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    Universidad Central del Ecuador

    Facultad de Ciencias Médicas


    Carrera de Laboratorio Clínico
    Laboratorio de Endocrinología
    Quinto Semestre

    RADIOINMUNOANÁLISIS
    Integrantes Grupo 2:
    Aguirre Richard Criollo Yuley
    Alejandro Joe Ñacata Rebeca
    Cisneros Jeniffer Oña Josselyn
    ¿QUÉ ES?

    El radioinmunoensayo o radioinmunoanálisis, es un método


    radioinmunocéntrico basado en la formación específica de complejos
    formados antígeno-anticuerpo. Esta particularidad, unido a la
    sensibilidad de la metodología radiológica, hace que el
    radioinmunoensayo cuente con una gran especificidad.

    El RIA se utiliza para detectar y cuantificar sustancias que se


    encuentran en cantidades muy pequeñas y mezcladas con muchas
    otras. Utilizando anticuerpos de gran afinidad se pueden detectar hasta
    picogramos de antígeno. (1 pg = 10-12 g).
    En sus orígenes, esta técnica fue desarrollada en 1960
    por Solomon A. Berson y Rosalyn Yalow para determinar
    la concentración de insulina presente en una muestra de
    plasma sanguíneo.
    FUNDAMENTO

    Usa isótopos radioactivos, es in vitro.


    El radioinmunoanálisis se basa en una reacción antígeno-anticuerpo.
    Los anticuerpos deben ser específicos contra la substancia que queremos
    determinar, y tener una gran afinidad.

    El antígeno es la hormona (de la muestra) que queremos determinar,


    (antígeno frío). Además del antígeno presente en la muestra problema, se va
    a añadir una cantidad constante y conocida de antígeno pero marcado
    (antígeno caliente).
    Los antígenos marcados se forman sustituyendo algunos de los átomos
    normales del antígeno por los correspondientes isótopos radiactivos
    (H3=tritio, P32), o introduciendo radioisótopos extraños en la molécula
    (yodo=I125 unido a un resto de TYR).
    FUNDAMENTO
    Cuanto mayor sea la cantidad de
    antígeno frío en la muestra problema,
    Los dos tipos de antígenos, frío y este desplazará al antígeno caliente y
    caliente, van a competir, en igualdad por tanto se fijarán al anticuerpo
    de condiciones, por unirse con el cantidades menores de antígeno
    anticuerpo disponible. marcado.

    Las concentraciones del antígeno


    marcado y del anticuerpo son
    constantes, la única variable del
    sistema es la concentración de
    antígeno no marcado (muestra
    problema).

    La formación de complejos radiactivos (Ag-Ac) varía en función de la concentración del antígeno no marcado: a mayor
    concentración de antígeno no marcado, mayor formación de complejos antígeno-anticuerpo no marcados, y menor
    formación de complejos radiactivos, y viceversa.
    FUNDAMENTO
    SEPARACIÓN DE LAS FASES LIGADA Y NO LIGADA
    Tras la reacción antígeno-anticuerpo, en el tubo de reacción encontraremos:

    • Las fracciones libres, constituidas por antígeno frío y antígeno marcado.


    • Las fracciones ligadas formadas por complejos antígeno-anticuerpo y
    antígeno marcado-anticuerpo.

    La radiactividad total en el tubo permanece constante antes y después de la reacción, por lo que hay que separar
    la fase ligada de la no ligada y contar la radiactividad en una de ellas, sin interferencia de la otra.
    SEPARACIÓN DE LAS FASES LIGADA Y NO LIGADA
    Adsorción: Con carbón activo, dextrano o resinas. Adsorben (se unen) específicamente la fase
    libre (antígenos frío y caliente) pero no se unen a los complejos antígeno-anticuerpo que
    quedarían en solución. Tras centrifugación, el carbón sedimenta en el fondo del tubo con la fase
    no ligada mientras que la fase ligada queda en el sobrenadante, que se aspira o decanta.

    Precipitación química: Hay substancias como el etanol, el propilenglicol o el sulfato amónico


    que alteran la solubilidad de las proteínas provocando su precipitación. Precipitan los complejos
    ligados. Tras centrifugación, quedan los complejos ligados en el sedimento y la fracción libre en
    el sobrenadante, que se elimina por aspiración o decantación.

    Precipitación inmunológica: Se utiliza un segundo anticuerpo contra el anticuerpo del sistema.


    La unión del segundo anticuerpo al complejo antígeno-anticuerpo da lugar a un complejo de
    gran tamaño, en general insoluble y fácilmente precipitable. Tras incubación y centrifugación, la
    fase libre queda en el sobrenadante y se separa por aspiración o decantación. Este método es
    muy utilizado en RIA.

    Fase sólida: Consiste en inmovilizar al anticuerpo a un soporte sólido, que puede ser la propia
    pared del tubo, bolitas de vidrio, partículas de SephadexÒ (polímero). La separación se consigue
    simplemente aspirando el medio de incubación.
    VENTAJAS DESVENTAJAS

    • Especificidad, sensibilidad y • Necesidad de equipos especiales.


    reproducibilidad. • Uso de isótopos radiactivos.
    • Constancia de la señal • Múltiples normas para la conservación y
    isotópica y la duración. desecho de los productos.
    INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

    En ausencia de antígeno frío (no


    radioactivo), todos los complejos Ag-Ac
    serán radioactivos. La radioactividad
    medida es máxima.

    En presencia de antígeno frío (no


    radioactivo), éste compite con el
    antígeno radioactivo para unirse al
    anticuerpo. Por tanto la radioactividad
    medida es menor. El descenso es
    proporcional a la concentración de Ag
    frío presente en la muestra.
    INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

    Se construye una curva de calibrado


    (color rojo) que relacione la medida de
    radioactividad (cpm) con la
    concentración de antígeno frío en la
    muestra.

    Si se realiza el ensayo con una muestra


    que contiene una cantidad desconocida
    del antígeno no marcado y se mide la
    radioactividad asociada a los
    anticuerpos, por interpolación sobre la
    curva de calibrado se puede estimar la
    concentración del antígeno frío en la
    muestra.
    Aplicación de la técnica en
    endocrinología y hormonas que se
    identifican con esta técnica
    Ayuda al diagnóstico y tratamiento de problemas hormonales relacionados con el crecimiento, la
    función tiroidea y la fertilidad.

    Cualquier sustancia del organismo puede ser considerada un


    antígeno. Los anticuerpos que se transforman sirven para medir la
    cantidad de hormonas que hay en el organismo. Así se miden:

    • Hormonas peptídicas: T3, T4, TSH, GH...Casi todas las


    hormonas hipofisarias.
    • Hormonas no peptídicas: Estrógenos,
    testosterona...Hormonas sexuales.
    BIBLIOGRAFÍA
    1. Radioinmunoensayo (RIA) [Internet]. Ehu.eus. [citado el 3 de septiembre de 2022]. Disponible en:
    https://www.ehu.eus/biomoleculas/isotopos/ria.htm
    2. Radioinmunoanálisis [Internet]. Quimica.es. [citado el 3 de septiembre de 2022]. Disponible en:
    https://www.quimica.es/enciclopedia/Radioinmunoan%C3%A1lisis.html
    3. MÉTODOS PARA EL ESTUDIO DE HORMONAS [Internet]. Ujaen.es. [citado el 3 de septiembre de
    2022]. Disponible en: http://www4.ujaen.es/~esiles/ENDOCRTema6.pdf
    4. RADIOINMUNOANALISIS DE LAS HORMONAS TIROIDEAS [Internet]. Binasss.sa.cr. [citado el 3
    de septiembre de 2022]. Disponible en: https://www.binasss.sa.cr/revistas/rccm/v9n4/art6.pdf
    5. Radioinmunoensayos RIA [Internet]. prezi.com. [citado el 3 de septiembre de 2022]. Disponible en:
    https://prezi.com/dklnphgvrhoe/radioinmunoensayos-ria/

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