Histologia
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Ampliação e Estruturação da Coleção Zoológica do Laboratório de Pesca e Ecologia Aquática LabPEA-UEMA, como meio para divulgação e conservação dos Recursos
Aquáticos Maranhense View project
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Abstract – Majority papers shows that histopathological changes are excellent for to evaluate and
monitor fish health and the level of impact in aquatic ecosystems. In this study we aimed to
compare the gill and liver changes in Oreochromis niloticus originating from cultivation ponds and
rivers in the Protected Area located in São Luís, Maranhão. Fish were sampled in a polyculture
pond and Ambude river with gill nets. Biometrics fish was recorded in the laboratory with
ictiometer. Gill and liver samples of each specimen were fixed in 10% formalin and kept in 70%
alcohol until the execution of histology. Sections of approximately 5μm were stained with
hematoxylin and eosin, assigning a scale according to the severity of injury, according to the
analysis by light microscopy. The identified types of histopathological lesions were grouped by
Bray-Curtis analysis by similarity of fish observations obtained from the two evaluated aquatic
systems. The histopathological lesions indicate that fish in the river and pond cultivation are under
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different levels of environmental stress. The organ which showed more severe injury (irreversible)
and greater similarity was the liver, indicating chronic stress in fish pond cultivation. Therefore,
the specie analyzed showed biological responses can be used as important biomarkers for
monitoring aquatic environments in the Protected Areas.
Keywords: Tissue changes, Histopathology, Nile tilapia
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INTRODUÇÃO
O monitoramento ambiental é um processo importante para a administração dos recursos
naturais e para o diagnóstico de impactos causados por tensores de origem antrópica. Essa
prerrogativa pode oferecer conhecimento e informações básicas para avaliar a presença de
contaminantes químicos e seus impactos quanto às respostas fisiológicas dos organismos aquáticos,
bem como compreender os sistemas aquáticos e auxiliando às políticas de manejo ambiental
(BRITO et al, 2012).
Técnicas biológicas eficazes são utilizadas para avaliação das condições do ambiente,
como por exemplo, os biomarcadores em peixes. Essas análises podem mostrar alterações
biológicas provocadas por exposição do organismo aos compostos tóxicos presentes na água ou
substrato, ou os efeitos destas exposições, desde níveis bioquímicos e teciduais até comportamentais
(AMARAL, SOTO, CUNHA, MARIGÓMEZ & RODRIGUES, 2006). O uso de biomarcadores
apresenta muitas vantagens para a avaliação da qualidade de um ambiente aquático e da sua
ictiofauna. Entre tais, rapidez, baixo custo e facilidade na interpretação dos resultados (PINHEIRO-
SOUSA, ALMEIDA & CARVALHO-NETA, 2013a). Alterações histopatológicas em brânquias e
fígados de peixes são comumente utilizadas em metodologias de monitoramento ambiental porque
são órgãos sensíveis às variações ambientais, respondendo de forma rápida e eficaz aos poluentes
(JOHNSON et al., 1993).
Nesse contexto, a análises de similaridade das lesões são de extrema relevância para
verificar quais são as alterações que têm algum tipo de relação entre si de acordo com o grau de
severidade e com as características ambientais (COSTA et al. 2009). Para o Estado do Maranhão,
poucos estudos utilizam esta nova abordagem através de índices ponderados e, na grande parte das
investigações, limitam-se a utilização desta técnica para uso em espécies marinhas, fazendo-se
necessária continuidade desse tipo de análise em organismos aquáticos (CARVALHO-NETA,
TORRES & ABREU-SILVA, 2012, PINHEIRO-SOUSA, ALMEIDA & CARVALHO-NETA,
2013b).
A tilápia do Nilo, Oreochromis niloticus Linnaeus, 1758, é um peixe dulcícola oriunda do
continente Africano e que foi introduzida no Brasil ainda na década de 70 pelo Departamento
Nacional de Obras contra à Seca (DNOCS). Considerada de bom desempenho zootécnico e por
apresentar rusticidade, tal espécie pode ser cultivada em diferentes sistemas de criação (Meurer,
Hayashi & Boscolo, 2003). É sugerida como um bom modelo biológico para avaliação de estresse
causado por impactos ambientais de natureza antrópica (PEREIRA, SANTOS, CARVALHO
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NETA, CRUZ, & CARVALHO-NETA, 2014). No Estado do Maranhão, a tilápia possui relevância
econômica para as Áreas de Proteção Ambiental devido à sua utilização em empreendimentos de
piscicultura, especialmente na região do Maracanã, próximo ao complexo industrial da capital
maranhense. Em período chuvoso, muitas lagoas de piscicultura da região transbordam e as tilápias
escapam para os rios que atravessam a região industrial da cidade de São Luís. Sob esse foco, não
existem relatos que analisem comparativamente a saúde dessa espécie pescada nos rios e cultivada
nas lagoas da APA do Maracanã, somente com outras espécies (CARVALHO-NETA, SOUSA,
ALMEIDA, SANTOS & TCHAICKA, 2014; CASTRO, SILVA, FREITAS & CARVALHO-
NETA, 2014).
O presente estudo comparou lesões branquiais e hepáticas através de um índice ecológico
em Oreochromis niloticus oriundos de lagoas de cultivo e de rios de uma área protegida localizada
em São Luís, Maranhão.
MATERIAL E MÉTODOS
A captura dos peixes foi autorizada a partir de uma licença emitida pela Secretaria de
Recursos Naturais e Meio Ambiente - SEMA (001/2012). O protocolo dessa pesquisa foi aprovado
pelo Comitê de Ética do Curso de Medicina Veterinária da Universidade Estadual do Maranhão
(04/2012 CRMV-MA), cumprindo as orientações do Colégio Brasileiro de Experimentação Animal
(COBEA; http://www.cobea.org.br). Os peixes foram amostrados a partir de duas coletas em 2012
(setembro e outubro = período de estiagem) e duas coletas em 2013 (janeiro e fevereiro = período
chuvoso), em dois locais distintos da APA do Maracanã. O primeiro local correspondeu ao criatório
de peixes da Lagoa Serena (2° 36′ 57″ S, 44° 17′ 58″W), considerado como uma área de referência;
e o segundo local, referiu-se ao rio Ambude (2°37′ 57″ S, 44° 17′ 43″W), um ecossistema aquático
da APA que têm sofrido impactos antrópicos de parques industriais próximos (Figura 1). Para cada
região foram analisados os parâmetros abióticos da água, tais como: pH, concentração de oxigênio
dissolvido, temperatura, amônia tóxica, turbidez e nitrito.
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Figura 1. Mapa da Ilha de São Luis - MA e localização dos pontos de coleta na APA do
Maracanã.
As brânquias do arco direito e a porção mediana do fígado de cada exemplar foram fixados
em formol a 10% e mantidos em álcool 70% até o processamento histológico. Estes órgãos foram
desidratados em uma série crescente de alcoóis, diafanizados em xilol, impregnados e incluídos em
parafina. Os cortes transversais de 5μm de espessura foram corados com Hematoxilina e Eosina
(HE). As alterações histológicas branquiais e hepáticas foram observadas e quantificadas em
microscópio óptico.
As alterações histopatológicas observadas foram ordenadas, seguindo-se uma escala de
severidade das lesões, conforme Bernet, Schmidt, Meier, Burkhardt-Holm & Wahli (1999). Nesta
escala as lesões são classificadas em leves (facilmente reversíveis), moderadas (reversíveis com
dificuldade) e severas (irreversíveis).
A análise de Bray-Curtis foi efetuada para verificar similaridades entre as lesões
histopatológicas branquiais e hepáticas dos peixes dos dois locais analisados. Esses procedimentos
foram executados como auxílio do software PRIMER versão 6.0 (CLARKE & WARWICK, 2001,
CLARKE, SOMERFIELD & CHAPMAN, 2006).
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RESULTADOS
Tabela 1. Dados abióticos dos locais amostrados na APA do Maracanã, São Luís-MA, no período
de setembro/2012 a fev/2013.
Parâmetros abióticos Lagoa de Cultivo Rio Ambude Valores recomendados
OD (ppm) 11 9 > 5 mg/L O2 a
pH 7.5 7.3 6–9a
Temp. (°C) 30 30 27 – 32ºC b
Amônia (ppm) 0.5 0.25 3,7mg/L N (pH ≤ 7,5) a
Turbidez (cm) 23.5 17 Até 100 UNT a
a
Resolução n. 357 de 17/03/2005 e Resolução n° 430 de 13/05/2011 do CONAMA.
b
Kubitza & Kubitza (2000).
Tabela 2. Dados biométricos para machos e fêmeas de Oreochromis niloticus coletados no período
de setembro/2012 a fevereiro/2013 na lagoa serena da APA do Maracanã, São Luís-MA.
Média±desvio-padrão
Época de Estiagem Época Chuvosa
Machos Fêmeas Machos Fêmeas
CT(cm) 17.76±7 20.48±4.1 21.65±3.5 20.05±1.05
CP (cm) 13.68±5.4 14.22±2.3 17.1±2.9 15.8±0.9
PT (g) 148±136.5 118±38.9 196.9±93 146.7±27.4
IGS 0.77±0.17 1.13±1.5 0.52±0.08 2.5±0.008
IHS 0.82 ±0.64 0.49±0.5 0.72±0.56 1.06±0.15
Tabela 3. Dados biométricos para machos e fêmeas de Oreochromis niloticus coletados no período
de setembro/2012 a fevereiro/2013 rio Ambude da APA do Maracanã, São Luís-MA.
Média±desvio-padrão
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Figura 2. Cluster de similaridade (Bray-Curtis) para lesões branquiais em O. niloticus da Lagoa (A)
e Rio Ambude (B), APA do Maracanã, São Luís-MA. FL = Fusão Lamelar; DE =
Deslocamento Epitelial; H= Hiperplasia; A= Aneurisma; DL= Desorganização Lamelar;
VSS= Vasodilatação do Seio Sanguíneo; CM= Células Mucosas.
Os agrupamentos das lesões hepáticas também foram diferenciados para as duas áreas
amostradas (Figura 3). Nos peixes da lagoa observaram-se os seguintes agrupamentos de lesões:
infiltração leucocitária (IL) e parasitos (P) com 100% de similaridade; congestão de vasos (CV) e
necrose (N) com 78% de similaridade. Nos peixes do Rio Ambude observou-se congestão dos
vasos (CV) e centros melanomacrófagos (CM) com 85% de similaridade; infiltração leucocitária
(IL) e parasitos (P) com 90% de similaridade.
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Figura 3. Cluster de similaridade (Bray-Curtis) para lesões hepáticas em O. niloticus da Lagoa (A)
e Rio Ambude (B), APA do Maracanã, São Luís-MA. H= Hemossiderina; E= Esteatose;
CV= Congestão dos Vasos; CM= Centros Melanomacrófagos; IL= Infiltração
Leucocitária; P= Parasitos; N= Necrose.
DISCUSSÃO
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Ambude. Alterações como hiperplasia e descolamento do epitélio, podem ser causadas por diversos
estressores, como amônia, fenóis, parasitas, microrganismos infecciosos e efluentes de esgotos
(NOGUEIRA, CASTRO & SÁ, 2008). Garcia-Santos, Monteiro, Carrola & Fontainhas-Fernandes
(2007) observaram que exemplares de Oreochromis niloticus expostos ao cádmio durante quatro
dias, apresentavam diversas alterações, como o destacamento epitelial, a proliferação do epitélio
filamentar e a fusão de lamelas. A fusão das lamelas, por exemplo, é uma reação biológica visando
a proteção do epitélio lamelar contra a exposição direta de contaminantes (Nogueira, Castro & Sá,
2008). Nero et al. (2006), em estudo com Perca flavescens e Carassius auratus expostas a águas
contaminadas por metais pesados e hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (PAHs), descreveram
lesões equivalentes às citadas neste trabalho: necrose, fusão lamelar e proliferação celular entre as
lamelas secundárias.
As lesões encontradas nas brânquias dos peixes do Rio Ambude apresentaram-se como
leves e moderadas, podendo ser reversíveis, caso o elemento estressante seja neutralizado
(BERNET, SCHMIDT, MEIER, BURKHARDT-HOLM & WAHLI, 1999). Já na lagoa de cultivo,
as alterações mais severas podem ser interpretadas como respostas ao estresse ambiental ou
exposição a contaminantes, apresentando-se como uma forma de defesa contra compostos tóxicos e
agentes infecciosos, podendo afetar diretamente os mecanismos de respiração e osmorregulação do
animal (WINKALER, SILVA, GALINDO & MARTINEZ, 2001, PINHEIRO-SOUSA, ALMEIDA
& CARVALHO-NETA, 2013A).
A alteração hepática predominante neste estudo (hemossiderina) é causada pelo
extravasamento de ferro no organismo ou pelo resultado do metabolismo dos eritrócitos, e o seu
desenvolvimento acontece após a hemorragia de um órgão (NUNES, BEHLAU, NUNES &
PAULINO, 2013). Os Centros de Melanomacrófagos são defesas naturais do peixe e acumulam
pigmentos no interior de suas células, tal como a hemossiderina (BOMBONATO, ROCHEL,
VICENTINI & VICENTINI, 2007). As alterações hepáticas observadas neste trabalho coincidem
com os estudos de campo realizados por Silva et al. (2009) em peixes do gênero Astyanax; nestes
organismos foram encontradas necrose, infiltração leucocitária e centros de melanomacrófagos. As
lesões encontradas no tecido hepático normalmente são em decorrência da poluição da água por
compostos orgânicos e representam contaminação crônica (SANTOS, CRUZ, PEREIRA, ALVES
& MORAES, 2012). Assim, pode-se inferir que os peixes da lagoa de cultivo apresentam alterações
hepáticas crônicas, devido, provavelmente, aos efluentes domésticos que chegam a este ambiente
e/ou lixiviação de compostos químicos provenientes da agricultura realizada nas proximidades
(CARVALHO-NETA 2010; CARVALHO-NETA et al., 2015).
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Os dados abióticos analisados na água dos dois locais da APA do Maracanã indicam
valores considerados dentro dos padrões normais para a área de estudo (água doce da classe 2
destinada à piscicultura), segundo a Resolução n° 357 de 17 de março de 2005 e Resolução n° 430
de 13 de maio 2011 do CONAMA. Os valores dos parâmetros abióticos mostraram-se maiores da
Lagoa Serena, devido ao tipo de sistema de cultivo peixes, sendo um ambiente fechado, de pouca
mobilidade da água e com concentração maior de compostos nitrogenados oriundos de rações e
fertilizantes, diferentemente da dinâmica do Rio Ambude (CASTRO, SILVA, FREITAS &
CARVALHO-NETA, 2014). De acordo com Kubitza & Kubitza (2000), tilápias são peixes
tropicais que apresentam melhor desempenho em cultivos sob 27°C a 32°C; em temperaturas
abaixo de 22°C, ocorre mortalidade destes peixes. Além deste parâmetro, o pH da água deve variar
entre 6 a 8.5, sendo que valores acima de 10.5 e abaixo de 4.5 ocasionam um aumento na
mortalidade das tilápias (KUBITZA & KUBITZA, 2000), bem como em alterações nos dados
biométricos destes peixes.
Em relação aos dados biométricos, houve uma variação nos valores de comprimento total e
peso total em ambos os pontos de coleta, no qual os espécimes machos apresentaram-se com
maiores medidas, fato explicado devido aos processos reprodutivos da espécie e fatores genéticos
(LUNDSTEDT, LUNDSTEDT & DIAS, 1997). Experimentos morfométricos realizados com
tilápias de várias linhagens apontam para o maior desenvolvimento de exemplares machos, podendo
atingir até o dobro da medida das fêmeas, considerando a mesma idade (MAINARDES-PINTO,
VIRANI, PAIVA & TABATA, 1986, LUNDSTEDT, LUNDSTEDT & DIAS, 1997, RUTTEN,
KOMEN & BOVENHUIS, 2005). Além disso, estudos mostram que o crescimento das tilápias
varia consideravelmente, de acordo com a dieta e também com o tipo de sistema de cultivo
empregado (MOREIRA, VARGAS, RIBEIRO, & ZIMMERMANN, 2001).
Em sumário, exemplares de tilápia, quando provenientes da lagoa de cultivo, apresentam
saúde comprometida. Enquanto, aqueles oriundos do Rio Ambude mostram sinais de estresse
crônico. Observações declaram que a localidade de obtenção dos peixes está sujeita à impactos
potenciais de ordem industrial e urbano, possivelmente devido ao crescimento de moradias ao longo
da extensão dos rios (CARVALHO-NETA, 2010; CARVALHO-NETA, TORRES & ABREU-
SILVA, 2012), além de postular níveis mais elevados de metais pesados encontrados nos corpos
hídricos do local de coleta (CARVALHO-NETA et al., 2015). Esse diagnóstico aponta para uma
necessidade de manejo adequado para o cultivo de tilápia (O. niloticus), bem como medidas de
conservação para ambos os ambientes aquáticos localizados na Área de Proteção Ambiental do
Maracanã.
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CONCLUSÕES
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