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Auto-anticorps anti-ADN natif

S. Mehlal, F. Batteux

Les anticorps anti-acide désoxyribonucléique (ADN) natif (anti-ADNn) font partie des critères diagnos-
tiques du lupus érythémateux systémique (LES). Le taux des immunoglobulines G (IgG) anti-ADNn est
corrélé à l’évolutivité de la maladie et à l’atteinte rénale. De nombreuses techniques permettent de
les rechercher et de les quantifier. Il convient d’en utiliser au moins deux, reposant sur des principes
méthodologiques différents afin d’en garantir les meilleures sensibilité et spécificité.
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Mots-clés : Auto-anticorps ; anti-ADN ; Lupus érythémateux systémique ; ACR

Plan LES. Les plus couramment utilisés sont les dosages immu-
noenzymatiques (enzym-linked immunosorbent assay [Elisa]) et
■ Introduction 1 l’immunofluorescence indirecte sur Crithidia luciliae (CLIFT). La
radio-immunologie garde encore tout son intérêt dans certaines
■ Techniques de dosage 1 situations.
Immunofluorescence indirecte 1
Dosages radio-immunométriques 1
Techniques immunoenzymatiques (Elisa) 2
Technologie Luminex® 2 Immunofluorescence indirecte
Chimiluminescence 2
Le CLIFT est très répandu dans les laboratoires d’immunologie
■ Stratégie de recherche des anticorps anti-ADN natif 2 pour la recherche des anti-ADNn.
■ Examens complémentaires 2 Il est réalisé sur des frottis de Crithidia luciliae, un parasite hémo-
■
flagellé, contenant un noyau volumineux et un kinétoplaste riche
Conclusion 2
en ADN bicaténaire circulaire [5] .
L’éventuelle présence d’anticorps anti-ADN est révélée par
l’ajout d’un antisérum anti-IgG humaines marqué à la fluores-
 Introduction céine. La positivité du test tient compte de la fluorescence du
kinétoplaste qu’il y ait ou non une fluorescence du noyau (Fig. 1).
Le CLIFT est un test simple à réaliser, qui présente une grande
Les anticorps anti-acide désoxyribonucléique (ADN) natif (anti-
spécificité grâce à la pureté de l’ADN du kinétoplaste. Il reste néan-
ADNn) sont des auto-anticorps reconnaissant l’ADN dans sa forme
moins semi-quantitatif (nécessité de compléter la recherche par
native, c’est-à-dire bicaténaire ou double brin. La nomenclature
une technique quantitative) et relativement peu sensible [6] .
des actes de biologie médicale recommande de les rechercher sys-
tématiquement en cas de positivité des anticorps antinucléaires
avec un titre supérieur à 1/80, ainsi qu’en cas de forte suspicion
de lupus érythémateux systémique (LES). Dosages radio-immunométriques
Depuis 1982, les anticorps anti-ADNn font partie des critères de
Ils sont représentés par le test de Farr, longtemps considéré
l’American College of Rhumatology (ACR) pour le diagnostic du
comme le gold standard pour la recherche et la quantification
LES [1, 2] . En effet, il a été démontré dans de nombreuses cohortes
des anticorps anti-ADNn. En effet, il détecte les auto-anticorps de
ainsi que sur des modèles murins que le taux des anticorps
forte avidité, principalement d’isotype IgG.
anti-ADN, d’isotype immunoglobulines G (IgG), était corrélé à
Initialement introduit par Wold et al. en 1968 [7] , il consiste
l’évolutivité de la maladie et à la sévérité de l’atteinte rénale [3] .
à incuber le sérum du patient avec un excès d’ADN radio-
Depuis 2003, le groupe du Systemic Lupus International Col-
marqué, puis à précipiter les éventuels complexes immuns
laborating Clinics (SLICC) a établi de nouveaux critères, incluant
« anti-ADNn–ADNn radiomarqué » qui se seraient formés. La
les anti-ADNn, qui ont été revus en 2012 [4] .
radioactivité du précipité est proportionnelle à la quantité
d’anticorps anti-ADNn présente dans l’échantillon. Le résultat
du test s’exprime en pourcentage d’ADNn précipité ou en unités
 Techniques de dosage internationales.
De nombreuses études ont montré une corrélation positive
Il existe aujourd’hui de nombreux tests permettant la recherche entre le taux des IgG anti-ADNn par test de Farr, l’évolutivité de la
et la quantification des anticorps anti-ADNn, le but étant maladie lupique et la survenue de complications viscérales graves,
de rechercher les anticorps d’isotype IgG, spécifiques du notamment rénales [8] .

EMC - Biologie médicale 1

Volume 11 > n◦ 3 > juillet 2016
http://dx.doi.org/10.1016/S2211-9698(16)71553-6

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internes (il existe actuellement 100 types de microbilles qui

diffèrent dans leur couleur de fluorescence) recouvertes d’un sub-
strat (antigènes purifiés, anticorps de capture, sondes nucléiques,
etc.).
La lecture se fait à l’aide d’un fluorimètre équipé de deux
sources lasers permettant de distinguer la fluorescence émise par
la microbille et donc le substrat de celle émise par le conjugué
secondaire soulignant la présence d’auto-anticorps spécifiques du
substrat. La technologie Luminex® offre l’avantage d’être auto-
matisable et de faire la recherche simultanée de plusieurs auto-
anticorps [12, 13] .

Chimiluminescence
Déjà appliquée pour la recherche d’un certain nombre d’auto-
anticorps, tels que les anti-MPO et PR3, les anti-GBM et les anti-
ENA, des trousses de dosage par chimiluminescence ont été plus
récemment élaborées pour les anti-ADNn.
Une étude récente a comparé le kit QUANTA Flash® dsDNA sur
l’automate BIO-FLASH® aux tests plus classiques de dosage des
Figure 1. Détection des anticorps anti-ADNn par immunofluorescence anti-ADN : Elisa standard et haute avidité, technique multiplex et
indirecte sur Crithidia luciliae : fluorescence du kinétoplaste. CLIFT.
Le principe du kit QUANTA Flash® dsDNA repose sur
l’utilisation de billes magnétiques recouvertes d’ADN double brin
d’origine synthétique incubées à 37 ◦ C avec le sérum à une cer-
Aujourd’hui, la place du test de Farr dans la stratégie diagnos- taine dilution. La présence d’anti-ADN est révélée, après lavage
tique du LES est controversée. En effet, il offre l’avantage d’une des billes, à l’aide d’un conjugué anti-IgG humaines couplé à une
grande spécificité et d’une bonne corrélation avec le score cli- substance luminescente (isoluminol). Cette dernière est oxydée
nique permettant ainsi le suivi. Néanmoins, de nombreux tests, à l’aide de solutions d’hydroxyde de sodium et de peroxyde. La
notamment Elisa, ont été développés, offrant une spécificité par- quantité de lumière émise est proportionnelle à la quantité d’anti-
faitement comparable et permettant de pallier les contraintes liées ADN contenue dans le sérum.
à l’utilisation des radioéléments [9] . Les résultats préliminaires d’Infantino et al. ont démontré que
le kit QUANTA Flash® dsDNA présente une moindre sensibilité
comparé aux tests Elisa de haute avidité, mais une spécificité tout
Techniques immunoenzymatiques (Elisa) à fait correcte et comparable au CLIFT. De plus, ce test totalement
automatisé assure un rendu de résultats plus rapide (30 minutes)
Il existe aujourd’hui de nombreuses trousses Elisa commerciales que tous les autres kits testés [14] .
de plus en plus performantes pour la recherche et la quantification
des anticorps anti-ADNn [3] .
Le principe étant le même, la source et la qualité de l’ADN utilisé  Stratégie de recherche
pour la sensibilisation des plaques sont ajustées afin de pallier le
manque de spécificité de cette technique. des anticorps anti-ADN natif
Les substrats antigéniques utilisés peuvent être des oligonu-
cléotides synthétiques, des plasmides circulaires, des antigènes Étant donné le caractère capital de la recherche des anti-ADNn
recombinants ou des extraits cellulaires purifiés. pour le diagnostic et le suivi du LES, il est souhaitable de les recher-
Certains tests, tel que Le FarrzymeTM [10] permettent de détecter cher par au moins deux techniques reposant sur des principes
les anti-ADN de haute avidité, en utilisant de l’ADN issu d’extraits méthodologiques différents dont une qui serait quantitative.
de thymus de veau, offrant ainsi une spécificité comparable à La combinaison le plus fréquemment utilisée est l’Elisa et le
celles du CLIFT et du Farr, avec une sensibilité supérieure. CLIFT.
L’Elisa offre l’avantage d’être une technique quantitative, Le recours au test de Farr peut se faire en cas de discordance
d’une grande sensibilité, simple à réaliser et automatisable. C’est entre les deux résultats, ainsi qu’en cas de discordance clinicobio-
pourquoi, elle demeure la méthode de choix en pratique quoti- logique [15] .
dienne [9, 11] .
Les possibles réactions croisées avec les autres constituants de
l’ADN (ADN simple brin, histones, etc.) ainsi que les fixations
non spécifiques à la polylysine utilisée pour la sensibilisation des
 Examens complémentaires
microplaques doivent être détectées par des puits-contrôles appro- Les résultats d’anti-ADN doivent toujours être interprétés en
priés. fonction du contexte clinique, de la technique utilisée et du reste
Le groupe SLICC a établi en 2012 de nouveaux critères diagnos- du bilan immunologique.
tiques du LES comprenant des critères immunologiques dont un Le biologiste peut être amené à réaliser des examens
taux d’anticorps anti-ADN en Elisa deux fois supérieur au seuil de complémentaires en cas de suspicion de réactions croisées ou de
positivité [4] . fixations non spécifiques, ce qui est souvent le cas en Elisa. Dans
ces cas-là, des anticorps antihistones et antinucléosomes peuvent
être recherchés.
Technologie Luminex®
Il s’agit d’une technologie multi-analytique, dérivée de la cyto-
métrie en flux, permettant d’analyser simultanément un grand  Conclusion
nombre de molécules différentes dans un même échantillon, ini-
tialement développée par une firme américaine, puis adaptée par Il est aujourd’hui clairement établi que les IgG anti-ADNn sont
d’autres fabricants à la recherche et à la quantification des auto- des marqueurs diagnostiques, pronostiques et de suivi du LES.
anticorps. C’est pourquoi le choix de la technique à utiliser est décisif. De
La technologie Luminex® repose sur des microbilles magné- nombreuses études ont établi des corrélations entre les différentes
tiques ou en polystyrène se distinguant par leurs fluorescences techniques existantes, mais la complexité des substrats utilisés,

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la variabilité des principes et performances des tests, ainsi que [5] Slater NG, Cameron JS, Lessof MH. The Crithidia luciliae kinetoplast
la diversité des réponses autoanticorps sont autant d’éléments immunofluorescence test in systemic lupus erythematosus. Clin Exp
empêchant une éventuelle standardisation [16] . Immunol 1976;25:480–6.
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reconnaissant l’ADN dans sa forme native, c’est-à-dire [8] Launay D, Schmidt J, Lepers S, Mirault T, Lambert M, Kyndt X,
bicaténaire ou double brin. et al. Comparison of the Farr radioimmunoassay, 3 commercial enzyme
• Les anticorps anti-ADNn font partie des critères de l’ACR immunoassays and Crithidia luciliae immunofluorescence test for
diagnosis and activity assessment of systemic lupus erythematosus.
et du groupe du SLICC pour le diagnostic du LES. Clin Chim Acta 2010;411:959–64.
• Le taux des IgG anti-ADN est corrélé à l’évolutivité de la [9] Antico A, Platzgummer S, Bassetti D, Bizzaro N, Tozzoli R, Villalta D,
maladie lupique et à la sévérité de l’atteinte rénale. et al. Diagnosing systemic lupus erythematosus: new generation immu-
• Les techniques le plus couramment utilisées pour la noassays for measurement of anti-dsDNA antibodies are an effective
recherche des anticorps anti-ADN sont le CLIFT et l’Elisa. alternative to the Farr technique and the Crithidia luciliae immunofluo-
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Déclaration d’intérêts : les auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts en W, González-Buitrago JM. Clinical evaluation of a new automa-
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Arthritis Rheum 2012;64:2677–86. Res 2013;56:420–4.

S. Mehlal.
F. Batteux (frederic.batteux@aphp.fr).
Laboratoire d’immunologie biologique, Hôpital Cochin, 27, rue du Faubourg-Saint-Jacques, 75014 Paris, France.

Toute référence à cet article doit porter la mention : Mehlal S, Batteux F. Auto-anticorps anti-ADN natif. EMC - Biologie médicale 2016;11(3):1-3 [Article
90-30-0015-A].

Disponibles sur www.em-consulte.com

Arbres Iconographies Vidéos/ Documents Information Informations Auto- Cas
décisionnels supplémentaires Animations légaux au patient supplémentaires évaluations clinique

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