Université Mohamed Khider de Biskra

Faculté des sciences exactes et sciences de la nature et de la vie

Département des sciences de la nature et de la vie

MÉMOIRE DE MASTER
Domaine : Sciences de la nature et de la vie

Sciences biologiques
Biochimie Appliquée
Réf. : ………………………………………………

Présenté et soutenu par :

Ahlem LOUCIF

Le : dimanche 25 octobre 2020

Thème
Activité antioxydant de plant médicinal
« Haloxylon scoparium »

Jury :

Mme Leila Bellebcir MAA Université de Président

Biskra

Mme Yamina Bouatrous MCA Université de Biskra Rapporteur

Mme Hadjer Hammia MAA Université de Examinateur

Biskra

Année universitaire : 2019/2020

 Remerciements

Avant tout, j’exprime mes remerciements à Dieu de m’avoir

donné le courage et la force d’aller au bout afin de terminer ce travail

et pour sa bien vaillance.

Ma profonde gratitude va à ma promotrice Mme

Bou Atrousse Y, pour l’honneur qu’elle m’a fait d’avoir acceptée

de

m’encadrer, pour ses précieux conseils, ses orientations, pour toute son

aide et surtout pour sa gentillesse.

Je tiens à remercier les membres du jury pour l’honneur

qu’ils m’ont accordé en jugeant ce travail, notamment :

Melle, qui m’a fait l’honneur par sa présence en qualité de

Présidente de jury. Melle et, pour avoir accepté d’examiner ce travail.

Enfin j’exprime ma gratitude à tous ceux qui ont

contribué de prés ou de loin à l’élaboration de ce travail.

 Dédicace

Je dédie ce travail à :

Mes chers parents pour leur amour inestimable, leur confiance, leur

soutien, leurs sacrifices et toutes les valeurs qu'ils ont su m'inculquer.

Ma mère et mon père

Mes sœurs leila et sana.

Mes frères Adnane, Facial, et Chaouki.

Toutes mes amies : safa el yakine, Fatima el Zahra , Ibtissem, Hafssa

et tous mes collègues

de la promotion de M2B.A. 2020 .

Ahlem.
 Table des matières

Liste des tableaux.......................................................................................................................I

Liste des figures..........................................................................................................................II

Liste des abréviations...............................................................................................................III

Introduction................................................................................................................................1

Partie bibliographique

Chapitre1 : Généralités sur les plantes médicinales

1. Généralités sur les plantes médicinales…................................................................................3

1.1. Définition….........................................................................................................................3

1.2. Origine des plantes médicinales….......................................................................................3

1.2.1 les plantes spontanées.......................................................................................................3

1.2.2 les plantes cultivées............................................................................................................3

1.3. les métabolites secondaires…...............................................................................................4

1.3.1 Les polyphénols…...........................................................................................................4

1.3. 2. Classification des polyphénols…....................................................................................4

1.3.2.1. Acide phénolique simple…...........................................................................................5

1.3.2.2. Les flavonoïdes.............................................................................................................6

1.3.2.3. Les tanins......................................................................................................................6

1.3.2.4.Alcaloïdes......................................................................................................................7

1.4. Activités biologiques des polyphénols….............................................................................8

1.5. Mode d’usage des plantes médicinales…...........................................................................8

1.5.1. Usage interne....................................................................................................................8

1.5.2. Usage externe....................................................................................................................9

1.6. Utilisation des plantes médicinales......................................................................................9

1.6.1. Infusion............................................................................................................................9

1.6.2. Décoction…......................................................................................................................9

1.6.3. Macération…...................................................................................................................9

Chapitre2 : Présentation de la plante Haloxylan Scoparium

2. Présantation des plantes étudiées..........................................................................................10

2.1. Caractérisation de Haloxylon scoparium Pomel................................................................10

2.1.1 .classification....................................................................................................................10

2.1.2. Description botanique.....................................................................................................11

2.1.3 .Utilisations et propriétés pharmaceutiques.....................................................................11

Chapitre 3 : activité biologique

3.1. Activité antioxydant….......................................................................................................12

3.1.1. Stress oxydatif….............................................................................................................12

3.1.2. Radical libre....................................................................................................................12

3.1.3. Les antioxydants............................................................................................................12

3.1.3.1 Les antioxydants d’origine végétale............................................................................12

Partie expérimentale

Chapitre 4 : matériel et méthode

4.1. Matériel..............................................................................................................................14

4.1.1. Matériel végétal…...........................................................................................................14

4.1.1.1. Récolte de plante étudiée.............................................................................................14

4.2. Méthodes…........................................................................................................................14

4.2.1. Extraction des composés phénoliques et des flavonoïdes….......................................14

4.2.1.1.Extraction par macération dans le éthanol aqueux (extraction solide/liquide)…........14

4.2.1.2.Extraction sous reflux dans l’acétone aqueux(extraction solide/ liquide)...................15

4.2.1.3.Extraction avec de l’eau chaude (extraction solide/liquide)…....................................15

4.2.1.4. Evaporation….............................................................................................................16

4.2.2. Rendement d’extraction…..............................................................................................17

4.2.3 Screening phytochimique….............................................................................................19

4.2.3.1. Caractérisation des alcaloïdes…..................................................................................19

4.2.3.2. Caractérisation des polyphénols…..............................................................................19

4.2.3.3. Caractérisation des tanins…........................................................................................19

4.2.3.4. Caractérisation des flavonoïdes…...............................................................................20

4.2.3.5. Caractérisation des stéroïdes…....................................................................................20

4.2.4. Dosage des métabolites secondaires..............................................................................20

4.2.4.1. Dosage des phénols totaux..........................................................................................20

4.2.4.2. Dosage des flavonoïdes totaux...................................................................................20

4.2.4.3Dosage des tannins condensés…...................................................................................21

4.2.5. Evaluation de l’activité antioxydant…...........................................................................21

4.2.5.1. Test anti radicalaire (DPPH).......................................................................... 22

Chapitre 5 :Résultats et Discussions

5.1. Rendements des extraits bruts............................................................................................24

5.2. Teneurs en phénols totaux.................................................................................................24

5.3 . Teneurs en flavonoïdes....................................................................................................25

5.4. Teneurs en tannins............................................................................................................26

5.5. Teneurs en alcaloïdes........................................................................................................26

Conclusion…............................................................................................................................29

Références bibliographiques…................................................................................................31

Annexes
 Liste des Tableaux

Tableau1 : Principales classes des composés phénoliques........................................................5

I
 Liste des Figures

Figure1.Structure générale de l'acide benzoïque (A) et de l'acide cinnamique (B)..................5

Figure2.Structure générale du noyau des flavonoïdes.............................................................6

Figure3. Structure générale du tanin condensé (a) et tanin hydrolysable (b)............................7

Figure 4. haloxylon scoparium….............................................................................................10

Figure 5: Organigramme d’extraction et d’évaporation….....................................................17

Figure 6 : Evaporateur rotatif…..............................................................................................18

Figure 7 : :Le rendement des différents extraits de plante haloxylon scoparium...................24

II
 Liste des abréviations

°C : Degré Celsius

% : Pourcentage

EtOH : Éthanol

Fecl3: Chlorure de fer

h : Heure

H2O: Eau

Hcl: Acide chlorhydrique

MeOH : Méthanol

mg : Milligramme

ml : Millilitre

min : Minutes

N°: Numéro

To: Température

UV : Ultraviolet

III
Introduction
 Introducti

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques, médicinales, des plantes épices et autres

possèdent des propriétés biologiques très intéressantes qui trouvent application dans divers
domaines en savoir en médecine, pharmacie, cosmétologie et agriculture. Cependant,
l’évaluation des propriétés phyto-thérapeutiques comme antioxydante demeure une tache
intéressante et utile, en particulier pour les plantes d’une utilisation rare ou moins fréquentes
ou non connu dans la médecine et les traditions médicinales folkloriques. Ces plantes
représentent une nouvelle source de composés actifs tels les composés phénoliques
(Mohammedi, 2005).

Le développement de nouveaux antioxydants d’une bonne capacité antioxydante

s’avère indispensable pour lutter contre les phénomènes d’oxydations. Dans ce but,
l’investigation des plantes représente un potentiel inestimable pour la découverte de nouvelles
substances à caractère antioxydant, si l’on considère que ces plantes peuvent contenir des
centaines, voire des milliers de métabolites secondaires. Ces derniers représentés actuellement
par 100 000 substances identifiées, pourraient être utilisés dans la prévention de certaines
maladies (Cowan, 1999).

Les études portant sur l’activité antioxydante sont basées sur l’amélioration des
techniques d’extraction des composés phénoliques à partir des produits naturels (Jerez et al.,
2006).

Dans cette étude, notre choix s’est porté sur une plante utilisée depuis longtemps, dans
la pharmacopée traditionnelle, Haloxylan scoparium (Pomel)., connue sous le nom de Remth,
qui est largement répandue dans la steppe Algérienne et le Sahara septentrional utilisée depuis
longtemps en médecine traditionnelle et reconnue pour ses vertus thérapeutiques. Elle est
employée pour traiter les infections des yeux, elle est également indiquée en cas
d’indigestion, piqûres de scorpion, dermatoses, dorsalgie (Baker, 1996; Iwasa et al., 2001).

La présente étude comprend deux parties principales; la première est une synthèse
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants.

La deuxième partie illustre le matériel et les méthodes utilisés dans les différentes
étapes de notre travail expérimental (Analyse des articles) :

Nous avons entamé cette partie par la préparation des extraits de la plante, ensuite une
analyse phytochimiques préliminaires de la plante a été réalisée, dans une troisième

1
 Introducti

étape étant le dosage de la teneur en polyphénols et en flavonoïdes totaux et pour finir

l’évaluation des activités biologiques tels que l’activité antioxydant. Finalement on expose
nos résultats obtenus avec discussion.

2
Partie Bibliographique
 Chapitre1
Généralités sur les plantes médicinales
Chapitre Généralités sur les plantes

1. Généralités sur les plantes médicinales

La plupart des espèces végétales qui poussent dans le monde entier possèdent des
vertus thérapeutiques, car elles contiennent des principes actifs qui agissent directement sur
l’organisme. On les utilise aussi bien en médicine classique qu’en phytothérapie : elles
présentent en effet des avantages dont les médicaments sont souvent dépourvus.

Les progrès de la physiologie, ont permis de comprendre les mécanismes d’action de

ces substances naturelle .Depuis quelques décennies, la compréhension des relations qui
existent entre la structure d’une molécule et son activité biologique permet la conception et la
fabrication de médicaments synthétiques aux performances améliorées ou aux effets
indésirables mieux contrôles (Iserin.p,1996).

1.1. Définition

La définition d’une plante médicinale est très simple , en fait il s’agit d’une plante qui est
utilisée pour prévenir ,soigner ou soulager divers maux. Se sont des plantes qu’ont été
employées pendant des siècles comme remèdes pour les maladies humaines parce qu’elles
contiennent des composants de valeur thérapeutique (Mohammedi, 2006). De façon plus large
, une plante médicinale est un végétale doué d’un effet thérapeutique sur l’organisme sans etre
toxique à dose normale (Gérard et François ,2009) .

Les plantes médicinale sont des drogues végétales dont au moins une partie possède des
propriétés médicamenteuses. Environ 35 000 espèces de plantes sont employées par le monde
à des fins médicinale, ce qui continuent de répondre à un besoin important malgré l’influence
croissante du système sanitaire moderne (Zaghad , 2009 et Beddou,2014).

1.2. Origine des plantes médicinales

Elle porte sur deux origines à la fois , en premier lieu les plantes spontanées
dites « sauvage » ou « de cueillette » ,pui en seconde les cultivées (Bézanger et al.,1986).

1.2.1. Les plantes spontanées

Se dit d’une plante spontanée qui croit naturellement sans qu’on la cultive, ni qu’on
l’ait introduite(Ozenda, 1991).

1.2.2. Plantes cultivées

Une partie importante des inconvénients est évitée grâce à la culture des plantes. Celle-
ci assure une matière en quantité suffisante pour répondre aux besoins .Autre avantage, et pas

3
Chapitre Généralités sur les plantes

des moindres , toute confusion possible par la cueillette est ici exclue,ce qui permet aussi une
récolte plus opportune . il n’estalors plus nécessaire d’attendre la formation de ses fleurs
caractéristiques, indispensables à la collecte sauvage , qui évite toute erreur possible
.Ramasser ses feuilles dés la première année permet une récolte plus abondante et une drogue
plus active (Bilgrarmi et al.,1992).

1.3. les métabolites secondaires

Les métabolites secondaires sont des molécules ayant une répartition limitée dans
l’organisme de la plante. Ils sont nécessaires à sa défense contre les agressions
extérieures (Kahlouche, 2014). Elles sont synthétisées dans une partie de la plante et stockés
dans une autre (Vu thi dao, 2008).Elle sont divisés principalement en trois grandes
familles, les polyphénols, les terpènes et les alcaloïdes (Bendif, 2017).

1.3.1 Les polyphénols

Les composés phénoliques ou polyphénols sont des métabolites secondaires caractérisés

par la présence d’un cycle aromatique à 6 atomes de carbone, portant des
groupements hydroxyles libres ou engagés avec un glucide. Les plus représentés sont les
anthocyanes, les flavonoïdes et les tannins (Nathalie et Jean-Paul, 2006).

1.3. 2. Classification des polyphénols

Les composés phénoliques peuvent être regroupés en de nombreuses classes (Tableau 1)

qui se différencient d’abord par la complexité du squelette de base, ensuite par le degré de
modifications de se squelette, en fin par les liaisons possibles de ces molécules de base avec
d’autre molécules (glucide, lipides) (Manchado et Cheynier, 2006).

4
Chapitre Généralités sur les plantes

Tableau 1 : Principales classes des composés phénoliques (Manchado et Cheynier, 2006)

1.3.2.1. Acide phénolique simple

Les acides phénoliques sont des petites molécules constituées d'un noyau benzénique et
au moins d'un groupe hydroxyle, elles peuvent être estérifiées, éthérifiées et liées à des sucres
sous forme d'hétérosides, ces acides phénoliques sont solubles dans les solvants
polaires (Wichtl et Anton, 2009). Leur biosynthèse dérive de l’acide benzoïque et d’acide
cinnamique (fig. 1) (Bruneton, 1993 ; Wichtl et Anton, 2009 ; Collin et Crouzet, 2011).

Figure1.Structure générale de l'acide benzoïque (A) et de l'acide cinnamique (B)

5
Chapitre Généralités sur les plantes

1.3.2.2. Les flavonoïdes

Les flavonoïdes sont des substances très répondus dans la règne végétale (Boughrara,
2016), elles ont en commun la structure du diphénylpropane (C6-C3-C6), les trois carbones
servant de jonction entre les deux noyaux benzéniques notés A et B forment généralement un
hétérocycle oxygéné C (Kahlouche, 2014) (fig. 2).

Figure2.Structure générale du noyau des flavonoïdes (Di Carlo et al., 1999)

1.3.2.3. Les tanins

Ou acides tanniques sont des composés organiques complexes. Ils sont souvent
contenus dans l’écorce ou dans les feuilles. Usagée pour le tannage des peaux d’animaux en
cuir (Dangles et al., 1992), ils sont solubles dans l’eau, avec des poids moléculaires compris
entre 500 et 3000 Dalton (Bruneton, 1999), d’après leurs structures et leurs propriétés, deux
types de tannins sont distingués :

 Les tanins hydrolysables

sont des esters d’acide gallique, qui se lient aux molécules de glucose (Bruneton, 1993 ;
Hopkins, 2003) et d'acides phénols, qui sont facilement scindés par les enzymes de tannases
en oses et en acide phénol (acide ellagique) (Bruneton, 2009).

6
Chapitre Généralités sur les plantes

 Les tanins condensés

sont des composés phénoliques hétérogènes, se trouvent sous forme d’oligomères ou

polymères qui sont formés par condensation des molécules de flavonoïdes entre elles
(Bruneton, 2009) (fig. 3).

Figure3.Structure générale du tanin condensé (a) et tanin hydrolysable (b).

1.3.2.4.Alcaloïdes

Un alcaloïde est un composé organique d'origine naturelle (le plus souvent

végétale), azoté, plus ou moins basique, de distribution restreinte et doté, à faible dose
de propriétés pharmacologiques marquées. Le regroupement d'un tel ensemble est par ailleurs
confirmé par des réactions communes de précipitation avec les «réactifs généraux des
alcaloïdes» (Bruneton, 2009).

Les alcaloïdes sont généralement classés selon leurs précurseurs biogénétique communs et la
position de l'atome d'azote, en:

 Alcaloïdes vrais

Les alcaloïdes vrais contiennent ordinairement un azote hétérocyclique dans leurs

structures qui dérivent des acides aminés.( Aniszewski, 2007).

7
Chapitre Généralités sur les plantes

 Pseudo- alcaloïdes

Les pseudo-alcaloïdes présentent le plus souvent toutes les caractéristiques des

a1ca1oïdes vrais mais ce ne sont pas des dérivés des acides aminés. Il s'agit dans la
majorité des cas connus d'isoprénoïdes et l'on parle alors d'alcaloïdes terpéniques:
monoterpéniques ,sesquiterpéniques, ou diterpéniques. Dans ce groupe on connait
également des substances issues du métabolisme de l'acétate, c'est le cas de la coniine,
principe toxique de la ciguë. Aniszewski, 2007)

 Proto- alcaloïdes

Les proto-alcaloïdes sont des amines simples dont l'atome d'azote n'est pas inclut dans un
système hétérocyclique mais forme plutôt des groupements aminés latéraux. Ils sont
biosynthétisés à partir des acides aminés (Aniszewski, 2007).

1.4.Activités biologiques des polyphénols

Plusieurs étude épidémiologiques dont la célèbre Zutphen Study aux Pays-Bas

indiquent qu’il existe une association inverse entre la consommation d’aliments riches en
polyphénols et l’incidence de cancer et des maladies cardiovasculaires (Pincemail et al.,2007).

La consommation d’aliments riche en polyphénols réduit le développement de

nombreuses pathologies, telles que le cancer, l’ischémie cardiaque, l’arthérosclérose et
l’hypertension .Ceci peut-être expliqué par le fait que ces composés ont la capacité de
modifier de nombreux facteurs impliqués dans la genèse de ce maladies (Martin et al.,2002).

1.5. Mode d’usage des plantes médicinales

Les façons d’utiliser les plants médicinales sont très divers et dépendent à la fois de
l’usage que l’on veut en faire (interne ou externe) et du mode d’extraction des principes actifs.
Le mode d’extraction dépend à la fois de la partie utilisée et de la nature du principe actif à
extraire (Chamouleau,1979).

1.5.1. Usage interne

Dans l’application courante , l’usage par voie interne est un moyen d’action
thérapeutique consistant uniquement en l’ingestion ,par voie buccale , de tisanes généralement
préparées sous forme d’infusion ou de décoction , de même que tout autre produit d’origine
végétale présente sous forme extractive (Chamouleau,1979).

8
Chapitre Généralités sur les plantes

1.5.2. Usage externe

L’usage par voie externe consiste essentiellement à recourir à divers formes

d’applications locales ainsi qu’aux bains partiels et généraux, en vue d’agir thérapeutique
ment sur des régions distinctes (Chamouleau, 1979).

1.6. Utilisation des plantes médicinales

Pratiquement, trois modes principaux de préparation des plantes médicinales sont

employés : l’infusion, la décoction et la macération.

1.6.1. Infusion

On verse l’eau bouillante sur les plantes dans un récipient dont le couvercle est fermé
bien , afin d’éviter toute perte d’essence volatile et on laisse extraire 5 à 15 minutes , puis on
filtre . La dose normale de plantes est de 1 à 3 cuillères à thé par tasse d’eau. A boire
immédiatement (Schauenbrg, 2006).

1.6.2. Décoction

Cette méthode s’applique essentiellement aux parties souterraines de la plante, comme

les racines, et aux écorces, qui libèrent difficilement leurs principes actifs lors d’une infusion.
Vous déposez donc les plantes dans une casserole ,puis vous les couvrez d’eau froide. Portez
ensuite à ébullition, et laissez le tout mijoter sur le feu pendant une vingtaine de minutes
jusqu’à ce que le liquide ait réduit d’un tiers. Retirez du feu, puis laisser infuser (et refroidir)
pendant une heure, avant de filtrer .Vous pouvez conserver une décoction pendant trois jours
au réfrigérateur (Sophie, 2003).

1.6.3. Macération

La macération consiste à faire tremper les plantes dans l’eau froide pendant plusieurs
heures. Pour ce qui est des quantités, il faut prévoir une cuillère à café de plante pour une
tasse d’eau, une cuillerée à soupe pour un bol, et trois cuillerées à soupe pour un litre .Les
plantes peuvent également macérer dans l’alcool, dans la glycérine, ou dans un autre solvant.
Un solvant est un liquide qui retient les principes actifs de la plante. Il convient de bien
sélectionner le solvant en fonction de la plante que l’on utilise (Morigane ,2009).

9
 Chapitre2
Haloxylon Scoparium.
Chapitre Haloxylon

2.Présentation des plantes étudiées

Figure4. Haloxylon scoparium (www.tela boutanica.com)

2.1.Caractérisation de Haloxylon scoparium Pomel

Nom volguir :‫اﻟﺮﻣﺚ‬

2.1.1 .classification : selon( MOHAMMEDI,2013)

Règne:Plantae

Embranchement: Phanérogames

Sous Embranchement: Angiospermes

Classe: Eudicots

Ordre: Caryophyllales

Famille: Amaranthaceae

Genre:Haloxylon

Espèce : H. scoparia

Nom Latin: Haloxylon scoparium

1
Chapitre Haloxylon

2.1.2.Description botanique

Haloxylon scoparium Pomel appartient à la famille des Amaranthaceae, qui est

composée de 800 espèces répartis sur 75 genres. C’est un arbrisseau à tiges grêles, très
nombreuses, qui noircissent en séchant, avec des épis floraux courts, des fruits à ailes
vivement colorées, souvent rose ou rouge. C’est une plante qui se trouve dans les régions
arides et semi-arides de l’Algérie, et d’autres régions de la méditerranée, et aussi en proche
orient. (Ozenda, 1958 ; Quezel et Santa, 1963).

I.2.1.3 .Utilisations et propriétés pharmaceutiques

Il a été prouvé que l’extrait aqueux de H. scoparium est doué d’une activité
anticancéreuse et d’un effet larvicide. Traditionnellement, il est utilisé pour les infections des
yeux et comme hypoglycémiant. Il est utilisé aussi pour les piqûres de scorpion (Maiza et al.,
1993 ; Bellakhdar , 1997 ; Salah et al., 2002).

1
Chapitre3
Activités biologiques
Chapitre Activité

3.1. Activité antioxydant

3.1.1. Stress oxydatif

Des molécules prooxydantes appelées radicaux libres ou espèces réactives de

l’oxygène (ERO) sont produites quotidiennement dans l’organisme. Ces dernières sont
cependant contrôlées par les antioxydants. Un stress oxydatif survient lorsque l’équilibre est
rompu en faveur des radicaux libres. Toutefois, une production excessive de ces molécules
réactives ou une insuffisance des mécanismes antioxydants peut déséquilibrer la balance
oxydant/antioxydant (Papazian et Roch, 2008) ; (Poncelet et Sifer, 2011).

3.1.2. Radical libre

Un radical libre est une espèce chimique, molécule, morceau de molécule ou

simple atome, capable d'avoir une existence indépendante (libre) en contenant un ou
plusieurs électrons célibataires (électron non apparié sur une orbitale). Cela lui confère
une grande réactivité donc une demi-vie très courte. En effet, ce radical libre aura
toujours tendance à remplir son orbitale en captant un électron pour devenir plus stable : il
va donc se réduire en oxydant un autre composé (Goudable et Favier, 1997).

3.1.3. Les antioxydants

Un antioxydant est toute substance qui, lorsqu’elle est présente à des faibles
concentrations comparées à celles d’un substrat oxydable retarde ou empêche de
manière significative l’oxydation de ce substrat. Le terme substrat oxydable englobe les
protéines, les lipides, les glucides, et l’ADN (Cadehas et Packer, 2002).

3.1.3.1 Les antioxydants d’origine végétale

L'utilisation de la médecine traditionnelle est largement répandue et les plantes

présentent encore une grande source de nouveaux composés biologiques actifs ayant
différentes activités (Cespedes et al., 2013).

Les composés phénoliques présentent une large gamme de propriétés

physiologiques, telles que, anti-inflammatoires, anti-allergènes, antioxydants,
antimicrobiens, effets antithrombotiques, cardioprotecteurs et vasodilatateurs (Balasundram
et al., 2006). De nombreux polyphénols sont des antioxydants naturels disponibles : vitamine
E (abondante dans les germes de blé, les légumes verts.), flavonoïdes et flavones (les

1
Chapitre Activité

fruits, le vin, le thé), caroténoïdes (présents dans les carottes, les fruitsrouges et jaunes, les
légumes verts) et vitamine C (les agrumes, les fruits rouges, les pommes). (Marc et al., 2004).

1
Parties expérimentale
Chapitre4
Matériel et méthodes
Chapitre matériel et

4.1. Matériel

4.1.1. Matériel végétal

Les plantes " Haloxylon scoparium Pomel" ont été récoltées pendant les mois de
novembre et Mars, dans deux régions de Laghouat, en Algérie (El KasrHiran et Sidi
Mekhlouf, respectivement). Le matériel végétal était identifié ( Quezel et al.,1963 ) et lavé
au laboratoire et séché à l'obscurité dans un endroit bien ventilé à température ambiante
pendant 30 jours.

.1.1. Récolte de plante étudiée

4.2. Méthodes

4.2.1. Extraction des composés phénoliques et des flavonoïdes

Les composés phénoliques et flavonoïdes ont été extraits à partir des feuilles de cette
plante par trois méthodes différentes : Extraction par macération dans le méthanol aqueux,
extraction avec de l’eau chaude et extraction par la méthode préconisée en médecine
traditionnelle (décoction).

4.2.1.1. Extraction par macération dans le éthanol aqueux (extraction solide/liquide)

La macération (extraction solide- liquide) est une opération qui consiste à laisser
séjourner la matière végétale (broyat) dans le méthanol aqueux pour extraire les principes
actifs (composés phénoliques et flavonoïdes). Cette méthode d’extraction a été effectuée
selon le protocole décrit par (Hamia et al. (2014), avec quelques modifications.

Le protocole de la macération de cette plante est le suivant (Figure 5) :

- Peser 10 gramme de la matière végétale ;

- Chauffer le éthanol aqueux (70:30) dans un bécher de 500 ml jusqu'à ébullition ;

-Mettre la matière végétale (10 g) sur le éthanol aqueux bouillant (70:30) ;

- Agiter de temps en temps jusqu'à parfaite refroidissement ;

- Laisser macérer pendant 24 h, ensuite filtrer sur un papier filtre Wathman (n°:1) ;

- Récupérer le filtrat dans un flacon

1
Chapitre matériel et

- Répéter la procédure trois fois (fraction retenue par le filtre dans 200 ml éthanol aqueux
bouillant);- Les macéras hydro-alcoolique de 3 jours sont placés dans un seul récipient.

4.2.1.2. Extraction sous reflux dans l’acétone aqueux(extraction solide/liquide.

- Peser 10 gramme de la matière végétale ;

- Prépare l’acétone aqueux (70/30) ;

- Mettre la matière végétale (10 g) dans ballon puis ajouté 100ml de l’acétone aqueux (70/30)
puis mettre dans montage à reflux pendants 30min ;

- Laisser le mélange refroidir à la température ambiante ;

- Filtrer sur un papier filtre Wathman (no1) ;

- Répéter la procédure trois fois ;

- les trois filtrats obtenus sont placés dans un seul récipient .

4.2.1.3. Extraction avec de l’eau chaude (extraction solide/liquide)

Cette méthode d’extraction a été effectuée selon le protocole décrit par Nshimiyimana
et He, (2010) en y apportant quelques modifications :

Le protocole de cette pour chaque plante est le suivant (Figure 5) :

- Peser 10 gramme de la matière végétale ;

- Ajouté la matière végétale broyée au 200 ml eau distillée puis agiter manuellement et
doucement ;

- Chauffer le mélange dans un bain-marie à 77 °C pendant 30 minutes.

- Laisser le mélange refroidir à la température ambiante ;

- Filtrer sur un papier filtre Wathman n°1;

- Répéter la procédure trois fois (fraction retenue par le filtre dans 200 ml eau distillée
chaude);

- Les trois filtrats obtenus sont placés dans un seul récipient.

1
Chapitre matériel et

4.2.1.4. Evaporation

Les trois solutions obtenues ont été évaporés à l’aide d’un évaporateur rotatif, ou
rotavap (Figure 6) qui permet a éliminé le solvant sous vide.

Le protocole d’évaporation est le suivant :

- Placer la solution dans le ballon d’évaporation ;

- Procéder à l’évaporation jusqu'à disparition complète du solvant (Solution 1 (T o= 45 oC et

vitesse de rotation = 3), Solution 2 et 3 ((To= 65 oC et vitesse de rotation = 27);

- Retirer le ballon du rotavap et attendre qu’il soit froid ;

- Peser le ballon afin de calculer le rendement d’extraction ;

- Recueillir l’extrait dans de l’eau chaude( MeOH) (100 ml) (l’intérêt de l’utilisation de
l’eau distillée bouillante c’est pour assurer la récupération des composés restés accolés à la
paroi du ballon d’évaporation) ;

- Ajouter 100 ml d’eau distillée en plusieurs quantités ;

- Laisser le tout à décanter pendant 24 h à température ambiante.

- Sur un papier filtre Wathman N°1, filtrer l’extrait aqueux (résidu + eau) pour éliminer les
boues (graisse et résine)

1
Chapitre matériel et

Figure 5: Organigramme d’extraction et d’évaporation

4.2.2. Rendement d’extraction

Le rendement désigne la masse de l’extrait déterminée après évaporation du solvant,

il est exprimé en pourcentage par rapport à la masse initiale de la plante soumise à
l’extraction.

Les rendements des extractions (méthanolique, hexane, acétate d’éthyle) sont calculés
suivants la formule ci-dessous (Boubekri, 2014)

R%= Me/Mé∗100

1
Chapitre matériel et

R% : rendement en pourcentage.

Me : masse de l’extrait sec en gramme.

Mé : masse de l’échantillon en

gramme.

Figure 6 : Evaporateur rotatif (Rihane et Benlahreche, 2013)

Le principe du rotavapor est basé sur la distillation du macérât sous vide. Le mode
d’emploi de cet appareil est le suivant (http://www.lachimie. fr/materiel/ evaporateur .php)
(Consulter et rédiger par Rihane et Benlahreche, 2013) :

- Placer le macérât à évaporer dans le ballon d’évaporation ;

- Mettre ensuite le ballon d’évaporation sous rotation ;

- Ouvrir le robinet d’eau froide relier au réfrigérant ;

- Fermer ensuite la vanne reliant le montage à la pression extérieure (vanne de fermeture) et

faire le vide à l’intérieur de l’appareillage à l’aide d’une trompe à eau ;

1
 Chapitre matériel et

- Si l’évaporation n’est pas assez rapide, plonger le ballon d’évaporation contenant le macérât
à évaporer dans le bain marie d’eau chaude ;

- Procéder à l’évaporation jusqu’à disparition complète du solvant ;

- Ouvrir la vanne de fermeture pour remettre la pression atmosphérique à l’intérieur du

dispositif ;

- Enfin, couper l’eau du réfrigérant et de la trompe à eau.

4.2.3. Screening phytochimiques

partie aérienne de Haloxylon réduites en poudre a subi différents tests chimiques afin
de mettre en évidence la présence ou l'absence des principales familles de métabolites
secondaires.

4.2.3.1. Caractérisation des alcaloïdes

Dans un tube à essai, 3 ml d'extrait, auquel a été ajoute 1 goutte d'HCl concentré, et
puis 2 gouttes de réactif de Dragendorff.

La présence des alcaloïdes est révélée par l'apparition de précipité orangé avec
le réactif de Dragendorff (Koffi et al., 2009).

4.2.3.2. Caractérisation des polyphénols

La réaction au chlorure ferrique (FeCl3) permet de caractériser les polyphénols. A 2 ml

de l'extrait, une goutte de solution aqueuse de chlorure ferrique à 5% est ajoutée. L’apparition
d’une coloration bleu-noirâtre ou verte plus ou moins foncée, indique la présence de
polyphénols. (Koffi et al., 2009).

4.2.3.3. Caractérisation des tanins

La présence de tanins est démontrée en ajoutant à 1 ml de chaque extrait 1 ml d'eau

et 1 à 2 gouttes de solution de FeCl3 diluée à 1%. L'apparition d'une couleur vert foncé ou
bleuvert indique la présence de tanins. L'apparition d'une couleur vert foncé indique la
présence de tannins catéchiques. L’apparition d’une couleur vert foncé indique la
présence de taninscatéchiques. L’apparition d’une couleur bleu-vert indique la présence
de tanins galliques (Boufellous et al., 2017).

1
Chapitre matériel et

4.2.3.4. Caractérisation des flavonoïdes

La présence de flavonoïdes dans un extrait peut être mise en évidence par un test
simple et rapide appelé « réaction de Shinoda » (Lock et al., 2006). Le test consiste à ajouter à
2ml de l’extrait, quelques gouttes d’HCl concentré (2N) et environ 0,5g de magnésium
métallique.Laisser agir 3 min et regarder le changement de couleur (Malec et al, 2003).

4.2.3.5. Caractérisation des stéroïdes

A 2 ml des différents extraits, 2ml d’anhydre acétique et 0,5ml d’acide sulfurique sont
ajoutées. L’apparition d’une couleur violette, bleu puis verte indique leurs présences
(Bruneton, 1999)

4.2.4. Dosage des métabolites secondaires

4.2.4.1. Dosage des phénols totaux

La teneur en phénols totaux des extraits des plantes a été déterminée par l’utilisation
du réactif de Folin–Ciocalteu. ( Singleton et al.,1999 ; Singleton et Ross,1956) Un volume de
200 μl pour chaque extrait est introduit dans des tubes à essais, le mélange : 1 ml de Folin
Ciocalteu, dilué 10 fois et 0.8 ml de carbonate de sodium à 7.5 %, est additionné. Les tubes
sont agités et conservés durant 30 minutes. L’absorbance est mesurée à 765 nm en utilisant le
spectrophotomètre Jenway 6405 UV/ Vis. Les teneurs en phénols totaux dans les extraits sont
exprimées en milligramme équivalent d’acide gallique par gramme du poids de la matière
sèche (mg EAG/ g MS).( Belhadj Tahar et al.,2015).

4.2.4.2. Dosage des flavonoïdes

La quantification des flavonoïdes a été effectuée par une méthode colorimétrique

adaptée (Dewanto et al.,2002) ; (Zhishen et al.,1999 ). Une quantité de 500 μl de solution
méthanolique de quercétine à différentes concentrations ou de l’extrait méthanolique dilué, est
ajoutée à 500 μl de trichlorure d’aluminium (AlCl3) à 2 %. Après l’incubation de 15 min à la
température ambiante, l'absorbance de la solution de couleur rosâtre est mesurée à 430 nm
contre le blanc. La teneur en flavonoïdes totaux des extraits des plantes est exprimée en
milligrammes équivalents de quercétine par gramme du poids de la matière sèche (EQ)/g).
Chaque test est répété trois fois.( Belhadj Tahar et al.,2015).

2
Chapitre matériel et

4.2.4.3. Dosage des tannins condensés

Les quantités des tannins condensés sont estimées en utilisant la méthode à vanilline en
milieu acide (Sadashivam, et Manickam .,2004). Un volume de 500 μl de l’extrait brut est
ajouté à 2500 μl de la solution Vanilline (1%) l’acide chlorhydrique (8%) et puis mélangé à
l’aide d’un vortex et laissé réagir à 30 °C dans un bain marie pendant 20 min. L'absorbance à
500 nm est mesurée contre un blanc. La concentration des tannins est estimée en
milligrammes équivalents de catéchine par gramme du poids de la matière sèche (EC)/g.(
Belhadj Tahar et al.,2015).

4.2.5. Evaluation de l’activité antioxydant

4.2.5.1.Test DPPH

Le test antioxydant a été réalisé par la méthode au DPPH( Kulisic et al ., 2004)

;Williams et al.,1995) (avec quelques modifications. Ce radical libre (2,2’-Diphényl-1-
picrylhydrazyl, C18H12N506 ; M: 394.33) possède une coloration violet foncé, lorsqu’il est
réduit, la coloration devient jaune pâle. Le DPPH est solubilisé dans du méthanol pour en
avoir une solution de 250 μM. 1 ml de cette solution est ajouté à 1 ml de l’extrait en solution
dans du méthanol à différentes concentrations. Après agitation, les tubes sont placés à
l’obscurité, à la température ambiante pendant 30 minutes. Le test est répété 3 fois pour
chaque concentration. La lecture est effectuée par la mesure de l’absorbance à 517 nm.

Pour chaque dilution, on prépare un blanc. Le contrôle négatif est composé de 1 ml

de la solution DPPH (250 μM) et de 1 ml de méthanol. Le contrôle positif est représenté par
une solution d’un antioxydant standard ; l’acide ascorbique, α-tocophérol et 3-tertiobutyl-4-
hydroxyanisole dont l’absorbance est mesurée dans les mêmes conditions que l’échantillon
test. Les résultats ont été exprimés en activité antioxydante et les valeurs de l’EC50 ont été
déterminées graphiquement.( Belhadj Tahar et al.,2015).

4.2.5.2. Test ABTS

Le test antioxydant a été réalisé selon la méthode ABTS (Miller. and Rice-Evans.
(1996). Le radical cation ABTS•+ est produit en faisant réagir 10 ml d’ABTS [2,2'-azino-bis
(3- éthylebenzothiazoline-6-sulfonique)] (20 mM) avec 100 μl de persulfate de potassium
(K2S2O8) (70 mM) , le mélange est laissé à l’obscurité à température ambiante pendant 24 h.
1 ml de ce dernier, est ajouté à 25 ml de solution tamponnée de phosphate (0.2 M) ; (pH=7,4).

2
Chapitre matériel et

Une prise de 10 μl de chaque extrait est mise en présence de 1ml du radical cation
ABTS•+. L'absorbance est enregistrée à 734 nm pendant 6 min. contre un blanc. Les résultats
obtenus nous ont permis de calculer le pouvoir inhibiteur (PI) en fonction de la concentration
de l’extrait (l’antioxydant), les valeurs de l’IC50 ont été déterminées graphiquement. .(
Belhadj Tahar et al.,2015).

 Calcul des pourcentages d’inhibition

Nous avons ainsi calculé les pourcentages d’inhibition suivant l’équation suivante :

PI %= ((Ac-At)/Ac)*100

Ac : absorbance du contrôle et At : absorbance du test effectué

2
 Chapitre5
Résultats et discussions
Chapitre résultats et

5. Résultats

Pour l’étude quantitative des métabolites secondaire on a basé sur analyse des résultats des
articles .

Article Auteur Année Le thème Le thème de

comparaison
1 Belhadj Tahar et 2015 Etude de l’activité antioxydante des -Rendement
al extraits phénoliques de l’Atriplex -Polyphénols
halimus L et de l’Haloxylon -Flavanoide
scoparium pomel du Sahara -Tannin
septentrional -Antioxydant
2 Bakchiche et al 2013 Antioxidant activities of eight -Polyphénols
Algerian plant extracts and two -Flavanoide
essential oils -Antioxydant
3 Bakchiche et 2014 Activités antioxydantes des -Polyphénols
Gherib polyphenols extraits de plantes -Flavanoide
médicinales de la pharmacopée -Antioxydant
traditionnelle d’Algérie
4 Drioiche et al 2019 ANTIMICROBIAL AND -Polyphénols
ANTIRADICAL PROPERTIES OF -Flavanoide
HAMMADA SCOPARIA(POMEL) -Antioxydant
ILJIN
5 Bouaziz et al 2016 Antibacterial and antioxidant -Polyphénols
activities ofHammada scoparia -Alcaloïde
extracts and its major purified -Antioxydant
alkaloids
6 Miguel et al, 2014 ANTIOXIDANT, ANTI- -Polyphénols
INFLAMMATORY AND -Flavanoide
ANTIACETYLCHOLINESTERASE -Antioxydant
ACTIVITIES
OF ELEVEN EXTRACTS OF
MOROCCAN PLANTS
7 Allaoui et al 2016 COMPARATIVE STUDY OF THE -Polyphénols
ANTIOXIDANT ACTIVITY AND -Flavanoide
PHENOLS AND FLAVONOIDS -Antioxydant
CONTENTS OF THE ETHYL
ACETATE EXTRACTS FROM
TWO SAHARAN
CHENOPODACEA:
Haloxylon scoparium and Traganum
nudatum

2
Chapitre résultats et

5.1. Rendements des extraits bruts

L’extraction des composés des plantes étudiées par ethanol ,eau distilée et par acéton,
nous a permis de déterminer les rendements (figure7).

29
30
Rendement d'extraction

25
17
20
15 12
rende me
10

0
ethanol eau distilée acétone
les différents extraction

Figure7 :Le rendement des différents extraits de plante haloxylon scoparium

En comparant le rendement de notre extraits, nous avons trouvé nos résultats

proches des résultats de l'auteur suivant où il se trouve ( Belhadj Tahar et al.,2015) les
extraits des fractions butanoliques de nos plante sont les plus élevés en termes de rendements,
comme illustré dans le tableau 1 : à commencer par les fruits de Haloxylon scoparium (15,38
%) .Les autres rendements plus ou moins considérables ont été observés, le plus important
étant pour les extraits de la fraction acétate d’éthyle des fleurs d’Haloxylon scoparium pomel
(1,12%). (Belhadj Tahar et al .,2015).

A titre indicatif, certains auteurs ont montré que le méthanol reste le solvant le mieux
adapté pour extraire les antioxydants d’une plante. (Sun. and Ho C-H(2005). ; Sun , Powers.
and Tang.2007).

5.2. Teneurs en phénols totaux

Chez Haloxylon scoparium, les résultats obtenus indiquent que les fractions
butanoliques des fleurs possèdent les teneurs les plus élevées en phénols ,Le teneurs en
polyphénols totaux égales à 4,163± 0,028 mg EAG/g MS(Belhadj Tahar et al.,2015) .

2
Chapitre résultats et

Il a également été trouvé chez( Bakchiche et al.,2013) trouvé les teneurs les plus
élevées en phénols totaux par rapport à des autre composée .

(Bakchiche et Gherib.,2014) été trouvé les teneurs les plus élevées en phénols totaux à
savoir: H. scoparium (108,41±4,59 mg EAG/g ).H. scoparium avec des teneurs 2,72 et 2,10
±0,54 mg EQ/g.

Et dans d'autres études, ils ont trouvé :les teneurs polyphénoliques suivantes ont été
enregistrées pour H. scoparia: 7,46 mg GAE / g DW; 4,80mg GAE / g DW; 2,38 mg GAE / g
DW et 1,9 mg AGE / g DW respectivement avec les extraits d'hydro-méthanol (HSSM)
,l’extrait d'hydro-acétone( HSSA), Hydro-methanol (HSMM) et l’extrait d'hydroacétone
(HSMA). Les extraits obtenus par soxhlet représentent la teneur la plus élevée en
polyphénols. Par rapport à l'extraction par macération, et l'extraction de soxhlet au méthanol
reste la meilleure méthode pour obtenir une teneur maximale en polyphénols.( Drioiche et
al.,2019).

Dans d'autres études, ils ont constaté que Le contenu phénolique total a montré que
l'extrait hydroéthanolique a le taux phénolique le plus élevé concentration (75,32 mg GAE /
g) suivi d'un extrait méthanolique (59,75 mg GAE / g) et du dichlorométhane avec une
concentration de 35,23 mg GAE / g. (Bouaziz et al.,2016).

Et vous obtenez également ce qui suit Haloxylon scoparium qui contient le phenole
12.338±0.942f(Miguel et al.,2014).

obtenez également chez (Allaoui et al.,2016) Les composés phénoliques totaux, tels
que déterminés par la méthode Folin Ciocalteu, sont indiqués comme équivalents d'acide
gallique par référence à la courbe standard (y = 4,0914x + 0,0719, R² = 0,995).

5.3. Teneurs en flavonoïde

Chez Haloxylon scoparium. les teneurs en flavonoïdes sont plus faibles (0,139± 0,003
mg EQ/gMS) ( Belhadj Tahar et al.,2015)

( Bakchiche et al.,2013). les teneurs en flavonoïdes sont plus faibles par rapport à l’autre
composée .

Et trouvé différentes teneurs en flavanones et dihydroflavonols est teneur le moins

élevée (1,52 ± 0,60 mg/g). (Bakchiche et Gherib.,2014)

2
 Chapitre résultats et

Le chercheur a découvert le teneure de flavanoide nous avons enregistré pour H.

scoparia 0,74 mg et 0,37 mg EQ / g DW respectivement, avec des extraits d'hydro-méthanol
et d'hydroacétone (HSSM et HSSA). L'extrait hydro-méthanolique (HSSM) représente la
teneur la plus élevée en flavonoïdes. Le même l'observation a été faite dans le cas de
l'extraction par macération, tout en sachant que la teneur la plus élevée est enregistrée avec
soxhlet extraction (HSSM).(Drioiche et al.,2019).

Chez autre chercheur a découvert le teneure de flavonoïde égale 4.500±0.215. (Miguel

et al.,2014).

obtenez également chez(Allaoui et al.,2016) déterminer la teneur en flavonoïdes a été

montrée comme suivant (y = 30,493x + 0,0914, R²= 0 999.

5.3. Teneurs en tannin

Le tanins à 0,531± 0,003 mg EQ/g MS et 1,641±0,017 mg EC/g MS respectivement.

Ces valeurs sont importantes par rapport à celles trouvées dans les tiges. (Belhadj Tahar et
al.,2015).

5.4. Teneurs en alcaloïdes

Extraction quantitative des alcaloïdes totaux du un extrait hydroéthanolique (31 g) a

donné un résidu brun rougeâtre (total alcaloïdes 5,1 g, 16,45% de l'extrait hydroéthanolique,
0,6% du total des feuilles poids de H. scoparialeaves).( Bouaziz et al.,2016).

5.5. Pouvoir antioxydant des composés phénoliques

. L’extrait de la fraction butanolique des fleurs d’haloxylon scoparium pomel possède

la meilleure capacité antioxydante totale de l’ordre de 0,414 mg AA/gms par rapport à celle
trouvée par les tiges de la même plante; par contre la fraction acétate d’éthyle des tiges révèle
une activité réductrice plus importante par rapport aux fleurs (de l’ordre de 0,224 mg AA /
gMS ) et pour la fraction dichlorométhane de la même plante, on remarque que les résultats
sont presque les mêmes (0,035 mgAA/gMS pour les tiges et 0,034 mgAA/gMS pour les
fleurs)..( Belhadj Tahar et al.,2015)

les valeurs d’IC50 d’ABTS des extraits phénoliques varient globalement de 0,003
mg/ml à 0,687 mg/ml. Les concentrations les plus faibles sont signalées dans l’extrait de la
fraction butanolique des fleurs de la plante Haloxylon scoparium ; l’extrait de la fraction

2
Chapitre résultats et

butanolique des feuilles de la même plante présente aussi une valeur d’IC50 importante de
l’ordre de 0,007 mg/ml. Pour les autres extraits, les valeurs d’IC50 varient entre 0,174 mg/ml
et 0,283 mg/ml, par contre la valeur la plus élevée est enregistrée pour la fraction acétate
d’éthyle des feuilles de l’Haloxylon scoparium pomel. .( Belhadj Tahar et al.,2015).

Le radical libre DPPH et ABTS sont ceux possédant les valeurs EC50 les plus basses.
(Bakchiche et al.,2013).

L’activité varie entre 0.006 et 0.235 mg/ml pour la méthode DPPH et 0.009 et
0.150 mg/ml pour la méthode ABTS . Les valeurs trouvées par le radical ABTS sont
plus importantes que celles trouvées par le radical DPPH .(Bakchiche et Gherib.,2014).

l'activité antioxydante Ils ont montré une activité antiradicalaire très puissante avec
des valeurs IC50 égales respectivement à 0,5 et 0,8 mg / ml pour l'acide ascorbique et le
BHA. Pour H. scoparia. HSSM et l’extraits HSMA sont les plus actifs, avec des valeurs de
CI50 égales respectivement à 1,2 et 1,4 mg / ml.( Drioiche et al.,2019).

Les activités antioxydantes de l'extrait hydroéthanolique et les organiques ont été

évalués par trois méthodes 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl (DPPH), β-carotène – linoléique
système acide et activité réductrice. L'extrait hydroéthanolique a montré l'activité de piégeage
la plus élevée (CE50 = 24 μg / mL). (Bouaziz et al,2016).

Et vous obtenez également ce qui suit Haloxylon scoparium pour le test ABTS :1.018±0.079a
et DPPH : 1.867±0.061a.( Miguel et al,2014).

6.Discussion

Ces résultats indiquent que la distribution des métabolites secondaires peut fluctuer
entre les différents organes de la plante (Bano et al, 2003 ; Falleh et a ,2008 ;Ksouri et al ,
2008) Nous constatons que les plantes du Sahara possèdent des teneurs élevées en tanins par
rapport aux flavonoïdes.

D’après ces résultats, il apparait que l’extrait de la fraction butanolique des fleurs de la
plante Haloxylon scoparium possède la meilleure activité antioxydante par rapport à la
vitamine E. Cette activité de nos extraits peut être attribuée aux composés phénoliques
notamment les flavonoïdes qui sont signalés dans plusieurs recherches comme les meilleurs
antioxydants. Les acides phénoliques et les diterpènes phénoliques peuvent être aussi
impliqués dans cette activité (Prosper-Cabralet al ,2007)

2
Chapitre résultats et

Néanmoins, la variabilité structurale de ces mêmes flavonoïdes affecte de façon non

négligeable cette activité (Marfak.;2003) et à titre indicatif, les composés les plus actifs sont
ceux qui combinent les trois critères suivants :

* La structure ortho-dihydroxy sur le cycle B (groupement catéchol) qui confère la stabilité au

radical flavonoxy et participe à la délocalisation des électrons.

* La double liaison C2-C3 en conjugaison avec la fonction 4-oxo.

* La présence du groupe 3-OH en combinaison avec la double liaison C2-C3. .( Belhadj

Tahar et al.,2015).

2
Conclusion
 Conclusi

Conclusion

La connaissance et l’usage des plantes médicinales constituent un vrai patrimoine

pour l’être humain. Leur importance dans le domaine de la santé publique a connu un
regain d’intérêt durant ces dernières années grâce aux thérapeutiques qu’elles procurent.
Cette diversité, en propriétés biologiques, est liée certainement aux vertus thérapeutiques
attribuées à une gamme extraordinaire de molécules bioactives, synthétisées par la
plante comme des agents thérapeutiques. Ces molécules naturelles phénoliques sont très
recherchées en phytothérapie vue les effets secondaires des médicaments et les
séquelles néfastes des antioxydants de synthèse.

Dans le but de la valorisation de la flore algérienne, nous nous sommes

intéressé à l'évaluation de l’activité antioxydante des trois extraits (éthanolique, acétate
et par l’eaux) de la partie aérienne de notre plante: haloxylon scoparium.

La détermination des rendements en extraits bruts a montré une rentabilité importante

chez notre plante. Les résultats obtenus ont montré que l’extrait butanolique de
haloxylon sont les plus élevés en termes de rendements dans les fruits.Les autres rendements
plus ou moins considérables ont été observés, le plus important étant pour les extraits de la
fraction acétate d’éthyle des fleurs d’Haloxylon scoparium pomel .

La quantification par des méthodes spectrophotométriques nous a permis de déterminer

les teneurs en polyphénols totaux par le réactif du Folin-Ciocalteu et en flavonoïdes
par le trichlorure d’aluminium. Les résultats obtenus nous ont montré que les extraits de
nos plantes ont une importante teneur en phénols totaux et particulièrement dans les fractions
butanoliques et acétate d’éthyle et qu’ils sont dotés d’une capacité antioxydante, et donc de
capture de radicaux libres intéressante, ce qui nous incite à isoler leurs composantes et de
caractériser leurs structures pour aboutir éventuellement à la mise en évidence des principes
actifs responsables de cette activité. Cet aspect fera l’objet d’un travail ultérieur. Par ailleurs,
l’activité antioxydante de nos extraits a été comparée à celle des antioxydants synthétiques et
des composés phénoliques purs. Il en ressort que nos extraits peuvent remplacer certains
antioxydants de synthèse.

Les potentialités antioxydants de l’extrait méthanolique et leurs fractions acétate

d’éthyle et butanolique ont évalué par divers mécanismes ; piégeage du radical libre DPPH,
le pouvoir réducteur et capacité antioxydante totale, où le BHA, le BHT et l’acide

2
 Conclusi

ascorbique ont utilisé comme des standards . L’extrait de la fraction butanolique des fleurs
d’haloxylon scoparium pomel possède la meilleure capacité antioxydante totale par rapport à
celle trouvée par les tiges de la même plante; par contre la fraction acétate d’éthyle des tiges
révèle une activité réductrice plus importante par rapport aux fleurs et pour la fraction
dichlorométhane de la même plante, on remarque que les résultats sont presque les mêmes
pour les tiges et pour les fleurs).Les piégeurs les plus efficaces du radical libre DPPH et
ABTS sont ceux possédant les valeurs EC50 les plus basses. les extraits de nos plantes ont
montré une activité de piéger les radicaux libres DPPH. Les concentrations les plus faibles
sont signalées dans la fraction acétate des feuilles de la plante haloxylon scoparium. De
même, des valeurs de EC50 pour la fraction butanolique des feuilles de la plante d’haloxylon
scoparium.

Il serait intéressant de procéder différentes méthodes d’extraction et de dosage

afin d’avoir un rendement plus élevé. On pourrait également rechercher d’autres effets
bénéfiques, de ces mêmes extraits, à savoir des activités thérapeutique anticancéreuses,
maladie des douleurs articulaires, maladie d'infertilité..etc,.Ainsi déterminer des nouvelles
substances bioactives naturelles et pourront répondre aux différents problèmes de la santé
et d’être un alternatif des médicaments synthétiques.

3
 Références
Bibliographiques
 Références

Références Bibliographiques
A

-AllaouiL M., Cheriti A.k.,Chebouat E.,Dadamoussa B., and Gherraf., N.E,2016 .

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FLAVONOIDS CONTENTS OF THE ETHYL ACETATE EXTRACTS FROM TWO
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Les sites internet :

- http://www.lachimie.fr/materiel/evaporateur.php

.(www.tela boutanica.com)

3
Annexes
 Anne

Annexes

Annexe 1. Réactifs et Appareillage utilisées

 Réactifs

-Acétone

- Acide gallique

- Acide sulfurique (H2SO4)

- Anhydre acétique (C4H6O3)

- Chlorure ferrique à 5% (FeCl3)

- Réactif de Dragendorff

- Eau physiologique

- Ethanol : (C2H6O), 100%, MM=46.07 g/mol, d=0.8

- Acide chloridrique (HCl)

- Magnésium métallique

 Appareillages

- Agitateur magnétique (FALC)

- Bain-marie (MEMMERT)

- Balance (KERN EMB 220-1)

- Etuve (MEMMERT)

- Evaporateur rotatif (Büchi)

- Micropipettes (SCILOGEX)

- Plaque chauffante agitatrice (Stuart)

- Spectrophotomètre UV-visible (SELECT)

 Anne

Annexe 2 : les articles utilisées dans le partie pratique

-AllaouiL M., Cheriti A.k.,Chebouat E.,Dadamoussa B., and Gherraf., N.E,2016 .

COMPARATIVE STUDY OF THE ANTIOXIDANT ACTIVITY AND PHENOLS AND
FLAVONOIDS CONTENTS OF THE ETHYL ACETATE EXTRACTS FROM TWO
SAHARAN CHENOPODACEA:Haloxylon scoparium AND Traganum nudatum; Algerian
journal of arid environment:6(1) 71-79.

-Belhadj Tahar S., Hadj-MahammedM., and Yousfi M.2015. Study of the antioxidant activity
of phenolic extracts of A. halimusL and Haloxylon scoparium Pomel northern Sahara. Journal
of Chemical and Pharmaceutical Research 7(11):258-264.

- Bano M. J., Lorente J., Castillo J., Benavente-Garcia O., Rio J. A., Otuno A., Quirin K. W.,
Gerard D.; J.(2003). Agric. Food Chem. 51, 42-47.

- Bakchiche B., Gherib A.A., Smail A.,Custódia G., M. Graca M,2013. Antioxidant activities
of eight Algerian plant extracts and two essential oils; Industrial Crops and Products 46, 85–
96.

- Bakchiche B et Gherib A.A.,2014.Activités antioxydantes des polyphenols extraits des

plantes médicinales de la pharmacopée traditionnelle d’Algérie ;International Journal of
Innovation and Applied Studies.9(1),167-172.

- Bouaziz A., Mhalla D., Zouari I, Jlaiel L, Tounsi S , Jarraya R., Trigu M.,2016. Antibacterial
and antioxidant activities ofHammada scopariaextracts andits major purified alkaloids.South
African Journal of Botany .105,89–96.

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- Zhishen J., Mengcheng T. and Jianming W.1999. The determination of flavonoid contents in
mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals ; Food Chem. 64, 555-559.
 ‫ﻣﻠﺧص‬

‫‪ scoparium Haloxylon‬ﻓﻲ ﺳﯾﺎق اﻛﺗﺷﺎف ﻣﺿﺎدات اﻷﻛﺳدة اﻟﺟدﯾدة ﻣن اﻟﻣﺻﺎدراﻟطﺑﯾﻌﯾﺔ ‪،‬ﻛﻧﺎ ﻣﮭﺗﻣﯾن ﺑﮭذا اﻟﻌﻣل ﻓﻲ ﺗﻘﯾﯾم ﻣﺳﺗوﯾﺎت اﻟﻣرﻛﺑﺎت اﻟﻔﯾﻧوﻟﯾﺔ‬
‫واﻟﺧﺻﺎﺋص اﻟﻣﺿﺎدة ﻟﻸﻛﺳدة ﻟﻠﻣﺳﺗﺧﻠﺻﺎت ﻣن ﻧﺑﺎت‬

‫ﯾﺗﻌﻠق اﻟﺟزءاﻷولﻣﻧﮭذھﺎ‪--‬ﻟدراﺳﺔ ﺑﺎﺳﺗﺧراج وﺗﻘدﯾراﻟﻛﻣﯾﺔ اﻟﻛﻠﯾﺔ ﻣن ﻣرﻛﺑﺎت اﻟﺑوﻟﯾﻔﯾﻧولواﻟﻔﻼﻓوﻧوﯾد‪ .‬اﻟﺟزء اﻟﺛﺎﻧﻲ ﻛﺎن دراﺳﺔ و اﻟﺣد ﻣن اﻟﺣدﯾدواﻟﻘدرة اﻹﺟﻣﺎ‪--‬ﻟﯾﺔ‪.‬‬
‫‪:‬اﻟﻧﺷﺎط اﻟﻣﺿﺎد ﻟﻸﻛﺳدة ﻣن ﻣﺳﺗﺧﻠﺻﺎﺗﻧﺎ اﻟﻧﺑﺎﺗﯾﺔ ﺑﺎﺳﺗﺧدام اﻟﺗﻘﻧﯾﺎت اﻟﺗﺎﻟﯾﺔ ‪DPPH‬اﻟﻣﺿﺎدة ﻟﻸﻛﺳدة‬

‫ﯾﺣﺗو ي ‪H.scoparuim .‬ﯾﺣﺗوي ﻋﻠﻰ اﻗل ﻛﺳﺢ‪ DPPH.‬ﺣﯾﺛﺄظﮭرﺗﺎﻟﻧﺗﺎﺋﺟﺎﻟﺗﯾﺣﺻﻠﻧﺎﻋﻠﯾﮭﺎﺛراءﻧﺑﺎﺗﻧﺎﻓﯾﺎﻟﺑوﻟﯾﻔﯾﻧوﻟواﻟﻔﻼﻓوﻧوﯾدﻣﻧﻛﻠﻣﻧﺄﺳﯾﺗﺎﺗﺎﻹﯾﺛﯾﻠوﺟزﯾﺋﺎﺗﺎﻟﺑوﺗﺎﻧوﻟﯾك و‬

‫ﺟزء ﺧﻼت اﻹﯾﺛﯾل ﻣن‬

‫‪.‬اﻟﻛﻠﻣﺎت اﻟﻣﻔﺗﺎﺣﯾﺔ‪ :‬ﺳﻛوﺑﺎرﯾوم ھﺎﻟوﻛﺳﯾﻠون‪ ،‬ﻓﻼﻓوﻧﯾدات ‪،‬ﻧﺷﺎط ﻣﺿﺎد ﻟﻸﻛﺳدة‬

‫‪Résumé :‬‬

‫‪Dans le cadre de la découverte de nouveaux antioxydants à partir des sources naturelles, nous avons intéressé dans ce travail à l’évaluation de‬‬

‫‪Mots clés : haloxylon scoparium, flavonoïdes, activité antioxydants.‬‬

‫‪Summary‬‬
‫‪In the context of the discovery of new antioxidants from natural sources, we were interested in this work in the evaluation of the levels of phenol‬‬

‫‪Key words: haloxylon scoparium, flavonoids, antioxidant activity.‬‬