Laboratorio de Aglutinación

Laboratorio de
aglutinación
Técnicas inmunoserológicas basadas en la reacción
antígeno-anticuerpo
Técnica parámetro Sensibilidad
Inmunodifusión doble Ag ó Ac 3-10 g/ml

(prueba de Ouchterlony)
Nefelometría y turbidimetría Ag ó Ac 1-3 g/ml
Aglutinación directa Ag 10-500 ng/ml
Aglutinación pasiva Ag ó Ac 1-10 ng/ml
Inmunofluorescencía Ag ó Ac 100 ng/ml
Ensayos Inmunoenzimático Ag ó Ac < 1 ng/ml
Radioinmunoensayo (RIA) Ag ó Ac < 1 ng/ml

Especificidad
1- Habilidad del sitio de combinación de un anticuerpo individual que
reacciona con un solo epítopo.
2- Habilidad de una población de moléculas de anticuerpo que reacciona con un
solo antígeno
Ag “A”
Ag “A”
Ac monoclonal
Ac policlonal
Reacción Cruzada
Habilidad del sitio de unión de una Ac individual a reaccionar
con mas de un epítopo
Habilidad de una población de moléculas de Ac para
reaccionar con mas de un Ag
Anticuerpo monoclonal
Anticuerpo policlonal
Aglutinación
 Su fundamento es inducir una agrupación macroscópicamente
visible de partículas (formación de grumos), causada por
interacciones antígeno anticuerpo que forman puentes entre ellas.
Usualmente el antígeno se encuentra en las partículas (GR,
bacterias, partículas inertes (látex) y los
 Las aglutinaciones se pueden hacer en: a) lamina, b) microplaca y
c) tubo
 Pueden observarse macroscópicamente o microscópicamente
 anticuerpos (IgG e IgM) forman puentes.
Etapas de la aglutinación:
 Sensibilización
a) reacción Ag-Ac reversible y
b) formación de redes para hacer grumos (estable)
 Formación de grumos:
a) Acs y Ag multivalentes,
b) concentración Ag y Acs,
 Factores que hay considerar en estas reacciones Ag-Ac:
a) Fuerza iónica
b) temperatura y
c) pH
Aglutinación
Directa
http://vlab.amrita.edu/index.php?sub=3&brch=69&sim=192&cnt=1
Aglutinación Directa
Anticuerpos dirigidos contra componentes de las partículas (eritrocitos, bacterias). Un ejemplo de este
caso es la determinación de grupos sanguíneos.
1. Test de aglutinación cualitativa (aglutinación rápida): Consiste en mezclar Ag y Ac (IgG o IgM) y
observar la aglutinación. Ej. Prueba de aglutinación rápida para la brucelosis, salmonelolis, proteus etc.
Utiliza
Ag= partículado
Acs= IgG, IgM

Aglutinación directa:
•tipeaje sanguíneo
•tipeaje bacteriano
•tipeaje de virus
•tipeaje de parásitos
Aglutinación Directa (sistema ABO)
Sistema ABO
Tipeaje bacteriano
Video de aglutinación directa

http://vlab.amrita.edu/index.php?sub=3&brch=69&sim=192&cnt=1
Aglutinación Directa
Cualitativa Cuantitativa
Lámina Diluciones seriadas en
Microplaca
Aglutinación directa
2. Test de aglutinación cuantitativa
(aglutinación lenta): Para la “titulación”
de un suero: se diluye el suero y se
enfrenta a una cantidad fija de Ag.
 Titulo: corresponde al reciproco la
máxima dilución del suero en el que la
aglutinación es positiva (o se ve
grumos).
 Efecto Prozona: Debido al exceso de
Ac no se forma la red que permite la
aglutinación. Puede también deberse a
la presencia de Ac “no aglutinantes”.
Aglutinación directa cuantitativa
 Prueba cuantitativa
• Aplicaciones
• infección viral
• infección Bacteriana
• Sube 4 veces el titulo
• Consideraciones practicas
• fácil
1/256
1/512
1/128
1/16
1/64
1/32
1/8
1/4
1/2
• Semicuantitativo
Ejercicio
Aglutinación
Pasiva
Aglutinación pasiva
+
Antígeno soluble
Ó
Anticuerpo
Aglutinación pasiva:
-prueba de sífilis RPR
-factor reumatoides
-prueba de HIV
Aglutinación Pasiva
Los anticuerpos se dirigen contra moléculas que se han adherido artificialmente
a una partícula que actúa como medio de soporte pasivo (GR, látex, carbón,
gelatina, etc.). Una variante es la aglutinación pasiva reversa, en donde lo que
se detecta es el antígeno y las partículas están recubiertas por el anticuerpo.
RPR: Prueba no treponémica

PCR: proteína C reactiva
muestra
Resultado
reactivo
mezcla
Aglutinación
Indirecta
• Eritroblastosis fetal
• Enfermedad hemolítica del
recién nacido
• Rh
Suero de Coombs: Anti-

IgG y anti-C3d
GR BB
AC maternos
Inhibición de la
Aglutinación
Inhibición de la aglutinación
 Se basa en el principio de la inhibición de la hemaglutinación. Para su

realización se precisan glóbulos rojos a los cuales se les ha unido la misma
sustancia que se desea detectar o cuantificar.
 Si estos glóbulos rojos son puestos en presencia de anticuerpos preparados
frente a dicha sustancia se producirá su aglutinación.
 Por el contrario, cuando se añade un suero problema que contiene la sustancia
a cuantificar entonces los anticuerpos se unirán a dicha sustancia y no a los
glóbulos rojos. En este caso no se producirá la hemaglutinación.
 Por tanto, aglutinación (+) indica ausencia de la sustancia a estudiar, y
aglutinación (-) indica presencia de la misma
Pruebas
 Estas pruebas se basan en la capacidad Dengue

de algunos patógenos (ej: virus de la
HGC(hormona
influenza, parvovirus canino) para
causar la aglutinación de los gonadotropina coriónica
eritrocitos.
 Pueden utilizarse para detectar el
humana)
patógeno (pruebas de
hemaglutinación) o los anticuerpos
dirigidos contra las hemaglutininas del
microorganismo (inhibición de la
hemaglutinación). Suelen ser pruebas
específicas de serotipo o subtipo y
bastante sensibles.
Dengue
Ac contra
Dengue
+ - 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 Titulo

_________
_________
_________
_________
_________
_________
_________
_________
Prueba de HGCH
(hormona gonadotropina corionica humana)

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Aglutinación directa Ag 10-500 ng/ml

Aglutinación pasiva Ag ó Ac 1-10 ng/ml

Inmunofluorescencía Ag ó Ac 100 ng/ml

Ensayos Inmunoenzimático Ag ó Ac < 1 ng/ml

Radioinmunoensayo (RIA) Ag ó Ac < 1 ng/ml

Acs= IgG, IgM

Video de aglutinación directa

RPR: Prueba no treponémica

Suero de Coombs: Anti-

 Se basa en el principio de la inhibición de la hemaglutinación. Para su

 Estas pruebas se basan en la capacidad Dengue

+ - 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 Titulo

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