BGN NON FERMENTANTS

I- INTRODUCTION

• Vaste groupe de bactéries réparties dans plusieurs familles et plusieurs genres.

• Pas de fermentation de glucose.
• Bactéries ubiquitaires, aérobies stricts, Résistent dans l’environnement (Capsule et spores).
 Bacilles à extrémité effilée ou arrondie à l’exception de l’Acinetobacter : coccobacilles.
 Un seul flagelle polaire (ciliature monotriche) : Pseudomonas aeruginosa.
 Une touffe de flagelles polaires (ciliature lophotriche) : Stenotrophomonas maltophilia.
 Immobile : Acinetobacter baumannii.
 Pili ou fimbriae.
• Culture sur milieu ordinaire et généralement sont pathogènes opportunistes.
• 10 à 15 % des BGN isolés dans les laboratoires de bactériologie médicales.
• Place importante en pathologie humaine infectieuse : Infection nosocomiales (pneumopathie nosocomiale,
septicémies, méningites).

II- PRINCIPALES BGN NON FERMENTAIRES :

Groupe d'homologie (ARNr) Genres Espèces
I Pseudomonas Espèces fluorescentes :
P. aeruginosa, P. fluorescens, P. putida
Espèces non fluorescentes :
P. alcaligenes, P. pseudoalcaligenes,
P. stutzeri, P. mendocina, P luteola, P. oryzibitans, etc.
II Burkholderia B. cepacia, B. gladioli, B. mallei, B. pseudomallei
Ralstonia R. pickettii
III Comamonas C acidovorans, C. testosteroni
IV Brevundimonas B. diminuta, B. vesicularis
V Stenotrophomonas S. maltophilia
III- CLINIQUE
Germe Pathologie
P. aeruginosa - Infection communautaires (souvent localisées) : otite, conjonctivites chez
les porteurs de lentilles.
- Infections nosocomiales : respiratoire, urinaire, sinusite, de site
opératoire, cathéter, prothèse, bactériémies…
Stenotrophomonas maltophilia - Bactériémie, endocardite, dermo-hypodermite, méningite.
Chryseobacterium meningosepticum - Bactériémie, méningite, IU, surinfections de plaies, infections
pulmonaires.
Acinetobacter - IU et postopératoires, pneumonies chez les patients ventilés.
Burkholderia cepacia - Abcès, plaies infectées, lésions hyperkératosiques macérées d'orteils,
arthrites aiguës, infections pulmonaire ou urinaire, péritonite,
bactériémie, endocardite.
Burkholderia mallei - la Morve : surtout chez les équidés.
Burkholderia pseudomallei - la Mélioïdose : infection suppurative à formes diverses
A) PSEUDOMONAS AERUGINOSA ❖ CULTURE :
• Non exigeante : Cultive facilement sur milieux ordinaires en
1) CARACTERES MORPHOLOGIQUES : développant une odeur de seringa.
• P. aeruginosa est une bactérie pathogène opportuniste. • Aérobies strictes.
• P. aeruginosa dans les selles n’est pas pathogène. • Si Prélèvements polymicrobiens :
• BGN, non sporulé. Milieu sélectif : milieu contenant du
• Mobile grâce à un cil polaire (monotriche). cétrimide (ammonium quaternaire) associé
• Bacilles Gram négatif, longs à extrémités effilées. ou non à l’acide nalidixique.
2) CARACTERES CULTURAUX : • Incubation : 48 à 72h,
• Bactéries non exigeantes. • La T optimale de croissance est de 30°C, tolère jusqu’à 41°C,
• Aérobies strictes. • Elaboration des pigments : la pyocyanine, la pyoverdine.
• Incubation : 48 à 72h, T optimale de croissance est de 30°C. • Les aspects des colonies sont particuliers à cette espèce :
• Elaboration des pigments :  Colonies larges : de 2 à 3 mm de
→ Pyocyanine : pigment bleu-vert est pathognomonique du diamètre, à bord irrégulier, rugueuses,
pseudomonas aeruginosa. avec une partie centrale bombée
→ Pyoverdine : jaune-vert. présentant des reflets métalliques.
• Odeur de seringa.  Colonies plus petites : lisses, bombées à bord régulier.
3) CARACTERES BIOCHIMIQUES :  Colonies muqueuses : bombées, visqueuses parfois
• Glucose(-) • Oxydase(+) coulantes (comme pour Klebsiella). Ces colonies sont
• Uréase (+/-) • Indole(+/-) • ADH, LDC et ODC. rencontrées chez les souches produisant
4) FACTEURS DE VIRULENCE : une Slime.
• Lipide A : LPS (lipopolysaccharide) : Responsable de l’activité toxique. • Souches non pigmentées,➔ le recours
• Slime : ➔ Capacité d’adhésion aux matériaux (biofilm) + Rce aux ATB. aux caractères biochimiques est nécessaire
• Substance muqueuse (exopolysaccharide) : ➔Rce à la phagocytose. (galeries API).
• Sécrétion de substances diverses : ❖ IDENTIFICATION :
- Elastase, Protéase, Hémolysines, Phospholipase C. • Aspect macroscopique : Aspect des colonies : couleur, taille,
- Toxines : Cytotoxine, Exotoxine et Entérotoxine.
et forme, Pigments, Odeur (seringa).
• Aspect microscopique : BGN.
5) CARACTERES EPIDEMIOLOGIQUES :
• Caractères biochimiques :
❖ Habitat et Réservoir :
- Non fermentant : mais peut les attaquer (Glucose +++) par voie
◼ Ubiquitaires :
oxydative ➔ acidification du milieu.
 l’environnement hospitalier (robinet, siphon, vase), et peuvent aussi
- Oxydase+ : Dc # avec les entérobactéries.
contaminer des solutions antiseptiques. DM, mains du personnel.
 Dans l’environnement (eaux douces et de mer, sol, végétaux, - D'autres caractères sont utiles pour le diagnostic d'espèce :
poussières). Galerie API 20 NE. (Systèmes d’identification +/- automatisés).
Urée, TDA H2S ONPG LDC ODC Nitrate Réductase Gélatine ADH
 les effluents indole
 Tractus digestif des animaux. - - - - - - - + + +

◼ Homme : B saprophytes qui peuvent coloniser les patients au ◼ Type respiratoire : viande-foie (aérobie).
niveau des endroits humides (oropharynx, anal, TD). ◼ Milieu Kligler hajna : pousse sur la pente seulement.
❖ Transmission : ◼ Milieu hugh et leifson : détermine le métabolisme oxydatif
 Directe : à partir des patients colonisés ou infectés sans ou fermentatif de la bactérie.
l’intermédiaire de personnels ni de matériels de soins. ◼ Mise en évidence des pigments sur milieux spécifiques :
 Indirecte : L’eau des douches, matériel infecté, utilisation des  King A : Favorise la production de pyocyanine
antiseptiques ou désinfectants contaminés. spécifique de P.aeruginosa.
 La transmission croisée par manuportage du personnel à  King B : favorise la production de pyoverdine
partir d'un patient colonisé ou infecté. commune aux Pseudomonas.
❖ Facteurs favorisants : ◼ Milieu mannitol-mobilité : Pyo peut utiliser en aérobiose les
 Terrains immunodéprimés : corticothérapie, IS, ou VIH. nitrates comme accepteur final d’e-.
 Terrain débilité : grands brûlés, mucoviscidosiques, patients ❖ ETUDE ANTIGENIQUE :
de réanimation. • Un schéma de typage en 20 gpes sérologiques : sérotypie des
Ag O++.
6) DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE : • Réalisation par l’agglutination sur lame utilisant une culture
❖ PRELEVEMENT : de 16 à 18 heures : Bio-Rad.
• D’origines multiples : LCR, urines, • Les sérovars O:1, O:3, O:6 et O:11 sont les plus fréquemment
pulmonaires, sang, ORL, oculaires, cutanée… isolés.
• Acheminement rapide au laboratoire, sinon conservation : +4°C. ❖ ETUDE DES MARQUEURS EPIDEMIOLOGIQUES :
❖ EXAMEN DIRECT : • Caractérisation des souches hospitalières pour déterminer
• Macroscopie : Pus, Crachats et les prélèvements superficiels. l’origine clonale ou non d’une souche.
• Microscopie : ✓ Méthodes phénotypiques : 17 Ag de LPSO par des Réactions
 Etat frais : mobilité monotriche, d’agglutination sur plaque.
 Gram : BGN, longs à extrémités effilées. ✓ Méthodes génotypiques : PCR.
7) ETUDE DE LA SENSIBILITE AUX ATB :

❖ ANTIBIOGRAMME (ATB CA-SFM 2021) :

• Méthode par diffusion en milieu gélosé sur Mueller-Hinton,
• Inoculum : 0,5 McFarland.
• Incubation : atmosphère normale, 35±2ºC, 20±4H.

❖ RESISTANCE NATURELLE de P. aeruginosa :

▪ Aminopénicillines, C1G, C2G, céfixime, céfuroxime,
céfotaxime, Ceftriaxone, Erta, Kana,
▪ Tétracyclines, Chloramphénicol, Triméthoprime,
Quinolones (acide nalidixique).
• Mécanismes :
- ß-lactamase AmpC chromosomique inductible : Aminopénicillines.
- Imperméabilité.
- Systèmes d’efflux actifs.
- Hydrolyse enzymatique.

❖ RESISTANCE ACQUISE :
a) BETA-LACTAMINES :
• ENZYMATIQUE :
o Hydrolyse enzymatique par β-lactamases de classe A :
Pénicillinase
 PSE-1 (enzyme spécifique de pyo), encore dénommée CARB-2 /
 PSE-4 (CARB-1) : - hydrolyse les carboxy et ureidopéni et
- inactive sur la ceftazidime et les carbapénèmes.
o Surproduction de la céphalosporinase AmpC (CDER) :
-Action moindre sur la céfépime.(Inactive sur céfépime)
-Confère une résistance à toutes les Bêtalactamines à
l’exception des carbapénèmes. Hydrolyse la Tic et Pip, Tazo,
Ceftazidime et l’aztreonam.
o Les BLSE : Une synergie entre un disque contenant de l’acide
clavulanique et un disque de ceftazidime, d’aztréonam ou
b) AMINOSIDES :
de céfépime.
• Mutation affectant le système actif de transport des
(PER-1, TEM-42 et SHV-2, GES-1,2,8,9).
aminoglycosides au travers la membrane externe.
o Les carbapénémases type métallo-β-lactamases : imipenème
• Enzymes plasmidiques : APH, ANT, AAC.
R.
• NON ENZYMATIQUE :
c) QUINOLONES :
 Imperméabilité (Altération de la porine /perte de la porine
• Mutation (ADN gyrase et l’ADN topoisomérase IV).
D2) Résistance à l’imipenème.
• Surproduction des pompes d’efflux.
 Hyperexpression efflux actif : Mex AB-OpcM.

CDER Pénicillinase Oxacillinase BLSE Carbapénémase Perte Pompe d) COLISTINE :

porine D2 d’efflux
Ticarcilline R R R R R S I/R • Modification de la composition de la mb externe : Mutations,
Ticar/Clav R S/I R S/I/R R S I/R Systèmes de régulation à deux composants.
Pipéracilline R R R R R S S
Pip/Taz R S/I R S/I/R R S S
CZD R S S R R S S
Céfépime I/R S R R R S S
Aztréonam R S S R S S I/R
Imipeneme S S S S R R S
Méropénème S S S S R R S
B) ACINETOBACTER BAUMANNII ❖ Culture :
• Aérobie strict.
• Genre Acinetobacter (39 espèces), • Croissance sur milieu ordinaire,
Famille des Moraxellaceae, • T° d'incubation entre 30°C et 37 °C.
Ordre des Pseudomonadales. • Seule espèce qui se développe à
1) EPIDEMIOLOGIE : 44°C en bouillon TSA (gélose : trypticase soja
agar).
• Ubiquitaire de l’environnement naturel et • Les Colonies sont :
hospitalier,  convexes,
• Responsable d’IN (Respiratoire, Urinaire), les plaies  circulaires,
et sur les cathéters,  lisses,
• Autres : pleurésies, péritonites chez les  translucides ou légèrement opaques,
dialysés, méningites, septicémies…  muqueuses pour les souches capsulées et
• Se manifeste souvent par bouffées épidémiques  non pigmentées.
dues à des souches multi-résistantes. • Les colonies apparaissent en général lactose négatif
• Facteurs de risques : Antibiothérapie, acte sur les milieux lactosés.
chirurgical et séjour dans une USI. ❖ Caractères biochimiques :
• Non fermentant, (par voie oxydative).
• Facteurs de virulence : • Oxydase - •Catalase + •Nitrate réductase -.
 l'adhésion, • Gelatinase -, ADH -, LDC -, ODC -, Indole -.
 la formation de biofilms, des systèmes
d'acquisition du fer, de la protéine de membrane ❖ Sensibilité aux antibiotiques :
externe OmpA, des phospholipases, et les • Procédure : comme pour P. aeruginosa.
composants du LPS (contre système immunitaire).
 La mobilité relève d'un processus de twitching dû ➢ Résistance naturelle : en plus de celles des BGN.
à l'extension et la rétraction de pili de type IV.• Aminopénicillines, Péni A+ Clav, C1G, C2G, céfotaxime
(CTA/CTX), ceftriaxone (CRO), ERT, Aztréonam,
2) POUVOIR PATHOGENE D’ACINETOBACTER : Chloramphénicol, Triméthoprime, FOS.
• Mécanisme : Surtout Céphalosporinase+++ de type
• Faible, mais capable de développer des résistances AmpC naturelle, exprimée à bas niveau.
qui font de lui un agent pathogène opportuniste. ➢ Résistances acquises : plusieurs mécanismes
• Responsable d’infections hospitalières de décrits :
transmission épidémique difficile à éradiquer.  Hyperproduction de la céphalosporinase naturelle.
 Acquisition de β lactamase plasmidique : pénicillinase /
Oxacillinase, carbapénémases (KPC++, IMP, VIM, OXA 23).
3) DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE :
 Mécanismes d’efflux ou d’imperméabilité de la paroi.
❖ Prélèvements : Surtout +++ :
 Modification de l’affinité des protéines liant les
Urines, cathéters, les pénicillines. PLP
aspirations bronchiques, HC.  Modification de l’ADN gyrase.
 Acquisition d’une BLSE : recherche de synergie entre
❖ Examen direct : Ac Clav + CZD.
 Des BGN, 1 à 1,5 μm / 1,5 à 2,5 μm difficilement
décolorables.
 Coccobacille gram- : Souvent coccoïdes, se
présente sous forme de diplobacilles à extrémité
arrondie.
 Non sporulée, immobile, parfois entourée d’une
capsule.
C) STENOTROPHOMONAS MALTOPHILIA D. BURKHOLDERIA CEPACIA
• BGN multirésistant opportuniste, en particulier chez les
patients hospitalisés. • Ces genres comprennent des bactéries
• Ubiquitaire qui colonise le plus souvent les patients par environnementales (eau, sol, plantes) qui survivent
voie exogène. en milieu humide et sont sources d'infections à
• 2ème BGNNF responsable des infections nosocomiales
l'hôpital ou chez des patients atteints de
(Pression de sélection des ATB : Bactériémies,
mucoviscidose.
(neutropénique), Infections pulmonaires (mucoviscidose,
ventilation), IU (sonde).
• Deux espèces sont susceptibles de provoquer des
1-CARACTERES MORPHOLOGIQUES: infections graves :
• Bacilles à Gram négatif, droits à extrémité → chez l'homme sain (la mélioïdose
arrondie. due à Burkholderia peudomallei) ou
• Mobiles grâce à une ciliature lophotriche. → chez l'animal (la morve due à B. mallei).
2-CARACTERES CULTURAUX :
• Aérobie strict. 1-CARACTERES MORPHOLOGIQUES :
• Croissance sur milieu ordinaire (tous les types de B. pseudomallei
milieux), Culture à 37 °C (Optimale 30°C), 24H. • BGN, fréquemment bipolaire, mobile et non
• Les colonies sont rondes, lisses, non sporulante.
hémolytiques. • 1 à 3 μm de long sur 1 μm de large,
• possède de 1 à 4 flagelles polaires.
• Produit un pigment brun sur gélose
• Une capsule peut être mee, à partir de tissus infectés,
ordinaire sur laquelle la culture est
aisée. par étude en ME avec marquage au rouge de ruthénium).
3-CARACTERES BIOCHIMIQUES :
2-EPIDEMIOLOGIE :
 Oxydase négative (–)
• Environnement hostile et hospitalier, pathogènes
 Catalase+, lysine décarboxylase+, opportunistes.
gélatinase+, esculine+, uréase– et indole–. • Septicémies sur cathéters, Infections pulmonaires
 Oxydation des sucres : glucose(+), lactose(+), (mucoviscidose, ventilation, transplantés), IU (sonde).
maltose (+), mannitol (–).
4-IDENTIFICATION : 3-CARACTERES BACTERIOLOGIQUES :
• Bacille mobile légèrement incurvé, • Culture sur milieux ordinaires à 30 °C en 48 H.
• caractères biochimiques : • Milieux sélectifs à partir des expectorations non
Oxydase négative (–)… diluées chez les patients atteints de mucoviscidose
• Galerie API 20NE. est nécessaire,
• spectrométrie de masse MALDI-TOF et PCR. - Milieu BCSA (Burkholderia
cepacia Selective Agar) rendu
5-SENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES : sélectif par la présence de
a-Résistance naturelle : gentamicine et de
• RN des BGNF + TIC, PIP, PIP/TAZ + IMP, polymyxine.
MEROP, Colistine, Trimétoprime, FOS et AZT.
• Résistance intrinsèque aux aminosides : observée 4-IDENTIFICATION :
uniquement après incubation à 30°C. • Galerie API 20 NE. Phoenix®, Vitek 2®.
• Biologie moléculaire,
• SM MALDI-TOF.
5-SENSIBILITE AUX ATB :
a-Résistance naturelle :
b-Résistances acquises :
• RN de l’A. baumannii + TIC + FQ + COL.
• Production de 2 β-lactamases chromosomiques
• R à nombreux ATB par mécanismes enzymatiques,
inductibles : Carbapénèmases L1 (RN aux
imperméabilité membranaire et par efflux actif.
carbapénèmes) et β-lactamase L2 de classe A.
• RN à bas niveau à l’imipénème.
• R acquise par efflux actif.