Papaína

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Proyecto BIO 239 Papana

Alberto Escobar Mara Constanza Fernndez Esteban Tello

Antecedentes

Composicin qumica de la papaya: El ltex presente en el fruto contiene principalmente papana bruta (constituida a su vez por una mezcla de papana, quimopapana A y B, papayapeptidasa A y papayaproteinasa omega).

En algunos individuos la protena presente en la papaya provoca una reaccin alrgica (acta como alrgeno). Segn un estudio realizado, aproximadamente el 5% de los individuos present reaccin a la papana.

En un trabajo realizado en la Universidad Autnoma Metropolitana de Iztapalapa, se logr determinar que es posible la denaturacin de la protena al aplicar cambios trmicos. Adems se reafirma que es posible la deteccin de la enzima a travs de la electroforesis.4

Objetivos e hiptesis

Objetivo: Determinar la presencia de papana en una muestra de papaya cocida. Hiptesis: Se espera que una muestra de papaya cocida no presente la enzima papana, puesto que esta se denatura en el proceso de coccin (30 min. en agua a 100C). La denaturacin al ser irreversible hara posible que una persona alrgica a la protena pueda ingerir papaya cocida, una vez alcanzada la temperatura ambiente.

Mtodos

Se realiza una electroforesis. Para ello se toman muestras de 1ml de papaya cruda y cocida molidas (30 min. en agua a 100C). Las muestras son mezcladas paralelamente con un buffer de lisis (0,5 ml) y centrifugadas (12.000 rpm por 10 min.). Se extrae el sobre nadante y se mezcla con un buffer de carga, se homogeniza la muestra y se carga en el gel de poliacrilamida en la celda electrofortica.

Mtodo alternativo

Para tener ms seguridad se realiza un mtodo de inmunofluorescencia directa para corroborar la informacin. Para este mtodo se utiliza un anticuerpo especfico para la papana (comprado o sintetizado en laboratorio).

Se mezclan las muestras de papaya (cruda y cocida) con el anticuerpo marcado por un fluorocromo, se incuban y se lavan. Las muestras lavadas se analizan en un microscopio con luz ultravioleta.

Resultados esperados

Utilizando ambos mtodos se espera ver que la muestra hervida no contenga la enzima. Bajo el primer mtodo, luego de realizar la electroforesis no debera encontrarse papana. (la barra correspondiente al peso molecular de la protena). Bajo el segundo procedimiento, no se debera ver el fluorocromo bajo el microscopio.

Bibliografa

http://www.herpato.com http://alergomurcia.com

Referencias
1.-

P.4 Mecanismo molecular de la desnaturalizacin acida de la papaina; Fosado, Rosa. Universidad Autnoma MetropolitanaIztapalapa (2011).-Middeltons Allergy Principes and Practice 7th edition, 2009;66:1 169- 1187 2.- Estudio conformacional y desnaturalizacin termica de protenas cistenicas del ltex de papaya; Solis, Silvia; Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa (1994). 3.- Reaccin adversa a aditivos; Dr. Miyagui, Jess Roberto Ken. Diciembre 2009 4.- P.4 Mecanismo molecular de la desnaturalizacin acida de la papana; Fosado, Rosa. Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa (2011).

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