Subscribe to DeepL Pro to translate larger documents.

Visit www.DeepL.com/pro for more information.

Jurnal Mediterania tentang Hematologi dan Penyakit Menular

Artikel Asli

Kembali ke "Standar Emas": Seberapa Tepatkah Deteksi Hematokrit Saat Ini?

Leonid Livshits1 , Tal Bilu2 , Sari Peretz2,3 , Anna Bogdanova1,4 , Max Gassmann1,4 , Harel Eitam3 , Ariel Koren2
dan Carina Levin2,5 .

1 Kelompok Penelitian Sel Darah Merah, Fakultas Vetsuisse, Institut Fisiologi Hewan, Universitas Zurich,
Zurich, Swiss.
2 Unit Hematologi Pediatrik, Pusat Medis Emek, Afula, Israel.
3 Unit Divisi Laboratorium, Pusat Medis Emek, Afula, Israel.
4 Pusat Fisiologi Manusia Integratif Zurich (ZIHP), Zurich, Swiss.
5 Fakultas Kedokteran Bruce dan Ruth Rapaport, Technion, Institut Teknologi Israel, Haifa, Israel.

Kepentingan yang bersaing: Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Abstrak. Pendahuluan: Metode yang umum digunakan untuk deteksi hematokrit, dengan
pemeriksaan visual tabung mikrokapiler, yang dikenal sebagai "micro-HCT", bersifat subjektif
tetapi tetap menjadi salah satu sumber utama untuk evaluasi hematokrit yang cepat. Teknik
otomatisasi analitik telah meningkatkan standarisasi deteksi indeks RBC; namun, pengukuran
hematokrit tidak langsung dengan penganalisis darah, HCT otomatis, tidak berkorelasi dengan baik
dengan hasil "micro-HCT" pada pasien dengan patologi hematologi. Kami bertujuan untuk
mengatasi kelemahan tersebut dalam analisis "micro-HCT" dengan menggunakan perangkat lunak
pemrosesan "ImageJ".
Metode: 223 sampel darah dari "populasi umum" dan 19 sampel darah dari pasien penyakit sel sabit
diperiksa secara paralel untuk mengetahui nilai hematokrit dengan menggunakan metode HCT
otomatis, "mikro-HCT" standar, dan mikro-HCT "ImageJ".
Hasil: Untuk sampel "populasi umum", nilai "ImageJ" secara signifikan lebih tinggi daripada nilai
yang sesuai yang dievaluasi oleh "micro-HCT" standar dan HCT otomatis, kecuali untuk bayi baru
lahir berusia 0 hingga 2 bulan, di mana hasil HCT otomatis serupa dengan HCT yang dievaluasi oleh
"ImageJ". Serupa dengan kohort "populasi umum", kami menemukan nilai yang secara signifikan
lebih tinggi yang diukur dengan "ImageJ" dibandingkan dengan "micro-HCT" atau HCT otomatis
pada pasien SCD. Perbedaan koresponden untuk MCV dan MCHC juga ditemukan.
Diskusi: Penelitian ini memperkenalkan teknik penilaian "micro-HCT" dengan menggunakan
modul analisis gambar dari perangkat lunak "ImageJ". Prosedur ini memungkinkan untuk
mengatasi sebagian besar kesalahan data yang terkait dengan evaluasi "micro-HCT" standar dan
dapat menggantikan penggunaan peralatan otomatis yang rumit dan mahal. Hasil yang disajikan
juga dapat digunakan untuk mengembangkan standar baru untuk menghitung hematokrit dan
parameter terkait untuk praktik klinis rutin.
Kata kunci: Indeks RBC, Hematokrit mikrokapiler, Analisis citra.

Kutipan: Livshits L., Bilu T., Peretz S., Bogdanova A., Gassmann M., Eitam H., Koren A., Levin C. Kembali ke "Standar Emas": seberapa tepat
deteksi hematokrit saat ini? Mediterr J Hematol Infect Dis 2022, 14(1): e2022049, DOI: http://dx.doi.org/10.4084/MJHID.2022.049

Diterbitkan: 1 Juli 2022Diterima : 18 Januari 2022Diterima : 12 Juni 2022

Ini adalah artikel Akses Terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons (https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0), yang
mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan benar.

Korespondensi kepada: Leonid Livshits, Kelompok Penelitian Sel Darah Merah, Fakultas Vetsuisse, Institut Fisiologi Veteriner,
Universitas Zurich, Zurich, Swiss, E-mail: leonidlivshts@gmail.com

Pengantar. Nilai hematokrit (HCT) menunjukkan fraksi sel darah merah (RBC), sedangkan fraksi residu meliputi
volume darah utuh yang ditempati oleh sel darah merah. plasma dan sel darah putih. Perubahan dalam
www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049Pag . 1 / 12
HCT mencerminkan perubahan akut atau kronis pada polisitemia13 atau pada kasus tekanan osmotik plasma yang
kondisi fisik pasien. Oleh karena itu, ketika keputusan tidak normal.14 Penelitian sebelumnya pada orang dewasa
terapeutik yang mendesak harus diambil, hasil HCT yang anemia dan bayi prematur menemukan korelasi yang lebih
cepat sangat penting untuk menentukan pengobatan yang rendah antara volume RBC yang bersirkulasi dan
cepat dan memadai.1,2 Karena keunggulannya
dibandingkan analisis hemoglobin (Hb), pengukuran HCT
secara luas digunakan dalam neonatologi untuk
memutuskan apakah akan memberikan transfusi darah
pada kasus anemia atau transfusi pertukaran parsial pada
kasus polisitemia. Keuntungan dari pengukuran HCT
adalah jumlah darah yang dibutuhkan sedikit dan hasil
yang cepat, yang sering diperoleh pada analisis di samping
tempat tidur.
Saat ini, ada dua pendekatan utama untuk pengukuran
HCT yang digunakan secara klinis: (i) deteksi HCT secara
manual dengan sentrifugasi tabung mikrokapiler yang
berisi darah dan pemeriksaan manual dengan mata
menggunakan penggaris (mikro-HCT) dan (ii) perhitungan
otomatis HCT yang dilakukan dengan alat analisis darah
modern.3,4 Metode otomatis digunakan di seluruh dunia
dalam praktik rutin, sedangkan deteksi mikro-HCT
sebagian besar diterapkan di bangsal neonatologi. Manfaat
menggunakan pendekatan terkomputerisasi dibandingkan
dengan pengukuran mikro-HCT tradisional adalah hasil
yang tinggi dan standarisasi pengukuran yang tinggi. Di
sisi lain, penganalisis darah memberikan hasil yang lebih
tepat, dengan koefisien variasi kurang dari 1% untuk
indeks HCT.5
Di sisi lain, pengukuran HCT otomatis memiliki
beberapa keterbatasan yang signifikan. Pertama,
pengukuran ini tidak langsung, menggunakan pendekatan
seperti sebaran ke depan dalam flow cytometry (alat
analisis darah ADVIA, Siemens) atau pembacaan
impedansi (Sysmex/Beckman Coulter) untuk mendeteksi
jumlah sel darah. Alat analisis darah ADVIA menghitung
nilai HCT secara tidak langsung dengan mengalikan
jumlah RBC dengan volume korpuskular RBC rata-rata
(MCV), yang juga diukur secara tidak langsung. Pada alat
analisis ADVIA, RBC membengkak, kehilangan
morfologi aslinya, dan secara kimiawi diperbaiki sebelum
terdeteksi.6,7 Oleh karena itu, pendekatan ini memberikan
penentuan MCV yang salah dari indeks HCT untuk sel
darah merah dengan kelainan morfologi, seperti sel sabit
yang kurang bulat; RBC yang tidak normal secara
morfologi lainnya juga mempengaruhi pengukuran HCT.8
Sumber lain yang mungkin dari evaluasi HCT yang salah,
biasanya lebih rendah, adalah adanya aglutinasi RBC,
yang tidak dihitung sebagai bagian dari fraksi RBC oleh
penganalisis otomatis, terutama karena ambang batas
volumetriknya yang sangat jelas.8 Selain itu, kelainan
konsentrasi elektrolit dan protein darah dapat
mempengaruhi evaluasi HCT.9 Secara keseluruhan,
pengukuran tidak langsung HCT dengan alat analisis darah
mungkin berkorelasi buruk dengan hasil micro-HCT pada
pasien dengan patologi yang parah dan beragam, termasuk
anemia hemolitik autoimun seperti penyakit aglutinin
dingin, anemia sel sabit, sferositosis turunan, dan lain-
lain.10–12
Selain itu, kesalahan dalam penghitungan HCT
otomatis lebih sering terjadi pada pasien dengan
www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Halaman. 2
/ 17
HCT dibandingkan pada individu yang sehat, sehingga Dalam
penganalisis otomatis menjadi tidak akurat dalam kasus-
kasus ini. Selain itu, banyak peneliti15–18 telah mendeteksi
korelasi yang buruk antara massa/volume RBC yang
bersirkulasi dan HCT atau hemoglobin yang ditentukan
secara otomatis pada bayi dengan berat badan lahir
sangat rendah (dengan koefisien korelasi yang bervariasi
antara 0,3 dan 0,7), sehingga pengukuran ini tidak dapat
diandalkan. Untuk bayi prematur, korelasi antara volume
RBC dan nilai HCT berkisar antara 0,87 dan 0,96;19 oleh
karena itu, menggunakan metode otomatis untuk pasien
ini juga kurang tepat. Nilai korelasi yang sama (0,88-
0,92) dilaporkan untuk orang dewasa normal dan anemia
oleh Huber dkk.20 dan oleh Bentley dan Lewis.21
Selain itu, kadar RBC yang sangat menurun, jumlah
retikulosit yang lebih tinggi, dan peningkatan RBC
hipokromik atau jumlah sel darah putih juga dapat
mengakibatkan evaluasi HCT yang salah.8,22,23 Dengan
demikian, meskipun pengukuran HCT otomatis dan
indeks turunannya sudah umum digunakan, hasilnya
mungkin tidak dapat diandalkan dalam berbagai kondisi
patologis. Terakhir, biaya penganalisis otomatis dan
bahan habis pakai tinggi, sehingga kurang tersedia di
pusat-pusat perawatan kesehatan dengan sumber daya
terbatas atau di luar rumah sakit yang tidak memiliki
laboratorium yang lengkap.
Pengukuran mikro-HCT manual telah dianggap
sebagai landasan hematologi selama bertahun-tahun.
Hampir semua alat analisis hematologi otomatis
dikalibrasi terutama berdasarkan pengukuran mikro-HCT
ini. Oleh karena itu, rentang referensi yang diterima
secara umum untuk HCT dan indeks RBC lainnya
bergantung pada keakuratan pemeriksaan ini.22,24 Namun,
meskipun pendekatan mikro-HCT manual sederhana dan
murah, namun memiliki banyak kelemahan dan dapat
dipengaruhi oleh beberapa variabel. Prosedur manual ini
relatif lambat dan membutuhkan tenaga terampil untuk
menghindari artefak ketika mengisi kapiler dan
mendapatkan pembacaan HCT.25 Selain itu, aspek teknis,
seperti durasi sentrifugasi dan perbedaan kecepatan rotor
sudut,26 plasma yang terperangkap di antara sel, yang
dapat mencapai hingga 4% dari total volume RBC.27–30
kontaminasi leukosit dan trombosit pada lapisan RBC,25
dehidrasi RBC31 dan status oksigenasi32 dapat secara
signifikan mempengaruhi hasil teknik mikro-HCT
manual. Untungnya, sebagian besar kesalahan ini
cenderung mengimbangi, sehingga kesalahan yang
sebenarnya biasanya kecil.22
Sifat subjektif dari interpretasi visual sampel (karena
kekhususan visual pribadi, kemiringan dan jarak
pengukuran yang tidak terkontrol, dan banyak lagi) tetap
menjadi salah satu sumber utama untuk evaluasi HCT
yang salah dengan metode mikrokapiler. Kami bertujuan
untuk mengatasi komplikasi ini dalam analisis data HCT
dengan menggunakan perangkat lunak pengolah gambar
untuk menganalisis sampel mikrokapiler dengan lebih
tepat. ImageJ, perangkat lunak sumber terbuka untuk
analisis pencitraan yang disediakan oleh Institut
Kesehatan Nasional AS33 , baru-baru ini digunakan untuk
mengukur parameter darah dalam bercak darah kering.34,35
www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Halaman. 3
/ 17
penelitian ini, kami menyarankan untuk menggunakan alat Jadi, kami menemukan bahwa kamera
ini untuk menghitung secara tepat HCT dan parameter
darah turunan HCT yang diperoleh dari pendekatan
mikrokapiler rutin.
Beberapa laporan sebelumnya telah membahas
ketidakakuratan pengukuran otomatis HCT dan parameter
yang diturunkan dari HCT untuk hemoglobinopati
herediter.12,36 Di sini, kami juga membandingkan tiga
pendekatan (mikro-HCT dengan analisis mata dan gambar
dan HCT otomatis) untuk penghitungan HCT dalam
sampel darah yang diperoleh dari pasien sel sabit.

Metode.
Pasien dan Sampel Darah. Secara keseluruhan, 262
sampel diikutsertakan dalam penelitian ini; 243 sampel
darah segar, yang disebut sebagai "kelompok populasi
umum", dalam tabung yang dilengkapi dengan K3EDTA,
dievaluasi dengan Sistem Hematologi ADVIA® 2120i
(Siemens Healthineers AG). Sampel yang tiba di
laboratorium pusat Emek Medical Center (EMC) untuk
pengukuran hitung darah lengkap (CBC) dipilih secara
acak selama periode 2018-2020. Pengukuran HCT secara
manual dilakukan dalam waktu 4 jam setelah pengambilan
sampel darah (lihat Tabel 1 untuk data demografis).
Subjek dewasa dianggap anemia jika kadar Hb <13,5 g/dL
untuk laki-laki dan
<12 g/dL untuk perempuan,37 dan polisitemia bila HCT >
51% untuk laki-laki dan > 48% untuk perempuan.38 19
sampel darah lainnya berasal dari pasien dengan penyakit
sel sabit (kelompok SCD), yang dikumpulkan di Unit
Hematologi Pediatrik EMC (Tabel 2). Penelitian ini
dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki dan disetujui
oleh komite etika EMC (EMC-0123-18). Mengingat bahwa
hanya sisa darah setelah evaluasi CBC di laboratorium
hematologi EMC yang dikumpulkan untuk penelitian ini
dan tidak ada pengambilan sampel darah khusus yang
dilakukan, maka tidak ada persetujuan yang harus diisi
oleh peserta penelitian.

Pengukuran HCT secara manual (Micro-HCT). Kapiler

HCT yang mengandung natrium heparin (Heinz Herenz
Medizinalbedarf GmbH) diisi dengan sampel darah,
ditutup rapat, dan disentrifugasi selama 5 menit dengan
kecepatan 12.000 rpm menggunakan sentrifus
laboratorium Sigma 1-14 dengan rotor micro-HCT 11026
(Sigma Laborzentrifugen GmbH), dengan mengikuti
protokol yang umum digunakan. Untuk pemeriksaan
dengan mata menggunakan penggaris atau mikroskop
(selanjutnya disebut pemeriksaan dengan mata), tinggi
total sampel dan tinggi lapisan RBC yang dikemas
diperiksa secara visual menggunakan pembaca mikro-
HCT atau penggaris. Tinggi lapisan RBC dibagi dengan
total tinggi sampel dan dinyatakan dalam persen untuk
mendapatkan nilai HCT. Pada saat yang sama, gambar
kapiler ini diambil dengan kamera 16MP (dipasang pada
ponsel Samsung Galaxy S6 Model SM-G920F). Kami
melakukan serangkaian percobaan pendahuluan untuk
menentukan, apakah jarak dari kapiler dan kemiringan
kamera akan mengubah kalkulasi HCT (Gambar 1A).

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Halaman. 4

/ 17
Kemiringan (hingga 30o kemiringan dan 45o penurunan
sehubungan dengan kapiler yang diposisikan secara
horizontal) tidak memiliki efek signifikan pada
perhitungan HCT (Gambar 1B). Jarak kurang dari 10 cm
dan lebih dari 15 cm menyebabkan pengaburan yang kuat
pada gambar dan mengganggu keakuratan pencitraan dan
analisis gambar selanjutnya (Gambar 1C). Berdasarkan
temuan awal ini, kamera dipasang secara horizontal
(dengan kemiringan 0o relatif terhadap kapiler) pada jarak
10 cm dari kapiler. Efek yang tidak signifikan (p > 0,05)
dari pembesaran gambar [pembesaran 1X (100%) hingga
4X (400%)] pada estimasi HCT ditentukan (Gambar
1D); kami memilih pembesaran 300% sebagai yang
optimal dalam hal kejernihan dan keburaman gambar.
Kami juga menemukan bahwa menggunakan kamera
yang berbeda (kamera 16MP, 25MP, 13MP) yang
dipasang pada berbagai ponsel (Samsung Galaxy S6
Model SM-G920F, Samsung Galaxy A50 SM-A505F,
ponsel Huawei P9 lite 2017, masing-masing)
menyebabkan perbedaan minimal dalam perhitungan
HCT (Gambar 1E).
Gambar kapiler kemudian dianalisis dengan perangkat
lunak ImageJ versi Windows yang gratis untuk umum
(ImageJ 1.52a; Wayne Rasband, National Institutes of
Health, AS; diunduh dari
https://imagej.nih.gov/ij/download.html). Analisis
gambar dilakukan sebagai berikut (Gambar 1F):
o Ketinggian fraksi RBC diperkirakan dari batas RBC-
sealant ke batas RBC-leukosit sebagai panjang [dalam
unit arbitrer (AU) dan mempertahankan sudut 90o ]
menggunakan alat analisis 'garis lurus' ImageJ.
Pertama, garis ditarik secara manual setelah
pembesaran maksimal, dan kemudian parameter garis
(yaitu, panjangnya) dianalisis menggunakan
perangkat lunak. Contoh prosedur analisis
ditunjukkan dalam Gambar 1F dan S1A.
o Ketinggian fraksi total diperkirakan dari batas RBC-
sealant ke batas plasma-udara sebagai panjang dalam
AU.
o Nilai HCT setiap tabung dihitung sebagai rasio tinggi
RBC yang sesuai dengan tinggi total.
o Setidaknya tiga pengukuran independen dari total
tinggi sampel dan tinggi yang sesuai dari lapisan RBC
yang dikemas dilakukan untuk setiap kapiler. Nilai
rata-rata dibandingkan dengan pengukuran yang
dilakukan dengan mata dan nilai HCT dari
penganalisis otomatis.

Meskipun perangkat lunak ImageJ versi Windows

yang digunakan memiliki opsi alat untuk menghitung
pengukuran panjang dalam satuan cm, kami melakukan
percobaan pendahuluan untuk menguji korelasi antara
skala panjang yang diukur oleh penggaris dan perangkat
lunak ImageJ. Pertama, kapiler berisi air ditempatkan di
dekat penggaris 5 cm dengan langkah 0,5 cm yang
ditandai dan kemudian diambil gambarnya seperti yang
dijelaskan di atas. Selanjutnya, panjang yang diketahui
(dengan kenaikan 0,5 cm) dianalisis oleh perangkat lunak
ImageJ

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Halaman. 5

/ 17
Tabel 1. Demografi dan Properti RBC dari Subjek "Populasi Umum" dan Analisis HCT yang Dilakukan oleh Tiga Metode (HCT otomatis, Micro-Eye dan Micro-ImageJ) Variasi nilai HCT yang diukur dengan
ImageJ vs metode mata dan vs HCT otomatis pada kelompok "populasi umum" yang dibagi lagi ke dalam usia subjek, jenis kelamin, MCV, dan status anemia. M, pria, F, wanita; RBC, jumlah sel darah merah;
Hb, hemoglobin; HCT, hematokrit; MCV, volume korpuskular rata-rata; MCH, hemoglobin korpuskular rata-rata. Subjek dianggap anemia ketika Hb <13,5 g/dL untuk laki-laki dan <12 g/dL untuk perempuan,
dan polisitemia ketika HCT> 51% untuk laki-laki dan >48% untuk perempuan. Data disajikan sebagai rata-rata ± SE. *, ^p <0.05; ^^p <0.01; ^^^p <0.001. * untuk HCT otomatis vs. pengukuran yang sesuai
dengan mata, dan ^,^^, ^^^ untuk HCT otomatis atau pengukuran dengan mata vs. pengukuran mikro-HCT ImageJ yang sesuai untuk kelompok yang diperiksa.
RBC (106 Hb MCV KIA HCT Gambar MikroJ
n Usia (tahun) M/F Mata-Mikro (%)
/µL) (g/dL) (fL) (hal) otomatis (%)
(%)
Total 243 47.8 ± 1.6 113/130 4.44 ± 0.06 12.6 ± 0.2 86.9 ± 0.5 28.39 ± 0.23 38.43 ± 0.48^^^ 38.63 ± 0.53^^^ 41.31 ± 0.52
Usia
0-2 bulan 11 18 ± 5,2 hari 6/5 4.1 ± 0.4 13.9 ± 1.5 100.4 ± 2.9 33.8 ± 0.9 41.57 ± 4.7* 39.08 ± 4.3^^^ 40.33 ± 4.14
2 bulan-2 tahun 10 1.11 ± 0.2 7/3 4.5 ± 0.15 11.5 ± 0.3 77.4 ± 2 25.6 ± 0.8 34. 75 ± 1.12^^^ 34.01 ± 1.54^^^ 36.43 ± 1.43
2-20 y 18 13.3 ± 1.4 5/13 4.42 ± 0.16 11.8 ± 0.5 82.7 ± 2 26.8 ± 0.7 36.36 ± 1.37^ 36.53 ± 1.37^^^ 40.1 ± 1.3
21-40 y 54 30.7 ± 0.8 19/35 4.33 ± 0.12 12.2 ± 0.3 85.7 ± 0.9 28.2 ± 0.4 36.93 ± 0.95^^^ 37.53± 1.11^^^ 40.21 ± 1.05
41-60 y 57 51.4 ± 0.7 26/31 4.69 ± 0.12 13.4 ± 0.3 87 ± 0.9 28.4 ± 0.6 40.9 ± 0.9^^^ 41.22 ± 1.04^^^ 43.75 ± 0.99
61-80 y 72 68.8 ± 0.7 35/37 4.53 ± 0.09 12.8 ± 0.3 87.3 ± 0.9 28.3 ± 0.4 39.42 ± 0.81^^^ 39.49 ± 0.87^^^ 42.37 ± 0.97
>80 y 21 86.1 ± 0.9 15/6 3.93 ± 0.16 11.3 ± 0.5 89.1 ± 1.5 28.8 ± 0.6 34.83 ± 1.3^^^ 35.49 ± 1.42^^ 38.1 ± 1.54
Jenis Kelamin
Laki-laki 113 50.7 ± 2.5 4.72 ± 0.09 13.52 ± 0.27 87 ± 0.7 28.4 ± 0.4 40.95 ± 0.74^^^ 41.19 ± 0.82^^^ 43.7 ± 0.81
Perempuan 130 45.2 ± 2.1 4.2 ± 0.06 11.87 ± 0.2 86.8 ± 0.8 28.4 ± 0.3 36.24 ± 0.55^^^ 36.41 ± 0.62^^^ 39.24 ± 0.61
MCV (hanya untuk orang dewasa berusia ≥20 tahun)
<80 24 53.5 ± 4 12/12 4.69 ± 0.25 11.2 ± 0.7 75.2 ± 1.1 23.7 ± 0.5 35.2 ± 1.93^^^ 36.34 ± 2.19^^^ 38.44 ± 2.16
80-95 159 54.1 ± 1.5 72/87 4.54 ± 0.06 13.1 ± 0.2 87.2 ± 0.3 28.6 ± 0.2 39.53 ± 0.51^^^ 39.89 ± 0.59^^^ 42.54 ± 0.58
>95 22 65.2 ± 4.1 11/11 3.55 ± 0.13 11.3 ± 0.5 99.2 ± 0.9 31.9 ± 0.4 35.1 ± 1.3^^^ 34.57 ± 1.51^^^ 38.33 ± 1.47
Non-Polisitemia vs Polisitemia (hanya untuk orang dewasa berusia ≥20 tahun)
Non-Politik 194 55.5 ± 1.4 105/127 4.36 ± 0.06 12.4 ± 0.2 87.1 ± 0.5 28.4 ± 0.2 37.78 ± 0.47^^^ 38.05 ± 0.52^^^ 40.84 ± 0.53
Polisitemik 11 51.5 ± 3.8 8/3 6.08 ± 0.19 17.1 ± 0.3 86 ± 2 28.3 ± 0.7 52 ± 0.57^ 53.88 ± 1.31^^ 55.13 ± 1.4
Non-Anemia vs Anemia (hanya untuk orang dewasa berusia ≥20 tahun)
Total
Anemia 91 54.9 ± 2.3 41/50 3.79 ± 0.07 10.4 ± 0.2 87 ± 1 27.5 ± 0.5 32.72 ± 0.5^^^ 32.63 ± 0.57^^^ 35.49 ± 0.6
Tidak anemia 114 55.6 ± 1.5 54/60 4.98 ± 0.06 14.5 ± 0.1 86.9 ± 0.5 29.1 ± 0.2 43.19 ± 0.5 ^^^ 44 ± 0.6^^^ 46.55 ± 0.55
Laki-laki
Anemia 42 62.4 ± 3.3 3.93 ± 0.09 10.9 ± 0.3 87.3 ± 1.3 27.3 ± 0.9 34.18 ± 0.79^^^ 34.08 ± 0.87^^^ 36.81 ± 0.94
Tidak anemia 54 56.6 ± 2.3 5.4 ± 0.08 15.7 ± 0.2 86.9 ± 0.8 29.2 ± 0.3 46.68 ± 0.48 ^^^ 47.62 ± 0.64^^^ 50.04 ± 0.6
Perempuan
Anemia 49 48.4 ± 3 3.69 ± 0.09 10.1 ± 0.2 87.1 ± 1.4 27.7 ± 0.5 31.69 ± 0.61^^^ 31.48 ± 0.73^^^ 34.46 ± 0.74
Tidak anemia 60 54.6 ± 2 4.59 ± 0.05 13.3 ± 0.1 86.9 ± 0.5 29 ± 0.2 39.88 ± 0.45^^^ 40.48 ± 0.68^^^ 43.22 ± 0.65

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 6 / 17

Tabel 2. Perhitungan HCT dan Properti RBC pada Pasien Penyakit Sel Sabit dan Analisis HCT yang Dilakukan oleh Tiga Metode (HCT Otomatis, Mata-Mikro dan Mikro-ImageJ) Variasi nilai HCT yang diukur
dengan ImageJ vs metode mata dan vs HCT otomatis pada pasien SCD yang dibagi lagi ke dalam usia subjek, jenis kelamin, genotipe dan kandungan HbF (%). M, laki-laki, F, perempuan; RBC, jumlah sel darah
merah; Hb, hemoglobin; HCT, hematokrit; MCV, volume korpuskular rata-rata; MCHC, konsentrasi hemoglobin korpuskular rata-rata; SCD, penyakit sel sabit; SS, sel sabit homozigot; S/β- talasemia, sel sabit β
talasemia. ^p <0.05; ^^p <0.01; ^^^p <0.001 untuk HCT otomatis atau pengukuran dengan mata vs. pengukuran mikro-HCT ImageJ yang sesuai untuk kelompok yang diperiksa.
Usia RBC (106 Hb MCV MCHC HCT Mata-Mikro Gambar MikroJ
n M/F
(tahun) /µL) (g/dL) (fL) (hal) otomatis (%) (%)
(%)
Total 19 26 ± 2.5 9/10 2.98 ± 0.15 9.11 ± 0.35 96.6 ± 3.3 31.2 ± 1.2 28.29 ± 1.09^^^ 28.73 ± 1.07^^^ 30.41 ± 1.12
Usia (tahun)
<20 8 27 ± 3.3 5/7 2.82 ± 0.14 8.59 ± 0.38 92.9 ± 4.5 30.7 ± 1.6 25.98 ± 1.15^^ 26.69 ± 1.29^ 28.37 ± 1.43
>20 11 34.2 ± 1.7 5/6 3.1 ± 0.24 9.5 ± 0.52 99.3 ± 4.7 31.5 ± 1.8 29.98 ± 1.54^^ 30.22 ± 1.48^^^ 31.9 ± 1.52
Jenis Kelamin
Laki-laki 9 25.1 ± 4.1 3.26 ± 0.24 9.38 ± 0.49 91.9 ± 5.4 29.6 ± 2 29.32 ± 1.68^^ 29.4 ± 1.55^^ 31.11 ± 1.65
Perempuan 10 26.7 ± 3.2 2.74 ± 0.16 8.87 ± 0.5 100.9 ± 3.7 32.6 ± 1.3 27.37 ± 1.44^^ 28.13 ± 1.54^^ 29.79 ± 1.57
Genotipe
SS 10 25.7 ± 3.9 4/6 2.74 ± 0.13 9.46 ± 0.43 105.1 ± 4 34.8 ± 1.2 28.57 ± 1.44^^ 29.07 ± 1.41^^ 30.81 ± 1.42
Talasemia S/β 9 26.2 ± 3.4 5/4 3.26 ± 0.26 8.73 ± 0.55 87.2 ± 3.2 27.2 ± 1 27.99 ± 1.75^^ 28.35 ± 1.71^^ 29.97 ± 1.83
Kandungan HbF (%)
<15 7 24.2 ± 4.1 4/3 2.86 ± 0.23 8.66 ± 0.42 95.3 ± 5.3 31.1 ± 2 26.73 ± 1.57^^ 27.11 ± 1.25^ 29.07 ± 1.36
>15 12 27 ± 3.3 5/7 3.06 ± 0.2 9.38 ± 0.49 97.4 ± 4.4 31.3 ± 1.5 29.21 ± 1.45^^^ 29.67 ± 1.5^^^ 31.2 ± 1.58

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 7 / 17

Gambar 1. Penentuan kondisi teknis untuk pencitraan dan analisis kapiler yang optimal. (A) Presentasi skematis dari percobaan awal untuk
menentukan kemiringan dan jarak kamera yang optimal. (B) Efek kemiringan kamera (-60o hingga +60o ) relatif terhadap sumbu kapiler. Signifikansi
diperkirakan relatif terhadap nilai gambar yang dihitung yang diperoleh ketika kamera tidak dimiringkan (0o ). (C) Kamera dipegang pada jarak 10,
15 dan 25 cm dari kapiler yang dicitrakan. Signifikansi ditunjukkan secara relatif terhadap gambar yang diambil pada jarak 10 cm. (D) Efek dari
pembesaran gambar 1X hingga 4X (100-400%) pra-analisis oleh perangkat lunak ImageJ. Tidak ada perubahan signifikan dalam nilai HCT yang
dihitung, yang ditemukan relatif terhadap pembesaran 3X (300%). (E) Analisis HCT komparatif pada gambar kapiler yang diambil oleh kamera yang
berbeda yang dipasang pada berbagai ponsel. (F) Analisis HCT pada gambar kapiler. Setidaknya tiga pengukuran independen dari total tinggi sampel
yang diukur dari RBC-sealant ke batas plasma-udara (jumlah segmen hijau dan biru), dan tinggi yang sesuai dari RBC yang dikemas, dari RBC-
sealant ke batas RBC-lekosit (segmen biru), dilakukan untuk setiap kapiler dengan menggunakan aplikasi ImageJ versi publik gratis. Nilai rata-rata
dibandingkan dengan pengukuran dengan mata dan nilai HCT yang dievaluasi dengan penganalisis otomatis. *p = 0,01-0,05; ***p <0,001.

(Gambar Tambahan 1A). Hasilnya, kami menemukan Hasil. Pertama-tama, kami memeriksa kontribusi
korelasi yang lengkap (R = 1) antara skala panjang ImageJ subjektivitas (yaitu, ketepatan oleh tes dengan
(dalam piksel) dan panjang cm penggaris serta antara skala penggaris/mata) pada pengukuran HCT oleh rutinitas
panjang ImageJ yang dihitung dalam piksel dan cm
(Gambar Tambahan 1B), sehingga mengkonfirmasi
perbandingan numerik yang lengkap antara HCT yang
diestimasi dengan penggaris dan pendekatan ImageJ.
Indeks yang berasal dari HCT dihitung dengan
menggunakan rumus: volume korpuskular rata-rata
(MCV) = HCT x 100/angka RBC; dan konsentrasi Hb
korpuskular rata-rata (MCHC) = Hb x 100/hematokrit, di
mana angka RBC dan nilai Hb berasal dari CBC.

Statistik. Semua data disajikan sebagai nilai rata-rata ±

SEM. ANOVA satu arah yang diikuti dengan post-test
Friedman (GraphPad Prism 4) dilakukan untuk Gambar 2. Efek subjektivitas dari pengukuran dengan mata (mata dan
penggaris) dan evaluasi ImageJ terhadap nilai HCT. Perbedaan yang
membandingkan indeks yang sama yang diukur dengan
signifikan ditemukan untuk nilai HCT yang diperkirakan oleh Pemeriksa
pendekatan yang berbeda. Tingkat signifikansi statistik 1 vs Pemeriksa 2 vs Pemeriksa 3 ketika evaluasi dilakukan dengan mata;
ditunjukkan sebagai p <0.05 (* atau^ ), p <0.01 (** atau^^ ) *p =
atau p <0.001 (*** atau^^^ ), dan p > 0.05 sebagai tidak 0.017. Perbedaan juga signifikan untuk ketiga pemeriksa antara estimasi
signifikan (NS). ImageJ dan estimasi dengan mata (p <0,001). NS, tidak signifikan.

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 8 / 17

Gambar 3. Perbandingan nilai HCT yang diukur dengan HCT makro dan HCT mikro yang diukur dengan mata (mata-mikro) dan dianalisis dengan
ImageJ (mikro-IJ) untuk sampel populasi umum (n = 223). (A) Nilai absolut rata-rata dan (B) perbedaan dalam % antara HCT yang diukur secara
paralel dengan tiga pendekatan. (C) dan (D) Korelasi tinggi, dengan pergeseran atas yang kecil, antara nilai yang dihitung dengan HCT makro atau
dengan mata (mata dan penggaris/skala) dan yang diperoleh dengan pendekatan ImageJ. ***p<0,001; NS, tidak signifikan.

metode micro-HCT dan, jika ditemukan perbedaan yang Kami menguji-223 sampel "populasi umum" yang
signifikan, meminimalkan perbedaan dengan memperbesar dikumpulkan secara acak dari laboratorium hematologi
gambar dan analisis menggunakan perangkat lunak ImageJ (Gambar 3 dan Tabel 1) dan 19 sampel dari pasien SCD
yang secara rutin digunakan. Untuk itu, hasil HCT dari 12 (Tabel 2). Untuk sampel "populasi umum", kami tidak
sampel darah yang diterima secara acak dibandingkan oleh menemukan perbedaan antara HCT otomatis dan
tiga pemeriksa independen. Ketiga pemeriksa tersebut pengukuran dengan mata. Namun, nilai HCT yang diukur
adalah para ahli di bidang metode dan penelitian dengan ImageJ secara signifikan lebih tinggi daripada nilai
laboratorium hematologi dan melakukan dua analisis HCT yang dievaluasi dengan mata (p <0,001) dan HCT
mikro: dengan mata dan menggunakan pendekatan ImageJ otomatis (p <0,001) (Gambar 3A dan Tabel 1). Selain itu,
(Gambar 2). Ketiga pemeriksa melakukan evaluasi mata analisis varians absolut (dalam persen) menunjukkan
tanpa mengetahui hasil dari dua pemeriksa lainnya. perbedaan penting antara nilai yang sesuai yang diukur
Evaluasi dengan perangkat lunak ImageJ dilakukan secara oleh ketiga pendekatan ini, 5,7 hingga 8,8% (Gambar
independen, termasuk menggunakan komputer mereka. 3B). Terlepas dari variasi ini, nilai HCT otomatis dan
Untuk pengukuran dengan mata, masing-masing mata-HCT yang diperoleh berkorelasi kuat (R = 0,918 -
pemeriksa memberikan nilai yang sedikit berbeda namun tidak ditampilkan), dan masing-masing berkorelasi kuat
signifikan [Pemeriksa 1, 37.38 ± 0.66; Pemeriksa 2, dengan indeks yang dievaluasi ImageJ (R = 0,92, Gambar
37.67 ± 0.64 (NS vs Ex # 1); Pemeriksa 3, 37.88 ± 0.65 (p 3C dan R = 0,965, Gambar 3D, masing-masing untuk
= 0.017 vs Ex#1 dan NS vs Ex#2). Semua data adalah HCT otomatis dan mata-HCT).
nilai rata-rata ± SE]. Ketika pemeriksa yang sama menilai Kami membandingkan nilai HCT yang dihitung
HCT dengan ImageJ, variasinya diminimalkan: 38,31 ± dengan ketiga pendekatan ini untuk kelompok yang
0,64, 38,38 ± 0,65, dan 38,38 ± 0,65 untuk Pemeriksa 1, 2 diperiksa, dibagi lagi menjadi beberapa kelompok
dan 3, masing-masing; NS untuk semua perbandingan berdasarkan usia, jenis kelamin, MCV, dan kondisi anemia
antara pemeriksa. Namun, pemeriksaan HCT dengan secara umum, dan dibagi berdasarkan jenis kelamin. Kami
ImageJ vs. pendekatan by-eye untuk dua pemeriksa menemukan nilai yang lebih tinggi secara signifikan dari
pertama menunjukkan perbedaan yang besar dan nilai ImageJ dibandingkan dengan nilai yang diukur
signifikan (semua p <0,001). Sebaliknya, untuk Pemeriksa dengan mata atau nilai yang diukur dengan HCT otomatis
3, tidak ada perbedaan signifikan yang diamati. pada semua subkelompok yang diperiksa, kecuali pada
Kami kemudian membandingkan nilai HCT yang bayi baru lahir berusia 0 hingga 2 bulan (Tabel 1). Yang
diukur dengan tiga metode: (i) HCT otomatis, (ii) terakhir adalah satu-satunya subkelompok di mana indeks
pemeriksaan dengan mata, dan (iii) pemeriksaan dengan HCT otomatis mirip dengan HCT yang dievaluasi ImageJ
ImageJ pada kohort yang besar dan heterogen. Secara (perbedaan rata-rata 6,4 ± 1%, p
keseluruhan, 242 sampel darah yang = 0,26), dan hasilnya lebih tinggi jika dibandingkan
dengan nilai yang diukur dengan mata.
www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 9 / 17
 Karena beberapa indeks darah secara matematis terkait Pengukuran dengan alat ini memiliki keterbatasan
dengan atau diekstrapolasi dari nilai HCT, seperti yang tambahan, yaitu dihitung dan tidak diukur secara langsung,
dijelaskan di bagian Metode, tujuan kami selanjutnya serta membutuhkan peralatan yang mahal dan tenaga
adalah untuk memeriksa efek evaluasi ImageJ pada nilai laboratorium yang terampil; peralatan otomatis mungkin
MCV dan MCHC dibandingkan dengan dua metode tidak sesuai untuk digunakan di daerah pedesaan atau
lainnya (Gambar Tambahan 2A dan C). Kami dalam situasi di mana staf medis berpindah-pindah dari
menemukan perbedaan dalam estimasi by-eye vs ImageJ satu tempat ke tempat lain, misalnya di medan perang atau
untuk kedua indeks tersebut (Gambar Tambahan 2B daerah bencana. Inilah sebabnya mengapa pengukuran
dan D). langsung (mikro-HCT) masih umum digunakan.
Ketika kami membandingkan tiga metode untuk Dalam penelitian ini, kami menunjukkan bahwa teknologi
perhitungan HCT dalam sampel darah yang diperoleh dari sederhana memungkinkan untuk mengatasi sebagian besar
pasien SCD, kami mengamati perbedaan penting dalam kesalahan dan variasi dalam data yang terkait dengan
varians absolut antara nilai yang sesuai yang diukur dengan evaluasi mikro-HCT yang bersifat subyektif (oleh mata
ketiga pendekatan ini: untuk HCT otomatis vs. pengukuran dengan skala mikro atau penggaris) dan dapat
dengan mata, 4,6 ± 0,8%; untuk pengukuran dengan mata menggantikan penggunaan peralatan otomatis yang rumit
vs. pengukuran ImageJ, 5,9 ± 0,5%; dan untuk pengukuran dan mahal di mana peralatan tersebut tidak tersedia. Selain
HCT otomatis vs. pengukuran ImageJ: 7.8 ± 1.3%. Selain itu, kemampuan untuk menganalisis kapiler apa pun pada
itu, serupa dengan kelompok non-SCD, kami menemukan pembesaran besar dengan jumlah yang hampir tidak
tingkat yang lebih tinggi secara signifikan untuk nilai yang terbatas dari RBC yang sesuai vs ketinggian darah total
diukur oleh ImageJ dibandingkan dengan nilai HCT mata memungkinkan untuk mempertimbangkan cacat kapiler,
atau nilai HCT otomatis (p <0,001) pada pasien SCD distribusi darah yang terpengaruh sentrifugasi, dan
(Tabel 2 dan Gambar 4). Selain itu, kami menemukan kekasaran bahan segel di kapiler. Dengan demikian,
perbedaan yang signifikan ketika kami menganalisis data kelemahan metode mikrokapiler untuk estimasi HCT dapat
pada pasien SCD dalam subkelompok berdasarkan usia, diatasi. Selain itu, nilai HCT kapiler yang diukur dengan
jenis kelamin, genotipe, dan kadar Hb janin (HbF) (Tabel ImageJ yang selalu lebih tinggi dibandingkan dengan nilai
2). yang sesuai yang diperoleh dengan mata (p <0,0001) juga
dapat dijelaskan. Di sisi lain, kurangnya pembesaran
Diskusi. Pengukuran HCT, apa pun metodenya, sangat dengan inspeksi oleh mata tidak memungkinkan
penting untuk manajemen medis pasien dengan anemia pemeriksaan cacat kapiler atau kekasaran bahan segel di
atau polisitemia. Namun, meskipun memiliki hasil yang kapiler. Gambar 5 menguraikan beberapa area RBC yang
tinggi dan tes hitung darah lengkap, pengukuran tidak tidak diestimasi dan fraksi plasma yang terlalu tinggi
langsung (HCT otomatis) memiliki banyak keterbatasan, dalam pengukuran dengan mata dan pendeteksiannya yang
seperti volume sampel yang diuji yang diperlukan dan tepat dengan analisis ImageJ (panah pada Gambar 5).
pemeriksaan sel darah dengan morfologi yang tidak Perkiraan yang salah dari fraksi-fraksi dengan mata
normal. Selain itu, pemeriksaan otomatis menghasilkan evaluasi yang salah dan terlalu rendah dari
parameter HCT.

Gambar 4. Perbandingan nilai HCT dan nilai turunan HCT yang diukur dengan pendekatan manual (mata-mikro, mikro-IJ) dan otomatis (makro-
HCT) pada pasien penyakit sel sabit (SCD) (n = 19). Nilai rata-rata untuk HCT (A), MCV (B) dan MCHC (C) yang diukur dengan metode otomatis
dan manual. (D) Korelasi antara mata (mata dan penggaris/skala) dan HCT yang dievaluasi dengan ImageJ (R = 0,99). ***p <0,001; NS, tidak

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 10 / 17

signifikan.

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 11 / 17

 Metode yang disajikan memiliki beberapa
keterbatasan, yang harus dipecahkan oleh pengguna di
masa mendatang. Salah satunya terkait dengan pengaturan
teknis penyiapan dan kondisi pengukuran. Kami
mengindikasikan bahwa kemiringan kamera, jarak antara
kamera dan kapiler, serta zoom akan memengaruhi
gambar. Secara jelas, pemosisian kamera yang tidak tepat
dapat memperkenalkan sumber variabilitas lain, dan
validasi yang lebih signifikan serta penetapan kondisi
pengukuran yang optimal, perlu dilakukan sebelum
sertifikasi sebagai aplikasi standar. Hal yang sama juga
terkait dengan variasi yang mungkin terjadi dalam versi
perangkat lunak. Selain itu, kami membandingkan HCT
kapiler yang diukur dengan ImageJ dan hasil HCT
otomatis yang dievaluasi hanya dengan Sistem Hematologi
ADVIA® 2120i. Meskipun percobaan awal kami tidak
Gambar 5. Presentasi skematis dari perbedaan evaluasi visual HCT menunjukkan perbedaan antara pengukuran HCT yang
dengan mata dan penggaris/skala mikro vs. pendekatan analisis gambar.
Garis hitam putus-putus menandai batas fraksi RBC (merah) dan plasma dilakukan dengan menggunakan kamera yang berbeda, di
(kuning) yang dievaluasi dengan mata. Garis kuning dan hijau masa depan kami wajib membandingkan HCT yang diukur
menunjukkan batas fraksi RBC dan plasma, masing-masing, ketika dengan ImageJ dengan HCT otomatis yang diukur dengan
dievaluasi dengan analisis ImageJ. perangkat dan pendekatan lain.
Sebagai komentar umum dan sebagai target yang
Satu-satunya pengecualian terhadap nilai HCT yang mungkin untuk penelitian lebih lanjut, kami mencatat
lebih tinggi dari ImageJ vs. dengan mata dan HCT bahwa keakuratan penentuan HCT dengan pendekatan apa
otomatis diamati pada bayi baru lahir. Bayi baru lahir pun (makro atau mikro) masih dalam perdebatan. Dengan
adalah satu-satunya subkelompok yang indeks HCT demikian, terlepas dari manfaat obyektif dari teknologi
otomatisnya mirip dengan HCT manual yang dievaluasi yang disajikan, kami perlu mengkonfirmasi bahwa sumber
ImageJ dan secara signifikan lebih tinggi daripada nilai utama kesalahan HCT mikro, yaitu evaluasi plasma yang
yang diukur dengan mata. Karena, dalam praktik klinis saat terperangkap, tidak dapat dikoreksi dengan pendekatan
ini, HCT pada pasien-pasien ini hampir secara eksklusif yang disajikan. Sepengetahuan kami, tidak ada kamera
dievaluasi dengan metode mikrokapiler, terutama karena yang digunakan secara rutin saat ini yang dapat
jumlah darah yang sangat terbatas untuk sampel, temuan memberikan zoom yang diperlukan untuk mendeteksi
ini sangat penting. Dibandingkan dengan nilai yang secara RBC yang terpisah dan plasma yang mengelilinginya.
signifikan lebih rendah yang diamati oleh mata, kurangnya Tentu saja, dimungkinkan untuk mendapatkan nilai HCT
variasi dalam hasil HCT vs ImageJ otomatis dapat yang tepat dengan metode yang lebih canggih, seperti
dijelaskan oleh karakteristik unik dari RBC neonatal. Pada pelabelan biotin dan radioaktif, optik, impedansi, atau
bayi yang sehat, anisositosis ringan dan poikilositosis pendekatan ultrasonik;45–50 tetapi menerapkan salah satu
sering diamati; RBC neonatal berbeda dari RBC dewasa dari metode ini sebagai prosedur rutin dalam praktik klinis
dalam hal kelainan bentuk dan kerapuhannya.39,40 Selain tidak realistis, terutama karena pertimbangan teknis dan
itu, jumlah sel yang diadu, echinosit, sferosit, dan eritrosit ekonomi. Namun, berbeda dengan pendekatan yang
berbentuk abnormal lainnya yang tinggi terlihat pada disajikan di sini, metode mata/penggaris yang secara rutin
neonatus, terutama pada bayi prematur.41,42 Secara khusus, digunakan secara keliru mempertimbangkan, di satu sisi,
fraksi stomatosit lebih dari dua kali lebih tinggi pada plasma yang terperangkap (yang menyebabkan evaluasi
neonatus dibandingkan dengan darah orang dewasa, HCT yang meningkat secara keliru), dan, di sisi lain, cacat
masing-masing 40% vs 18%.43,44 Dengan demikian, kapiler, kekasaran bahan segel di kapiler dan margin yang
"pembengkakan" asli tersebut dapat mengakibatkan tidak jelas antara lapisan sel darah merah dan sel darah
penurunan yang cukup besar dalam perbedaan antara sifat putih, semuanya terutama menghasilkan nilai HCT yang
morfologi RBC yang secara de-facto diperiksa dengan lebih rendah secara keliru. Meskipun tidak mungkin untuk
pendekatan otomatis dan manual, dan, dengan demikian, mengatasi tantangan plasma yang terperangkap, namun
nilai HCT yang serupa akan diperoleh. Karena darah kami sangat menyarankan metode ini untuk
neonatal kurang tersedia untuk pemeriksaan otomatis, satu- meminimalkan sumber kesalahan lainnya.
satunya kemungkinan untuk menguji HCT pada pasien ini Oleh karena itu, pendekatan mikro-HCT manual
adalah micro-HCT; analisis ImageJ dapat memberikan dengan protokol pengukuran yang telah ditingkatkan dapat
akurasi yang diperlukan untuk evaluasi HCT pada menjadi solusi yang lebih andal dan murah untuk praktik
neonatus. Karena hasil pendekatan ImageJ sedikit lebih klinis rutin pengukuran HCT. Selain itu, karena parameter
tinggi daripada yang diperoleh dengan mata, pendekatan ini penting secara klinis dan digunakan sebagai faktor
ini mungkin memerlukan beberapa penyesuaian dalam prognostik,23,36,51 evaluasi yang akurat sangat penting.
kebijakan oleh ahli neonatologi mengenai ambang batas Selain itu, pendekatan yang disarankan akan bermanfaat
pemberian transfusi darah pada neonatus. untuk menentukan standar klinis baru untuk HCT dan
parameter terkait.
www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 12 / 17
Ucapan terima kasih. Proyek ini sebagian didanai oleh

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 13 / 17

Fondation Botnar serta oleh Baugarten Stiftung, Susanne bantuan teknis mereka yang luar biasa, dan terutama Hiba
& René Braginsky Stiftung dan Ernst Göhner Stiftung. Zoabi, Feras Afife, dan Hoda Aiada, yang telah melakukan
Penulis mengucapkan terima kasih kepada staf Divisi tes darah rutin.
Laboratorium Hematologi Emek Medical Center untuk

Referensi:
1. Billett H. Hemoglobin dan Hematokrit. Dalam: Walker HK, ed., (ed). Metode 15. Hudson I, Cooke A, Holland B, dkk. Volume sel darah merah dan curah
Klinis: Anamnesis, Pemeriksaan Fisik, dan Pemeriksaan Laboratorium jantung pada bayi prematur yang mengalami anemia. Arsip Penyakit pada
(1990). Masa Kanak-kanak. 1990;65(7 Spec No):672-675.
2. Quinn JG, Tansey EA, Johnson CD, Roe SM, Montgomery LEA. Darah: tes doi:10.1136/adc.65.7_Spec_No.672
yang digunakan untuk menilai sifat fisiologis dan imunologis darah. https://doi.org/10.1136/adc.65.7_Spec_No.672
Kemajuan dalam Pendidikan Fisiologi. 2016;40(2):165-175. PMid: 2386399 PMCid: PMC1590183
doi:10.1152/advan.00079.2015 https://doi.org/10.1152/advan.00079.2015 16. Jones JG, Holland BM, Hudson IRB, Wardrop CAJ. Jumlah sel darah merah
PMid:27068991 yang bersirkulasi versus hematokrit sebagai deskriptor utama
3. Green R, Wachsmann-Hogiu S. Perkembangan, Sejarah, dan Masa Depan p e n g a n g k u t a n oksigen oleh darah. British Journal of Haematology.
Penghitung Sel Otomatis. Klinik dalam Kedokteran Laboratorium. 1990;76(2):288-294. doi:10.1111/j.1365-2141.1990.tb07886.x
2015;35(1):1- https://doi.org/10.1111/j.1365-2141.1990.tb07886.x
10. doi:10.1016/j.cll.2014.11.003 PMid:2094332
https://doi.org/10.1016/j.cll.2014.11.003 17. Blanchette VS, Zipursky A. Penilaian anemia pada bayi baru lahir.
PMid:25676368 Perinatologi Klinis. 1984;11(2):489-510. https://doi.org/10.1016/S0095-
4. Vis JY, Huisman A. Verifikasi dan kontrol kualitas penganalisis hematologi 5108(18)30930-8
rutin. Jurnal Internasional Hematologi Laboratorium. 2016;38(Suppl 1):100- 18. Phillips HeatherM, Abdel-Moiz A, Gareth Jones J, dkk. Penentuan massa sel
109. doi: 10.1111/ijlh.12503 darah merah dalam penilaian dan pengelolaan anemia pada bayi yang
https://doi.org/10.1111/ijlh.12503 PMid:27161194 membutuhkan transfusi darah. The Lancet. 1986;327(8486):882-884.
5. BOURNER G, DHALIWAL J, SUMNER J. Evaluasi Kinerja Penganalisis doi:10.1016/S0140-6736(86)90988-8
Hematologi Otomatis Penuh Terbaru dalam Pengaturan Laboratorium https://doi.org/10.1016/S0140-6736(86)90988-8
Komersial Besar: Studi 4 Arah, Berdampingan. Laboratorium Hematologi. 19. Mock DM, Bell EF, Lankford GL, Widness JA. Hematokrit Berkorelasi Baik
2005;11(4):285-297. doi:10.1532/LH96.05036 dengan Volume Sel Darah Merah yang Bersirkulasi pada Bayi Berat Badan
https://doi.org/10.1532/LH96.05036 Lahir Sangat Rendah. Penelitian Pediatrik. 2001;50(4):525-531.
PMid:16475476 doi:10.1203/00006450- 200110000-00017
6. ADVIA. Panduan operator sistem hematologi 2120/2120i. Diterbitkan secara https://doi.org/10.1203/00006450-200110000-00017
online 2010. PMid:11568298
7. Lehner J, Greve B, Cassens U. Otomasi dalam Hematologi. . Pengobatan 20. Huber H, Lewis SM, Szur L. Pengaruh Anemia, Polisitemia, dan
Transfusi dan Hemoterapi. 2007;34:328-339. Splenomegali terhadap Hubungan antara Hematokrit Vena dan Volume Sel
https://doi.org/10.1159/000107368 Darah Merah. British Journal of Haematology. 1964;10(4):567-575.
8. Buttarello M. Diagnosis laboratorium anemia: apakah parameter sel darah doi:10.1111/j.1365-2141.1964.tb00733.x
merah lama dan baru berguna dalam klasifikasi dan pengobatan, bagaimana https://doi.org/10.1111/j.1365-2141.1964.tb00733.x
caranya? Jurnal Internasional Hematologi Laboratorium. 2016;38:123-132. PMid:14218458
doi:10.1111/ijlh.12500 21. Bentley SA, Lewis SM. Hubungan antara Volume Sel Darah Merah Total,
https://doi.org/10.1111/ijlh.12500 PMid:27195903 Volume Plasma dan Hematokrit Vena. British Journal of Haematology.
9. McMahon DJ, Carpenter RL. Perbandingan Penentuan Hematokrit Berbasis 1976;33(2):301-307. doi:10.1111/j.1365-2141.1976.tb03542.x
Konduktivitas Dengan Metode Laboratorium Konvensional Pada Transfusi https://doi.org/10.1111/j.1365-2141.1976.tb03542.x
Darah Autologus. Anestesi & Analgesia. 1990;71(5):541-544. PMid:1268099
doi:10.1213/00000539-199011000-00015 22. Bull BS, Fujimoto K, Houwen B, dkk. Rekomendasi Dewan Internasional
https://doi.org/10.1213/00000539-199011000-00015 PMid:2221416 untuk Standardisasi Hematologi (ICSH) untuk metode "referensi pengganti"
10. Novis DA, Walsh M, Wilkinson D, St Louis M, Ben-Ezra J. Produktivitas untuk volume sel yang dikemas. Laboratorium Hematologi. 2003;9(1):1-9.
laboratorium dan tingkat peninjauan apusan darah tepi manual: sebuah studi 23. Mohandas N, Clark MR, Kissinger S, Bayer C, Shohet SB. Ketidakakuratan
College of American Pathologists Q-Probes terhadap 95.141 penentuan yang terkait dengan pengukuran otomatis konsentrasi hemoglobin sel rata-
jumlah darah lengkap yang dilakukan di 263 institusi. Arsip Patologi & rata dalam sel yang mengalami dehidrasi. Blood. 1980;56(1):125-128.
Kedokteran Laboratorium. 2006;130(5):596-601. https://doi.org/10.1182/blood.V56.1.125.125
https://doi.org/10.5858/2006-130-596-LPATRO PMid: 7388177
PMid:16683868 24. Bull BS, Hay KL. Apakah indeks sel darah merah bersifat internasional?
11. Kakkar N, Makkar M. Sitogram Sel Darah Merah yang Dihasilkan oleh Arsip Patologi & Kedokteran Laboratorium. 1985;109(7):604-606.
Penganalisis Hematologi Otomatis ADVIA 120: Pola Karakteristik dalam 25. Bull BS, Rittenbach JD. Hematokrit referensi yang diusulkan yang berasal
Kondisi Hematologi Umum. . Kedokteran Laboratorium. 2009;40(9):549- dari beberapa penentuan MCHC melalui pengukuran hemoglobin.
555. https://doi.org/10.1309/LM23R7FULSTUJSJD Hematologi Klinis & Laboratorium. 1990;12(Suplemen 1):43-53.
12. Huisjes R, Makhro A, Llaudet-Planas E, dkk. Densitas, heterogenitas, dan 26. Furth FW. Pengaruh sferositosis terhadap volume plasma yang terperangkap
deformabilitas sel darah merah sebagai penanda tingkat keparahan klinis pada dalam kolom sel darah merah kapiler dan hematokrit Wintrobe. Jurnal
sferositosis herediter. Haematologica. 2020;105(2):338-347. Kedokteran Laboratorium dan Klinis. 1956;48(3):421-430.
doi:10.3324/haematol.2018.188151 27. Rustad H. Koreksi Plasma yang Terperangkap dalam Penentuan Mikro-
https://doi.org/10.3324/haematol.2018.188151 Hematokrit. Jurnal Skandinavia Investigasi Klinis dan Laboratorium.
PMid:31147440 PMCid:PMC7012482 1964;16(6):677-679. doi:10.3109/00365516409055233
13. Guthrie DL, Pearson TC. Pengukuran PCV dalam pengelolaan pasien https://doi.org/10.3109/00365516409055233 PMid:14224492
polisitemia. Hematologi Klinis & Laboratorium. 1982;4(3):257-265. 28. Savitz D, Sidel VW, Solomon AK. Sifat Osmotik Sel Darah Merah Manusia.
doi:10.1111/j.1365-2257.1982.tb00075.x Jurnal Fisiologi Umum. 1964;48(1):79-94. doi:10.1085/jgp.48.1.79
https://doi.org/10.1111/j.1365-2257.1982.tb00075.x PMid:6756765 https://doi.org/10.1085/jgp.48.1.79
14. Beautyman W, Bills T. Kesalahan osmotik dalam pengukuran volume sel PMid:14212152 PMCid:PMC2195405
darah merah. The Lancet. 1974;304(7885):905-906. doi: 10.1016/S0140- 29. Stäubli M, Roessler B, Straub PW. Perangkap cairan eritrosit di bawah
6736(74)91246-X hipoosmolar kondisi. Blut. 1987;54(4):239-245.
https://doi.org/10.1016/S0140-6736(74)91246-X doi:10.1007/BF00594200
https://doi.org/10.1007/BF00594200 PMid:3828540

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 14 / 17

30. Pearson TC, Guthrie DL. Plasma yang Terperangkap dalam https://doi.org/10.1203/00006450-199311000-00024
Mikrohematokrit. American Journal of Clinical Pathology. 1982;78(5):770- PMid:8284111
772. doi:10.1093/ajcp/78.5.770 41. Segal GB, Palis J. Hematologi bayi baru lahir. Dalam: Lichtman M, ed.
https://doi.org/10.1093/ajcp/78.5.770 (eds.). Williams Hematologi. 7th ed. Ke-5. Mcgraw Hill; 2006.
PMid:7137120 42. Ceriotti F. Interval Referensi Pediatrik. Dalam: Soldin SJ, ed., (eds.). Kimia
31. Karlow MA, Westengard JC, Bull BS. Apakah diameter tabung Klinis. Edisi ke-3. Jakarta: AACC Press; 2005.
mempengaruhi volume sel yang dikemas? Hematologi Klinis & 43. Goossen LH. Hematologi dan hemostasis pediatrik dan geriatri. Dalam:
Laboratorium. 1989;11(4):375-383. doi:10.1111/j.1365-2257.1989.tb00236.x Keohane E, penyunting. Hematologi Rodak Prinsip dan Aplikasi Klinis. 5th
https://doi.org/10.1111/j.1365-2257.1989.tb00236.x PMid:2605878 ed. Ed. Keohane E, ed., Rodak's Hematology Clinical Principles and
32. Bryner MA, Houwen B, Westengard J, Klein O. Hematokrit mikro yang Applications. 5. Elsever; 2015.
berputar dan volume sel darah merah rata-rata dipengaruhi oleh perubahan 44. Esan AJ. Perbedaan hematologi pada bayi baru lahir dan penuaan: sebuah
keadaan oksigenasi sel darah merah. Hematologi Klinis & Laboratorium. studi tinjauan. Jurnal Internasional Hematologi & Transfusi. 2016;3(3):178-
1997;19(2):99-103. doi:10.1046/j.1365-2257.1997.00223.x 190. https://doi.org/10.15406/htij.2016.03.00067
https://doi.org/10.1046/j.1365-2257.1997.00223.x PMid:9218148 45. Meyer LM. Penentuan volume darah dengan eritrosit berlabel kromium
33. Schneider CA, Rasband WS, Eliceiri KW. NIH Image to ImageJ: 25 t a h u n radioaktif (Cr 51). Jurnal Asosiasi Medis Amerika. 1956;160(15):1312-1315.
analisis gambar. Metode Alam. 2012;9(7):671-675. doi:10.1038/nmeth.2089 doi:10.1001/jama.1956.02960500042011b
https://doi.org/10.1038/nmeth.2089 https://doi.org/10.1001/jama.1956.02960500042011b
PMid:22930834 PMCid:PMC5554542 PMid:13306548
34. Alsous MM, Hawwa AF, McElnay JC. Hematokrit, volume darah, dan luas 46. Dirksen JW, Quaife MA, Paxson CL, Barton TP. Evaluasi dan Pengujian Sel
permukaan bercak darah kering - model kuantitatif. Pengujian dan Analisis Darah Merah Berlabel Technetium Tc-99m Berlabel In Vitro pada Dua
Obat. 2020;12(4):555-560. doi:10.1002/dta.2776 Model Hewan untuk Penentuan Volume RBC Neonatal. Penelitian Pediatrik.
https://doi.org/10.1002/dta.2776 PMid:32061031 1981;15(6):905-907. doi:10.1203/00006450-198106000-00004
35. del Ben F, Biasizzo J, Curcio F. Metode yang cepat, tidak merusak, dan https://doi.org/10.1203/00006450-198106000-00004
berbiaya rendah untuk penentuan hematokrit bercak darah kering PMid:7243392
menggunakan analisis gambar. Kimia Klinis dan Kedokteran Laboratorium 47. Mock D, Lankford GL, Widness JA, Burmeister LF, Kahn D, Strauss RG.
(CCLM). 2019;57(5):e81-e82. doi:10.1515/cclm-2018-0755 Pengukuran volume sel darah merah yang bersirkulasi menggunakan sel
https://doi.org/10.1515/cclm-2018-0755 darah merah berlabel biotin: validasi terhadap sel darah merah berlabel 51Cr.
PMid:30179847 Transfusi. 1999;39(2):149-
36. Brugnara C, Mohandas N. Indeks sel darah merah dalam klasifikasi dan 155. doi:10.1046/j.1537-2995.1999.39299154728.x
pengobatan anemia. Opini Terkini dalam Hematologi. 2013;20(3):222-230. https://doi.org/10.1046/j.1537-2995.1999.39299154728.x
doi:10.1097/MOH.0b013e32835f5933 PMid:10037124
https://doi.org/10.1097/MOH.0b013e32835f5933 PMid:23449069 48. Mock DM, Mock NI, Lankford GL, Burmeister LF, Strauss RG, Widness JA.
37. Hoffman R, Benz EJr, Shattil SJ, Furie B. Hematologi: Prinsip Dasar dan Volume Sel Darah Merah Dapat Ditentukan Secara Akurat pada Domba
Praktik. . Edisi ke-4. 4th ed. Churchill-Livingstone; 2004. Menggunakan Label Biotin Nonradioaktif. Penelitian Pediatrik.
38. Pearson TC. Polisitemia yang nyata. Ulasan Darah. 1991;5(4):205- 2008;64(5):528-532. doi:10.1203/PDR.0b013e318183f119
213. doi:10.1016/0268-960X(91)90010-A https://doi.org/10.1203/PDR.0b013e318183f119
https://doi.org/10.1016/0268-960X(91)90010-A PMid:18596580 PMCid:PMC2677971
39. Linderkamp O, Wu PYK, Meiselman HJ. Geometri Sel Darah Merah 49. Zeidan A, Golan L, Yelin D. Pengukuran hematokrit in vitro menggunakan
Neonatal dan Dewasa. Penelitian Pediatrik. 1983;17(4):250-253. sitometri aliran yang dikodekan secara spektral. Optik Biomedis Ekspres.
doi:10.1203/00006450-198304000-00003 2016;7(10):4327-4334. doi:10.1364/BOE.7.004327
https://doi.org/10.1203/00006450-198304000-00003 PMid:6856385 https://doi.org/10.1364/BOE.7.004327
40. Linderkamp O, Friederichs E, Meiselman HJ. Sifat Mekanik dan Geometrik PMid:27867734 PMCid:PMC5102548
Eritrosit Neonatal dan Dewasa yang Dipisahkan Densitasnya. Pediatrik 50. Jalal UM, Kim SC, Shim JS. Analisis histogram untuk penentuan hematokrit
Penelitian. 1993;34(5):688-693. cepat berbasis ponsel pintar. Optik Biomedis Ekspres. 2017;8(7):3317-3328.
doi:10.1203/00006450-199311000-00024 doi:10.1364/BOE.8.003317
https://doi.org/10.1364/BOE.8.003317
PMid:28717569 PMCid:PMC5508830
51. Rocha S, Costa E, Rocha-Pereira P, dkk. Penanda komplementer untuk
klasifikasi keparahan klinis sferositosis herediter pada pasien yang tidak
displenektomi. Sel Darah, Molekul, dan Penyakit. 2011;46(2):166-170.
doi:10.1016/j.bcmd.2010.11.001
https://doi.org/10.1016/j.bcmd.2010.11.001 PMid:21138793

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 15 / 17

File tambahan:

Tambahan Gambar 1. Korelasi antara panjang yang diukur dengan skala perangkat lunak ImageJ (dalam AU) dan penggaris (dalam cm). Jarak 5
cm dengan periode 0,5 cm secara bertahap diukur dengan menggunakan perangkat lunak ImageJ (A) dan dikorelasikan dengan nilai penggaris
koresponden (B).

Tambahan Gambar 2. Perbandingan estimasi indeks darah yang berasal dari nilai HCT. Gambar 3. Nilai rata-rata dan korelasi antara MCV (A dan
B) dan MCHC (C dan D) ketika HCT diukur secara paralel dengan tiga pendekatan. ***p <0,001; NS, tidak signifikan.

www.mjhid.org Mediterr J Hematol Infect Dis 2022; 14; e2022049 Hal. 16 / 17