Aula Questoes Micro Clinica
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SUMÁRIO PÁGINA
Apresentação 1
1. Conceitos Básicos em Microbiologia 2
2. Estrutura dos Microorganismos 2
3. Características das Bactérias 6
4. Coleta de Amostras 14
5. Transporte de Amostras 17
6. Recebimento de Amostras 21
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7. Meios de Cultura 22
8. Coloração 42
9. Provas de Controle de Qualidade 60
10. Lista de Questões Apresentadas 61
11. Gabarito 74
12. Referências Bibliográficas 74
Olá pessoal,
Sou a Professora Thaiana Cirqueira, sou Bacharel em Biomedicina e
mestranda na Universidade de São Paulo no Programa de Hemoterapia.
Atualmente trabalho na Secretaria de Saúde do Distrito Federal exercendo
atividades pertinentes as Análises Clínicas e Hemoterapia. Estou aqui para
acompanhar vocês no estudo deste módulo de Microbiologia para
concursos públicos.
Nesta aula iniciaremos os estudos dos nossos microorganismos com
alguns conceitos básicos, coleta, transporte de amostras, meios de
cultura e coloração de lâminas microbiológicas.
Espero que aproveitem bem este módulo e que todos alcancem a
aprovação!
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O que é a microbiologia?
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multicelulares complexos que junto com os protozoários são comumente
denominados como parasitas.
Dessa forma, podemos citar diversas características essenciais que
cada um desses organismos possui que os diferenciam uns dos outros.
Por exemplo, as bactérias, os fungos, os protozoários e os helmintos são
organismos celulares, enquanto os vírus são organismos acelulares. Essas
diferenças são baseadas em três principais critérios:
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ÁCIDO NUCLEICO DNA OU RNA TANTO DNA TANTO DNA TANTO DNA COMO
COMO RNA COMO RNA RNA
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As análises das características morfológicas das bactérias são importantes
para classificação preliminar e para o conhecimento de algumas
propriedades importantes do ponto de vista industrial.
Tamanho:
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Micrococos – cocos.
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As células bacterianas
cilíndricas ou em
bastonetes (bacilos) não apresentam a mesma disposição dos cocos, mas
podem apresentar-se isolados, aos pares (diplobacilos) e em cadeias
(estreptobacilos). Em alguns casos esses arranjos não constituem
padrões morfológicos característicos, mas é devido às etapas de
crescimento ou às condições de cultivo. De um modo geral, essas duas
formas de bactérias (cocos e bacilos) são as mais comuns entre as
contaminantes nas indústrias de açúcar e de álcool.
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Parede celular:
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membrana externa que é composta por lipoproteínas, fosfolipídios,
proteínas e lipopolissacarídeos.
Flagelos:
Pêlos (Fímbrias):
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Glicocálice:
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grupos fisiológicos de bactérias: as psicrófilas têm temperatura ótima de
crescimento entre 15 - 25ºC; as mesófilas têm temperatura ótima de
crescimento entre 25 - 45ºC; e as termófilas têm temperatura ótima de
crescimento entre 45 - 80ºC.
4. Coleta de amostras
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7. Trato gastrointestinal: A confirmação laboratorial de uma infecção
intestinal efetua-se, usualmente, pela detecção de ovos e parasitas,
por montagens de material fecal com solução salina ou iodada, ou
isolando-se bactérias de amostras de fezes.
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5. Transporte de amostras:
Tabela 02- Tipos de meio de transporte com o respectivo material a ser transportado.
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Os meios de transporte preservam a viabilidade dos microrganismos
nas amostras, mas evitam a proliferação bacteriana.
Coleta e/ou transporte inadequado podem ocasionar falhas no
isolamento do agente etiológico causador da doença.
Para cada material em análise existe critérios diferentes para o
melhor e mais adequada realização do exame. A tabela abaixo é um
esquema com cada material, o tempo de envio ao laboratório,
estabilidade da amostra e temperatura de transporte:
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Broncoalveolar refrigerada
Swab com < 12h em TA <24h TA
meio de em TA
Nasal transporte e
lâmina de
Gram
Tudo estéril < 2h em TA <24h TA
Líquidos refrigerada
Orgânicos Frasco de < 12h em TA <24h em TA TA
(pleural, hemocultura,
0
peritoneal, método
ascítico, automatizado
diálise, Frasco de < 2h em TA ou <12h em TA TA
pericárdico, hemocultura, 12h a 35+/-
sinovial) método 2°C
manual
Frasco de < 12h em TA <12h em TA TA
hemocultura,
método
Sangue e automatizado
Medula óssea Frasco de < 2h em TA ou <12h em TA TA
hemocultura, 12h a 35+/-
método 2°C
manual
Tubo ou < 2h em TA <24h TA
Fragmentos de frasco refrigerada
biópsia, tecido contendo
e osso solução
fisiológica
estéril
Frasco estéril < 1h em TA <24h TA
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seco refrigerada
se coloca em
Fezes meio
conservante
Com <12h TA ou <48h TA
conservante 24h refrigerada refrigerada
Líquor Tubo estéril Imediatamente, <24h TA
TA refrigerada
Cateter Tubo estéril <1h em TA <12h TA
refrigerada
Raspado da Swab fino <2h em TA <24h em TA TA
conjuntiva com meio de
transporte
Raspado de Semeadura < 2h em TA <12h em TA TA
córnea diretamente
em meio
adequado
Fluido vítreo Seringa com Imediatamente <12h TA
ponta em TA refrigerada
protegida ou
frasco de
hemocultura
Urina de jato Frasco estéril <2h em TA < 24h Refrigerada
médio ou refrigerada
Até 12h
refrigerada
Esperma Frasco estéril <2h em TA <12h TA
refrigerada
Vol. > 2ml, < 3h em TA <12h TA
seringa com refrigerada
ponta
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bloqueada,
Cultura de sem bolha de
anaeróbio ar
Frasco de < 12h em TA <24h em TA TA
hemocultura,
método
automatizado
Frasco de <2h em TA ou <12h em TA TA
hemocultura, 12h a 35°C +/-
método 2°C
manual
Vol. <1ml, < 30 min. em <1h TA
seringa com TA refrigerada
ponta
bloqueada,
sem bolha de
ar
Sendo TA = temperatura ambiente.
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7. Meios de Cultura
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condições físicas (pH, temperatura, pressão osmótica), e condições
ambientais favoráveis (ambiente estéril).
Bom, para escolhermos qual será o meio mais adequado, vamos
analisar as características que cada um apresenta.
Primeiro, precisamos classificar os meios de cultura quanto ao estado
físico, quanto à procedência dos constituintes e quanto à composição
química.
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A) álcool 70%.
B) xilol.
C) ágar-ágar.
D) formol.
E) Metanol
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Comentário: O componente utilizado nos meios de cultura é o ágar-ágar,
um hidrocoloide que forma base gelatinosa dos meios de cultura.
Resposta: Letra C
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Meios de transporte/conservação:
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Skim-Milk: é utilizado para preservação de microrganismos e
recomendado para o cultivo e enumeração de microrganismos
encontrados na indústria de lacticínios.
Meios de crescimento:
Meios de enriquecimento:
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Caldo Tioglicolato: é um meio de enriquecimento para
Clostridium perfringens.
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nos permite diferenciar as bactérias lactose (+) e lactose (-), pois elas
formam cores distintas.
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Comentário:
a) São aqueles meios líquidos ricos em nutrientes que permitem que as
bactérias contidas na amostra coletada cresçam quantitativamente. São
meios que estimulam o crescimento de determinados microrganismos,
mas não contêm substancias que inibem.
b) são aqueles que permitem selecionar e isolar organismos específicos
que estão misturados com outros em uma mesma amostra, através da
adição de inibidores que irão impedir o crescimento de organismos não
desejados e favorecer o crescimento daqueles organismos que se deseja
isolar.
c) são meios que devido a adição de alguns reagentes ou substâncias
resultam em um tipo de crescimento ou reação específica, o que permite
estabelecer diferenças entre microrganismos muito parecidos.
d) empregado nas determinações de vitaminas, antibióticos e
aminoácidos.
Resposta: Letra C.
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08) (CESPE – HEMOBRÁS – ESPECIALISTA EM PRODUÇÃO DE
HEMODERIVADOS – FARMÁCIA – 2008). Sabendo que os meios de
cultura consistem da associação qualitativa e quantitativa de substâncias
que fornecem os nutrientes necessários ao desenvolvimento (cultivo) de
microrganismos fora do seu meio natural, julgue os itens a seguir.
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fermenta manitol, acidificando o meio que passa de rosa para amarelo.
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ser marrom (por isso o nome de Agar chocolate :D). Esse meio favorece
o crescimento da maioria das bactérias, incluindo algumas que não
crescem em Agar sangue.
Meios cromogênicos:
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satelitismo (teste para identificação presuntiva de Haemophilusspp).
Resposta: Letra A.
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presença de bactérias aeróbias”, e além dos aeróbios, avalia a
presença de microaerófilos e anaeróbios, enquanto o tioglicolato sem
indicador é “usado para cultivo de microrganismos anaeróbios”. O Agar-
MacConkey é “meio seletivo para bactérias Gram-negativas e diferencial
para bactérias fermentadoras e não fermentadoras de lactose”. E o
manitol é “meio seletivo usado para o isolamento de estafilococos
patogênicos, e o principal patógeno isolado nesse meio é o S. aureus.
Resposta: Letra D
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II. Meio para cultivo de estreptococos, meningococos, penumococos,
enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos.
III. É um meio derivado de nutrientes de cérebro, coração peptona e
dextrose.
Essas características são referentes a qual meio de cultura?
A) Caldo BHI
B) Caldo selenito
C) Ágar CLED
D) Ágar sangue
E) Ágar Chocolate
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principalmente aquelas que não exigem muitos suprimentos para crescer.
Resposta: Letra B.
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(D) Quando se deseja obter um ambiente rico em O2 para o
crescimento de bactérias, deve se acender uma vela no fundo de uma
jarra, fechando-se hermeticamente essa jarra.
(E) Os meios de cultura não devem ser preparados no próprio
laboratório.
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mais comuns e selecionar meios especializados quando o clinico suspeitar
de um organismo específico.
8. Coloração:
Coloração de Gram:
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negativas e as bactérias gram-positivas. Mas para entendermos a
coloração de gram, precisamos diferenciar as bactérias em gram-
negativas e gram-positivas.
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ambiente, pois os nutrientes devem atravessá-la para manter o
metabolismo da célula. O componente lipopolissacarídeo (LPS) da
membrana externa das bactérias gram-negativas atua como
antígenos e são úteis para diferenciar as espécies das bactérias.
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ao cristal violeta-iodo. Ao contrário, nas bactérias gram-negativas, o
álcool dissolve a membrana externa, fazendo com que o corante violeta-
iodo entre dentro da membrana, e aí as bactérias gram-negativas ficam
incolores com a lavagem de álcool, e com a adição do corante safarina
torna as células cor-de-rosa.
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7. Após essa etapa, lavar a lâmina com água destilada e deixar secar;
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lococcus aureus para serem coradas pela coloração de Gram (cristal
violeta, lugol, álcool, fucsina diluída). Após fixar os esfregaços pelo calor,
o estagiário realizou a coloração, porém inverteu a ordem da utilização
dos corantes (fucsina, álcool diluído, cristal violeta, lugol). Qual foi o
resultado da coloração observado ao microscópio para E. coli e S. aureus,
respectivamente?
A) Bacilos vermelho claros e cocos vermelho-escuros.
B) Bacilos vermelho-claros e bacilos violeta-escuros.
C) Bacilos e cocos vermelho-claros.
D) Bacilos e cocos violeta-escuros.
E) Cocos vermelho-claros e cocos violeta-escuros.
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2) Os micro-organismos Gram-negativos possuem uma camada externa
composta de lipopolissacarídeos, lipoproteínas e fosfolipídios.
3) Apenas os micro-organismos Gram-positivos têm uma membrana
externa contendo endotoxina (lipopolissacarídeo).
4) Os micro-organismos Gram-positivos e os Gram-negativos contêm
peptideoglicano; contudo, nos primeiros, a parede é única e fina e nos
segundos a parede é múltipla e espessa. Estão corretas, apenas:
A) 1 e 4.
B) 1 e 3.
C) 2 e 3.
D) 3 e 4.
E) 1 e 2.
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celular. Essa cápsula torna a bactéria vulnerável à fagocitose por
monócitos, podendo dificultar sua fixação tecidos do hospedeiro.
(C) os organismos gram-positivos são assim denominados devido às
características de coloração próprias da sua finíssima camada externa de
peptidoglicano, além disso, esses micro-organismos possuem amplo
complexo de Golgi e mitocôndrias em seu interior.
(D) as bactérias são classificadas em Gram-positivas ou Gram-negativas
em função da diferença na arquitetura da parede celular. A parede celular
Gram-positiva consiste de uma camada espessa de peptidoglicano (~30
nm), enquanto a parede celular da Gram-negativa apresenta camada
mais fina de peptidoglicano (~10nm) e sua estrutura e composição da
membrana mais complexas.
(E) bactérias como as microbactérias têm glicolipídeos múltiplos que lhes
conferem uma aparência de bolor, acarretando desvantagens biológicas,
impedindo a infecção ao hospedeiro.
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(PHE, na sigla em inglês), em 2015, foram registrados 17.586 casos da
infecção no país – o número só não ultrapassa os registros de 1967, com
19.305 notificações. A escarlatina é uma infecção bacteriana, causada por
estreptococos do grupo A, que atinge principalmente crianças com idades
entre 5 e 12 anos.” Fonte: Adaptado de VEJA.com/Divulgação
(21/03/2016). Referente às características das bactérias, é CORRETO
afirmar que:
(A) A diferenciação entre as bactérias é realizada exclusivamente pelas
suas características morfológicas.
(B) Os aspectos microscópicos, incluindo o tamanho, forma e os arranjos
dos organismos (cocos, bastonetes, curvos ou espiralados), determinam a
capacidade das bactérias de resistir a certos antibióticos.
(C) Coloração de Gram é um teste rápido que permite aos clínicos a
diferenciação entre as duas mais importantes classes de bactérias.
(D) As bactérias Gram negativas têm a camada de peptidoglicano espessa
contendo ácido teicoico e ácidos lipoteicoicos.
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(D) No geral, os procedimentos de coleta seguem protocolos específicos
que facilitam o cultivo dos micro-organismos suspeitos, de acordo com o
sítio a ser investigado.
(E) Todas estão corretas.
Gabarito: E
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C) Bactérias Gram negativas são aquelas que apresentam uma camada
lipídica não corada pelo corante devido à afinidade entre a pigmentação e
a camada de fosfolipídeos.
D) As bactérias Gram-positivas têm parede celular espessa e única de
peptidoglicanos, que, ao contato com a coloração de Gram, adquire cor
púrpura ou azul.
Coloração de Ziehl-Neelsen
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nas propriedades que alguns gêneros bacterianos apresentam de
resistir ao descoramento feito por uma solução álcool-ácido, que
fazem com que essas bactérias permaneçam coradas de vermelho
depois de serem tratadas com fucsina. Chamamos essas bactérias
de Bacilo-Álcool-Ácido-Resistente – BAAR). Elas se diferem das
outras bactérias que retém a cor do corante de fundo.
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Comentário: “Eles se basearam nas propriedades que alguns gêneros
bacterianos apresentam de resistir ao descoramento feito por uma
solução álcool-ácido, que fazem com que essas bactérias permaneçam
coradas de vermelho depois de serem tratadas com fucsina. Chamamos
essas bactérias de Bacilo-Álcool-Ácido-Resistente – BAAR)”. Resposta:
Letra A.
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A) álcool 70%.
B) xilol.
C) ágar-ágar.
D) formol.
E) Metanol
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03) (AOCP - Biomédico - EBSERH/HU-UFJF – 2015). Quais são os
principais componentes de um meio de cultura?
(A) Energia, oxigênio, elastina e colágeno.
(B) Fósforo, queratina, glúten e carbono.
(C) Fontes de carbono, açúcares, nitrogênio, fósforo e sais minerais.
(D) Sais minerais, oxigênio, elastina e carbono.
(E) Fontes de carbono, energia, colágeno e elastina.
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b) Os meios seletivos proporcionam nutrientes adequados ao crescimento
de microrganismos presentes usualmente em baixos números ou de
crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos.
c) Os meios diferenciais contêm substâncias que permitem estabelecer
diferenças entre microrganismos muito parecidos.
d) Os meios de dosagem prestam-se para a realização de provas
bioquímicas e para a verificação de funções fisiológicas de organismos
submetidos à identificação.
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(A) Isolamento de microrganismos não fastidiosos, verificação de
hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. e usado na prova
de satelitismo (para identificação presuntiva de Haemophilus spp.).
(B) Análise de água, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar
das amostras submetidas a exames bacteriológicos e isolamento de
organismos para culturas puras, conservação e manutenção de culturas
em temperatura ambiente, como método opcional para os laboratórios
que não dispõem do método da criopreservação (congelamento das cepas
em freezer à - 70ºC) e observação da esporulação de espécies de bacilos
Gram-positivos.
(C) Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp.,
Neisseria spp. Branhamellacatarrhalis e Moraxella spp.
(D) Isolar bacilos Gram-negativos (enterobactérias e não fermentadores)
e verificar a fermentação ou não da lactose.
(E) Selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella, em amostras de
fezes, alimentos e água.
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( ) Moraxella spp.
( ) Micro-organismos aeróbios, microaerófilos e anaeróbios.
( ) Diferencial para Staphylococcus aureus.
( ) Micro-organismos anaeróbios.
A sequência está correta em
A) 3, 5, 1, 4, 2.
B) 5, 3, 2, 4, 1.
C) 2, 1, 5, 3, 4.
D) 4, 1, 2, 5, 3.
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A) Caldo BHI
B) Caldo selenito
C) Ágar CLED
D) Ágar sangue
E) Ágar Chocolate
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culturas são feitas pela semeadura dos materiais clínicos em meios
sólidos, distribuídos em placas de Petri, ou em meios líquidos, distribuídos
em tubos de ensaio ou em outros tipos de frascos. A respeito da
realização das culturas, assinale a alternativa correta.
(A) Os meios líquidos são utilizados como meio de enriquecimento ou
quando é grande o volume do material clínico a ser semeado.
(B) Uma vez semeados, todos os meios devem ser incubados em
temperatura acima de 45 ºC.
(C) A atmosfera isenta de O2 é a atmosfera necessária para o
crescimento de microrganismos aeróbios.
(D) Quando se deseja obter um ambiente rico em O2 para o
crescimento de bactérias, deve se acender uma vela no fundo de uma
jarra, fechando-se hermeticamente essa jarra.
(E) Os meios de cultura não devem ser preparados no próprio
laboratório.
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(B) As bactérias gram positivas ficarão coradas de roxo.
(C) As bactérias gram negativas ficarão coradas em rosa.
(D) As bactérias gram positivas não irão corar.
(E) Ele não conseguirá visualizar nada na lâmina, pois não haverá
nenhuma bactéria corada.
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E) Cocos vermelho-claros e cocos violeta-escuros.
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celular. Essa cápsula torna a bactéria vulnerável à fagocitose por
monócitos, podendo dificultar sua fixação tecidos do hospedeiro.
(C) os organismos gram-positivos são assim denominados devido às
características de coloração próprias da sua finíssima camada externa de
peptidoglicano, além disso, esses micro-organismos possuem amplo
complexo de Golgi e mitocôndrias em seu interior.
(D) as bactérias são classificadas em Gram-positivas ou Gram-negativas
em função da diferença na arquitetura da parede celular. A parede celular
Gram-positiva consiste de uma camada espessa de peptidoglicano (~30
nm), enquanto a parede celular da Gram-negativa apresenta camada
mais fina de peptidoglicano (~10nm) e sua estrutura e composição da
membrana mais complexas.
(E) bactérias como as microbactérias têm glicolipídeos múltiplos que lhes
conferem uma aparência de bolor, acarretando desvantagens biológicas,
impedindo a infecção ao hospedeiro.
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(C) Coloração de Gram é um teste rápido que permite aos clínicos a
diferenciação entre as duas mais importantes classes de bactérias.
(D) As bactérias Gram negativas têm a camada de peptidoglicano espessa
contendo ácido teicoico e ácidos lipoteicoicos.
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P T C A
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(D) Deve ser confirmado por microscopia de campo escuro ou pelo
método de tinta nanquim.
(E) Utiliza um corante que pode se tornar fluorescente na microscopia
óptica.
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11. Gabarito:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
D C C Errado Certo C Errado Errado A D
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
B A B Certo A E A C D E
21 22 23 24 25 26 27 28
D C E D Errado C A A
12. REFERÊNCIAS:
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TORTORA, G. J. ; FUNKE, B. R. ; CASE, C. L. Microbiologia. 8. ed. Porto
Alegre.
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