Tecnica Histologica y Citologica

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1- TCNICA HISTOLGICA

OBJETIVOS:
Definir Tcnica Histolgica
Mencionar los pasos de la
Tcnica Histolgica
Diferenciar una
preparacin Histolgica de
una Citolgica.
Dr. Florido Rodrguez

Tcnica Histolgica

Procesos para la preparacin de los tejidos para ser


observados al microscopio

Pasos de la Tcnica Histolgica

Obtencin de la muestra
Fijacin Inmediata de la Muestra
Tallado de la Muestra
Procesado de la Muestra

Fijacin
Deshidratacin
Aclaramiento
Inclusin

Bloqueo
Corte Histolgico
Tincin
Montaje

1- OBTENCION DE LA MUESTRA
Biopsia
Extraccin del tejido en vida

Necropsia
Tejido obtenido de un cadaver

Tcnica Histolgica

2- FIJACIN INMEDIATA DE LA MUESTRA

Evita la autlisis o degeneracin celular

Formalina acuosa al 10%

Propiedades de un buen fijador

Fijadores Qumicos

Formalina al 10% (formaldehido o formol)


Alcohol etlico al 95%

Fijadores Fsicos

Conserva caractersticas morfolgicas en vivo


Penetra profundamente el tejido
Impide la desaparicin de los elementos solubles
Impide la aparicin de artefactos (precipitados)
evita la retraccin excesiva de los tejidos que los hace quebradizo
Permite la manipulacin de los tejidos
Bajo costo

Calor
Desecacin
Fro

3- TALLADO DE LA MUESTRA

Corte de 2.5 a 3cm X 2mm


Permite los pasos del procesador, el bloqueo y el corte histolgico

Tcnica Histolgica

4- PROCESADO MANUAL O
AUTOMTICO

1- Fijacin

2- Deshidratacin

Formalina al 10% - 4 horas

Alcohol etlico al 75% - 2 horas


Alcohol etlico al 95% - 2 horas
Eliminan el agua intracelular y extracelular (el
agua no se lleva con la parafina)

3- Aclaramiento

Alcohol Butlico 2 horas


Xilol 1 hora

Elimina la turbidez del tejido y lo hace ms


tansparente
El Xilol aclara el tejido, elimina el alcohol y
permite que la parafina penetre el tejido

4- Inclusin

Parafina o paraplast 4 horas

Insoluble en agua o alcohol


Punto de fusin 56 a 58C

Ocupa los espacios intra e intercelular


Da firmeza a los tejidos
Facilita los cortes histolgicos sin
deformacin
Mantiene la relacin espacial del tejido
Celoidina, gelatina,resinas.

Tcnica histolgica

5- BLOQUEO

Anillo de plstico
Base de metal o
plstico
Parafina

Se forma un
bloque de
parafina, que
puede colocarse
en el micrtomo
sin daar el
tejido

El bloque
contiene el tejido
procesado para
realizar el corte
histolgico

Tcnica Histolgica

6- CORTE HISTOLOGICO

El bloque de parafina
Con el tejido incluido

Micrtomo
Cuchilla

Espesor: 3 a 7 um

Clasificacin de los
micrtomos:

Rotacin
Deslizamiento
Balanceo
Congelacin
Para cortes Ultradelgados

Tcnica Histolgica
Los cortes se
extienden sobre un
Bao de Maria
Se recogen sobre
un portaobjeto
ligeramente
impregnado con
Albmina de Mayer
glicerina y albmina
de huevo

El tejido se adhiere
al portaobjeto

Tcnica Histolgica

Tcnica Histolgica

HEMATOXILINA Y EOSINA (HyE)


Tincin de Rutina en Histologa

Hematoxilina:

Colorante bsico
Natural
Color: azul (basfilo)
ADN, ARN nuclear

Eosina:

Colorante cido
Sinttico
Color rosado a rojo (acidfilo)
Los componentes bsicos del
citoplasma

Tincin Ortocromtica:
Igual color que el colorante

Tincin Metacromtica:
Color diferente al colorante

Tinciones Especiales:

PAS
Verhoeff
Wright
Mucicarmin.

Tcnica Histolgica

8- MONTAJE

La preparacin se seca y
limpia con una gasa

SE COLOCA EL CUBRE
OBJETO
Balsamo del Canad

Resina natural

Permount

Resina sinttica

Protege de los hongos


Es una placa permanente

Las resinas tienen un


ndice de refraccin
similar al del aire o vidrio

por lo que los rayos de


luz pasan directamente
al objeto

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