Determinação do espetro de absorção do complexo

1e2 albumina/azul de Coomassie

Quantificação de proteínas por espetrofotometria

RELATÓRIO/FICHA DE ATIVIDADES

Autores Turno Grupo Contacto

1. 4.

2. 5.

3. Data da aula:

I. Objetivos

II. Princípio do método

III. Resultados

1. Calcular a concentração de BSA em cada padrão.

2. Preencher as tabelas com os valores de absorvância obtidos para os padrões e amostras.

TUBO 1 2 3 4 5 6 7 8
ABS a ___ nm

Amostra 1 2
ABS a ___ nm

3. Construir o gráfico da curva de calibração do método de Bradford.

4. Desenhar a reta padrão e determinar a equação da reta que melhor se ajusta aos pontos
experimentais.

5. Calcular a concentração de albumina nas amostras.

IV. Discussão e Conclusão

QUESTÕES PÓS-LABORATORIAIS

1. Discuta se o método de Bradford depende da composição/tipo das proteínas na amostra e nos

padrões ou se permite quantificar indiscriminadamente todas as proteínas.

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 3 Doseamento de lípidos: colesterol e triglicéridos

RELATÓRIO/FICHA DE ATIVIDADES

Autores Turno Grupo Contacto

1. 4.

2. 5.

3. Data da aula:

I. Objetivos

II. Princípio do método

III. Resultados

IV. Discussão/Conclusão

V. Ficha de atividades

Atividade 1
A Helena acordou mais tarde que o previsto para ir para as aulas, pois o despertador não tocou.
Tomou um duche e, sem tomar o pequeno-almoço, correu para apanhar o metro. Felizmente a
primeira aula da manhã foi adiada e, assim, a Helena foi tomar o pequeno-almoço.

Responda às seguintes perguntas:

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 1. Se a Helena fizesse um teste rápido de medição de colesterol no sangue depois de parar de
comer, qual seria o resultado esperado? Justifique.

2. A Helena poderia utilizar um equipamento da Roche, o Accutrend GCT®, por exemplo,

para avaliar o colesterol? Descreva o funcionamento deste equipamento.

Atividade 2

Uma mulher de 32 anos de idade foi hospitalizada com um enfarte agudo do miocárdio. Através de
exames médicos laboratoriais foi determinado o colesterol. O resultado foi de 420 mg/dL. Os
triglicéridos estavam normais. As análises revelaram também elevados níveis de LDL.

Responda às seguintes perguntas:

1. Explique o metabolismo das LDL neste contexto.

2. O exame médico laboratorial utilizado para o doseamento dos triglicéridos na paciente foi
realizado através de uma amostra de sangue seguido de testes enzimáticos. Explique o
princípio do método.

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 5 Digestão de prótidos, lípidos e glícidos

RELATÓRIO

Autores Turno Grupo Contacto

1. 4.

2. 5.

3. Data da aula:

I. Objetivos

II. Princípio do método

III. Resultados

DIGESTÃO DOS CARBOIDRATOS

1. Ensaio da α-amílase sobre o amido

1.1. Preencha a tabela 1 com os dados do ensaio da α-amílase sobre o amido.

Tabela 1. Ensaio da α-amílase sobre o amido.

Tubo 1 2 3 4 5 6 7

Amílase Amílase Amílase ddH2O ddH2O Amílase Amílase

Reagentes Amido Amido ddH2O Amido Maltose Amido Amido
pH 7.0 pH 7.0 pH 7.0 pH 7.0 pH 7.0 pH 2.0 pH 9.0
1º: Boil
(ferver)
Cond. 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C
2º:
Incubação 60 min 60 min 60 min 60 min 60 min 60 min
37 ˚C
60 min

Benedict

Lugol

1.2. O que é que os tubos 2, 6 e 7 permitem concluir acerca da α-amílase?

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 1.3. Qual o pH ótimo da α-amílase?

1.4. Que tubo(s) indica(m) que a água desionizada não contém maltose nem amido?

1.5. Se não usássemos os tubos 3, 4 e 5 que objeções poderiam ser levantadas à afirmação “A
α-amílase digere o amido a maltose”?

1.6. Poderia a α-amílase presente na saliva atuar a nível do estômago? Justifique.

1.7. Qual o efeito da fervura na atividade enzimática? Explique.

2. Ensaio da α-amílase sobre a celulose

2.1. Preencha a tabela seguinte com os dados do ensaio da α-amílase sobre a celulose.

Tabela 2: Ensaio da α-amílase sobre a celulose

Tubo 1 2 3 4 5 6 7

Amílase Amílase Amílase Amílase Amílase Peptidase Bactérias

Reagentes Amido Amido Glicose Celulose Celulose Amido Celulose
pH 7.0 pH 7.0 pH 7.0 pH 7.0 dH2O pH 7.0 pH 7.0
1º: Freeze
Cond. (congelar) 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C
Incubação 2º: 37 ˚C 60 min 60 min 60 min 60 min 60 min 60 min
60 min

Benedict

Lugol

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 2.2. Que tubos foram positivos para o teste de Lugol?

2.3. Que tubos foram positivos para o teste de Benedict?

2.4. Que efeito tem o congelamento na atividade enzimática?

2.5. Em que difere o efeito congelamento do efeito fervura?

2.6. Qual foi o efeito da α-amílase sobre a glicose no tubo 3? Proponha uma explicação para
esse facto.

2.7. Qual foi o efeito da α-amílase sobre a celulose no tubo 4?

2.8. O que pode concluir sobre a digestão da celulose a julgar pelos resultados obtidos nos
tubos 4, 5 e 7?

2.9. Qual foi o efeito da enzima peptidase usada no tubo 6? Justifique

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

DIGESTÃO DAS PROTEÍNAS

3. Ensaio da pepsina
3.1. Preencha a tabela seguinte com os dados do ensaio da pepsina.

Tabela 3: Ensaio da Pepsina

Tubo 1 2 3 4 5 6

Pepsina Pepsina Pepsina ddH2O Pepsina Pepsina

Reagentes BAPNA BAPNA ddH2O BAPNA BAPNA BAPNA
pH 2.0 pH 2.0 pH 2.0 pH 2.0 pH 7.0 pH 9.0
1º: Boil (ferver)
37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C
Cond. Incubação 2º: 37 ˚C
60 min 60 min 60 min 60 min 60 min
60 min

Densidade ótica

3.2. Indique o pH ótimo para a atividade da pepsina. Justifique.

3.3. A pepsina seria ativa na boca? Justifique.

3.4. Como justifica os resultados obtidos no tubo 1 e no tubo 2?

3.5. Se não tivesse usado como controlo os tubos 2 e 3, como poderia arguir contra a afirmação
“A pepsina digere a BAPNA”?

3.6. O que acha que poderia ocorrer se o tempo de incubação baixasse para 30 minutos?

3.7. O que acha que poderia ocorrer se baixasse a temperatura de incubação para 10 ˚C?

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

DIGESTÃO DOS LÍPIDOS
4. Ensaio da lípase
4.1. Preencha a tabela seguinte com os dados do ensaio da lípase.

Tabela 4: Ensaio da Lípase

Tubo 1 2 3 4 5 6 7

Lípase ddH2O Lípase Lípase

Lípase Lípase
Lípase Óleo Óleo Óleo Óleo
Óleo ddH2O
Óleo vegetal vegetal vegetal vegetal vegetal
Reagentes vegetal Sais
Sais biliares Sais Sais Sais Sais
ddH2O biliares
pH 7.0 biliares biliares biliares biliares
pH 7.0 pH 9.0
pH 7.0 pH 7.0 pH 2.0 pH 9.0
1º: Boil
Cond. (ferver) 2º: 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C 37 ˚C
Incubação 2º: 37 ˚C 60 min 60 min 60 min 60 min 60 min 60 min
60 min

pH

4.2. É possível determinar se ocorreu hidrólise das gorduras no tubo 7? Justifique.

4.3. A que valor de pH é que a lípase possui maior atividade?

4.4. Este método é suficiente para determinar se a atividade ótima da enzima lípase é a pH
2.0? Justifique.

4.5. Em teoria esta enzima poderia atuar:

4.5.1. Na boca? Justifique.

4.5.2. E no estômago? Justifique.

5. Baseando-se nas atividades que realizou onde espera encontrar as enzimas usadas nessas
experiências.

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 6 Regulação da biossíntese de proteínas por monossacarídeos

RELATÓRIO

Autores Turno Grupo Contacto

1. 4.

2. 5.

3. Data da aula:

I. Objetivos

II. Princípio do método

III. Resultados

IV. Discussão/Conclusão

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 7 Efeito do tratamento com insulina em ratos com Diabetes tipo I

RELATÓRIO

Autores Turno Grupo Contacto

1. 4.

2. 5.

3. Data da aula:

I. Objetivos

II. Princípio do método

III. Resultados

1. Apresente a reta de calibração determinada na atividade I.

2. Preencha a tabela 1 com resultados obtidos na atividade II.

Tabela 1 – Concentração de glicose em cada amostra.

Tubo Concentração de glicose

IV. Questões
1. Compare os níveis de glicose no tubo 1 e 2. Explique o resultado obtido.

2. _____________________________________________ Qual foi a condição induzida no ratinho

cobaia pelo aloxano?

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

3. _____________________________________________ Compare os níveis de glicose no tubo 3 e 1.
Explique o resultado obtido.

4. _____________________________________________ Compare os níveis de glicose no tubo 4 e 2.

Explique o resultado obtido.

5. _____________________________________________ Qual o efeito da administração de insulina no

ratinho controlo?

6. __________________________________________ Qual o efeito da administração de insulina no

ratinho cobaia?

7. _____________________________________________ Sobre a injeção de soro fisiológico no ratinho

controlo:

7.1. ________________________________________ Indique o motivo pelo qual é realizado este

procedimento.

7.2. ________________________________________ Este procedimento podia ser dispensado?

Justifique.

8. _____________________________________________ A determinação da concentração da glicose

foi realizada de forma qualitativa ou quantitativa? Justifique.

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 8 Teste imunoenzimático na deteção de hCG

RELATÓRIO

Autores Turno Grupo Contacto

1. 4.

2. 5.

3. Data da aula:

I. Objetivos

II. Princípio do método

III. Resultados

IV. Discussão/Conclusão

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 11 Metabolismo e Terapêutica de Substituição Hormonal

RELATÓRIO

Autores Turno Grupo Contacto

1. 4.

2. 5.

3. Data da aula:

I. Objetivos

II. Resultados

1. Atividades n.º 1, 2, 3 e 4
1.1. Preencha a tabela 1 com dados obtidos no decorrer das atividades 1, 2, 3 e 4.

Tabela 2 - Efeito das hormonas na taxa metabólica.

Rato normal Rato tiroidectomizado Rato hipofisectomizado

B ASAL
____________________g
Peso ____________________g ____________________g
___________________mL
mL de O2/minuto ___________________mL ___________________mL
___________________mL
mL de O2/hora ___________________mL ___________________mL
_______________mL O2/Kg/h
Taxa metabólica _______________mL O2/Kg/h _______________mL O2/Kg/h

C OM TIROXINA
____________________g ____________________g ____________________g
Peso
___________________mL ___________________mL ___________________mL
mL de O2/minuto
___________________mL ___________________mL ___________________mL
mL de O2/hora
_______________mL O2/Kg/h _______________mL O2/Kg/h _______________mL O2/Kg/h
Taxa metabólica

C OM TSH

Peso
____________________g ____________________g ____________________g
mL de O2/minuto
___________________mL ___________________mL ___________________mL
mL de O2/hora
___________________mL ___________________mL ___________________mL
Taxa metabólica
_______________mL O2/Kg/h _______________mL O2/Kg/h _______________mL O2/Kg/h

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

C OM
PROPILTIOURACILO

____________________g ____________________g ____________________g

Peso

___________________mL ___________________mL ___________________mL

mL de O2/minuto

___________________mL ___________________mL ___________________mL

mL de O2/hora

_______________mL O2/Kg/h _______________mL O2/Kg/h _______________mL O2/Kg/h

Taxa metabólica

1.2. Apresente um exemplo de cálculo para a determinação do consumo de O2/h e da taxa

metabólica.

2. Atividade n. º5
2.1. Indique o peso do útero de cada animal.

III. Questões

1. Atividades n.º 1, 2, 3 e 4
1.1. Indique as hormonas estudadas e o seu respetivo local de origem.

1.2. Cada hormona apresenta um tecido-alvo específico. Para cada uma das seguintes
hormonas estudadas, identifique o seu tecido-alvo e a sua ação específica.

1.3. Na atividade experimental qual foi o efeito da tiroxina na taxa metabólica dos animais?

Justifique.

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 1.4. A administração da TSH desenvolveu algum efeito na taxa metabólica do rato

tiroidectomizado? Qual seria o resultado esperado? Justifique.

1.5. A administração de propiltiouracilo desenvolveu algum efeito na taxa metabólica do rato

tiroidectomizado ou hipofisectomizado? Qual seria o resultado esperado para cada um

dos casos? Justifique.

2. Atividade n. º 5

2.1. Indique o efeito da remoção dos ovários nos animais?

2.2. O que pode concluir sobre a administração de injeções de estrogénio no animal

experimental?

2.3. Durante a experiência administrou 7 injeções de estrogénio ao rato experimental

durante 7 dias. O que pensa que aconteceria se administrasse uma injeção diária de

estrogénio, durante mais uma semana?

2.4. Caso esta atividade experimental fosse desenvolvida num laboratório (em condições

reais), porque razão seria necessário esperar algumas semanas após os ratos serem

submetidos à ovariectomização, antes de realizar esta atividade experimental?

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|

 X Título
RELATÓRIO

Autores Turno Grupo Contacto

1. 4.

2. 5.

3. Data da aula:

I. Objetivos

II. Princípio do método

III. Resultados

IV. Discussão/Conclusão

| Bioquímica | Ciências Biomédicas Laboratoriais|