Laporan praktikum ini membahas tentang uji kualitatif terhadap protein dan asam amino melalui beberapa reaksi. Protein diuji melalui pengendapan oleh logam berat, garam, alkohol, dan panas yang menghasilkan denaturasi protein. Hasil uji menunjukkan protein dapat mengalami presipitasi oleh logam dan garam serta koagulasi oleh panas dan alkohol.
0 penilaian0% menganggap dokumen ini bermanfaat (0 suara)
1K tayangan9 halaman
Laporan praktikum ini membahas tentang uji kualitatif terhadap protein dan asam amino melalui beberapa reaksi. Protein diuji melalui pengendapan oleh logam berat, garam, alkohol, dan panas yang menghasilkan denaturasi protein. Hasil uji menunjukkan protein dapat mengalami presipitasi oleh logam dan garam serta koagulasi oleh panas dan alkohol.
Deskripsi Asli:
Albumin merupakan protein pengangkut asam lemak dalam darah. Albuimin di plasma manusia merupakan fraksi protein dengan berat molekul 66.300 sampai 69.000, terdiri dari asam amino, yang terutama adalah asam aspartat dan glutamat dan sangat sedikit triptofan. Albumin merupakan hampir 50% dari protein plasma dan bertanggung jawab atas 75 – 80% dari tekanan osmotikpada plasma manusia (Winarno 1992).
Larutan logam berat seperti AgNO3, HgCl2, dan Pb-asetat dapat menggumpalkan larutan protein encer. Garam logam berat tersebut sangat berbahaya bagi tubuh. Kadar logam berat yang masih bisa ditolelir oleh tubuh mencapai 10-25 ug/100mg. Apabila kadar logam Ag, Pb, dan Hg berlebihan logam tersebut akan mendenatruasikan protein dan mengendapkan protein dalam sel-sel tubuh. Protein akan mengalami presipirasi bila bereaksi dengan ion logam. Reaksi protein dengan logam berat dapat memutuskan jembatan garam. Jembatan garam berfungsi untuk mempertahankan kenetralan medium elektrolit tempat batang elektrode berada (Sumardjo 2006).
Berdasarkan percobaan didapatkan hasil endapan yang dibentuk oleh penambahan AgNO3 lebih banyak daripada penambahan HgCl2 dan Pb-asetat. Hal ini disebabkan ion Ag+ lebih mudah mengikat elektron daripada Pb-asetat dan HgCl2 karena ion Ag+ cenderung lebih reaktif. Sedangkan HgCl2 lebih banyak menghasilkan endapan karena larutan HgCl2 berasal dari asam kuat sedangkan Pb-asetat berasal dari asam lemah (Sumardjo 2006).
Pengendapan protein dengan cara penambahan garam, cara tersebut dilakukan berdasarkan pengaruh yang berbeda pada kelarutan beberapa protein globular. Proses ini disebut salting-in dan dipengaruhi oleh sifat garam netral, konsentrasi, dan jumlah muatan pada tiap larutan. Bila konsentrasi garam netral ditambahkan maka kelarutan protein akan berkurang sehingga protein akan mengendap (Roswiem 2011). Penambahan garam yang berlebihan mengakibatkan terdenaturasinya protein sehingga protein tersebut akan mengendap (Winarno 1992).
Berdasarkan hasil percobaan larutan albumin yang diberi larutan garam, endapan protein tersebut tidak larut dalam air. Hal tersebut disebabkan albumin telah mencapai tingkat kejenuhan sehingga kelarutannya menurun (Page 1998). Endapan tersebut kemudian diuji menggunakan pereaksi Millon yang menghasilkan warna merah sehingga dalam larutan tersebut mengandung tirosin. Filtrat saringan hasil pengendapan garam diuji menggunakan biuret menghasilkan reaksi negatif karena warna yang terbentuk adalah biru.
Protein yang dipengaruhi oleh pemanasan, sinar ultraviolet, gelombang ultrasonik, pengocokan kuat, dan penambahan bahan kimia dapat mengalami denaturasi. Denaturasi protein akibat perlakuan panas dan penambahan alkohol menyebabkan koagulasi (Sumardjo 2006). Panas dapat merusak interaksi hidrofobik ikatan nonpolar karena energi kinetik yang bergerak sangat cepat sehingga dapat merusak protein tersebut. Selain itu pemanasan juga mengakibatkan kemampuan protein untuk mengikat air menurun karena mendekati titik isolistriknya. Hal tersebut terjadi karena terputusnya interaksi nonkovalen pada struktur protein namun tidak memutus ikatan kovalen atau peptida (Ophart 2003). Titik isolistrik adalah daerah pH tertentu dimana protein tidak mempunyai selisih muatan atau jumlah muatan dan negatifnya sama, sehingga tidak bergerak bila diletakkan di dalam medan listrik. Pada pH isolistrik,
Berdasarkan hasil percobaan uji koagulasi endapan protein yang dilarutkan dalam air mendapatkan reaksi negatif. Hasil uji Millon dari endapan albumin mendapatkan reaksi positif. Hal tersebut menunjukkan endapan tersebut masih berupa protein, hanya saja telah terjadi perubahan struktur tersier maupun kuartener, sehingga membuat protein tersebut mengendap. Hal tersebut bisa dilihat dari tidak larutnya endapan allbumin di dalam air.
Laporan praktikum ini membahas tentang uji kualitatif terhadap protein dan asam amino melalui beberapa reaksi. Protein diuji melalui pengendapan oleh logam berat, garam, alkohol, dan panas yang menghasilkan denaturasi protein. Hasil uji menunjukkan protein dapat mengalami presipitasi oleh logam dan garam serta koagulasi oleh panas dan alkohol.
Laporan praktikum ini membahas tentang uji kualitatif terhadap protein dan asam amino melalui beberapa reaksi. Protein diuji melalui pengendapan oleh logam berat, garam, alkohol, dan panas yang menghasilkan denaturasi protein. Hasil uji menunjukkan protein dapat mengalami presipitasi oleh logam dan garam serta koagulasi oleh panas dan alkohol.
Unduh sebagai DOC, PDF, TXT atau baca online dari Scribd
Unduh sebagai doc, pdf, atau txt
Anda di halaman 1/ 9
Laporan Praktikum
Biokimia Umum
Hari/tanggal Waktu PJP Asisten
: : : :
Rabu/ 18 Maret 2013
08.00 s.d. 11.00 dr. Husnawati, S.Ked. Nur Fitriani M. Andi Arya Fajar A. Yayuk Kartika
PROTEIN Reaksi Uji Protein Kelompok 15 Jannatul Ajilah Kanti Rahmi Fauziyah Devy Nur Priscaningtyas Indira Septianawati
B04120124 B04120125 B04120128 B04120147
DEPARTEMEN BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DA N ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2013
Pendahuluan Protein merupakan biopolimer yang terdiri atas banyak asam amino yang berhubungan satu dengan yang lainnya lewat ikatan amida (peptida). Protein mempunyai berbagai peran dalam sistem biologis. Beberapa protein merupakan komponen utama dari jaringan struktur yaitu otot, kulit, kuku, dan rambut. Protein juga bertindak sebagai katalis dalam reaksi biologis yang diperlukan untuk mempertahankan hidup (Hart 2005). Protein merupakan makromolekul karena memiliki bobot molekul yang besar. Protein terdiri atas dua puluh macam asam amino yang membentuk suatu rantai polipeptida. Struktur protein dapat dibagi menjadi empat yaitu primer, sekunder, tersier, dan kuartener. Susunan linear asam amino dalam protein merupakan struktur primer. Struktur primer merupakan penyusun utama struktur sekunder dan tersier (Roswiem 2011). Protein yang terdapat dalam bahan pangan mudah mengalami perubahan antara lain terdenaturasi dan terkoagulasi (Winarno 1992). Pereaksi millon adalah larutan merkuro dan merkuri nitrat dalam asam nitrat. Apabila pereaksi ini ditambahkan pada larutan protein, akan menghasilkan endapan yang dapat berubah menjadi merah oleh pemanasan. Protein yang mengandung tirosin akan menghasilkan hasil positif. Hal ini dikarenakan struktur tirosin mengandung gugus hidroksil fenil (Lehninger 1982). Uji Biuret menggunakan prinsip reaksi antara reagen dengan senyawa CuSO4 pada suasana basa sehingga menghasilkan larutan berwarna violet . Komposisi dari reagen ini adalah senyawa kompleks yang mengandung unsur karbon (C), hidrogen (H), oksigen (O), dan nitrogen (N) dan merupakan hasil reaksi antara dua senyawa urea (CO(NH 2)2) pada suhu tinggi (Page 1981). Fungsi dari penambahan CuSO4 ke dalam reagen ini adalah untuk mendeteksi keberadaan asam amino dalam suatu sampel uji dengan mengubah warna larutan menjadi ungu apabila positif, kecuali asam amino histidin, serin, dan treonin tidak memberikan reaksi positif (Ophart 2003). Denaturasi protein adalah berubahnya bentuk dan lipatan molekul protein tetapi tidak sampai memutuskan ikatan antar asam amino dalam struktur protein. Hal itu dikarenakan denaturasi tidak cukup kuat untuk memutuskan ikatan.
Denaturasi terjadi karena adanya gangguan pada struktur sekunder dan tersier protein. Denaturiasi yang umum ditemui adalah proses presipitasi dan koagulasi protein (Ophart 2003). Denaturasi dapat terjadi karena beberapa hal yaitu karena pengaruh pH, panas, pelarut, logam berat, garam, kekuatan ion, terlarut dan radiasi. Denaturasi memiliki derajat yang bertingkat, dari yang ringan yaitu bersifat revesible sampai yang berat yang bersifat irreversible (Page 1981).
Tujuan Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui sifat dan struktur asam amino dan protein melalui uji-uji kualitatif dan mempelajari beberapa reaksi uji terhadap asam amino dan protein. Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan dalam percobaan adalah tabung reaksi, gelas piala, pipet mohr, pipet tetes, bulp hitam, batang pengaduk, corong plastik, kertas saring, tissue, dan penangas air. Bahan yang digunakan antara lain larutan albumin, pereaksi Millon, pereaksi Biuret, larutan HgCl2, larutan AgNO3, larutan Pb-asetat, akuades, larutan CH3COOH, ethanol 95%, HCl 0,1M, NaOH 0,1M, buffer asetat pH 4,7. Prosedur Kerja Pengendapan oleh logam. Tiga ml albumin dan 5 tetes larutan HgCl2 2% ke dalam tabung reaksi. Percobaan tersebut diulang dengan menggati larutan dengan larutan Pb-asetat 5% dan AgNO3 5%. Pengendapan oleh garam. Sepuluh ml larutan albumin dan garam (NH4)2SO4 dijenuhkan dengan garam tersebut hingga mencapai titik jenuh kemudian disaring. Kelarutan diuji dengan air. Endapan diuji dengan pereaksi Millon dan Biuret. Uji Koagulasi. Dua tetes CH3COOH 1M dan 5 ml larutan albumin dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tabung diletakkan dalam air mendidih selama lima menit. Endapan diambil meggunakan batang pengaduk. Kelarutan endapan diuji ke dalam 3 ml air. Endapan diuji dengan pereaksi Millon.
Pengendapan oleh alkohol. Empat buah tabung reaksi disediakan.
Campuran dibuat dengan tabung ke-1, 2.5 ml larutan albumin, 0.5 ml HCl 0.1M, dan 3 ml ethanol 95%. Tabung ke-2, 2.5 ml larutan albumin, 0.5 ml NaOH 0.1M, dan 3 ml ethanol 95%. Tabung ke-3, 2.5 ml larutan albumin, 0.5 ml buffer asetat pH4.7 0.1M, dan 3 ml ethanol 95%. Tabung ke-4 2.5 ml larutan albumin dan 3 larutan ethanol. Denaturasi protein.
Tiga buah tabung reaksi disediakan. Campuran
dibuat dengan tabung ke-1, 4.5 ml larutan albumin dan 0.5 ml HCl 0.1M. Tabung ke-2, 4.5 ml larutan albumin dan 0.5 ml NaOH 0.1M. Tabung ke-3, 4.5 ml larutan albumin dan 0.5 ml buffer asetat pH 4.7. ketiga tabung ditempatkan ke dalam air mendidih selama 15 menit dan didinginkan pada temperatur kamar. Tabung 1 dan 2 ditambahkan 5 ml buffer asetat ph4.7 dan diamati hasilnya. Hasil Pengamatan Tabel 1. Pengendapan oleh logam Larutan HgCl2 AgNO3 Pb-asetat Keterangan : + sedikit endapan ++ banyak endapan +++ sangat banyak endapan tidak ada endapan
Larutan HCl 0.1M + Ethanol 95% NaOH 0.1M + Ethanol 95% Buffer asetat pH4.7 + Ethanol 95% Ethanol 95% Keterangan : + sedikit endapan ++ banyak endapan +++ sangat banyak endapan tidak ada endapan
Hasil pengamatan + ++ ++ +++
Gambar 4 Hasil percobaan pengendapan oleh alkohol.
Tabel 5. Denaturasi protein
Larutan HCl 0.1M + buffer asetat pH 4.7 NaOH 0.1M + buffer asetat pH 4.7 Buffer asetat pH4.7 Keterangan : + sedikit endapan ++ banyak endapan +++ sangat banyak endapan tidak ada endapan
Hasil pengamatan + ++ ++
Gambar 1 Hasil percobaan denaturasi protein.
Pembahasan Albumin merupakan protein pengangkut asam lemak dalam darah. Albuimin di plasma manusia merupakan fraksi protein dengan berat molekul 66.300 sampai 69.000, terdiri dari asam amino, yang terutama adalah asam aspartat dan glutamat dan sangat sedikit triptofan. Albumin merupakan hampir 50% dari protein plasma dan bertanggung jawab atas 75 80% dari tekanan osmotikpada plasma manusia (Winarno 1992). Larutan logam berat seperti AgNO3, HgCl2, dan Pb-asetat dapat menggumpalkan larutan protein encer. Garam logam berat tersebut sangat berbahaya bagi tubuh. Kadar logam berat yang masih bisa ditolelir oleh tubuh mencapai 10-25 ug/100mg. Apabila kadar logam Ag, Pb, dan Hg berlebihan logam tersebut akan mendenatruasikan protein dan mengendapkan protein dalam sel-sel tubuh. Protein akan mengalami presipirasi bila bereaksi dengan ion logam. Reaksi protein dengan logam berat dapat memutuskan jembatan garam. Jembatan garam berfungsi untuk mempertahankan kenetralan medium elektrolit tempat batang elektrode berada (Sumardjo 2006). Berdasarkan percobaan didapatkan hasil endapan yang dibentuk oleh penambahan AgNO3 lebih banyak daripada penambahan HgCl2 dan Pb-asetat. Hal ini disebabkan ion Ag+ lebih mudah mengikat elektron daripada Pb-asetat dan
HgCl2 karena ion Ag+ cenderung lebih reaktif. Sedangkan HgCl2 lebih banyak menghasilkan endapan karena larutan HgCl2 berasal dari asam kuat sedangkan Pbasetat berasal dari asam lemah (Sumardjo 2006). Pengendapan protein dengan cara penambahan garam, cara tersebut dilakukan berdasarkan pengaruh yang berbeda pada kelarutan beberapa protein globular. Proses ini disebut salting-in dan dipengaruhi oleh sifat garam netral, konsentrasi, dan jumlah muatan pada tiap larutan. Bila konsentrasi garam netral ditambahkan maka kelarutan protein akan berkurang sehingga protein akan mengendap (Roswiem 2011). Penambahan garam yang berlebihan mengakibatkan terdenaturasinya protein sehingga protein tersebut akan mengendap (Winarno 1992). Berdasarkan hasil percobaan larutan albumin yang diberi larutan garam, endapan protein tersebut tidak larut dalam air. Hal tersebut disebabkan albumin telah mencapai tingkat kejenuhan sehingga kelarutannya menurun (Page 1998). Endapan
tersebut
kemudian
diuji
menggunakan
pereaksi
Millon
yang
menghasilkan warna merah sehingga dalam larutan tersebut mengandung tirosin.
Filtrat saringan hasil pengendapan garam diuji menggunakan biuret menghasilkan reaksi negatif karena warna yang terbentuk adalah biru. Protein yang dipengaruhi oleh pemanasan, sinar ultraviolet, gelombang ultrasonik, pengocokan kuat, dan penambahan bahan kimia dapat mengalami denaturasi. Denaturasi protein akibat perlakuan panas dan penambahan alkohol menyebabkan koagulasi (Sumardjo 2006). Panas dapat merusak interaksi hidrofobik ikatan nonpolar karena energi kinetik yang bergerak sangat cepat sehingga
dapat
merusak
protein
tersebut.
Selain
itu pemanasan
juga
mengakibatkan kemampuan protein untuk mengikat air menurun karena
mendekati titik isolistriknya. Hal tersebut terjadi karena terputusnya interaksi nonkovalen pada struktur protein namun tidak memutus ikatan kovalen atau peptida (Ophart 2003). Titik isolistrik adalah daerah pH tertentu dimana protein tidak mempunyai selisih muatan atau jumlah muatan dan negatifnya sama, sehingga tidak bergerak bila diletakkan di dalam medan listrik. Pada pH isolistrik, Berdasarkan hasil percobaan uji koagulasi endapan protein yang dilarutkan dalam air mendapatkan reaksi negatif. Hasil uji Millon dari endapan albumin
mendapatkan reaksi positif. Hal tersebut menunjukkan endapan tersebut masih
berupa protein, hanya saja telah terjadi perubahan struktur tersier maupun kuartener, sehingga membuat protein tersebut mengendap. Hal tersebut bisa dilihat dari tidak larutnya endapan allbumin di dalam air. Penambahan alkohol dapat mendenaturasikan protein karena sifat alkohol yang dapat menarik mantel air dalam protein. Pengendapan paling banyak terjadi pada larutan albumin dan etanol setelah itu penambahan buffer asetat pH 4,7 mendapatkan endapan yang banyak. Hal ini terjadi karena suatu protein mempunyai titik isolistrik, endapan juga terjadi pada larutan yang memiliki pH rendah. Percobaan denaturasi protein membentuk endapan setelah penambahan buffer asetat pH 4,7 sedangkan sebelum penambahan buufer asetat tidak terdapat endapan. Pada umumnya, protein sangat peka terhadap pengaruh fisik zat kimia sehingga mengalami perubahan bentuk. Proses denaturasi dapat berlangsung secara reversible dan irreversible tergantung penyebabnya (Hart 2003). Fungsi penambahan buffer asetat adalah sebagai pemberi suasana asam tanpa merusak struktur protein (Kurniawan 2008). Denaturasi protein terhadap larutan albumin HCl 0.1 M, NaOH 0,1 M, dan buffer asetat pH 4,7 menghasilkan endapan setelah pemanasan hanya pada campuran antara albumin dan buffer asetat pH 4,7. HCl 0,1 M dan NaOH 0,1 M tidak menghasilkan endapan tetapi setelah penambahan buffer asetat pH 4,7 menghasilkan endapan. Endapan pada campuran larutan NaOH lebih banyak menghasilkan endapan dibanding campuran larutan HCl. Campuran albumin dengan larutan NaOH dan buffer asetat pH 4,7 memiliki endapan yang sama banyaknya dengan campuran larutan albumin dengan buffer asetat pH 4,7. Simpulan Protein akan mengendap di dalam logam berat. Semakin reaktif logam tersebut semakin mudah pula mengendapkan protein. Protein yang diberi garam akan mengalami pengendapan. Endapan tersebut tidak akan larut dalam air, memberikan reaksi positif terhadap Millon dan filtratnya memberikan reaksi negatif terhadap biuret. Protein juga akan mengalami koagulasi dan akan mengendap bila diberi asam asetat. Hasil endapan ini akan positif pada uji Millon
dan akan negatif pada uji kelarutan air. Alkohol juga mempengaruhi pengendapan protein karena adanya titik isolistrik maka suatu protein dapat mengendap di dalam pH 4,7. Daftar Pustaka Hart H. 2003. Kimia Organik: Suatu Kuliah Singkat Edisi Kesebelas. Jakarta: Erlangga. Kurniawan D. 2008. Modifikasi Bentonit. Purifikasi karbonat hlm. 1. Depok: FMIPA UI. Ophart CE. 2003. Virtual Chembook. Elmhurst: Elmhurst College. Page DS. 1998. Prinsip-prinsip Biokimia. Jakarta: Erlangga. Roswiem et al. 2011. Biokimia Umum Jilid 1. Bogor: Departemen Biokimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam IPB. Sumardjo D. 2006. Pengantar Kimia Kedokteran. Jakarta: Penerbit EGC. Winarno FG. 1992. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia.
