiene más aa con carga neta negativa, será una proteína con carga
neta negativa”.