Exámenes

microbiológicos
diagnósticos.
Exámenes microbiológicos

Objetivos :

• Fines de Diagnóstico y/o control de tratamiento

• Fines de Investigación
Condiciones para la Toma de
Muestra Microbiológica.
• Anamnesis y diagnóstico clínico presuntivo, y descripción del proceso o lesión.

• Aislamiento y secado del campo operatorio.

• Utilizar instrumentos esterilizados.

• Evitar el contacto de las manos del operador.

• Extraer una cantidad suficiente de muestra.

• Siembra directa para cultivo en un medio de transporte adecuado.

Examen microscopia.
• Microscopía directa :

• Transiluminación – fondo oscuro – fase contrastada

•
• Tinción de Gram
• tinción de Ziehl - Nielsen
• Otras tinciones
Diagnóstico.
• Cultivos
cultivos en aerobiosis
Cultivos en anaerobiosis
Cultivos en medios :
mejorados, selectivos e indicadores

sensibilidad ante antimicrobianos

Cualidades que deben tener los
exámenes microbiológicos
• Validez : que siempre entregue los mismos
resultados, que sea confiable, que tenga consistencia.

• Especificidad : que midan lo que tienen que medir.

• Sensibilidad : que detecte mínimas proporciones o

cantidades de la muestra u objeto en estudio.
Exámenes con fines de
Investigación
• Clínica.
• Determinación de los agentes causales de las enfermedades infecciosas

• Determinar los mecanismos patogénicos de las enfermedades infecciosas

• Determinar los límites de riesgo de las enfermedades infecciosas

• Descubrir nuevas formas de prevención y tratamiento de las

enfermedades infecciosas
Exámenes con fines de
Investigación básica.
• Determinar las características biológicas específicas de cada especie
microbiana

• Diseñar o establecer indicadores microbiológicos de riesgo

• Estudiar las asociaciones de determinados microorganismos con

enfermedades infecciosas específicas

• Estudiar la prevalencia e incidencia de las enfermedades infecciosas

Diagnóstico.
• El diagnóstico microbiológico indirecto o estudio serológico permite
detectar indirectamente un agente patógeno a través de los
anticuerpos específicos producidos por el hospedero frente a dicho
patógeno.
Diagnóstico clínico.
• La microbiología clínica es una ciencia de juicio interpretativo que
responde a las necesidades clínicas del médico tratante, con el fin de
identificar el agente etiológico de una infección y establecer la
actividad in vitro de las drogas antimicrobianas contra el (los)
microorganismo (s) identificado (s). Para maximizar el valor clínico de
las pruebas diagnósticas microbiológicas, es crucial que exista una
estrecha colaboración entre el médico tratante, la enfermera y el
laboratorio de microbiología.
Diagnóstico clínico.
• La interpretación de los resultados obtenidos en el laboratorio de
microbiología depende de la calidad de las muestras recibidas, siendo
el manejo previo a su recepción en el laboratorio, crítico para la
exactitud de los resultados. Esto se debe a que los microorganismos
pueden crecer, multiplicarse o morir rápidamente cuando existe una
indebida recolección, transporte y conservación de la muestra. Un
manejo inadecuado de la muestra puede producir resultados
erróneos, los que afectan directamente la salud del paciente e
influencian las decisiones terapéuticas.
Diagnóstico clínico.
• El diagnóstico directo tradicional generalmente abarca tres
procedimientos: la observación directa de la muestra, su cultivo y la
identificación del organismo aislado. Este procedimiento puede
realizarse a través de la microscopía directa al fresco, sin utilizar
tinciones o a través de la microscopia directa con tinciones, en la
cual, parte de la muestra es extendida en un portaobjeto y
posteriormente es sometida a un colorante que tiene afinidad por
diferentes estructuras microbianas.
Diagnóstico.
• Una de las tinciones más utilizadas
en el laboratorio de microbiología,
es la tinción de Gram , la cual
permite agrupar a las bacterias
según su reacción tintorial (Gram
negativo o Gram positivo),
morfología (cocos, bacilos,
cocobacilos) y agrupación (racimo,
cadena, diplo, empalizada). La
tinción de Gram también permite
observar células y levaduras.
Diagnóstico.

• El cultivo de la muestra constituye una

técnica básica para poder aislar y
posteriormente identificar los
microorganismos presentes, a través de
la siembra e incubación en medios de
cultivo artificiales. El éxito del
procedimiento es dependiente de las
condiciones de incubación.
Diagnóstico.
• La identificación del organismo aislado en un cultivo se realiza a
través de diferentes metodologías, tales como, observación de
las características macroscópicas de las colonias (morfología de
la colonia y reacciones que produce el microorganismo en el
agar); observación microscópica con tinción de la colonia
(agrupación, afinidad tintorial y morfología del
microorganismo) ; estudio del comportamiento metabólico y
bioquímico, a través de la aplicación de pruebas manuales
(pruebas directas, baterías bioquímicas, galerías bioquímicas y
medios de cultivo cromógenos) o automatizadas (equipos que
realizan las pruebas bioquímicas y metabólicas de manera
miniaturizada) ; pruebas de requerimiento nutricional y pruebas
diagnósticas no tradicionales, tales como, pruebas
inmunológicas, espectrometría de masa y pruebas basadas en
ácidos nucleicos
Pruebas
metabólicas
y
bioquímicas
realizadas
por equipos
automatiza
dos
Susceptibilidad Antimicrobiana

• Posterior al aislamiento e identificación de un microorganismo clínico

significativo, se realiza la prueba de susceptibilidad antimicrobiana, con el
objetivo de guiar al clínico a elegir una terapia antimicrobiana adecuada. El
estudio de susceptibilidad antimicrobiana (antibiograma o antifungigrama),
es un método que determina, in vitro, la susceptibilidad de las bacterias y
hongos, respectivamente, a los antimicrobianos, bajo condiciones
específicas y estandarizadas de laboratorio.
Antibiograma por difusión en disco.
• Es una técnica económica, que entrega información
cualitativa de la sensibilidad de un microorganismo a un
determinado antimicrobiano (sensible, intermedio o
resistente). Esta prueba consiste en la difusión de un
antimicrobiano impregnado en un disco de papel, sobre
la superficie de una placa de agar sembrada previamente
con el microorganismo en estudio. Si el microorganismo
es sensible al antimicrobiano, sufre una inhibición de su
crecimiento alrededor del disco, formando un “halo de
inhibición” que es visible y medible luego de 18 hrs. de
incubación. El diámetro de la zona de inhibición
determina si existe sensibilidad o resistencia al
antimicrobiano.
Epsilometría o E-
test.
• La Epsilometría o E-test, entrega información cuantitativa
de la sensibilidad del microorganismo, determinando la
Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) de un
antimicrobiano, es decir, la concentración mínima del
antimicrobiano que es capaz de inhibir el crecimiento de
un microorganismo determinado. Este método consiste
en una tira plástica impregnada con concentraciones
crecientes del antimicrobiano, la cual es puesta en una
placa de agar sembrada previamente con el
microorganismo en estudio. El agente antimicrobiano
difunde en el agar produciendo inhibición del
crecimiento bacteriano alrededor de la tira. La CIM
corresponde al punto donde el crecimiento bacteriano
alcanza la tira
 • La Dilución es la metodología estándar de oro para obtener la
susceptibilidad antimicrobiana. Esta metodología entrega información
cuantitativa, determinando la CIM. Se basa en la dilución seriada de un
Método por antimicrobiano en un medio líquido o sólido, los cuales se ponen en
contacto con una concentración estándar del microorganismo en estudio.
dilución. Luego de incubarlos por 18 hrs. se observa el crecimiento del
microorganismo y se establece la CIM. En la actualidad existen equipos
automatizados que efectúan una dilución en caldo en forma miniaturizada,
permitiendo obtener resultados de CIM en forma rápida
Diagnóstico directo no tradicional

• El diagnóstico directo no tradicional permite realizar la

detección del agente etiológico directamente de la muestra
o a partir de un microorganismo aislado previamente desde
un cultivo.
• Los métodos inmunológicos, los cuales detectan antígenos
del microorganismo utilizando un anticuerpo específico, el
cual está unido a un sistema de detección. Según la técnica
de inmunodiagnóstico que se utilice, es posible detectar el
antígeno directamente desde la muestra o a partir de un
microorganismo ya aislado desde un cultivo.
 • El Enzimoinmunoensayo (EIA), el cual es una metodología utilizada para detectar antígenos
directamente desde la muestra. Una de las técnicas más utilizadas en microbiología es el
ensayo por inmunoabsorción ligado a enzima (ELISA) de captura, donde se utiliza un
anticuerpo específico del antígeno, el cual es fijado a una fase sólida (placa). El antígeno

EIA presente en la muestra se une al anticuerpo específico. Posteriormente se añade un

segundo anticuerpo específico contra el antígeno, el cual está unido covalentemente a una
enzima. Luego de un periodo de incubación y varios procesos de lavado, el complejo
anticuerpo-antígeno-anticuerpo es detectado al añadir el sustrato de la enzima ligada al
segundo anticuerpo. La enzima actúa sobre el sustrato produciendo color, el cual puede ser
leído a simple vista o mediante un espectrofotómetro
I.Fluorecencia

• La inmunofluorescencia es una técnica

que permite detectar el antígeno
presente en una muestra. Esta técnica
tiene dos modalidades. La primera es
la modalidad de anticuerpo
fluorescente directo (Direct
Fluorescent Antibody, DFA) que
consiste en una lámina con la muestra
del paciente previamente fijada, a la
cual se le aplica un anticuerpo
específico. Luego de un período de
incubación y de varios procesos de
lavado, el complejo antígeno-
anticuerpo es detectado mediante
microscopía de fluorescencia.