Eqd20001 o

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
ESCOLA DE ENGENHARIA DE LORENA
ALEXANDRE DE MORAES RICARDI
Análise dos efeitos das variáveis de processo na produção de biomassa e nos

parâmetros reológicos da microalga Chlorella minutissima cultivada em reator Raceway
para produção de biocombustíveis
Lorena
2020
ALEXANDRE DE MORAES RICARDI
Análise dos efeitos das variáveis de processo na produção de biomassa e nos

parâmetros reológicos da microalga Chlorella minutissima cultivada em reator Raceway
para produção de biocombustíveis
Dissertação apresentada à Escola de

Engenharia de Lorena da Universidade
de São Paulo para obtenção do título de
Mestre em Ciências do Programa de
Pós-graduação em Engenharia Química
na Área de Concentração de
Desenvolvimento de Produtos e
Processos
Orientador: Prof. Dr. Messias Borges

Silva
Versão Original
Lorena
2020
AUTORIZO A REPRODUÇÃO E DIVULGAÇÃO TOTAL OU PARCIAL DESTE TRABALHO, POR QUALQUER MEIO
CONVENCIONAL OU ELETRÔNICO, PARA FINS DE ESTUDO E PESQUISA, DESDE QUE CITADA A FONTE
Ficha catalográfica elaborada pelo Sistema Automatizado

da Escola de Engenharia de Lorena,
com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)
Ricardi, Alexandre de Moraes

Análise dos efeitos das variáveis de processo na
produção de biomassa e nos parâmetros reológicos da
microalga Chlorella minutissima cultivada em reator
Raceway para produção de biocombustíveis / Alexandre
de Moraes Ricardi; orientador Messias Borges Silva -
Versão Original. - Lorena, 2020.
138 p.
Dissertação (Mestrado em Ciências - Programa de Pós

Graduação em Engenharia Química na Área de
Desenvolvimento de Produtos e Processos) - Escola de
Engenharia de Lorena da Universidade de São Paulo.
2020
1. Microalgas. 2. Reologia. 3. Chorume. 4.

Raceway. 5. Biodiesel. I. Título. II. Silva, Messias
Borges, orient.
Agradecimentos
Agradeço, primeiramente, à Deus, pois sem Ele nada seria possível.
Aos meus pais, Ofélia e Hélcio, que sempre me deram força e suporte para seguir meus
ideais.
À minha namorada Gabrielle, que me incentivou o tempo todo e me acompanhou de

perto nessa fase da vida, sendo muito importante e fazendo tudo ficar mais fácil.
Ao meu filho Theodoro, que está vindo aí e foi fundamental nessa fase final de
conclusão, me dando todo estímulo necessário pra não deixar a peteca cair.
Ao professor Dr. Messias, que foi mais que um orientador, sendo uma inspiração pra
mim e pra muitos da área acadêmica.
À professora Dra Daniela, que foi a principal responsável pelo início de tudo, além de
todo suporte e confiança.
Ao professor Dr. Carlos Shigue, que me permitiu aprender ensinando com os projetos
aplicados nas escolas públicas de Lorena, além do apoio e incentivo.
Aos meus irmãos, Amanda e Henrique, pela parceria e companheirismo.
Ao meu avô, Ademar, por todo apoio e carinho.
Aos meus amigos de Lorena: André, Augusto, Diogo, Matheus, Michel, Ph, Raquel,
Simone, Tati, Thais, Thales e Ygormon pela amizade, pelas risadas e pelos bons momentos.
Aos meus amigos de Rep, Marcos e Trans, pela paciência e pela boa convivência.
Aos amigos do Lab de Microalgas: Carolzinha, Du, Gilberto, Guilherme,Wallyson e
Júnia, pelo suporte e troca de experiência.
À Ana Beatriz, pela paciência, tranquilidade e disposição em me ajudar, pelas

conversas e preocupação com todos os alunos do programa.
À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) pela

concessão da bolsa de estudos, que me possibilitou realizar esse trabalho.
À todos que, direta ou indiretamente, participaram e tornaram possível a conclusão

desse trabalho.
“Você pode sonhar, criar, desenhar e construir
o lugar mais maravilhoso do mundo, mas é
necessário ter pessoas para transformar seu
sonho em realidade”
Walt Disney
RESUMO
RICARDI, A. M. Análise dos efeitos das variáveis de processo na produção de biomassa

e nos parâmetros reológicos da microalga Chlorella minutissima cultivada em reator
Raceway para produção de biocombustíveis. 2020. 138p. Dissertação (Mestrado em
Ciências) - Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de São Paulo, Lorena, 2020.
Há algum tempo, as microalgas vêm despertando interesse nos cenários energético e

ambiental. Sua elevada taxa de proliferação, a não necessidade de terras e de água
previamente tratada para cultivo, além do amplo potencial de aproveitamento como fonte de
biocombustíveis, no conceito das biorrefinarias, são vantagens que apontam para o sucesso
desta pesquisa. O presente trabalho teve por objetivo analisar o comportamento reológico de
suspensões da microalga Chlorella minutissima cultivada em chorume (lixiviado de aterro
sanitário), em reator Raceway, onde foram avaliados os efeitos dos fatores: concentração do
chorume, concentração da fonte de carbono (acetato de sódio), vazão de aeração no reator e
frequência de rotação do motor no agitador, utilizando planejamento de experimentos com
o arranjo ortogonal de Taguchi L9 para avaliar os efeitos desses quatro fatores nas seguintes
variáveis de resposta: parâmetros reológicos; concentração, produção e produtividade de
biomassa; teor e produtividade de lipídeos e redução da demanda química de oxigênio. Os
resultados mostraram que o teor de acetato de sódio foi o fator que influenciou na maior
quantidade de respostas analisadas no cultivo da microalga Chlorella minutissima, nas
condições apresentadas. Pôde-se constatar a viabilidade de se utilizar o chorume no cultivo,
exceto em altas concentrações, aliado ao baixo teor ou ausência da fonte de carbono. Com
relação aos parâmetros reológicos, pôde ser observado comportamento de fluido dilatante,
em todas as condições de cultivo e a vazão de aeração foi o fator que mais impactou nos
resultados desta resposta.
Palavras-chave: Reologia. Chlorella. Chorume. Raceway. Biocombustíveis.

ABSTRACT
RICARDI, A. M. Analysis of the effects of process variables on the biomass production

and rheological parameters of the microalgae Chlorella minutissima grown in Raceway
reactor for biofuels production. 2020. 138p. Dissertation (Master of Science) - Escola de
Engenharia de Lorena, Universidade de São Paulo, Lorena, 2020.
For a while microalgae have been raising interest in energy and environmental scenarios. Its
high proliferation rate, the no need for land and water previously treated for cultivation and
the wide potential of use as a source of biofuels, in the concept of biorefinery, are advantages
that point to the success of this research. This study had the objective of analyzing the
rheological behavior of suspensions of the microalgae Chlorella minutissima cultivated in
leachate (landfill leachate), in Raceway reactor, where the effects of the factors were
evaluated: slurry concentration, carbon source concentration (sodium acetate), aeration in
the reactor and frequency of motor rotation on the agitator using the design of experiments
with orthogonal arrangement of Taguchi L9 to evaluate the effects of these four factors on
the following response variables: rheological parameters; biomass concentration, production
and productivity; percentage and productivity of lipids and chemical oxygen demand
reduction. The results showed that the sodium acetate content was the factor that influenced
the greatest amount of responses analyzed in the cultivation of microalgae Chlorella
minutissima, under the conditions presented. It was possible to verify the viability of using
slurry in cultivation, except in high concentrations, combined with the low content or
absence of the carbon source. Regarding the rheological parameters, dilating fluid behavior
could be observed in all cultivation conditions and the aeration flow was the most impacting
factor on the results of this response.
Keywords: Rheology. Chlorella. Slurry. Raceway. Biofuels.

LISTA DE ILUSTRAÇÕES
Figura 1 - Células da microalga Chlorella minutissima vista em microscópio biológico com

aumento de 600 vezes. ...................................................................................... 27
Figura 2 - Exemplo de reatores para cultivo de microalgas: (a)Reator tubular espiral, (b)
Air Lift e (c) Raceway. ...................................................................................... 30
Figura 3 - Diagrama simplificado do metabolismo das microalgas. ................................... 31
Figura 4 - Desenho esquemático de uma lagoa de cultivo em formato de pista (Raceway).
........................................................................................................................... 34
Figura 5 - Fotobiorreatores dos tipos (a) Flat-Plate e (b) coluna de bolhas. ....................... 35
Figura 6 - Variação da biomassa pelo tempo em cultivo descontínuo. ............................... 41
Figura 7 - Tipos de comportamento de fluxo. ..................................................................... 52
Figura 8 - Curvas de fluxo características para cada modelo matemático. .......................... 53
Figura 9 - Células de Chlorella minutissima utilizadas no presente trabalho. ................... 59
Figura 10 - Banco de células da microalga Chlorella minutissima no interior do cepário do
Laboratório de Engenharia de Microalgas da Escola de Engenharia de Lorena
........................................................................................................................... 59
Figura 11 - Desenho representando as dimensões do reator tipo Raceway. ........................ 60
Figura 12 - Reator do tipo Raceway Pond utlizado nos cultivos. ........................................ 61
Figura 13 - Etapas da preparação do inóculo até o início dos cultivos em reator Raceway:
a) cultivos em erlenmeyer no cepário. b) cultivo em recipiente transparente de
2L; c) cultivo em recipiente transparende de 5L; d) cultivo em reator Raceway.
........................................................................................................................... 62
Figura 14 - Fluxograma do procedimento de obtenção da biomassa seca ........................... 65
Figura 15 - Fluxograma da extração de lipídeos a partir da biomassa seca. ........................ 66
Figura 16 - Comparação do crescimento diário da suspensão da microalga Cholrella
minutissima pelo parâmetro da absorbância (λ=680nm). ................................. 71
minutissima pelo parâmetro da concentração (g.L-1). ....................................... 72
Figura 18 - Comparação da obtenção de biomassa entre as diferentes condições de cultivo.
........................................................................................................................... 74
Figura 19 - Comparação da produtividade de biomassa entre as diferentes condições de
cultivo. .............................................................................................................. 76
Figura 20 - Comparação do teor de lipídeos obtido entre as diferentes condições de cultivo.
........................................................................................................................... 78
Figura 21 - Comparação da produtividade média de lipídeos entre as diferentes condições
de cultivo. .......................................................................................................... 79
Figura 22 - Comparação da redução de DQO entre as diferentes condições de cultivo. ..... 81
Figura 23 - Gráfico comparativo da reologia entre todas as condições experimentais........ 82
Figura 26 - Gráfico comparativo entre os dias de cultivo da condição 3. ............................ 83
Figura 25 - Gráfico comparativo entre os dias de cultivo da condição 2............................. 83
Figura 27 - Gráfico comparativo entre os dias de cultivo da condição 4............................. 83
Figura 33 - Gráfico da viscosidade aparente versus taxa de cisalhamento. ......................... 87
Figura 34 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de concentração final
do cultivo. .......................................................................................................... 90
Figura 35 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de
concentração final do cultivo. ........................................................................... 91
Figura 36 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de obtenção de
biomassa total. ................................................................................................... 94
Figura 37 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de obtenção
de biomassa total. .............................................................................................. 94
Figura 38 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de obtenção de
biomassa total. ................................................................................................... 97
de biomassa total. .............................................................................................. 97
Figura 40 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de teor de lipídeos. 100
Figura 41 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de teor de
lipídeos. ........................................................................................................... 100
Figura 42 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de produtividade
média de lipídeos............................................................................................. 104
produtividade média de lipídeos. .................................................................... 104
Figura 44 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de redução de DQO.
......................................................................................................................... 107
......................................................................................................................... 107
Figura 46 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de redução de índice
de consistência. ............................................................................................... 110
Figura 47 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de redução
de índice de consistência. ................................................................................ 110
Figura 48 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de índice de
comportamento. .............................................................................................. 111
Figura 49 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de índice de
comportamento. .............................................................................................. 112
Figura 50 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de tensão limite de
escoamento. ..................................................................................................... 113
Figura 51 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de tensão
limite de escoamento....................................................................................... 113
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Produtividade de biodiesel com diferentes matérias-primas (os valores para as

microalgas são calculados a partir do teor em óleo). ........................................ 28
Tabela 2 - Comparação da composição celular entre diferentes espécies de microalgas. ... 32
Tabela 3 - Vantagens e desvantagens dos sistemas de cultivo. ........................................... 36
Tabela 4 - Comparação das produtividades de biomassa, lipídeos e ácidos graxos usando
diferentes fontes de carbono durante cultivo em dois estágios. ........................ 40
Tabela 5 - Espécies produtoras de lipídeos e suas respectivas porcentagens em relação à
biomassa seca. ................................................................................................... 45
Tabela 6 - Comparação entre os modelos reológicos. ......................................................... 52
Tabela 7 - Variáveis de entrada e níveis usados para determinação dos parâmetros
significativos no cultivo da microalga Chlorella minutissima.......................... 69
Tabela 8 - Arranjo ortogonal da matriz Taguchi L9. ........................................................... 70
Tabela 9 - Quantidade de biomassa obtida de 10 L de cultivo. ........................................... 74
Tabela 10 - Produtividade de biomassa. .............................................................................. 76
Tabela 11 - Teor de lipídeos ................................................................................................ 77
Tabela 12 - Produtividade média de lipídeos. ...................................................................... 79
Tabela 13 - Análise de redução da Demanda Química de Oxigênio. .................................. 80
Tabela 14 - Comparação da confiança do ajuste entre os modelos matemáticos aplicados a
análise reológica da suspensão da microalga Chlorella minutissima. .............. 85
Tabela 15 - Parâmetros do modelo matemático Herschel-Bulkley para cada condição
experimental de cultivo. .................................................................................... 86
Tabela 16 - Matriz ortogonal da resposta em termos de obtenção de biomassa total dos
cultivos de microalgas em diferentes condições experimentais. ....................... 90
Tabela 17 - ANOVA para a média em termos de concentração final do cultivo. ............... 91
Tabela 18 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de concentração final do cultivo.
........................................................................................................................... 92
cultivos de microalgas em diferentes condições experimentais. ....................... 93
Tabela 20 - ANOVA para a média em termos de obtenção de biomassa total. ................... 95
Tabela 21 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de obtenção de biomassa total... 95
Tabela 22 - Matriz ortogonal da resposta em termos de produtividade de biomassa dos
cultivos de microalgas em diferentes condições experimentais. ...................... 96
Tabela 23 - ANOVA para a média em termos de produtividade de biomassa. ................... 98
Tabela 24 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de produtividade de biomassa. .. 98
Tabela 25 - Matriz ortogonal da resposta em termos de teor de lipídeos dos cultivos de
microalgas em diferentes condições experimentais. ......................................... 99
Tabela 26 - ANOVA para a média em termos de teor de lipídeos. ................................... 101
Tabela 27 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de teor de lipídeos. .................. 101
Tabela 28 - Matriz ortogonal da resposta em termos de produtividade de lipídeos dos
cultivos de microalgas em diferentes condições experimentais. .................... 103
Tabela 29 - ANOVA para a média em termos de produtividade média de lipídeos. ........ 105
Tabela 30 - ANOVA para a razão sinal ruído em termos de produtividade média de
lipídeos. ........................................................................................................... 105
Tabela 31 - Matriz ortogonal da resposta em termos de redução de DQO dos cultivos de
microalgas em diferentes condições experimentais. ....................................... 106
Tabela 32 - ANOVA para a média em termos de redução de DQO. ................................. 108
Tabela 33 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de redução de DQO. ............... 108
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
ANOVA Análise de Variância

CC Concentração de Chorume (%)
CFC Concentração da Fonte de Carbono (g.L-1)
DEQUI Departamento de Engenharia Química
DOE Design of Experiments (Planejamento de Experimentos)
DQO Demanda Química de Oxigênio (mg O2.L-1)
EEL Escola de Engenharia de Lorena
FA Frequência de agitação (rpm)
F Teste F
GL Graus de Liberdade
LED Light Emitting Diode (Diodo emissor de Luz)
PB Produtividade de biomassa (mg L-1 d-1)
PL Produtividade média de lipídeos (mg L-1 d-1)
PVC Polyvinyl Chloride (Policloreto de Vinila)
S/N Razão Sinal-Ruído
SMQ Soma Média Quadrática
SQ Soma Quadrática
USP Universidade de São Paulo
VA Vazão de aeração (vvm)
LISTA DE SÍMBOLOS
CO2 gás carbônico

m2 metro quadrado
m3 metro cúbico
L9 matriz ortogonal de Taguchi com 9 condições experimentais
µm micrometro
cm centímetro
pH potencial hidrogeniônico
H2CO3 ácido carbônico
HCO3- íon bicarbonato
CO3-2 íon carbonato
H+ íon hidroxônio
H2O água
OH- íon hidroxila
NaHCO3 bicarbonato de sódio
g gramas
L litro
O2 oxigênio
o
C graus Celsius
N nitrogênio
P fósforo
ω3 ômega 3
ω6 ômega 6
C carbono
mL mililitro
GHz giga hertz
H2PO4- íon dihidrogênio fosfato
HPO4-2 íon monohidrogênio fosfato
E irradiância
CH4 metano
Ca+2 íon cálcio
Mg+2 íon magnésio
Na+ íon sódio
K+ íon potássio
NH+4 íon amônio
Cl- íon cloreto
SO4-2 íon sulfato
Cd+2 íon cádmio
Pb+2 íon chumbo
Cr+3 íon cromo
Cu+2 íon cobre
 tensão de cisalhamento (dyn.cm-2)
dyn dina
 taxa de deformação (1.s-1)
µ viscosidade (cP)
nap viscosidade aparente (cP)
k Índice de consistência (cP)
cP centipoise
n Índice de comportamento (adimensional)
w watts
h hora
mm milimetro
nm nanometro
NaCl cloreto de sódio
v/v razão volume por volume
mm² milimetro quadrado
mm³ milimetro cúbico
rpm rotações por minuto
M molaridade (mol.L-1)
mM milimol
t variação de tempo (dias)
L% teor de lipídeos (%)
s segundos
vvm volume de ar por volume do meio de cultivo por minuto
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO ................................................................................................ 21
1.1 Justificativa ....................................................................................................... 24
1.2 Objetivos ........................................................................................................... 25
1.2.1 Objetivo geral.................................................................................................... 25
1.2.2 Objetivos específicos ........................................................................................ 25
2 PESQUISA BIBLIOGRÁFICA........................................................................ 26
2.1 Microalgas como matéria-prima para biocombustíveis .................................... 26
2.2 Metabolismo das Microalgas ............................................................................ 31
2.3 Cultivo de microalgas ....................................................................................... 32
2.3.1 Tipos de reator .................................................................................................. 32
2.3.2 Principais parâmetros de cultivo ....................................................................... 36
2.3.3 Crescimento e desenvolvimento das microalgas .............................................. 40
2.3.4 Acompanhamento do crescimento das microalgas ........................................... 42
2.3.5 Colheita da biomassa ........................................................................................ 42
2.3.6 Síntese de lipídeos em microalgas .................................................................... 44
2.3.7 Extração de lipídeos .......................................................................................... 46
2.4 Uso de efluentes no cultivo da biomassa microalgal ........................................ 47
2.5 Reologia ............................................................................................................ 50
2.5.1 Modelos reológicos ........................................................................................... 52
2.5.1.1 Modelo de Bingh am ......................................................................................... 53
2.5.1.2 Modelo de Ostwald Waale ou Lei da Potência ................................................. 54
2.5.1.3 Modelo de Herschel-Bulkley ............................................................................ 55
2.5.2 Fatores que influenciam na reologia das suspensões ........................................ 55
2.6 Planejamento de Experimentos ......................................................................... 56
2.6.1 Método de Taguchi ........................................................................................... 57
3 METODOLOGIA ............................................................................................. 59
3.1 Caracterização da microalga utilizada nos experimentos ................................. 59
3.2 O reator tipo Raceway Pond ............................................................................. 60
3.3 Meio e condições experimentais para o crescimento da microalga Chlorella
minutissima em reator do tipo Raceway. .......................................................... 61
3.3.1 Preparo do inóculo ............................................................................................ 62
3.3.2 Desenvolvimento dos cultivos .......................................................................... 63
3.4 Acompanhamento do crescimento .................................................................... 63
3.5 Obtenção da biomassa ....................................................................................... 64
3.6 Extração de lipídeos .......................................................................................... 66
3.7 Demanda Química de Oxigênio (DQO) ............................................................ 67
3.7.1 Preparo das amostras ......................................................................................... 67
3.7.2 Digestão e medição da absorbância .................................................................. 68
3.7.3 Medição da absorbância .................................................................................... 68
3.8 Análises reológicas............................................................................................ 68
3.9 Planejamento Experimental .............................................................................. 69
3.9.1 Análise Estatística ............................................................................................. 70
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO ...................................................................... 71
4.1 Crescimento celular dos cultivos ...................................................................... 71
4.2 Biomassa ........................................................................................................... 74
4.2.1 Quantificação da biomassa obtida ..................................................................... 74
4.2.2 Produtividade de biomassa ................................................................................ 75
4.3 Lipídeos ............................................................................................................. 77
4.3.1 Teor de lipídeos ................................................................................................. 77
4.3.2 Produtividade média de lipídeos ....................................................................... 78
4.4 Demanda química de oxigênio (DQO) ............................................................. 80
4.5 Reologia ............................................................................................................ 81
4.5.1 Modelos matemáticos ajustados ao comportamento reológico da suspensão da
microalga Chlorella minutissima cultivada em reator Raceway ....................... 84
4.5.2 Viscosidade Aparente........................................................................................ 86
4.6 Análises Estatísticas .......................................................................................... 89
4.6.1 Crescimento celular dos cultivos ...................................................................... 89
4.6.2 Biomassa total obtida ........................................................................................ 93
4.6.3 Produtividade de biomassa ................................................................................ 96
4.6.4 Teor de lipídeos ................................................................................................. 99
4.6.5 Produtividade média de lipídeos ..................................................................... 103
4.6.6 Demanda química de oxigênio ........................................................................ 106
4.6.7 Reologia .......................................................................................................... 109
Índice de consistência ........................................................................................................ 109
Índice de comportamento (n) ............................................................................................. 111
Tensão limite de escoamento ............................................................................................. 112
5 CONCLUSÕES .............................................................................................. 115
REFERÊNCIAS................................................................................................................. 116
ANEXOS ......................................................................................................................... 131
ANEXO A - Valores tabelados de Fcrítico para teste bilateral com α=0,05. ........................ 131
ANEXO B - Caracterização do chorume proveniente do aterro sanitário do município de
Cachoeira Paulista. .......................................................................................... 132
ANEXO C - Comparação entre os valores de obtenção de biomassa e lipídeos cultivado
em diferentes concentrações de nitrato de sódio e acetato de sódio. .............. 133
APÊNDICES ..................................................................................................................... 134
APÊNDICE A - Caracterização metálica do chorume utilizado nos cultivos ................... 134
APÊNDICE B - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 1. ........ 134
APÊNDICE C - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 2. ........ 134
APÊNDICE D - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 3. ........ 135
APÊNDICE E - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 4. ........ 135
APÊNDICE F - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 5. ......... 135
APÊNDICE G - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 6. ........ 136
APÊNDICE H - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 7. ........ 136
APÊNDICE I - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 8. .......... 136
APÊNDICE J - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 9. ......... 137
APÊNDICE K - Resultado da análise de precipitação da biomassa diária (g). ................. 137
APÊNDICE L - Curva de calibração para obtenção da concentração da Demanda Química
de Oxigênio (DQO)......................................................................................... 138
APÊNDICE M - Curva de calibração para a obtenção da concentração da suspensão
microalgal do cultivo. ..................................................................................... 138
21
1 INTRODUÇÃO
Ao longo de todo o século XX, os produtos do refino de petróleo tornaram-se a

principal forma de geração de energia e a principal base para o desenvolvimento da indústria
química, gerando uma dependência global deste combustível fóssil. Contudo, a crise
suscitada pelo aumento do preço do barril petrolífero, na década de 1970, direcionou ao
desenvolvimento de tecnologias para a obtenção de fontes alternativas de energia (MARTÍN;
GROSSMANN, 2012).
Concomitantemente, a crescente preocupação com questões ambientais tem se
evidenciado nos últimos anos, passando a influenciar nas decisões dos dirigentes de
empresas quanto às fontes energéticas. Dentro deste aspecto, os combustíveis fósseis são os
mais criticados, devido à produção de CO2 em quantidade que o planeta não tem condições
de assimilar a longo prazo (causando o efeito estufa) e, também, pela possibilidade de
emissão de óxidos de enxofre. Tais combustíveis pertencem à categoria não biodegradável
e que, ao utilizá-los, emitem compostos poluentes à atmosfera (SCHMITZ; MAGRO;
COLLA, 2012).
Nesse contexto, a bioenergia emerge como uma opção renovável com grande potencial
de satisfazer às necessidades da sociedade moderna. Em outras palavras, as questões
econômicas, geopolíticas e ambientais têm chamado a atenção do mundo para fontes
alternativas de energia, em especial para os biocombustíveis onde os mais representativos
desta classe - o biodiesel, resultado do processamento de lipídeos, e o bioetanol, originário
da fermentação de carboidratos - apresentam processos produtivos estabelecidos. No Brasil,
a produção desses biocombustíveis está perfeitamente consolidada sendo, basicamente, o
biodiesel obtido a partir do óleo de soja e o bioetanol oriundo da cana-de-açúcar
(DEMIRBRAS; BALAT, M.; BALAT, H., 2009).
Entretanto, a viabilidade no uso de um biocombustível está associada à economia de
energia gerada por ele, destacando a importância em se fazer um balanço energético da sua
cadeia produtiva, assim como da quantidade de gases de efeito estufa emitidos, incluindo as
fases agrícola e industrial. Nesse aspecto, a produção do biodiesel proveniente da soja tem
se mostrado uma boa opção apenas sob o ponto de vista econômico, mas ruim no que diz
respeito ao balanço energético, à ocupação de terras e à inclusão social (a qual constitui um
sério problema no Brasil). Além disso, dada à dimensão do território brasileiro, a exploração
de outras fontes de matéria-prima para obtenção de biocombustíveis se faz necessária, onde
a diversificação da matriz bioenergética caracteriza-se como uma nova oportunidade de
22
emprego e geração de renda. Diante disto, projetos experimentais realizados em todo o

mundo têm destacado as microalgas como a única fonte de biocombustíveis, capaz de
substituir a dependência do petróleo no futuro de forma econômica e socialmente viável
(DEMIRBRAS, A.; DEMIRBRAS, M. F., 2011; SILVA; GOUVEIA; REIS, 2014).
Nos últimos anos, a obtenção de energia a partir das microalgas ganhou adeptos em
muitas partes do mundo, como nos Estados Unidos e em diversos países europeus. O
incentivo à utilização de microalgas como matéria-prima para produção de biocombustíveis
é decorrente dos grandes avanços da engenharia de biossistemas, mas que ainda apresenta
grandes lacunas a serem otimizadas (MATHIMANI; UMA; PRABAHARAN, 2015; TIAN
et al., 2016). Nesse cenário, a construção de reatores que viabilize o cultivo das microalgas
em grande escala e que permita maior controle sobre as condições operacionais destaca-se
como um dos principais desafios, uma vez que os elevados custos de construção e
operacionalidade dos fotobiorreatores são fatores limitantes para a sua utilização comercial,
não apresentando condições para suportar de forma economicamente viável o cultivo em
grande escala (HE; WANG; SONG, 2016; MAGRO et al., 2016).
Ainda, segundo He, Wang e Song (2016), apesar do fato das microalgas possuírem
elevada produtividade lipídica, o seu cultivo energético em larga escala demanda elevado
conteúdo de nutrientes. Nesse sentido, diferentes tipos de efluentes têm sido testados como
fontes de água e nutrientes para a produção de microalgas, o que pode reduzir visivelmente
os custos de produção. A utilização de efluentes como meio de cultivo pode também
melhorar o balanço energético e reduzir impactos ambientais associados à sua disposição em
corpos d´água sem o tratamento prévio (NECKEL; GOELLNER; BERTOLDI, 2016). No
presente trabalho, o efluente utilizado no meio de cultivo como fonte de nutrientes foi o
chorume (lixiviado de aterro sanitário), proveniente do aterro sanitário do município de
Cachoeira Paulista. O aterro sanitário de Cachoeira Paulista-SP está localizado na Estrada
Municipal Fiuta, Sítio Pai Joaquim, km 4, Bairro do Jardim. Suas ativdades foram iniciadas
em 16 de junho de 2006. A empresa responsável pelo aterro é a Vale Soluções Ambientais
(VSA), que garante que o terreno disponibilizado para a atividade possui condições ideias
de relevo e planialtimetria, perfazendo um total de 500 mil m2. Segundo André Luiz Galvão
Rodrigues, gerente da unidade, o aterro de Cachoeira Paulista possui capacidade para receber
350 toneladas de resíduo por dia, sendo esses resíduos gerados pelas cidades de Lorena,
Queluz, Canas, Guaratinguetá, Cachoeira Paulista, Aparecida, Lavrinhas, Potim, Cunha,
23
Caraguatatuba e São Sebastião. O chorume é coletado diariamente de uma lagoa com

capacidade máxima de 210m3 em caminhões com capacidade de armazenamento de 30m3.
O Departamento de Engenharia Química (DEQUI) da Escola de Engenharia de
Lorena/Universidade de São Paulo (EEL/USP) tem desenvolvido, ao longo dos anos, uma
série de trabalhos científica e tecnologicamente relevantes. Com relação aos projetos
envolvendo a produção de biocombustíveis a partir de microalgas, os estudos têm englobado
principalmente a “Otimização no cultivo de microalgas como fonte de matéria-prima para a
produção do biodiesel”, onde está previsto a construção de um biorreator de alimentação
contínua, sendo selecionado o sistema de alimentação mais conveniente, após análises físicas
e químicas das correntes de alimentação. Numa linha de pesquisa desse tipo, o
comportamento reológico ocupa posição de destaque, pois todos os materiais envolvidos no
processo têm comportamento não-newtoniano e devem ser submetidos aos diversos tipos de
operações unitárias como agitação, mistura, trocas de calor, movimentação por bombas
especiais, separações e outras que podem advir da concepção e desenvolvimento de todo o
processo.
Nesse contexto, foi proposto um terceiro projeto, com o objetivo de analisar o
comportamento reológico de suspensões da microalga Chlorella minutissima em diferentes
tempos de cultivo em reatores do tipo coluna de bolhas, submetido e aprovado pela Fapesp
(Processo N. 2014/03244-0, concluído em outubro de 2016), sob o título de “Análise do
comportamento reológico de suspensões de Chlorella minutissima ao longo das diversas
etapas para a produção do biodiesel”.
De acordo com os resultados obtidos nos trabalhos mencionados nos parágrafos
anteriores, o cultivo em chorume intensificou a taxa do crescimento microalgal, sem a
necessidade de adição de sais, conferindo baixo custo ao processo. Paralelamente, a
biomassa microalgal cultivada no meio Guillard apresentou comportamento não-newtoniano
e tal comportamento, aliado ao fato dessas suspensões apresentarem estruturas complexas,
demanda que, paralelamente às medidas reológicas, a biomassa seja caracterizada com
relação à configuração, quantidade, tamanho e distribuição das partículas dispersas, por meio
de um microscópio biológico.
Considerando a escassez de informações à respeito de dados reológicos de
comportamento de suspensão de microalgas na literatura científica e sabendo que esta
informação é um conhecimento chave de suma importância para se projetar um reator que
atenda as condições necessárias para o aumento de escala e, ainda, que os fotobiorreatores
não demonstram ser capazes de suprir tal necessidade, o presente trabalho tem como objetivo
24
analisar o comportamento reológico de suspensões da microalga Chlorella minutissima,

cultivada em chorume, em reator Raceway, para diferentes tempos e condições de processo,
assim como a configuração, quantidade, tamanho e distribuição das partículas dispersas na
biomassa. Pata tal, foram avaliados os efeitos da concentração do chorume (2,5%; 5,0% e
7,5%), da concentração de fonte de carbono (acetato de sódio) (0g.L-1; 1g.L-1 e 2g.L-1), vazão
da aeração no reator (0,05vvm; 0,10vvm e 0,15vvm) e da frequência de rotação do agitador
(4rpm, 6rpm e 8rpm).
O comportamento reológico da suspensão da microalga Chlorella minutissima foi
analisado diariamente durante os períodos de cultivo, por meio do reômetro giratório
Brookfield (LVDV-3T). As partículas suspensas foram caracterizadas com relação à
configuração, quantidade, tamanho e distribuição, por meio de um microscópio biológico
trinocular acoplado com câmera digital.
1.1 JUSTIFICATIVA
O uso do chorume como fonte de nutrientes e minerais no cultivo de microalgas torna

o processo mais barato, já que o uso de vitaminas e demais nutrientes de forma pura encarece
o processo, tornando-o assim, inviável em escalas maiores, como na Raceway. Deste modo,
propõe-se o uso do chorume, que contém grande parte do que é necessário ao cultivo, e ,se
necessário, suplementado com nutrientes que estejam em falta na sua composição. A
realização de experimentos, no qual são avaliadas o comportamento das respostas ao variar
as condições de entrada (fatores controlados) é de extrema importância para o entendimento
do processo e no auxílio de tomada de decisão de maineira eficaz. A utilização do
planejamento de experimentos, a partir do arranjo ortogonal de Taguchi, visa colaborar para
a viabilidade da pesquisa, reduzindo de forma considerável a quantidade de tempo e recursos
gastos. Com os resultados obtidos, através deste estudo, o aumento de escala torna-se
possível, visto que a maior limitação para o procedimento é a falta de conhecimento do
comportamento do processo e de como controlar as variáveis inerentes a ele. Ainda, em
relação aos resultados, existem poucos estudos abordando reologia de suspensão de
microalgas, principalmente se restringirmos o assunto a grandes reatores de cultivo, como é
o caso da Raceway.
25
1.2 OBJETIVOS
1.2.1 Objetivo geral
Analisar o comportamento reológico de suspensões da microalga Chlorella

minutissima, cultivada em chorume, em reator Raceway, para diferentes condições de
processo, assim como a configuração, quantidade, tamanho e distribuição das partículas
dispersas na biomassa e encontrar a melhor condição de cultivo para cada parâmetro de
resposta analisado, através da matriz experimental do arranjo ortogonal de Taguchi L9.
1.2.2 Objetivos específicos
Derivados do objetivo geral, o presente trabalho teve outras metas a serem alcançadas:
● Realizar análises como: acompanhamento diário do crescimento do cultivo,
análises reológicas, análise de demanda química de oxigênio, obtenção da
biomassa e extração de lipídeos;
● Utilizar o chorume como fonte de nutrientes e minerais ao cultivo, visando
diminuir os custos de produção e perimitir o aumento da escala produtiva;
● Avaliar a eficácia do tratamento de efluentes promovido pelo cultivo de
microalgas, através dos valores de redução de DQO;
● Testar a consistência do arranjo ortogonal de Taguchi.
26
2 PESQUISA BIBLIOGRÁFICA
2.1 MICROALGAS COMO MATÉRIA-PRIMA PARA BIOCOMBUSTÍVEIS
As microalgas são pequenos organismos fotossintéticos encontrados em ambientes

aquáticos (água salgada ou doce). A ausência de estruturas (caule e folhas), aliada ao fato de
encontrarem-se submersas em água, tornam as microalgas mais eficientes na conversão de
energia solar em biomassa, quando comparadas às plantas superiores (SCHENK et al.,
2014).
Por volta de 1919 iniciou-se culturas propriamente ditas com algas, sendo a espécie
Chlorella sp. a pioneira nesse sentido, verificando-se que certas algas podiam duplicar-se
com muita velocidade e que sua matéria seca podia conter 50% de proteína crua (BORZANI
et al., 2001). As células de Chlorella podem ter de 2 a 12 µm de diâmetro, são unicelulares,
microscópicas, esféricas, ovoides ou elipsoidais, podendo ocorrer em água doce, salgada e
solos. O cloroplasto é parietal, em forma de “taça”, podendo apresentar ou não um pirenoide
(GRAHAM; WILCOX, 2002; SHUBERT, 2003), encontrada comumente em lagos, com
grande habilidade de realizar fotossíntese (VONSHAK, 1997). Sua composição média é de
aproximadamente 20% de gordura, 45% de proteina, 20% de carboidrato e 10% de minerais
e vitaminas (PHUKAN et al., 2011). A reprodução é principalmente assexuada sendo
realizada pela formação de quatro autoesporos. A reprodução sexuada é desconhecida
(GRAHAM; WILCOX, 2002).
Microrganismos como a Chlorella sp. (família Oocystaceae), são unicelulares, de
águas continentais, com ampla distribuição geográfica e capazes de gerar elevada quantidade
de biomassa sob determinadas condições de cultivo (SIPAÚBA-TAVARES; PELICONE;
OLIVEIRA, 2009; MOHAN et al., 2009).
Ainda, segundo Sipaúba-Tavares, Pelicone e Oliveira (2009) e Mohan et al. (2009),
dentre as microalgas mais utilizadas para produção de biomassa destacam-se os organismos
da Classe Chlorophyceae, os quais apresentam diversos membros com altas taxas de divisão
celular (tempo de geração curto). Alguns representantes das famílias Oocystaceae (Chlorella
minutissima. (Figura 1) e Selenastraceae (Ankistrodesmus sp.)) são exemplos típicos de
microalgas, unicelulares, com ampla distribuição geográfica e que geram elevadas
quantidades de biomassa em curtos intervalos de tempo.
27
Figura 1 - Células da microalga Chlorella minutissima vista em microscópio biológico com

aumento de 600 vezes.
Fonte: (TAGLIAFERRO, 2017).
O crescente interesse no estudo de microrganismos como microalgas deve-se à sua

aplicação comercial em diferentes campos tecnológicos, como na nutrição, na saúde humana
e animal, no tratamento de águas residuais e na obtenção de compostos de interesse das
indústrias alimentícia, química e farmacêutica, dentre outras (AMIN, 2009; XIA; ZHANG,
HU, 2011). Além destas, as microalgas estão despertando interesse no cenário energético e
ambiental por apresentarem amplo potencial de aproveitamento, devido ao rápido
crescimento, a elevada eficiência de conversão fotossintética, ao elevado teor e capacidade
de acúmulo de lipídeos e carboidratos, a produção não sazonal e a possibilidade de cultivo
em terrenos impróprios para culturas alimentares. Tais vantagens tornaram esses
microrganismos promissores substratos para a produção de combustíveis, sendo o biodiesel
o mais explorado, visto que algumas espécies de microalgas têm elevado teor lipídico,
podendo produzir até 137000 litros de óleo por hectare, ao ano, em condições ótimas
(POHNDORF et al., 2016).
O aspecto econômico de produção de microalgas vem mudando com o passar do
tempo. Primeiramente, seu uso era focado para a área alimentar, logo após surgiram estudos
para obtenção de compostos para serem utilizados na química fina, na fabricação de
biomateriais, aplicações na agricultura, medicina, tratamento de água e esgoto, bioabsorção
de metais pesados, biofertilização e acondicionador de solos para o setor agrário. Porém,
recentemente, seu maior foco de utilização está voltado para o setor energético, na obtenção
de biocombustíveis (REIS; GOUVEIA, 2013).
28
Atualmente, as microalgas são consideradas a fonte de matéria-prima que tem o maior

potencial para substituir os combustíveis fósseis. A produção de óleo de microalgas é muitas
vezes superior a de plantas oleaginosas, como a palma, o amendoim e a mamona. Para se
cultivar essa biomassa não são usados solos agrícolas, elas auxiliam na absorção do dióxido
de carbono e, também, podem ser utilizadas no tratamento de efluentes (FRANCO, 2011).
A composição química das microalgas contém três componentes principais:
carboidratos, proteínas e lipídeos. A concentração dos componentes é variável de espécie
para espécie. Na fabricação do biodiesel, a matéria prima necessária é o lipídeo, que se
encontra na forma de triglicerídeo, sendo que os ácidos graxos presentes nas microalgas
podem estar dispostos em cadeias curtas e longas e os de cadeia curta são os ideais para a
produção deste biocombustível (CHISTI, 2007).
Nesse contexto, os biocombustíveis a partir de microalgas são uma alternativa atrativa
(ZHANG et al., 2010) devido a sua rápida razão de crescimento, alta concentração de
lipídeos, pouca ocupação territorial - em comparação com as demais fontes de
biocombustíveis - e elevada absorção de CO2 (JORQUERA et al., 2010; SINGH; OLSEN,
2011). A Tabela 1 apresenta dados que diferenciam as diversas matérias-primas utilizadas
para a produção de biodiesel.
Tabela 1 - Produtividade de biodiesel com diferentes matérias-primas (os valores para as

microalgas são calculados a partir do teor em óleo).
Teor de Produtividade Produtividade

Área Necessária
Matéria-Prima Óleo em Óleo em Biodiesel
(m2.ano-1.Kgbiodiesel-1)
(% m.m-1) (L.ha-1.a-1) (Kg.ha-1.a-1)
Milho 44 172 66 152
Soja 18 636 18 562
Jatropha 28 741 15 656
Camelina 42 915 12 809
Girassol 40 1070 11 946
Palma 36 5366 2 4747
Microalga (teor
30 58700 0.2 51927
reduzido de óleo)
Microalga (teor
50 97800 0.1 86515
médio de óleo)
Microalga (teor
70 136900 0.1 121104
elevado de óleo)
Fonte: (MATA; MARTINS; CAETANO, 2010).
De acordo com Monteiro e Mota (2013), os biocombustíveis podem ser classificados

de acordo com a matéria prima utilizada na sua produção, sendo:
29
 Os biocombustíveis de primeira geração, aqueles cujo processo produtivo encontra-se

bem desenvolvido e são produzidos a partir de matérias-primas de origem alimentícia,
como o milho e a soja. A grande desvantagem de sua produção seria a competição entre
o uso do alimento para fonte de combustível, aumentando o preço do alimento e seus
derivados.
 Os biocombustíveis de segunda geração, aqueles que utilizam como matéria-prima a
biomassa lignocelulósica, podendo esta se originar a partir dos resíduos agrícolas e do
processamento da madeira, utilizando óleos de vegetais que não são comestíveis, como
o óleo da semente de tabaco e tem como principal problema a sazonalidade da colheita
da matéria prima e a falta de abundância da matéria prima.
 Os biocombustíveis de terceira geração, aqueles originados de biomassa cultivada para
este propósito e que não tenha nenhuma competição com a produção de alimentos, como
as algas. Como mostrado na Tabela 1, as microalgas tem maior produtividade de óleo se
comparada a outras matérias-primas, além de outras vantagens, como: necessitar de uma
área menor para ser produzida e de não ser um alimento.
Segundo Huntley e Redalje (2007), o gênero Chlorella é considerada uma candidata
promissora para a produção comercial de lipídeos devido ao seu rápido crescimento e fácil
cultivo, destacando a Chlorella sp. como uma das espécies mais robustas para o cultivo em
tanques abertos devido ao seu potencial de resistir a contaminações, visto que há uma
contaminação considerável nesses tipos de tanque, pelo fato de ficarem expostos a
atmosfera.
Além do biodiesel, aplicações potenciais na utilização dos resíduos provenientes da
extração dos lipídeos podem ser citadas, já que tais resíduos são geralmente ricos em
carboidratos, proteínas e pigmentos, podendo ser convertidos em uma variedade de
biocombustíveis como o biogás, bioetanol, biometado, biohidrogênio, dentre outros
(PRAGYA; PANDEY; SAHOO, 2013; NEOFOTIS et al., 2016). De acordo com Zhu et al.
(2014), a produção de etanol e biogás a partir dos resíduos de biomassa gerados em processos
como a extração lipídica, pode aumentar a produtividade energética total e representa uma
medida fundamental para ambos os aspectos, econômico e energético, em equilíbrio.
Pereira et al., (2012), afirma que a produção destes organismos autotróficos é realizada
em sistemas iluminados, tais como os fotobiorreatores (sistemas fechados) ou as lagoas
fotossintéticas (sistemas abertos) e, para que a taxa de crescimento e a produtividade sejam
mais elevadas, as microalgas necessitam de condições de cultivo adequadas Ainda, segundo
os autores, os principais arranjos dos reatores abertos são os tanques retangulares e circulares
30
do tipo Raceway; nos sistemas fechados normalmente empregam-se reatores do tipo coluna
de bolhas, Air Lift e arranjos tubulares espirais (Figura 2) .
Figura 2 - Exemplo de reatores para cultivo de microalgas: (a)Reator tubular espiral, (b)Air
Lift e (c)Raceway.
Fonte: (a)(KOLLER, 2015), (b) O autor, (c)(HATTAB; GHALY, 2015).
De acordo com Singh e Dhar (2011), os principais parâmetros que influenciam na

produção da biomassa microalgal incluem a intensidade de luz, a concentração do CO2, a
quantidade de nutrientes e as condições de mistura. No que diz respeito às condições de
mistura, para que a taxa de crescimento e a produtividade da biomassa sejam elevadas, um
sistema de agitação adequado é imprescindível, de modo a manter as células em suspensão,
proporcionar uma exposição uniforme de luz em todas as células, aumentar a transferência
de massa para reduzir o gradiente de nutriente na cultura e para evitar sedimentação das
células. No entanto, o aumento do cisalhamento pelo fornecimento excessivo de energia
pode produzir danos celulares, afetando o desempenho da cultura (BENNEMANN;
OSWALD, 1996; MAGRO et al., 2016).
No desenvolvimento de novos projetos industriais, como é o caso do cultivo de
microalgas em larga escala para geração de biocombustíveis, a análise do comportamento
reológico do material é de fundamental importância nos cálculos de engenharia de processos,
envolvendo grande variedade de equipamentos tais como bombas, tubulações, misturadores,
aeradores, trocadores de calor, dentre outros (PELEGRINE;SILVA; GASPARETTO, 2002;
SILVA; PELEGRINE; GASPARETTO, 2005).
31
De acordo com os resultados obtidos por Lira (2011) e Pelegrine, Silva e Loures
(2016), os cultivos microalgais não apresentam valores constantes de viscosidade ao longo
das diferentes etapas do processo e, para otimizá-las, torna-se necessário cautelosa análise
do comportamento reológico dos cultivos em cada uma destas etapas.
2.2 METABOLISMO DAS MICROALGAS
O metabolismo da microalga pode ser autotrófico, heterotrófico ou mixotrófico. No

autotrófico, a geração de energia necessária para a sobrevivência da célula é regida pela
fotossíntese. No heterotrófico são adicionados nutrientes e outros compostos orgânicos
como fonte de carbono (por exemplo: glicose e/ou acetato), que são dissolvidos no meio de
cultivo, para que o metabolismo ocorra na ausência de luz. E por último, no cultivo
mixotrófico ocorre a atuação de ambos os metabolismos citados anteriormente (MORAIS,
2011; KAEWPINTONG et al., 2007; TERRY; RAYMOND, 1985; BOROWITZKA, 1999;
KIM; HUR, 2013). A Chlorella minutissima é um exemplo de microalga que possui a
capacidade de se adaptar aos três tipos de metabolismo (CHEN et al., 2011;TERRY;
RAYMOND, 1985). Os tipos de metabolismo estão representados esquematicamente na
Figura 3.
Figura 3 - Diagrama simplificado do metabolismo das microalgas.
Fonte: (MARIANO, et al., 2010).
Estudos com microalgas estão sendo realizados nos mais diversos campos, devido a
sua composição e flexibilidade metabólica. Alguns exemplos, são: tratamento de águas
residuais, detoxificação biológica e remoção de metais pesados, como bioindicadores para
32
detecção de substâncias, entre outros. Os cultivos heterotróficos e mixotróficos vem sendo

empregados nos meios de cultivo empregando efluentes (RAMSUNDAR et al., 2017;
RAZZAK et al., 2017; REYIMU; OZÇIMEN, 2017; SINGH; TIWARI; DAS, 2016). Ainda,
o cultivo mixotrófico, apresenta vantagens, como: rápido crescimento e elevado rendimento
em biomassa e teor de lipídeos, tornando bastante interessante para produção de biodiesel
(MITRA; VAN LEEUWEN; LAMSAL, 2012; HEREDIA-ARROYO et al., 2011)
Além dos lipídeos, as microalgas possuem outros metabólitos de valor agregado, como
por exemplo, carboidratos, proteínas e pigmentos que podem ser refinados e comercializados
com diferentes aplicações. Dentre as principais espécies de microalgas cultivadas hoje no
mundo, estão a Chlorella sp. e Spirulina sp., utilizadas com a finalidade principal de
suplementação alimentar; a Dunaliella salina, que é boa fonte de caroteno e a Haematococus
pluvialis, cultivada com o objetivo de produção de astaxantina (AZEREDO, 2012). A
composição celular média de algumas espécies de microalgas pode ser observada na Tabela
Tabela 2 - Comparação da composição celular entre diferentes espécies de microalgas.
Espécies Proteínas Caboidratos Lipídeos

Scenedesmus obliquus 50-56 10-17 12-14
Chlorella vulgaris 51-58 12-17 14-22
Chlorella pyrenoidosa 57 26 2
Chlorella minutissima 30 9 47
Dunaliella salina 57 32 6
Spirulina platensis 46-63 8-14 4-9
Spirulina maxima 60-71 13-16 6-7
Fonte: (BECKER, 2013; HATTAB; GHALY, 2015; TAGLIAFERRO, 2017).
2.3 CULTIVO DE MICROALGAS
2.3.1 Tipos de reator
As microalgas podem ser cultivadas de diferentes formas, que são divididas

basicamente em dois grandes grupos: cultivos abertos e fechados.
33
a) Sistema de cultivo aberto
As lagoas fotossintéticas são fotobiorreatores abertos, com profundidade variando de

10 a 50cm aproximadamente, de modo que permita a difusão de dióxido de carbono
proveniente da atmosfera e a penetração da luz solar (CHISTI, 2007).
A absorção de CO2 da atmosfera através da superfície de uma Raceway é
absolutamente insuficiente para suportar a fotossíntese. Uma fonte de CO2 é necessária para
evitar a limitação de carbono e atingir alta produtividade de biomassa. Segundo Weissman,
Tillet e Goebel (1989), entre 35 e 70% do CO2 injetado para um Raceway é perdido para a
atmosfera, se traduzindo em uma perda monetária significativa. Se o dióxido de carbono
for consumido rapidamente e não reposto, o pH torna-se alcalino. Quando o CO2 é injetado
no meio de cultivo, ele pode ser encontrado na forma de 4 espécies: CO2, H2CO3, HCO3- e
CO3-2 . Seguem as seguintes equações de equilíbrio:
CO2 + H2O ↔ H2CO3
H2CO3 ↔ HCO3- + H+
HCO3− ↔ CO3-2 + H+
Como pode-se perceber, existe um acúmulo de íons H+, fazendo com que o pH do
meio de cultivo diminua (LEKANG, 2007). No entanto, o consumo do dióxido de carbono
pelas microalgas é dado pelas seguintes reações (RICHMOND, 2004):
2HCO3-↔ CO3-2 + H2O + CO2
HCO3- ↔ CO2 + OH-
CO3-2 + H2O ↔ CO2 + OH-
É possível ver que há, no decorrer do cultivo, uma acumulação de íons OH-, levando
a um aumento gradual do pH. Caso não haja biomassa suficiente para absorver o CO2
injetado no meio de cultivo, o pH ficará mais ácido (LOURENÇO, 2006).
Um aumento do pH durante os períodos de pico de fotossíntese é comumente visto
nestes sistemas de cultivo (BECKER, 1994). Um pH alcalino não é desejado, uma vez que
resulta na geração de amônia. Esta dissolve-se a partir de sais de amônio e isto inibe a
produtividade de algas. O crescimento em meio alcalino pode não ser possível para as algas
oceânicas, como a Chlorella sp., uma vez que os sais marinhos se precipitam a valores de
pH inferiores a 8 (CHISTI, 2012). Na maioria dos casos, o CO2 fornecido é realmente
absorvido pela alga sob a forma de bicarbonato. Segundo Jeon et al. (2016), existem enzimas
34
que convertem o NaHCO3 em CO2 e vice-versa e Hou et al. (2016) e Kim et al. (2017),
elucidam a vantagem do uso do bicarbonato em relação ao CO2, que apresenta baixa
solubilidade no meio e, por isto, em grande parte é perdido para a atmosfera, assim, isto, faz
com que o uso do NaHCO3 torne-se mais conveniente em relação ao suprimento de CO2
gasoso.
Os Raceways Ponds (Figura 4) são sistemas pouco sofisticados, onde as microalgas
ficam expostas ao contato direto com a atmosfera, são cultivadas sob condições naturais de
iluminação e temperatura e com baixo ou nenhum controle dos parâmetros ambientais. Esses
tanques, geralmente, possuem 30cm de profundidade e são construídos de concreto, fibras
de vidro, policarbonato com fundo de terra ou revestidos com material plástico. Nestes
tanques ocorre uma recirculação em circuito fechado. Essas culturas são constantemente
agitadas com pás mecânicas para evitar a sedimentação das partículas, sendo utilizado para
a produção de microalgas das espécies: Spirulina, Chlorella, Arthrospira platensis,
Anabaena sp., Nannochloropsis e Dunaliella (DERNER et al.,2006; PEREIRA, et al., 2012;
JORQUERA et al., 2010; CHISTI, 2007).
A agitação de culturas, em meio líquido, mantém as células em suspensão e evita
parcialmente a sua deposição no fundo do biorreator, favorecendo a homogeneização de
disponibilidade de luz a todas as células em suspensão e promovendo a eliminação de
excesso de oxigênio dissolvido no meio, o que diminui o risco de ocorrer morte celular por
fotooxidação (BECKER, 2004).
Figura 4 - Desenho esquemático de uma lagoa de cultivo em formato de pista (Raceway).
Fonte: (JORQUERA, 2010).

35
O sistema aberto apresenta grandes vantagens, como: o baixo custo de investimento

de operação e possibilidade de scale up. A produção de microalgas em lagoas abertas não
compete por espaço com culturas agrícolas, podendo ser alocada em terras e locais não-
agricultáveis. Ainda, exigem menor energia na produção, tem fácil manutenção e limpeza e
o seu potencial de produção de energia líquida é elevado, o que favorece na produção de
biocombustíveis. Porém, sua maior limitação está na dificuldade em conseguir controlar o
processo e na vulnerabilidade a contaminação por outras algas ou protozoários, que podem
inviabilizar a produção (BRENNAN; OWENDE, 2010).
b) Sistema de cultivo fechado
Os sistemas fechados, também denominados fotobiorreatores, tem como principais

características o maior controle das variáveis de processo. São, geralmente, construídos de
acrílico ou vidro para uma melhor penetração da luz, melhorando a eficiência da fotossíntese.
Há o controle da iluminação e da intensidade da iluminação. Seu meio é esterilizado, o que
evita contaminação de outros microrganismos e é possível se controlar a vazão de ar e CO2,
permitindo uma maior produtividade ao adaptar o meio de cultivo para otimizar o processo
de acordo com a microalga escolhida. Dentre os tipos de fotobioreatores, os mais usados
são: flat-plate e coluna de bolhas ou tubulares (Figura 5).
Figura 5 - Fotobiorreatores dos tipos (a) Flat-Plate e (b) coluna de bolhas.
Fonte: O autor.
36
A Tabela 3 apresenta as vantagens e desvantagens entre os sistemas aberto e fechado.
Tabela 3 - Vantagens e desvantagens dos sistemas de cultivo.
Parâmetros Sistema Aberto Sistema Fechado

Risco de Contaminação Muito Alto Baixo
Necessidade de Área Alta Baixa
Perda de Água Muito Alta Muito Baixa
Perda de CO2 Alta Muito Baixa
Variedade de Espécies
Poucas Alta, quase todas
Cultiváves
Flexibilidade de Produção Nenhuma Alta
Reprodutibilidade dos
Específicas do Local Possível
Parâmetros de Produção
Padronização Nenhuma Possível
Dependência do Clima Absoluta Insignificante
Pedíodo até produção líquida
ser alcançada após o início ou Longo Curto
interrupções
Concentração de Biomassa 0.1 – 0.5 g.L-1 2 – 8 g.L-1
Eficiência nos Processos Baixa, grande volume com Alta, volumes menores com
Downstream baixas concentrações altas concentrações
Fonte: (PULZ, 2001).
2.3.2 Principais parâmetros de cultivo
Tanto no ambiente natural quanto nos cultivos, o crescimento de uma população de

microalgas é resultado da interação entre fatores biológicos, físicos e químicos (RAVEN,
1988). Os fatores biológicos incluem os fatores reprodutivos da própria espécie, a taxa
metabólica e as interações entre as espécies, bem como com a possível influência de outros
organismos sobre o desenvolvimento algal. Quanto aos fatores físico-químicos, que afetam
o crescimento das microalgas, são principalmente reportados estudos sobre a luz, a
temperatura, a salinidade e a disponibilidade de nutrientes (HELLENBUST, 1970;
GUILLARD, 1975; EPPLEY, 1977; YONGMANITCHAI; WARD, 1991, LOURENÇO;
MARQUES Jr., 2002; BEGON; TOWNSEND; HARPER, 2007).
Segundo Gladue (1991), a maioria das espécies algais é fotoautotrófica, isto é, através
da fotossíntese obtém energia da luz para fixar carbono, necessário para a construção de
biomassa.
Fatores como temperatura, luz e nutrientes não afetam somente a taxa fotossintética e
a produtividade em biomassa das microalgas, tais fatores afetam também o metabolismo
37
celular e por consequência a composição celular (VONSHAK, 1997). O principal

componente de interesse nas microalgas para a produção de biodiesel é o lipídeo, que
segundo Suali e Sarbatly (2012) pode atingir altas porcentagens na biomassa pela
manipulação do método de cultivo. A cultura de microalgas requer um controle rigoroso de
todos os fatores de crescimento: nutrientes, pH, temperatura, concentração de CO2, O2, e luz.
Para otimizar o crescimento é necessário compreender o comportamento dos
microrganismos sob diferentes condições:
 Nutrientes (suplementação): Segundo Lourenço (2006), os nutrientes podem ser
subdivididos em três categorias, apresentando as seguintes características:
o Macronutrientes: Apresentam as funções de constituir a estrutura de
biomoléculas, membranas e do meio intracelular, participar do processo de
troca de energia, regular atividades metabólicas, dentre outras funções de
grande importância. Carbono, hidrogênio, oxigênio, nitrogênio, fósforo,
enxofre, potássio, magnésio, silício e ferro são os principais
macronutrientes presentes em células vivas;
o Micronutrientes: Participam da estrutura e atividade de diversas enzimas.
Por exemplo, o molibdênio (Mo) é necessário para a assimilação do
nitrogênio. O cobalto (Co) é requerido nas microalgas que sintetizam
vitamina B12. Manganês, molibdênio, cobalto, boro, vanádio, zinco, cobre
e selênio são os principais micronutrientes presentes em células vivas;
o Vitaminas: As vitaminas que são usualmente adicionados aos meios de
cultivos são: Tiamina (B1), que possui função geral de agir como coenzima,
Biotina (B7), que atua no transporte de CO2 e Cianocobalamina (B12), que
não possui ainda um papel metabólico suficientemente elucidado.
 Luz: A luz é um fator importante no cultivo, visto que as microalgas são seres
fotossintetizantes. No cultivo de microalgas, a demanda por luz aumenta com o
passar do tempo. Dessa forma, uma correta suplementação de luz é necessária para
um crescimento adequado das microalgas. Uma alta suplementação luminosa na
fase inicial de crescimento pode causar foto-inibição (SOARES, 2010).
 Aeração: A aeração dos cultivos, também é um fator limitante, pois impede que as
células sedimentem, mantendo-as em suspensão. Além disso, o sistema permanece
homogêneo e todas as células são expostas as mesmas condições de cultivo. Essa
aeração pode ser realizada por um sistema de agitação mecânico (pás) em sistemas
abertos, sistema de bombas, reciclo e distribuição de bolhas pelo reator fechado. A
38
aeração também ajuda no processo de respiração microbiana, deixando o meio

homogêneo facilita a dissociação do O2 no meio facilitando a troca de gases do
microorganismo com o meio. (BORZANI et al., 2001).
 Temperatura: O crescimento celular e a porcentagem lipídica são fortemente
afetados pela temperatura. Dependendo da espécie, ao aumentar a temperatura
observa-se o aumento no teor de lipídeos (VERMA et al., 2010). Microalgas do
gênero Chlorella são boas produtoras de lipídeos quando cultivadas a temperaturas
entre 25 a 30°C, embora sejam capazes de crescer em temperaturas a partir de 16°C
(SUALI; SARBATLY, 2012).
Nos cultivos em batelada as células são inoculadas no meio fresco no início do cultivo,
não havendo nenhuma adição posterior de nutrientes.
A composição do meio de cultivo é de suma importância para o bom desenvolvimento
das microalgas. Dentre os nutrientes adicionados, destaca-se a importância da fonte de
nitrogênio. Sabe-se de longa data na literatura, que o acúmulo de lipídeos no interior das
células das microalgas pode ser ampliado em ambientes de cultivo com escassez de nitrato
(ABEDINI NAJAFABADI et al., 2015; LI et al., 2016; RASDI; QIN, 2015; SAN PEDRO
et al., 2014; SUNG et al., 2017). A composição bioquímica das microalgas está relacionada
à integração de vários processos envolvidos na absorção e assimilação de nutrientes. Por
exemplo, a deficiência de certos nutrientes poderá levar a uma maior absorção destes no
meio (BEARDALL; YOUNG; ROBERTS, 2001). Quando o meio possui limitação de
nitrogênio (N), algumas microalgas reagem com aumento nos teores de lipídeos ou
carboidratos, havendo um decréscimo na síntese de proteínas (ILLMAN; SCRAGG;
SHALES, 2000; RICHMOND, 2004). A rota de produção de proteínas, neste caso, é
desviada para produção dos outros dois componentes celulares. A célula responde à
deficiência como um período de escassez do nutriente e direciona o metabolismo para
acúmulo de material de reserva (GROBBELAAR, 2004). O teor de fósforo (P) disponível
para as microalgas também pode provocar diferentes respostas na produção de componentes
celulares. Em Ankistrodesmus falcatus a limitação deste nutriente aumentou a produção de
lipídeos e carboidratos e diminuiu a síntese de proteínas (KILHAN et al., 1997). Segundo
Rasdi e Qin (2015), a relação de nitrato e fosfato (N:P) influencia a taxa de crescimento e a
quantidade de ácidos graxos poli-insaturados. Ainda, no mesmo estudo, os autores
verificaram que uma proporção de 120:1 de N:P aumenta o teor de determinados ácidos
39
graxos poli-insaturados nas células da microalga Nannochloropsis oculata. San Pedro et al.
(2014), por outro lado, verificaram que a limitação na concentração de fosfato no meio não
influencia de forma tão significativa na produção de biomassa e de lipídeos, quanto
comparada à limitação de nitrato.
Além da fonte de nitrogênio, também existe a necessidade da escolha da fonte de
carbono, assim como a determinação da quantidade desta fonte a ser disponibilizada.
Conforme a natureza da fonte de carbono empregada, o cultivo da microalga é classificado
como: autotrófico, mixotrófico ou heterotrófico, como já mencionado anteriormente. O
cultivo autotrófico ocorre quando apenas fontes inorgânicas de carbono (especialmente CO2)
são empregadas, sob iluminação constante ou não, de modo que a microalga obtém energia
através da luz e faz fotossíntese (GROBBELAAR, 2004). O bicarbonato também é uma
fonte de carbono empregada em regimes autotróficos, uma vez que existem enzimas que
transformam bicarbonato em CO2 e vice versa (JEON et al., 2016). No cultivo mixotrófico,
por sua vez, ocorre à fotossíntese, pois é fornecido CO2 e iluminação, porém também é
fornecida uma fonte orgânica de carbono (glicose, acetato, melaço e glicerina, por exemplo).
Por fim, no cultivo heterotrófico é fornecida a fonte de carbono, porém não ocorre
fotossíntese, pois o cultivo é realizado no escuro (GROBBELAAR, 2004). A escolha da
fonte de carbono tem forte influência sobre o crescimento celular, acúmulo de lipídeos e na
produção de ω3 e ω6 das microalgas (ABEDINI NAJAFABADI et al., 2015; CHEIRSILP;
TORPEE, 2012; LI et al., 2016; SELVAKUMAR; UMADEVI, 2014; WOODWORTH et
al., 2015). Em um de seus trabalhos, Abedini Najafabadi et al. (2015), avaliaram o efeito do
uso de diversos tipos de fontes de carbono (orgânicas e inorgânicas) na produção celular,
acúmulo de lipídeos e produção de ácidos graxos da microalga Chlorella vulgaris. Dentre as
fontes de carbono testadas, o uso de acetato de sódio, em um cultivo com baixa concentração
de nitrato, foi o que apresentou o maior teor de lipídeos. Ainda, observaram que o acetato de
sódio, o bicarbonato de sódio e o melaço são fontes de carbono que propiciaram altos teores
de ácido α-linoleico (um dos ácidos graxos poli-insaturados do tipo ω3). Na Tabela 4, estão
presentes os dados do estudo de Abedini Najafabadi et al. (2015), no qual fizeram um cultivo
em dois estágios (estágio I com quantidade suficiente de nitrogênio e estágio II com falta de
nitrogênio) e compararam a influência das fontes de carbono: ar, CO2, bicarbonato de sódio
e acetato de sódio nos seguintes parâmetros: concentração e produtividade de biomassa,
quantidade e produtividade de lipídeos e quantidade e produtividade de ácidos graxos:
40
Tabela 4 - Comparação das produtividades de biomassa, lipídeos e ácidos graxos usando

diferentes fontes de carbono durante cultivo em dois estágios.
Acetato de Bicarbonato de
Ar 3% CO2
Sódio Sódio
Tempo (dia) 8 7 6 6
Concentração de
1,083 ± 0,042 1,366 ± 0,048 1,176 ± 0,015 1,250 ± 0,066
Biomassa (g.L-1)
Produtividade de
0,093 ± 0,005 0,146 ± 0,007 0,139 ± 0,002 0,151 ±0,011
Biomassa (g.L-1.dia-1)
Quantidade Final de
25,86 ± 2,84 36,75 ± 0,81 42,5 ± 1,93 36,31 ± 2,00
Lipédeo (%)
Produtividade de
23,94 ± 0,06 53,76 ± 0,22 59,11 ± 0,19 54,96 ±0,88
Lipídeo (g.L-1.dia-1)
Quantidade de Ácidos
2,496 ±0,260 5,971 ± 0,0696 7,613 ± 0,852 5,500 ±0,406
Graxos (%)
Produtividade de Ácidos
2,31 ± 0,05 8,73 ± 0,19 10,59 ± 0,09 8,32 ± 0,18
Graxos (g.L-1.dia-1)
Fonte: (ABEDINI NAJAFABADI, et al., 2015).
Hou et al. (2016), obtiveram bons resultados com a microalga Dunaliella salina
usando bicarbonato como fonte de carbono. Inclusive, elucidam a vantagem do uso do
bicarbonato em relação ao CO2, que apresenta baixa solubilidade no meio e, por isto, em
grande parte é perdido para a atmosfera. Isto, faz com que o uso do NaHCO3 torne-se mais
conveniente em relação ao suprimento de CO2 gasoso (HOU et al., 2016). Kim et al. (2017)
também menciona as mesmas vantagens do uso do NaHCO3, elucidando sua equivalência,
em termos de crescimento celular e produção de carotenoides, com o CO2.
2.3.3 Crescimento e desenvolvimento das microalgas
Considera-se um meio de cultura líquido com uma fonte de energia adequada, os

nutrientes necessários, condições químicas e físicas favoráveis em sistema fechado (exceto
a troca de gases). Se uma população de organismos for inoculado, pode-se obter uma curva
(Figura 6), que mostra as várias fases características do crescimento de populações
microbianas, ao seguir o seu crescimento ao longo do tempo (RICHMOND, 2004).
41
Figura 6 - Variação da biomassa pelo tempo em cultivo descontínuo.
Fonte: Adaptado de (BORZANI et al., 2001)
Tomando como referência as numerações do gráfico, as fases são (RICHMOND,

2004):
1 - Fase de adaptação (fase lag): trata-se de um período de adaptação das células
extraídas de uma cultura em fase exponencial ou estacionária para um meio fresco; esta fase
é extensa na presença de tóxicos, de nutrientes dificilmente metabolizáveis ou se o inóculo
for de reduzida dimensão ou inadequado.
2 - Fase de aceleração do crescimento: trata-se de um período onde as células já estão
adaptadas e começam a multiplicar-se; a taxa específica de crescimento é inferior ao valor
máximo.
3 e 4 - Fases de crescimento exponencial: fase de crescimento acelerado onde o valor
da taxa específica de crescimento se mantém constante, atingindo o seu valor máximo.
5 - Fase de desaceleração do crescimento: nesta fase a concentração de um (ou mais)
nutriente(s), tornar-se-á limitante, com o consequente decréscimo da taxa específica de
crescimento.
6 - Fase estacionária: As populações raramente conseguem manter um crescimento
exponencial a altas velocidades durante um largo período de tempo, visto que o crescimento
está limitado pelo esgotamento dos nutrientes ou pelo acúmulo de produtos inibitórios do
metabolismo. Como consequência a velocidade de crescimento diminui e iguala a taxa de
morte. A população de microrganismos mantém, durante algum tempo, uma concentração
42
aproximadamente constante de biomassa à custa da utilização de reservas internas de

nutrientes ou dos nutrientes que são libertados para o meio devido à lise de outras células.
7 - Fase de morte: A morte resulta do esgotamento de nutrientes da cultura de
microrganismos. A cinética de morte é também equivalente a uma reacção de primeira
ordem.
2.3.4 Acompanhamento do crescimento das microalgas
Em um cultivo descontínuo de microalgas, o tempo de crescimento pode variar de

acordo com as condições impostas, sendo que o acompanhamento do desenvolvimento
celular faz-se essencial para determinar o momento ótimo para coleta da biomassa formada.
Os principais métodos utilizados para acompanhar o crescimento celular é a contagem de
células por microscopia e a medida da densidade óptica por espectrofotometria
(LOURENÇO, 2006).
Ainda, segundo Lourenço (2006), a contagem direta por microscopia é a técnica mais
simples e tradicional para monitorar o crescimento de microalgas, por intermédio de uma
câmara de contagem, como por exemplo, uma câmara de Neubauer. Um número de células
algáceas presentes em um determinado volume é contado com o auxílio de um microscópio
biológico com capacidade de aumento de pelo menos 400 vezes. Nas contagens em
microscópio, a densidade de indivíduos é geralmente expressa como o número de células
por mililitro de cultivo. Já o crescimento de microalgas pelo uso da densidade óptica se
baseia na obstrução física da luz pelas células, quanto mais células estiverem presentes na
amostra maior será a absorção de luz e menor será a passagem da luz pela amostra. Utiliza-
se um espectrofotômetro para realizar as medições de um cultivo de microalgas num
comprimento de onda de 680nm.
2.3.5 Colheita da biomassa
Um dos grandes impasses na comercialização das microalgas é o alto custo da colheita

da biomassa, chegando, em alguns casos, a 30% do custo do processo (GUDIN;
THERPENIER, 1986). Por isso, é importante que existam pesquisas cujo foco é justamente
esta etapa.
43
Após o período de cultivo, deve-se proceder com a colheita da biomassa microalgal,

que é considerada por muitos a etapa chave para a produção industrial de biocombustíveis a
partir de óleos de microalgas. Isso se deve ao fato delas crescerem em culturas muito
diluídas, o que faz necessário o processamento de grandes quantidades de líquidos para a
sua colheita, desprendendo alto consumo energético (LEE; LEWIS; ASHMAN, 2010;
ZHANG et al., 2010).
A colheita é basicamente uma separação sólido-líquido entre a biomassa e meio de
cultivo, respectivamente, que pode ser realizada através de sedimentação, centrifugação ou
filtração (RICHMOND, 2004). Ainda, podem ser feitas a floculação e flotação da biomassa,
previamente (KIM et al., 2005).
Após o término da fase de cultivo, se faz necessária a colheita da biomassa. A colheita
é o processo que visa à remoção da água de cultivo para a obtenção da biomassa em
concentração alta o suficiente e para que, assim, possa ser processada. Desta biomassa pode-
se extrair os lipídeos e diversos outros produtos de valor agregado. O processo de colheita
pode ser efetuado de diversas formas, dentre elas pode-se citar:
 Floculação química: As células das microalgas apresentam naturalmente carga
elétrica negativa, oriunda de terminais orgânicos desprotonados, tais como
carboxilatos, fosfatos, etc. Esta carga eletrostática auxilia na manutenção das
células das microalgas em suspenção no meio de cultivo. O processo de floculação
visa, basicamente, neutralizar esta carga elétrica, com a adição de um floculante,
possibilitando que as células se arranjem em flocos e decantem. Este processo se
dá com a doação de cátions metálicos por parte dos floculantes. Em geral, a
floculação é uma técnica que é aplicada como um primeiro estágio da colheita,
precedendo, por exemplo, a filtração ou a centrifugação com obtenção de elevados
valores de eficiência (AL HATTAB; GHALY; PÉREZ DE LOS RÍOS, 2015;
PIRWITZ; RIHKO-STRUCKMANN; SUNDMACHER, 2015).
 Filtração: O método de filtração consiste em submeter o meio de cultivo a passar
por uma membrana de poros reduzidos que retêm as células microalgais e
permitem apenas a passagem do meio líquido (BABEL; TAKIZAWA; OZAKI,
2002). Na filtração de pequenos volumes, utiliza-se um aparato de filtração como
um frasco de Kitasato ou similar, porém num cultivo de grande escala, a separação
de enormes volumes de microalgas para posterior processamento da biomassa
somente é viável se a espécie apresentar células grandes ou filamentosas
(LOURENÇO, 2006). Em geral, usa-se filtração a vácuo para se acelerar o
44
processo de colheita. Uma desvantagem é que nem sempre a filtração convencional

consegue reter as células da microalga, devido ao seu tamanho reduzido, tendo-se
que recorrer a processos como filtração por membrana e ultrafiltração (AL
HATTAB; GHALY; PÉREZ DE LOS RÍOS, 2015; BRASIL; SILVA;
SIQUEIRA, 2017; BRENNAN; OWENDE, 2010). Embora não seja uma etapa
obrigatória, uma possível saída para este problema seria uma etapa prévia de
floculação (WAN et al., 2015).
 Centrifugação: Método físico que vêm se provando muito eficiente na colheita de
microalgas no decorrer do tempo (BRASIL; SILVA; SIQUEIRA, 2017). Sua
principal desvantagem envolve elevados custos, especialmente para cultivos de
grandes volumes, devido ao gasto energético (AL HATTAB; GHALY; PÉREZ
DE LOS RÍOS, 2015; BRENNAN; OWENDE, 2010). Uma possível saída para
este problema seria uma etapa prévia de floculação antes do processo de
centrifugação (PIRWITZ; RIHKO-STRUCKMANN; SUNDMACHER, 2015;
WAN et al., 2015).
 Sedimentação: É um processo lento que envolve a separação das células de
microalgas do meio de cultivo pela ação da força gravitacional, portanto, um
processo simples, porém com baixa eficiência (LOURENÇO, 2006; DE GODOS
et al., 2011). Em contra partida, a centrifugação que utiliza um equipamento de
sedimentação de células que atua pela ação da força centrífuga, trata-se de um
processo rápido de recuperação de biomassa, porém que requer alto consumo de
energia. Por esta técnica a biomassa é concentrada sem a adição de produtos
químicos, conservando suas características originais (LOURENÇO, 2006;
VERMA et al., 2010; DE GODOS et al., 2011).
2.3.6 Síntese de lipídeos em microalgas
As microalgas sintetizam os lipídeos a partir da fonte de carbono, seja inorgânico

(CO2) ou orgânico (glicose, acetato, etc.). Os componentes e os teores de lipídeos nas células
das microalgas variam de espécie para espécie, sendo divididos basicamente em lipídeos
neutros (triglicerídeos e colesterol) e lipídeos polares como os fosfolipídeos. Os lipídeos
neutros como os triglicerídeos são considerados como o principal material para a produção
do biodiesel (HUANG et al., 2010).
45
Um dos obstáculos para a produção de lipídios é o custo relativamente elevado, que se

espera superar ao desenvolver novas e avançadas tecnologias. A produção de biomassa algal
é mais cara do que a produção de culturas, pois o crescimento fotossintético requer luz, CO2,
água e sais inorgânicos. A temperatura, também, deve estar controlada entre os 20 e 30 oC,
para minimizar os gastos. A produção de biodiesel deve utilizar luz solar disponível
livremente, apesar da variação sazonal e diária (CHISTI, 2007).
O teor de óleo comumente encontrado nas microalgas situa-se na faixa de 20 a 50%,
porém espécies de microalgas como a Botryococcus braunii podem produzir teores de
lipídeos em torno de 75%, assim como a espécie Schizochytrium sp. pode atingir teores de
lipídeos próximos a 77%, conforme apresentado na Tabela 5, porém com baixa
produtividade de biomassa. Entretanto espécies como a Chlorella vulgaris, requerem menor
tempo de cultivo e apresentam alta produtividade celular, porém atingem quantidades de
lipídeos inferiores a 20% (CHISTI, 2007; BRENNAN; OWENDE, 2010). Na Tabela 5, está
disposto um levantamento comparativo entre as espécies de microalgas e sua capacidade de
produzir lipídeos.
Tabela 5 - Espécies produtoras de lipídeos e suas respectivas porcentagens em relação à

biomassa seca.
Espécies Conteúdo de Óleo (% em massa seca)

Botryococcus braunii 25 – 75
Chlorella 28 – 32
Crypthecodinuim cohnii 20
Cylindrotheca sp. 16 – 37
Dunaliella primolecta 23
Isochysis sp. 25 – 33
Monallanthus salina > 20
Nannochloris sp. 20 – 35
Nannochloropsis sp. 31 – 68
Neochloris oleoabundans 35 – 54
Nitzschia sp. 45 – 47
Phaeodactylum tricornutum 20 – 30
Schizochytrium sp. 50 – 77
Tetraselmis sueica 15 – 23
Fonte: (CHISTI, 2007).
Além do teor lipídico, deve-se atentar ao perfil dos ácidos graxos presentes no material
lipídico, uma vez que, características estruturais das moléculas de ácidos graxos como o
46
comprimento da cadeia, o grau de instauração e a presença de ramificações refletem

propriedades finais ao biodiesel, determinando assim a sua qualidade (KNOTHE;
MATHEAUS; RYA, 2003).
De um modo geral, biodiesel oriundo de lipídeos que possuem em sua composição
elevadas quantidades de ácidos graxos de cadeia insaturada, com destaque para os ácidos
linoleico (C18:2) e linolênico (C18:3) provocam problemas na ignição do combustível, auto-
oxidação e entupimentos de filtros no motor que implicam em falhas no funcionamento do
motor. Entretanto composições lipídicas ricas em ácidos graxos saturados, em especial os
ácidos palmíticos (C16:0) e esteárico (C18:0) conferem ao biodiesel uma boa qualidade
como uma ignição adequada e estabilidade de operação. (KNOTHE, 2005; RAMOS et al.,
2003).
2.3.7 Extração de lipídeos
Após o término do cultivo e posterior colheita da biomassa, a próxima etapa é,

normalmente, a extração dos lipídeos. Várias formas de se obter o óleo são conhecidas e
estes processos, de um modo geral, podem ser divididos em extrações físicas (ultrassom,
micro-ondas, etc.) ou químicas (extração por solvente). Embora, para se obter maiores
rendimentos de extração, é comum o uso combinado destes processos. Desta forma, os
processos físicos atuam rompendo as células das microalgas, aumentando o contato dos
lipídeos com o solvente e, com isto, facilitando a extração e melhorando seu rendimento
(BRENNAN; OWENDE, 2010; MUBARAK; SHAIJA; SUCHITHRA, 2015).
A técnica criada por Bligh e Dyer (1959), consiste em misturar 100 mL de metanol e
100 mL clorofórmio a uma amostra de 100 g, agitando durante 3 minutos. O sistema formado
então é monofásico e tem como objetivo inicial extrair totalmente para o meio os lipídeos
presentes na amostra. Adiciona-se então, mais 100 mL de clorofórmio à mistura para
aumentar ainda mais a solubilidade de lipídeos. Então, água é adicionada ao sistema,
formando um ternário bifásico, onde há a fase orgânica, formada pelo clorofórmio e pelos
lipídeos, e a fase aquosa, constituída por água e metanol. As duas fases são então separadas
em um funil de decantação e a fase orgânica é evaporada. Por análise gravimétrica, é possível
avaliar a quantidade de lipídeos presente na amostra (SMEDES; THOMASEN, 1996). O
objetivo da adição de metanol e clorofórmio à amostra é dissolver tanto gorduras polares
(fosfolipídeos e ácidos graxos livres), quanto apolares (triglicerídios). Após a adição da água,
47
somente a fase com clorofórmio mantém a solubilidade dos lipídeos (SMEDES;

THOMASEN, 1996).
Dentre os solventes possíveis para o uso nas extrações de lipídeo de microalga a
mistura clorofórmio (apolar) com metanol (polar) é a mais largamente empregada, com a
vantagem de não necessitar da completa secagem da biomassa (processo energeticamente
custoso) para o lipídeo ser extraído (HALIM; DANQUAH; WEBLEY, 2012; MUBARAK;
SHAIJA; SUCHITHRA, 2015).
A extração por solventes pode, para aumento de eficiência, ser realizada com o auxílio
de processos físicos de extração, como é o caso das micro-ondas e do ultrassom
(BRENNAN; OWENDE, 2010; MUBARAK; SHAIJA; SUCHITHRA, 2015). No caso das
micro-ondas, mistura-se o solvente à biomassa e incidem-se as micro-ondas. As micro-
ondas, ondas eletromagnéticas com frequência entre 0,3 e 300 GHz, atuam sobre a água da
biomassa (além de outras moléculas polares) gerando aquecimento concentrado e abrupto
sem contato direto com o material. Este aquecimento sobre a biomassa provoca aumento de
pressão interna às células levando à sua ruptura, facilitando a extração dos lipídeos (HALIM;
DANQUAH; WEBLEY, 2012; MUBARAK; SHAIJA; SUCHITHRA, 2015). O método
usando ultrassom, por outro lado, aplica ondas sonoras sobre a mistura solvente/biomassa,
que gera ciclos de alta e baixa pressão ao longo de seu percurso. Os ciclos de baixa pressão
geram bolhas por evaporação que são comprimidas e implodem no ciclo de alta pressão,
num fenômeno denominado cavitação. A cavitação provoca o rompimento das células,
facilitando desta forma, o processo de extração (AL HATTAB; GHALY; PÉREZ DE LOS
RÍOS, 2015; KANNAN; PATTARKINE, 2014). Em ambos os casos, o rompimento celular
libera os lipídeos que se encontravam no interior das células ampliando seu contato com o
solvente orgânico e, por isto, melhorando o rendimento do processo de extração
(BRENNAN; OWENDE, 2010; MUBARAK; SHAIJA; SUCHITHRA, 2015).
2.4 USO DE EFLUENTES NO CULTIVO DA BIOMASSA MICROALGAL
O termo efluente é utilizado para designar qualquer resíduo líquido resultante dos
processos industriais, podendo ser gerado na planta ou então usado como insumo. A
crescente demanda por produtos e serviços tem elevado drasticamente a atividade industrial,
gerando cada vez mais desses resíduos, cuja composição pode variar de acordo com sua
origem, podendo conter grande quantidade de matéria orgânica ou ainda apresentar altas
48
concentrações de metais tóxicos, representando um grave problema para o meio ambiente

(QUINTELAS et al., 2008; YANG et al., 2011).
Frente à essa problemática, busca-se aliar desenvolvimento econômico com proteção
ambiental, onde têm-se intensificado os estudos baseados em processos biológicos para
tratamento de efluentes, surgindo assim a biossorção. Esse processo apresenta-se como
tecnologia promissora e em expansão, com baixo custo e alta eficiência (ZHU et al., 2014).
Dentre os micro-organismos utilizados na biossorção, as microalgas têm sido foco de
inúmeras investigações biotecnológicas envolvendo tratamento de efluentes, em função da
sua capacidade de retenção e imobilização de metais (SCHMITZ; MAGRO; COLLA, 2012;
TANGO, 2015). Além de produzirem diversos subprodutos de interesse, as microalgas se
mostraram potencialmente úteis no tratamento de águas residuárias, já que possuem a
habilidade de remover matéria orgânica e nutriente dos efluentes, incorporando-os à
biomassa (BONINI, 2012).
Para que os biocombustíveis, produzidos a partir da biomassa de microalgas, sejam
economicamente viáveis, têm sido propostos por diferentes autores que o cultivo seja
realizado de forma alternativa, sem a utilização dos meios sintéticos convencionais
(JOSEPH, V.; JOSEPH, A., 2001; BHATNAGAR et al., 2011; CHINNASAMY et al.,
2010). O uso de águas de efluentes indrustriais, agrícolas e águas de esgotos domésticos têm
sido indicados como meios alternativos, capazes de diminuir o valor agregado dos cultivos,
visto que tais resíduos, geralmente, são liberados no meio ambiente sem tratamento prévio
(PITTMAN; DEAN; OSUNDEKO, 2011).
Espécies de algas como a Chlorella foram amplamente aplicadas para tratamento de
águas residuais e demonstraram capacitade para remover nitrogênio, fósforo e demanda
química de oxigênio (DQO) com diferentes tempos de retenção. Qualquer que seja o tipo de
água residual, deve apresentar nutrientes que favoreçam o crescimento da biomassa para que
possam ser usadas para compor meio de cultivo de microalga. O nutriente mais comumente
encontrado nas águas residuais é o nitrogênio sob as formas de amônio e nitratos. O fósforo,
outro nutriente importante no metabolismo microalgal, também, pode ser encontrado nas
formas de íons inorgânicos H2PO4- e HPO4-2 (WANG et al., 2010; GULDHE et al., 2017).
Segundo Bhatnagar et al. (2011), em efluentes de esgotos domésticos, Chlorella
minutissima mostrou ser tolerante à ausência de oxigênio (O2) dissolvido, crescendo em
faixas variadas de pH (4-12) e diferentes intensidades luminosas (2μEm−2 s −1 a 30μEm−2s−1).
No entanto, nem todas as microalgas avaliadas conseguiram crescer em águas residuárias
49
municipais. Deve-se considerar que, na entrada de um sistema de tratamento, a água

geralmente apresenta excessos de nutrientes tais como sais dissolvidos e substâncias tóxicas,
baixas concentrações de oxigênio, e ocorre pouca penetração de luz. A vantagem deste tipo
de habitat é oferecer baixa competição, facilitando uma melhor adaptação das microalgas às
condições existentes e, consequentemente, favorecendo o aumento da taxa de crescimento,
ou seja, da produção de biomassa nas espécies estudadas.
Assim como as águas residuais, o lixiviado de aterro sanitário (chorume), também,
contém nutrientes, além de matéria orgânica, metais e sais dissolvido e pode ser utilizado
como meio de cultivo. No entanto, devido a alta concentração dos compostos presentes em
sua composição, nos quais alguns são tóxicos, a diluição antes de ser acionado ao meio
celular, torna-se necessária (CHEAH et al., 2016). O lixiviado é um líquido produzido pela
lixiviação de substâncias presentes em resíduos sólidos urbanos de aterros sanitários ou
provenientes de sua decomposição. É obtido após a percolação dos interstícios da massa
deste resíduo por água de origem pluviométrica ou do próprio lixo. Possui odor
desagradável, cor escura, com presença de sólidos em suspensão, metais pesados, compostos
nitrogenados, compostos tóxico, entre outros (MAIA et al., 2015; QUEIROZ et al., 2011;
SOUTO, 2009; BIDONE, 2007).
Segundo Ghosh, Thakur e Kaushik (2017), de uma forma geral, a maioria dos
lixiviados tem a mesma composição básica e é caracterizada por quatro grupos de poluentes.
a) Matéria orgânica dissolvida: expressa como demanda química de
oxigênio (DQO) ou Carbono orgânico total (COT), incluindo CH4 e
ácidos graxos;
b) Macro componente inorgânico: Ca+2, Mg+2, Na+, K+, NH+4, Cl-, SO4-2
e HCO3-;
c) Metais pesados: (Cd+2, Pb+2, Cr+2, Cu+2, etc);
d) Compostos inorgânicos xenobióticos: hidrocarbonetos aromáticos,
fenóis e alifáticos clorados.
A utilização de águas residuais ou lixiviados demonstram ser uma boa alternativa
econômica e ecologicamente viáveis para a produção de ennergia de forma renovável,
através da produção de microalgas. Deste modo, pode-se gerar biocombustíveis como
biodiesel e bioetanol, a partir da biomassa microalgal produzida nos meios de cultivo
contendo nutrientes reaproveitados das águas residuais ou lixiviado, que seriam descartados
ou tratados, pelas maneiras convencionais, além de reduzir consideravelmente os custos de
produção e operação (RICHARDS; MULLINS, 2013).
50
2.5 REOLOGIA
A reologia é definida como a ciência que estuda a deformação e o fluxo dos materiais.
(TANNER, 2000). Os fluidos reais apresentam uma certa resistência ao escoamento ou à
deformação e esta resistência é resultante de uma propriedade denominada viscosidade,
introduzida por Issac Newton, em 1887 (SINGH; HELDMAN, 2003).
Schramm (2006), atribui à reologia a capacidade de descrever a deformação de um
corpo sob a influência de tensões.
A lei de Newton afirma que a força por unidade de área (tensão de cisalhamento),
necessária para manter o movimento do fluido, é proporcional ao gradiente de velocidade na
direção perpendicular ao fluxo (taxa de deformação), e a constante de proporcionalidade
corresponde à viscosidade, a qual é sinônimo de atrito interno, ou seja, medida da resistência
ao escoamento (SHARMA; MULVANEI; RIZVI, 1999). A equação que descreve o
comportamento destes fluidos é dada por:
 = 𝜇. 𝛾 (1)
No qual,  corresponde à tensão de cisalhamento,  à taxa de deformação e μ à
viscosidade absoluta.
Os fluidos que obedecem ao postulado de Newton, descrito pela equação (1), são
chamados de fluidos newtonianos. Para estes fluidos, a viscosidade é independente de  ou
de , dependendo somente da composição e da temperatura (BARNES; HUTTON;
WALTERS, 1989). De acordo com Castro, Covas e Diogo (2001) os fluidos newtonianos
são aqueles que apresentam uma relação linear entre a tensão de cisalhamento e a taxa de
deformação, independente da taxa de deformação e da tensão de cisalhamento inicial.
Os fluidos que não obedecem ao postulado de Newton são designados genericamente
de não-newtonianos (HOLDSWORTH, 1971). Fluidos não-newtonianos são caracterizados
como todo o fluido cuja relação entre tensão de cisalhamento e taxa de deformação não for
linear e/ou não passar pela origem. Para fluidos não-newtonianos o termo viscosidade é
substituído por ηap que é a viscosidade aparente, e é função do gradiente de velocidade
(VIDAL; GASPARETTO; GRANDIN, 2000). A viscosidade é função da taxa de
deformação ou da tensão de cisalhamento e por isto, para caracterizá-los, é utilizada a
51
viscosidade aparente (a), a uma taxa de deformação específica, representada pela equação
(2):
a = ⁄𝛾𝑖 , (2)
No qual, i é a taxa de deformação na qual se calculou a.
Segundo Rao e Rizvi (1986) os fluidos não-newtonianos podem ser dependentes ou

independentes do tempo. Quando a temperatura e a composição são constantes, a
viscosidade aparente depende apenas da taxa de deformação ou da tensão de cisalhamento.
O comportamento desses fluidos pode ser dividido em duas categorias: pseudoplásticos e
dilatantes. Para os fluidos pseudopásticos, a viscosidade aparente diminui com a tensão de
cisalhamento; estas substâncias geralmente são dispersões de moléculas ou partículas
assimétricas, que no repouso apresentam um estado desordenado, mas quando submetidas a
uma tensão de cisalhamento, tendem a orientar-se na direção da força aplicada. Quanto mais
elevada a tensão de cisalhamento, maior será a ordenação e, consequentemente, menor será
a viscosidade aparente (TISCHER, 2006).
O comportamento dilatante é encontrado em suspensões, no qual a viscosidade
aparente aumenta com a tensão de cisalhamento. Uma explicação para este tipo de
comportamento é que, à medida que a tensão de cisalhamento aumenta, o líquido intersticial
entre as partículas torna-se incapaz de preencher os espaços, devido a um aumento no
volume que acompanha o fenômeno, ocorrendo contato direto entre as partículas sólidas,
fazendo com que a viscosidade aparente aumente (LEONARDI; CAMPOS, 2001).
Os fluidos também podem apresentar uma tensão inicial a ser vencida antes deles
escoarem e este comportamento é usualmente explicado em termos da sua estrutura interna,
capaz de impedir o movimento para valores de tensão de cisalhamento menores do que um
valor limite 0. Para  > 0 a estrutura interna colapsa, permitindo o escoamento (BOURNE,
1982). Para os fluidos não-newtonianos dependentes do tempo, a viscosidade aparente
depende também da duração da tensão aplicada. Esses fluidos são subdivididos em
tixotrópicos e reopéticos. No caso do primeiro, a uma taxa de deformação fixa, o fluido
torna-se menos viscoso com a duração do cisalhamento, enquanto que para o último observa-
se um aumento de viscosidade com o tempo (OLIVEIRA, 2013 ; SCHRAMM, 2006). As
curvas de fluxo, que caracterizam os fluidos estão representadas na Figura 7.
52
Figura 7 - Tipos de comportamento de fluxo.
Fonte: (SCHRAMM, 2006).
2.5.1 Modelos reológicos
Segundo Rao e Anantheswaram (1982), na literatura existem muitos modelos

reológicos propostos. A escolha do tipo do modelo a ser utilizado deve ser feita em função
das características do fluido que se quer estudar. Os modelos mais comumente utilizados
são: Ostwald-de-Waelle (Lei da Potência), Bingham, Herschel-Bulkley e Casson. Os
modelos citados estão caracterizados na Tabela 6.
Tabela 6 - Comparação entre os modelos reológicos.
Modelo Equação Parâmetros

Bingham  = 0 + µ𝑃 .  µp ; 0
Lei da Potência  = 𝑘. 𝑛 klp; n
Casson 0,5
= 𝑘0,𝑐 + 𝑘𝑐 .  0,5
k0,c; kc
Herschel-Bulkley  = 0 + 𝑘𝐻𝐵 .  𝑛 kHB; n
Nota: : tensão de cisalhamento; : taxa de deformação; klp, kHB; kc: são os índices de consistência;
k0,c: constante do modelo; n: é o indice de comportamento.
Fonte: O autor.
Segundo Machado (2002), o parâmetro reológico do modelo da lei da potência índice

do comportamento do fluido (n) é uma grandeza adimensional e indica fisicamente, o
53
afastamento do fluido considerado do modelo newtoniano; e o índice de consistência (k)

indica o grau de resistência do fluido diante do escoamento, ou seja, quanto maior o valor
de k mais consistente o fluido será.. Segundo Navarro (1997), através do modelo de Ostwald-
de-Waelle observa-se que a equação se reduz ao modelo de Newton quando o índice de
comportamento do fluido n = 1. Como o índice de consistência (k) não varia com a tensão
de cisalhamento nem com a taxa de deformação, é o índice n que fará a distinção entre os
comportamentos dos fluidos e, desta maneira, quanto mais distante o n do fluido estiver do
valor unitário, mais distante também o fluido estará do comportamento newtoniano. Para n
> 1, o fluido é dilatante; Para n = 1, o fluido é newtoniano; Para n < 1, o fluido é
pseudoplástico.
Os modelos de Herschel-Bulkley e de Plástico de Bingham são usados para fluidos
que só iniciam o processo de escoamento quando a tensão de cisalhamento aplicada supera
uma tensão inicial que é própria do material (VIDAL; GASPARETTO; GRANDIN, 2000).
A Figura 8 mostra as curvas de fluxo características para cada modelo matemático.
Figura 8 - Curvas de fluxo características para cada modelo matemático.
Fonte: O autor.
2.5.1.1 Modelo de Bingham
Um plástico de Bingham não flui até uma tensão de cisalhamento, τ , exercer um valor
mínimo, τ0 , conhecido também como “Yield Point”. Depois da tensão de cisalhamento
mínimo ter sido aplicada, variações na tensão de cisalhamento são proporcionais as variação
54
na taxa de cisalhamento e a constante de proporcionalidade é chamada de viscosidade

plástica (µp). Percebe-se que a unidade de viscosidade plástica é semelhante à unidade de
viscosidade aparente (µa) para um fluido newtoniano (BOURGOYNE Jr et al., 1991).
Considerando a teoria molecular coloidal, os parâmetros reológicos do fluido
binghamiano possuem uma interpretação. O atrito entre as partículas dispersas e entre as
próprias moléculas do líquido dispersante é o responsável por um dos componentes de
resistência ao escoamento - a viscosidade plástica. Enquanto isso, as forças de interação entre
as partículas dispersas são consideradas a causa da existência do outro parâmetro viscoso -
o limite de escoamento, também denominada de componente eletroviscosa. É sabido ainda
que se a concentração de partículas dispersas aumenta então a viscosidade plástica também
aumenta, isto é, quando aumenta o potencial iônico do meio, causando um conseqüente
aumento das forças eletrostáticas entre as partículas dispersas (MACHADO, 2002).
2.5.1.2 Modelo de Ostwald Waale ou Lei da Potência
Como o modelo de Bingham, o modelo de potência requer dois parâmetros para

caracterização do fluido. Entretanto o modelo de potência pode ser usado para representar
fluidos pseudoplásticos (n < 1), um fluido newtoniano (n = 1) ou um fluido dilatante (n > 1)
(BOURGOYNE Jr et al., 1991). Este modelo não se aplica para todo e qualquer fluido, nem
a todo intervalo de taxa de cisalhamento. Entretanto, existe um número razoável de fluidos
não-newtonianos que apresentam comportamento de potência, num largo intervalo de
velocidades cisalhantes Os parâmetros reológicos do fluido de potência são o índice de
consistência (k) que indica o grau de resistência do fluido diante do escoamento, quanto
maior o valor de k mais consistente é o fluido e mais dificil de escoar ele é. O índice de
comportamento ou de fluxo (n), que indica fisicamente o afastamento do fluido do modelo
newtoniano. Se o valor de “n” se aproxima de um então o fluido está próximo do
comportamento newtoniano. Um grande número de fluidos não-newtonianos se comporta
como pseudoplásticos, isto é, 0 < n > 1 (MACHADO, 2002). As emulsões e as soluções de
polímeros ou de macromoléculas lineares são os exemplos mais típicos da indústria do
petróleo. Tecnicamente, fluidos que “afinam” quando a vazão ou taxa de cisalhamento
aumenta, são denominados pseudoplásticos. O “afinamento” de muitos materiais líquidos se
manifesta reversivelmente, isto é, eles recuperam a sua viscosidade original alta, quando o
cisalhamento é reduzido ou cessado. Teoricamente, as partículas retornam ao eu estado
55
natural de interação não orientada em relação à forças de cisalhamento. As gotas readquirem

sua forma esférica e os agregados se reagrupam devido ao movimento browniano
(MACHADO, 2002).
2.5.1.3 Modelo de Herschel-Bulkley
Este modelo é uma modificação do modelo de Ostwald de Waale onde se adicionou o

parâmetro τ0 , (tensão limite de escoamento ou limite de escoamento real). É chamado
também de fluido de potência com limite de escoamento ou fluido de potência modificado e
tem três parâmetros reológicos a serem levados em consideração, que define a equação do
modelo. Materiais típicos que exibem tensão limite de escoamento são dispersões de argila
com polímeros, empregados amplamente na indústria de petróleo como fluidos de
perfuração. O modelo em questão é mais completo do que os anteriores, uma vez que a sua
equação engloba três parâmetros, como visto, além do que, os modelos comentados
anteriormente (Bingham e Ostwald de Waale) podem ser analisados, perfeitamente, como
casos particulares deste (MACHADO, 2002).
2.5.2 Fatores que influenciam na reologia das suspensões
As referências mais recentes relatam como os principais fatores responsáveis pelo

comportamento reológico das suspensões a configuração, quantidade, tamanho e
distribuição das partículas dispersas; em relação à fase contínua, os fatores que mais
influenciam nas propriedades reológicas são a sua composição química, concentração
eletrolítica e temperatura (MACHADO, 2002; HAMINIUK et al., 2009).
De um modo geral, a formação de sistemas coloidais (incluindo as suspensões)
envolve a degradação de partículas de dimensões maiores ou a agregação de moléculas de
íons pequenos. Em ambos os mecanismos, as taxas de agregação e fragmentação são
determinadas predominantemente pelo tamanho da partícula e pelo gradiente de velocidades,
estimado através da energia dissipada por unidade de massa. A taxa de dissipação de energia
é responsável pela frequência de colisão e pela energia de impacto entre as partículas
colidindo. Baixas taxas de dissipação de energia promoverão agrupamentos do tipo
partícula-partícula, enquanto que a turbulência do fluido provavelmente causará
fragmentação dos agregados (MELO; MENEZZI, 2010).
56
Segundo Barnes, Hutton e Walters (1989) três tipos de forças coexistem nas partículas
suspensas em um líquido. Primeiramente, existem as forças de origem coloidal, que se
originam das interações entre as partículas: se esta força líquida resultante for atrativa, as
partículas tendem a flocular, enquanto que uma repulsão global indica que as partículas
permanecerão dispersas. Em segundo lugar, devem ser consideradas as forças de Brownian,
fortemente dependentes do tamanho das partículas; este tipo de força descreve a distribuição
espacial das partículas em uma média de tempo, além de assegurar que as partículas estão
em constante movimento. Em terceiro lugar, as forças viscosas que agem sobre as partículas
devem ser consideradas; as forças viscosas são proporcionais à diferença entre as
velocidades locais das partículas e a do fluido circundante; consequentemente, a forma como
estas partículas afetam a viscosidade da suspensão está intimamente relacionada à
viscosidade da fase contínua.
Nos cultivos microalgais, o comportamento não-newtoniano dilatante é geralmente o
mais comum; consequentemente, a viscosidade destes fluidos não pode ser expressa por um
único valor, sendo esta obtida pela tangente em cada ponto do reograma, dependendo da
tensão aplicada (LIRA, 2011).
2.6 PLANEJAMENTO DE EXPERIMENTOS
O planejamento de experimentos é considerado, entre os métodos estatísticos o mais

apropriado para investigação de variáveis influentes em processos. É um método estruturado
e organizado, utilizado na determinação de diferentes fatores de entrada e saída do processo,
envolvendo a definição do conjunto de experimentos, nos quais todos os fatores relevantes
são variados sistematicamente (HARIDY; GOUDA; WU, 2011). O planejamento
experimental é definido como um conjunto de técnicas estatísticas aplicadas ao
planejamento, condução, análise e interpretação de testes controlados, buscando encontrar e
definir fatores que influenciam os valores de um parâmetro ou um grupo de parâmetros de
interesse (BRUNS; BARROS NETO; SCARMÍNIO, 2010). Este método representa um
conjunto de ensaios estabelecidos com critérios científicos e estatísticos, com o objetivo de
determinar a influência de diversas variáveis de entrada em determinadas variáveis de
resposta indicando as melhores condições experimentais na tentativa de melhorar o processo
com a maior precisão estatística ao menor custo possível. (BUTTON, 2005; ARANDA;
JUNG; CATEN, 2008; SILVA, H. A; SILVA, M. B, 2008; SOUZA et al., 2011).
57
A otimização de parâmetros de processo e a melhoria da qualidade de produtos têm

sido amplamente utilizada com o planejamento experimental através da aplicação de
conceitos da engenharia e estatística (WANG; HUANG, 2007). Segundo Franceschini e
Macchietto (2008), o planejamento experimental ou design of experiments (DOE) é uma
ferramenta estatística que visa maximizar o valor das variáveis respostas obtidas em cada
experimentação, além de reduzir o número de condições experimentais, a fim de minimizar
custo e tempo.
2.6.1 Método de Taguchi
A metodologia desenvolvida pelo engenheiro e estatístico Genichi Taguchi, consiste

em matrizes ortogonais, que levam seu nome e são uma excelente opção para a análise de
dados em processos com múltiplas variáveis de entrada. Com esta metodologia, é possível
se verificar, com um número reduzido de experimentos, quais variáveis de entrada possuem
influência sobre as variáveis de saída de um processo. De certa forma, as matrizes ortogonais
de Taguchi são baseadas nos planejamentos fatoriais completos, porém não é necessária a
realização de todas as combinações experimentais possíveis. A notação para as matrizes
ortogonais Taguchi é Li, no qual i é o número de experimentos necessários para a realização
da análise estatística (TAGUCHI, 1986; TAGUCHI; CHOWDHURY; YUIN, 2005).
O método de Taguchi é uma robusta ferramenta matemática, capaz de descobrir os
parâmetros significativos de um processo ideal através de aspectos qualitativos múltiplos
(CHIANG; HSIEH, 2009). De acordo com Barrado et al. (1996), a aplicação do Método de
Taguchi consiste em:
 Selecionar as variáveis resposta, a serem otimizadas;
 Identificar os fatores (variáveis de entrada) e escolher os seus níveis;
 Selecionar o arranjo ortogonal apropriado conforme literatura (TAGUCHI;
KONISH, 1987);
 Executar os experimentos de maneira aleatória para evitar a incorporação de
erros sistemáticos;
 Analisar os resultados utilizando a relação sinal-ruído (S/N) e análise de
variância (ANOVA);
 Determinar o melhor ajuste dos parâmetros.
58
O Método de Taguchi é capaz de oferecer vantagens como a redução da variabilidade

do processo, conformidade próxima do resultado desejado e, consequentemente, a redução
dos custos operacionais. Além disso, o método utiliza arranjos ortogonais que permitem
estudar diversos fatores com um número reduzido de experimentos (RANA et al., 2014).
Genichi Taguchi introduziu o importante conceito na literatura em experimentos
chamado de fatores de ruído ou fatores incontroláveis, a percepção de Taguchi foi notar que
esses fatores podem em muitos casos ser controláveis (variáveis). Experimentos são
realizados modificando os fatores de controle, assim obtém o desenvolvimento de um
modelo em que as respostas são uma função de ambos os fatores controláveis e os fatores de
ruído. O termo robusto consiste em utilizar esse modelo para otimizar os fatores controláveis,
de tal forma que a solução é insensível ou robusta as variações dos fatores de ruído. Os
fatores controláveis são as variáveis do processo, enquanto que variáveis não controláveis
são os ruídos, ou seja, fatores que interferem na variabilidade experimental (YANG;
HWANG; LEE, 2002).
A quantidade de experimentos pode ser reduzida para um nível prático, por isso uma
escolha é necessária para identificar os fatores mais representativos sobre a variável resposta.
As matrizes ortogonais de Taguchi constituem um dos meios mais eficientes para identificar
a importância dos fatores, realizando um número reduzido de experimentos (WANG;
HUANG, 2015). O projeto experimental de Taguchi é um arranjo ortogonal para organizar
os parâmetros que afetam o processo e determinar os fatores que afetam a qualidade do
produto. O método experimental de Taguchi investiga como os parâmetros afetam o
desempenho do processo em estudo (KISHORE et al., 2009). Taguchi, de acordo com o
trabalho de Rana et al. (2014), relata que o método é um tipo especial de matriz que se pode
empregar em várias situações, no qual a quantidade de colunas das matrizes é número
máximo de fatores que podem ser estudados. Uma matriz ortogonal é um projeto
experimental construído para permitir uma avaliação matemática independente do efeito de
cada um dos fatores, permitindo assim analisar os dados coletados de forma eficiente
(TANSEL et al., 2011).
Uma vez realizados os experimentos, ao menos em duplicata, a análise dos dados se
dá com o uso da análise de variância (ANOVA). Com o uso da ANOVA é possível se
determinar quais, de todos os fatores estudados, são realmente influentes ao processo.
59
3 METODOLOGIA
3.1 CARACTERIZAÇÃO DA MICROALGA UTILIZADA NOS EXPERIMENTOS
Para o estudo em questão, utilizou-se a microalga marinha Chlorella minutissima,

oriunda de Cananéia/SP (Figura 9), gentilmente doada pelo Departamento de Oceanografia
Biológica do Instituto Oceanográfico da Universidade de São Paulo.
Figura 9 - Células de Chlorella minutissima utilizadas no presente trabalho.
Fonte: O autor.
A cepa da microalga Chlorella minutissima foi mantida em uma incubadora

confeccionada em madeira e dotada de um fotoperíodo, controlada por um temporizador. A
intensidade luminosa fornecida foi de 15 W por uma lâmpada fluorescente (Figura 10).
Figura 10 - Banco de células da microalga Chlorella minutissima no interior do cepário do

Laboratório de Engenharia de Microalgas da Escola de Engenharia de Lorena
Fonte: O autor.
60
Para manutenção de um banco de células, foi feita a repicagem em erlenmeyers de 125

mL, com fotoperíodo de 12h:12h (luz/escuro) e luminosidade média de 4,8 klux. As
repicagens foram feitas em períodos de 15 a 20 dias, na proporção de 10mL de cultura
antecessora para 90mL de meio de cultivo novo e os frascos agitados de forma manual uma
vez ao dia.
Para a manutenção do cultivo mãe, foi adotado o meio Guillard (1975), sendo que
todos os reagentes utilizados no preparo foram de padrão analítico. As soluções de estoque,
utilizadas para preparar o meio de cultivo, foram filtradas através de filtros de 0,22μm.
3.2 O REATOR TIPO RACEWAY POND
O reator usado para realizar os experimentos do presente trabalho foi um reator aberto
do tipo Raceway Pond confeccionado em fibra de vidro com espessura de 3mm e com as
dimensões: 140cm de comprimento x 40cm de largura x 40cm de altura, conforme a
representação da Figura 11.
Figura 11 - Desenho representando as dimensões do reator tipo Raceway.
Fonte: O autor.
61
A Raceway conta com um sistema de agitação por meio de pás movidas por um motor
de corrente contínua, um sitema de aeração confeccionado em tubos perfurados de PVC, que
cobre o corredor contrário as pás e lâmpadas de led com comprimento de onda misturados
entre azul e vermelho.
3.3 MEIO E CONDIÇÕES EXPERIMENTAIS PARA O CRESCIMENTO DA

MICROALGA CHLORELLA MINUTISSIMA EM REATOR DO TIPO RACEWAY.
O crescimento microalgal foi acompanhado em reator Raceway, onde os meios de

cultivo utilizados foram soluções compostas por água salinizada e chorume (lixiviado de
aterro sanitário), proveniente do aterro sanitário do município de Cachoeira Paulista.
Primeiramente, o chorume foi analisado com relação a sua composição metálica,
através do método 3005a (USEPA, 1999). O resultado da análise encontra-se no APÊNDICE
A. Uma vez analisado o chorume, os meios de cultivo microalgal foram preparados.
Os experimentos em reator Raceway foram realizados com agitação, através de pás
movidas por um motor de corrente contínua e suprimento de ar, proporcionado por um
compressor, ambos de maneira constante, em volumes fixos de 100 litros, à temperatura
ambiente, com iluminação artificial permanente, através de lâmpadas de led em
comprimentos de onda combinados entre o azul e o vermelho (Figura 12).
Figura 12 - Reator do tipo Raceway Pond utlizado nos cultivos.
Fonte: O autor.
62
3.3.1 Preparo do inóculo
Para inicar o experimento em reator Raceway, primeiramente fez-se necessário obter

um grande volume de cultivo de microalga em concentração elevada. Para tal, fez-se a
repicagem do cultivo do banco de células que estava mantido no cepário. Este procedimento
foi realizado na proporção de 1 erlenmeyer de cultivo (125mL) para um recipiente plástico
e transparente de 2L. Por sua vez, cada recipiente de 2L passou por uma nova repicagem em
recipientes de 5L com as mesmas características.
Os recipientes utilizados para o repique foram previamente tratados com hipoclorito e
neutralizadas com Tiossulfato de Sódio (Na2S2O3) para evitar contaminação do inóculo. O
acompanhamento do crescimento dos cultivos foi realizado por meio de leituras de
absorbância em espectrofotômetro (UV-Vis, Bel Photonics) a 680nm até que o valor da
leitura atingiu a marca de 1,500. O procedimento de preparo do inóculo com as etapas até o
início do experimento na Raceway, está esquematicamente ilustrado na Figura 13.
Figura 13 - Etapas da preparação do inóculo até o início dos cultivos em reator Raceway: a)
cultivos em erlenmeyer no cepário. b) cultivo em recipiente transparente de 2L; c) cultivo
em recipiente transparende de 5L; d) cultivo em reator Raceway.
Fonte: O autor.
63
3.3.2 Desenvolvimento dos cultivos
Os cultivos foram realizados em batelada no reator do tipo Raceway e inoculados

utilizando 15L de cultura microalgal com leituras de absorbância próximas a 1,500. Esse
valor de absorbância foi adotado devido a necessidade de se padronizar a concentração
celular ao se iniciar os experimentos e de modo a garantir uma boa concentração para
desenvolvimento da cultura celular. Todos os cultivos foram realizados em duplicata e em
batelada com volume total de 100L, que contavam com 15L da cultura microalgal com
absorbância de 1,500 a 680nm, uma quantidade de chorume, que variou de acordo com a
condição experimental e o restante de água. Ainda, foram adicionados cloreto de sódio
(NaCl), visto que a Chlorella minutissima é uma espécie de microalga marinha, na proporção
de 35g.L-1 e em alguns casos o acetato de sódio, que representa a fonte de carbono fornecida
ao cultivo, em diferentes concentrações, dependendo da condição experimental. A
quantidade de acetato adicionado ao cultivo foi dividida propositalmente e adicionado em
dois momentos - no início e após 7 dias - com os objetivos de não saturar as células de
microalga e de proporcinar duas curvas de crescimento para o mesmo cultivo. Foram,
também, ajustadas a vazão de aeração do reator e a frequência de agitação, a qual o cultivo
foi submetido. Após ajustar os parâmetros mencionados, o cultivo inoculado foi mantido
pelo período de 15 dias com agitação, aeração e iluminação constantes.
3.4 ACOMPANHAMENTO DO CRESCIMENTO
Assim como na preparação do inóculo, o crescimento microalgal foi acompanhado

pela medida de absorbância em espectrofotômetro (UV-Vis, Bel Photonics), selecionando o
comprimento de onda de 680nm para a realização das leituras. Segundo Zhao, Zhang e Cui
(2015), esse valor de comprimento de onda quantifica a concentração da clorofila total, a
qual é proporcional a biomassa produzida. As medidas de absorbância foram registradas
diariamente, buscando-se manter intervalos de 24h entre cada medição, começando pelo
início do cultivo. A partir dos valores medidos de absorbância, as concentrações do cultivo
foram calculadas com o auxílio de uma curva de calibração. Curva esta obtida partindo de
uma suspensão concentrada de Chlorella minutissima, que teve sua absorbância determinada
com o auxílio do mesmo espectrofotômetro utilizado para o acompanhamento do
crescimento dos cultivos, no comprimento de onda de 680nm. Partindo desta suspensão,
diluições sucessivas foram feitas até que se atingisse a concentração mínima de 1:10 v/v.
64
Então, cada amostra teve sua absorbância determinada para o mesmo comprimento de onda
no mesmo equipamento e com a relação entre a concentração da amostra diluída e o valor
de absorbância medido, a curva de regreção foi traçada com um coeficiente de correlação no
valor de 0,9257. Com os valores da absorbância e da concentração para cada dia do cultivo,
os gráficos de absorbância vs tempo (em dias) e concentração (g.L-1) vs tempo (em dias)
foram traçados, para cada uma das diferentes condições experimentais com o objetivo de
analisar como o crescimento da população de microalgas se comportou para cada condição
experimental e comparar a efetividade entre elas.
Outras duas maneiras de se analisar o crescimento, também, foram adotadas. Para
contagem do número de célululas da suspensão microalgal, foi utilizada uma câmara de
Neubauer aperfeiçoada em microscópio biológico trinocular com câmera digital (TIM108,
Opton), no qual as regiões da câmara consideradas para contagem possuem 1 mm 2 de área
cada e como a profundidade é igual a 0,1 mm, o número de células contado na em cada
região considerada corresponde ao número de células em 0,1 mm3 , sendo o valor adotado a
média das quatro regiões e, também, foi utilizada uma lâmina micrométrica para mensurar
o tamanho das células de microalgas presentes no cultivo. As fotografias do meio celular
para o primeiro e último dia de cultivos estão dispostas nos APÊNDICES B-J. Já a
determinação diária de biomassa seca foi realizada a partir de uma alíquota de 3mL de
amostra coletada do cultivo, que foi transferida para um tubo de centrífuga previamente seco
em liofilizador (LT1000, Terroni) a 60oC por aproximadamente 24h, pesado em balança
analítica de precisão 0,0001g (S2202H, Bel) e submetida a centrifugação (centrífuga: 80-
2B-15mL, Centrilab) a 1500rpm por 10 minutos. O sobrenadante foi descartado e o tubo
com o precipitado foi, novamente, colocado para secagem no liofilizador a 60oC por mais
24h. Passado o período, o tubo com o precipitado seco foi pesado na mesma balança analítica
e a biomassa foi quantificada pela diferença entre as massas. Os resultados dessa análise está
presente no APÊNDICE K.
3.5 OBTENÇÃO DA BIOMASSA
Como os cultivos foram feitos com 100L de volume, para o procedimento de

quantificação de biomassa foi utilizada uma alíquota de 10L, a fim de tornar a análise viável,
uma vez que para se executar as etapas descritas a seguir se gastaria muito em termos de
tempo e recursos. Primeiramente, a biomassa do cultivo da microalga Chlorella minutissima
65
foi separada do meio de cultura por floculação, utilizando sulfato de alumínio 0,15M como
agente floculante. Após a floculação, a biomassa foi submetida ao processo de filtração a
vácuo com peneira molecular, utilizando um sistema dotado de funil de Buchner, Kitasato e
uma bomba de vácuo (131 - Tipo 2 VC, Prismatec). Uma vez separada, a biomassa foi
transferida para um vidro de relógio de massa conhecida e seguiu para a operação de
secagem em liofilizador (LT1000, Terroni) a 60oC por um período aproximado de 24h.
Depois de seca a biomassa, diposta no vidro de relógio, foi pesada em balança analítica
(S2202H, Bel) com precisão de 0,0001g e quantificada pela diferença entre as massas. O
fluxograma do procedimento é representado pela Figura 14.
Figura 14 - Fluxograma do procedimento de obtenção da biomassa seca
Fonte: O autor.
Em seguida, ela foi macerada em almofariz de porcelana com o auxílio de um pistilo

e armazenada em um recipiente de vidro previamente identificado para que fosse utilizada
nas análises seguintes. A massa de biomassa obtida no processo foi considerada como o
parâmetro “massa total obtida” e a partir dela foi feito o cálculo de produtividade de
biomassa (PB), a fim de quantificar a produção diária do cultivo em litros. A equação (3) foi
utilizada para o cálculo.
𝑚𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑜𝑏𝑡𝑖𝑑𝑎 .100

𝑃𝐵(𝑚𝑔. 𝑑𝑖𝑎−1 . 𝐿−1 ) = (3)
.𝑡𝑑𝑖𝑎𝑠
66
3.6 EXTRAÇÃO DE LIPÍDEOS
Para a extração de lipídeos, a biomassa foi previamente separada do meio de cultura

pelo procedimento descrito no item 3.5. A partir dessa biomassa seca, a extração foi realizada
baseando-se numa adaptação do processo proposto por BLIGH; DYER (1959), no qual foi
determinada o teor de umidade de 1 grama de biomassa seca em uma balança infravermelho
semi-analítica (Sartorius MA 30). A biomassa foi então disposta em um erlenmeyer de 125
mL e sua umidade foi ajustada acrescentando-se água destilada até que o valor atingido fosse
de 64%, considerado como ideal de acordo com a pesquisa de Zorn et al. (2017). Em seguida,
o Erlenmeyer foi transferido para um banho ultrassônico (Hielscher Ultrassound
Technology, UP 200S) pelo período de 15 minutos. Logo após, acrescentou-se 9,4 mL de
clorofórmio, 10,2 mL de metanol e agitou-se a solução até que fosse homogeneizada. A
mistura foi retornada ao ultrassom de sonda por mais 35 minutos. Passado este período,
foram adicionados mais 9,4mL de clorofórmio e submetida a mais 35 minutos do banho
ultrassônico. Ao finalizar o processo ultrassônico, foi acrescentado 3,4 mL de água destilada
na mistura a fim de separar as fases e facilitar a remoção dos lipídeos.
O counteúdo do erlenmeyer foi filtrado em papel de filtro qualitativo com diâmetro
médio de poros de 22µm e submetido a um período de 12h de repouso em funil de separação
para garantir a completa separação de fases. Após esse período, a fase apolar foi recolhida
em um frasco de vidro, previamente seco em liofilizador a 60ºC por 24h para a completa
evaporação do clorofórmio, e pesado em balança analítica (M214AIH, Bel) com precisão de
0,0001g. O fluxograma do procedimento está representado na Figura 15.
Figura 15 - Fluxograma da extração de lipídeos a partir da biomassa seca.
Fonte: O autor.
67
Após a secagem, o vidro foi novamente resfriado em dessecador e pesado, obtendo-se

assim o teor de lipídeos a partir dos cálculos baseados na massa de biomassa utilizada. A
equação (4) foi utilizada para a determinação do teor de lipídeos (L%) e, na sequência,
utilizou-se a equação (5) para a determinação da produtividade média de lipídeos (PL):
𝑚ó𝑙𝑒𝑜 𝑜𝑏𝑡𝑖𝑑𝑎
𝐿(%) = 𝑚 × 100 (4)
𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑢𝑡𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑑𝑎
𝑚𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑜𝑏𝑖𝑡𝑖𝑑𝑎 .𝐿(%)

𝑃𝐿(𝑚𝑔. 𝑑𝑖𝑎−1 . 𝐿−1 ) = (5)
𝑡𝑑𝑖𝑎𝑠
Lembrando que a massa de biomassa total obtida foi extraída a partir de uma alíquota
de 10L do cultivo total.
Outra maneira de se calcular a produtividade média de lipídeos é a partir da equação
(6) para o resultado em g.L-1.dia-1 e da equação (7) para o resultado em mg.L-1.dia-1, ambas
em função da produtividade de biomassa (PB).
𝑃𝐵.𝐿(%)
𝑃𝐿(𝑔. 𝑑𝑖𝑎−1 𝐿−1 ) = (6)
100
𝑃𝐿(𝑚𝑔. 𝑑𝑖𝑎−1 𝐿−1 ) = 10. 𝑃𝐵. 𝐿(%) (7)
3.7 DEMANDA QUÍMICA DE OXIGÊNIO (DQO)
A determinação da DQO foi feita de acordo com a metodologia de Valente, Padilha e

Silva (1997) para as amostras correspondentes ao primeiro e último dias de cultivo. O
procedimento para a realização da DQO foi realizado em três fases, no qual a primeira delas
foi a preparação das amostras, a segunda a digestão das amostras e a terceira a medição da
absorbância.
3.7.1 Preparo das amostras
Primeiramente, as amostras foram diluídas 20 vezes de modo a adequar a concentração

de íons cloreto com o intuito de minimizar a interferência. Sabe-se que os íons cloreto
68
provocam interferência positiva na análise e, no caso das amostras a serem analisadas, sua
concentração é elevada pois a microalgac Chlorella minutissima é de origem marinha.
As amostras foram preparadas em tubos de ensaio de vidro, a partir da adição de 50mg
Sulfato de Mercúrio (HgSO4), responsável pelo controle da interferência dos íons cloretos
em solução; 2,5mL de Sulfato Ácido de Prata (Ag2SO4), responsável por tornar o meio ácido;
0,5mL de Dicromato de Potássio (K2Cr2O7) (forte agente oxidante); 0,3mL de água destilada
e 2mL da amostra diluída.
3.7.2 Digestão e medição da absorbância
A digestão das amostras foi realizada em um bloco digestor de concreto à temperatura

de 150ºC pelo período de 1 hora e meia. Terminada a digestão, os tubos foram retirados do
bloco digestor e armazenados em um armário com baixa luminosidade à temperatura
ambiente por 24h para o resfriamento e sedimentação do precipitado, quando houve.
3.7.3 Medição da absorbância
Com os tubos já resfriados, as medidas de absorbância das amostras foram feitas no

comprimento de onda de 420 nm em cubeta de quartzo de faces polidas e laterais escuras
com caminho óptico de 10mm e volume máximo de 1,4mL. Os valores de absorbância
medidos foram convertidos em valores de concentração (g.L-1) através de uma curva de
calibração presente no APÊNDICE L.
3.8 ANÁLISES REOLÓGICAS
Os ensaios reológicos foram feitos em duplicata para cada amostra diária de cada
condição experimental à temperatura controlada de 25oC no reômetro Brookfield (modelo
LVDV-3T), de maneira automatizada por meio do software Rheocalc T.
Este aparelho mantém uma velocidade de rotação constante que corresponde a certa
taxa de deformação e a tensão de cisalhamento é obtida através da leitura do torque no
cilindro de medida (fixo). As leituras foram feitas a cada intervalo de tempo pré-programado
de 30s, no qual a velocidade de rotação era iniciada a 30rpm e era incrementada em 30
unidades para cada intervalo até que se atingisse a velocidade de 240rpm. Para cada ponto,
69
foram obtidos dados de tensão de cisalhamento, taxa de cisalhamento e viscosidade. Analisar

esses parâmetros é de extrema importância para o estudo reológico de suspensões, além de
determinar as características do fluido
As curvas reológicas obtidas foram ajustadas aos modelos reológicos de Casson, Lei
da Potência, Bingham e Herschel-Bulkley, visando buscar o modelo que melhor se adequa
as condições e propriedades físicas do fluido suspensão de microalgas. A análise estatística
foi realizada utilizando as variáveis do modelo, que melhor se ajustou ao caso, buscando as
condições para que o cultivo microalgal se aproximasse de um fluido newtoniano.
3.9 PLANEJAMENTO EXPERIMENTAL
No presente estudo, foram avaliados os efeitos dos fatores: concentração de chorume

e da fonte de carbono (acetato de sódio) adicionados ao inóculo, a vazão da aeração injetada
no meio de cultivo e a frequência de rotação do agitador, a qual o cultivo foi submetido nas
variáveis resposta em termos de: crescimento microalgal, biomassa, lipídeos, redução de
DQO e parâmetros reológicos (obtidos após os ajustes dos reogramas aos modelos
reológicos) ao final do cultivo.
Para a avaliação dos efeitos dos fatores anteriormente descritos, nas variáveis resposta,
foi feito um planejamento experimental, utilizando o arranjo ortogonal L9 de Taguchi, no
qual é possível avaliar até 4 fatores em 3 níveis diferentes. A Tabela 7 apresenta os fatores
com os respectivos ajustes de níveis.
Tabela 7 - Variáveis de entrada e níveis usados para determinação dos parâmetros

significativos no cultivo da microalga Chlorella minutissima.
Código Fatores Nível Baixo (1) Nível Médio (2) Nível Alto (3)
A CC (%) 2,5 5,0 7,5
B CFC (g.L-1) 0 1 2
C VA (vvm) 0,05 0,10 0,15
D FA (rpm) 4 6 8
Nota: CC - concentração do chorume; CFC - concentração da fonte de carbono; VA - vazão de
aeração; FA - frequência de rotação do motor do agitador (frequência de agitação).
Fonte: O autor.
Na Tabela 8 está disposto o arranjo ortogonal da matriz L9 de Taguchi, utilizada para

o planejamento de experimentos.
70
Tabela 8 - Arranjo ortogonal da matriz Taguchi L9.

Condição
CC CFC VA FA
Experimental
1 1 1 1 1
2 1 2 2 2
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 2
8 3 2 1 3
9 3 3 2 1
Fonte: O autor.
3.9.1 Análise Estatística
Para as análises estatísticas foram utilizados os softwares Statistica 13.5, Minitab 19 e

o Excel 2016. Deste modo, verificou-se os efeitos dos fatores (CC - Concentração de
chorume; CFC - Concentração da Fonte de Carbono (acetato de sódio) e VA - Vazão de
aeração) sobre as variáveis respostas (crescimento celular da suspensão de microalgas,
biomassa total obtida, PB = Produtividade de Biomassa, teor de lipídeos, PL = Produtividade
média de Lipídeos, redução de DQO, n = índice de comportamento e k = índice de
consistência). Após obter e organizar as respostas para todos os parâmetros, os dados obtidos
foram analisados utilizando os softwares. O Statistica 13.5 e o Minitab 19, foram
responsáveis pelo cálculo dos efeitos, por gerar os gráficos, fazer propostas de melhor ajuste
e disponibilizar outras informações, que auxiliaram na discussão dos resultados. A análise
de variância (ANOVA) foi realizada no Excel 2016 em uma planilha desenvolvida
exclusivamente para atender as condições do presente trabalho. A partir da ANOVA, foi
possível determinar quais fatores foram mais impactantes para cada variável resposta,
significativos, relevantes ou não, utilizando o teste F, no qual o valor calculado de F para
cada fator é comparado a um valor de F tabelado - chamado de Fcrítico. Quando Ffator > Fcrítico,
o fator é significante no processo e a variação de ajuste influencia fortemente no valor da
resposta. Quando o fator não atinge um valor de F maior que Fcrítico, adota-se um critério
simplificado chamado critério de Padke, no qual quando Fcrítico > Ffator > 2 o fator é dito como
relevante, impactando de forma razoável na resposta. Para valores em que o valor de F
calculado para o fator é inferior a 2, diz-se que o fator é não significante, deste modo, não
promove influência na resposta, independete de como for ajustado.
71
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Os resultados apresentados a seguir foram previamente comentados de uma maneira

mais geral com algumas observações pertinentes. Uma discussão mais aprofundada sobre
cada parâmetro analisado e a influência dos fatores no valor das respostas observada foi feita
a partir da análise estatística da matriz ortogonal de Taguchi e será abordada no decorrer do
capítulo.
4.1 CRESCIMENTO CELULAR DOS CULTIVOS
As curvas apresentadas no gráfico da Figura 16, mostram os valores de absorbância da

suspensão de microalga Chlorella minutissima, para cada condição de experimental, em
função do tempo em dias.

minutissima pelo parâmetro da absorbância (λ=680nm).
1,200
1,150
Condição 1
1,100
1,050
1,000 Condição 2
0,950
Absorbância (680nm)
0,900 Condição 3
0,850
0,800
Condição 4
0,750
0,700
0,650 Condição 5
0,600
0,550 Condição 6
0,500
0,450
0,400 Condição 7
0,350
0,300 Condição 8
0,250
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Condição 9
Tempo (dias)
Fonte: O autor.
72
Para melhor apresentação e discussão dos resultados, foi feita a conversão dos dados
obtidos dos valores de absorbância da suspensão de microalgas para valores de concentração
(g.L-1), através de uma curva de calibração presente no APÊNDICE M. O resultado desta
conversão está presente na Figura 17.

minutissima pelo parâmetro da concentração (g.L-1).
0,35
Condição 1
0,33
0,30
Condição 2
0,28
0,25
Concentração (g.L-1)
Condição 3
0,23
0,20 Condição 4
0,18
0,15 Condição 5
0,13
0,10 Condição 6
0,08
0,05 Condição 7
0,03
Condição 8
0,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Condição 9
Tempo (dias)
Fonte: O autor.
A diferença no crescimento (concentração celular da suspensão microalgal) entre os

cultivos pode ser facilmente percebida e está relacionada a variação das condições
experimentais, no qual cada cultivo foi realizado. De acordo com os gráficos das Figuras 16
e 17, os melhores resultados obtidos, em termos de crescimento microalgal, foram para as
condições de cultivo 3 e 9 com valores aproximados de concentração de 0,33g.L-1 com a
concentração da fonte de carbono (acetato) ajustada no nível 3 (2g.L-1), porém com a
condição 3 tendo adição de chorume ajustada no nível 1 (2,5%), enquanto a condição 9 teve
adição do lixiviado ajustada em nível 3 (7,5%). As condições de cultivo 4 e 7, junto da
condição 1, foram as que apresentaram menor crescimento, sendo que a condição 4 teve a
73
adição de chorume ajustada no nível 2 (5,0%) e a condição 7 ajustada no nível 3 (7,5%) e

ambas não possuem adição da fonte de carbono. Deste modo, observa-se que o a adição de
acetato é extremamente importante para o crescimento microalgal, principalmente na
presença de altas concentrações do lixiviado. Da Figura 17 observa-se que, quando não
houve suplementação da fonte de carbono (condições 2 e 4), o crescimento celular não foi
eficiente. De acordo com, Ohse et al. (2009) e Zhao, Zhang e Cui (2015), é sabido que o
CO2 contribui para o crescimento celular de maneira geral, visto que o carbono participa do
processo de fotossíntese dos cultivos fotoautotróficos na forma de CO2 gasoso e na forma
de substrato orgânico, como a glicose ou sal (bicarbonato, acetato) nos cultivos
heterotróficos e mixotróficos, embora cada espécie de microalga requer uma suplementação
de CO2 específica no seu meio. Segundo os autores, para a Chlorella sp., uma suplementação
de 5% de dióxido de carbono é a adequada enquanto que a Chlorella minutissima (foco desse
projeto) necessita de apenas 2% de suplementação desse gás para o crescimento ser
aprimorado.
Segundo Chiu et al. (2015), a carga metálica e outros compostos orgânicos presentes
na composição do chorume pode configurar a ele uma certa toxicidade e, assim, causar um
aumento no tempo de adaptação da microalga ao meio de cultivo, prejudicando seu
crescimento. Contudo, a presença de uma elevada carga orgânica e nutrientes, nele presentes,
também, propiciam um melhor crescimento celular.
Ainda, em relação ao efeito da concentração do chorume no meio de cultivo, Khalili
et al. (2014) afirmam que a tendência de algumas espécies de microalgas em crescer nos
meios ricos em fósforo e nitrogênio faz com que estas sejam utilizadas em tratamento dos
efluentes provenientes de esgotos municipais visando à diminuição de matéria orgânica, de
compostos fosfatados e nitratos nos sistemas aquáticos. Desse modo, o cultivo das
microalgas em efluentes proporciona o crescimento celular da biomassa, dispensando a
adição de nutrientes e, desta maneira, tornando o processo mais econômico. Os autores
afirmam que a concentração destes nutrientes no meio é diretamente proporcional à taxa de
crescimento celular das algas, exceto em soluções com concentração acima do nível crítico.
De acordo com Tagliaferro (2017), o lixiviado proveniente de aterros sanitários pode
ser utilizado como meio de cultivo, visto que o este contém vários nutrientes que podem ser
aproveitados pelas microalgas, tais como os metais, os sais dissolvidos e substâncias
orgânicas, sendo que estas últimas podem ser degradadas mais rapidamente graças ao
oxigênio produzido na fotossíntese, durante o crescimento microalgal (CHEAH et al., 2016).
74
4.2 BIOMASSA
4.2.1 Quantificação da biomassa obtida
Os valores de biomassa, em gramas, obtidos para cada condição de cultivo, em

duplicata, estão dispostos na Tabela 9, no qual a numeração romana “II” indica a réplica do
cultivo em questão. Para melhor vizualização da comparação entre os cultivos e suas
réplicas, os dados da tabela foram dispostos graficamente na Figura 18.
Tabela 9 - Quantidade de biomassa obtida de 10 L de cultivo.

Condição Experimental Biomassa Obtida (g)
1 3,12
1 II 3,67
2 9,71
2 II 9,28
3 15,30
3 II 16,02
4 5,01
4 II 5,32
5 10,18
5 II 11,08
6 12,07
6 II 12,73
7 6,33
7 II 6,98
8 14,99
8 II 14,72
9 16,51
9 II 16,28
Fonte: O autor.
Figura 18 - Comparação da obtenção de biomassa entre as diferentes condições de cultivo.
18
16
Biomassa Obtida (g)
14
12
10
8
6
4
2
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Condição Experimental
I II
Fonte: O autor
75
As condições experimentais, que geraram a maior quantidade de biomassa, foram a 3,

8 e 9 com valores superiores a 14g, apresentando as médias de 15,66; 14,86 e 16,40g,
respectivamente. As condiçoes 3 e 9, possuem adição de acetato ajustadas no nível 3 (2g.L-
1
), enquanto que a condição 8 possui a adição da fonte de carbono ajustada no nível 2 (1g.L-
1
). Porém, ambas as condições 8 e 9, possuem adição de chorume ajustada no nível 3 (7,5%),
que é justamente o que difere as condições 3 e 9, no qual a 3 possui adição do lixiviado
ajustada no nível 1 (2,5%). Deste modo, pode-se perceber que a quantidade de acetato
adicionado é o que mais influencia na obtenção de biomassa total. O que faz sentido, já que
a quantidade de biomassa está diretamente relacionada a concentração do cultivo e, como já
mencionado, o acetato é o maior responsável pelos maiores valores de concentração obtidos.
O chorume, também, é um fator muito importante, como já pôde ser visto, mas mesmo a
condição 3 tendo adição de chorume ajustada no nível 1 (2,5%), pelo fato de conter adição
de acetato ajustada no nível 3 (2g.L-1), conseguiu superar a condição 8, que conta com a
adição de chorume ajustada no nível 3 (7,5%) e adição de acetato ajustada no nível 2 (1g.L-
1
). Assim, apesar da adição de chorume ser um fator importante, não é tanto quanto a fonte
de carbono. Os outros fatores - frequência de agitação e vazão de aeração - também, tem a
sua importância, mas não são tão siginificantes. Mesmo a condição 4 possuindo vazão de
aeração ajustada no nível 2 (0,10vvm) e frequência de agitação ajustada no nível 3 (8rpm) e
a condição 6 possuir a frequência de agitação ajustado no nível 2 (6rpm) e vazão de aeração
ajustada no nível 1 (0,05vvm), o cultivo 4 apresenta um dos valores mais baixos de obtenção
de biomassa total, sendo de uma média de 5,16g, enquanto o cultivo 6 apresenta um valor
médio bom de 12,40g. Isto se deve ao fato de que condição 6 apresenta o faot adição de
acetato ajustado no nível 3 (2g.L-1), enquanto que a condição 4 não apresenta adição da fonte
de carbono.
4.2.2 Produtividade de biomassa
Os dados de produtividade de biomassa para cada condição experimental são

importantes, uma vez que deste modo pode-se enxergar com mais clareza o quanto de
biomassa está sendo produzida ao decorrer dos dias de cultivo. Esses dados estão na Tabela
10, no qual o parâmetro produtividade foi medido em gramas de biomassa obtido por litros
e dias de cultivo. Também, o gráfico de comparação entre as condições experimentais e suas
réplicas, está ilustrado na Figura 19.
76
Tabela 10 - Produtividade de biomassa.
Condição Experimental Produtividade de Biomassa (g.L-1.dia-1)

1 0,0208
1 II 0,0245
2 0,0647
2 II 0,0619
3 0,1020
3 II 0,1068
4 0,0334
4 II 0,0355
5 0,0679
5 II 0,0739
6 0,0805
6 II 0,0849
7 0,0422
7 II 0,0465
8 0,0999
8 II 0,0981
9 0,1101
9 II 0,1085
Fonte: O autor.
Figura 19 - Comparação da produtividade de biomassa entre as diferentes condições de

cultivo.
0,1200
0,1000
Produtividade (g/L.dia)
0,0800
0,0600
0,0400
0,0200
0,0000
1 2 3 4 5 6 7 8 9
I II
Fonte: O autor.
Analogamente ao que foi discutido no item anterior, as condições experimentais 3, 8

e 9, foram as que apresentaram maiores valores de produtividade de biomassa com valores
77
médios de 1,044; 0,099 e 1,093g.L-1.dia-1, respectivamente. Da mesma forma, observou-se,

que os fatores mais importantes foram a concentração da fonte de carbono e a concentração
de chorume, nessa ordem.
4.3 LIPÍDEOS
4.3.1 Teor de lipídeos
Além da quantidade de biomassa que cada condição experimental produz, também,

faz-se necessário analisar o quanto de lipídeo pode ser extraído dessa biomassa e isto está
diretamente relacionado as características da biomassa obtida e varia pra cada condição. A
extração de lipídeos foi feita a partir de aproximadamente 1g da biomassa retirada do cultivo
para cada condição experimental e o teor de lipídeos foi calculado pela comparação entre a
massa de lipídeo obtida e a de biomassa utilizada. Todos os valores mencionados estão
apresentados na Tabela 11 e o gráfico da Figura 20, ajuda em uma melhor análise dos dados.
Tabela 11 - Teor de lipídeos

Condição Massa de Biomassa Massa de Lipídeo
Teor de Lipídeos (%)
Experimental Utilizada (g) Extraído (g)
1 1,0390 0,0299 2,88
1 II 1,0210 0,0281 2,75
2 1,0159 0,0317 3,12
2 II 1,0080 0,0290 2,88
3 1,0110 0,0518 5,12
3 II 1,0053 0,0497 4,94
4 1,0300 0,0445 4,32
4 II 1,0704 0,0447 4,18
5 1,0236 0,0444 4,34
5 II 1,1340 0,0503 4,44
6 1,0042 0,0522 5,20
6 II 1,0030 0,0546 5,44
7 1,0490 0,0473 4,51
7 II 1,0004 0,0476 4,76
8 1,0320 0,0610 5,91
8 II 1,0110 0,0583 5,77
9 1,0030 0,0750 7,48
9 II 1,0942 0,0805 7,36
Fonte: O autor.
78
Figura 20 - Comparação do teor de lipídeos obtido entre as diferentes condições de cultivo.
8,00
Teor de Lipídeo Obtido (%)
7,00
6,00
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9
I II
Fonte: O autor.
A partir dos resultados, percebe-se que a condição experimental 9 foi a que apresentou
maior teor de lipídeos, com os ajustes no nível 3 para adição de chorume (7,5%) e fonte de
carbono (2g.L-1) As condições 8 e 6, também, apresentaram bons resultados, sendo o a
adição de chorume ajustada no nível 3 (7,5%) para a condição 8 e no nível 2 (5,0%) para a
condição 6 e a fonte de carbono ajustada no nível 2 (1g.L-1) para a condição 8 e no nível 3
(2g.L-1) para a condição 6, o que demonstra que a quantidade de chorume adicionada impacta
mais no teor de lipídeos obtido do que a quantidade de acetato.
4.3.2 Produtividade média de lipídeos
Analogamente aos cálculos de produtividade para a biomassa, os dados de

produtividade média de lipídeos vizam apresentar os resultados de modo que se possa
englobar todo o cultivo, uma vez que, ao invés de se analisar o teor de lipídeos obtido a partir
de 1g de biomassa, foi calculada o quanto se produziu de lipídeo por litro de cultivo durante
os 15 dias. Deste modo, os resultados em termos de produtividade de lipídeos estão atrelados
aos valores obtidos de biomassa total, de onde os lipídeos foram extraídos. Os valores de
produtividade estão na Tabela 12 e o gráfico da Figura 21 mostra um comparativo entre os
cultivos feitos nas diferentes condições experimentais e entre suas réplicas.
79
Tabela 12 - Produtividade média de lipídeos.

Biomassa Total Obtida no Produtividade Média de
Cultivo (g) Lipídeos (mg.L-1.dia-1)
1 3,12 5,99
1 II 3,67 6,73
2 9,71 20,20
2 II 9,28 17,80
3 15,30 52,26
3 II 16,02 52,80
4 5,01 14,43
4 II 5,32 14,81
5 10,18 29,44
5 II 11,08 32,76
6 12,07 41,83
6 II 12,73 46,20
7 6,33 19,03
7 II 6,98 22,14
8 14,99 59,07
8 II 14,72 56,59
9 16,51 82,33
9 II 16,28 79,88
Fonte: O autor.
Figura 21 - Comparação da produtividade média de lipídeos entre as diferentes condições de

cultivo.
90,00
80,00
Produtividade (mg/L.dia)
70,00
60,00
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9
I II
Fonte: O autor.
Da mesma forma que na análise de teor de lipídeos, a condição de cultivo com maior
produtividade média de lipídeos foi a condição 9. Isso se deve ao fato de que além desta
condição apresentar uma ótima produção em teor de lipídeos, também, proporciona a maior
obtenção de biomassa total dentre todas as condições experimentais. Porém, apesar da
condição 6 demonstrar um valor maior de teor de lipídeos do que a condição 3, a última
80
proporciona maior obtenção de biomassa total que a primeira, sendo suficiente para
apresentar um valor de produtividade média em lipídeos superior.
4.4 DEMANDA QUÍMICA DE OXIGÊNIO (DQO)
Na Tabela 13, estão os resultados da análise de DQO, realizada em duplicata. O valor

de redução percentual foi obtido comparando a concentração atingida no último dia do
cultivo com relação a concentração do primeiro dia. Os valores de concentração foram
obtidos pela conversão dos valores de absorbância lidos no espectrofotômetro, através de
uma curva de calibração presente no APÊNDICE L.
Tabela 13 - Análise de redução da Demanda Química de Oxigênio.
Condição Concentração DQO (mg O2.L-1)

Redução DQO (%)
Experimental Primeiro dia Último dia
1 7,367 6,866 6,80
1 II 7,316 6,836 6,56
2 7,351 6,051 17,68
2 II 7,372 6,102 17,22
3 7,323 5,911 19,28
3 II 7,320 5,930 19,00
4 7,651 6,419 16,11
4 II 7,721 6,405 17,05
5 7,712 6,964 9,70
5 II 7,674 6,990 8,92
6 7,681 6,032 21,47
6 II 7,693 6,062 21,20
7 8,115 7,849 3,27
7 II 8,105 7,795 3,82
8 8,091 5,783 28,53
8 II 8,101 5,757 28,93
9 8,061 7,078 12,19
9 II 8,108 7,064 12,87
Fonte: O autor.
Analisando os dados da Tabela 13, observa-se que a condição 8 foi a que atingiu a
maior redução de DQO, com o valor médio de 28,73%. As condições 3 e 6, também,
81
apresentaram bons valores de redução, na faixa de 20%. Já as condições 1, 5 e 7 tiveram

redução inferior a 10%. Deste modo, percebe-se que os fatores CFC e FA ajustados nos
níveis 2 e 3, foram os que propiciaram os mais altos percentuais de redução de DQO,
enquanto que a concentração de chorume foi determinante para os valores de concentração
inicial desse parâmetro.
O gráfico da Figura 22 mostra um comparativo entre a resposta dos cultivos feitos nas
diferentes condições experimentais e entre suas duplicatas.
Figura 22 - Comparação da redução de DQO entre as diferentes condições de cultivo.
30,00
25,00
Redução de DQO (%)
20,00
15,00
10,00
5,00
0,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9
I II
Fonte:O autor.
A partir dos resultados obtidos e com o auxílio do gráfico da Figura 22, percebe-se que
os cultivos com o fator CFC ajustado em nível 3 (2g.L-1) atrelado a uma boa frequência de
agitação, deram bons resultados de redução de DQO. Com aproximadamente 30% de
redução, o cultivo 8 se mostrou eficaz para esse procedimento. As condições experimentais,
que proporcionam altas concentrações de cultivo e uma boa produção de biomassa, também,
demonstraram proporcionar uma boa redução de DQO, como já era esperado.
4.5 REOLOGIA
O gráfico de tensão de cisalhamento em relação a taxa de cisalhamento para cada

condição experimental está presente na Figura 23.
82
Figura 23 - Gráfico comparativo da reologia entre todas as condições experimentais.
7,5
6,5
Tensão de Cisalhamento (dyn.cm-2)
5,5 Condição 1
Condição 2
4,5 Condição 3
Condição 4
3,5
Condição 5
2,5 Condição 6
Condição 7
1,5 Condição 8
Condição 9
0,5
-0,5 30 80 130 180 230 280

Taxa de Cisalhamento (s-1)
Fonte: O autor.
Avaliando as curvas reológicos do gráfico, pode-se afirmar que a suspensão de

microalgas apresenta comportamento de um fluido não-newtoniano. Esta suspensão pode
ser classificada como um líquido que apresenta um comportamento de fluxo dilatante, que é
caracterizado pela dependência entre os parâmetros viscosidade e tensão de cisalhamento,
no qual o valor da viscosidade aumenta a partir do aumento da taxa de cisalhamento.
Segundo Holdsworth (1971), esse tipo de comportamento pode ser encontrado, por exemplo,
em emulsões que possuem elevada concentração de partículas sólidas como é o caso dos
cultivos de microalgas.
Os resultados da Figura 23 foram coerentes também com as observações feitas por
Tischer (2006), que relatou comportamento reológico semelhante ao analisar as propriedades
reológicas das galactanas sulfatadas das algas vermelhas Meristiella gelidium e
Gymnogongrus griffithsiae.
De modo a verificar a influência do tempo de cultivo no comportamento reológico da
suspensão da microalga Chlorella minutissima, os gráficos da tensão de cisalhamento em
função da taxa de deformação obtidos diariamente, nas diferentes condições do experimento,
encontram-se nas Figuras 24 a 32.
83
Figura 27 - Gráfico comparativo entre os dias de cultivo da Figura 26 - Gráfico comparativo entre os dias de cultivo da
condição 1. condição 2.
Dia 1 Dia 1
7 7 Dia 2
Tensão de Cisalhamento
Dia 2
Dia 3
6 Dia 3 6 Dia 4
5 Dia 4 5 Dia 5
(dyn.cm-2)
(dyn.cm-2)
Dia 6
4 Dia 7 4
Dia 7
3 Dia 8 3 Dia 8
Dia 9 Dia 9
2 2
Dia 10
Dia 10
1 1 Dia 11
Dia 11 Dia 12
0 0
25 75 125 175 225 275 Dia 14 Dia 13
25 75 125 175 225 275
Dia 14
Dia 15
Taxa de Cisalhamento (s-1) Taxa de Cisalhamento (s-1) Dia 15
Fonte: O autor. Fonte: O autor.
Dia 1 Dia 1
7 Dia 2 7 Dia 2
Dia 3 Dia 3
6 Dia 4 6 Dia 4
5 Dia 5 5 Dia 5
(dyn.cm-2)
(dyn.cm-2)
Dia 6 Dia 6
4 4 Dia 7
Dia 7
3 Dia 8 3 Dia 8
Dia 9 Dia 9
2 2
Dia 10 Dia 10
1 Dia 11 1 Dia 11
Dia 12 Dia 12
0 0
Dia 13 Dia 13
25 75 125 175 225 275 25 75 125 175 225 275
Dia 14 Dia 14
Taxa de Cisalhamento (s-1) Dia 15 Taxa de Cisalhamento (s-1) Dia 15
Dia 1 Dia 1
7 Dia 2 7 Dia 2
Dia 3 Dia 3
6 Dia 4 6 Dia 4
5 Dia 5 5 Dia 5
(dyn.cm-2)
(dyn.cm-2)
Dia 6 Dia 6
4 Dia 7 4 Dia 7
3 Dia 8 3 Dia 8
Dia 9 Dia 9
2 2
Dia 10 Dia 10
1 Dia 11 1 Dia 11
Dia 12 Dia 12
0 0
Dia 13 Dia 13
25 75 125 175 225 275 25 75 125 175 225 275
Dia 14 Dia 14

84
Dia 1 Dia 1
7 Dia 2 7 Dia 2
Dia 3
Dia 3
6 Dia 4 6
Dia 5
5 Dia 5 5
(dyn.cm-2)
(dyn.cm-2)
Dia 6 Dia 6
4 Dia 7
4 Dia 7
3 Dia 8 3 Dia 8
Dia 9 Dia 9
2 2
Dia 10 Dia 10
1 Dia 11 1
Dia 12
Dia 12
0 0 Dia 13
Dia 13
25 75 125 175 225 275 25 75 125 175 225 275 Dia 14
Dia 14
Figura 32 - Gráfico comparativo entre os dias de cultivo da

condição 9.
Dia 1
7 Dia 2
6 Dia 3
5 Dia 5
(dyn.cm-2)
Dia 6
4
Dia 7
3
Dia 8
2
Dia 9
1 Dia 10
0 Dia 12
25 75 125 175 225 275 Dia 14
Taxa de Cisalhamento (s-1) Dia 15
Fonte: O autor.
Dos gráficos das figuras 24 a 32, observa-se que o tempo de cultivo praticamente não
exerceu influência nos reogramas da suspensão da microalga Chlorella minutissima, exceto
nas condições 5 e 9, que apresentam uma boa taxa de crescimento microalgal e a frequência
de agitação no nível 1 (4 rpm), condições estas que contribuem para maior sedimentação das
partículas em suspensão.
4.5.1 Modelos matemáticos ajustados ao comportamento reológico da suspensão da

microalga Chlorella minutissima cultivada em reator Raceway
Quatro modelos matemáticos foram aplicados na análise reológica da suspensão de

microalgas para averiguar qual se adequaria melhor ao comportamento deste fluido. As
85
equações utilizadas foram as dos modelos de Bingham, Casson, Lei da potência e Herschel-
Bulkley e estão dispostas na Tabela 14.
Tabela 14 - Comparação da confiança do ajuste entre os modelos matemáticos aplicados a

análise reológica da suspensão da microalga Chlorella minutissima.
Confiança do Ajuste (%)

CONDIÇÃO
Bingham Casson Power Law Herschel-Bulkley
1 73,27 87,34 92,59 99,92
2 73,57 87,19 92,01 99,91
3 73,59 87,15 92,01 99,92
4 72,26 85,35 91,72 99,81
5 73,78 86,27 89,72 99,83
6 73,69 87,36 92,58 99,93
7 72,53 86,87 92,10 99,91
8 72,88 87,14 92,25 99,90
9 70,95 86,05 90,72 99,89
Fonte: O autor.
Ao analisar a Tabela 14, pode-se afirmar que o modelo matemático que melhor se
ajusta ao comportamento da suspensão das microalgas Chlorella minutissima é o Herschel-
Bulkley com coeficiente de correlação próximo a 0,999. Isto reforça que a suspensão
microalgal é caracterizada como não-Newtoniada, já que este modelo é o mais indicado para
se utilizar para este tipo de fluido. O modelo Herschel-Bulkley é representado pela equação:
 = 0 + 𝑘𝑛 (3)
No qual  é a tensão de cisalhamento, 0 é a tensão limite de escoamento (qual tensão
precisa ser aplicada ao fluido para ele começar a escoar), k é o índice de consistência e n o
índice de comportamento. Se n=1 e 0=0, o modelo se reduz ao modelo de um fluido
newtoniano. Na Tabela 15, estão os valores médios dos parâmetros mencionados para cada
condição experimental.
86
Tabela 15 - Parâmetros do modelo matemático Herschel-Bulkley para cada condição

experimental de cultivo.
Condição
k (cP) n 0 (dyn/cm2)
Experimental
1 0,0679 1,619 0,0903
2 0,0685 1,622 0,0991
3 0,0696 1,619 0,0980
4 0,0688 1,629 0,0923
5 0,0698 1,623 0,1168
6 0,0749 1,604 0,0726
7 0,0677 1,624 0,1006
8 0,0693 1,621 0,0809
9 0,0555 1,659 0,1183

Fonte: O autor.
Com os dados da Tabela 15, percebe-se que a condição 9 gerou o menor valor de k
(0,0555), enquanto a condição 6 gerou o maior valor (0,749). Isso significa que para a
condição 6 a suspensão de microalgas se comporta como um fluido mais resistente ao
escoamento do que para a condição 9. Já para os valores de n, o cultivo 6 foi o que gerou o
menor valor e o 9 foi o que gerou o maior valor. Deste modo, a suspensão microalgal
cultivada na condição 6 tende a ser um fluido com comportamento mais próximo de um
fluido newtoniano, que o cultivado na condição 9. Por último, o cultivo com menor valor de
0 foi o cultivo 6 e o maior, foi o cultivo 9. Quanto mais próximo o valor de 0 for de 0, mais
o fluido se aproxima do comportamento de um fluido newtoniano.
4.5.2 Viscosidade Aparente
Os gráficos da viscosidade aparente em função da taxa de deformação obtidos nas

diferentes condições do experimento encontram-se na Figura 33.
87
Figura 33 - Gráfico da viscosidade aparente versus taxa de cisalhamento.
2,5
2,4
2,3
2,2
2,1
Viscosidade Aparente (cP)
2 Condição 1
1,9 Condição 2
Condição 3
1,8
Condição 4
1,7
Condição 5
1,6
Condição 6
1,5 Condição 7
1,4 Condição 8
1,3 Condição 9
1,2
1,1
1
30 60 90 120 150 180 210 240 270 300
Taxa de Cisalhamento (s-1)
Fonte: O autor.
Da Figura 33, observa-se que a viscosidade aparente da suspensão da microalga

Chlorella minutissima aumentou a medida que houve um aumento na frequência de rotação
a que a amostra foi submetida (que é diretamente proporcional à taxa de deformação), em
todos os casos a partir de, aproximadamente 75rpm. Estes resultados estão coerentes com
diversos autores, para suspensões de algas em geral, que apresentam comportamento
reológico de fluido dilatante e, uma explicação para este tipo de comportamento é que, à
medida que a tensão de cisalhamento aumenta, o líquido intersticial que lubrifica a fricção
entre as partículas é incapaz de preencher os espaços, devido a um aumento no volume que
frequentemente acompanha o fenômeno, ocorrendo contato direto entre as partículas sólidas,
fazendo com que a viscosidade aparente aumente (TISCHER, 2006).
Os resultados apresentados estão de acordo com as investigações recentes, cujos
resultados apontam a natureza não-newtoniana para a maioria dos cultivos microalgais com
elevada concentração celular mostrando, ocasionalmente, uma resistência inicial ao fluxo
88
e/ou uma dependência com o tempo (LIRA, 2011; ADESANYA; DAMIEN; MALCOLM,
2012; WILEMAN; OZKAN; BERBEROGLU, 2012; PELEGRINE; SILVA; LOURES,
2016).
Lira (2011), ao analisar o comportamento reológico da Chlorella minutissima
verificou comportamento não-newtoniano dilatante, quando cultivada em Erlemneyers de
75 mL, com agitação controlada (por mesa de agitação orbital) em um meio com baixo teor
de nitrogênio. Nesse caso, a viscosidade não pode ser expressa por um único valor, devendo
ser obtida pela tangente em cada ponto do reograma, dependendo da tensão aplicada.
Pelegrine, Silva e Loures (2016), também constataram comportamento reológico
típico de um fluido não-newtoniano dilatante em diferentes condições de cultivo da
microalga Chlorella sp., possivelmente devido ao tamanho das células microalgais dispersas
(acima de 1 m) às quais tendem a absorver o líquido intersticial, aproximando-se cada vez
mais umas das outras e, consequentemente, aumentando o valor da viscosidade aparente do
material. O comportamento dilatante é encontrado em suspensões onde a viscosidade
aparente aumenta com a tensão de cisalhamento. Uma explicação para este tipo de
comportamento é que, à medida que a tensão de cisalhamento aumenta, o líquido intersticial
entre as partículas torna-se incapaz de preencher os espaços, devido a um aumento no
volume que acompanha o fenômeno, ocorrendo contato direto entre as partículas sólidas,
fazendo com que a viscosidade aparente aumente (LEONARDI; CAMPOS, 2001). Ainda,
no mesmo estudo, os autores constataram que os cultivos da microalga Chlorella sp. sem a
suplementação de acetato contribui para maior sedimentação das partículas orgânicas
suspensas. Ou seja, a concentração da fonte de carbono no cultivo das microalgas influencia
nas interações das partículas orgânicas com a fase contínua às quais, por usa vez, influenciam
na viscosidade e até mesmo no comportamento reológico da suspensão.
Por outro lado, Wileman, Ozkan e Berberoglu (2012) concluíram que o
comportamento newtoniano em cultivos das microalgas Nannochloris sp, Chlorella vulgaris
e Phaeodactylum tricornutum em concentrações inferiores a 20 kg/m3. No entanto, a partir
de 60 kg/m3, as suspensões da Nannochloris sp e Chlorella vulgaris passaram a apresentar
comportamento não-newtoniano, com diferentes graus de sensibilidade à tensão de
cisalhamento; para a Phaeodactylum tricornutum, tal mudança no comportamento reológico
aconteceu a partir de 80 kg/m3.
Adesanya, Damien e Malcolm (2012) analisaram as propriedades reológicas de
suspensões da microalga Scenedesmus obliquus, em diferentes concentrações volumétricas,
89
utilizando um reômetro rotacional do tipo Couette. Os autores concluíram que existe

interação entre as células algais em todas as concentrações analisadas, e que tal interação
desempenha importante papel, em termos de viscosidade. Ainda em relação a Figura 33,
observa-se que a condição experimental 9, que apresentou alta concentração celular e possui
CFC ajustado no nível 3 (2g.L-1), também foi a condição que apresentou os maiores valores
de viscosidade aparente, ao passo que a condição 1, que apresentou a menor concentração
de células e possui ausência de CFC no cultivo, também foi a condição que apresentou os
menores valores de viscosidade. Deste modo, comprova-se que os resultados corroboram
com os demais trabalhos mencionados.
4.6 ANÁLISES ESTATÍSTICAS
Após apresentar os resultados de cada análise com abordagem de alguns aspectos

pontuais pertinentes, torna-se necessário analisar cada aspecto do cultivo mais a fundo. Para
tal, foi efetuada a análise estatística da matriz experimental - baseada nos arranjos ortogonais
de Taguchi - e, deste modo, pôde-se elencar a significância ou relevância de cada fator
(concentração de chorume, concentração da fonte de carbono, vazão de aeração e frequência
de agitação), quando houve, a partir da ferramenta de análise de variância (ANOVA), nas
respostas. Para propor as melhores condições de ajuste, visando otimizar a resposta
pretendida ou o processo como um todo e diminuir a variabilidade, fez-se o cálculo dos
efeitos dos fatores sobre a variável resposta para a média e para a razão sinal-ruído. Para o
cálculo dos efeitos dos fatores, foram utilizados o Statistica 13.5 e o Minitab 19 e para a
ANOVA, foi utilizado o Excel 2016. O critério de avaliação da significância adotado, foi o
teste F e a tabela dos valores de Fcrítico estão no ANEXO A.
4.6.1 Crescimento celular dos cultivos
A análise estatística para avaliar o crescimento celular, foi feita considerando os

valores de concentração final que cada cultivo atingiu. A Tabela 16 contém a matriz
experimental e os resultados obtidos em termos de crescimento celular para cada condição
experimental.
90

cultivos de microalgas em diferentes condições experimentais.
Condição Fatores
Resposta Média S/N
Experimental CC CFC VA FA
1 1 1 1 1 122,91 124,40 123,66 41,84
2 1 2 2 2 245,03 241,10 243,06 47,71
3 1 3 3 3 335,44 330,10 332,77 50,44
4 2 1 2 3 153,83 156,70 155,27 43,82
5 2 2 3 1 211,37 214,40 212,88 46,56
6 2 3 1 2 198,06 202,20 200,13 46,02
7 3 1 3 2 88,08 88,67 88,37 38,93
8 3 2 1 3 268,90 272,30 270,60 48,65
9 3 3 2 1 306,48 308,80 307,64 49,76
Fonte: O autor.
A partir dos valores de resposta obtidos e dispostos na Tabela 16, foram calculados os
efeitos dos fatores tanto em relação a média, quanto em relação a razão sinal-ruído, visando
a maximização da concentração final (maior é melhor). Os gráficos das Figuras 34 e Figura
35 representam o resultado do melhor ajuste obtido de acordo com os valores dos efeitos
calculados.
Figura 34 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de concentração final
do cultivo.
Fonte: O autor.
91
concentração final do cultivo.
Fonte: O autor.
Ao analisar os gráficos dos efeitos, observa-se que, tanto para a maximização da

resposta em termos de concentração final, quanto para a redução de variabilidade do
processo, o fator CC deve ser ajustado no nível 1 (2,5%), CFC deve ser ajustado no nível 3
(2g.L-1), VA deve ser ajustado no nível 2 (0,10vvm) e FA deve ser ajustado no nível 3
(8rpm).
Buscando aprofundar e tornar a análise mais eficaz, a análise de variância (ANOVA)
foi realizada e o resultado para um α de 0,05 (95% de confiança) está apresentado na Tabela
17 em relação à média e na Tabela 18 em relação a razão sinal-ruído.
Tabela 17 - ANOVA para a média em termos de concentração final do cultivo.

Fonte de Variação SQ gl SMQ F
A 3107,41 2 1553,71 1,46
B 40668,70 2 20334,35 19,07
C 2133,03 2 1066,52 1,00
D 8593,72 2 4296,86 4,03
Erro 0 0 - -
Erro Ajustado 2133,03 2 1066,52 -
Nota: CC=Concentração de Chorume; CFC=Concentração da Fonte de Carbono;VA=Vazão de
Aeração e FA= Frequência de agitação; SQ=Soma dos Quadrados; gl=graus de
liberdade;SMQ=Soma da Média dos Quadrardos; F=Teste F.
Fonte: O autor.
92
Tabela 18 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de concentração final do cultivo.

A 2,32 2 1,16 1,00
B 90,57 2 45,29 39,06
C 5,77 2 2,89 2,49
D 17,52 2 8,76 7,56
Erro 0 0 - -
Erro Ajustado 2,32 2 1,16 -
Fonte: O autor.
A partir da análise da Tabela 17 da ANOVA para a média e para um valor de F crítico

tabelado de 19, tem-se que apenas o fatore CFC é significante e o fator FA é relevante
segundo o critério de Padke (F>2). Já ao analisar a Tabela 18 da ANOVA para a razão sinal-
ruído para o mesmo valor de F, tem-se que apenas o fator CFC é significante e os fatores
VA e FA são relevantes. Deste modo, o fator mais impactante na resposta em termos de
concentração final dos cultivos de microalga Chlorella minutissima em reator Raceway para
as condições do presente trabalho é o fator concentração da fonte de carbono (acetato), que
deve ser ajustado no nível 3 (2g.L-1) para maximizar a resposta e diminuir a variabilidade,
como já mencionado anteriormente. O fator FA, também, deve ser ajustado no nível 3 (8rpm)
de modo a maximizar a resposta e os fatores CC e VA, podem ser ajustados da maneira que
for mais conveniente, já que são os que menos impactam no valor da resposta. Assim, a
condições de cultivo 3 mantém-se como a melhor condição, comprovada pelos valores de
obtenção de concentração final, enquanto que as condições 1 e 7, com os ajustes do fator
CFC no nível 1, geram os menores valores da resposta. Em seus trabalhos, Mitra, Van
Leeuwen e Lamsal (2012) e Abedini Najafabadi et al. (2015), perceberam que a fonte de
carbono (acetato) tinha um efeito muito forte no aceleramento do crescimento de biomassa
de microalgas. Já Singh e Dhar (2011), constataram a importância da agitação em evitar a
sedimentação das células do culivo, mantendo-as em suspensão e, assim, proporcionando
uma exposição uniforme de luz em todas as células, aumentando a transferência de massa
para reduzir o gradiente de nutriente na cultura e na homogeinização do meio.
93
4.6.2 Biomassa total obtida
A Tabela 19 contém a matriz experimental e os resultados obtidos em termos de

biomassa total produzida no cultivo para cada condição experimental.

Condição Fatores Biomassa Obtida

Média S/N
Experimental CC CFC VA FA (g)
1 1 1 1 1 3,12 3,67 3,395 10,53

2 1 2 2 2 9,71 9,28 9,495 19,54
3 1 3 3 3 15,30 16,02 15,660 23,89
4 2 1 2 3 5,01 5,32 5,165 14,25
5 2 2 3 1 10,18 11,08 10,630 20,51
6 2 3 1 2 12,07 12,73 12,400 21,86
7 3 1 3 2 6,33 6,98 6,655 16,43
8 3 2 1 3 14,99 14,72 14,855 23,44
9 3 3 2 1 16,51 16,28 16,395 24,29
Aeração e FA= Frequência de agitação.
Fonte: O autor.
a maximização da obtenção de biomassa total (maior é melhor). Os gráficos das Figuras 36
e Figura 37 representam o resultado do melhor ajuste obtido de acordo com os valores dos
efeitos calculados.
94
Figura 36 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de obtenção de biomassa
total.
Fonte: O autor.
de biomassa total.
Fonte: O autor.
Ao analisar os gráficos dos efeitos, observa-se que, tanto para a maximização da

resposta em termos de obtenção de biomassa total, quanto para a redução de variabilidade
do processo, todos os fatores devem ser ajustados no nível 3.
95
Buscando aprofundar e tornar a análise mais eficaz, a análise de variância (ANOVA)

foi realizada e o resultado para um α de 0,05 (95% de confiança) está apresentado na Tabela
20 em relação à média e na Tabela 21 em relação a razão sinal-ruído.
Tabela 20 - ANOVA para a média em termos de obtenção de biomassa total.
Fonte de Variação (Fatores) SQ gl SMQ F

CC 20,21 2 10,11 20,21
CFC 148,38 2 74,19 148,33
VA 1,00 2 0,50 1,00
FA 9,11 2 4,56 9,11
Erro 0 0 - -
Fonte: O autor.
Tabela 21 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de obtenção de biomassa total.

CC 18,66 2 9,33 4,46
CFC 152,25 2 76,12 36,41
VA 4,18 2 2,09 1,00
FA 6,58 2 3,29 1,57
Erro 0 0 - -
Fonte: O autor.

tabelado de 19, tem-se que os fatores CFC e CC são significantes e o fator FA é relevante
segundo o critério de Padke (F>2). Já ao analisar a Tabela 21 da ANOVA para a razão sinal-
ruído para o mesmo valor de F, tem-se que apenas o fator CFC é significante e o fator CC é
relevante. Deste modo, o fator mais impactante na resposta em termos de biomassa total dos
cultivos de microalga Chlorella minutissima em reator Raceway para as condições do
presente trabalho é o fator concentração da fonte de carbono (acetato), que deve ser ajustado
no nível 3 (2g.L-1) para maximizar a resposta e diminuir a variabilidade, como já mencionado
anteriormente. O fator CC, também, deve ser ajustado no nível 3 (7,5%) de modo a
96
maximizar a resposta e os fatores VA e FA, podem ser ajustados da maneira que for mais
conveniente, já que são os que menos impactam no valor da resposta. Assim, as condições
de cultivo 3, 6, 8 e 9 mantém-se como as melhores condições, comprovadas pelos valores
de obtenção de biomassa total, enquanto que as condições 1, 4 e 7, com os ajustes do fator
CFC no nível 1, geram os menores valores da resposta. Os resultados estão de acordo com
diversos autores. O uso da fonte de carbono promovendo um cultivo mixotrópico já se
mostrou bastante eficaz no aumento da concentração de células microalgais e em melhores
rendimentos, em termos de obteção de biomassa, se comparado ao cultivo fotoautotrófico.
Já em relação ao chorume, sabe-se que o lixiviado apresenta boa parte dos nutrientes
necessários para a célula de microalga se desenvolver, sobretudo nitrato e fosfato. Apesar da
toxicidade, por apresentar metais pesados em sua composição, quando utilizado em
concentrações ótimas ou combinado com altas concentrações de acetatos ao formarem o
meio de cultivo, os resultados são os melhores possíveis.
4.6.3 Produtividade de biomassa
A matriz experimental e os resultados obtidos em termos de produtividade de biomassa

para cada condição experimental está disposto na Tabela 22.
Tabela 22 - Matriz ortogonal da resposta em termos de produtividade de biomassa dos

Condição Fatores Produtividade de
Média S/N
Experimental CC CFC VA FA Biomassa (mg.L-1.dia-1)
1 1 1 1 1 20,80 24,47 22,63 27,01
2 1 2 2 2 64,73 61,87 63,30 36,02
3 1 3 3 3 102,00 106,80 104,40 40,37
E4 2 1 2 3 33,40 35,47 34,43 30,73
5 2 2 3 1 67,87 73,87 70,87 36,99
6 2 3 1 2 80,47 84,87 82,67 38,34
7 3 1 3 2 42,20 46,53 44,37 32,91
8 3 2 1 3 99,93 98,13 99,03 39,91
9 3 3 2 1 110,07 108,53 109,30 40,77
Fonte: O autor.
97
a maximização da produtividade de biomassa (maior é melhor). Os gráficos das Figuras 38

e Figura 39 representam o resultado do melhor ajuste obtido de acordo com os valores dos
efeitos calculados.
Figura 38 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de produtividade de
biomassa.
Fonte: O autor.
produtividade de biomassa.
Fonte: O autor.
Analisando os resultados em relação a média percebe-se que para maximizar a

produtividade em biomassa deve-se ajustar todos os fatores no nível 3. Porém, pode-se
98
observar que o fator CC e o fator FA, se ajustados no nível 2, fornece os piores resultados
em termos de produtividade de biomassa, até menores do que se ajustados no nível baixo,
principalmente para FA. Isto não era tão visível no gráfico dos efeitos para a biomassa total,
apesar de, também, apresentar esse fato.
Também, para a razão sinal-ruído, tem-se que o melhor ajuste é para todos os fatores
ajustados no nível 3.
Dando continuidade a análise, foi feita a ANOVA, que está representada pela Tabela
23 para a média e pela Tabela 24 para a razão sinal-ruído.
Tabela 23 - ANOVA para a média em termos de produtividade de biomassa.

CC 898,40 2 449,20 20,21
CFC 6594,61 2 3297,30 148,33
VA 44,46 2 22,23 1,00
FA 404,95 2 202,47 9,11
Erro 0,00 0 - -
Fonte: O autor.
Tabela 24 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de produtividade de biomassa.

CC 18,66 2 9,33 4,46
CFC 152,25 2 76,12 36,41
VA 4,18 2 2,09 1,00
FA 6,58 2 3,29 1,57
Erro 0 0 - -
Fonte: O autor.

tabelado de 19, tem-se que os fatores CFC e CC são significantes e o fator FA é relevante.
Já ao analisar a Tabela 24 da ANOVA para a razão sinal-ruído e para o mesmo valor de F,
99
tem-se que apenas o fator CFC é significante e o fator CC é relevante. Deste modo, o fator
mais impactante na resposta em termos de produtividade de biomassa dos cultivos de
microalga Chlorella minutissima em reator Raceway para as condições do presente trabalho
é o fator concentração da fonte de carbono (acetato), que deve ser ajutado no nível 3 (2g.L-
1
) para maximizar a resposta e diminuir a variabilidade, como já mencionado anteriormente.
O fator CC, também, deve ser ajustado no nível 3 (7,5%) de modo a maximizar a resposta e
os fatores VA e FA, podem ser ajustados da maneira que for mais conveniente, já que são
os que menos impactam no valor da resposta. Assim, as condições de cultivo 3, 6, 8 e 9
mantém-se como as melhores condições, comprovadas pelos valores de obtenção de
produtividade de biomassa, enquanto que as condições 1, 4 e 7, com os ajustes do fator CFC
no nível 1, geram os menores valores da resposta.
4.6.4 Teor de lipídeos
A matriz experimental e os resultados obtidos em termos de teor de lipídeos para cada

condição experimental está disposto na Tabela 25.
Tabela 25 - Matriz ortogonal da resposta em termos de teor de lipídeos dos cultivos de

microalgas em diferentes condições experimentais.
Condições Fatores
Teo de Lipídeos (%) Média S/N
de Cultivo CC CFC VA FA
1 1 1 1 1 2,88 2,75 2,815 8,98
2 1 2 2 2 3,12 2,88 2,999 9,52
3 1 3 3 3 5,12 4,94 5,034 14,03
4 2 1 2 3 4,32 4,18 4,248 12,56
5 2 2 3 1 4,34 4,44 4,387 12,84
6 2 3 1 2 5,20 5,44 5,321 14,51
7 3 1 3 2 4,51 4,76 4,634 13,31
8 3 2 1 3 5,91 5,77 5,839 15,32
9 3 3 2 1 7,48 7,36 7,420 17,41
Fonte: O autor.
a maximização da resposta teor de lipídeos (maior é melhor). Os gráficos das Figuras 40 e
100
Figura 41 representam o resultado do melhor ajuste obtido de acordo com os valores dos
efeitos calculados.
Figura 40 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de teor de lipídeos.
Fonte: O autor.
Figura 41 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de teor de
lipídeos.
Fonte: O autor.
101
Analisando os resultados, tanto em relação a média, quanto para a razão sinal-ruído,

percebe-se que para maximizar o teor de lipídeos deve-se ajustar todos os fatores no nível 3.
Porém, o ajuste de nível para a VA não influencia consideravelmente na resposta, uma vez
que todos os pontos de nível ficam dentro de um mesmo intervalo.
Dando continuidade a análise, foi feita a ANOVA, que está representada pela Tabela
26 para a média e pela Tabela 27 para a razão sinal-ruído.
Tabela 26 - ANOVA para a média em termos de teor de lipídeos.

CC 8,31 2 4,15 86,84
CFC 6,66 2 3,33 69,64
VA 0,10 2 0,05 1,00
FA 0,86 2 0,43 8,98
Erro 0 0 - -
Fonte: O autor.
Tabela 27 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de teor de lipídeos.
Tabela ANOVA
CC 30,49 2 15,25 98,41
CFC 22,18 2 11,09 71,60
VA 0,31 2 0,15 1,00
FA 3,53 2 1,77 11,39
Erro 0 0 - -
Fonte: O autor.

tabelado de 19, tem-se que os fatores CC e CFC são significantes e o fator FA é relevante.
Essa conclusão se repete ao analisar a Tabela 27 da ANOVA para a razão sinal-ruído e para
o mesmo valor de F. Deste modo, o fator mais impactante na resposta em termos de teor de
lipídeos dos cultivos de microalga Chlorella minutissima em reator Raceway para as
condições do presente trabalho é o fator concentração de chorume, que deve ser ajutado no
102
nível 3 (7,5%) para maximizar a resposta e diminuir a variabilidade. O fator CFC, também,
deve ser ajustado no nível 3 (2g.L-1) de modo a maximizar a resposta e os fatores VA e FA,
podem ser ajustados da maneira que for mais conveniente, já que são os que menos impactam
no valor da resposta. Assim, as condições de cultivo 6, 8 e 9 mantém-se como as melhores
condições, comprovadas pelos valores de obtenção de teor de lipídeos, enquanto que as
condições 1, 2 e 4, com os ajustes do fator CC e CFC nos nível 1 (2,5%) e 2 (1g.L-1), geram
os menores valores da resposta.
Segundo Huang et al. (2010), as microalgas sintetizam lipídeos a partir das fontes de
carbono, sejam elas orgânicas (acetato, glicerina) ou inorgânicos (CO2). Com relação ao
efeito da concentração do CO2 na corrente de aeração, Antonio (2014) afirma que o fato do
CO2 estar presente no ar atmosférico em baixa concentração, pode limitar o crescimento
rápido, uma vez que o carbono corresponde à cerca de 45% da biomassa das microalgas. O
autor, ao avaliar o efeito da concentração do CO2 na produção lipídica de Cholrella vulgaris,
constatou que, para que elevadas taxas de crescimento possam ser alcançadas, esse carbono
geralmente necessita ser suplementado. No entanto, a influência do teor de CO2 na corrente
gasosa vai depender fortemente da espécie microalgal, tanto no que diz respeito à
produtividade em biomassa quanto ao teor de lipídeos e à composição em ácidos graxos
(CHIU et al, 2015). Abedini Najafabadi et al. (2015), avaliaram o efeito do uso de diversos
tipos de fontes de carbono (orgânicas e inorgânicas) na produção celular, acúmulo de
lipídeos e produção de ácidos graxos da microalga Chlorella vulgaris. Dentre as fontes de
carbono testadas, o uso de acetato de sódio, em um cultivo com baixa concentração de
nitrato, foi o que apresentou o maior teor de lipídeos.
Os resultados obtidos são coerentes já que os cultivos com ajuste de CFC no nível 3
(2g.L-1), obtiveram os melhores resultados. As concentrações de nitrato no chorume são
extremamente baixas, o que explica o fato da análise estatística caminhar para um resultado
no qual CC deve ser ajustado em nível 3 (7,5%), o que vai de encontro com a literatura, já
que estudos indicam que os melhores rendimentos em lipídeos são em condições com baixa
concentração de nitrato e alta concentração de acetato. Brito (2014), encontrou valores de
concentração de nitrato próximos a 2,1mg.L-1 em estudo de caracterização do chorume
proveniente do aterro sanitário do município de Cachoeira Paulista (o mesmo utilizado neste
estudo). O resultado completo da caracterização, encontra-se no ANEXO B.
Landazábal et al. (2013), em estudo utilizando a microalga Chlorella vulgaris,
obtiveram os maiores rendimentos em lipídeos na concentração de 10mM (milimol) de
103
acetato de sódio e 1,47mM de nitrato de sódio em cultivos realizados em reator Air-lift, com
volume de 2L e alimentação de aeração de 2L.min-1 . Ainda, no mesmo estudo, ao analisar
os resultados tem-se fortes indícios de que possa haver uma possível interação entre os
fatores CC e CFC, já que apesar de os dois serem favoráveis ao cultivo, eles influenciam as
produções de biomassa e lipídeos hora para bom hora para ruim, dependendo da proporção
em que são combinados. O resultado obtido nesse estudo, está disponível no ANEXO C.
4.6.5 Produtividade média de lipídeos
A matriz experimental e os resultados obtidos em termos de produtividade média de

lipídeos para cada condição experimental está disposto na Tabela 28.
Tabela 28 - Matriz ortogonal da resposta em termos de produtividade de lipídeos dos cultivos

de microalgas em diferentes condições experimentais.
Condições Fatores Produtividade Média de

Média S/N
de Cultivo CC CFC VA FA Lipídeos (mg.L-1.dia-1)
1 1 1 1 1 0,5986 0,6734 0,636 3,98
2 1 2 2 2 2,0199 1,7799 1,900 5,52
3 1 3 3 3 5,2261 5,2800 5,253 14,41
4 2 1 2 3 1,4430 1,4811 1,462 3,30
5 2 2 3 1 2,9438 3,2764 3,110 9,82
6 2 3 1 2 4,1828 4,6199 4,401 12,84
7 3 1 3 2 1,9028 2,2141 2,058 6,20
8 3 2 1 3 5,9069 5,6589 5,783 15,24
9 3 3 2 1 8,2330 7,9881 8,111 18,18
Fonte: O autor.
a maximização da produtividade média de lipídeos (maior é melhor). Os gráficos das Figuras
42 e Figura 43 representam o resultado do melhor ajuste obtido de acordo com os valores
dos efeitos calculados.
104
Figura 42 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de produtividade média
de lipídeos.
Fonte: O autor
produtividade média de lipídeos.
Fonte: O autor.
105
Analisando os resultados, tanto em relação a média, quanto para a razão sinal-ruído,

percebe-se que para maximizar a produtividade média de lipídeos deve-se ajustar todos os
fatores no nível 3. Dando continuidade a análise, foi feita a ANOVA, que está representada
pela Tabela 29 para a média e pela Tabela 30 para a razão sinal-ruído.
Tabela 29 - ANOVA para a média em termos de produtividade média de lipídeos.

CC 1297,06 2 648,53 69,13
CFC 3087,10 2 1543,55 164,54
VA 18,76 2 9,38 1,00
FA 330,73 2 165,36 17,63
Erro 0 0 - -
Fonte: O autor.
Tabela 30 - ANOVA para a razão sinal ruído em termos de produtividade média de lipídeos.

CC 94,02 2 47,01 14,08
CFC 271,24 2 135,62 40,62
VA 6,68 2 3,34 1,00
FA 16,69 2 8,34 2,50
Erro 0 0 - -
Fonte: O autor.

tabelado de 19, tem-se que os fatores CFC e CC são significantes e o fator FA é relevante.
Já ao analisar a Tabela 30 da ANOVA para a razão sinal-ruído e para o mesmo valor de F
crítico, percebe-se que apenas o fator CFC é significante, enquanto que os fatores CC e FA
são relevantes, porém com o valor de F calculado para CC bem maior do que o de FA. Deste
modo, o fator mais impactante na resposta em termos de produtividade média de lipídeos
dos cultivos de microalga Chlorella minutissima em reator Raceway para as condições do
presente trabalho é o fator concentração da fonte de carbono, que deve ser ajustado no nível
106
3 (2g.L-1) para maximizar a resposta e diminuir a variabilidade. O fator CC, também, deve
ser ajustado no nível 3 (7.5%) de modo a maximizar a resposta e os fatores VA e FA, podem
ser ajustados da maneira que for mais conveniente, já que são os que menos impactam no
valor da resposta. Lembrando que para os cálculos médios de produtividade, foram
considerados os valores obtidos de biomassa total para a extração, logo o fator mais
impactante na resposta para biomassa - o CFC- , também, será importante para a resposta
em produtividade, já que quanto mais biomassa o cultivo gerar, mais lipídeo poderá ser
extraído. Deste modo, o ajuste no nível alto da CFC é imprenscindícel para este caso.
Assim, as condições de cultivo 3, 8 e 9 são as melhores condições, comprovadas pelos
valores de obtenção de produtividade média de lipídeos, enquanto que as condições 1, 2 e 4,
com os ajustes do fator CC e CFC nos nível baixo e médio, geram os menores valores da
resposta.
4.6.6 Demanda química de oxigênio
A matriz experimental e os resultados obtidos em termos de redução da DQO para

cada condição experimental está disposto na Tabela 31.
Tabela 31 - Matriz ortogonal da resposta em termos de redução de DQO dos cultivos de

microalgas em diferentes condições experimentais.
Condições Fatores Redução de DQO

Média S/N
Experimentais CC CFC VA FA (%)
1 1 1 1 1 6,80 6,56 6,679 16,49
2 1 2 2 2 17,68 17,22 17,452 24,83
3 1 3 3 3 19,28 19,00 19,137 25,64
4 2 1 2 3 16,11 17,05 16,576 24,38
5 2 2 3 1 9,70 8,92 9,310 19,36
6 2 3 1 2 21,47 21,20 21,333 26,58
7 3 1 3 2 3,27 3,82 3,547 10,92
8 3 2 1 3 28,53 28,93 28,729 29,17
9 3 3 2 1 12,19 12,87 12,533 21,95
Fonte: O autor.
107
a maximização da redução de DQO (maior é melhor). Os gráficos das Figuras 44 e Figura

45 representam o resultado do melhor ajuste obtido de acordo com os valores dos efeitos
calculados.
Fonte: O autor.
Fonte: O autor.
108
Analisando os resultados em relação a média, percebe-se que para maximizar a

redução de DQO deve-se ajustar os fatores CC e CFC no nível 2 (5,0% e 1g.L-1), VA no
nível 1 (0,05vvm) e FA no nível 3 (8rpm). Para a razão sinal-ruído, tem-se que o melhor
ajuste é para CC ajustado no nível 2 (5,0%), CFC no nível 3 (2g.L-1), VA no nível 1
(0,05vvm) e FA no nível 3 (8rpm). Dando sequência a análise, foi feita a ANOVA, que está
representada pela Tabela 32 para a média e pela Tabela 33 para a razão sinal-ruído.
Tabela 32 - ANOVA para a média em termos de redução de DQO.

CC 2,64 2 1,32 1,00
CFC 168,42 2 84,21 63,73
VA 103,13 2 51,56 39,03
FA 218,87 2 109,43 82,82
Erro 0 0 - -
Fonte: O autor.
Tabela 33 - ANOVA para a razão sinal-ruído em termos de redução de DQO.

CC 11,56 2 5,78 1,00
CFC 107,42 2 53,71 9,29
VA 55,58 2 27,79 4,81
FA 84,63 2 42,31 7,32
Erro 0 0 - -
Erro Ajustado 11,56 2 5,78 1,00
Fonte: O autor.

tabelado de 19, tem-se que os fatores FA e CFC e VA são significantes. Já ao analisar a
Tabela 33 da ANOVA para a razão sinal-ruído e para o mesmo valor de F crítico, percebe-
se que nenhum fator é significante, enquanto que os fatores CFC, FA e VA são relevantes.
109
Deste modo, o fator mais impactante na resposta em termos de produtividade média de

lipídeos dos cultivos de microalga Chlorella minutissima em reator Raceway para as
condições do presente trabalho é o fator frequência de agitação, que deve ser ajustado no
nível 3 (8rpm) para maximizar a resposta e diminuir a variabilidade. Os fatores CFC e VA,
também, são significantes e devem ser ajustado de maneira a maximizar a resposta, no qual
o CFC deve ser ajustado no nível 3 (2 g.L-1g.L-1) e VA no nível 1 (0,05vvm), o fator CC,
pode ser ajustado da maneira que for mais conveniente, já que não tem impacto significativo
no valor da resposta. Porém, vale ressaltar que a quantidade de chorume adicionada ao
cultivo é determinante para a concentração de DQO inicial.
Assim, as condições de cultivo 3, 6 e 8 são as melhores condições, comprovadas pelos
valores de obtenção de redução de DQO, com ajustes de VA no nível 3 e presença de fonte
de carbono. Enquanto que as condições 1 e 7, com os ajustes do fator CFC no nível 1 e do
fator VA nos níveis 1 e 2, geram os menores valores da resposta.
4.6.7 Reologia
Os parâmetros reológicos considerados para a análise estatística, foram: o índice de

consistência (k), o índice de comportamento (n) e a tensão limite de escoamento (0), todos
fatores presentes na equação do modelo matemático, que melhor se ajustou a reologia de
suspensão microalgal, Herschel-Bulkley. Deste modo, pôde-se verificar a influência das
diferentes condições experimentais nos parâmetros reológicos e propor o melhor ajuste para
cada caso.
4.6.7.1 Índice de consistência
Como já mencionado, o índice de consistência (k) demonstra quão resistente ao

escoamento o fluido é. Deste modo, buscando diminuir a perda de carga, a análise deste
parâmetro foi feita visando a minimização do valor de k (menor é melhor). Os gráficos de
melhor ajuste estão representados na Figura 46 para a média e na Figura 47 para a razão
sinal-ruído.
110
Figura 46 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de redução de índice de
consistência.
Fonte: O autor.
Figura 47 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de redução
de índice de consistência.
Fonte: O autor.
111
De acordo com a análise dos gráficos, o melhor ajuste dos fatores para a minimização
da resposta índice de consistência é: CC no nível 3 (7,5%), CFC no nível 3 (2g.L-1), VA no
nível 2 (0,10vvm) e FA no nível 1 (4rpm), tanto para a média quanto para a razão sinal-
ruído. Fato este que é comprovado com a condição experimental 9, que fornece o menor
valor da resposta, sendo de 0,0555. Também, pode-se observar no gráfico que o fator que
mais impacta na resposta é o fator CC.
4.6.7.2 Índice de comportamento (n)
Para a análise estatística do índice de comportamento, buscou-se encontrar a condição

no qual o valor da resposta mais se aproximasse de 1, pois quando n=1 o modelo de Herschel-
Bulkley é reduzido e o fluido é caracterizado como fluido newtoniano. Desta forma, a análise
foi conduzida de forma a minimizar a resposta (menor é melhor). Os gráficos de melhor
ajuste estão representados na Figura 48 para a média e na Figura 49 para a razão sinal-ruído.
Figura 48 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de índice de
comportamento.
Fonte: O autor.
112
Figura 49 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de índice de
comportamento.
Fonte: O autor.
da resposta índice de comportamento é: CC no nível 2 (5,0%), CFC no nível 2 (1g.L-1), VA
no nível 1 (0,05vvm) e FA no nível 2 (6rpm), tanto para a média quanto para a razão sinal-
ruído. Nenhuma condição experimental da matriz atende esse ajuste, porém a condição 6
com CC ajustado no nível 2, VA no nível 1 e FA no nível 2, apresenta o menor valor da
resposta, sendo de 1,604. Também, pode-se observar no gráfico que o fator que mais impacta
na resposta é o fator VA.
4.6.7.3 Tensão limite de escoamento
Analogamente a análise estatística do índice de comportamento, o objetivo foi

minimizar a resposta (menor é melhor), em termos de tensão limite de escoamento, para que,
deste modo, o modelo de Herschel-Bulkley fosse reduzido e o fluido é caracterizado como
fluido newtoniano. Para tal, buscou-se encontrar a condição no qual o valor da resposta mais
se aproximasse de 0. Os gráficos de melhor ajuste estão representados na Figura 50 para a
média e na Figura 51 para a razão sinal-ruído.
113
Figura 50 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a média em termos de tensão limite de
escoamento.
Fonte: O autor.
Figura 51 - Gráfico dos efeitos dos fatores sobre a razão sinal-ruído em termos de tensão
limite de escoamento.
Fonte: O autor.
114
da resposta tensão limite de escoamento é: CC no nível 2 (5,0%), CFC no nível 1 (0g.L-1),
VA no nível 1 (0,05vvm) e FA no nível 2 (6rpm) ou 3 (8rpm), tanto para a média quanto
para a razão sinal-ruído. Nenhuma condição experimental da matriz atende esse ajuste,
porém a condição 6 com CC ajustado no nível 2, VA no nível 1 e FA no nível 2, apresenta
o menor valor da resposta, sendo de 0,726. Também, pode-se observar no gráfico que o fator
que mais impacta na resposta é o fator VA.
115
5 CONCLUSÕES
De acordo com os resultados apresentados:

 a concentração da fonte de fonte de carbono (acetato) adicionada ao cultivo, é o fator
que influencia na maior quantidade das respostas analisadas para o cultivo da microalga
Chlorella minutissima, nas condições apresentadas, sendo elas: crescimento celular dos
cultivos, biomassa total obtida, produtividade de biomassa e produtividade média de
lipídeos, no qual é o fator mais significante, teor de lipídeos e demanda química de oxigênio;
 o chorume apesar de conter metais pesados e apresentar uma certa toxidade, colabora
muito com o crescimento do cultivo microalgal, nas condições com com CFC ajustado em
nível 3. Porém, quando há alta concentração de chorume e baixa concentração de acetato, o
cultivo é prejudicado;
 apesar da VA não ter demonstrado significância para a maioria das resposta, é o fator
que mais impacta em termos de parâmetros reológicos, visando o comportamento de fluido
newtoniano.
 Os cultivos com concentração acima de 0,25g,L-1, foram os que tiveram maiores
taxas de redução de DQO;
 exceto para a DQO, a frequência de agitação é não-significante para todas as outras
respostas. Além disso, altas velocidades de agitação do cultivo demonstrou causar tensão de
cisalhamento nas partículas;
 em termos de reologia, pôde ser observado comportamento de fluido dilatante para
a suspensão de microalgas, em todas as condições de cultivo;
116
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131
ANEXOS
ANEXO A - Valores tabelados de Fcrítico para teste bilateral com α=0,05.

132
ANEXO B - Caracterização do chorume proveniente do aterro sanitário do município

de Cachoeira Paulista.
Fonte: Brito, (2014).

133
ANEXO C - Comparação entre os valores de obtenção de biomassa e lipídeos cultivado

em diferentes concentrações de nitrato de sódio e acetato de sódio.
Fonte: Landazábal, (2013).

134
APÊNDICES
APÊNDICE A - Caracterização metálica do chorume utilizado nos cultivos.
Chorume Resultados em mg.L-1

como meio do
Cultivo Al P Si Se Cr Mg Na K Zn Ti Fe Ca Sn
C1 0,16 13,16 2,30 0,14 0,88 51,20 4263,50 2074,25 0,35 0,00 5,95 31,78 0,32
C2 0,40 12,85 0,30 0,14 0,90 49,85 3881,00 2074,50 0,51 0,00 7,48 28,98 0,26
C3 0,00 12,62 0,00 0,07 0,00 55,55 2958,50 1216,50 0,00 0,00 3,57 9,08 0,05
C4 0,19 8,77 0,00 0,09 0,21 48,48 3233,50 2029,50 0,94 0,00 5,96 30,55 1,14
C5 0,00 13,59 0,00 0,07 0,00 69,70 2263,50 1088,25 0,14 0,00 4,13 9,22 0,00
C6 0,63 7,48 2,34 0,10 0,22 47,06 3316,00 2095,00 1,14 0,00 7,94 27,34 1,14
C7 0,38 11,65 1,64 0,14 0,96 50,95 4561,00 2309,25 0,70 0,00 7,27 35,61 0,38
C8 0,68 13,55 1,81 0,13 0,98 53,85 4303,50 2097,75 0,25 0,00 8,49 28,88 0,20
C9 0,00 9,81 0,00 0,14 0,83 48,59 4203,50 2101,00 0,42 0,00 6,36 30,33 0,43
CHORUME
4,53 14,13 3,27 0,17 2,30 56,86 4005,50 2084,50 1,20 0,80 6,16 36,76 1,14
NATURA
APÊNDICE B - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 1.
1°Dia Último Dia
APÊNDICE C - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 2.
1°Dia Último Dia

135
APÊNDICE D - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 3.
1°Dia Último Dia
APÊNDICE E - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 4.
1°Dia Último Dia
APÊNDICE F - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 5.
1°Dia Último Dia

136
APÊNDICE G - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 6.
1°Dia Último Dia
APÊNDICE H - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 7.
1°Dia Último Dia
APÊNDICE I - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 8.
1°Dia Último Dia

Último Dia
137
APÊNDICE J - Fotografia do primeiro e último dia de cultivo para a Condição 9.
1°Dia Último Dia
APÊNDICE K - Resultado da análise diária de precipitação da biomassa.
Resultado em g
Dias
C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9
1 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100
2 0,0154 0,0154 0,0154 0,0154 0,0154 0,0154 0,0154 0,0154 0,0154
3 0,0126 0,0126 0,0126 0,0126 0,0126 0,0126 0,0126 0,0126 0,0126
4 0,0111 0,0111 0,0111 0,0111 0,0111 0,0111 0,0111 0,0111 0,0111
5 0,0124 0,0124 0,0124 0,0124 0,0124 0,0124 0,0124 0,0124 0,0124
6 0,0078 0,0078 0,0078 0,0078 0,0078 0,0078 0,0078 0,0078 0,0078
7 0,0178 0,0178 0,0178 0,0178 0,0178 0,0178 0,0178 0,0178 0,0178
8 0,0136 0,0136 0,0136 0,0136 0,0136 0,0136 0,0136 0,0136 0,0136
9 0,0081 0,0081 0,0081 0,0081 0,0081 0,0081 0,0081 0,0081 0,0081
10 0,0074 0,0074 0,0074 0,0074 0,0074 0,0074 0,0074 0,0074 0,0074
11 0,0107 0,0107 0,0107 0,0107 0,0107 0,0107 0,0107 0,0107 0,0107
12 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100 0,0100
13 0,0121 0,0121 0,0121 0,0121 0,0121 0,0121 0,0121 0,0121 0,0121
14 0,0104 0,0104 0,0104 0,0104 0,0104 0,0104 0,0104 0,0104 0,0104
15 0,0122 0,0122 0,0122 0,0122 0,0122 0,0122 0,0122 0,0122 0,0122
138
APÊNDICE L - Curva de calibração para obtenção da concentração da Demanda

Química de Oxigênio (DQO).
0,000 0,000
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
-0,200 -0,184
-0,268
-0,369
-0,400
-0,516
-0,600
-0,654
-0,800
-0,901
-1,000 -1,019
y = -0,1431x + 0,1552
-1,200 R² = 0,9845
Concentração O2
APÊNDICE M - Curva de calibração para a obtenção da concentração da suspensão

microalgal do cultivo.
y = 0,3914x - 0,1178
R² = 0,9257
0,50
0,45
0,40 0,442
Concentração (g/L)
0,35
0,30
0,310
0,25
0,275
0,20
0,15 0,198
0,183
0,10 0,148
0,05 0,098
0,00
0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40

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UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

ESCOLA DE ENGENHARIA DE LORENA

ALEXANDRE DE MORAES RICARDI

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Aos meus irmãos, Amanda e Henrique, pela parceria e companheirismo.

Ao meu avô, Ademar, por todo apoio e carinho.

À Ana Beatriz, pela paciência, tranquilidade e disposição em me ajudar, pelas

À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) pela

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2.3 CULTIVO DE MICROALGAS

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