Résumé

L’Algérie, par sa position géographique, abrite une biodiversité exceptionnelle occupée

pard’importantes plantes médicinales. Dans le cadre de l’étude prospective de
sourcesintéressantes d’antioxydants d’origine naturelle, nous sommes intéressés parLepidium
sativum. C’est une herbacée annuelle appartenant alla famille des fabacées. Cette plante
estconnue par ses propriétés médicinales, thérapeutiques et nutritionnelles très importantes vu
lesutilisations traditionnelles, et les activités pharmacologiques des composés photochimiques
présents dans les extraits des graines de cette plante. Le présent travail a porté sur l’étude dela
teneur en flavonoïdes et phénols totaux de l’extrait hydro-méthanolique des grainesL.sativum.
Ainsi, l’évaluation de l’activité antioxydante on utilisant les méthodes del’oxydation du
radical le 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl (DPPH),l’ABTS test (2, 2’-azynobis-[3-
ethylbenzothiazoline-6- sulfonic acid])et lepouvoir antioxydant du fer ferrique (FRAP);avec
un acide ascorbique, Trolox et (FeSO 4 )7 H20 comme des références
synthétiquessuccessible.Avec la corrélation de l’activité antioxydante et la corrélation entre
les phénols,les flavonoïdes et l’activité antioxydante (DPPH,ABTS et FRAP). Les quantités
de phénols totaux correspondantes ont été rapportées en équivalent d’unmilligramme de
l’étalon utilisé par gramme d’extrait lyophilisé (1111,23±0,22EAG/g). Les résultats des
flavonoïdesont été exprimés en mg équivalent de la quercétine par gramme d’extrait
lyophilisé (118,64±0,24) mg EQ/g).Ces résultats obtenus montrent la richesse de l’extrait en
flavonoïdes et phénols totaux. L’évaluation du pouvoir antioxydant a montré que l’extrait
hydro-méthanolique doté d’un pouvoir antioxydant très important à 0,8mg/ml : IDPPH:
98,41±0,24%; IABTS : 99,3 ± 0,33% ; et AFRAP: 0,86±0,010%avec des concentrations
d’inhibitions IC50DPPH: 0,38±0,005; IC50ABTS: 0,37±0,005 et IC50FRAP:0,52±0,02.Avec une
bonne corrélation entre le DPPH, ABTS et le FRAP. Par ailleurs, une forte corrélation a été
montré entre les teneurs en phénols totaux et les flavonoïdes et l’activité antioxydant, la
corrélation élevée est de (r=0,989 et r=0,987) successible. Cette étude confirme,
scientifiquement, que les graines deLepidium sativum sont une très bonne source ensubstances
antioxydantes, et donc très bénéfique à la santé humaine.

Mots clés :L.sativum. Phénols totaux, Flavonoïdes, Extrait hydro-méthanolique, Activité

antioxydante, DPPH, ABTS, FRAP.
Abstract

Algeria, by its geographical position, is home to an exceptional biodiversity occupied by

important medicinal plants. As part of the prospective study of interesting sources of naturally
occurring antioxidants, we are interested in lepiduim.sativum is an annual herb belonging to
the fabaceae family. This plant is known for its very important medicinal, therapeutic and
nutritional properties given the traditional uses and pharmacological activities of the
phytochemicals present in the extracts of the seeds of this plant. This work focused on the
study of the content of flavonoids and total phenols in the hydro-methanolic extracts of the
seeds as well as the evaluation of the antioxidant activity using the methods of the oxidation
of the 2,2- radical. diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), ABTS test (2, 2'- azynobis- [3-
ethylbenzothiazoline-6- sulfonic acid]) and antioxidant power of iron (FRAP) with ascorbic
acid, Trolox and (FeSO4)7H20 as the references synthetic successible. With the correlation of
antioxidant activity and the correlation between phenols, flavonoids and antioxidant activity
(DPPH, ABTS and FRAP). The corresponding amounts of total phenols were reported as the
equivalent of one milligram of the standard used per gram of lyophilized extract
(389,815±0,22EAG/g) and the flavonoids results were expressed as mg quercetin equivalent
per gram of lyophilized extract (118,64±0,24) mg EQ/g).. These results obtained show the
richness of the extract in flavonoids and total phenols. The evaluation of the antioxidant
power showed that the hydro-methanolic extract with very high antioxidant power at 1 mg /
ml:IDPPH: 98,41 ± 0,24% IABTS: 99,3 ± 0,33%; and A FRAP0,86±0,010%with IC50DPPH inhibition
concentrations: 0,38±0,005; IC50ABTS 0,37± 0,005 and IC50 FRAP0,52 ± 0,02). With good
correlation of DPPH, ABTS and FRAP. Moreover, a strong correlation has been shown
between the contents of total phenols and flavonoids and antioxidant activity, the high
correlation is ((r =0,989 et r =0,987))successible. This study confirms, scientifically, the
traditional use of this plant.

Keywords: Lipiduimsativum, Total phenols, Flavonoids, hydro-methanolic extract,

Antioxidant activity, DPPH, ABTS, FRAP.
 ‫ملخص‬
‫المستقبلية للمصادر المثيرة لالهتمام لمضادات األكسدة التي تحدث بش‪JJ‬كل ط‪JJ‬بيعي‪ ،‬نحن مهتم‪JJ‬ون بـ ‪Lepiduim.sativum‬‬
‫وهي عشب سنوي ينتمي إلى عائلة فاباسيا‪ .‬يش‪J‬تهر ه‪JJ‬ذا النب‪J‬ات بخصائص‪JJ‬ه الطبي‪JJ‬ة والعالجي‪J‬ة والغذائي‪J‬ة‪ J‬المهم‪JJ‬ة ج‪J‬دًا نظ‪J‬رًا‬
‫لالستخدامات التقليدية واألنشطة الدوائية للمواد الكيميائي‪JJ‬ة النباتي‪JJ‬ة الموج‪JJ‬ودة في مستخلص‪JJ‬ات ب‪JJ‬ذور ه‪JJ‬ذا النب‪JJ‬ات‪ .‬رك‪JJ‬ز ه‪JJ‬ذا‬
‫العمل على دراسة محتوى مركبات الفالفونويد والفينوالت الكلية في المستخلص‪JJ‬ات المائي‪JJ‬ة الميثانولي‪JJ‬ة للب‪JJ‬ذور وك‪JJ‬ذلك تق‪JJ‬ييم‬
‫نشاط مضادات األكسدة باس‪JJ‬تخدام ط‪J‬رق أكس‪J‬دة ‪ -2،2‬راديك‪JJ‬الي‪- .‬بيكري‪J‬ل هي‪J‬درازيل (‪ ،)DPPH‬اختب‪JJ‬ار ‪-'2، 2(ABTS‬‬
‫أزين‪JJJ‬وبيس‪-3[ -‬إيثي‪JJJ‬ل بنزوثي‪JJJ‬ازولين‪ -6 -‬حمض الس‪JJJ‬لفونيك]) وق‪JJJ‬وة الحدي‪JJJ‬د المض‪JJJ‬ادة لألكس‪JJJ‬دة (‪ )FRAP‬م‪JJJ‬ع حمض‬
‫األسكوربيك‪ ،‬ترولوكس و(‪ 7H20)FeSO4‬كمراجع اصطناعية متتالي‪JJ‬ة‪.‬م‪JJ‬ع ارتب‪JJ‬اط نش‪JJ‬اط مض‪JJ‬ادات األكس‪JJ‬دة والعالق‪JJ‬ة بين‬
‫الفين‪JJ‬والت والفالفونوي‪JJ‬د ونش‪JJ‬اط مض‪JJ‬ادات األكس‪JJ‬دة ( ‪DPPH‬و‪ABTS‬و‪ .)FRAP‬الكمي‪JJ‬ات المقابل‪JJ‬ة من إجم‪J‬الي الفين‪JJ‬والت‬
‫كمكافئ لمليغرام واحد من المعيار المستخدم لك‪JJ‬ل ج‪JJ‬رام من المس‪JJ‬تخلص‪)0,22±389,815‬مجم ‪ / EAG‬جم) و‪ .‬تم التعب‪JJ‬ير‬
‫عن نتائج مركبات الفالفونويد على أنها مليجرام كيرسيتين مكافئ لك‪JJ‬ل ج‪JJ‬رام من المس‪JJ‬تخلص (‪0,24±118,64‬مجم ‪/ EQ‬‬
‫جم)‪ .‬تظهر هذه النتائج التي تم الحصول عليها ثراء المستخلص في مركبات الفالفونويد والفينوالت الكلية‪ .‬أظهر تقييم الق‪JJ‬وة‬
‫المض‪JJ‬ادة لألكس‪JJ‬دة أن خالص‪JJ‬ة الميث‪JJ‬انول ذات ق‪JJ‬وة عالي‪JJ‬ة ج ‪J‬دًا من مض‪JJ‬ادات األكس‪JJ‬دة عن‪JJ‬د ‪ 1‬مجم ‪ /‬م‪JJ‬ل‪IDPPH: 98,41 :‬‬
‫‪٪ ±0,24%‬؛‪٪ IABTS: 99,3 ± 0,33%‬و‪ AFRAP 0,86± 0,010٪‬بتركيزات تثبيط ‪IC50DPPH0,38 ±0,005‬؛‬
‫‪IC50ABTS0,37±0,005‬و‪ .)IC50FRAP0,52± 0.02‬مع وجود عالقة جيدة بين ‪DPPH‬و‪ABTS‬و‪FRAP‬والعالق‪JJ‬ة بين‬
‫اجمالي الفينوالت ومركبات الفالفونويد و نشاط مضادات االكسدة حيث االرتباط العالي هو= ‪ r =0,987 et r(0,989‬على‬
‫التوالي‪ .‬تؤكد هذه الدراسة علميا االستخدام التقليدي لهذا النبات‪.‬‬
‫الكلمات المفتاحية ‪ ،:lipiduim.sativum‬اجمالي الفينوالت ‪,‬مركبات الفالفونويد‪ .‬مستخلص هيدرو ميثانول‪ ،‬نشاط مضاد‬
‫لألكس‪JJ‬دة‪ -2،2.‬راديك‪JJ‬الي‪- .‬بيكري‪JJ‬ل هي‪JJ‬درازيل(‪ -'2، 2(،)DPPH‬أزين‪JJ‬وبيس‪-3[ -‬إيثي‪JJ‬ل بنزوثي‪JJ‬ازولين‪-6 -‬‬
‫حمض السلفونيك](‪)ABTS‬وقوة الحديد المضادة لألكسدة (‪.)FRAP‬‬
LISTE DES ABRÉVIATIONS

Abs : Absorbance
ABTS : (2, 2- azinobis- (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate)
DPPH : 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
EAG/g: Equivalent d’acide gallique par gramme
ERO : espèces réactives oxygénées.
FAO : Food and Agriculture Organization of the United Nations
FRO :Formes Réactives de l’Oxygène
FRAP: Ferric ion reducing antioxidant power
g : gramme
GSH : La régulation redox de glutathion
h : heure
HO : Hydroxyle
H2O2 : Hydrogène Peroxyde
IC50 : Concentration inhibitrice à 50 %
LDL : Les lipoprotéines de basse densité
L.sativum : Lepidium sativum
mm : millimètre
mg : Milligramme
min : Minutes
ml : Millilitre
nm : nanometer
NADPH :Nicotinamide adénine di nucléotide phosphate
Na NO2 : Nitrite de sodium
O2 : L'oxygène
OMS : Organisations mondiale de la santé
pH : potentiel Hydrogène pNPP
Rdt : Rendement
ROS : Réactive Oxygéné Sepecies
RO2° : Radical peroxyle
TCE :teneurencomposésextractibles
μg : microgramme
μl : Microlitre
% : Pourcentage
°C : Degrés Celsius
TCE
LISTE DES FIGURES

Figure 1: Balance radicaux libres /antioxydant……………………………………………...0

Figure 2: Origine des différents radicaux libres oxygénés et espèces réactives deL’oxygène
impliqué en biologie…………………………………..…………………………04Figure 3 :
Structure chimique générale des flavonoïdes…………………………………….07
Figure 4 : Exemple d’unité structurelle de base des tanins condensés………………………08
Figure 5 : Aspect morphologique de L. Sativum ……………………………….
Figure 6 :La vue picturale deL. Sativum. a: les graines de cresson; (b) les graines dans l’eau,
et (c) lapoudre de graines de cresson………………………………………………..
Figure 7 : Répartition géographique de Lepidium sativum………………………………
Figure 8: (A) Les graines de cresson alénois, (B) Les graines de cresson alénois en
poudre…………………………………………………………………………………
Figure 9: Protocole d’extraction des composés phénoliques
Figure 10 : Protocole du dosage des phénols totaux
Figure 11 :Protocole du dosage des flavonoïdes
Figure12 : Protocole de dosage de DPPH
Figure 13 : Protocole de dosage d’ABTS
Figure 14 :Protocole de dosage de FRAP
Figure15 : Pourcentage d’inhibition du radical libre DPPH en fonction des Concentrations
del’extrait méthanolique de Lepidium sativum.
Figure16 : Pourcentage d’inhibition du radical libre DPPH en fonction d’acide
ascorbique.
Figure17 : Pourcentage d’inhibition d’ABTS en fonction des concentrations de l’extrait
méthanolique de L. sativum.
Figure18 : Pourcentage d’inhibition d’ABTS en fonctions des concentrations de Trolox
Figure 19: Absorbance de FRAP en fonction des concentrations de l’extrait méthanolique de
L.sativum…………………………………………………………………………………
Figure20 : Absorbance de FRAP en fonction des concentrations de (FeSO 4 ) 7 H 2 0

LISTE DES TABLEAUX

Tableau 01 :Classes des composés phénoliques des plantes…………………………..……08

Tableau0 2 : principaux mode d’action de quelques antioxydants…………………………..10
Tableau 03 : La Classification scientifique de Lepidium sativum ……………………
Tableau 04 : Noms communs de Lepidium sativum………………………………….
Tableau 05 : Information nutritionnelles de Lepiduim sativum……………………….
Tableau 06 : Rendement d’extraction des graines de L. sativum……………………………
Tableau 07 : Les teneurs en phénols totaux et les flavonoïdes de l’extrait méthanolique de
L.sativum………………………………………………………………………………………
Tableau 08 : Concentration d’inhibition d’IC50 de l’extrait méthanolique de lipiduim
sativum etde l’acide ascorbique vis-à-vis le radical DPPH………………………………
Tableau 09 : Concentration d’inhibition d’IC50 de l’extrait méthanolique de L. sativum. et
Trolox vis-à-vis le radical ABTS…………………………………………………………
Tableau 10: Concentration d’inhibition d’IC50 de l’extrait méthanolique de L. sativum et
de(FeSO 4 ) 7 H 2 O vis-à-vis le FRAP………………………………………………
Tableau11 : Concentration d’inhibition IC50 de l’extrait des graines de L. sativum Vis-à-vis
duDPPH, ABTS et de FRAP……………………………………………………………
Tableau12 : Les coefficients de corrélation de DPPH, ABTS et FRAP de l’extrait
méthanolique de L. sativum………………………………………………………………..
Tableau 13: Les coefficients de corrélation entre les phénols totaux, les flavonoïdes et
l’activitéantioxydante (DPPH, ABTS et FRAP) de l’extrait méthanolique de
L. sativum……………………………………………………………………………..

Sommaire

Dédicace
Remerciement
Résumé
Liste des abréviations
Liste des figures
Liste des tableaux
Introduction ………………… ………………………………………………………………01

Partie I : Synthèse bibliographique

Chapitre I : Le stress oxydant

I .1. Définition de stress oxydatif ……………………………………………………………03
I.2. Les radicaux libres……………………………………………………………………….03
I.3. Les espèces réactives de l’oxygène radicalaires………………………………………....04
I.3.1. Radical superoxyde O²…………………………………………………………….04
I.3.2 .Radical perhydroxyle HO²…………………………………………………………04
I.3.3. Radical hydroxyle OH……………………………………………………………..04
I.3.4. Radical peroxyle RO²………………………………………………………………05
I .4. Les espèces réactives de l’oxygène non radicalaires……………………………………05
I.4.1. peroxyde d’hydrogène (H²O²)……………………………………………………...05
I.5. L’origine de stress oxydante …………………………………………………………….06
I.6. Les maladies liées aux stress oxydant………………………………………………........06
I.7. Système de défense antioxydants ………………………………………………………..07
I.8. Les antioxydant endogènes ………………………………………………………………07
I.8.1. Système de défense enzymatique ………………………………………………….07
I.8.1.1. Les superoxyde dismutases (SOD)
……………………………………………..07I.8.1.2. Les glutathion peroxydases (GPxs)
…………………………………………..….07
I.8.1.3. Le système thiorédoxine ………………………………………………………...07
I.8.2. Système antioxydant non enzymatique ……………………………………………..…08
I.8.2.1. Le glutathion et les protéines thiols……………………………………………..08
I.9. Les antioxydants exogènes…………………………………………………………….…08
I.9.1. Médicaments……………………………………………………………………………08
I.9.2. Antioxydants naturels …………………………………………………………….……08
I.9.2.1. La vitamine C (acide ascorbique)……………………………………………....08
I.9.2.2. L’acide ascorbique……………………………………………………………..09
I.9.2.3. La vitamine E (Tocophérol)……………………………………………………09
I.9.2.4. Les flavonoïdes………………………………………………………………...09
I.9.2.5. Les tanins……………………………………………………………………….09
I.9.2.6. Les phénols……………………………………………………………………..10
I.10. Composition phénoliques (polyphénol)……………………………………………...…10
I.10.1. Class majeur des polyphénols…………………………………………………….11
I.11. Activité antioxydant………………………………………………………………..……11
I.12. Mécanismes d’action des antioxydants…………………………………………………12
I.12.1. Les antioxydants de type I………………………………………………………..13
I.12.2. Les antioxydants de type II……………………………………………………….13
I.12.3. Les antioxydants de type III……………………………………………...............13
Chapitre II : Lepidium sativum L
II.1.Généralité………………………………………………………………………………14
II.2.1.  Classification scientifique ………………………………………………………..…14
II.2.2. Noms communs ……………………………………………………………………...15
II.3. Description de la plante (L. sativum)………………………………………… ………..15
II.4. Description des graines du cresson alénois …………………………………………......16
II.5. Composition photochimique …………………………………………………………....16
II.6. Utilisation thérapeutique ………………………………………………………………..17
II.7. Répartition géographique du Lepidium sativum ……………………………………………..18
II.8. Informations nutritionnelles …………………………………………………………….18
II.9. Substances bioactives de Lepidium sativum …………………………………………………
19
II.10. Vertus médicinales de Lepidium sativum …………………………………………………...19
II.11. Les activités biologiques de L. sativum……………………………………………………..19
II.11.1. Activité anti-microbienne……………………………………………………..19
II.11.2. Activité anti oxydante ………………………………………………………..20
II.11.3. Activité anti-inflammatoire…………………………………………………...20
Chapitre III : La phytothérapie
III.1. Historique…………………….………………………………………………………...21 
III.2. Définition de la phytothérapie………………………………………………………….21
III.3. La phytothérapie traditionnelle ………………………………………………………...22

II.4. La phytothérapie clinique………………………………………………………………..22

III.5. Différents types de la Phytothérapie …………………………………………..23

III.5.1. La phytothérapie pharmaceutique …………………………………………23

III.5.2. L’herboristerie ………………………………………………………………23

III.5.3. L’homéopathie ……………………………………………………………...23

III.5.4. La gemmothérapie ………………………………………………………….23

III.5.5. L'aromathérapie ……………………………………………………………24

III.5.6. La phytothérapie chinoise ………………………………………………….24

III.6. Usage de la phytothérapie ……………………………………………………………..24

III.7. Le principe de laphytothérapie ………………………………......................................24
III.8. Intérêt de la phytothérapie………………………………...............................................25
III.9. Les avantage de la phytothérapie ………………………………………………….......25
III.10. Effets secondaires de la phytothérapie………………………………………………..25
III.11. Les différentes formesgaléniques de phytothérapie………………………….......…..26

Partie II : Partie expérimental

Chapitre I: Matériels et méthodes
Objectif……...............................................................................................................27
I. Matériel ………………….........................................................................................27
I.1. Matériel végétale…………………………………………………………………….….27
II. Méthode……………………………………………………………………………….…27
II.1. Méthode extraction …………………………………………………………………….27
II.2. Rendement d’extraction.........................................................................................28
II.3. Détermination de la teneur phénolique totale……………………………………….…29
II.4. Détermination de la teneur totale en flavonoïdes………………………………..........30
II.5. Capacité antioxydant déterminée par le diphényle-1-picrylhydrazyl………………….31
II.6. Capacité antioxydante déterminée par le dosage des cations radicaux ABTS..............32

II.7. Capacité antioxydante déterminée par le pouvoir antioxydant réducteur ferrique

(FRAP)………………………………………………………………………………………35

II.8. Analyses statistiques…………………………………………………………………….37

Chapitre II: Résultats et Discussion
II. Résultats…………………………………............................................................................
II.1. Rendement en extraits……………………………………………………………………
II.2. Teneur de phénols totaux………………………………………………………………..
II.3. Teneur en flavonoïdes…………………………………………………………………
II.4. L’activité antioxydante …………………………………………………………………
II.4.1. Test de piégeage du radical libre DPPH…………………………………………
II.4.2. Test de la réduction ABTS……………………………………………………….
II.4.3. Test de la réduction du fer (FRAP)……………………………………………….
II.4.4. Corrélation de DPPH, ABTS et le FRAP………………………………………..
Conclusion générale…………………………………………………………………….
Références bibliographique………………………………………………………………