RÉSUMÉS 3 EME MEDECINE BATNA BACTERIOLOGIE PAR :MOHAMMED IYAD BERREHAIL

Etude in vitro des antibiotiques

Concentration d’antibiotiques in vitro ==> Inhibe / tue la bactérie

T :37° Bactérie + atb

Témoin C 2C 4C 8C 2C+ 2

4C gamme de concentrations d’antibiotiques décroissantes de raison géométriques 2

Gélose sans ATB

I. Effets d’antibiotique sur bactérie (bactéridie et bactériostase) :

- Analyse des courbes :
- Témoin : courbe de croissance classique
- Les concentrations faibles : concentrations sub -
inhibitrices
- Concentrations élevées (ex :4mg) : concentrations
bactériostatiques. N < Ntémoin
- Concentrations + élevés (ex 16mg) : concentrations
bactéricides. N des bactéries inférieures à l’autres
tubes.

*phénomène de croissance des bactéries restantes = population génétiquement hétérogène + productrices

d’enzymes de résistance inductible + Instabilité de l’antibiotique.
* CMI (Concentration Minimal Inhibitrice) : Concentration minimal d’ATB pour inhiber la toute la culture
visible. C’est la caractère d’effet bactériostatique
*CMB (Concentration minimale bactéricide) : Concentration minimale d’ATB qui ne laisse que < 0.01% des
bactéries survivants d’inoculum. C’est la caractère d’effet bactéricide.
-Bactéricidie : mort des bactéries
- effet bactéricide temps dépendant : Identiques au cours le temps pour des concentrations variables d’atb.
Exp : β-lactamines
- effet bactéricide dose dépendant : Variables au cours le temps pour des concentrations étudiées.
Exp : Aminosides
- Bactériostase : arrêter de la croissance des bactéries
Différentes courbes exprimant le pourcentage de survivants en fonction de la concentration
CMI :
éloigné à CMB: * phénomène de « Eagle » : après une diminution importante du nombre de
décroissance lente ( bactéries viables, l’effet bactéricide diminue pour les concentrations les plus
courbe B)
élevées (courbe C).
Si le CMI
proche à CMB:
disparition presque
totale des bactéries à
0.01% (courbe B)
 RÉSUMÉS 3 EME MEDECINE BATNA BACTERIOLOGIE PAR :MOHAMMED IYAD BERREHAIL

Exp : streptocoques et pénicilline. Ainsi :

CMB/CMI= 1 ou 2mg/l : =ATB est
bactéricide.
CMB/CMI= 4 à 16mg/l =ATB est
bactériostatique.
CMB/CMI> ou = 32mg/l =Tolérance
bactérienne pour des ATB bactéricides.

- L’effet post-antibiotique ou bactériopause : est la persistance d’un effet antibactérien après élimination de l’antibiotique,
dû à la fixation cumulative de l’antibiotique sur les bactéries.
Les bactéries ne recommencent à se diviser qu’après un délai de 15 à 30h, durant lequel elles perdent leur pouvoir
pathogène et sont plus sensibles aux défenses de l’organisme
Exp: Macrolides et synergistines.

Types des antibiotiques :

Les antibiotiques bactéricides Les antibiotiques bactériostatiques
β-lactamines Phénicolés
aminosides cyclines
quinolones, macrolides
rifampicine, Fucidine
glycopeptides les sulfamides
polypeptides Apparentés aux macrolides
Bactrim

II. Effets d’antibiotique en fonction des concentrations à un temps fixe :

L’effet de différentes concentrations d’antibiotiques est apprécié à un moment donné, 18 à 24 H d’incubation

Notions se définissent les limites de l’activité d’antibiotique :

La concentration inhibitrice 50(CI50) : est la concentration d’antibiotiques inhibant 50% de la population bactérienne.
La concentration minimale d’antibiotique donnant une inhibition (CMA) : est la plus faible concentration
entrainant une diminution d’un log 10 de la population bactérienne comparée à celle obtenue sans antibiotiques.
La CI 90 : c’est la concentration inhibant 90% de la population bactérienne par rapport au témoin sans
antibiotique.
La CI 99 : même définition pour 99%.
CMI +CMB : voir page 1

III. Facteurs influençant l’activité in vitro des antibiotiques :

Milieux de culture:
PH les Béta-lactamines et les tétracyclines sont plus actives en
milieu acide, les aminosides et les MLS sont plus actives en
milieu alcalin
Concentration des minéraux Ca++ et Mg++ : un excès défavorise les tétracyclines, les
polymixines et les aminosides
Présence des acides aminés Thymine/Thymidine: antagonise les sulfamides et le
trimethoprime
 RÉSUMÉS 3 EME MEDECINE BATNA BACTERIOLOGIE PAR :MOHAMMED IYAD BERREHAIL

Incubation : Une atmosphère anaérobie ou riche en CO2 inhibe les aminosides et antagonise les MLS

Inoculum: inoculum léger favorise l’ATB et vise à versa . Les sulfamides et Beta – lactamines +++ marqué
V. Méthodes d’études :

Quantitatifs Qualitative
Par dilution en gélose
ou en bouillon
Mesure de la CMI par Antibiogramme
l’E-test
Détermination de la
CMI en milieu solide

1/Par dilution en gélose ou en bouillon :

T : 37°C

t : après 18-24H
Témoin 0.5 C 1C 2C 4C 8C ∞C

Le milieu est limpide

La croissance bactérienne a été
inhibée CMI

Dilution 10-4 de l’inoculum

La CMB est la plus petite

concentration de l’antibiotique
qui réduit la population
bactérienne 10 000 fois

2/Par mesure de la CMI par l’E-test : Par diffusion en gélose à partir de bandelettes imprégnées d’un gradient de
concentration d’antibiotiques (Etest).

3/Détermination de la CMI en milieu solide : Après solidification et séchage et 18 -

24 h

1 2

3 4

Témoin 0.5 C 1C 2C
CMI:
Souche 1: > 2mg/l
Souche 2: 2mg/l
Souche 3: 1 mg/l
Souche 4: > 2mg/l
 RÉSUMÉS 3 EME MEDECINE BATNA BACTERIOLOGIE PAR :MOHAMMED IYAD BERREHAIL

4/Antibiogramme :

Diamètre de la zone d’inhibition

D et CMI sont proportionnellement inversé

Une courbe de concordance est établie entre le diamètre de la zone d’inhibition et la CMI en testant un grand nombre
de souches de sensibilités variées.
Interprétation des résultats, définition des domaines d’activités :
Souche Résistant R : Forte probabilité d’échec thérapeutique c-à-d la dose nécessaire d’ATB pour guérir supérieur pour
être supportée chez l’homme
Souche sensible S : Forte probabilité de la succès thérapeutique c-à-d la dose habituelle d’ATB pour guérir est réalisable
in vitro et administrable chez l’homme
Souche intermédiaire I : On ne peut pas prévoir la succès thérapeutique ou bien l’efficacité d’ATB sur les bactéries

VI. Associations d’antibiotiques:

Pourquoi on associe les ATBs ?: Obtenir un effet bactéricide maximal - traitement des infections à germes multiples -
éviter de sélectionner des mutants résistants

Interaction Définition Exemples

Indifférence Effet (A + B) = effet A ou effet B.
Addition Effet (A + B) = effet A + effet B L’association de deux ATB
bactériostatiques
Synergie Effet (A + B) > effet A + effet B Bêta-lactamines + aminosides.
Vancomycine + aminosides.
Sulfaméthoxazole + triméthoprime
L’association de deux ATB
bactéricides
Antagonisme Effet (A + B) < effet A ou effet B - Antibiotique bactériostatique +
Bêta-lactamine (tétracycline,
chloramphénicol).
- Compétition pour le même site
d’action : Chloramphénicol +
Macrolides, aminoside + tétracycline
ou chloramphénicol.
- Induction enzymatique : cefoxitine
+ ceftazidime.
L’association d’un ATB bactéricide et
d’un ATB bactériostatique

Etude des associations bactéricides :

a- Dilution en milieu liquide: la méthode en triangle, la technique de l’échiquier (ou Damier ou Carré)
 RÉSUMÉS 3 EME MEDECINE BATNA BACTERIOLOGIE PAR :MOHAMMED IYAD BERREHAIL

A : Témoin inoculum (de haut en bas) :

Inoculum pur . Dilué à 10-1 . Dilué à 10-2 . Dilué à 10-3 . Dilué à 10-4

B : Antibiotiques isolés (de haut en bas) :

. Antibiotique A : 0,1 % de survivants . Antibiotique B : 1 % de survivants .

Antibiotique C : 1 % de survivants . Antibiotique D : 10 % de survivants

C : Antibiotiques associés (de haut en bas) :

. A + B : 0,01 % de survivants, synergie . A + C : 0,01 % de survivants,

synergie . A + D : 0,01 % de survivants, synergie . B + C : 100 % de
survivants, antagonisme . B + D : 0,1 % de survivants, synergie (mais
l'association est insuffisamment bactéricide).

C + D : 0,1 % de survivants, synergie (mais l'association est insuffisamment

bactéricide)

b- Diffusion: qualitatives, simples et rapides

Indifférence: donne un angle droit.
Addition: angle arrondi.
Synergie: renflement.
Antagonisme: une encoche.

VII. Autres méthodes:

-Le pouvoir bactéricide du sérum (Test Heilman): déterminer en milieu liquide CMI et CMB pour connaître que
le sérum a un pouvoir bactéricide suffisant.
Le dosage des antibiotiques
Le dosage des antibiotiques: Permet de surveiller l’efficacité et surtout l’absence de toxicité du traitement
Exp: Aminosides, vancomycine (microbiologiques, radio-immunologiques et immuno-enzymatiques).