Biotecnologia Vegetal

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Biotecnología Vegetal

¿ Qué es la Biotecnología ?
La Biotecnología es toda aplicación tecnológica que utilice
sistemas biológicos u organismos vivos o sus derivados
para la creación o modificación de productos o procesos
para usos específicos.

Convenio sobre Diversidad Biológica,1992


Biotecnología Vegetal
Conjunto de técnicas de cualquier tipo, empleadas sobre
vegetales como organismos enteros o sobre alguna de
sus partes (tallos, hojas, orgánulos etc.)
Virología

Biología
Fisiología Molecular
Vegetal

Biotecnología
Vegetal
Botánica

Bioquímica

Biología
Agricultura
Celular
Historia de la Biotecnología Vegetal


Biotecnología tradicional

Descubrimiento de la agricultura (8000-7000 ac)

Fabricación de cerveza de los sumerios (6000 ac)

Elaboración del vino en Mesopotamia (5000-4000 ac)

Producción del pan en Egipto (4000-3000 ac)

Biotecnología Clásica (siglo XIX)

La finalidad principal es la mejora de
distintas plantas para obtener variedades
con las características seleccionadas

Introducción consciente de la diversidad
genética en las poblaciones cruzando
progenitores con características notables

Es óptima para el manejo de características
que depende de la interacción de muchos
genes

Biotecnología moderna (a
partir 1970)

Se apoya en la puesta en práctica
de la ingeniería genética,
consiste en introducir
información genética nueva en
un organismo para dotarlo de
capacidades que antes no poseía

Ofrece mejoras para caracteres
que dependen de un número de
genes reducido
Ventajas y desventajas de la
Biotecnología

Rendimiento superior

Reducción de pesticidas
1) Ventajas

Aumento de resistencia frente a patógenos


y deficiencias nutricionales
Riesgos para el medio ambiente
2) Desventajas
- Polinización cruzada

- Cultivos modificados con genes que producen toxinas


insecticidas (B. anthracis)

- Perdida de biodiversidad

- Mayor inestabilidad frente a variables ambientales

Riesgos para la salud:


-Transferir toxinas o compuestos alergénicos de unas especies
a otras

- Problemas éticos
Biotecnologías de apoyo al mejoramiento
de plantas
• Cultivo de tejidos
• Rescate de embriones
• Embriogénesis somática
• Organogénesis somática
• Producción de haploides
• Fusión de protoplastos

• Trasformación genética
• Agrobacterium tumefaciens
• Agrobacterium rhizogenes
• Métodos directos
• Métodos Indirectos
Cultivo de tejidos Factores comunes
Composición general de medios de cultivo:
• Fuente de Carbono (azúcares)
• Macronutrientes (N, K, etc)
• Micronutrientes (Fe, Cl, etc)
• Vitaminas
• Agente gelificante (para medios sólidos)
• Reguladores de crecimiento (hormonas vegetales)
• Otros compuestos (ej: agentes quelantes)

asepcia ambientación

cultivo
Tipos de Cultivo in vitro. Propagación y
regeneración de plantas

Plantas
Regeneradas

Organogénesis Embriogénesis

Suspensión
de células
Callos

Protoplastos

Explantos: trozos Microesporas/


hojas, tallos, gametos
Planta
meristemos, etc.
donante
Cultivo de tejidos: Rescate de embriones
Cultivo de tejidos: Embriogénesis somática
Cultivo de tejidos: Organogénesis somática

Propagación masiva
• Flores
• Frutales
• Árboles forestales

Cultivo de meristemas
• Saneamiento de virus
• Rejuvenecimiento
Cultivo de tejidos: Producción de haploides
Cultivo de tejidos:
Fusión de protoplastos
Transformación genética Técnicas básicas

• Enzimas de restricción
• Clonación de genes
• Secuenciación
• Electroforesis de Proteínas, ARN y ADN
• Hibridación con anticuerpos (western blot)
• Hibridación de ácidos nucleicos (southern, northern)
• Reacción de la polimerasa en cadena (pcr)
Transformación genética Técnicas básicas

Enzimas de restricción

Clonación en plásmidos (vectores)


Transformación genética Técnicas básicas

Clonación en plásmidos (vectores)


Transformación genética Técnicas básicas

Secuenciación

A C G T
Transformación genética Técnicas básicas: Secuenciación
Transformación genética Técnicas básicas
Electroforesis (DNA, RNA,proteinas)

southern

northern

western
Transformación genética Técnicas básicas

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)


Plantas transgénicas

Organismos en los que se


han introducido genes que
proceden de otras especies
o en los que se ha
modificado la expresión de
sus propios genes,
incorporándosele o no DNA
de otras especies
Propagación clonal rápida

El callo y el cultivo de células individuales


Producción
plantas
transgénicas

Protoplastos vegetales

Haploides
Propagación clonal rápida

Cultivo in vitro de un meristemo o yema apical aislado de un vástago


A veces se utilizan para obtener plantas sanas libres de patógenos a
partir de plantas madre cuya sanidad se desconoce

La frecuencia con la que se obtienen plantas sanas aumenta:


- Cultivos con sustancias que inhiben patógenos
- Cultivos expuestos a elevadas temperaturas

Aplicaciones en Fitopatología:
- Aporta estabilidad genética o ausencia de mutaciones

- Plantas libres de patógenos (saneamiento)


El callo y cultivos de células
individuales
Callo:
Tejido desorganizado formado por una masa de
células tumorales debido a que éstas crecen de
manera descontrolada. La mayoría de estas
células están en estado diferenciado salvo
algunas que revierten al estado indiferenciado.
Consiste en regenerar plantas a partir de células
desorganizadas y diferenciadas pero siempre
que estas reviertan al estado de meristimoide y/o
embrioide

Cultivo del callo:


- Agar
- Macronutrientes y micronutrientes
- Agua
Aplicaciones del callo y cultivos de células
individuales en Fitopatología:

Estudiar los efectos que presentan ciertas sustancias


secretadas por patógenos

Estudiar el comportamiento del patógeno (parásitos obligados)

Estudiar barreras estructurales y sustancias bioquimicas que


producen las células y tejidos de las variedades vegetales
resistentes

Probar in vitro sustancias químicas


Protoplastos vegetales

Protoplasto: es una célula vegetal, bacteriana


o fúngica que ha perdido su pared celular para
lo cual se usan métodos mecánicos o
enzimáticos

Los virus se introducen en las plantas mediante


el empleo de protoplastos utilizando:
- Fusógeno
- Liposomas

Una vez introducido el virus con la variable de


estudio, los protoplastos se introducen en medios
nutritivos con :
- Toxina
- Patógenos
A continuación se observa la resistencia de cada
protoplasto
Plantas Haploides
Anteras Células Haploides Plantas haploides

Dado que las microsporas son los productos de la meiosis, la constitución


genética de cada microspora y de cada una de las plantas haploides que derivan
de ellas difieren de la constitución genética de las demás microsporas y plantas
haploides.

Dotación genética 1N Fácil aislamiento de genes menores


que confieren resistencia
Aplicaciones de las plantas haploides en
Fitopatología

 Inoculación del material con virus y otros patógenos y su posterior


selección para obtener resistencia a las enfermedades

 Diploidización o inoculación del tejido dihapolide seguida de una


selección del material vegetal para obtener resistencia contra los
patógenos

 Inoculación y selección del tejido vegetal para obtener resistencia


contra las enfermedades
TÉCNICAS DE INGENIERÍA GENÉTICA
QUE SON IMPORTANTES PARA LA
FITOPATOLOGÍA

1. Biología Molecular Vegetal


2. Biología Molecular de los Fitopatógenos
3. Vectores que se utilizan para Clonación Genética en
plantas
3. Vectores que se utilizan para
clonación genética en plantas
• Vectores:
Son aquellos organismos capaces de transferir material genético de un
organismo a otro

- El material genético
persiste.
- Se expresa en la célula
receptora
Donador Receptor
• Los más utilizados:
– Plásmido de la bacteria fitopatógena Agrobacterium tumefaciens.
– El virus del mosaico de la coliflor
• Otros en estudio:
– Geminivirus → Con DNA de una sola banda.
– Virus del mosaico del tabaco → Con un RNA de una sola banda.
– Otros virus.
– Transposones
I. Plásmidos bacterianos como vectores

Se utiliza → Plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens.

Cepas virulentas de
A.tumefaciens
Formación de tumores

Induce
Infectan

“AGALLAS DE LA CORONA”
Si entra en contacto con una planta ya lesionada

Planta lesionada

Plásmido Ti se transfiere de la bacteria a la célula


DNA T → Región específica del plásmido Ti
→ Se transfiere al núcleo de la célula vegetal.
Se integra al genoma nuclear de la planta y se transcribe.
GENES UTILIZADOS Y CARACTER CONFERIDO EN
PLANTAS TRANSGÉNICAS
Tipo de gen utilizado en transgénesis Caracter que confiere a la planta

Toxina de Bacillus thuringensis Resistencia a Insectos

Proteína de la cubierta viral Resistencia a Virus

Quitinasas, glucanasas de plantas y de otros Resistencia a Hongos


organismos

Lisozima humana y de cerdo. Otros péptidos Resistencia a Bacterias


bactericidas

Genes cuyos productos afectan la Resistencia a Herbicidas


biosíntesis de aminoácidos, o la fotosíntesis

Genes cuyos productos afectan la


biosíntesis del etileno, o la formación de Retraso maduración de frutos
pared celular
ALGUNAS LIBERACIONES COMERCIALES DE PLANTAS TRANSGÉNICAS (Birch, 1997)

Cultivo (Fecha Nombre Compañía Caraterísticas


liberación)

Tomate (1994) Flavr Savr Calgene Savor de madurez en


rama, largavida

Tomate (1995) Zeneca Consistencia de pasta


de tomate

Algodón Bollgard Toxina deBacillus


Papas NewLeaf Monsanto thuringiensis para
Maiz (1996-97) YieldGuard resistencia insectos

Soya
Resistencia a
Raps Roundup Ready Monsanto
Algodón (95-96) Glifosato (herbicida)
OTRAS PLANTAS QUE HAN SIDO
GENÉTICAMENTE MODIFICADAS

Eucalyptus Pino
Abeto Frambuesa Plátano
Acelga Frutilla Poroto
Alfalfa Kiwi Poroto de soya
Algodón Lechuga Remolacha
Alamo Lirio Repollo
Arabidopsis Maíz Rosa
Arroz Maní Sorgo
Arveja Manzana Tabaco
Camote Maravilla Tomate
Caña de Orquidea Tulipán
azucar Papa Trigo
Cebada Papaya Vides
Centeno Petunia Zanahoria
Clavel Pera Zapallo
Crisantemo
Espárrago
MEJORAMIENTO GENÉTICO DE PLANTAS CON
TRANSFORMACIÓN GENÉTICA

Transformación de Plantas

Biobalística
o
Agrobacterium

Mejoramiento
Genético

Resistencia a Resistencia a Esterilidad Calidad del


Patógenos Herbicidas Sexual Producto

Roundup Materna
Insectos Hongos Bacterias Color Postcosecha
Listo Paterna
Glifosato

Glifosato

Bromoxinil
Laboratorios de Biotecnología Vegetal y Agrícola en el Perú
•Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales de la UPCH
•Unidad de Genómica de la UPCH
•Instituto de Biotecnología de la UNALM
•Laboratorio de Semillas Ortodoxas de la Dirección Nacional de
Investigación en Recursos Genéticos del INIA
•Laboratorio de Conservación in vitro de Recursos Fitogenéticos de la
Dirección Nacional de Investigación en Recursos Genéticos del INIA
•Laboratorio de Biología Molecular de la Dirección Nacional de
Investigación en Recursos Genéticos del INIA
•Laboratorio de Biotecnología en Fruticultura y Hortalizas de la EEA
Donoso del INIA
•Laboratorio de Biotecnología de la EEA Santa Ana del INIA
•Laboratorio de Cultivo de Tejidos e Ingeniería Genética de la URP
•Centro de Investigación de Bioquímica y Nutrición de la UNMSM
•Laboratorio de Biotecnología Aplicada del CIP
•Laboratorio de Biotecnología Vegetal de la UNSCH
•Laboratorio de Biotecnología de la UNFV
•MEDLAB Laboratorio Clínico (antes Cantella-Colichon)

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