Mémoire 2021
Mémoire 2021
Mémoire 2021
Mémoire de Master
DOMAINE : Sciences et
TechnologiesFILIERE : Génie des
Procédés OPTION : Procédés
Pharmaceutiques
Présenté Par :
Khadidija
Dédicace
Au nom d’Allah, Le Clément, Le Miséricordieux
je dédie ce travail
Inchirah
Remerciements
Avant toute chose, nous remercions Dieu, le tout puissant, pour nous avoir
donnée la force et la patience.
Tout d’abord nous tenons surtout à adresser nos plus vifs remerciements à
notre promoteur M. Harrath mohamed , qui nous a fait l’honneur de
réaliser ce travail sous sa direction, pour sa grande patience, pour sa
disponibilité et ses conseils précieux.
Matériel et méthodes
II.1. PRODUITS CHIMIQUES ET INSTRUMENTS……………………………..…04
II.2. QUANTIFICATION DES COMPOSE PHÉNOLIQUE…………………...…..05
II.2.1. Dosage des phénols totaux……………………………………………….…….05
II.2.2. Dosage des flavonoïdes………………………………………………….……..05
II.2.3. Dosage des Tanins condensés………………………………………………….06
II.2.4. Activité antioxydant des extraits phénoliques……………………………...…..07
II.2.4.1. Test DPPH………………………………………………………………...….07
Résultats et discussion
III.1. QUANTIFICATION DES COMPOSES PHÉNOLIQUES………………… …09
III.1.1. Quantification des composés phénoliques totaux………………………… ….09
III.1.2. Dosage des flavonoïdes……………………………………………………….10
III.1.3. Dosage des tanins condensés………………………………………………….11
III.2.4. Evaluation de l’activité antioxydant………………………………………… .12
CONCLUSION GÉNÉRALE
RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
ANNEXE
Liste d’abréviation et tableaux
A Absorbance
Da Dalton
DF Facteur de dilution
EAG Equivalent Acide Gallique
EC Equivalent Catéchine
EQ Equivalent Quercitine
% Pourcentage
DPPH Radical libre stable 1,1-diphényl-1,2 picryl hydrazyle
N˚ Titre Page
Tableau II.01 Produits et les instruments 4
Tableau III.01 Quantification des phénols totaux dans les feuilles de Pistacia lentiscus
10
Tableau III.02 Quantification dans flavonoïdes les feuilles de Pistacia lentiscus 11
Tableau III.03 Quantification des dans Tanins condensés les feuilles de Pistacia 12
lentiscus.
Tableau III.04 Activité antioxydant des extraits 13
Liste des figures
N˚ Titre Page
Figure I.01 Les branches de P. lentiscus L 1
Figure I.02 Structure de base des flavonoïdes 2
Figure I.03 Structure des tanins condensés 3
Figure II.01 Protocole de dosage des phénols totaux 5
Figure II.02 Protocole de dosage des flavonoïdes 6
Figure II.03 Protocole de dosage des tanins condensés 6
Figure II.04 Réduction du radical libre DPPH•. 7
Figure II.05 Protocole de dosage de test DPPH 8
Figure III.01 Courbe d’étalonnage de l’acide gallique 9
Figure III.02 Courbe d’étalonnage de la quecétine 10
Figure III.03 Courbe d’étalonnage de la catéchine 11
Figure III.4 Courbes d’étalonnage du test du DPPH 13
Introduction générale
Introduction
générale
1
Introduction générale
Il y’a environ 500 000 plantes sur terre, 100 000 d’entre elles, environ, possèdent des propriétés
médicinales qui peuvent contribuées par leur principe actif à agir directement sur l'organisme (Haciniet
Djelloul,2017).
En effet, en 2002, l’OMS estime que, pour se soigner, 80 % de la population africaine recourt
toujours à la médecine traditionnelle pour laquelle la majeure partie des thérapies implique l’exploitation
des principes actifs des plantes médicinales. Ces espèces végétales d’aussi grande importance pour la santé,
méritent d’être étudiées scientifiquement pour leur meilleure utilisation.
Les plantes médicinales contiennent un large spectre des substances phytochimiques qui sont des
sources d’antioxydants naturels tels que les acides phénoliques, les flavonoïdes et les tanins, ces composées
possèdent en plus de leurs activités antioxydants d’autres propriétés biologiques : anti-inflammatoires,
antimicrobiennes et anti-cancéreuse.
Pistacia lentiscus est un arbuste ou arbre dioïque qui appartient à la famille des Anacardiacea
(Hacini et Djelloul,2017), pousse dans la région méditerranéenne (Dhifietal., 2013), les déférentes parties
de cette plante ont une longue tradition en médecine populaire datant de l'Antiquité grecque (Dhifiet al.,
2013). En effet elle a été utilisée dans le traitement de l'eczéma, la paralysie, la diarrhée, l'infection de la
gorge.
Les composés phénoliques sont des métabolites secondaires des végétaux tous ces composés
possèdent des groupements hydroxyles sur les noyaux aromatiques. Parmi ces métabolites on cite : les
acides phénoliques, les flavonoïdes et les tannins qui sont les classes majeures des polyphénols et sont
groupés selon la présence des différents substituant sur les noyaux et selon leur degré de saturation.
Ils sont fréquemment attachés aux molécules de sucre pour augmenter leur solubilité dans l’eau
(Berboucha, 2005).
2
Introduction générale
Le terme acide phénolique peut s’appliquer à tous les composés organiques possédant au
moins une fonction carboxylique et un hydroxyle phénolique. En phytochimie, cette dénomination est
réservée aux acides benzoïques caractérises par un squelette en C6-C1 (acide gallique, p-
hydroxybenzoique, protocatechique, syringique) et les acides cinnamiques de structure C6-C3 (acide p-
coumarique, caféique, ferulique et plus rarement l’acide sinapique (Balasundrum et al., 2006).
Le terme flavonoïde désigne une très large gamme de composés naturels appartenant à la famille
des polyphénols. Ils sont considérés comme des pigments quasi universels des végétaux et un groupe vaste
connu du produit naturel (Marfak, 2003 ; Medic-Šarié et al., 2003). A l’heure actuelle, 4000
flavonoïdes dans le règne végétal ont été identifiés (Medic-Šarié et al., 2003).
Les flavonoïdes des plantes vasculaires sont localisés dans divers organes : racines, tiges, bois, feuilles,
fleurs et fruits (Marfak, 2003; Medic-Šarié et al., 2003).
Ils sont reconnus pour leurs nombreuses activités biologiques, citons par exemple les activités
antivirales, anti-inflammatoires et anticancéreuses (Voir fig 2) (Hanasaki et al., 1993).
Les tannins ces composés résultent généralement de la condensation des formes simples des
flavonoïdes. Selon la nature des constituants impliqués et le type de condensation, il est classique de
distinguer deux grands groupes de tannins différents à la fois par leur réactivité chimique et par leur
composition : les tannins hydrolysables et les tannins condensés (Reed, 1995 ; Khanbabaee et Ree,
2001).
Les tanins condensés, également nommés proanthocyanidines, sont des oligomères ou des polymères
de Flavan-3-ols dérivés de la catéchine ils sont caractérisés par la résistance à l’hydrolyse et seules des
attaques chimiques fortes permettent de les dégrader (Garon et Guéguen, 2014).
3
Introduction générale
L’antioxydant les antioxydants peuvent être défini comme : toute substance qui, lorsqu'elle est
présente à de faibles concentrations par rapport à celle d'un substrat oxydable ; retarde ou inhibe
considérablement l’oxydation de ce substrat. Lorsqu’ils sont ajoutés aux produits alimentaires, agissent
comme agents anti-radicalaires, empêchent les réactions radicalaires d'oxydation, retardent ou inhibent le
processus d'oxydation et augmentent la durée de conservation en retardant le processus de peroxydation.
L’objectif de notre travail consiste donc à la détermination l’effet de stockage sur la composition et
l’activité antioxydant des extraits phénolique des feuilles de Pistacia lentiscus L, la détermination des
teneurs en composés phénolique (phénols totaux, les flavonoïdes et les Tanins condensés) et ceci en
employant un nombre assez grand d’échantillons.
Enfin, on termine par une conclusion générale qui résume l’essentiel des résultats obtenus lors de ce
travail.
4
Matériel et méthodes
Matériel et
méthodes
Matériel et méthodes
6
Matériel et méthodes
Mode opératoire
Le protocole est résumé dans la figure suivante :
7
Matériel et méthodes
Mode opératoire
Le protocole est résumé dans la figure suivante :
1 ml solution diluée
+ 1 ml du réactif AlCl3(2%)
Mode opératoire
Le protocole est le suivant :
200µl d’extrait
8
Matériel et méthodes
Le test DPPH° permet de mesurer le pouvoir anti radicalaire de molécules pures ou d’extraits
végétaux dans un système modèle (solvant organique, température ambiante). Il mesure la capacité d’un
antioxydant (AH, composés phénoliques généralement) à réduire le radical chimique DPPH° (2,2-diphényl-
1-picrylhydrazyl) par transfert d’un hydrogène. Le DPPH°, initialement violet, se transforme en DPPH-H,
jaune pâle (Chevally,2000).
La réduction du DPPH° est facilement mesurée par spectrophotométrie à 517 nm (λ max DPPH°).
La réaction sera plus ou moins rapide selon la nature de l’antioxydant, et la quantité de DPPH-H formée
dépendra de la concentration en antioxydant.
9
Matériel et méthodes
Mode opératoire
Le protocole suivi est résumé dans la figure suivante :
10
Résultats et discussion
Résultats
et
discussion
Résultats et discussion
Les extraits analysés par spectrophotométrie visible pour déterminer la quantité en phénols
totaux sont calculées à l’aide de la courbe d’étalonnage de l’acide gallique (Figure III.1) et elles sont
exprimées en équivalent de ce composé par 100 grammes de matière végétale.
1,4
1,2
R² = 0,998
Absorbance à 7600mn
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4
concentration mg/ml
Les résultats concernant les quantités de phénols totaux pour les 08 échantillons prélevés au
cours des quatre mois sont compilés dans le tableau III.1. Au vu de ces résultats, nous constatons que
nos échantillons pour 2017 ont enregistré des quantités de phénols totaux entre 1,71 et 2,08 g/100g
d'acide gallique de composés phénoliques, alors qu'en 2021 nous avons enregistré des quantités de
phénols totaux entre 1,21 et 1,64 g/100 g d'acide gallique de composés phénoliques, et à partir de là,
nous remarquons une légère diminution.
12
Résultats et discussion
Tableau III.1 : Quantification des Poly phénols totaux dans les feuilles de Pistacia lentiscus
1 1.71±0.102 1.41±0.008
Janvier 2 1.89±0.111 1.45±0.089
3 1.81±0.17 1.34±0.020
Avril 4 1.76±0.12 1.26±0.079
5 2.03±0.16 1.56±0.012
Août 6 1.83±0.14 1.42±0.11
7 2.08±0.078 1.64±0.004
Octobre 8 1.74±0.146 1.21±0.02
Afin de comparer la capacité de nos extraits en contenu phénolique, nous avons choisi trois travaux
tels que ceux de Gardeli et al, Bampouli et al et Dahmoune et al où ils ont trouvé des quantités très
supérieures aux nôtres dans des extraits méthanolique des feuilles de Pistacia lentiscus provenant de la
Grèce et de l’Algérie. Les quantités en phénols totaux sont égales à 588 et 314,88 mg/g pour les échantillons
de la Grèce et 185,69 mg/g pour les échantillons de l’Algérie.
Ces différences peuvent êtres dues à plusieurs facteurs comme le solvant d’extraction, le genre de
l’arbre, la région et la période de la cueillette (Harrat, 2020).
1
R² = 0,990
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 0,005 0,01 0,015 0,02 0,025 0,03 0,035
concentration mg/ml
Figure III.2: Courbe d’étalonnage de la quercétine
13
Résultats et discussion
Tableau III.02 : Quantification des Flavonoïdes dans les feuilles de Pistacia lentiscus.
Flavonoïdes g/100g
1 0.23±0.004 0.21±0.006
Janvier 2 0.30±0.004 0.18±0.011
3 0.14±0.006 0.20±0.006
Avril 4 0.21±0.002 0.21±0.019
5 0.27±0.006 0.31±0.012
Août 6 0.20±0.012 0.24±0.002
7 0.19±0.008 0.24±0.006
Octobre 8 0.34±0.002 0.26±0.001
A partir de ces résultats, nous constatons que la quantité de flavonoïdes pour 2021 varie de 0,31 à
0,18 g/100 g. Par rapport aux valeurs des quantités obtenues pour 2017 0,34 à 0,14 g/100 g, on voit qu'elle
est très proche. Cependant, ces résultats montrent que les phénols étudiés sont une source importante de
flavonoïdes. Ces composés secondaires sont très importants pour leurs propriétés fonctionnelles, et ils ont
également de nombreux avantages pour la santé.
0,8
R² = 0,998
0,6
0,4
0,2
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
Concentration mg/ml
14
Résultats et discussion
Tableau III.03 : Quantification des Tanins dans les feuilles de Pistacia lentiscus
Tanins g/100g
1 0.76±0.032 0.93±0.016
Janvier 2 1.18±0.069 0.84±0.009
3 0.59±0.006 0.49±0.006
Avril 4 0.95±0.007 0.88±0.012
5 0.61±0.013 0.54±0.0079
Août 6 0.81±0.006 0.60±0.0074
7 1.22±0.190 1.18±0.0072
Octobre 8 1.20±0.340 1.12±0.700
Les résultats obtenus sont agrégés dans le tableau III.04 pour les années 2017 et 2021, montrant que
les quantités de tanins diffèrent légèrement selon la saison de récolte lorsque la valeur maximale a été
enregistrée pour l'année 2017 en octobre (1,22 g/100 g), et le minimum a été trouvé La quantité de tanins
dans le mois avril est de (0,59 g/100 g) , et pour nos échantillons 2021 la quantité maximum (1,18 g/100
g) en octobre Et la quantité minimale de tanins dans le mois avril est de (0,49 g/100 g) .
L’évaluation de l’activité antiradicalaire de nos extraits lipidique et phénolique a été déterminée par
le test du radical libre DPPH qui est un test de routine simple et rapide basé sur la diminution de la
couleur du radical en présence de l’extrait.
1,2
1
Absorbance à 517 nm
R² = 0,995
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 0,002 0,004 0,006 0,008
Concentration g/l
15
Résultats et discussion
VCEAC
1 3.38±0.06 3.294±0.0005
Janvier 2 3.96±0.04 3.806±0.006
3 6.07±0.00 5.87±0.007
Avril 4 4.70±0.14 4.60±0.006
5 3.57±0.11 3.53±0.0004
Août 6 4.41±0.10 4.32±0.007
7 3.77±0.05 3.658±0.014
Octobre 8 3.83±0.04 3.78±0.008
A l’aide des courbes d’étalonnage de la vitamine C (Figure III.04), nous avons évalué l’activité
antioxydante des différents extraits. L’activité antioxydante est exprimée par VCEAC, qui est définie
comme la concentration en g/l d’une solution de la vitamine C possédant la même activité antioxydante
qu’une solution 1g/l de la substance testée, à la lumière de ces résultats, on remarque que nos échantillons
ont enregistré des quantités entre 5.87 et 3.29 g/l en équivalent vitamine C pour l’année 2021 et pour l’année
2017 une quantités entre 6.07 et 3.38 g/l.
16
Conclusion générale
Conclusion
générale
Conclusion générale
Conclusion générale
Les plantes médicinales restent une source fiable des molécules actives, ayant montré leurs efficacités dans
le traitement de diverses pathologies, tout en prévenant l’apparition des effets secondaires observés lors de
l’utilisation des médicaments de synthèse. Pistacia lentiscus possède un pouvoir pharmacologique aux
nombreuses indications thérapeutiques.
Le dosage des composés phénoliques obtenu montre que les extraits dévoilent des teneurs en
phénols totaux pour 2017 s’étalant entre 1,71 et 2,08 g/l, alors qu'en 2021 nous avons enregistré des
quantités de phénols totaux entre 1,21 et 1,64 g/l équivalents en acide gallique par100 g. Cependant, la
détermination quantitative des tanins condensés révèle des teneurs pour l’année 2021 varie de 0.31 à 0.18
g/l, Par rapport aux valeurs des quantités obtenues pour 2017, 0.34 à 0.14 g/l équivalents en catéchine par
100 grammes, tandis que la quantité des flavonoïdes totaux allant de pour l'année 2017 entre1,22 à 0.59 g/l
équivalents en quercétine par 100 grammes, et pour nos échantillons de l’année 2021 la quantité maximum
0,34g/l en octobre Et la quantité minimale dans le mois avril est de 0,14 g/l équivalents en quercétine par
100 grammes.
L’activité antioxydant a été calculée à l’aide de la courbe d’absorption du radical DPPH en fonction
de la concentration de la vitamine C. À la lumière de ces résultats, on remarque que nos échantillons ont
enregistré des quantités entre 5.87 et 3.29 g/l en équivalent vitamine C pour l’année 2021 et pour nos
échantillons de l’année 2017 une quantité entre 6.07 et 3.38 g/l.
Enfin, nous pouvons dire que notre travail a apporté des résultats très intéressants et préliminaires
originaux à l'appui du fait que nos extraits des feuilles de Pistacia lentiscus n'est pas affecté par le stockage.
.
18
Références bibliographiques
Références
bibliographiques
Références bibliographiques
Memory title :Storage effect on the composition and antioxidant activity of phenolic extracts
from the leaves of Pistacia lentiscus L
Name :Chachi, Guendouzi First name :Inchirah ,Khadidja Directed by : Harrat Mohamed
Abstract Pistacia lentiscus is known for its medicinal properties since antiquity. are widely used in
traditional medicine in the treatment of certain diseases such as eczema, diarrhea, stomach pain, and
respiratory problems.
The first section of this study deals with the extraction and quantification of total phenols and flavonoids
by means of reagents folin-ciocalto and aluminum chloride, respectively, and quantification of tannins
(tannins) by means of vanillin and hydrochloric acid reagent. As for the second section, it concerns the
study of the antioxidant activity of plant extracts using the method: inhibition of free radicals, 2,2-diphenyl-
1-picrylhydrazyl(DPPH). The results obtained showed the richness of the leaves of the plant in total
phenols, where the value ranged between 1.64 and 1.21 g / l, flavonoids expressed in aluminum chloride
are in the range of 0.31 and 0.18 g / l, and the tannins expressed in vanillin and hydrochloric acid are in the
range of 1.18 and 0.49 g /l. The results of the antioxidant activity test also showed that all the studied plant
extracts have antioxidant properties. Through these results, we can conclude that we can store and use
phenolic extracts at any time
Key words:Pistacia lentiscus, polyphenols, flavonoids,tannins ,antioxidantactivities
Titre du mémoire : Effet de stockage sur la composition et l’activité antioxydant des extraits
phénolique des feuilles de Pistacia lentiscus L
Nom:Chachi, Guendouzi Prénom: Inchirah ,Khadidja Encadreur: : Harrat Mohamed
Résumé : Pistacia lentiscus est connue pour ses propriétés médicinales depuis l'antiquité. Sont largement utilisées en
médecine traditionnelle dans le traitement de certaines maladies telles que l’eczéma, diarrhées, maux d'estomac, et
problèmes respiratoires.
La première section de cette étude porte sur l'extraction et la quantification des phénols totaux et des flavonoïdes au
moyen de réactifs folin-ciocalto et chlorure d'aluminium, respectivement, et la quantification des tanins (tanins) au
moyen de réactif vanilline et acide chlorhydrique. Quant au deuxième volet, il concerne l'étude de l'activité
antioxydante d'extraits végétaux par la méthode : inhibition des radicaux libres, 2,2-diphényl-1-picryl
hydrazyl(DPPH). Les résultats obtenus ont montré la richesse des feuilles de la plante en phénols totaux, où la valeur
variait entre 1.64 et 1,21 g/l, les flavonoïdes exprimés en chlorure d'aluminium sont compris entre 0.31 et 0.18 g/l,
et les tanins exprimés en la vanilline et l'acide chlorhydrique sont compris entre 1.18 et 0.49 g/l. Les résultats du
test d'activité antioxydante ont également montré que tous les extraits de plantes étudiés ont des propriétés
antioxydantes. À la lumière de ces résultats, nous pouvons conclure que nous pouvons stocker des extraits
phénoliques et les utiliser ultérieurement.
Mots clés : pistacia lentiscus, Polyphénols, Flavonoïdes, tanin, Activités antioxydants.