FUNDAMENTOS GENERALES DE LA

PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS

TEJIDOS

CONCEPTO

La histología es la rama de la biología que estudia la composición, la estructura y las características de los
tejidos orgánicos de los seres vivos. Del griego histos (tejido) – logos (tratado).

Nace la citología (estudio de las células) a partir de la teoría de Virchow “omnis cellula e cellula” (Toda
célula procede de otra célula preexistente por división de ésta).

1. Tejido (epitelial, conjuntivo, muscular, nervioso).

2. Órgano (hígado, bazo, riñón, etc.).
3. Sistemas de órganos (sistema digestivo).
4. Sistemas difusos (sistema linfático).

TECNICAS PARA EL PROCESAMIENTO DE TEJIDOS

Técnicas de inclusión en medio solido Técnicas por métodos citológicos

 Inclusión en parafina – M. Óptico.  Improntas – tejidos semiblandos.
 Inclusión en plásticos – M. Electrónico.  Rasprontas – tejidos duros y leñosos.
 Aplastamientos – tejidos blandos
y friables.
Técnicas de congelación
Tipos de muestras
 Cortes con criostatos.
 Cortes con microtomos de CO2.  Biopsias – tejido vivo.
 Autopsias – tejido muerto.
 Necropsias – tejido necrosado.

TECNICAS DE PARAFINA PARA M. OPTICO

1er Paso: Muestra

 Obtención de la muestra mediante extirpación de pequeños fragmentos del tejido

(biopsia). 2do Paso: Fijación

 Se interrumpe los procesos de degradación que parecen tras la muerte celular.

 Se usa Fenol al 10%.

3er Paso: Deshidratación

 Se elimina por completo el agua de la muestra.

 Se usa Alcohol Etílico de forma creciente.
4to Paso: Aclaramiento

 Se sustituye el deshidratante por una sustancia miscible con el medio de inclusión.

 Se usa Xileno (Xilol).
5to Paso: Infiltración

 Proceso donde se rellena la muestra con el medio que se va a usar para la

imbibición (desplazamiento de un fluido por otro) del tejido.

6to Paso: Encastramiento del tejido y confección de bloques

 Estación de inclusión: Dispensador de parafina liquida, con placa caliente para la orientación
y con placa fría para la solidificación, así se forma el bloque de parafina.
 Orientación de la pieza: Se coloca en la posición deseada.
 Corte del bloque: Un microtomo de parafina con una cuchillada de acero.

7mo Paso: Montaje

 Colocar los cortes sobre un portaobjetos, cubierto previamente con una capa de albumina
o gelatina.

8vo Paso: Desparafinación

 Se usa Xilol.

9no Paso:

Hidratación

 Se retira el Xilol y se introduce el portaobjetos en Alcohol Etílico de manera

decreciente. 10mo Paso: Coloración

 Tinción con colorantes histológicos.

 El más común es Hematoxilina – Eosina (HE).

PREPARACION DE TEJIDOS PARA M. ELECTRONICO

1er Paso: Fijación 4to Paso: Inclusión

 Glutaraldehído o tetróxido de  Plástico (resinas).
osmio. 2do Paso: Deshidratación 5to Paso: Confección de bloques y cortes
 Etanol de manera  Se usa un
creciente. 3er Paso: Aclaramiento ultramicrotomo. 6to Paso:
 Oxido de Propileo. Montaje

 Los cortes se colocan en la grilla.

FUNDAMENTOS QUIMICOS DE LA COLORACION

Esto radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar diversas sustancias de
modo variable. Esto quiere decir:

 Un ácido es una sustancia capaz de liberar un protón (+)

 Una base es una sustancia capaz de aceptar un protón

(+) Entonces podemos decir que:

 Acidófilia: tejidos que tienen capacidad de tinción con colorantes ácidos (+)
 Basófilia: tejidos que tienen capacidad de tinción con colorantes básicos (-)

TIPOS DE COLORANTES

 Ácidos: Son aniónicos (-), reaccionan a los catiónicos (+). Ejemplo: Eosina.
 Básicos: Son catiónicos (+), reaccionan a los aniónicos (-). Ejemplo: Hematoxilina.
 Metacromáticos: Reacciona distinto a los esperado. Ejemplo: azul de metileno (tiñe rojo
o morado).
 Ortocromáticos: Tiñen del mismo color del colorante
 Neutros: Colorean conjunta o separadamente. Ejemplo: Tinción de Giemsa.
 Indiferentes: Colorean por impregnación, no son ni ácidos ni básicos.

HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICA

Son procedimientos químicos muy específicos que dan información detallada sobre sustancias químicas
y componentes de la célula.

Se fundamentan en la unión especifica de un colorante:

 El uso de anticuerpos dirigidos a un componente celular particular Inmunocitoquímica.

 Actividad enzimática inherente de un elemento constitutivo de las células Digestión
Enzimática.
 Se usa para localizar material radioactivo en tejidos Radioautografía.
 Rayos X de un corte histológico Historadiografía.

CITOQUMICA

 Estudio de las células desde el punto de vista químico.

 Nos permite identificar compuestos químicos y moleculares (enzimas, metales pesados).

INMUNOCITOQUIMICA

 Se introduce un anticuerpo con colorante de fluorocromo esperando de una

reacción antígeno – anticuerpo.
HISTOQUIMICA

 Se dedica al estudio de los tejidos desde el punto de vista químico.

INMUNOHISTOQUIMICA

 Similar a la inmunocitoquímica
 Se usa un anticuerpo marcado con colorante, este va a buscar al antígeno que se quiere
y dará respuesta de si existe o no este antígeno.
 MICROSCOPIA

¿QUE ES UN MICROSCOPIO?

Es un instrumento que aumenta el tamaño de una imagen y permite ver mayores detalles. La imagen va
a depender de:

 Forma de la preparación del tejido.

 Tipo de microscopio.
 Tipo de luz empleada.

TIPOS DE MICROSCOPIOS

 M. OPTICO COMPUESTO M. ELECTRONICO

 Campo claro - Transmisión
 Campo oscuro - De Barrido
 Contraste de fases
 Fluorescencia
 Con focal
 Luz ultravioleta
 Luz polarizada

PARTES DEL MICROSCOPIO

OPTICAS E ILIMINCACION

AUMENTO

 Relación entre el tamaño de la imagen y del

objeto. AM = A. lente objetivo x A. lente ocular.
AM = 10x (ocular) x 40x (objetivo).
AM = 400x

PODER DE RESOLUCION

 Capacidad de distinguir los mas finos detalles por separado.

 El ojo humano PR = 0.2mm.

MICROSCOPIA ELECTRONICA

Es el mas potente, tiene un poder de resolución de 0.005nm. Existen dos tipos, MET y MEB.

ME. DE TRANSMISION ME. DE BARRIDO

 Usa la interacción de un haz  El haz de electrones no atraviesa

de electrones con la muestra la muestra, sino que explora su
para producir una imagen. superficie (barre).
MICROSCOPIA COMPUESTA

MO. DE CAMPO CLARO MO. DE CONTRASTE DE FASES

 Usa luz visible D = 0.2𝜇m  Aprovecha pequeñas diferencias

 La luz atraviesa el objeto en el índice de refracción que
examinado y capta la luz directa existen en las estructuras de la
proveniente de la fuente luminosa. muestra.

MO. DE CAMPO OSCURO

MO. FLUORESCENCIA
 Penetran el objetivo los rayos de
la luz refractados por las  Aprovecha la capacidad de
estructuras de la muestra. algunas moléculas de fluoreser
bajo la luz.
 LA CELULA, GENERALIDADES, CITOPLASMA Y ORGANELAS

COMPONENTES DEL CUERPO

Existen 3 elementos:

 Líquidos corporales: Sangre, liquido tisular y linfa.

 Sustancias Intercelulares y Extracelulares: Sostén y nutrición a la célula.
 Células: unidad estructural y funcional de los seres vivos:
 Procariotas: No tienen núcleo, ADN disperso en el citoplasma.
 Eucariota: Posee núcleo, ADN organizado en el núcleo.

GENERALIDADES

CARACTERISTICAS FISIOLOGICAS

 Absorción: Captación de sustancias del medio circundante

 Secreción: Capacidad de transformar moléculas absorbidas en un producto
especifico (hormona)
 Excreción: Capacidad de descartar los productos de desecho formado por sus
procesos metabólicos
 Respiración: Capacidad de producir energía mediante la utilización de O2 absorbido en
la oxidación de nutrientes
 Irritabilidad: Capacidad de reaccionar a un estimulo
 Conductibilidad: Capacidad de transmitir la estimulación de la célula
 Contractilidad: Capacidad de acortarse en una dirección especifica como reacción
al estimulo
 Reproducción: Capacidad de generar nuevas células hijas a partir de otras
preexistentes, mitosis y meiosis.

COMPONENTES QUIMICOS

 Componentes Inorgánicos:
 Iones: Sodio, potasio, calcio (sales 1%)
 Agua: 60%
 Componentes Orgánicos:
 Proteínas
 Lípidos
 Hidratos de carbono
 Ácidos nucleicos
CONSTITUYENTES

 Se divide en Citoplasma (matriz citoplasmática o citosol con sus organelas y plasmalema)

y Núcleo (núcleo plasma y núcleo lema).
 Plasmalema del griego plasma(liquido) – lema(membrana).

CITOPLASMA

Tiene aspecto amorfo, homogéneo y uniforme, contiene estructuras citoplasmáticas de forma y

función variable, suspendidos en el citosol.

 Organelas Membranosas: Poseen membranas que se usan para separar del

citosol, responsables de la síntesis, nutrición, respiración y metabolismo.
 Organelas No Membranosas: Comprenden el citoesqueleto que ayuda a la
forma, movimiento y reproducción de la célula y a las inclusiones.

ORGANELAS MEMBRANOSAS

 Plasmalema.  R.E. Liso.

 Endosomas.  Aparato de Golgi.
 Lisosomas.  Mitocondrias.
 R.E. Rugoso.  Peroxisoma.

ORGANELAS NO MEMBRANOSAS

 Citoesqueleto:
 Microtúbulos.
 Microfilamentos.
 Filamentos intermedios.
 Centriolos.
 Cuerpos basales.
 Inclusiones:
 Productos metabólicos, depósitos de nutrientes, cristales y pigmentos inertes.

PLASMALEMA

 Barrera permeable selectiva entre el citoplasma y el medio extracelular.

 Conserva la integridad estructural de la célula.
 Controla los movimientos de las sustancias que se encuentran en el interior de la célula.
 Regula interacciones entre las células.
 Reconoce partículas extrañas y células dañadas.
CONSTITUCION DE LA MEMBRANA PLASMATICA

 El espesor total es de aproximadamente de 8-10nm.

 Estructura trilaminar Bicapa Lipídica.
- Hojuela interna.
- Hojuela externa.
- Zona clara entre hojuelas.

HOJUELAS

 Compuesta por lípidos anfipáticos (fosfolípidos y colesterol) y proteínas.

 Fosfolípidos: Tiene una cabeza polar (hidrofóbica) y dos colas (hidrofílicas).
 Colesterol: Da estabilidad celular.
 Proteínas: Se dividen en integrales y específicas.

TRANSPORTE DE MEMBRANA

 Las sustancias que entran y salen de la célula necesariamente deben pasar a través de
la membrana plasmática.
 Pueden ser a través de:
- Difusión simple.
- Difusión facilitada.
1.- Proteínas transportadoras: Transfieren moléculas hidrosolubles pequeñas, pueden
requerir energía (transporte activo) o sin energía (transporte pasivo).
2.- Proteínas canal: Transfieren moléculas hidrosolubles pequeñas, son selectivas para
los iones.
- Transporte vesicular. (activo).

TRANSPORTE VESICULAR

 Es el proceso que comprende cambios conformacionales de la membrana plasmática en

sitios específicos y la formación de vesículas desde la membrana o la función de las
vesículas en esta misma.
 Se dividen en:
1. Endocitosis.
2. Exocitosis.

ENDOCITOSIS

 Pinocitosis: Capta material en el espacio extracelular por invaginación de la

membrana citoplasmática (vesículas). Son clatrina dependiente.
 Fagocitosis: Rodean a otras células con su membrana citoplasmática y las introducen en
su interior (clatrina independiente y actina dependiente).
 Mediada por receptores (pinocitosis): Externos e internos (clatrina dependiente).
 EXOCITOSIS

 Secreción Regulada: Con gránulos de secreción. Clatrina dependiente.

 Secreción Constitutiva: Sin gránulos de secreción. Clatrina independiente.

ORGANELAS MEMBRANOSAS

RETICULO ENDOPLASMATICO

 Sistema de sacos limitados por una membrana que forma una pared de una
red anastomosada de túbulos o bolsas aplanadas ramificadas llamadas
cisternas.
 Se divide en: R.E. Rugoso y R.E. Liso.

R.E. RUGOSO

 Los ribosomas se encuentran en toda la cara externa.

 Aquí se produce la síntesis proteica.

R.E. LISO

 No está asociado a los ribosomas.

 Compuesto por túbulos.
 Interviene en la desintoxicación y conjugación de sustancias nocivas.

APARATO DE GOLGI

 Compuesta por múltiples cisternas aplanadas.

 Modifica, clasifica y empaqueta las proteínas y lípidos para su transporte intracelular.
 Íntimamente relacionado con el R.E.
 Su polarización es morfológica y funcionalmente
1. Cara formadora (cis): Ubicada en la superficie que tiene relación con el R.E.R.
con superficie convexa hacia el núcleo. Red Cis-Golgi.
2. Cara madurativa (trans): Mas alejada del R.E.R. con superficie cóncava. Red Trans-Golgi.

MITOCONDRIAS

 Poseen ADN propio.

 Llevan a cabo la fosforilación oxidativa (respiración).

Ciclo de ácido cítrico y 𝛽-oxidación de los ácidos grasos (síntesis de lípidos).

 Forman ATP (energía).

 Percibe estrés celular y decide si la célula muere o vive (apoptosis).
 ENDOSOMAS

 Son organelas citoplasmáticas estables o estructuras temporarias formadas por endocitosis.

1. Endosomas Tempranos: Clasifican y recibían proteínas incorporadas por endocitosis.
2. Endosomas Tardíos: Las células viajan hacia el citoplasma que luego se convertirán
en lisosomas.

LISOSOMAS

 Organelas digestivas ricas en enzimas hidrolíticas, proteasas, nucleasas, lipasas,

fosfolipasas en solución acida.
 Degradan macromoléculas derivadas de mecanismos endocíticos, así como el recambio
de todas las organelas (autofagia).

PEROXISOMAS

 Contienen enzimas oxidativas, catalasas (destrucción) y peroxidasas (producción).

 Todas las enzimas generan peróxido de hidrógenos (H2O2) altamente tóxico.
 La catalasa regula el contenido celular de H2O2 y lo degrada para proteger la célula.

ORGANELAS NO MEMBRANOSAS

CITOESQUELETO

 Forma un esqueleto celular interno que da sostén y forma a la célula.

 Contribuye al desplazamiento de los componentes intracelulares y da movilidad a la célula.
 Dan soporte a los cilios y flagelos.

MICROTUBULOS

 Poseen inestabilidad dinámica: polimerización y despolimerización con gasto de

energía (GTP).
 Compuestos por partes iguales de tubulinas (dímeros alfa y beta).
 Vincula organelas y estructuras periféricas con el centro organizador de microtúbulos.
1. Participa en: Clasifican y recibían proteínas incorporadas por endocitosis.
2. Dineínas: Transporte de la periferia hacia el centro organizador de microtúbulos.
3. Cinesinas: Transporte del centro organizador de microtúbulos a la periferia.

MICROFILAMENTOS

 Compuesto por moléculas de actina.

 La polimerización requiere: ATP, Mg+, K+.
 Formación del núcleo estructural de las microvellosidades.
 Locomoción celular.
FILAMENTOS INTERMEDIOS

 Su diámetro es intermedio entre los filamentos de actina y los microtúbulos.

 Fibras trenzadas a manera de cuerdas.
1. Dominio bastoniforme.
2. Dímeros superenrollados.
3. Tetrámero escalonado.
 Compuesto por:
1. Queratinas.
2. Laminas.
3. Neurofilamentos.
4. Vimentina y símil de vimentina.
 No requieren energía

CENTRIOLOS

 Son los puntos focales alrededor de los cuales se arman los centrosomas.
 Cilindros citoplasmáticos cortos, en pares formados por nueve tripletes de microtúbulos.
 Proveen los cuerpos basales para los cilios y flagelos.
 Alinean el huso mitótico durante la división celular.

CENTROSOMAS

 Conformado por los centriolos y el material pericentriolar denso y amorfo.

 Funciona como centro de anclaje de microtúbulos del citoesqueleto, centro organizador
de microtúbulos (COMT).

INCLUSIONES

 Son componentes celulares no indispensables con características tintoriales específicas.

1. Pueden ser sintetizados por la célula.
2. Pueden ser captados por el medio extracelular.
3. Permanecen en la célula por un tiempo limitado
4. Son depósitos de nutrientes y pigmentos.
 Depósitos de Nutrientes:
- Hidratos de carbono (glucógeno), libres en la matriz citoplasmática.
Ejemplo: hepatocitos, células musculares estriadas.
- Gotas de lípidos, son extraídos por solventes orgánicos.
 Pigmentos:
- Exógenos: Carotenos (dermis, epidermis), adipocitos, polvo de carbón,
macrófagos alveolares.
- Endógenos: Hemoglobina (hemosiderina, bilirrubina), lipofuscina.