Micrtobi Indus
Micrtobi Indus
Micrtobi Indus
INDUSTRIELLE
Cours théorique
3ème Année TA
Prof. A. TANTAOUI ELARAKI
Microbiologie Industrielle
Présentation générale
Cours Théorique: 24 heures
Travaux Pratiques: 14 heures
Enseignants
- Cours théorique: A. TANTAOUI
ELARAKI
- Travaux Pratiques: H. AMAROUCH
2
Microbiologie Industrielle
Présentation générale (suite)
- Polycopié distribué
- Présentation Data show
- Participation des étudiants souhaitée
- Rappels si nécessaire (les réclamer)
- Possible de déborder du cadre strict du
cours
3
Microbiologie industrielle
Plan du cours
Introduction
I- La souche microbienne à usage industriel
II- Les microorganismes d’intérêt industriel
dans les IAA
III- Les micro-organismes utilisés dans
l’industrie laitière
IV- La levure boulangère
4
Microbiologie industrielle
Introduction
Microbiologie industrielle: étudie les micro-
organismes utilisés dans l’industrie
Introduction (suite)
Remarques:
1- un même micro-organisme peut être indispensable
dans un produit et indésirable dans un autre
2- Microbiologie industrielle = biotechnologie
- Microbiologie industrielle: définition des souches,
nature, systématique, propriétés, etc.
- Biotechnologie: exploitation industrielle de leurs
propriétés.
6
Microbiologie industrielle
Introduction (suite)
Rôle essentiel des MO dans les industries de
fermentation (biotechnologies):
- Panification: boulangerie, viennoiseries, etc.
- Fermentations laitières: fromages, yaourts, autres laits
fermentés, etc.
- Fermentations végétales : olive, choucroute, cornichons
- Fermentations carnées: saucissons fermentés, jambon,
- Fermentation alcoolique: Brasserie, Cidrerie, Œnologie
- Fermentation acétique: Vinaigrerie
7
Multiples fonctions des microorganismes:
- Fonction technologique;
- Rôle dans la conservation;
- Fonction nutritionnelle;
- Intérêt sanitaire.
8
1. Fonction technologique
1.1. Fermentation
o Métabolisme = Transformation de la matière première
9
2. Rôle dans la conservation/amélioration de la qualité hygiénique
o Bactériocines / antibiotiques
o Alcools
o Diacétyle
empirique 6
10
3. Fonction nutritionnelle
Production de vitamines (Vitamines du groupe B, Ac. folique, etc.)
Amélioration de la digestibilité de nutriments complexes
Disponibilité d’acides aminés essentiels
Meilleure disponibilité d’oligo-éléments ( ex.: Phytates et fer dans le pain)
4. Intérêt sanitaire
11
Chapitre I- La souche
microbienne à usage industriel
12
I- La souche microbienne à usage industriel
I.1- Caractéristiques de la souche
idéale
- Croissance rapide sur un substrat peu coûteux
avec rendement élevé
- Production intense des enzymes nécessaires
- Transformation dans des conditions simples, y
compris récupération du produit désiré
- Stabilité génétique
- Autres (selon le cas)
13
I- La souche microbienne à usage industriel
I.2- Obtention des souches
14
I- La souche microbienne à usage industriel
I.2- Obtention des souches
(suite)
I.2.1- Screening technic
- Principe:
> passer au crible grand nombre de
souches
> chercher là où on a le plus de chance
de trouver
15
I- La souche microbienne à usage industriel
I.2- Obtention des souches
I.2.1- Screening technic
16
I- La souche microbienne à usage industriel
I.2- Obtention des souches
I.2.1- Screening technic
2 ans
55 chercheurs
134 726 souches
5000 échantillons de sol
17
I- La souche microbienne à usage industriel
I.2- Obtention des souches
I.2.2- Collections de souches
Exemples
ATCC: American Type Culture Collection (USA)
CBS: Central Bureau voor Schimmel culture (NL)
NRRL: Northern Regional Research Laboratory
(USA)
CCTM: Centre de Collection de Types Microbiens
(CH)
NCIB: National Collection of Industrial Bacteria
(UK)
NCTC: National Collection of Type Culture (UK)
19
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
20
I- La souche microbienne à usage industriel
I3- Amélioration des souches (suite)
I.3.2- Mutagenèse
- Principe
- Dose efficace
- Agents mutagènes
- Criblage des mutants
- Applications
22
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.2- Mutagenèse (suite)
23
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.2- Mutagenèse (suite)
Agents mutagènes
chimiques Agents
- Propionolactone mutagènes
- Analogues bases pur. & pyr. physiques
- Agents alkylants à l’azote
- Acide nitreux
- Rayons UV
- Oxyde d’éthylène
- Rayons γ
- Dérivés de l’acridine
- Rayons X
- Sulfates et sulfonates (EMS)
- Epoxydes
- Ethylène
- imines
24
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.2- Mutagenèse (suite)
25
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.2- Mutagenèse (suite)
Applications
- Amélioration de Penicillium chrysogenum pour
production de pénicilline (sélection naturelle et
mutagenèse)
- Souches mutantes de levure insensibles à la
répression catabolique du glucose (pour
assimilation du maltose)
- Souches mutantes de levure capables de
synthétiser la thiamine
26
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches (suite)
- I.3.3.2- Parasexualité
27
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.3- Recombinaison génétique « naturelle »
28
Gamète mâle Gamète femelle
Levure + ou a Levure - ou α
Conjugaison
A (n) B (n)
Zygote
MEIOSE
Crossing-over
A B
Recombinés
29
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.3- Recombinaison génétique « naturelle »
30
1 2
Filament A (n)
CYCLE PARASEXUEL
ANASTOMOSE
Filament B (n)
3 4
- Conditions restrictives:
. Filaments de même espèce
. Filaments compatibles
32
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
- Objectif
- Principe
- Technique
- Quelques applications
- Exemple détaillé
33
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.4- Fusion cellulaire induite
34
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.4- Fusion cellulaire induite
Principe:
- Élimination de la paroi par attaque enzymatique
(milieu isotonique)
- Mélange des 2 populations cellulaires en
présence d’ions Ca++ et de polyéthylène glycol
- Régénération de la paroi
- Criblage des recombinants (marqueurs
génétiques)
35
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.4- Fusion cellulaire induite
Technique
Exemple de technique de fusion cellulaire
induite chez les moisissures
36
Souche A (a-b-c+d+) Souche B (a+b+c-d-)
Enzymes lytiques
protoplastes protoplastes
Cultures + Cultures
PEG 30% + Ca++
MM MM MC
MC
Fusion
(0,1-1% au lieu
de 10-6) Contrôle Viabilité des
Contrôle Viabilité des protoplastes
protoplastes des
des mutations
mutations
Culture sur MC
Régénération et réversion
Culture sur MM
des protoplastes
Régénération et réversion
A (a-b-c+d+), B (a+b+c-d-)
des produits de fusion
37 et des produits de fusion
(a+b+c+d+)
(a+b+c+d+)
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.4- Fusion cellulaire induite
Quelques applications
- Streptomyces (antibiotiques)
- Penicillium chrysogenum (pénicilline)
- Aspergillus niger (acide citrique)
- Schizosaccharomyces pombe Souches de
même signe
- Saccharomyces lipolytica sexuel
38
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.4- Fusion cellulaire induite
40
Pousse à 37°C Ne pousse pas à 37°C
Ne fermente pas mélibiose Fermente mélibiose
Fermente dextrines Ne fermente pas dextrines
Pas de gène MAL Possède gène MAL
Petites colonies lisses Grandes colonies lisses
Diploïde (asque à 4 spores) Plyploïde (pas de spores)
Ne pousse pas sur lactose Pousse sur lactose
Saccharomyces
Saccharomyces Pousse à 37°C
uvarum
diastaticus Fermente mélibiose Souche 21 RS
Souche 1384 RD
Fermente rapidement maltose
Fermente dextrines
Aptitude légère à la sporulation
Colonies grandes et rugueuses
Pousse sur lactose
41
Produit de la fusion
-I La souche microbienne à usage industriel
I.3
- Amélioration des souches
- Objectif
- Principe
- Exemple d’application
42
I- La souche microbienne à usage industriel
I.3- Amélioration des souches
I.3.5- Recombinaison génétique in vitro
Objectif:
Introduire un gène intéressant (humain, animal,
végétal ou microbien) dans une cellule
étrangère (réceptrice) pour qu’il s’exprime
dedans.
Avantages des cellules réceptrices
microbiennes (bactéries surtout): facilité de
culture et vitesse de reproduction et de
métabolisme
43
-I La souche microbienne à usage industriel
I.3
- Amélioration des souches
I.3.5
- Recombinaison génétique in vitro
Principe
- Découper le gène intéressant par action mécanique ou
par action enzymatique (enzymes de restriction:
extrémités cohésives)
- L’attacher à ADN familier (plasmide, ADN viral) pour
former un ADN hybride (rôle des transférases
terminales et de la ligase)
- Introduire l’ADN hybride dans la cellule réceptrice:
cellule transformée ou génétiquement modifiée
44
-I La souche microbienne à usage industriel
I.3
- Amélioration des souches
I.3.5
- Recombinaison génétique in vitro
Exemple d’application:
transformation d’Escherichia coli pour la
production de somatostatine humaine
45
I- La souche microbienne à usage industriel
I.4- Conservation des souches
46
-I La souche microbienne à usage industriel
I.4. Conservation des souches
Techniques
- Rôle de l’huile
. Très faible passage de l’O2 (assurer la
concentration critique en O2)
. Empêcher la dessiccation du milieu
Congélation
- Congélation lente ou rapide (azote
liquide)
- Pour éviter formation de cristaux:
. Congélation rapide
. Addition d’agents protecteurs
- Durée de conservation: illimitée (jusqu’à
décongélation)
48
-I La souche microbienne à usage industriel
I.4. Conservation des souches
Techniques
Lyophilisation
- Évaporation de l’eau à basse température
sous vide
- Récipient scellé pour éviter réhumidification
- Inconvénient: forte mortalité (réduite par
agents protecteurs)
- Durée de conservation: illimitée, même à
température ambiante (jusqu’à ouverture des
récipients)
49
Chapitre II- Les microorganismes
d’intérêt industriel
Introduction
II.1- Les bactéries
- II.1.1- Bactéries lactiques
- II.1.2- Bactéries acétiques
- II.1.3- Micrococcaceae
- II.1.4- Propionibactéries
II.2- Les microorganismes fongiques
- II.2.1- Généralités
- II.2.2- Principales utilisations industrielles
- II.2.3- Les levures
- II.2.4- Les moisissures
50
Introduction
Il s’agit de microorganismes
Capables de :
51
I.1. Les bactéries
Groupe de micro-organismes le plus large et le plus diversifié.
52
PLACE DANS LE MONDE VIVANT
Monde vivant: 5 règnes:
Microorganismes
Structures cellulaires deux groupes de microorganismes
Fungi Monera
Algues**
Moisissures*** Cyanobactéries
Protozoaires**
Levures*** Bactéries***
Ricketsies
Archaebactéries
*** importants pour l'alimentation Mycoplasmes
** moins importants Chlamidiae 10
(Virus)
53
Groupes de bactéries utilisées en IAA
Bactéries lactiques
Bactéries acétiques
Micrococcacea
Propionibactéries
Divers (Bacillus, Brevibacterium, etc.)
54
I.1.1. Les bactéries lactiques
Non pathogènes
Catalase négative
Microaérophiles ou anaérobies
Applications :
Fermentations de produits végétaux ou animaux
Ensilages pour la production d’aliments du bétail
Œnologie (fermentation malo-lactique)
Pro-biotiques
13
56
La Fermentation des sucres produit :
C6H12O6 2CH3CH(OH)COOH
Glucose Ac. lactique
( Hétéro-fermentation)
o Famille: Lactobacillaceae
57
Actuellement
• Famille : Lactobacillaceae
1 Genre : Lactobacillus
• Famille : Streptococcaceae
• Famille : Actinomycetaceae
1 Genre : Bifidobacterium
15
58
I.1.1.2. Genres des bactéries lactiques d'importance industrielle
genre Lactococcus
• Gram positif
• cocci isolées, en diplococques ou en courtes chaînes
• Métabolisme du glucose : Homo-fermentaire
59
Détermination du type de lactate (Utilisation de lactate déshydrogénase : LDH)
LDH du muscle spécifique pour L(+): stéréospécificité
LDH
Lactate (L+) + NAD+ Pyruvate + NADH, H+
Ajout de semicarbazide
- Spectrophotométrie à 340 nm = concentration L(+)
- Dosage de l’acide lactique total (titrimétrie) = Acidité titrable
Acidité titrable – L(+) = D(-)
60
Espèces :
§ Une variété
2. Lc. garviae
3. Lc. plantarum
4. Lc. raffinolactis 18
61
genre Lactobacillus
ou sous-espèces différentes
Homofermentaires: C6 ======> 2 C3
62
HOMOFERMENTAIRES HETEROFERMENTAIRES
Streptobacterium Betabacterium
Thermobacterium
Lb. plantarum Lb. fermenti
Lb. helveticus
Lb. casei Lb. buchneri
Lb. jugurti
Lb. sakei Lb. brevis
Lb. bulgaricus
Lb. curvatus Lb. cellobiosis
Lb. lactis
Lb. acidophilus Lb. viridescens
Lb. delbreuckii
Lb. salivarius
Lb. jansenii
20
63
־Rôle important dans l'industrie agro-alimentaire (ferments, producteurs
d'arômes, probiotiques...)
o Lb. delbruekii (toutes les sous espèces y compris Lb. debruekii ssp.
bulgaricus) : D(-)
־Sur MRS agar (de Man, Rogosa et Sharpe) à 37° C : Colonies blanches, 21
lisses, convexes, diamètre d'environ 2 mm.
64
genre Leuconostoc
Cocci ou Ovoïde,
65
o Production d’exo-polysaccharides (EPS) : Dextranes, Fructosanes,
Levanes, etc.
־Importance
o Technologie
- Consistance (viscosité),
- Probiotiques
o Bactéries du levain 23
* Utilisées
en Ind. laitière
** œnologie
67
24
genre Enterococcus
Résistent à la pasteurisation
25
68
§ Principales espèces
E. avium E. malodoratus
E durans* E. casseliflavus
E. faecalis* E. gallinarum
E. faecium*
*Levains ?
• Présent dans de nombreux produits fermentés largement
consommés à l’échelle internationale;
• Non permis en tant que ferments industriels
27
69
genre Pediococcus
70
Principales espèces
71
genre Streptococcus
72
Croissance
Groupe 10°C 45°C Groupesérologique
Pyogènes - - A,B,etc.
Viridans - + ?
Pyogènes
Agents infectieux :
S. pyogenes et S. agalagtiae • pneumonie
• Angines
Viridans
73
genre Carnobacterium
Genre proposé en 1987
§ 1999 : C. inhibens pour une souche isolée du tube digestif d'un saumon de
l'Atlantique
32
74
§ Caractères morphologiques et physiologiques
75
§ Habitat
Viandes (bœuf, porc, mouton et volailles), Poissons, Eau douce
§ Importance
33
76
genre Bifidobacterium
77
2 Glucoses 2 Glucose-6-P
2 ATP 2 ADP
2 Fructose-6-P
Pi Phosphoketolase
TPP
Transaldolase
Acétyl-P + Erythrose-4-P
(C2) (C4)
3 ADP 3 ATP
Sedoheptulose-7-P + Glyceraldehyde-3-P
(C7) (C3)
3 Acétates Transkétolase
TPP
EMP
2 Acides lactiques 35
Bilan : 2 glucoses 3 acétate + 2 lactate
78
Microscope photonique Microscope électronique
36
79
I.1.2. Bactéries acétiques
Bactéries capables de convertir les sucres ou l’alcool en acide acétique = production du
vinaigre
Genre Acetobacter
80
CH3-CH2OH 2CH3-CHO + 2H2O
ETHANOL ACETALDEHYDE
O2
Présence
abondante
d’oxygène
CH3-CH2OH + CH3COOH
ETHANOL AC. ACETIQUE
81
Acetobacter aceti
Espèce : Acetobacter aceti : ubiquitaire (fleurs, fruits, abeilles, drosophiles, eau, sol, etc.)
82
I.1.3- Micrococcaceae
Genres utilisés dans la Fermentation des produits carnés : Charcuterie
genre Micrococcus
• Description Taxonomique
Gram positif; Forme sphérique (0.5-2.0µm de diamètre)
Cellules en paires, tétrades or amas irrégulier,
Non mobile, non sporulant
Aérobie strict
Colonies pigmentées : jaune ou rouge
Métabolisme respiratoire
Catalase positive
Halo-tolérant ( 5% NaCl)
Croissance optimale : 25-37°C
GC% élevé (66-73)
42
84
Fermentent le fructose, le glucose, le glycérol et la N-acétylglucosamine
furanose ;
85
Staphylococcus carnosus :
Autres sources :
o Saucissons
o Poissons fermentés
86
Comparaison des séquences des ARNr 23S révèlent que les souches de
Staphylococcus carnosus se répartissent en 3 groupes (F, A et B).
A et B = Même Espèce
87
Staph. carnosus subsp. carnosus
o phosphatase positive
o Coagulase négative
hémolysine.
46
88
Rôles dans la fabrication des produits carnés :
Eviter l'oxydation grâce à leur catalase qui dégrade l'eau oxygénée élaborée par
les bactéries lactiques. Une oxydation importante conduit à des anomalies dans
la couleur et le goût et diminue la durée de conservation (rancissement).
89
Nitrate réductase staphylococcique :
NO3- NO2- NO
H2O H2O
Myoglobine Nitrosomyoglobine
(Composé stable de couleur
NADH,H+ rose/rouge)SANS DANGER)
NAD+
Amines secondaires
NO3- NO2-
R N H
H2O
R’
Nitrosamines Cancer ??
90
I.1.4- Les propionibactéries
Bacilles à Gram positif
Produisent l'acide propionique par fermentation du glucose et de l’acide lactique
Non sporulés,
Immobiles,
Catalase positive.
Peuvent également apparaître sous des formes coccoïdes, bifides voire ramifiées.
Croissance optimale : entre 30 et 37 °C et les colonies peuvent être blanches, grises, roses,
rouges, jaunes ou oranges.
49
GC % élevé (67%): Actinobactéries
91
D'après leur habitat, les espèces du genre Propionibacterium sont divisées
lait"
92
o Propionibactéries de la peau ou Groupe acnes
51
93
Classification d’après des critères génétiques
genre) et P. cyclohexanicum
thoenii
94
Microbiologie industrielle
95
Microbiologie industrielle
96
Classification du Monde Vivant
(d’après Langeron, 1945)
Monde vivant
Protophytes
Algues Autres
bleu Fungi
Bactéries algues
vert unicellulaires (Champignons) Protozoaires
97
Protistes Inférieurs Protistes Supérieurs
Le monde microbien
ine nde
rte
Mo
s
ale
M
Vir
ol
lic
ut
Ri es
ck Myc
et oba Microorganismes
ts
Métaphytes
ia cter
le ia
s Eub fongiques
a c té
ales ri- Algues Autres
t er ia
b a c bleu Algues
o
Pro Alg vert unicel.
t
bac ozoo
teri
a
Pro Schizomycètes
to
aire zo Protistes inférieurs
s
Ensemble des Protistes
Mét Ensemble des microbes
azo
aire 98
s
Microbiologie industrielle
Champignons
(Fungi, Mycètes)
(du latin (du grec
Fungus) Mykes)
Moisissures Levures
(Mycéliennes) (Unicellulaires)
99
Microbiologie industrielle
100
Schéma montrant la
structure eucaryote
d’une cellule de
levure (ci-contre)
en comparaison avec
la cellule bactérienne
procaryote (ci haut)
101
Microbiologie industrielle
103
Filaments non cloisonnés
(champignons inférieurs)
Filaments cloisonnés
(champignons supérieurs)
Structure filamenteuse
104
des moisissures
Spores de reproduction Sporangiospores
chez les moisissures (champignons inférieurs)
Conidies (champignons
supérieurs)
105
Microbiologie industrielle
106
Microbiologie industrielle
- Levures: parfois
pseudomycélium
107
Cicatrice de
bourgeonnement
Bourgeon
Bourgeonnement de la levure
108
Métabolismes des sucres
54
• Cryptococcus neoformans (mammites)
109
Microbiologie industrielle
110
Microbiologie industrielle
pH
o Croissance dans une large gamme de
pH (souvent de 2 à 8)
o Mais plutôt acidophiles ou, du moins,
acidotolérants (supportent mieux les
pH acides que les bactéries)
o Application: milieux à pH de 3,5 à 4,5
pour leur isolement
111
Valeurs cardinales du pH de croissance
de quelques micro-organismes
113
Microbiologie industrielle
114
Activités de l’eau minimale permettant la
croissance des microorganismes à une
température proche de leur optimum
115
Microbiologie industrielle
Température
116
Températures cardinales de croissance de
quelques microorganismes fongiques
Aspergillus flavus 10 30 45
Botrytis cinerea -4 22 37
Moisissures
Cladosporium herbarum -6 25 40
Mucor mucedo 6 15-25
Penicillium brevicompactum -2 22 28
Penicillium camemberti 6 15-25
Penicillium roqueforti 2 18-20 35
Geotrichum candidum 4 22-30 38
117
Microbiologie industrielle
Oxygénation; en général:
118
Structure de la
cellule de levure en
fonction de
l’oxygénation
1: paroi
2: membrane nucléaire
3: noyau
4: vacuole
5: réticulum endoplasmique
6: membrane cytoplasmique
7: inclusions cytoplasmiques
8: mitochondries
119
Microbiologie industrielle
Conclusion:
120
Microbiologie industrielle
122
I.2.4.2- Production de produits du
métabolisme primaire
124
I.2.4.4- Production de produits
alimentaires
Espèces Produit Substrat Intérêt
125
I.2.4.5- Exemples d’applications industrielles
pour les moisissures
§ Industrie laitière
- Affinage de fromages (Penicillium camemberti, P. roqueforti, P. candidum, etc.)
126
§ Fermentation du riz et de la sauce de soja, etc. (Asie)
§ Environnement
127
pour les levures
§ Fermentations
Panification
Œnologie, Brasserie (la plus ancienne connue)
55
128
Espèces utilisées
56
129
• Cas de Yerrowia lipolitica :
§ Industrie de bio-fermentation
végétales en aérobiose
§ Industries fromagère
- Affinage de certains
130
Chapitre III- Les microorganismes
utilisés dans l’industrie laitière
III.1- Généralités
III.2- Les bactéries lactiques
III.3- Les propionibactéries
III.4- Les microorganismes fongiques
III.5- Les levains lactiques
131
III.1- Généralités
- Les propionibactéries
- Levures et moisissures
- Fermentation de certains laits fermentés :
132
III.2- Les Bactéries lactiques
Au moins 5 rôles :
63
133
• Bactéries lactiques utilisées dans les fermentations laitières:
• Espèces utilisées
• Lactococcus :
• Leuconostoc :
• Lactobacillus :
• Streptococcus
• Str. thermophilus
69
Levains lactiques: voir III.5
134
III.3- Les propionibactéries
Exp. Fromages du type suisse : Emmental; Gruyère
74
135
Utilisation dans l’industrie laitière :
75
136
• Activité lipolytique : Acides gras libres issus de la lipolyse
l’isoleucine
• Potentiel probiotique :
137
• Adaptation efficace aux stress digestifs.
d’adénocarcinome colorectal
138
III.3
- Les microorganismes fongiques
139
Lait
Coagulation
II.3.1- Schéma général
de la fabrication des Caillé
fromages
Egouttage
~15 min
Lait caillé
Lait acidifié mais non (action de la
coagulé : pH ~6,2
Lait (pasteurisé ou cru) présure)
Découpage
Démoulage Moulage pH acide :
Egouttage ~5,0 à 5,2
64
142
Egouttage
66
143
67
144
Affinage
68
145
Microbiologie industrielle
III.3.2
- Classification des fromages
147
Principales moisissures des fromages
Rôle principal Exemple de
Microorganismes produits
• Aromatisation:
Geotrichum candidum : Fromages de
Composé soufrés
Moisissure levurioforme spécialité :
• Aspect blanc et
duveteux (sous sa Chabichou du
forme mycélienne) Poitou, Pouligny St
• Aspect crème (forme Pierre, Crottin de
levuriforme) ou Chavignol,
78
intermédiaire Rocamadour.
148
Principales Levures des froma
fromages
mages
149
Chabichou du Poitou Pouligny St Pierre
79
Crottin de Chavignol Rocamadour
150
Camembert Roquefort
Brie 80
Penicillium roqueforti
151
Fromage rouge à croute lavée
Croute rose/rouge : Consortium de Microorganismes
Bactéries : Brevibacterium linens, Corynebacterium casei, Staphylococcus
saprophyticus, Micrococcus spp (pigments : couleur),
82
Levures : Debaryomyces hansenii, Candida catenulata, et Candida lusitaniae
152
Microbiologie industrielle
Geothrichum candidum
153
Microbiologie industrielle
o Rôle et propriétés de la FA
Relève le pH après acidification du caillé
par les bactéries lactiques et permet au
Penicillium camemberti de se développer
Sensible au sel
• Salage excessif: inhibition de la FA, pas de
développement du Penicillium
• Salage insuffisant: développement excessif
de la FA (accident « peau de crapaud »)
154
Microbiologie industrielle
155
Microbiologie industrielle
Penicillium roqueforti
Têtes
conidiennes
Conidies
156
Microbiologie industrielle
Lipases 5-6,5
7,5-9
157
Microbiologie industrielle
Penicillium camemberti
Têtes
conidiennes
Conidies
158
Microbiologie industrielle
159
Microbiologie industrielle
160
Microbiologie industrielle
161
Microbiologie industrielle
162
Microbiologie industrielle
Phénomènes en profondeur:
163
Schéma de l’affinage centripète
du Camembert
Fraction non
Lipases encore affinée
Protéases
164
Affinage centripète du
Camembert
Croûte moisie
Partie superficielle
de la pâte, affinée
165
III.4- Les levains lactiques
industriels
III.4.1- Définition et classification
III.4.2- Métabolisme des bactéries lactiques
- Métabolisme des sucres
- Métabolisme des protéines
- Métabolisme des lipides
III.4.3- Production industrielle des levains
- Historique
- Technologie de production
III.4.4- Ensemencement des levains lactiques
166
III.4.1
III.4.1-
.1- DEFINITION ET CLASSIFICATION
70
Leur composition en souches de bactéries lactiques.
167
O Selon la température de croissance:
Levains thermophiles : Croissance optimale : 40 à 45°C.
§ Yaourt: Streptococcus salivarius subsp. thermophilus et Lactobacillus
delbrueckii subsp. bulgaricus.
Levains mésophiles :
§ Croissance optimale : 25 à 32°C.
Utilisés dans plusieurs types de fromage et laits fermentés :
Camembert, Brie, kéfir, fromage frais, etc.
O Selon la composition :
168
LEVAINS MESOPHILES
169
LEVAINS THERMOPHILES
170
III.4.2- MÉTABOLISME DES BACTÉRIES LACTIQUES
3
171
Sucres simples
172
Glucose
ATP
ADP
Glucose-6-P
Fructose-6-P
ATP
ADP
Fructose-1,6 D i-P
NAD+
Pi
NADH, H+
Acide 1,3-D i-P glycérique
ADP
ATP
Acide 3, Phophoglycérique
Acide 2, Phophoglycérique
ATP
ADP
H2O
Acide pyruvique
Lactate racémase
Lactate D(-) Lactate L(+)
174
o Voies fermentaires dans le cas de l’Hétéro-fermentation
־Hexoses, Pentoses
équimolaire
175
Glucose Glucose-6-P Gluconate-6-P
CO2 NADPH, H+
Ribulose-5-P
Xylulose -5-P
Glycéraldéhyde-36P-P Acétyle-P
ATP ADP
EMP
Acétate
NADH, H+
Pi
NAD+
TPP
Acétaldéhyde-TPP Acétaldéhyde
Diacétyle
Acétyl-CoA NAD+
NADH, H+
Ethanol
NAD+
Acétoine
NADH, H+
NAD+
2,3-butylène glycol
8
176
o Voies fermentaires dans le cas des Bifidobactéries
2 Glucoses 2 Glucose-6-P
2ATP 2ADP
2 Fructose-6-P
Pi Phosphoketolase
TPP
Transaldolase
Acétyl-P + Erythrose-4-P
(C2) (C4)
3 ADP 3ATP
Sedoheptulose-7-P +Glyceraldehyde-3-P
(C7) (C3)
3Acétates Transkétolase
TPP
EMP
2 lactates
9
Bilan : 2 glucoses 3 acétates + 2 lactates
177
Lactose
Hydrolyse du lactose
10
178
o Voies fermentaires
Hydrolyse du lactose: Deux types d’enzymes
Lactase (β-glucosidase ou la phospho- β glucosidase)
β -galactosidase
Lactose Glucose + galactose
phospho- β -galactosidase
17
179
LACTOSE
PEP-PTS
LACTOSE-P
PHOSPHO- β -GALACTOSIDASE
Galactose-6P Glucose
Tagatose-6-P Glucose-6-P
Tagatose-1-6-DiP
3-PGAL+ DHAP
VOIE de TAGATOSE
PHOSPHATE
180
Glycolyse
- Métabolisme des Protéines
Protéines du lait :
Protéolyse :
• Coagulation
• Production de peptides et acides aminés
assimilables par les bactéries lactiques
19
181
Bactéries lactiques protéolytiques
Lactococcus
Lactobacillus
Carnobacterium
Pediococcus
20
182
Protéines (macromolécules) Acides aminés
Milieu Protéines de
Extérieur Protéines + oligopeptides transport
Protéinases
Paroi bactérienne
Membrane plasmique
Intérieur
Cytoplasme Oligopeptides > 3 aa
Peptidases Peptides +Acides aminés
• Endo-peptidases
• Exo-peptidases
Di et tri-
Peptidases Acides aminés
Tryptophane : Indole
Histidine : Histamine
Tyrosine : tyramine
Ammoniac (NH3)
22
184
Acide aminé
Désamination
Décarboxylation Transamination oxydative
Dégradation
NH3
CO2
NH3 Phénols
Aldéhydes Indole
Alcools Acides
23
185
- Métabolisme des Lipides
Triglycérides
Glycérol
Liaison ester
Triglycéride
24
186
Métabolisme des triglycérides
Deux étapes
1- Lipolyse: action de Lipase (extracellulaire)
Estérase: coupure de la liaison ester entre le glycérol et un acide
gras
Estérase :Libération d’un acide
gras du triglycéride
25
187
2- Oxydation biologique de(s) l’acide(s) gras libéré(s):
(β-oxydation)
- H2
R-(CH2)n COOH R-CH=CH-COOH
H 2O
CO 2
R-C(O)-CH3
METHYL CETONE
Rancidité : Aromatisation
Recherchée dans certains produits laitiers (Fromage roquefort,smen)
26
188
III.4.3- PRODUCTION INDUSTRIELLE DES LEVAINS
- Historique
Antiquité : préparation de fromages par acidification du lait par la flore
naturelle qu’il contient
27
189
• 1800: Installation de crémeries et d’usines de fabrication du beurre et
acidifiés spontanément.
de proche en proche
28
190
• 1930 : Apparition d’entreprises privées de production et de distribution
29
191
- Technologie de Production
Milieu de culture
Milieux naturels :
• Laits sélectionnés :
• Exempt d'antibiotiques
• Vaches non nourries d'ensilage (pâturage naturel)
• Très bonne qualité microbiologique
30
192
• Lactosérum
• Milieux synthétiques :
31
193
pH
pH contrôlé :
(Glycérophosphates)
fermenteur.
Agitation
32
194
- Concentration et Conditionnement
Centrifugation
Concentration du levain obtenu
Pb : source principale de contamination !
Conditionnement
- Séchage (Lyophilisation)
Avantages
Inconvénients
• Taux de mortalité des cellules élevé
• Certaines souches supportent mal la lyophilisation
34
195
- Congélation
Avantages
• Meilleure activité
Inconvénients :
35
196
III.4.4- Ensemencement des levains lactiques
Ensemencement direct
• Lyophilisés
• Concentrés congelés
36
197
Ensemencement semi direct
Les levains lyophilisés sont généralement utilisés pour préparer une culture
de fermentation.
37
198
1 à 3% (v/v)
Levain
conditionné
Cuve de fermentation
Pied de
cuve
38
199
Levain sui generis (unique en son genre, typique)
39
200
40
201
41
202
42
203
IV- La levure boulangère
Inoculation
Température
Mélasse brute
Corrections MILIEU DE pH
Programme d’alimentation
CULTURE Oxygénation
Mousse
Récupération
PRODUIT DESIRE
III.1- Schéma général du
procédé de la levurerie 205
Microbiologie industrielle
Saccharomyces cerevisiae
levure boulangère
levure de bière
206
Microbiologie industrielle
207
Microbiologie industrielle
208
Microbiologie industrielle
o Aéro-anaérobie facultative
o Reproduction asexuée par bourgeonnement
(nécessite beaucoup d’énergie)
209
Microbiologie industrielle
210
GLUCOSE
C6H12O6
Effet
Glucose ACIDE PYRUVIQUE O2
(Crabtree) 2CH3COCOOH
Effet
Cycle de Pasteur
Krebs
211
Croissance importante Croissance faible
Microbiologie industrielle
o Caractéristiques nutritionnelles
Glucides utilisables
Glucose, fructose et mannose (formes D): en
aérobiose et en anaérobiose
Saccharose: grâce à l’invertase, constitutive, à
activité très rapide
Amidon: amylase à activité très réduite ou
inexistante
Lactose: non utilisable
212
Microbiologie industrielle
o Caractéristiques nutritionnelles(suite)
azote: NH4+, acides aminés, urée (milieu riche en biotine)
213
Microbiologie industrielle
214