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    INMUNOHISTOQUIMICA

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    Este documento describe la inmunohistochemica, la cual detecta antígenos mediante anticuerpos. Explica que ha habido avances en la técnica, incluyendo un gran número de anticuerpos disponibles y técnicas sensibles de recuperación antigénica. También describe conceptos clave como antígenos, epitopos, anticuerpos policlonales y monocolonales, y métodos para recuperar antígenos como la digestión enzimática y calentamiento térmico.

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    INMUNOHISTOQUIMICA

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    Este documento describe la inmunohistochemica, la cual detecta antígenos mediante anticuerpos. Explica que ha habido avances en la técnica, incluyendo un gran número de anticuerpos disponibles y técnicas sensibles de recuperación antigénica. También describe conceptos clave como antígenos, epitopos, anticuerpos policlonales y monocolonales, y métodos para recuperar antígenos como la digestión enzimática y calentamiento térmico.

    Descripción original:

    inmuno

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    Este documento describe la inmunohistochemica, la cual detecta antígenos mediante anticuerpos. Explica que ha habido avances en la técnica, incluyendo un gran número de anticuerpos disponibles y técnicas sensibles de recuperación antigénica. También describe conceptos clave como antígenos, epitopos, anticuerpos policlonales y monocolonales, y métodos para recuperar antígenos como la digestión enzimática y calentamiento térmico.

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    INMUNOHISTOQUIMICA

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    Este documento describe la inmunohistochemica, la cual detecta antígenos mediante anticuerpos. Explica que ha habido avances en la técnica, incluyendo un gran número de anticuerpos disponibles y técnicas sensibles de recuperación antigénica. También describe conceptos clave como antígenos, epitopos, anticuerpos policlonales y monocolonales, y métodos para recuperar antígenos como la digestión enzimática y calentamiento térmico.

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    de 22

    INMUNOHISTOQUIMICA

    ELVIS ALARCON VALDIVIA


    MR1 ANATOMIA PATOLOGICA
    INMUNOHISTOQUIMICA

     DETECTA ANTIGENOS MEDIANTE


    ANTICUERPOS
     AVANCE INMUNOHISTOQUIMICA:
     GRAN NUMERO DE ANTICUERPOS
     TECNICAS DE RECUPERACION
    ANTIGENICA
     SISTEMAS DE DETECCION MUY SENSIBLES
    ANTIGENO EPITOPO

    Molécula que induce la


    formación de un anticuerpo
    y que tiene uno o más
    lugares donde un
    anticuerpo puede unirse a
    ella
    Reacción Antígeno/Anticuerpo típica: una bacteria
    gram-negativa patógena podría tener varios antígenos
    o inmunógenos (flagelos, fimbrias y pared celular)
     DETERMINANTES ANTIGENICOS:
     CONTINUOS
     DISCONTINUOS  MAS FRECUENTES
     HAPTENO MOLECULAS DE
    PEQUEÑO TAMAÑO
    INCAPACES DE PRODUCIR
    RESPUESTA INMUNE
    ANTICUERPO
    IgG
    PARATOPO
    ANTICUERPOS POLICLONALES
    VENTAJAS

     GRAN AVIDEZ POR EL ANTIGENO, YA QUE LOS


    LUGARES DE UNION AL MISMO SON MULTIPLES
     ALTA SENSIBILIDAD
    INCONVENIENTES

     LOS ANTICUERPOS PRESENTAN UN AMPLIO RANGO DE


    ESPECIFICIDAD, PUDIENDO DAR ORIGEN A REACCIONES CRUZADAS
    CON OTRAS MOLECULAS.
     POCA REPRODUCIBILIDAD.
     DISPONIBILIDAD LIMITADA.
    ANTICUERPOS MONOCLONALES
    VENTAJAS
    INCONVENIENTES
     ESPECIFICIDAD • MENOR
     REPRODUCIBILIDAD SENSIBILIDAD
     DISPONIBILIDAD • POSIBILIDAD DE
    OBTENCION DE
    FALSOS
    NEGATIVOS
    ALMACENAMIENTO

    Los anticuerpos en forma líquida


    pueden almacenarse a 4°C durante
    unos meses o bien congelados (a -
    20°C o -80°C) durante años.
    Mezclar el anticuerpo con
    glicerol a partes iguales. El
    glicerol es una sustancia inerte
    que disminuye el punto de
    congelación, de forma que
    tendremos el anticuerpo frio( a
    -20° C), pero no congelado,
    con lo que podremos usarlo las
    veces que queramos sin
    necesidad de alicuotarlo y sin
    que se altere
    RECUPERACION ANTIGENICA

    La fijación mediante
    agentes reticulantes
    como el formaldehído
    induce la formación
    de enlaces
    hidroximetileno entre
    los aminoácidos
    RECUPERACION ENZIMATICA

     PRONASA O TRIPSINA
     LA DIGESTION ENZIMATICA INDUCE UNA ROTURA DE ENLACES
    CRUZADOS QUE FACILITA EL ACCESO DEL ANTICUERPO
    PRIMARIO AL ANTIGENO
     PARAMETROS A TENER EN CUENTA:
     TIPO DE ENZIMA
     CONCENTRACION DE LA ENZIMA
     TEMPERATURA
     TIEMPO DE INCUBACION  5 – 30 MIN
    RECUPERACION TERMICA

     MECANISMO DE ACCION

     ROTURA DE ENLACES CRUZADOS

     EXTRACCION DE COMPLEJOS DE CALCIO

     MOVILIZACION POR EL CALOR DE RESTOS DE PARAFINA


    FACTORES QUE INTERVIENEN EN
    RECUPERACION TERMICA

    1. TAMPON DE INCUBACION
     CITRATO SODICO (PH:6) , ETILEN-DIAMINO TETRAACETICO(EDTA) (PH:9) 
    SUST. QUELANTES DE CALCIO
     AG MUESTRAN INMUNOREACTIVIDAD MAS INTENSA A MAYOR PH(9)
    2. METODOS DE CALENTAMIENTO
     MICROONDAS, OLLA A PRESION, BAÑO TERMOSTATICO, AUTOCLAVE

     PARA DISTINTOS ANTICUERPOS LA RECUPERACION OPTIMA PUEDE


    CONSEGUIRSE EMPLEANDO UNO U OTRO DE LOS APARATOS
    MENCIONADOS

    3. TEMPERATURA Y TIEMPO
    MICROONDAS  100°C, 10-20 MIN
    BAÑO TERMOSTATICO  95-99° C, 20-40 MIN
    OLLA A PRESION  120°C, 2-5 MIN

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