PI-IM1841–05

CORTISOL RIA KIT

IM1841
TABLE OF CONTENTS Čeština (CZ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
English . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 Slovenčina (SK) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
Français (FR) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 한국어 (KO) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
Deutsch (DE) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 Türkçe (TR) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Italiano (IT) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 Русский (RU) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
Español (ES) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 中文 (ZH-TW) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50
Português Portugal (PT-PT) . . . . . . . . . . . . . . . 17 Србија (SR) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53
Svenska (SV) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20 Português Brasil (PT-BR) . . . . . . . . . . . . . . . . 56
Ελληνικά (EL) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 APPENDIX . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
Lietuviškai (LT) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
Magyar (HU) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
Polski (PL) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32

IMMUNOTECH s.r.o., Radiova 1, 102 27 Prague 10, 捷克共和國

Beckman Coulter do Brasil Com. e Imp. de Prod. de Lab. Ltda
Alameda Rio Negro, 500, 15 andar, Torre B Alphaville Industrial
CEP 06.454-00 Barueri, São Paulo, Brasil
CNPJ: 42.160.812/0001-44 Telefone: 0800-771-8818
ООО «Бекмен Культер», 109004 Москва, Россия, ул. Станиславского, д. 21, стр. 3.
Тел. +7 (495) 228 67 00, e-mail: beckman.ru@beckman.com

IMMUNOTECH s.r.o., Radiova 1, 102 27 Prague 10, Czech Republic

© 2020 Beckman Coulter, Inc. All rights reserved.

CORTISOL RIA KIT Safety Data Sheet is available at techdocs.beckmancoulter.com
IM1841
RADIOIMMUNOASSAY FOR THE IN VITRO
SPECIMEN COLLECTION, PROCESSING,
DETERMINATION OF CORTISOL IN HUMAN SERUM, STORAGE AND DILUTION
Serum and plasma samples
PLASMA AND URINE
For in vitro diagnostic use. • Collect blood in tubes either not containing any additive or containing
EDTA.
PRINCIPLE • Separate serum or plasma from cells by centrifugation.
The radioimmunoassay of cortisol is a competition assay. The same kit may
• Serum and plasma samples may be stored at 2-8°C, if the assay is
be employed for the measurement of cortisol:
. to be performed within 24 hours. For longer storage keep frozen (<
● either directly in serum, plasma or urine -20°C, 3 months maximum) after aliquoting so as to avoid repeated
● or after the extraction of the urine with dichloromethane and evaporation of freezing and thawing. Thawing of sample should be performed at room
the solvent, followed by resuspension in zero calibrator. temperature.
Serum, plasma or urine samples, urine extracts, the control and calibrators • If samples have concentrations greater than the highest calibrator,
are incubated in monoclonal antibody-coated tubes with 125I-labeled cortisol they must be diluted in the zero calibrator.
tracer. After incubation, the liquid contents of the tubes are aspirated and Urine samples
bound radioactivity is measured. A calibration curve is established and
unknown values are determined by interpolation from the standard curve. • Collect 24-hour urine in flask.
• Determine volume.
WARNING AND PRECAUTIONS
General remarks • If necessary, store aliquoted at < -20°C, 1 week maximum. Thawing
of sample should be performed at room temperature.
• The vials with calibrators and controls should be opened as shortly as
possible to avoid excessive evaporation. • If samples have concentrations greater than the highest calibrator,
they must be diluted in distilled water.
• Do not mix the reagents from kits of different lots.
• A standard curve must be included with each assay. MATERIALS PROVIDED
All reagents of the kit are stable until the expiry date indicated on the kit label,
• It is recommended to perform the assay in duplicate. if stored at 2-8°C. Expiry dates printed on vial labels apply to the long-term
• Each tube must be used only once. storage of components by the manufacturer only, prior to assembly of the kit.
Do not take into account.
Protection against ionizing radiation
Anti-cortisol monoclonal antibody-coated tubes: 2 x 50 tubes
The purchase, possession, utilization, and transfer of radioactive material is (ready-to-use)
subject to the regulations of the country of use. Adherence to the basic rules 125
of radiation safety should provide adequate protection. I-labeled cortisol tracer: one 55 mL vial (ready-to-use)
• No eating, drinking, smoking or application of cosmetics should be The vial contains 185 kBq, at the date of manufacture, of 125I-labeled cortisol
carried out in the presence of radioactive materials. in buffer containing bovine serum albumin, sodium azide (<0.1%) and a dye.
• No pipeting of radioactive solutions by mouth. Calibrators: 5 vials with 0.5 mL and 1 vial with 5 mL of «zero» calibrator
(ready-to-use)
• Avoid all contact with radioactive materials by using gloves and
laboratory overalls. The calibrator vials contain from 0 to approximately 2,000 nM of cortisol in
buffer with bovine serum albumin and sodium azide (<0.1%). The exact
• All manipulation of radioactive substances should be done in an concentration is indicated on each vial label. The calibrators were calibrated
appropriate place, distant from corridors and other busy places. against the reference preparation ERM-DA192 and 193.
• Radioactive materials should be stored in the container provided in a The zero calibrator may be ordered separately, too (cat. #IM1959 - 10 mL,
designated area. IM3444 - 250 mL).
• A record of receipt and storage of all radioactive products should be Note: Occasional presence of turbidity in the zero calibrator does not affect
kept up to date. assay performance.
• Laboratory equipment and glassware which are subject to Control sample: one 0.5 mL vial (ready-to-use)
contamination should be segregated to prevent cross-contamination
of different radioisotopes. The vial contains cortisol in a buffer with bovine serum albumin and sodium
azide (<0.1%). The expected values are in the concentration range indicated
• Each case of radioactive contamination or loss of radioactive material on a supplement.
should be resolved according to established procedures.
• Radioactive waste should be handled according to the rules MATERIALS REQUIRED, BUT NOT PROVIDED
established in the country of use. In addition to standard laboratory equipment, the following items are required:
Sodium azide For the direct assay of serum, plasma or urine cortisol
Some reagents contain sodium azide as preservative. Sodium azide may • precision micropipet (50 µL).
react with lead, copper or brass to form explosive metal azides. Dispose of • semi-automatic pipet (500 µL).
the reagents by flushing with large amounts of water through the plumbing
system. • vortex-type mixer.
Material of human origin • horizontal or orbital shaker.
All serum and plasma samples should be handled as if capable of transmitting • aspiration system.
hepatitis or AIDS. • gamma counter set for 125 iodine.
Dichloromethane For the assay of urine extract cortisol (optional)
Dichloromethane is a highly volatile and inflammable solvent. Extraction and • analytical grade dichloromethane (methylene chloride), not
evaporation must be done in a ventilated hood. Keep away from any open ethanol-stabilized.
flame. Do not pipet reagents by mouth.
• 2 and 5 mL glass pipets.
GHS HAZARD CLASSIFICATION • glass tubes or vials fitted with teflon-lined screw caps.
Not classified as hazardous
• evaporator.

PI-IM1841–05 2 of 62
PROCEDURE RESULTS
Extraction of urine (optional, see Assay procedure for direct assay of Results are obtained from the standard curve by interpolation. The curve
urine cortisol). serves for the determination of cortisol concentrations in samples measured
at the same time as the calibrators.
Note: The extraction must be done in clean glass vials or tubes, pre-rinsed
with dichloromethane and fitted with teflon or glass stoppers. Standard curve
Bring samples to room temperature and mix well before starting extraction. The results in the quality control department were calculated using spline
curve fit with B/T or B/B0 on the logit vertical axis and analyte concentration
Samples only are extracted before assay; do not extract calibrators.
of the calibrators on the log horizontal axis (nmol/L).
• Cool a sufficient volume of dichloromethane in ice-water bath.
Other data reduction methods may give slightly different results.
• Number tubes or flasks.
Total activity: 66,953 cpm
• Add 500 µL of urine sample to numbered tubes kept on ice. Calibrators Cortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
• Add 5 mL of dichloromethane using a glass pipet, stopper carefully 0 0 62,217 92.9 100
and vortex for one minute. 1 20 53,531 80.0 86.0
• Let the two phases separate at room temperature. 2 70 38,175 57.0 61.4
3 200 21,730 32.5 34.9
• Take off upper, aqueous phase by aspiration.
4 700 9,233 13.8 14.8
• Take 2 mL of organic phase using glass pipet or syringe. 5 2000 4,271 6.38 6.87
• Evaporate organic phase completely in evaporator. Do not heat.
(Example of standard curve, do not use for calculation)
• Take up organic extract in 200 µL of zero calibrator. Wait 15 minutes
and then vortex vigorously. Samples
Assay procedure for serum, plasma and urine extracts: For each sample, locate the B/T or B/B0 on the vertical axis and read off the
corresponding cortisol concentration on the horizontal axis.
Bring all reagents to room temperature before pipeting.
To convert nmol/L (nM) into ng/mL, multiply results by 0.362.
Steps Calibrators and Serum, plasma Tubes for total Serum, plasma or urine samples assayed after extraction
control or urine extracts count (T)
1: Additions The concentration is in nanomoles per liter (nM). The calculation of the daily
To urinary cortisol excretion is given in the following paragraph.
antibody-coated Urine samples assayed by direct procedure
tubes, add
successively: The value must be multiplied by 1.09, the dilution factor due to the addition
- - of 50 µL of zero calibrator.
calibrators or 50 µL
control It is suggested that in cases where there is disagreement with clinical data or
serum samples - 50 µL - other measurements, to check the value obtained in the direct assay by an
or urine extracts indirect assay after dichloromethane extraction.
tracer 500 µL 500 µL 500 µL The daily excretion of urine cortisol (Q) (nmol/24hours) is:
Mix
2: Incubation Q = U x V
1 hour at 18-25°C with shaking (≥400 rpm)
where
3: Count
Aspirate carefully contents of tubes (except of U = urine cortisol value (nM)
two tubes for total count). V = volume of urine in liters/24 hours
Determine cpm bound (B) and total cpm (T)
EXPECTED VALUES
Assay procedure for direct assay of urine cortisol: It is suggested that each laboratory establishes its own normal values. The
Bring all reagents to room temperature before pipeting. following values obtained with healthy subjects are indicative only.
Sera:
Steps Calibrators and Urines Tubes for total
control count (T) Morning: 263 to 724 nM (n = 69) Evening: 49 to 430 nM (n = 84)
1: Additions Urines (n = 66)
To
antibody-coated Assay Mean (nmol/24h) Standard Extremes values
tubes, add deviation for 95% of
successively: (nmol/24h) population
calibrators or 50 µL - - (nmol/24h)
control Direct 114 55 38 - 208
urine samples - 50 µL - After extraction 103 45 30 - 197
zero calibrator - 50 µL -
(attention: to Detail information about expected values for children (sorted according
urine samples to age and sex) can be found in the data sheet "APPENDIX".
only)
tracer 500 µL 500 µL 500 µL QUALITY CONTROL
Mix Good laboratory practices imply that control samples be used regularly to
ensure the quality of the results obtained. These samples must be processed
2: Incubation exactly the same way as the assay samples, and it is recommended that their
1 hour at 18-25°C with shaking (≥400 rpm) results be analyzed using appropriate statistical methods.
3: Count
Aspirate carefully contents of tubes (except of In case of packaging deterioration or if data obtained show some performance
two tubes for total count). alteration, please contact your local distributor or use the following e-mail
address: imunochem@beckman.com
Determine cpm bound (B) and total cpm (T)

PI-IM1841–05 3 of 62
PERFORMANCE CHARACTERISTICS Measurement range (from analytical sensitivity to highest calibrator): 5.0 to
(for more details, see the data sheet “APPENDIX”) approximately 2,000 nM.
Representative data are provided for illustration only. Performance obtained
in individual laboratories may vary.
LIMITATIONS
The non-respect of the instructions in this package insert may affect results
Analytical sensitivity: 5 nM significantly.
Specificity Results should be interpreted in the light of the total clinical presentation
of the patient, including clinical history, data from additional tests and other
The antibody used in the immunoassay is highly specific for
appropriate information.
cortisol. Extremely low cross reactivities were obtained against other
naturally occurring steroids (Aldosterone, Corticosterone, Cortisone, Do not use hemolyzed, lipemic or icteric samples.
11-Desoxycortisol, Progesterone, etc.) or therapeutic drugs that may be
In spite of the very low cross-reactivity with corticoids currently employed
present in patient samples (Prednisolone, Prednisone, Spironolactone, etc.).
therapeutically, particularly prednisolone and prednisone, treatment with high
Precision doses may lead to an artefactual increase in serum and urine cortisol, due to
interference by the substance administered or certain of its metabolites. It is
Intra-assay
therefore inadvisable to perform direct cortisol assays on patients receiving
Samples were assayed 10 resp 25 times in the same series. The coefficients systemic corticotherapy.
of variation were found below or equal to 5.8% for serum, 8.9% for urine
For assays employing antibodies, the possibility exists for interference
samples and 9.4% for urine extracts.
by heterophile antibodies in the patient sample. Patients who have been
Inter-assay regularly exposed to animals or have received immunotherapy or diagnostic
Samples were assayed in duplicate in 17 resp 10 different series. Coefficients procedures utilizing immunoglobulins or immunoglobulin fragments may
of variation were found below or equal to 9.2% for serum, 13.3% for urine produce antibodies, e.g. HAMA, that interfere with immunoassays.
samples and 12.6% for urine extracts. Such interfering antibodies may cause erroneous results. Carefully evaluate
Accuracy the results of patients suspected of having these antibodies.

Dilution test
High-concentration samples were serially diluted with the zero calibrator. The
recovery percentages obtained were between 86% and 115%, for serum,
80.1% - 118% for urine and 81.4% - 112% for urine extracts.
Recovery test
Samples were spiked with known quantities of cortisol. The recovery
percentages obtained were between 95% and 113% for serum, 82.6% –
107% for urine and 83.0% - 119% for urine extracts.

PI-IM1841–05 4 of 62
CORTISOL RIA KIT Dichlorométhane
IM1841 Le dichlorométhane est un solvant organique volatil et très inflammable.
Effectuer l'extraction et l'évaporation sous une hotte ventilée. Eviter tout
contact avec une flamme et ne pas pipetter les réactifs à la bouche.
TROUSSE RADIOIMMUNOLOGIQUE POUR LE DOSAGE
IN VITRO DU CORTISOL DANS LE SERUM, LE PLASMA CLASSIFICATION DES RISQUES SGH
OU LES URINES HUMAINES Non classifié comme dangereux
Pour un usage diagnostique in vitro.
La fiche technique santé-sécurité est disponible à l’adresse
PRINCIPE techdocs.beckmancoulter.com
Le dosage radioimmunologique du cortisol est un dosage par compétition.
Cette même trousse permet de doser :
. PRELEVEMENT, PREPARATION,
● soit directement sur sérum, plasma ou urines ;
● soit après extraction des urines au dichlorométhane et évaporation du CONSERVATION ET DILUTION DES
solvant, sur des extraits remis en solution dans le calibrateur zéro. ECHANTILLONS
Les échantillons sériques, plasmatiques ou urinaires, le contrôle, les extraits Echantillons sériques ou plasmatiques
urinaires à doser ou les calibrateurs sont incubés dans des tubes recouverts • Recueillir le sang dans des tubes secs sans additif, ou des tubes
d'anticorps monoclonal avec un traceur cortisol marqué à l’iode 125. Après contenant de l'EDTA.
incubation, le contenu du tube est vidé par aspiration, puis la radioactivité liée
est mesurée. Une courbe d’étalonnage est établie. Les valeurs inconnues • Séparer le sérum ou le plasma des cellules par centrifugation.
sont déterminées par interpolation à l’aide de cette courbe. • Les échantillons sériques ou plasmatiques peuvent être conservés
à 2-8 °C si le dosage est réalisé dans les 24 heures. Sinon, il est
AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS préférable de les conserver congelés (< -20 °C, 3 mois maximum) et de
Précautions générales préférence aliquotés, afin d’éviter les congélations et décongélations
• Les flacons de calibrateurs et de contrôles doivent être ouverts des successives. La décongélation de l’échantillon peut être réalisée à
temps aussi courts que possible afin d’éviter une évaporation trop température ambiante.
importante. • Si l’échantillon analysé a une concentration supérieure au calibrateur
• Ne pas mélanger des réactifs de lots différents. le plus élevé de la gamme, le diluer dans le calibrateur zéro.

• Effectuer simultanément la courbe standard et le dosage des Echantillons urinaires

échantillons. • Recueillir les urines de 24 heures dans un flacon.
• Il est recommandé de réaliser les dosages en double. • Mesurer le volume final.
• Chaque tube ne doit être utilisé qu’une seule fois. • Si le dosage est différé, conserver une fraction aliquote à < -20 °C (1
Protection contre les rayonnements ionisants semaine maximum) et de préférence aliquotés. La décongélation de
l’échantillon peut être réalisée à température ambiante.
L’achat, la possession, l’utilisation et l’échange de matières radioactives
sont soumis aux réglementations en vigueur dans le pays de l’utilisateur. • Si l’échantillon analysé a une concentration supérieure au calibrateur
L’application des règles de base de protection contre les rayonnements le plus élevé de la gamme, le diluer dans de l’eau distillée.
ionisants assure une protection adéquate. Certaines d’entre elles sont
rappelées ci-après : MATÉRIEL FOURNI
Tous les réactifs de la trousse conservés non ouverts à 2-8 °C sont stables
• Ne pas manger, ni boire, ni fumer, ni appliquer de cosmétiques dans jusqu’à la date de péremption mentionnée sur la trousse. Les dates
les laboratoires où des produits radioactifs sont utilisés. d'expiration imprimées sur les étiquettes des flacons concernent uniquement
• Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche. le stockage à long terme des réactifs par le fabricant, avant l'assemblage de
la trousse. Ne pas en tenir compte.
• Eviter le contact direct avec tout produit radioactif en utilisant des
blouses et des gants de protection. Tubes revêtus d'un anticorps monoclonal anti-cortisol : 2 x 50 tubes
(prêts à l'emploi)
• Toute manipulation de matières radioactives se fera dans un local
approprié, éloigné de tout passage. Traceur cortisol marqué à l'iode 125 : 1 flacon de 55 mL (prêt à l 'emploi)
• Les produits radioactifs seront stockés dans leur conditionnement Le flacon contient 185 kBq, en début de lot, de cortisol marqué à l’iode 125
d'origine dans un local approprié. dans un tampon contenant de l'albumine bovine sérique, de l'azide de sodium
(<0,1 %) et un colorant vert.
• Un cahier de réception et de stockage de produits radioactifs sera tenu
à jour. Calibrateurs : 5 flacons de 0,5 mL + 1 flacon «zéro» de 5 mL (prêts à
l’emploi)
• Le matériel de laboratoire et la verrerie qui ont été contaminés doivent
être éliminés au fur et à mesure afin d'éviter une contamination croisée Les flacons de calibrateurs contiennent entre 0 à environ 2 000 nM de cortisol
de plusieurs isotopes. dans un tampon contenant de l’albumine sérique bovine en présence d’azide
de sodium (<0,1 %). La concentration exacte est indiquée sur l’étiquette de
• Chaque cas de contamination ou perte de substance radioactive devra chaque flacon. Les calibrateurs ont été calibrés par rapport aux solutions de
être résolu selon les procédures établies. référence ERM-DA192 et 193.
• Toute mise aux déchets de matière radioactive se fera en accord avec Le calibrateur zéro peut être aussi commandé séparément (réf. # IM1959 -
les règlements en vigueur. 10 mL, IM3444 - 250 mL).
Azide de sodium Remarque : Le calibrateur zero peut parfois présenter une certaine turbidité
Certains réactifs contiennent de l'azide de sodium comme agent mais cela n'a pas d'impact sur les performances du dosage.
conservateur. L'azide de sodium peut réagir avec le plomb, le cuivre Echantillon de contrôle : 1 flacon de 0,5 mL (prêt à l’emploi)
et le laiton et former des azides métalliques explosifs. Lors du rejet de
telles solutions à l'évier, laisser couler un volume important d'eau dans les Le flacon contient du cortisol dans un tampon contenant de l'albumine
canalisations. bovine sérique et de l’azide de sodium (<0,1 %). Les valeurs attendues
sont comprises dans la fourchette de concentrations indiquée dans un
Les produits d’origine humaine supplément.
Tous les échantillons de sérum ou de plasma doivent être manipulés comme
étant susceptibles de contenir les virus de l'hépatite ou du SIDA. MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI
En plus de l'équipement de laboratoire usuel, il est nécessaire d'utiliser le
matériel suivant :

PI-IM1841–05 5 of 62
Pour le dosage direct du cortisol sérique, plasmatique ou urinaire Etapes Calibrateur et Urines Tubes "totaux"(T)
contrôle
• micropipette de précision (50 µL). 1 : Répartition
• pipette semi-automatique (500 µL). Dans des tubes
recouverts
• mélangeur de type vortex.
d’anticorps,
• agitateur à mouvement de va et vient horizontal ou à plateau oscillant. distribuer :
les calibrateurs, 50 µL - -
• système d'aspiration.
contrôle
• compteur gamma calibré pour l'iode 125. les urines - 50 µL -
Pour le dosage du cortisol urinaire après extraction (facultatif) le calibrateur - 50 µL -
zéro (attention
• dichlorométhane pour analyse, non stabilisé par de l'éthanol. : uniquement
• pipettes en verre de 2 et 5 mL. dans les urines)
• tubes ou fioles en verre, avec bouchons à vis, munis d'un joint en traceur 500 µL 500 µL 500 µL
téflon. Agiter
2 : Incubation
• évaporateur.
1 heure à 18-25 °C avec agitation (≥400 rpm).
PROCÉDURE 3 : Comptage
Extraction des urines (facultatif, voir Mode opératoire du dosage des Aspirer soigneusement le contenu de chaque tube
urines, sans extraction préalable) (sauf les 2 tubes "cpm totaux").
Compter les cpm liés (B) et les cpm totaux (T).
NB : L’extraction doit être réalisée dans des tubes (ou des fioles) en verre
propres, rincés au dichlorométhane avant l’emploi et munis d’un bouchon en
téflon ou en verre. RÉSULTATS
Les résultats sont déduits de la courbe standard par interpolation. La courbe
Amener les réactifs à température ambiante. Homogénéiser avant de sert à déterminer les taux de cortisol de tous les échantillons mesurés en
commencer l'extraction. même temps que les calibrateurs.
Réaliser l’extraction uniquement sur les échantillons biologiques ; ne Courbe standard
pas extraire les calibrateurs.
Les résultats obtenus par le service chargé du contrôle de la qualité ont été
• Refroidir dans un bac à glace un volume suffisant de dichlorométhane. calculés en utilisant un ajustement de courbe spline avec B/T ou B/B0 sur l’axe
• Numéroter chaque tube (ou fiole). vertical logit et la concentration en substance à analyser des calibrateurs sur
l’axe horizontal logarithmique (nmol/L).
• Déposer 500 µL de chaque échantillon urinaire dans les tubes ainsi
numérotés et maintenus dans la glace. L’utilisation d’un autre mode de calcul peut conduire à des résultats
légèrement différents.
• A l'aide d'une pipette en verre, ajouter 5 mL de dichlorométhane,
boucher soigneusement et vortexer pendant 1 minute. Activité totale : 66 953 cpm
• Laisser décanter les deux phases hors de la glace. Calibrateurs Cortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
• Eliminer le surnageant aqueux par aspiration. 0 0 62 217 92,9 100
1 20 53 531 80,0 86,0
• Prélever 2 mL de la phase organique en utilisant une pipette ou une 2 70 38 175 57,0 61,4
seringue en verre. 3 200 21 730 32,5 34,9
• Evaporer complètement la phase organique à l'aide d'un appareil 4 700 9 233 13,8 14,8
d'évaporation. Ne pas chauffer. 5 2000 4 271 6,38 6,87
• Remettre en solution l’extrait organique, en ajoutant 200 µL de
calibrateur zéro. Attendre 15 min. et agiter vigoureusement à l'aide (Exemple de courbe standard, ne pas utiliser pour les calculs)
d'un vortex. Echantillons
Mode opératoire du dosage des sérums, plasma ou des extraits Pour chaque échantillon, repérer le rapport B/T ou B/B0 sur l’axe vertical,
urinaires: puis le point correspondant de la courbe standard et en déduire par lecture
Equilibrer les réactifs à la température du laboratoire avant utilisation. sur l’axe horizontal la concentration en cortisol de l’échantillon.
Pour convertir des concentrations de nmol/L en ng/mL, multipliez les résultats
Etapes Calibrateur et Sérums, plasma Tubes "totaux"(T) par 0,362.
contrôle ou Extraits
urinaires Echantillons sériques, plasmatiques ou extraits urinaires
1 : Répartition La concentration en cortisol est donnée directement en nanomoles par litre
Dans des tubes (nM). Voir ci-dessous le calcul de l’excrétion journalière du cortisol urinaire.
recouverts
Echantillons urinaires dosés par la méthode directe
d’anticorps,
distribuer : La concentration en cortisol doit être multipliée par 1,09 (facteur de dilution
les calibrateurs, 50 µL - - de l’échantillon, dû à l’ajout de 50 µL de calibrateur zéro).
contrôle En cas de discordance avec la clinique ou avec les autres paramètres
Sérums ou - 50 µL -
biologiques, il est recommandé de contrôler la valeur obtenue par un dosage
Extraits urinaires indirect, effectué après l'extraction au dichlorométhane.
traceur 500 µL 500 µL 500 µL
L’excrétion journalière du cortisol urinaire Q (nmol/24 h) est donnée par :
Agiter
2 : Incubation Q = U x V
1 heure à 18-25 °C avec agitation (≥400 rpm).
3 : Comptage où
Aspirer soigneusement le contenu de chaque tube U est la concentration de cortisol urinaire en nM
(sauf les 2 tubes "cpm totaux").
Compter les cpm liés (B) et les cpm totaux (T). V est le volume urinaire en litres / 24 h

Mode opératoire du dosage des urines, sans extraction préalable:

Equilibrer les réactifs à la température du laboratoire avant utilisation.

PI-IM1841–05 6 of 62
VALEURS ATTENDUES Inter-essais
Il est recommandé à chaque laboratoire d'établir ses propres valeurs
Des échantillons ont été dosés en doublet dans 17 resp. 10 séries différentes.
normales. Les valeurs suivantes déterminées chez des sujets sains sont
Les coefficients de variation obtenus étaient inférieurs ou égales à 9,2 % pour
données à titre indicatif.
les sérums, 13,3 % pour les urines et 12,6 % pour les extraits urinaires.
Sérums
Exactitude
Matin : 263 à 724 nM (n = 69) - Soir : 49 à 430 nM (n = 84)
Epreuve de dilutions
Urines (n = 66)
Des échantillons de concentration élevée ont été dilués dans le calibrateur
Dosage Moyenne Ecart-type Extrêmes pour zéro de la trousse. Les pourcentages de recouvrement s’échelonnent entre
(nmol/24h) (nmol/24h) 95 % de la 86 % et 115 % pour les sérums, 80,1 % - 118 % pour les urines et 81,4 % -
population 112 % pour les extraits urinaires.
(nmol/24h) Epreuve de surcharge
Directe 114 55 38 - 208
Des quantités connues de cortisol ont été ajoutées à des sérums humains.
Après extraction 103 45 30 - 197 Les pourcentages de recouvrement s’échelonnent entre 95 % et 113 % pour
les sérums, 82,6 % - 107 % pour les urines et 83,0 % - 119 % pour les extraits
Les renseignement détail de value attendue pour les enfants (diviser urinaires.
par l’âge et l’sexe) est dans la feuille « APPENDIX».
Plage de mesure (de la sensibilité analytique jusqu’au calibrateur le plus
CONTRÔLE DE QUALITÉ concentré) : 5,0 à environ 2 000 nM.
Les bonnes pratiques de laboratoire impliquent que des échantillons de
contrôle soient utilisés dans chaque série de dosage pour s'assurer de LIMITES
la qualité des résultats obtenus. Ces échantillons devront être traités de Le non-respect des recommandations indiquées dans cette notice peut avoir
la même façon que les prélèvements à doser et il est recommandé d'en un impact significatif sur les résultats.
analyser les résultats à l'aide de méthodes statistiques appropriées. Les résultats doivent être interprétés à la lumière du dossier clinique complet
En cas de détérioration de l'emballage ou si les résultats obtenus montrent du patient, incluant l’historique clinique et les données de tests additionnels
une perte de performance du produit, veuillez contacter notre service Support et toute autre information appropriée.
Technique. E-mail : imunochem@beckman.com Ne pas utiliser de spécimens hémolysés, icteriques ou lipémiques.
PERFORMANCES DU DOSAGE Malgré la très faible réaction croisée in vitro obtenue avec les corticoïdes
(voir la feuille “APPENDIX” pour plus de détails) couramment utilisés en thérapeutique, en particulier la prednisolone et la
prednisone, un traitement par des doses élevées peut s’accompagner d’une
Les données représentatives ne sont fournies qu'à titre d'illustration. Les augmentation artéfactuelle du cortisol sérique ou urinaire, liée à l’interférence
performances obtenues dans les laboratoires individuels peuvent varier. de la substance administrée ou de certains de ses métabolites. Il est donc
Sensibilité analytique: 5 nM déconseillé d’effectuer des dosages directs du cortisol chez des patients
recevant une corticothérapie par voie générale.
Spécificité
Pour les tests employant des anticorps, il existe la possibilité d’une
L’anticorps utilisé dans ce dosage est hautement spécifique du cortisol. interférence par des anticorps hétérophiles présents dans l’échantillon du
Des réactivités croisées extrêmement basses ont été obtenues vis à vis patient. Les patients qui ont été régulièrement exposés à des animaux ou qui
de nombreux stéroïdes naturels (Aldostérone, Corticostérone, Cortisone, ont reçu une immunothérapie ou qui ont subi des procédures diagnostiques
11-Desoxycortisol, Progestérone, etc…) ou vis à vis de médicaments utilisant des immunoglobulines ou des fragments d’immunoglobulines
pouvant être présents dans les échantillons à tester (Prednisolone, peuvent produire des anticorps, par exemple des anticorps HAMA (anticorps
Prednisone, Spironolactone, etc…). humains anti-souris), qui interfèrent avec les tests immunologiques.
Précision Ces anticorps qui interfèrent peuvent être la cause de résultats erronés.
Intra-essai Evaluer avec précaution les résultats de patients suspectés de posséder
ces anticorps.
Des échantillons ont été dosés 10 resp. 25 fois dans une même série. Les
coefficients de variation obtenus étaient inférieurs ou égales à 5,8 % pour les
sérums, 8,9 % pour les urines et 9,4 % pour les extraits urinaires.

PI-IM1841–05 7 of 62
CORTISOL RIA KIT Dichlormethan
IM1841 Dichlormethan ist ein höchst flüchtiges und entzündbares Lösungsmittel.
Extraktion und Evaporation müssen in einer gut belüfteten Haube stattfinden.
Von offenem Feuer fernhalten. Keine Mundpipette verwenden.
RADIOIMMUNOASSAY FÜR DIE IN-VITRO BESTIMMUNG
VON CORTISOL IN HUMANEM SERUM, PLASMA UND GHS-GEFAHRSTOFFKLASSIFIZIERUNG
URIN Nicht als gefährlich eingestuft
In-vitro-Diagnostikum.
Das Sicherheitsdatenblatt ist auf techdocs.beckmancoulter.com
PRINZIP verfügbar.
Der Radioimmunoassay Cortisol ist ein kompetitiver Bindungsassay.
Derselbe Test kann verwendet werden zur Bestimmung von Cortisol
. PROBENENTNAHME, -BEHANDLUNG,
● entweder direkt im Serum, Plasma oder Urin,
● oder nach der Extraktion von Urin mit Dichlormethan und der Evaporation -LAGERUNG UND VERDÜNNUNG
des Lösungsmittels und einer Resuspension in Nullkalibrator. Entnahme von Serum- und Plasmaproben
Serum-, Plasma- oder Urinproben, Urinextrakte, die Kontrollen und die • Das Blut sollte in Röhrchen gesammelt werden, die entweder keine
Kalibratoren werden in einem mit monoklonalen Antikörpern-beschichteten Zusätze enthalten oder EDTA.
Röhrchen mit einem 125I-markierten Cortisol Tracer inkubiert. Nach der • Trennen Sie Die Zellen vom Serum oder Plasma durch Zentrifugation.
Inkubation wird die Flüssigkeit abgesaugt und die gebundene Radioaktivität
bestimmt. Unbekannte Probenwerte werden mittels Interpolation aus der • Serum- und Plasmaproben können bei 2-8 °C gelagert werden, wenn
Standardkurve bestimmt. der Assay innerhalb von 24h durchgeführt wird. Für eine längere
Lagerung sollte die Probe aliquotiert und eingefroren werden (< -20
WARNUNGEN UND VORSICHTSMASSNAHMEN °C, maximum 3 Monate). Wiederholtes Auftauen und Einfrieren sollte
Allgemeinhinweise vermieden werden. Auftauen sollte bei Raumtemperatur stattfinden.

• Die Kalibrator- und Kontrollfläschchen sollten so kurz wie möglich • Wenn die Proben Konzentrationen über dem höchsten Kalibratorwert
geöffnet werden, um eine übermäßige Verdunstung zu vernmeiden. haben, müssen sie mit Nullkalibrator verdünnt werden.

• Reagenzien aus Kits von verschiedenen Produktionsserien sollten Sammeln von Urinproben
nicht miteinander vermischt werden. • Sammeln Sie den 24-Stunden Urin in der Flasche.
• Eine Standardkurve ist für jeden Assay notwendig. • Bestimmen Sie Das Volumen.
• Der Assay sollte in Doppelbestimmung durchgeführt werden. • Wenn nötig, aliquotieren und bei -20 °C lagern, maximum 1 Woche.
• Jedes Röhrchen darf nur einmal verwendet werden. Auftauen sollte bei Raumtemperatur stattfinden.

Schutz vor radioaktiver Strahlung • Bei einer Probenkonzentration die über den höchsten Kalibratorwert
hinausgeht, sollte mit destilliertem Wasser verdünnt werden.
Annahme, Besitz und Verwendung, Lagerung, Transport und Beseitigung
unterliegen den Vorschriften der Atomenergie- bzw. der jeweiligen MITGELIEFERTE MATERIALIEN
staatlichen Behörde. Die Einhaltung der Grundregeln beim Umgang mit Die Reagenzien sind verwendbar bis zum Verfallsdatum, wenn sie bei 2-8 °C
Radioaktivität sollte eine ausreichende Sicherheit gewährleisten. gelagert werden. Auf die Fläschchen gedruckte Verfallsdaten betreffen nur
• In Räumen, in denen mit radioaktiven Materialien gearbeitet wird, die Langzeitlagerung beim Hersteller, vor der Zusammensetzung des Kits.
sollte Essen, Trinken, Rauchen und das Auftragen von Kosmetika Bitte nicht beachten.
vermieden werden. Röhrchen mit anti-Cortisol monoklonalen Antikörpern beschichtet: 2 x
• Keine Mundpipette verwenden. 50 Röhrchen (gebrauchsfertig)
125
• Direkter Kontakt mit radioaktiven Materialien sollte durch Tragen I-markierter Cortisol Tracer: ein 55 mL Fläschchen (gebrauchsfertig)
entsprechender Schutzkleidung (Laborkittel, Handschuhe) vermieden Das Fläschchen enthält 185 kBq (am Tag der Herstellung) markiertes
werden. Cortisol in Puffer mit bovinem Serumalbumin, Natriumazid (<0,1 %) und
• Das Arbeiten mit radioaktiven Stoffen muß in dafür speziell einen Farbstoff.
gekennzeichneten Bereichen, die vom normalen Laborbetrieb Kalibratoren: 5 Fläschchen mit je 0,5 mL und 1 Fläschchen mit 5 mL
abgetrennt sind, erfolgen. Nullkalibrator (gebrauchsfertig)
• Radioaktive Materialien sollten in einem speziell gekennzeichneten Die Kalibratorflaschen enthalten zwischen 0 bis ungefähr 2 000 nM Cortisol in
Bereich gelagert werden. Puffer mit bovinem Serumalbumin und Natriumazid (<0,1 %). Die genauen
• Ein Register der Eingänge und Lagerung aller radioaktiven Produkte Konzentrationen sind auf jedem Fläschchen angegeben. Die Kalibratoren
sollte ständig aktualisiert werden. wurden gegen die Referenz-Präparation ERM-DA192 und 193 kalibriert.
• Kontaminierte Labor- und Glasgeräte sollten isoliert werden, um eine Der Nullstandard kann separat bestellt werden (Nr. # IM1959 - 10 mL, IM3444
Kreuzkontamination von verschiedenen Radioisotopen zu verhindern. - 250 mL).
• Kontaminationen des Arbeitsplatzes müssen unverzüglich sorgfältig Bemerkung: Ein gelegentliches Auftreten einer Trübung des Nullstandards
nach den üblichen Verfahren entfernt werden. beeinträchtigt nicht das Assayergebnis.
• Radioaktiver Abfall muss entsprechend den Richtlinien jedes Kontrolle: ein 0,5 mL Fläschchen (gebrauchsfertig)
Einsatzortes entsorgt werden. Das Fläschchen enthält Cortisol in Puffer mit bovinem Serumalbumin
Natriumazid (BSA) und Natriumazid (<0,1 %). Die erwartenen Werte liegen im
Konzentrationsbereich, der in der Packungsbeilage angegeben ist.
Zur Vermeidung mikrobieller Kontamination enthalten einige Reagenzien
Natriumazid. Natriumazid kann mit Blei, Kupfer oder Messing zu explosiven ERFORDERLICHE, JEDOCH NICHT
Metallaziden reagieren. Um dies zu vermeiden, sollte bei einer Entsorgung
über Rohrleitungen mit viel Wasser nachgespült werden. MITGELIEFERTE MATERIALIEN
Zusätzlich zu der Standardlaborausstattung, werden die folgenden
Bestandteile menschlichen Ursprungs Materialien benötigt:
Mit allen Serum- and Plasmaproben ist so vorzugehen, als ob eine Für den direkten Assay von Serum, Plasma oder Urin
tatsächliche Ansteckungsgefahr für Hepatitis oder AIDS bestünde.
• Präzisionspipette (50 µL).
• Halbautomatische Pipetten (500 µL).
• vortex-mixer.

PI-IM1841–05 8 of 62
 • Horizontal, oder Orbitalschüttler. Verfahren Kalibrator oder Urin Röhrchen für
Kontrollen Totalaktivität (T)
• Absaugsystem. 1: Zugabe
• Gamma-Counter für 125I. zu den
Für den Assay von Cortisol aus Urinextrakt (optional) beschichteten
Röhrchen :
• analytisch reines Dichlormethan (Methylenchlorid), nicht Kalibratoren oder 50 µL - -
Ethanol-stabilisiert. Kontrollen
• 2 und 5 mL Glasspipetten. Urinproben - 50 µL -
Nullkalibrator - 50 µL -
• Glassröhrchen oder -fläschchen mit einem Teflon-beschichteten (Achtung : nur
Drehdeckel. für Urinproben)
• Evaporator. Tracer 500 µL 500 µL 500 µL
Mischen
DURCHFÜHRUNG 2: Inkubation
Extraktion von Urin (optional, siehe Assay-Durchführung mit Urin ohne 1St bei Raumtemperatur inkubieren (18-25
vorherige Extraktion). °C) ≥ 400 rpm
Anmerkung: Die Extraktion muss in sauberen Glasgefäßen durchgeführt 3: Messen
werden, die vorher mit Dichlormethan gespült wurden und mit Teflon- oder Vorsichtig den Inhalt der Röhrchen absaugen (außer
Glasdeckeln verschlossen sind. zwei Röhrchen für Totalaktivität).
Vor der Extraktion müssen die Proben auf Raumtemperatur gebracht und gut Gebundene cpm (B) und Totalaktivität (T) bestimmen.
geschüttelt werden
Die Extraktion vor dem Versuch erfolgt nur für Proben; es erfolgt keine ERGEBNISSE
Extraktion für Kalibratoren. Die Ergebnisse werden aus der Standardkurve durch Interpolation ermittelt.
Die Kurve dient für die Bestimmung der Cortisolkonzentration in den Proben,
• Eine ausreichende Menge von Dichlormethan in einem Eiswasserbad die zur gleichen Zeit wie die Standardkurve gemessen wurden.
kühlen.
Standardkurve
• Röhrchen oder Fläschchen beschriften.
Die Ergebnisse wurden in der Abteilung für Qualitätskontrolle anhand einer
• 500 µL der Urinproben in die auf Eis stehenden Röhrchen geben. Spline-Kurvenanpassung mit B/T oder B/B0 auf der vertikalen Logit-Achse
• 5 mL Dichlormethan mit einer Glaspipette zugeben, gut verschließen und der Analytkonzentration der Kalibratoren auf der logarithmischen
und für eine Minute vortexen. horizontalen Achse (nmol/L) berechnet.
• Die Röhrchen stehen lassen bei RT bis sich zwei Phasen gebildet Andere Datenreduktions-Methoden können zu leicht abweichenden
haben. Ergebnissen führen.
• Die obere wässrige Phase absaugen. Gesamtaktivität: 66 953 cpm
• 2 mL von der unteren organischen Phase mit einer Glaspipette oder Kalibratoren Cortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
Spitze entnehmen. 0 0 62 217 92,9 100
• Die organische Phase vollständig in einem Evaporator evaporieren. 1 20 53 531 80,0 86,0
Nicht erhitzen. 2 70 38 175 57,0 61,4
3 200 21 730 32,5 34,9
• Das organische Extrakt in 200 µL Nullkalibrator aufnehmen, 15 min
4 700 9 233 13,8 14,8
stehen lassen, anschließend gründlich vortexen.
5 2000 4 271 6,38 6,87
Assay-Durchführung für Serum, Plasma und Urinextrakte:
Die Reagenzien sollten Raumtemperatur haben vor dem Pipettieren. (Beispiel einer Standardkurve, nicht zur Berechnung benutzen)
Proben
Verfahren Kalibrator oder Serum, Plasma Röhrchen für
Kontrollen oder Urinextrakt Totalaktivität (T) Für jede Probe wird der B/T oder B/B0 -Wert auf der y-Achse bestimmt und
1: Zugabe die entsprechende Cortisolkonzentration auf der x-Achse abgelesen.
zu den Um die Werte von nmol/L (nM) in ng/mL umzurechnen, müssen die Werte
beschichteten mit 0,362 multipliziert werden.
Röhrchen : Serum, Plasma oder Urinproben nach Extraktion
Kalibratoren oder 50 µL - -
Kontrollen Die Konzentration ergibt sich in nmol pro Liter (nM). Die Berechnung der
Serumproben - 50 µL - täglichen Cortisolexkretion im Urin wird im folgenden Paragraph erklärt.
oder Urinextrakte Urinproben im direkten Verfahren getestet
Tracer 500 µL 500 µL 500 µL
Die Werte müssen mit 1,09 multipliziert werden, dem Verdünnungsfaktor,
Mischen der durch die Zugabe von 50 µL Nullkalibrator entsteht.
2: Inkubation
1St bei Raumtemperatur inkubieren (18-25 Bei Diskrepanzen zwischen den klinischen Daten und anderen Messungen,
°C) ≥ 400 rpm wird geraten, den Wert aus dem direkten Assay mit einem indirekten Assay
nach Dichlormethanextraktion zu überprüfen.
3: Messen
Vorsichtig den Inhalt der Röhrchen absaugen (außer Die tägliche Exkretion von Cortisol im Urin (Q) (nmol/24h) setzt sich wie folgt
zwei Röhrchen für Totalaktivität). zusammen:
Gebundene cpm (B) und Totalaktivität (T) bestimmen.
Q = U x V
Assay-Durchführung mit Urin ohne vorherige Extraktion:
wo:
Die Reagenzien sollten Raumtemperatur haben vor dem Pipettieren.
U = Urin Cortisol Wert (nM)
V = Volumen des Urins in Litern/24 Stunden

ERWARTETE WERTE
Jedes Labor sollte seinen eigenen Normalbereich in Gruppen von gesunden
Testpersonen festlegen. Die hier angegebenen Werte dienen nur als
Richtlinie.

PI-IM1841–05 9 of 62
Serum : Genauigkeit
Morgens: 263 bis 724 nM (n = 69) Abends: 49 bis 430 nM (n = 84) Verdünnungstest
Urin (n = 66) Proben mit hohen Konzentrationen wurden mit Nullkalibrator verdünnt.
Die erhaltene Wiederfindung befindet sich zwischen 86 % und 115 % für
Assay Mittelwert Standard- Extremewerte Serumproben, 80,1 % - 118 % für Urinproben und 81,4 % - 112 % für
(nmol/24St) abweichung für 95 % der Urinextrakt.
(nmol/24St) Bevölkerung
(nMol/24St) Wiederfindungstest
Direkt 114 55 38 - 208 Proben wurden mit definierten Cortisolmengen vermischt. Die erhaltene
Nach Extraktion 103 45 30 - 197 Wiederfindung befindet sich zwischen 95 % und 113 % für Serumproben,
82,6 % - 107 % für Urinproben und 83,0 % - 119 % für Urinextrakt.
Detaillierte Information über die erwarteten Kinderwerte Messbereich (von analytischer Sensitivität bis zum höchsten Kalibratorwert):
(aufgeschlüsselt nach Alter und Geschlecht) sind im Datenblatt 5,0 bis circa 2 000 nM.
“APPENDIX“ aufgeführt.

QUALITÄTSKONTROLLE EINSCHRÄNKUNGEN
Die Nichtbeachtung der Anweisungen in dieser Packungsbeilage kann die
Zur Einhaltung der Laborgrundregeln sollten regelmäßig Kontrollproben Ergebnisse signifikant beeinflussen.
benutzt werden, um die Qualität der Ergebnisse zu sichern. Diese Proben
müssen in genau derselben Weise wie die Assayproben getestet werden, Die erhaltenen Ergebnisse sind vor dem Hintergrund der gesamten
und die Analyse der Ergebnisse sollte mit angebrachten statistischen klinischen Situation des Patienten unter Berücksichtigung seiner klinischen
Methoden stattfinden. Vorgeschichte, den Ergebnissen anderer Testergebnisse sowie weiteren
vorliegenden Informationen zu interpretieren.
Im Falle von Verpackungsschäden oder einer Leistungbeeinträchtigung des
Produkts, kontaktieren Sie bitte Ihren lokalen Vertreiber oder benutzen Sie Es dürfen keine hämolytischen, ikterischen oder lipämischen Proben
die folgende e-mail: imunochem@beckman.com verwendet werden.
Aufgrund der sehr niedrigen Kreuzreaktivität mit Corticoiden, die
SPEZIFISCHE LEISTUNGSMERKMALE therapeutisch verwendet werden, insbesondere Prednisolon und Prednison,
(für mehr Details siehe die Beilage “APPENDIX”) könnten Behandlungen mit hohen Dosen dieser Stoffe zu einem falschen
Repräsentative Daten dienen nur der Veranschaulichung. Die in einzelnen Anstieg des Serum- und des Urin-Cortisols führen, aufgrund der Interferenz
Labors erzielten Leistungen können anders ausfallen. durch die Substanz oder seiner Stoffwechselprodukte. Es ist daher nicht
ratsam direkte Cortisolbestimmungen bei Patienten durchzuführen, die eine
Analytische Sensitivität: 5 nM systemische Corticotherapie durchführen.
Spezifität Bei Assays, die Antikörper nutzen, besteht die Möglichkeit einer Störung
Der in diesem Immunoassay verwendete Antikörper ist hoch spezifisch für durch in der Patientenprobe enthaltene heterophile Antikörper. Patienten, die
Cortisol. Eine extrem niedrige Kreuzreaktivität wurde mit anderen natürlichen regelmäßig mit Tieren in Kontakt kommen oder sich immuntherapeutischen
Steroiden (Aldosteron, Corticosteron, Cortison, 11-Desoxycortisol, oder -diagnostischen Verfahren unter Einsatz von Immunglobulinen oder
Progesteron, etc.) gefunden oder mit Medikamenten in den Patientenproben Immunglobulin-Fragmenten unterzogen haben, können Antikörper bilden
(Prednisolon, Prednison, Spironolacton, etc.). (wie bspw. HAMA), welche die Immunoassays stören.
Präzision Derartige störende Antikörper können zu fehlerhaften Ergebnissen führen.
Die Ergebnisse von Patienten, bei denen das Vorliegen derartiger Antikörper
Intra-Assay zu vermuten ist, sind sorgfältig zu untersuchen.
Proben aus derselben Serie wurden 10 oder 25 mal getestet. Der
Variationskoeffizient war jeweils weniger oder gleich 5,8 % für Serumproben,
8,9 % für Urinproben und 9,4 % für Urinextrakt.
Inter-assay
Proben aus 17 oder 10 verschiedenen Serien wurden als
Doppelbestimmungen getestet. Der Variationskoeffizient war jeweils ≤9,2 %
für Serumproben, 13,3 % für Urinproben und 12,6 % für Urinextrakt.

PI-IM1841–05 10 of 62
CORTISOL RIA KIT CLASSIFICAZIONE PERICOLI GHS
Classificato non pericoloso
IM1841
KIT RADIOIMMUNOLOGICO PER LA DETERMINAZIONE La scheda tecnica sulla sicurezza è disponibile su
techdocs.beckmancoulter.com
IN VITRO DEL CORTISOLO IN SIERO, PLASMA E URINE
UMANI
Per uso diagnostico in vitro. RACCOLTA, MANIPOLAZIONE, DILUIZIONE E
CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI
PRINCIPIO Campioni di siero o plasma
Il dosaggio del cortisolo è un metodo radioimmunologico competitivo. E’ • Raccogliere i campioni in provette senza anticoagulante o con EDTA.
possibile utilizzare lo stesso kit sia per il dosaggio diretto del cortisolo in
siero, plasma e urine, che per il dosaggio nelle urine dopo estrazione con • Separare per centrifugazione il siero o il plasma dalla parte
diclorometano, evaporazione del solvente e risospensione con calibratore corpuscolata.
zero. • Icampioni possono essere conservati fino a 24 ore a 2-8 °C o, suddivisi
Campioni di siero, plasma, urine o estratti di urine, calibratori e controlli in aliquote, a –20 °C o a temperature inferiori per periodi più lunghi (fino
sono incubati insieme a cortisolo marcato con 125I in provette sensibilizzate ad 3 mesi). Evitare ripetuti cicli di congelamento – scongelamento dei
con un anticorpo monoclonale anti cortisolo. Dopo l’incubazione, le provette campioni. Lo scongelamento deve avvenire a temperatura ambiente.
vengono aspirate e contate in un contatore gamma. La radioattività legata • I campioni con concentrazioni superiori a quelle dello calibratore più
alle provette è inversamente proporzionale alla concentrazione di cortisolo elevato devono essere diluiti con lo calibratore zero.
in campioni e calibratori. Si traccia una curva di taratura e si calcolano per
interpolazione sulla curva le concentrazioni dei campioni. Campioni di urine
• Raccogliere in un contenitore le urine delle 24 ore.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
Considerazioni generali • Determinare il volume delle urine.
• Aprire i flaconi dei calibratori e controlli nel più breve tempo possible • Se non si esegue il dosaggio entro 24 ore, conservare alcune aliquote
per evitarne l’eccessiva evaporazione. di urine a –20 °C o a temperature inferiori (fino ad 1 settimana). Lo
scongelamento deve avvenire a temperatura ambiente.
• Non utilizzare reattivi di lotti diversi.
• Se i campioni hanno una concentrazione più elevata del valore
• Inserire la curva standard in ogni esperimento. dell’ultimo calibratore devono essere diluiti con acqua distillata.
• Eseguire il dosaggio in duplicato.
MATERIALI FORNITI
• Le provette sono monouso. I reattivi, conservati a 2-8 °C, sono stabili fino alla data di scadenza riportata
Norme di radioprotezione sul kit. Le date di scadenza riportate sulle etichette di ciascun flacone si
riferiscono alla conservazione dei reattivi stabilita in produzione, prima del
L’acquisto, la detenzione, l’utilizzo e il trasporto di materiale radioattivo sono loro inserimento nel kit.
soggetti a regolamentazione locale. Lo scrupoloso rispetto delle norme per
l’uso di sostanze radioattive fornisce una protezione adeguata agli utilizzatori. Provette sensibilizzate con un anticorpo monoclonale anti cortisolo: 2
Nei luoghi dove si usano sostanze radioattive non è consentito consumare x 50, pronte per l’uso.
cibi o bevande, fumare o usare cosmetici. Cortisolo125I: 1 flacone da 55 mL (pronto per l’uso)
• Nei luoghi dove si usano sostanze radioattive non è consentito Il flacone contiene 55 mL di cortisolo in soluzione, marcato con 125I, con attività
consumare cibi o bevande, fumare o usare cosmetici. totale: < 185 kBq alla data della marcatura, in tampone con albumina bovina,
• Non pipettare materiale radioattivo con pipette a bocca. sodio azide (< 0,1%) e un colorante.
• Usare sempre guanti e camici da laboratorio quando si manipola Calibratori cortisolo: 5 flaconi con 0,5 mL di calibratore 1-5 e 1 flacone
materiale radioattivo. con 5 mL di calibratore zero (pronti per l’uso)
• Tutte le manipolazioni di sostanze radioattive devono essere fatte in I flaconi degli calibratori contengono cortisolo a concentrazioni comprese tra
posti appropriati, lontano da corridoi ed altri posti affollati. 0 e circa 2000 nmol/L, in tampone con albumina bovina, sodio azide (<0,1%).
L’esatta concentrazione degli calibratori è riportata sulle etichette dei flaconi.
• Le sostanze radioattive devono essere conservate in propri contenitori Gli calibratori sono calibrati contro la preparazione di riferimento ERM-DA192
in appositi locali che devono essere interdetti alle persone non e 193.
autorizzate.
E' possibile ordinare separatamente il calibratore zero aggiuntivo (cat. #
• Deve essere tenuto un registro di carico e scarico del materiale IM1959 - 10 mL, IM3444 - 250 mL).
radioattivo.
Nota: L’eventuale presenza di coagulato nel marcato non ha alcun effetto
• Il materiale di laboratorio e la vetreria deve essere dedicato all'uso di sulla qualità della determinazione.
isotopi specifici per evitare cross-contaminazioni.
Controllo: 1 flacone da 0,5 mL (pronto per l’uso)
• In caso di contaminazione o dispersione di materiale radioattivo, fare
riferimento alle norme locali di radioprotezione. Il controllo contiene albumina bovina e sodio azide (<0,1%). L’intervallo dei
valori attesi è indicato sul foglio del controllo di qualità.
• I rifiuti radioattivi devono essere smaltiti secondo le norme locali di
radioprotezione. MATERIALI RICHIESTI MA NON FORNITI
Sodio azide Oltre alla normale attrezzatura da laboratorio, è richiesto il materiale
seguente:
Alcuni reattivi contengono sodio azide come conservante, che può reagire
con piombo, rame o ottone presenti nelle tubature di scarico per formare Per il dosaggio diretto di cortisolo in siero, plasma e urine:
metallo-azidi esplosive. Smaltire questi reattivi facendo scorrere abbondante • Micropipette di precisione (50 µL)
acqua negli scarichi.
• pipette semi-automatiche (500 µL).
Materiale di origine umana
• agitatore tipo vortex.
Manipolare tutti i campioni di sangue come potenziali fonti di infezioni. (Ad
es. epatite o AIDS). • agitatore oscillante per provette.
Diclorometano • sistema di aspirazione.
Il diclorometano è un solvente altamente volatile ed infiammabile. • contatore gamma programmato per leggere 125I.
L'estrazione e l'evaporazione deve essere fatta sotto cappa ventilata. Per il dosaggio con estrazione del cortisolo nelle urine
Mantenere il solvente lontano da fonti di calore. Non pipettare il reagente
con la bocca. • Diclorometano, purezza analitica, senza etanolo.

PI-IM1841–05 11 of 62
 • Pipette in vetro da 2 e 5 mL. Fasi Calibratori e Urine idrolizzate Attività totale (T)
controlli
• Provette con tappo a vite in teflon. 1: Pipettamento
• Evaporatore. Aggiungere
in sequenza
PROCEDURA a provette
Estrazione delle urine (vedi il Schema per il dosaggio diretto del sensibilizzate:
cortisolo su urine) Calibratori o 50 µL - -
Nota: Eseguire l’estrazione in provette di vetro o tubi puliti, lavate controlli
Urine idrolizzate - 50 µL -
precededentemente con diclorometano e chiuse con tappi di vetro o teflon.
Calibratore zero - 50 µL -
Portare i campioni a Temperatura Ambiente e miscealre bene i campioni (Da aggiungere
prima di procedere all'estrazione. solo alle urine)
Estrarre soltanto i campioni; non estrarre i calibratori. Marcato 500 µL 500 µL 500 µL
• Raffreddare in bagno di acqua e ghiaccio la quantità di diclorometano Agitare
necessaria per l'estrazione dei campioni. 2: Incubazione
1 ora a 18-25 °C in agitazione (≥400 rpm)
• Numerare le provette e metterle in bagno di acqua e ghiaccio.
3: Conteggio
• Pipettare 500 µL di urine nelle rispettive provette. Aspirare accuratamente il liquido contenuto nelle
• Aggiungere con una pipetta di vetro 5 mL di diclorometano freddo, provette (eccetto quelle per l'attività totale)
tappare con cura le provette con il tappo di teflon e agitare per almeno Contare le cpm nelle provette per l'attività totale (T)
1 minuto su vortex. e le cpm presenti nelle altre provette (radioattività
legata, bound, alla fase solida) (B).
• Lasciare separare la fase acquosa dalla fase organica a temperatura
ambiente.
• Aspirare e scartare la fase acquosa (fase superiore).
RISULTATI
Le concentrazioni di cortisolo in campioni e controlli vengono calcolate per
• Trasferire con una pipetta in vetro 2 mL della fase organica in provette interpolazione dei rispettivi rapporti di competizione B/T% o B/B0% sulla
in vetro. curva standard. Campioni e controlli devono essere dosati insieme agli
calibratori.
• Evaporare il solvente organico in evaporatore a temperatura ambiente.
Curva standard
• Riprendere gli estratti con 200 µL di calibratore zero. Attendere 15
minuti e agitare vigorosamente su vortex. I risultati registrati dal reparto responsabile del controllo di qualità sono stati
calcolati utilizzando l’adattamento della curva con metodo spline con B/T
Schema del dosaggio per siero, plasma e urine estratte: o B/B0 sull’asse verticale logit e la concentrazione di analiti dei calibratori
Prima dell'uso lasciare equilibrare i reattivi a temperatura ambiente. sull’asse orizzontale logaritmico (nmol/L).

Fasi Calibratori e Siero, plasma o Attività totale (T) Altri metodi di interpolazione dati possono dare risultati leggermente
controlli urine estratte differenti.
1: Pipettamento Totale attività: 66.953 cpm
Aggiungere Calibratori Cortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
in sequenza
0 0 62.217 92,9 100
a provette
sensibilizzate: 1 20 53.531 80,0 86,0
Calibratori o 50 µL - - 2 70 38.175 57,0 61,4
controlli 3 200 21.730 32,5 34,9
Siero, plasma o - 50 µL - 4 700 9.233 13,8 14,8
urine estratte 5 2000 4.271 6,38 6,87
Marcato 500 µL 500 µL 500 µL
(Esempio di curva standard. Non usare per calcolare il valore dei propri
Agitare
campioni)
2: Incubazione
1 ora a 18-25 °C in agitazione (≥400 rpm) Campioni
3: Conteggio Calcolare B/T o B/B0 per ogni campione (siero o plasma), riportarlo sull’asse
Aspirare accuratamente il liquido contenuto nelle delle ordinate e leggere le concentrazioni corrispondenti sull’asse delle
provette (eccetto quelle per l'attività totale) ascisse.
Contare le cpm nelle provette per l'attività totale (T) Fattore di conversione per passare da nmol/L a ng/mL: nmol/L x 0,362 =
e le cpm presenti nelle altre provette (radioattività ng/mL
legata, bound, alla fase solida) (B).
Siero, plasma e urine estratte.
Schema per il dosaggio diretto del cortisolo su urine: I risultati ottenuti sono espressi in nmol/L. Il metodo per calcolare l’escrezione
Prima dell'uso lasciare equilibrare i reattivi a temperatura ambiente. urinaria di cortisolo nelle 24 ore è descritto nel paragrafo seguente.
Urine dosate con il metodo diretto
Moltiplicare il valore trovato per 1,09, per correggere la diluizione dovuta
all’aggiunta di 50 µL di calibratore zero alla miscela di reazione.
In caso di non concordanza tra i dati ottenuti con il metodo diretto e la diagnosi
clinica o strumentale, si consiglia di ripetere il dosaggio del CORTISOL RIA
KITo dopo estrazione delle urine con diclorometano e confrontare i valori
ottenuti.
L’escrezione urinaria di cortisolo nelle 24 ore (Q) (nmol/24 ore) è:

Q = U x V

dove
U = concentrazione di cortisolo nelle urine (nmol/L)
V = volume delle urine delle 24 ore L/24 ore.

PI-IM1841–05 12 of 62
VALORI ATTESI Inter-saggio
Ogni laboratorio deve stabilire i propri limiti di riferimento in campioni
Campioni sono stati dosati in duplicato in 17 risp.10 differenti serie. Il
provenienti da soggetti caratterizzati clinicamente. Si prega di considerare
coefficiente di variazione trovato è inferiore o uguale al 9,2% per i campioni
solo come guida i valori sotto riportati.
di siero, 13,3% per urine e 12,6% per urine estratte.
Siero:
Accuratezza
Mattino: 263 - 724 nmol/L (n=69) Sera: 49 - 430 nmol/L (n=84)
Test di diluizione
Urine (n = 66)
Il test di diluizione è stato effettuato con diluizioni seriali di campioni ad elevata
Dosaggio Media (nmol/24 Deviazione Limiti per il 95% concentrazione di cortisolo, con percentuali di recupero comprese tra 86% e
ore) standard della popolazione 115% per i campioni di siero, 80,1% - 118% per urine e 81,4% - 112% per
(nmol/24 ore) (nmol/24 ore) urine estratte.
Diretto 114 55 38 - 208 Test di recupero
Dopo estrazione 103 45 30 - 197 E’ stata aggiunta una quantità nota di cortisolo a campioni, con percentuali
di recupero comprese tra 95% e 113% per i campioni di siero, 82,6% - 107%
Informazioni dettagliate sui valori attesi per i bambini (ordinati per età per urine e 83,0% - 119% per urine estratte.
e sesso) si possono trovare in “APPENDIX”).
Intervallo di misurazione (da sensibilità analitica a calibratore più elevato):
CONTROLLO DI QUALITÀ da 5,0 a circa 2.000 nM.
Si consiglia ad ogni laboratorio di dosare regolarmente sieri di controllo per
verificare la qualità dei risultati ottenuti. Questi campioni devono essere LIMITAZIONI
manipolati esattamente come i campioni in esame; i risultati devono essere Rispettare accuratamente le istruzioni d'uso per evitare risultati aberranti.
analizzati con metodi statistici appropriati. I risultati devono essere interpretati in base alla valutazione clinica
In caso il kit fosse danneggiato o i dati ottenuti mostrino un alterazione della complessiva della paziente, che comprende la storia clinica, i dati ottenuti
performance, si prega di contattare il distributore locale o di scrivere al indizzo con altri test diagnostici o strumentali ed altre informazioni appropriate.
e-mail seguente: imunochem@beckman.com Non usare campioni emolizzati, itterici o lipemici.
CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI Nonostante le basse cross-reazioni con i farmaci steroidei, e in particolare,
(ulteriori dati sono riportati in APPENDICE) con prednisolone e prednisone, la terapia con farmaci ad alte dosi può
provocare un falso aumento delle concentrazioni di cortisolo nel siero e
Vengono forniti dati rappresentativi a mero scopo illustrativo. I risultati nelle urine, dovuto all’interferenza da parte del farmaco somministrato o di
possono variare da laboratorio a laboratorio. suoi metaboliti. Si consiglia pertanto di non dosare con il dosaggio diretto
Sensibilità analitica: 5 nM campioni di pazienti in tera.
Specificità Nei test anticorpali, esiste la possibilità di interferenza degli anticorpi eterofili
presenti nei campioni dei pazienti. I pazienti regolarmente a contatto con
L’anticorpo utilizzato nel dosaggio è altamente specifico per il cortisolo. animali o sottoposti a immunoterapia o a procedure diagnostiche a base
Cross-reazioni molto ridotte sono state trovate con steroidi naturali di immunoglobuline o frammenti di immunoglobuline possono produrre
(Aldosterone, Corticosterone, Cortisone, 11-Desossicortisol, Progesterone anticorpi, p.e. HAMA, che interferiscono con gli immunodosaggi.
ed altri) o con farmaci assunti dai pazienti o loro metaboliti (Prednisolone,
Prednisone, Spironolattone ed altri). Tali anticorpi interferenti possono portare a risultati errati. Valutare
attentamente i risultati di pazienti che potrebbero presentare questi anticorpi.
Precisione
Intra-saggio
Campioni sono stati dosati 10 risp. 25 volte nella stesse serie. Il coefficiente
di variazione trovato è inferiore o uguale al 5,8% per i campioni di siero, 8,9%
per urine e 9,4% per urine estratte.

PI-IM1841–05 13 of 62
CORTISOL RIA KIT CLASIFICACIÓN DE MATERIAL PELIGROSO
IM1841 SEGÚN EL SGA
No clasificado como tóxico
RADIOINMUNOANALISIS PARA LA DETERMINACIÓN
CUANTITATIVA IN VITRO DE CORTISOL EN SUERO, La hoja de datos de seguridad está disponible en
PLASMA U ORINA HUMANOS techdocs.beckmancoulter.com
Para uso diagnóstico in vitro.
RECOLECCIÓN, PROCESAMIENTO,
PRINCIPIO ALMACENAMIENTO Y DILUCION DE LAS
El ensayo de cortisol es un radioinmunoanálisis competitivo. El mismo equipo
puede ser empleado para medir los niveles de cortisol: MUESTRAS
. Muestras de suero y plasma
● ya sea directamente en suero, plasma u orina,
● ó después de la extracción de la orina con diclorometano y evaporación • Recolectar la muestra de sangre en un tubo sin aditivos ó con
del solvente seguida de la resuspensión con el calibrador Cero. anticoagulante: EDTA.
Las muestras de suero, plasma u orina, extractos de orina, controles • Separar el suero o el plasma de las células mediante centrifugación.
y calibradores se incuban en los tubos recubiertos con el anticuerpo • Las muestras séricas y/ó plasmáticas pueden ser conservadas entre
monoclonal junto con el trazador de cortisol marcado con I125. Después de 2 ºC y 8 ºC si el ensayo habrá de efectuarse dentro de las siguientes
la incubación se aspira el contenido líquido de los tubos y a continuación se 24 horas. Si se requiere conservar las muestras durante un periodo
determina la radiactividad unida mediante un contador gamma. Se prepara mayor (3 meses máximo), preparar alícuotas para evitar repetidas
una curva estándar y los valores desconocidos se determinan mediante descongelaciones y congelaciones; y conservar las muestras a < –20
interpolación con dicha curva. °C. La descongelación de las muestras debe realizarse a temperatura
ambiente.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Generales • Las muestras que presenten concentraciones más altas, a aquella del
calibrador de mayor concentración, diluirlas con el calibrador Cero.
• Los viales de los calibradores y controles deben ser abiertos durante
el menor tiempo posible, para así evitar evaporaciones excesivas. Muestras de la orina
• No mezclar los reactivos de lotes diferentes. • Colectar la orina de 24 horas en un frasco
• Incluir una curva estandar en cada ensayo. • Determinar el volumen
• Se recomienda realizar el ensayo por duplicado. • De ser necesario, conserve alícuotas de la muestra a < –20 °C, 1
semana máximo. La descongelación de las muestras debe realizarse
• Cada tubo debe estar utilizado solamente una vez. a temperatura ambiente.
Seguridad radiológica • Es necesario diluir con el agua destilada las muestras presentan
La compra, posesión, uso y transferencia de material radiactivo están sujetas concentraciones mayores a las del calibrador más alto.
a las disposiciones legales del país en el que se las utiliza. El cumplimiento
de las normas básicas de seguridad radiológica debe proporcionar una MATERIALES PROPORCIONADOS
protección adecuada. Todos los reactivos son estables entre 2 y 8 °C hasta la fecha de caducidad
del equipo indicada en las etiquetas. Las fechas de caducidad impresas
• No se debe comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos en presencia sobre las etiquetas de los frascos son válidas sólo para el fabricante, durante
de materiales radiactivos. su almacenamiento a largo plazo hasta antes del ensamblaje del equipo. No
• No pipetear las soluciones radiactivas con la boca. tener en cuenta.
• Evitar cualquier contacto con materiales radiactivos mediante el uso Tubos recubiertos de anticuerpo monoclonal anti-Cortisol: 2 x 50 tubos,
de guantes y bata de laboratorio. (listos para usar).
• Toda manipulación de material radiactivo debe realizarse en el lugar Trazador de Cortisol con I125: un frasco x 55 mL (listo para usar).
adecuado, alejado de corredores y espacios ocupados. El frasco contiene 185 kBq (el día de su elaboración) de cortisol marcado
• Los materiales radiactivos deben almacenarse en el contenedor con 125I en buffer con albúmina sérica bovina, + azida sódica (<0,1 %) y un
aprobado en una zona especializada. colorante.
• Se debe llevar y conservar actualizado un registro de las entradas y Calibradores: 5 frascos x 0,5 mL + 1 frasco x 5 mL de calibrador Cero
almacenamiento de todos los productos radiactivos. (listos para usar).
• El equipo y material de vidrio de laboratorio que son objeto de Los frascos de los calibradores contienen cortisol en concentraciones desde
contaminación se deben separar para evitar la contaminación con 0 hasta aproximadamente 2000 nM en buffer con albúmina sérica bovina, +
otros radioisótopos. azida sódica (<0,1 %). La concentración exacta se indica en cada etiqueta.
Los calibradores fueron calibrados frente a una preparación de referencia
• Cada caso de contaminación radiactiva, o de pérdida de materiales ERM-DA192 y 193.
radiactivos se debe resolver de acuerdo con los procedimientos
establecidos. El calibrador cero puede ser también pedido por separado, cod # IM1959 -
10 mL, IM3444 - 250 mL.
• El desecho radiactivo debe manipularse de acuerdo a las reglas
establecidas por el país donde se utiliza. Nota: La presencia ocasional de turbidez en el calibrador cero no afecta el
desarrollo del ensayo.
Azida sódica
Testigo o Control: 1 frasco x 0,5 mL (listo para usar).
Algunos reactivos contienen azida sódica como conservador. La azida
sódica puede reaccionar con el plomo, el cobre y el bronce para formar El vial contiene cortisol en buffer con albúmina sérica bovina y azida
azidas metálicas explosivas. Deseche los reactivos a través del sistema de sódica (<0,1 %). Los valores esperados se encuentran en el intervalo de
drenaje mediante lavado con grandes cantidades de agua. concentraciones indicada en un suplemento.
Material de origen humano MATERIALES NECESARIOS PERO NO
Todas las muestras de sangre deben manejarse como si fueran capaces de INCLUIDOS
transmitir enfermedades (ej. hepatitis o SIDA). Además del equipo normal de laboratorio se requiere lo siguiente:
Diclorometano Para el análisis directo de Cortisol en suero, plasma u orina:
El diclorometano es un solvente muy volatil e inflamable. Su extraccíon y • Micropipetas de precisión (50 µL).
evaporacíon deben realizarse en una campana de flujo laminar. Mantener
fuera de toda flama. No pipetar los reactivos con la boca. • pipeta semiautomática (500 µL).

PI-IM1841–05 14 of 62
 • mezclador tipo vórtex. Pasos: Calibradores y muestras de Tubos para radio
controles orina - actividad total
• Agitador horizontal u orbital. (T)
• sistema de aspiración. 1: Agregados
• contador gamma calibrado para I125. A los tubos
recubiertos
Para el análisis de Cortisol extraído en orina (opcional): de anticuerpo
• Diclorometano de grado analítico (cloruro de metileno), sin estabilizar agregar
con etanol. sucesivamente:
calibradores o 50 µL - -
• Pipetas de vidrio graduadas: 2 y 5 mL. controles
• Tubos o frascos de vidrio con tapón de rosca recubierto con teflón. muestras de - 50 µL -
orina
• Evaporador. el calibrador cero - 50 µL -
( Atención : sólo
PROCEDIMIENTO para muestras
Extracción de la orina (opcional, ver Procedimiento para el ensayo
de orina)
directo de cortisol urinario)
trazador 500 µL 500 µL 500 µL
Nota: La extracción debe realizarse en frascos de vidrio o tubos pre-lavados Mezclar
con diclorometano y cubiertos con teflon o tapones de vidrio. 2: Incubación
Llevar las muestras a temperatura ambiente y mesclar bien antes de 1 hr a temperatura ambiente (18 a 25 ºC)
comenzar la extraccíon con agitación (≥400 rpm).
Las muestras deben extraerse solo antes del ensayo. No extraer los 3: Conteo
calibradores. Aspirar cuidadosamente el contenido de cada
tubo (excepto el de los dos tubos destinados para
• Enfriar un volumen suficiente de diclorometano en baño de hielo. determinar la radioactividad total (T)
• Numerar los tubos o los matraces. Determinar las cpm enlazadas (B) y las cpm totales (T).
• Colocar 500 µL de la muestra de orina a los frascos numerados al
tiempo que éstos se conservan en hielo. RESULTADOS
Los resultados se obtienen por interpolación con la curva estándar. La curva
• Agregar 5 mL de diclorometano con la ayuda de una pipeta de vidrio, estándar se usa para determinar las concentraciones del cortisol en muestras
tapar cuidadosamente y agitar en el vórtex durante un minuto. analizadas al mismo tiempo que los calibradores.
• Permitir que las dos fases separen a la temperatura ambiente. Curva estándar
• Descartar la fase superior acuosa mediante una pipeta de vidrio o una Los resultados del departamento de control de calidad se calcularon
jeringa. usando el ajuste de curva spline con B/T o B/B0 en el eje logit vertical y la
• Tomar 2 mL de la fase orgánica mediante una pipeta o una jeringa, de concentración de analito de los calibradores en el eje logarítmico horizontal
vidrio. (ng/mL).
• Evaporar por completo la fase orgánica en el evaporador. No calentar. Otros métodos de reducción de datos pueden dar resultados ligeramente
diferentes.
• Disolver el extracto orgánico obtenido con 200 µL del calibrador cero.
Esperar 15 minutos para después agitar vigorosamente con el vórtex. Actividad total: 66 953 cpm
Procedimiento para el ensayo de suero, plasma y extractos de orina Calibradores Cortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
Permitir que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de su uso. 0 0 62 217 92,9 100
1 20 53 531 80,0 86,0
Pasos: Calibradores y Sueros, plasma o Tubos para radio 2 70 38 175 57,0 61,4
controles extractos de orina - actividad total 3 200 21 730 32,5 34,9
(T) 4 700 9233 13,8 14,8
1: Agregados 5 2000 4271 6,38 6,87
A los tubos
recubiertos (Ejemplo de curva estándar, no utilizar para los cálculos)
de anticuerpo
Muestras
agregar
sucesivamente: Para cada muestra marcar sobre el eje vertical el B/T o el B/B0 y leer la
calibradores o 50 µL - - concentración correspondiente de cortisol sobre el eje horizontal.
controles Para convertir los resultados de nmol/L (nM) a ng/mL multiplicar por 0.362.
las muestras de - 50 µL -
suero o extractos Muestras de suero, plasma y orina ensayadas después de la extracción
de orina La concentración es en nanomoles por litro (nM). Los cálculos de la excreción
trazador 500 µL 500 µL 500 µL diaria de cortisol urinario se proporciona en el párrafo siguiente.
Mezclar Muestras de orina ensayadas mediante el procedimiento directo
2: Incubación
1 hr a temperatura ambiente (18 a 25 ºC) El valor se debe multiplicar por 1.09, correspondiente al factor de dilución
con agitación (≥400 rpm). resultante por el agregado de 50 µL del calibrador Cero.
3: Conteo Se sugiere que en los casos en los que haya discrepancia con los datos
Aspirar cuidadosamente el contenido de cada clínicos u otras mediciones verificar los valores obtenidos por análisis directo
tubo (excepto el de los dos tubos destinados para mediante un análisis indirecto después de extracción con diclorometano.
determinar la radioactividad total (T) La excreción diaria del cortisol (Q) (nmol/24 horas) es
Determinar las cpm enlazadas (B) y las cpm totales (T).
Q = U x V
Procedimiento para el ensayo directo de cortisol urinario
Permitir que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de su uso. donde
U = valor del cortisol urinario (nM)
V = volumen en litros de orina por 24 horas.

PI-IM1841–05 15 of 62
VALORES ESPERADOS Inter-análisis
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de
Las muestras se evaluaron por duplicado en 17 resp. 10 series diferentes.
referencia. Los valores que se muestran a continuación fueron obtenidos de
Los coeficientes de variación obtenidos para las muestras de estos sueros
sujetos sanos y deben de considerarse solo como orientativos.
son ≤ a 9,2 %, para orina son ≤13,3 % y para extractos de orina son ≤12,6 %.
Suero
Precisión
Por la mañana: 263 a 724 nM (n = 69) Por la tarde: 49 a 430 nM (n = 84)
Prueba de dilución
Muestras de orina (n = 66)
Las muestras altamente concentradas fueron serialmente diluídas con el
Análisis Promedio Desviación Valores extremos calibrador Cero. Los porcentajes recuperados fueron entre 86 % y 115 %
(nmol/24 hrs) estándar para 95 % de para sueros, 80,1 % - 118 % para orina y 81,4 % - 112 % para extractos de
(nmol/24 hrs) la población orina.
(nmol/24 hrs) Prueba de recuperación
Directo 114 55 38 - 208
A muestras se les agregó cantidades conocidas de cortisol. Los porcentajes
Despues de la 103 45 30 - 197 recuperados fueron entre 95 % y 113 % para sueros, 82,6 % - 107 % para
extracción orina y 83,0 % - 119 % para extractos de orina.
Información detallada acerca de los valores esperados para niños Intervalo de medición (de la sensibilidad analítica al calibrador más
clasificada de acuerdo a la edad y al sexo) puede ser encontrada en la elevado): de 5,0 a 2000 nM aproximadamente.
hoja de datos "APPENDICES".
LIMITACIONES
CONTROL DE CALIDAD El no respetar las instrucciones de uso puede afectar significativamente a los
La obtención de unos resultados óptimos implica la utilizacion de los sueros resultados.
control en cada serie de experimentos para asegurar la calidad de los Los resultados deberán ser interpretados como una ayuda dentro de la
resultados obtenidos. Dichos controles deben se procesados de la misma situación clínica del paciente, incluyendo la historia clínica, así como los
manera que las muestras a analizar. Se recomienda que los resultados datos provenientes de otras testas adicionales.
sean analizados utilizando los métodos estadísticos apropiados.
No utilice muestras hemolizadas, ictéricas o lipémicas.
En caso de detectar un deterioro en el embasado del producto ó que
los resultados expresen una alteración en las características del mismo, A diferencia de la muy poca reactividad cruzada obtenida in vitro con
contactar con el Distribuidor local ó notificar a la dirección de e-mail: corticoides normalmente empleados para tratamientos terapéuticos
imunochem@beckman.com (particularmente prednisolona y prednisona), un tratamiento con dosis altas
de corticoides pueden dar como resultado falsos incrementos de cortisol
CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO urinario y sérico, debido a la interferencia de la sustancia administrada o
(para mayores detalles ver la página de “APENDICES”) de algunos de sus metabolitos. Por lo tanto, no es recomendable realizar
ensayos directos en pacientes que reciben un tratamiento sistemático de
Se facilitan datos representativos solo a modo de ejemplo. El rendimiento corticoides.
obtenido en los distintos laboratorios puede variar.
En los ensayos en los que se utilizan anticuerpos existe la posibilidad
Sensibilidad Analítica: 5 nM de que se produzcan interferencias debido a la presencia de anticuerpos
Especificidad heterófilos en la muestra del paciente. Los pacientes que hayan estado
en contacto regularmente con animales o hayan recibido inmunoterapia
El anticuerpo usado en el inmunoanálisis es altamente específico para o procedimientos diagnósticos con inmunoglobulinas o fragmentos de
cortisol. Este presentó niveles extremadamente bajos de reacción cruzada inmunoglobulinas pueden producir anticuerpos, p.ej. HAMA, que interfieren
con otros esteroides naturales (Aldosterona, Cortisona, Corticosterona, con los inmunoensayos.
11-Desoxi-cortisol, Progesterona, etc.) o drogas terapéuticas que pueden
estar presentes en las muestras de pacientes a analizar (Prednisolona, Esos anticuerpos que crean interferencias pueden causar resultados
Prednisona, Espironolactona, etc.). erróneos. Evaluar cuidadosamente los resultados de los pacientes que se
sospeche que puedan tener esos anticuerpos.
Precisión
Intra- ensayo
Las muestras se evaluaron 10 resp. 25 veces en igual numero de series.
Los coeficientes de variación obtenidos para las muestras de estos sueros
son ≤ a 5,8 %, para orina son ≤8,9 % y para extractos de orina son ≤9,4 %.

PI-IM1841–05 16 of 62
CORTISOL RIA KIT A Ficha de dados de segurança está disponível em
IM1841 techdocs.beckmancoulter.com

RADIOIMUNOENSAIO PARA O DETERMINAÇÃO ‘IN COLHEITA, PROCESSAMENTO,

VITRO’ DE CORTISOL EM SORO, PLASMA E URINA ARMAZENAMENTO, E DILUIÇÃO DAS
HUMANA.
Para fins de diagnóstico in vitro.
AMOSTRAS
Amostras de soro ou plasma
PRINCÍPIO • Colete em tubos contendo EDTA, ou sem aditivos.
O radioimunoensaio de Cortisol é um ensaio de competição. O mesmo kit • Separe o soro ou plasma das células por centrifugação.
pode ser aplicado para a determinação de cortisol:
. • As amostras de soro ou plasma devem ser armazenadas de 2-8
● tanto diretamente no soro, plasma, urina °C, se os ensaios forem realizados no intervalo de 24 horas. Para
● ou após extração da urina com diclorometano e evaporação do solvente, longos períodos (até 3 meses) mantenha congelado à < -20 °C
seguido por resuspensão no calibrador zero. após aliquotar as amostras, evitando assim os repetidos ciclos de
descongelamento. Descongelação da amostra deve ser realizada à
Soro, plasma, urina ou extrato da urina, controles e calibradores são
temperatura ambiente.
incubados em tubo revestido com anticorpo monoclonal e adicionados de
traçador 125I-ligado ao cortisol. Após incubação, o conteúdo líquido do tubo • Qualquer amostra com leituras acima da concentração do calibrador
é aspirado e a ligação à radioatividade é medida. A curva de calibração é mais alto deve ser diluída com o calibrador zero e ensaiada
estabelecida e valores desconhecidos são determinados por interpolação novamente.
da curva padrão.
Amostras de Urina
AVISOS E PRECAUÇÕES • Colete a urina de 24 horas em um frasco.
Orientações Gerais:
• Determine o volume.
• Os frascos dos calibradores e controlos devem estar abertos durante
• Se necessário, armazene aliquotado à < -20 °C, máximo de 1 semana.
o menor tempo possível, de forma a evitar evaporação excessiva.
Descongelação da amostra deve ser realizada à temperatura
• Não misture os reagentes de kits de diferentes lotes. ambiente.
• Uma curva padrão deve ser feita em cada ensaio. • Se a concentração das amostras forem maiores que a do calibrador
mais alto, elas devem ser diluídas com o água destilada.
• É recomendado que o ensaio seja feito em duplicado.
• Cada tubo deve ser utilizado uma vez. MATERIAIS FORNECIDOS
Todos os reagentes do kit são estáveis até a data de validade indicada no
Regras básicas de segurança para radiação
rótulo do kit, se armazenado a 2-8 °C. A data de validade impressa nas
A compra, posse, utilização e transporte de material radioativo está sujeita a etiquetas dos frascos é aplicada no armazenamento a longo prazo dos
regulação do país de uso. A adequada proteção será oferecida seguindo-se componentes pelo fabricante. Não levar em consideração.
as regras básicas de segurança para radiação.
Tubos revestidos com Anti-cortisol monoclonal: 2 x 50 tubos (pronto
• Não comer, beber, fumar ou aplicar cosméticos na presença de para uso)
materiais radioativos.
Traçador 125I-ligado ao cortisol: um frasco 55 mL (pronto para uso)
• Não pipetar o material radioativo com a boca.
O frasco contém, na data de fabricação, 185 kBq de [125I] ligado ao cortisol,
• Evite qualquer contato com o material radioativo utilizando-se luvas e em tampão com albumina de soro bovino e azida sódica (<0,1%) e corante.
EPI’s de laboratório.
Calibrators: 5 frascos com 0,5 mL e 1 frasco com 5 mL do calibrador
• Toda a manipulação de material radioativo deve ser feita em local «zero» (pronto para uso)
apropriado, distante de corredores e locais muito utilizados.
O calibrador contém de 0 a, aproximadamente 2000 nM de cortisol
• Materiais radioativos devem ser armazenados no frasco fornecido e em tampão com albumina de soro bovino e azida sódica (<0,1%). A
em área designada. concentração exata está indicada no rótulo de cada frasco. Os calibradores
• O registro de recepção e armazenamento de produtos radioativos foram calibrados com uma preparação de referência ERM-DA192 e 193.
devem ser mantidos atualizados. O calibrador zero pode ser adquirido separadamente (cat. # IM1959 - 10 mL,
• Equipamentos laboratoriais e vidrarias que estão sujeitas à IM3444 - 250 mL).
contaminação devem ser separados para prevenir a contaminação Nota: O carlibrador zero, ocasionamente, pode parecer turvo, isto não afeta
cruzada de radioisótopos diferentes. o desempenho do ensaio.
• Cada caso de contaminação ou perda de material radioativo deve ser Amostra Controle: um frasco 0,5 mL (pronto para uso)
efetuada de acordo com os procedimentos estabelecidos.
Os frascos contém cortisol em tampão com albumina de soro bovino e
• Descarte dos reagentes e materiais deve ser de acordo com a azida sódica (<0,1%). O valor esperado de concentração está indicado num
regulamentação aplicável. suplemento.
Azida Sódica
MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO
Alguns dos reagentes contêm azida de sódio como conservante. A azida
de sódio reage com chumbo e cobre das canalizações e forma azidas FORNECIDOS
metálicas altamente explosivas. Ao descartar os líquidos, deixe correr Em adição ao material usual de laboratório, é ainda necessário:
grande quantidade de água a fim de prevenir a formação destas azidas. Para ensaio direto do cortisol no soro, plasma ou urina
Material de origem humana • micropipeta de precisão (50 µL).
Todas as amostras de soro e plasma devem ser tratadas e manuseadas • pipeta semi-automatica (500 µL).
como infectantes para hepatite ou AIDS.
• agitador tipo vortex
Diclorometano
• agitador orbital ou horizontal.
Diclorometano é um solvente altamente volátil e inflamável. A extração e a
• sistema de aspiração.
evaporação deve ser feita em capela ventilada. Mantenha longe da chama.
Não pipete reagentes com a boca. • Contador Gama ajustado para iodo 125.

CLASSIFICAÇÃO DE PERIGO GHS

Não classificado como perigoso

PI-IM1841–05 17 of 62
Paro o ensaio de extrato de cortisol na urina (opcional) Passos Calibradores e Urina Tubos para
control contagem total
• diclorometano de grau analítico (cloreto de metileno), não estabilizado (T)
com etanol. 1: Adições
• pipetas de vidro de 2 e 5 mL. Ao tubo
revestido,
• tubos de vidro ou frascos com tampa.
adicione
• evaporador. sucessivamente:
calibradores ou 50 µL - -
PROCEDIMENTO controles
Extração da Urina (opcional, veja Procedimento para ensaio direto de amostras de - 50 µL -
cortisol na urina). urina
Nota: A extração deve ser feita em tubos ou frascos de vidros limpos, pré calibrador zero - 50 µL -
humedecidos com diclorometano e tampados. (atenção: Só
para amostras
Colocar as amostras à temperatura ambiente e misturar bem antes de de urina)
começar a extração.
traçador 500 µL 500 µL 500 µL
As amostras devem são extraídas apenas antes do ensaio, não extrair Agitar
calibradores. 2: Incubação
• Esfrie um volume suficiente de diclorometano em um banho de gelo. 1 hora entre 18-25 °C com agitação (≥400 rpm)
• Numere os tubos ou frascos. 3: Contagem
Aspire cuidadosamente o conteúdo dos tubos (exceto
• Adicione 500 µL de amostra de urina em um tubo mantido no gelo. os dois tubos para contagem total).
• Adicione 5 mL de diclorometano usando uma pipeta de vidro, tampe Determine a cpm de ligação (B) e a cpm total (T)
cuidadosamente e agite em vórtex por um minuto.
• Deixe as duas fases separar à temperatura ambiente. RESULTADOS
Os resultados são obtidos da curva padrão por interpolação. A curva fornece
• Retire a fase aquosa por aspiração. as concentrações de cortisol nas amostras mensurada ao mesmo tempo dos
• Retire 2 mL da fase orgânica usando uma pipeta de vidro ou seringa. calibradores.
• Evapore a fase orgânica completamente no evaporador. Não aqueça. Curva Padrão
• Retire o extrato orgânico em 200 µL do calibrator zero. Aguarde 15 Os resultados do departamento de controlo de qualidade foram calculados
minutos e agite em vórtex vigorosamente. utilizando um ajuste de curva spline (polynomial) com B/T ou B/B0 no eixo
vertical logit e a concentração de analito dos calibradores no eixo horizontal
Procedimento de ensaio para soro, plasma ou extratos de urina:
logarítmico (nmol/L).
Deixe todos os reagentes atigir a temperatura ambiente antes da pipetagem.
Outros métodos de redução de dados podem dar resultados ligeiramente
Passos Calibradores e Soro, Plasma ou Tubos para diferentes.
control Extratos de Urina contagem total
Atividade total: 66 953 cpm
(T)
Calibradores Cortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
1: Adições
0 0 62 217 92,9 100
Ao tubo
revestido, 1 20 53 531 80,0 86,0
adicione 2 70 38 175 57,0 61,4
sucessivamente: 3 200 21 730 32,5 34,9
calibradores ou 50 µL - - 4 700 9233 13,8 14,8
controles 5 2000 4271 6,38 6,87
amostra de soro - 50 µL -
ou extrato urina (Exemplo de curva padrão, não utilize para cálculo)
traçador 500 µL 500 µL 500 µL Amostras
Agitar
Estabeleça a relação B/T para cada amostra ou B/B0 no eixo vertical da curva
2: Incubação padrão e leia a concentração de cortisol correspondente da amostra no eixo
1 hora entre 18-25 °C com agitação (≥400 rpm) horizontal em nmol/L.
3: Contagem
Para conversão de nmol/L (nM) para ng/mL, multiplique o resultado por
Aspire cuidadosamente o conteúdo dos tubos (exceto 0.362.
os dois tubos para contagem total).
Determine a cpm de ligação (B) e a cpm total (T) Soro plasma ou urina ensaiadas após a extração
A concentração é em nanomols por litro (nM). O cálculo da excreção diária
Procedimento para ensaio direto de cortisol na urina: de cortisol é dada no parágrafo seguinte.
Deixe todos os reagentes atigir a temperatura ambiente antes da pipetagem. Amostras de urina ensaiadas pelo procedimento direto
O valor deve ser multiplicado por 1.09, o fator de diluição devido a adição de
50 µL do calibrador zero.
É sugerido que, em casos onde há desacordo com o dado clínico ou
outras determinações, checar o valor obtido no ensaio direto por um ensaio
utilizando a extração com diclorometano.
A excreção diária do cortisol na urina (Q) (nmol/24horas) é:

Q = U x V

onde
U = valor do cortisol na urina (nM)
V = volume de urina em litros/24 horas

PI-IM1841–05 18 of 62
VALORES ESPERADOS Inter-ensaio
É sugerido que cada laboratório estabeleça seus próprios valores normais.
Amostras foram testadas em duplicatas em 17 resp. 10 séries diferentes. Os
Os seguintes valores obtidos com sujeitos saudáveis são somente
coeficientes de variação encontrados foram iguais ou abaixo de 9,2% para
indicativos:
amostras de soro, ≤13,3% para urina e ≤12,6% para extratos de urina.
Soro:
Exactidão
Manha: 263 to 724 nM (n = 69) Tarde: 49 to 430 nM (n = 84)
Teste de Diluição
Urina (n = 66)
Altas concentrações foram diluídas em série com o calibrador zero. As
Ensaio Média (nmol/24h) Desvio padrão Valores extramos porcentagens de recuperação obtidas foram entre 86% e 115% para
(nmol/24h) para 95% da amostras de soro, entre 80,1% e 118% para urina e entre 81,4% e 112%
população para extratos de urina.
(nmol/24h) Teste de Recuperação
Direto 114 55 38 - 208
Em baixas concentrações foram adicionadas quantidades conhecidas de
Após extração 103 45 30 - 197 cortisol. As porcentagens de recuperação obtidas foram entre 95% e 113%
para amostras de soro, entre 82,6% e 107% para urina e entre 83,0% e
Pode encontrar informação detalhada sobre os valores esperados nas 119% para extratos de urina.
crianças (de acordo com idade e género) no “APPENDIX”.
Intervalo de medição (da sensibilidade analítica ao calibrador mais alto):
CONTROLO DE QUALIDADE 5,0 a aproximadamente 2000 nM.
As boas práticas de laboratório implicam que o controle das amostras
seja feito regularmente para garantir a qualidade dos resultados obtidos. LIMITAÇÕES
Estes controles devem ser processados exatamente da mesma maneira O não cumprimento das instruções deste protocolo pode afectar,
das amostras do ensaio, e é recomendado que os seus resultados sejam significativamente, os resultados.
analisados utilizando um método estatístico adequado. Os resultados devem ser interpretados conjuntamente com a clínica do
Em caso de deterioração da embalagem ou se o dado obtido mostrar alguma doente, incluindo história clinica, dados de testes adicionais e outras
alteração de performance, por favor contacte o distribuidor local ou utilize o informações apropriadas.
seguinte endereço de e-mail: imunochem@beckman.com. Não use amostras intensamente lipêmicas, ictéricas ou hemolizadas.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO Apesar da baixa reatividade cruzada com corticóides usualmente aplicados
(para mais detalhes, veja o “APPENDIX” da ficha de segurança) em terapias, particularmente predinisolona e predinisona, tratamentos com
altas doses podem levar à um valor de cortisol aumentado no soro e na urina,
São fornecidos dados representativos apenas para fins ilustrativos. O devido a interferência da substância administrada ou alguns metabólitos. É
desempenho pode variar de um laboratório para outro. desaconselhado efetuar o ensaio de cortisol direto em pacientes recebendo
Sensibilidade analítica: 5 nM terapias sistêmicas com corticóides.
Especificidade Em ensaios que usam anticorpos, há possibilidade de interferência por
anticorpos heterófilos nas amostras de doentes. Os doentes expostos
O anticorpo usado no imunoensaio é altamente específico para cortisol. regularmente a animais, que receberam imunoterapia ou procedimentos
Foram obtidas reatividade cruzada extremamente baixas com os seguintes diagnósticos utilizando imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas
compostos: (Aldosterona, Corticosterona, Cortisona, 11-Desoxicortisol, podem produzir anticorpos, ex. HAMA, que interferem com os imunoensaios.
Progesterona, etc.) ou drogas terapeuticas que podem estar presente nas
amostras. (Prednisolona, Prednisona, Espironolactona, etc.). Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errados. Os
resultados de doentes suspeitos de ter estes anticorpos devem ser avaliados
Precisão com cuidado.
Intra-ensaio
Amostras foram testadas 10 resp. 25 vezes na mesma série. Os coeficientes
de variação encontrados foram iguais ou abaixo de 5,8% para amostras de
soro, ≤8,9% para urina e ≤9,4% para extratos de urina.

PI-IM1841–05 19 of 62
CORTISOL RIA KIT Säkerhetsdatablad finns på techdocs.beckmancoulter.com
IM1841
RADIOIMMUNOASSAY FÖR IN VITRO BESTÄMNING AV PROVINSAMLING, BEARBETNING,
KORTISOL I HUMANT SERUM, PLASMA OCH URIN FÖRVARING OCH UTSPÄDNING
För in vitro diagnostiskt bruk. Serum och plasma prov
• Samla blod i tomma rör eller i rör som innehåller EDTA.
PRINCIP • Separera serum eller plasma från celler genom centrifugering.
Radioimmunoanalysen för kortisol är en kompetitiv analys. Kitet kan
användas för mätning av kortisol på följande sätt: • Serum och plasma prover kan förvaras vid 2-8 °C, om analysen ska
. utföras inom 24 timmar. Vid längre förvaring förvaras proverna frusna
● antingen direkt I serum, plasma eller urin. (< -20 °C, högst 3 månader) efter alikvotering samt undvik upprepad
● eller efter extraktion av urin med diklorometan och evaporering av tining och återfrysning. Prover måste tinas upp vid rumstemperatur
lösningsmedlet, följd av resuspention i nollkalibratorn.
• Prov med koncentration högre än högsta kalibrator måste spädas med
Serum, plasma eller urin prover, urin extrakt, kontroll och kalibratorer noll kalibrator.
inkuberas med monoklonal antikropps-klädda (coatade) rör med 125I-märkt
kortisol tracer. Efter inkuberingen, aspireras det flytande innehållet i Urinprov
röret och bunden radioaktivitet mäts. Kalibreringskurva upprättas och • Samla 24-timmars urin i dunk.
provkoncentrationen bestäms genom interpolering med kurvan.
• Mät volymen.
VARNING OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER • Om nödvändigt, förvara alikvoterad vid < -20 °C, senast en vecka.
Allmänna kommentarer Prover måste tinas upp vid rumstemperatur
• Kalibrator- och kontrollflaskorna skall hållas öppna så kort stund som • Prov med koncentration högre än högsta kalibrator måste spädas med
möjligt för att undvika onödig avdunstning. destillerat vatten.
• Blanda inte reagens från kit med olika batchnummer.
MEDFÖLJANDE MATERIAL
• En standardkurva måste ingå i varje analys. Alla reagens i kitet är stabila till utgångsdatum, vilket återfinns på kitets etikett,
• Det rekommenderas att analysen utförs som dubbelprov. om kitet förvaras vid 2-8 °C. De udløbsdatoer, som er trykt på mærkaterne
på hætteglassene, gælder kun under langtidsopbevaring af komponenter hos
• Rören är av engångstyp. producenten.
Grundregler för strålningssäkerhet. Anti-kortisol monoklonal antibody-coatede rör: 2 x 50 rör (klara att
Inköp, innehav ooch transport av radioaktivt material är föremål för användas)
regelverket i det land som använder materialet. Följs grundreglerna för 125
I-märkt kortisol tracer: en flaska om 55 mL (klar att använda)
strålningssäkerhet ska detta ge tillräckligt skydd.
Flaskan innehåller 185 kBq, vid märkningstillfället, 125I-märkt kortisol i buffert
• Intag av föda och dryck, rökning eller användande av kosmetika får ej innehållande bovint serumalbumin, natriumazid (<0,1 %) och en färg.
förekomma vid hantering av radioaktivt materials.
Kalibratorer: 5 flaskor med 0,5 mL och 1 flaska med 5 mL «noll»
• Pipettera inte radioaktivt material med munnen. kalibrator (klar att använda)
• Undvik all kontakt med radioaktivt material genom att använda Kalibrator flaskorna innehåller 0 till ungefär 2 000 nM kortisol i buffert med
handskar och laboratoriekläder. bovint serum albumin och natriumazid (<0,1 %). Den exakta koncentrationen
• All hantering av radioaktiva substanser ska ske på lämplig plats, på anges på varje flasketikett. Kalibratorn är ställd mot referens preparationen
avstånd från korridor och andra “trafikerade” platser. ERM-DA192 och 193.
• Radioaktivt material skall förvaras i medföljande behållare, på angiven Noll-kalibrator kan beställas separat (kat. #IM1959 – 10 mL eller IM3444 –
plats. 250 mL).
• Ett dokument över alla mottagna och förvarade radioaktiva produkter Notera: Grumlighet kan förekomma i noll-kalibratorn men denna påverkar ej
ska hållas uppdaterat. analysresultaten.
• Laboratorieutrustning och glasvaror, vilka är föremål för Kontroll: en flaska 0,5 mL vial (klar att använda )
kontamination, ska hållas åtskilda för att förebygga smitta mella olika Flaskorna innehåller kortisol i buffert med bovint serum albumin och natrium
radioisotoper. azid (<0,1 %). De förväntade nivåerna indikeras i koncentrationsområdet
• Varje fall av radioaktiv kontaminering eller förlust av radioaktivt vilket indikeras i kitets supplement.
material ska löss enligt gällande bestämmelser.
MATERIAL SOM BEHÖVS MEN INTE
• Radioaktivt avfall ska hanteras enligt de bestämmelser som gäller i
respektive land. MEDFÖLJER
Förutom standard laboratorieutrustning, behövs följande:
Natriumazid
För direkt analys av serum, plasma eller urin kortisol
Vissa reagens har natriumazid som konserveringsmedel. Natriumazid kan
reagera med bly, koppar eller mässing och bilda explosiva metallazider. Gör • precisionspipet (50 µL).
av med reagenset genom att spola med stora mängder vatten genom avlopps • semi-automatisk pipett (500 µL).
systemet.
• vortex mixer.
Material av mänskligt ursprung
• horisontal eller orbital skak.
Alla serum och plasma prover ska hanteras som om de kan överföra hepatit
och HIV. • aspirationssystem.
Diklormetan • gammaräknare.
Diklormetan är ett flyktigt och lättantändligt lösningsmedel. Extraktion och För analys av urin extrakt (option)
evaporering måste göras i dragskåp. Håll avstånd från öppen eld. Pipettera • pro analysi diklorometan, ej etanol-stabiliserad.
ej reagens med munnen.
• 2 och 5 mL glaspipetter.
RISKKLASSIFICERING ENLIGT GHS • glasrör eller rör med teflon-klädd skruvkork.
Ej kategoriserad som farligt
• evaporator.

PI-IM1841–05 20 of 62
METODBESKRIVNING Standardkurva
Extraktion av urin (option l, se Analysprocedur för direkt analys av urin
Resultaten i avdelningen för kvalitetskontroll beräknades med spline-kurvan
kortisol).
anpassad med B/T eller B/B0 för logit på den vertikala axeln och
Not: Extraktion måste göras i rena glasflaskor eller glasrör, förtvättade med analytkoncentrationen för kalibratorerna på den logaritmiska horisontella
diklormetan och utrustade med teflon- eller glaskork. axeln (nmol/L).
Rumstemperera och blanda proverna väl före extraktion. Andra datareduceringsmetoder kan ge något annorlunda resultat.
Endast prov ska extraheras före analys, extrahera inte kalibratorerna. Total aktivitet: 66 953 cpm
• Kyl en tillräcklig volym diklormetan i isbad. Kalibrator Kortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
• Numrera rör eller flaskor. 0 0 62 217 92,9 100
1 20 53 531 80,0 86,0
• Tillsätt 500 µL urin till numrerade rör förvarade i is. 2 70 38 175 57,0 61,4
• Tillsätt 5 mL diklormetan med en glaspipett, korka noggrant och vortex 3 200 21 730 32,5 34,9
mixa i en minut. 4 700 9 233 13,8 14,8
• Låt de två faserna separera vid rumstemperatur. 5 2000 4 271 6,38 6,87
• Tag bort den övre, vatten, fasen genom aspirering. (Exempel på standardkurva,använd ej för beräkning)
• Ta 2 mL av den organiska fasen med glaspipett eller spruta. Prov
• Evaporera den organiska fasen komplett i evaporator. Får ej värmas. Lokalisera B/T eller B/B0 för varje prov på y-axeln och läs av den
• Lös det organiska extraktet i 200 µL nollkalibrator. Vänta 15 minuter korresponderande kortisol koncentrationen på x-axeln.
och vortex mixa därefter ordentligt. För att omvandla nmol/L (nM) till ng/mL, multiplicera resultatet med 0.362.
Analysprocedur för serum, plasma och urinextrakt: Serum, plasma eller urinprov analyserade efter extraktion
Rumstemperera alla reagens före pipettering. Koncentrationen anges i nanomol per liter (nM). Beräkning av dygnsmängd
urin kortisol ges i följande paragraf.
Steg Kalibratorer & Serum, plasma Rör för total
kontroller el urinextrakt count (T) Urinprov analyserade med direktmetod
1: Tillsätt Värdet ska multipliceras med 1.09, spädningsfaktorn som fås genom tillsats
Till antikropps- av 50 µL noll kalibrator.
coatade rör,
tillsätt successivt: I de fall där resultatet från direktmetoden inte överenstämmer med kliniska
- - data eller andra mätningar föreslås reanalysering med den indirekta metoden
kalibratorer el 50 µL med diklormetan extraktion.
kontroll
serumprov el - 50 µL - Dygnsmängden urinkortisol (Q) (nmol/24 timmar) är:
urinextrakt
tracer 500 µL 500 µL 500 µL Q = U x V
Mixa där
2: Inkubera
1 timme vid 18-25 °C samt skaka ( ≥400 rpm) U = urin kortisol värdet (nM)
3: Count V = volym urin i liter/24 timmar
Aspirera noggrant innehållet i rören (förutom
de två rören för total count). FÖRVÄNTAT VÄRDE
Bestäm cpm bundet (B) och total cpm (T) Vi rekommenderar varje laboratorium att ta framegna normal värden.
Följande värden, som erhållits från friska individer är endast indikativa.
Analysprocedur för direkt analys av urin kortisol: Serum:
Rumstemperera alla reagens före pipettering. Morgon: 263 till 724 nM (n = 69) Kväll: 49 till 430 nM (n = 84)
Steg Kalibratorer & Urine Rör för total Urin (n = 66)
kontroller count (T)
1: Tillsätt Analys Medel (nmol/24t) Standard Referensområde
deviation för 95 % av
Till antikropps-
(nmol/24t) population
coatade rör,
(nmol/24t)
tillsätt successivt:
- - Direkt 114 55 38 - 208
kalibratorer el 50 µL
kontroll Efter extraktion 103 45 30 - 197
urinprov - 50 µL -
- - Detaljerad information om förväntade värden för barn (sorterad efter
noll kalibrator 50 µL ålder och kön) finns i databladet "APPENDIX".
(obs: Endast till
urinprov ) KVALITETSKONTROLL
tracer 500 µL 500 µL 500 µL God laboratorie praxis innefattar regelbunden användning av kontroller, för att
Mixa erhålla försäkranom att kvaliteten bibehålls. Kontrollerna måste behandlas
2: Inkubera på exakt samma sätt som proverna och det rekommenderas att resultaten
1 timme vid 18-25 °C samt skaka ( ≥400 rpm) beräknas med hjälp av lämpliga statistiska methoder.
3: Count Om förpackningen är skadad eller om erhållen data indikerar förändring av
Aspirera noggrant innehållet i rören (förutom prestanda, kontakta er lokala distributor eller använd följande e-mail adress:
de två rören för total count). imunochem@beckman.com
Bestäm cpm bundet (B) och total cpm (T)
PRESTANDAEGENSKAPER
(För mer detljer, se data blad “APPENDIX”)
RESULTAT
Resultaten erhålls genom att interpolera från standardkurvan. Kurvan Representativa data är endast avsedda som exempel. Resultaten i enskilda
möjliggör bestämning av kortisolkoncentrationen i prov vilka mäts vid samma laboratorier kan variera.
tillfälle som kalibratorn.

PI-IM1841–05 21 of 62
Analytisk sensitivitet: 5 nM Mätområde (från analytisk sensitivitet till högsta kalibrator): 5,0 till ca
2 000 nM.
Specificitet
Antikroppen som används i kitet är mycket specifik för kortisol. Extremt BEGRÄNSNINGAR
låg korsreaktivitet erhölls mot andra naturligt förkommande steroider Om instruktionerna i detta produktblad inte följs, kan detta påverka resultaten
(Aldosteron, kortikosterone, kortison, 11-Desoxykortisol, Progesterone, signifikant.
etc.) eller andra therapeutiska substanser som kan finnas i patientprover
Resultaten ska tolkas i ljuset av patientens totala kliniska bild, inklusive klinisk
(Prednisolone, Prednisone, Spironolactone, etc.).
historik, data från ytterligare prover och annan väsentlig information.
Precision
Använd inte hemolyserade, lipemiska eller ikteriska prover.
Intra-assay
Trots mycket låg korsreaktivitet med tillgängliga terapeutiska kortikoider,
Prover analyserades 10 resp. 25 gånger i samma serie. speciellt prednisolon och prednison, kan behandling med höga doser leda
Variationskoefficienten befanns vara under eller lika med 5,8 % för till en artificiell ökning av serum och urin kortisol, beroende på interferens
serumprov, 8,9 % för urine och 9,4 % för urinextrakt. av förskrivna substanser eller någon av dess metaboliter. Det är därför
inte tillrådigt att utföra direkt kortisol analys på patienter som står på
Inter-assay
kortisonbehandling.
Prov analyserades i duplikat i 17 resp.10 olika serier. Variationskoefficienten
För analyser som använder antikroppar finns alltid risk för interferens av
befanns vara under eller lika med 9,2 % för serumprov, 13,3 % för urine och
heterofila antikroppar hos patientprovet. Patienter som regelbundet har
12,6 % för urinextrakt.
kontakt med djur eller har erhållit immunterapi eller annan diagnostisk
Noggrannhet procedur som använder immunoglobuliner eller immunoglobulin fragment
Spädningstest kan producera antikroppar t ex HAMA, vilka interfererar i immunanalyser.

Prover med hög koncentration späddes i serie med noll kallibrator. Erhållen Sådana interfererande antikroppar kan orsaka felaktiga resultat. Utvärdera
recovery låg mellan 86 % och 115 % för serumprov, 80,1 % och 118 % för resultat från patienter som misstänks ha dessa antikroppar med försiktighet.
urine och 81,4 % och 112 % för urinextrakt.
Recovery test
Prover med låg kontration spetsades med kända kvantiteter kortisol. Erhållen
recovery låg mellan 95 % och 113 % för serumprov, 82,6 % och 107 % för
urine och 83,0 % och 119 % för urinextrakt.

PI-IM1841–05 22 of 62
CORTISOL RIA KIT Διχλωρομεθάνιο
IM1841 Το διχλωρομεθάνιο είναι πτητικός και πολύ εύφλεκτος διαλύτης. Η εκχύλιση
και η εξάτμιση να γίνονται κάτω από αεριζόμενο απορροφητήρα. Να
αποφεύγετε κάθε επαφή με φλόγες και να μην πιπετάρετε τα αντιδραστήρια
ΑΝΟΣΟΡΑΔΙΟΜΕΤΡΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ ΓΙΑ ΤΟΝ IN VITRO με το στόμα.
ΠΟΣΟΤΙΚΟ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΗΣ ΚΟΡΤΙΖΟΛΗΣ ΣΤΟΝ
ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ, ΣΤΟ ΠΛΑΣΜΑ ΚΑΙ ΤΑ ΟΥΡΑ ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ ΕΠΙΚΙΝΔΥΝΟΤΗΤΑΣ ΚΑΤΑ ΠΕΣ
Για διαγνωστική χρήση in vitro. Δεν ταξινομείται ως επικίνδυνο

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το Δελτίο δεδομένων ασφάλειας είναι διαθέσιμο στη διεύθυνση
Η εξέταση της κορτιζόλης είναι ραδιοανοσολογική εξέταση ανταγωνισμού. techdocs.beckmancoulter.com
Αυτό το Kit επιτρέπει την εξέταση (ποσοτικό προσδιορισμό):
.
● είτε απευθείας στον ορό, στο πλάσμα ή τα ούρα; ΣΥΛΛΟΓΗ, ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑ, ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ
● είτε έπειτα από αφαίρεση των ούρων με διχλωρομεθάνιο και εξάτμιση της
διαλυτικής ουσίας, σε εκχυλίσματα που έχουν επαναραιωθεί στο απόλυτο ΑΡΑΙΩΣΗ ΤΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ
μηδέν. Δείγματα ορού και πλάσματος

Τα δείγματα ορού, πλάσματος ή ούρων, τα δείγματα ελέγχου, τα δείγματα • Συλλέξτε το αίμα σε στεγνά σωληνάρια χωρίς προσθετικά, σε
ούρων που θα εξεταστούν ή τα βαθμονομητής επωάζονται σε σωληνάρια σωληνάρια με EDTA.
επιστρωμένα με μονοκλωνικό αντίσωμα, μαζί με ιχνηθέτη κορτιζόλη • Διαχωρίστε τον ορό ή το πλάσμα από τα κύτταρα με φυγοκέντρηση.
επισημασμένη με Ιώδιο 125. Μετά την επώαση αποχύνονται τα υγρά
περιεχόμενα των σωληναρίων με απορρόφηση και μετράται η δεσμευμένη • Τα δείγματα ορού ή πλάσματος μπορούν να διατηρηθούν στους
ραδιενέργεια. Κατασκευάζεται πρότυπη καμπύλη και οι άγνωστες τιμές 2-8 °C, αν η εξέταση πρόκειται να γίνει μέσα σε 24 ώρες. Για
προσδιορίζονται με παρεμβολή στην καμπύλη αυτή. μεγαλύτερα χρονικά διαστήματα, είναι προτιμότερο να διατηρούνται
στην κατάψυξη (σε θερμοκρασία χαμηλότερη των -20 °C, για 3 μήνες
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ το πολύ) και κατά προτίμηση χωρισμένα σε μικρότερες ποσότητες,
Γενικές παρατηρήσεις ώστε να αποφεύγεται η επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη. Η
απόψυξη των δειγμάτων πρέπει να γίνεται σε θερμοκρασία δωματίου.
• Τα φιαλίδια των ορών βαθμονόμησης και των ορών ελέγχου πρέπει να
ανοίγονται όσο το δυνατόν λιγότερο, προς αποφυγήν εξατμίσεως του • Αν τα δείγματα που έχουν αναλυθεί έχουν μεγαλύτερη συγκέντρωση
περιεχομένου. από το βαθμονομητής με την υψηλότερη συγκέντρωση, πρέπει να
αραιωθούν στο μηδενικό βαθμονομητής.
• Μην ανακατεύετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες.
Δείγματα ούρων
• Κάνετε ταυτόχρονα την πρότυπη καμπύλη και τον ποσοτικό
προσδιορισμό των δειγμάτων. • Συλλέξτε ούρα 24 ωρου σε ένα δοχείο.

• Σας συστήνεται να πραγματοποιείτε δύο φορές τον κάθε • Μετρήστε και καταγράψτε τον τελικό όγκο.
προσδιορισμό. • Αν η ποσολογία δε γίνεται κατευθείαν, διατηρείστε μία δόση στους -20
• Κάθε σωληνάριο πρέπει να χρησιμοποιηθεί μόνο μια φορά. °C, 1 εβδομάδας. Η απόψυξη των δειγμάτων πρέπει να γίνεται σε
θερμοκρασία δωματίου.
Προφυλάξεις κατά της ραδιενέργειας
• Αν τα δείγματα που έχουν αναλυθεί έχουν μεγαλύτερη συγκέντρωση
Η αγορά, η κατοχή, η χρήση και η ανταλλαγή του ραδιενεργού υλικού από το βαθμονομητής με την υψηλότερη συγκέντρωση, πρέπει να
υπόκεινται στους κανονισμούς της χώρας στην οποία το υλικό αυτό αραιωθούν σε απεσταγμένο νερό.
χρησιμοποιείται. Η συμμόρφωση με τους βασικούς κανόνες ασφάλειας από
την ακτινοβολία παρέχει επαρκή προστασία. Ορισμένοι από αυτούς είναι : ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ
• Υπό την παρουσία ραδιενεργών υλικών, μην καταναλώνετε τρόφιμα ή Όλα τα αντιδραστήρια είναι σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που
ποτά, μην καπνίζετε και μη χρησιμοποιείτε καλλυντικά. αναγράφεται στην ετικέτα του kit, όταν αποθηκεύονται σε θερμοκρασία
2-8 °C. Οι ημερομηνίες λήξης που αναγράφονται στις ετικέτες των
• Μη χρησιμοποιείτε το στόμα για να πιπετάρετε τα ραδιενεργά υλικά. φιαλιδίων αφορούν αποκλειστικά στη μακροπρόθεσμη αποθήκευση των
• Αποφύγετε κάθε άμεση επαφή με τα ραδιενεργά υλικά, και αντιδραστηρίων από τον κατασκευαστή, πριν από τη συναρμολόγηση του
χρησιμοποιείτε γάντια και εργαστηριακή ποδιά. kit. Να μη λαμβάνονται υπόψη.
• Κάθε χειρισμός ραδιενεργού υλικού πρέπει να γίνεται σε κατάλληλο Σωληνάρια επιστρωμένα με μονοκλωνικό αντίσωμα κατά της
χώρο, μακριά από διαδρόμους και άλλα πολυσύχναστα μέρη. κορτιζόλης : 2 x 50 σωληνάρια (έτοιμα προς χρήση).
• Το αρχείο παραλαβής και αποθήκευσης ραδιενεργών υλικών πρέπει Ιχνηθέτης κορτιζόλη επισημασμένη με 125Ι: 1 φιαλίδιο των 55 mL (έτοιμο
να είναι πάντα ενημερωμένο. προς χρήση).
• Το αρχείο παραλαβής και αποθήκευσης ραδιενεργών υλικών πρέπει Το φιαλίδιο περιέχει 185 kBq (την ημέρα που παρασκευάζεται) κορτιζόλης
να είναι πάντα ενημερωμένο. επισημασμένης σε ρυθμιστικό που περιέχει βοδινή αλμπουμίνη ορού, αζίδιο
του Νατρίου (<0,1%) και μία πράσινη χρωστική.
• Ο εργαστηριακός εξοπλισμός ή τα γυάλινα σκεύη που έχουν μολυνθεί
από ραδιενεργά υλικά πρέπει να απομονώνονται, προκειμένου να Βαθμονομητής: 5 φιαλίδια των 0,5 mL και 1 φιαλίδιο των 5 mL με το
αποφευχθεί μόλυνση από διαφορετικά ραδιοϊσότοπα. βαθμονομητής “μηδέν” (έτοιμα προς χρήση).
• Κάθε περίπτωση ραδιενεργής μόλυνσης ή απώλειας ραδιενεργού Τα φιαλίδια με τα βαθμονομητής περιέχουν συγκεντρώσεις κορτιζόλης
υλικού θα πρέπει να επιλύεται με βάση τις ισχύουσες διαδικασίες. που καλύπτουν το εύρος από 0 μέχρι κατά προσέγγιση 2.000 nM. Τα
βαθμονομητής έχουν ετοιμαστεί σε ρυθμιστικό που περιέχει βοδινή
• Ο χειρισμός των ραδιενεργών αποβλήτων πρέπει να ακολουθεί τους αλμπουμίνη ορού και αζίδιο του Νατρίου (< 0,1%). Η ακριβής συγκέντρωση
κανονισμούς της χώρας στην οποία χρησιμοποιείται το ραδιενεργό αναγράφεται σε κάθε φιαλίδιο. Τα βαθμονομητής είναι χωρισμένα σε σχέση
υλικό. με τα πρότυπα διαλύματα ERM-DA 192 και 193.
Αζίδιο του Νατρίου Ο μηδενικός βαθμονομητής μπορεί να παραγγελθεί και ξεχωριστά (cat
Κάποια αντιδραστήρια περιέχουν αζίδιο του Νατρίου ως συντηρητικό. #IM1959 - 10 mL, IM3444 - 250 mL)
Το αζίδιο του Νατρίου μπορεί να αντιδράσει με το χαλκό ή το μόλυβδο Παρατήρηση: Σε μερικές περιπτώσεις θολερότητα μπορεί να εμφανιστεί στο
προς το σχηματισμό εκρηκτικών αζιδίων των μετάλλων. Η απόρριψη βαθμονομητή 0, το φαινόμενο δεν επηρεάζει τη διαδικασία της εξέτασης.
των αντιδραστηρίων πρέπει να γίνεται μέσα από το υδραυλικό σύστημα,
χρησιμοποιώντας μεγάλες ποσότητες νερού. δείγμα ελέγχου: ένα φιαλίδιο των 0,5 mL (έτοιμο προς χρήση).
Υλικό ανθρώπινης προέλευση Περιέχει βοδινή αλμπουμίνη ορού και αζίδιο του Νατρίου (< 0,1%).
Οι αναμενόμενες τιμές κυμαίνονται μεταξύ των συγκεντρώσεων που
Όλα τα δείγματα ορού και πλάσματος πρέπει να τα χειρίζεστε ως ικανά να αναγράφονται σε επιπλέον φυλλάδιο.
μεταδώσουν ηπατίτιδα ή AIDS.

PI-IM1841–05 23 of 62
ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ Διαδικασία Βαθμονομητές
και δείγματα
Οροί, πλάσμα Σωληνάρια για
Ο απαιτούμενος εργαστηριακός εξοπλισμός, επιπλέον του συνήθους, είναι ο ή εκχυλίσματα ολικές κρούσεις
εξής: αναφοράς ούρων (T)
1: Προσθήκες
Για την απευθείας εξέταση της κορτιζόλης ορού, πλάσματος ή ούρων
Στα επιστρωμένα
• Μικροπιπέτες ακριβείας (50 µL). με αντισώματα
• Ημιαυτόματη πιπέτα (500 µL). σωληνάρια
προσθέστε:
• Μίξερ τύπου vortex. τα βαθμονομητής 50 µL - -
• Shaker με οριζόντια πλατφόρμα παλινδρόμησης ή με πλατφόρμα και τα δείγματα
ταλάντωσης. αναφοράς
τους ορούς ή - 50 µL -
• Σύστημα απόχυσης. τα εκχυλίσματα
• Gamma counter σετ για Ιώδιο 125. ούρων
τον ιχνηθέτη 500 µL 500 µL 500 µL
Για την εξέταση της κορτιζόλης εκχυλίσματος ούρων (προαιρετικό)
Ανακατέψτε στο vortex
• διχλωρομεθάνιο για ανάλυση, μη σταθεροποιημένο με αιθανόλη. 2: Επώαση
• γυάλινες πιπέτες των 2 και 5 mL. 1 ώρα στους 18-25 °C με ανάδευση (≥400 rpm)
• γυάλινα σωληνάρια ή φιαλίδια, με βιδωτά πώματα με λαστιχάκια από 3: Μέτρηση
τεφλόν, Αποχύστε προσεκτικά τα περιεχόμενα των σωληναρίων
(εκτός από τα 2 σωληνάρια για τις ολικές κρούσεις)
• Εξατµιστήρας Μετρήστε τη ραδιενέργεια όλων των σωληναρίων για
τις δεσμευμένες (Β) και τις ολικές (Τ) κρούσεις.
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Εκχύλιση ούρων (προαιρετικό, βλέπε Περίληψη της διαδικασίας για την Περίληψη της διαδικασίας για την εξέταση της Κορτιζόλης των ούρων
εξέταση της Κορτιζόλης των ούρων χωρίς να έχει προηγηθεί εκχύλιση) χωρίς να έχει προηγηθεί εκχύλιση
Σημείωση: Η εκχύλιση των ούρων πρέπει να γίνει σε καθαρά γυάλινα Αφήστε τα αντιδραστήρια να φτάσουν σε ισορροπία σε θερμοκρασία
σωληνάρια (ή φιάλες) που έχουν ξεπλυθεί με διχλωρομεθάνιο και που είναι δωματίου πριν από τη χρήση.
κλεισμένα με καπάκια από γυαλί ή τεφλόν.
Αφήστε τα δείγματα να φτάσουν σε θερμοκρασία δωματίου και ανακατέψτε Διαδικασία Βαθμονομητές Δείγματα ούρων Σωληνάρια για
καλά πριν αρχίσετε την εκχύλιση και δείγματα ολικές κρούσεις
αναφοράς (T)
Τα δείγματα εκχυλίσονται πρίν την εκτέλεση; Μην εκχυλίσεται τους 1: Προσθήκες
βαθμονομητές
Στα επιστρωμένα
• Ψύξτε έναν επαρκή όγκο διχλωρομεθανίου σε λουτρό πάγου. με αντισώματα
σωληνάρια
• Αριθμήστε κάθε σωληνάριο (ή φιάλη).
προσθέστε:
• Προσθέστε 500 µL δείγματος ούρων στα αριθμημένα σωληνάρια που τα βαθμονομητής 50 µL - -
βρίσκονται στον πάγο. και τα δείγματα
• Προσθέστε 5 mL διχλωρομεθανίου χρησιμοποιώντας γυάλινη πιπέτα, αναφοράς
βάλτε προσεκτικά το πώμα και ανακινήστε για ένα λεπτό στο vortex. τα δείγματα - 50 µL -
ούρων
• Αφήστε τις δύο φάσεις να διαχωριστούν σε θερμοκρασία δωματίου. τα βαθμονομητής - 50 µL -
• Απομακρύνετε την υπερκείμενη, υδατική φάση με απόχυση. “μηδέν”
(προσοχή : μόνο
• Αφαιρέστε 2 mL από την οργανική φάση χρησιμοποιώντας γυάλινη
στα δείγματα
πιπέτα ή σύριγγα.
ούρων)
• Εξατμίστε πλήρως την οργανική φάση σε εξατμιστήρα. Μην τον ιχνηθέτη 500 µL 500 µL 500 µL
θερμάνετε. Ανακατέψτε στο vortex
• Προσθέστε το οργανικό εκχύλισμα σε 200 µL του μηδενικού 2: Επώαση
προτύπου. Περιμένετε 15 λεπτά και μετά ανακινήστε δυνατά, με τη 1 ώρα στους 18-25 °C με ανάδευση (≥400 rpm)
βοήθεια του vortex. 3: Μέτρηση
Περίληψη της διαδικασίας για την εξέταση ορού, πλάσμα ή Αποχύστε προσεκτικά τα περιεχόμενα των σωληναρίων
εκχυλισμάτων ούρων (εκτός από τα 2 σωληνάρια για τις ολικές κρούσεις)
Μετρήστε τη ραδιενέργεια όλων των σωληναρίων για
Αφήστε τα αντιδραστήρια να φτάσουν σε ισορροπία σε θερμοκρασία τις δεσμευμένες (Β) και τις ολικές (Τ) κρούσεις.
δωματίου πριν από τη χρήση.

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Τα αποτελέσματα των δειγμάτων υπολογίζονται με
παρεμβολή στην πρότυπη καμπύλη. Η καμπύλη χρησιμοποιείται για
τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων όλων των δειγμάτων που γίνεται
ταυτόχρονα με την εξέταση των βαθμονομητών.
Πρότυπη καµπύλη
Τα αποτελέσματα στο τμήμα ποιοτικού ελέγχου υπολογίστηκαν με τη χρήση
της καμπύλης προσαρμογής μοντέλου «spline», με τον λόγο B/T ή B/B0
στον κάθετο άξονα logit και τη συγκέντρωση της αναλυόμενης ουσίας των
βαθμονομητών στον οριζόντιο λογαριθμικό άξονα (nmol/L).
Άλλες μέθοδοι αναγωγής των δεδομένων μπορεί να δώσουν ελαφρώς
διαφορετικά αποτελέσματα.

PI-IM1841–05 24 of 62
 Συνολική δραστηριότητα: 66.953 cpm ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ
Βαθμονομητές Κορτιζόλη cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%) (βλέπε τη σελίδα “APPENDIX” για περισσότερες λεπτομέρειες)
(nM)
Τα αντιπροσωπευτικά δεδομένα παρέχονται μόνο ως παράδειγμα.
0 0 62.217 92,9 100
Η απόδοση που επιτυγχάνεται σε κάθε εργαστήριο μπορεί να διαφέρει.
1 20 53.531 80,0 86,0
2 70 38.175 57,0 61,4 Αναλυτική ευαισθησία: 5 nM
3 200 21.730 32,5 34,9 Εξειδίκευση
4 700 9.233 13,8 14,8
Το αντίσωμα που χρησιμοποιείται σε αυτή την εξέταση είναι υψηλά
5 2000 4.271 6,38 6,87 εξειδικευμένο για την κορτιζόλη. Εξαιρετικά χαμηλές διασταυρωτές
αντιδραστικότητες προέκυψαν με πολλά φυσικά στεροειδή (Αλδοστερόνη,
(Παράδειγμα πρότυπης καμπύλης, να μη χρησιμοποιηθεί σε υπολογισμούς) Κορτικοστερόνη, Κορτιζόνη, 11-Δεσοξυκορτιζόλη, Προγεστερόνη κλπ…) ή
∆είγµατα με φάρμακα τα οποία μπορεί να υπάρχουν μέσα στα δείγματα προς εξέταση
(Πρεδνισολόνη, Πρεδνισόνη, Σπειρονολακτόνη, κλπ…).
Για κάθε δείγμα, σημειώστε τον λόγο Β/Τ ή Β/Β0 στον κάθετο άξονα, έπειτα το
αντίστοιχο σημείο στην πρότυπη καμπύλη και διαβάστε στον οριζόντιο άξονα Ακρίβεια
την αντίστοιχη συγκέντρωση της κορτιζόλης του δείγματος. Εντός της δοκιμής
Πολλαπλασιάστε τα αποτελέσματα με το 0,362 για να μετατρέψετε τις Διάφορα δείγματα εξετάστηκαν 10 αντιστοίχως 25 φορές στην ίδια σειρά. Οι
συγκεντρώσεις από nmol/L σε ng/mL. συντελεστές μεταβολής που προέκυψαν ήταν μικρότεροι ή ίσοι με 5,8% για
Δείγματα ορού, πλάσματος και ούρων που εξετάζονται μετά από τους ορούς, 8,9% για δείγματα ούρων και 9,4% για εκχυλίσματα ούρων.
εκχύλιση Εκτός της δοκιμής
Η συγκέντρωση σε κορτιζόλη προκύπτει σε nanomoles ανά λίτρο (nM). Ο Διάφορα δείγματα εξετάστηκαν δύο φορές το καθένα σε 17 αντιστοίχως
υπολογισμός της ημερήσιας ουρικής απέκκρισης κορτιζόλης δίνεται στην 10 διαφορετικές σειρές. Οι συντελεστές μεταβολής που προέκυψαν ήταν
παρακάτω παράγραφο: μικρότεροι ή ίσοι με 9,2% για τους ορούς, 13,3% για δείγματα ούρων και
Δείγματα ούρων που εξετάζονται με την απευθείας διαδικασία 12,6% για εκχυλίσματα ούρων.
Η συγκέντρωση σε κορτιζόλη πρέπει να πολλαπλασιαστεί με το 1,09 Ακρίβεια
(παράγοντας αραίωσης του δείγματος λόγω της προσθήκης 50 µL του ∆οκιµή αραίωσης
μηδενικού προτύπου).
Δείγματα υψηλής συγκέντρωσης αραιώθηκαν στο μηδενικό βαθμονομητής
Προτείνεται στις περιπτώσεις όπου υπάρχει ασυμφωνία της μέτρησης με τα του kit. Τα ποσοστά κάλυψης κυμαίνονται μεταξύ 86% και 115% για τους
κλινικά δεδομένα ή με άλλες βιολογικές παραμέτρους, να ελέγξετε την τιμή ορούς, μεταξύ 80,1% και 118% για δείγματα ούρων και μεταξύ 81,4% και
που βρέθηκε στην απευθείας εξέταση σε σχέση με την τιμή της έμμεσης 112% για εκχυλίσματα ούρων.
εξέτασης ύστερα από εκχύλιση με διχλωρομεθάνιο.
∆οκιµή ανάκτησης
Η ημερήσια απέκκριση ουρικής κορτιζόλης Q (nmol / 24 ώρες) είναι:
Γνωστές ποσότητες κορτιζόλης προστέθηκαν σε ανθρώπινους ορούς. Τα
Q = U x V ποσοστά κάλυψης κυμαίνονται μεταξύ 95% και 113% για τους ορούς,
μεταξύ 82,6% και 107% για δείγματα ούρων και μεταξύ 83,0% και 119% για
όπου εκχυλίσματα ούρων.
U η συγκέντρωση της κορτιζόλης ούρων σε nM Εύρος μέτρησης (από την αναλυτική ευαισθησία έως τον υψηλότερο
V ο όγκος ούρων σε λίτρα / 24 ώρες βαθμονομητή): 5,0 έως περίπου 2.000 nM.

ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΤΙΜΕΣ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ

Προτείνουμε το κάθε εργαστήριο να καθιερώσει τις δικές τους τιμές αναφοράς. Η μή τήρηση των οδηγιών που περιέχονται στο έντυπο μπορεί να επηρεάσει
Οι τιμές που ακολουθούν και που προέκυψαν από υγιή άτομα είναι απλώς σημαντικά τα αποτελέσματα.
ενδεικτικές. Τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνευθούν λαμβάνοντας υπόψη τη συνολική
Οροί: κλινική παρουσίαση της ασθενούς, συμπεριλαμβανομένων της κλινικής
ιστορίας, των δεδομένων από συμπληρωματικές εξετάσεις και άλλων
Πρωί: 263 έως 724 nM (n=69) - Βράδυ: 49 έως 430 nM (n=84) κατάλληλων πληροφοριών.
Ούρα (n = 66) Αποφύγετε τη χρήση βαριά αιμόλυση, ικτερικά ή λιπαιμικά δείγματα.
Προσδιορισμός Μέση τιμή Τυπική απόκλιση Ακραίες τιμές Παρά την πολύ μικρή in vitro διασταυρωτή αντίδραση με τα κορτιδοειδή που
(nmol/24ώ) (nmol/24ώ) για το 95% του χρησιμοποιούνται συνήθως στη φαρμακολογία, ειδικά με την πρεδνισολόνη
πληθυσμού και την πρεδνισόνη, η θεραπεία με υψηλές δόσεις μπορεί να οδηγήσει
(nmol/24ώ) σε τεχνητή αύξηση της κορτιζόλης του ορού και των ούρων, εξαιτίας
Απευθείας 114 55 38 - 208 της παρεμβολής από την ουσία που χορηγείται ή από συγκεκριμένους
εξέταση μεταβολίτες αυτής. Κατά συνέπεια, δεν προτείνεται η διεξαγωγή απευθείας
εξέτασης της κορτιζόλης σε ασθενείς που υπόκεινται σε συστηματική
Εξέταση μετά 103 45 30 - 197
κορτικοθεραπεία.
από κχύλιση
Για προσδιορισμούς που χρησιμοποιούν αντισώματα, υπάρχει πιθανότητα
Λεπτομερής περιγραφή πληροφοριών σχετικά με τις αναμενόμενες παρεμβολής από ετερόφιλα αντισώματα στο δείγμα του ασθενούς. Οι
τιμές για παιδιά (ανά ηλικία και φύλο), παραθέτονται στο φύλλο ασθενείς που ήρθαν σε συχνή επαφή με ζώα ή έκαναν ανοσοθεραπεία
"APPENDIX". ή διαγνωστικές επεμβάσεις με τη βοήθεια ανοσοσφαιρινών ή τμήματα
ανοσοσφαιρίνης πιθανόν να παραγάγουν αντισώματα, π.χ. HAMA, που
ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ παρεμβάλλουν στους ανοσοπροσδιορισμούς.
Η σωστή εργαστηριακή πρακτική προϋποθέτει την τακτική χρήση δειγμάτων
Τα εν λόγω παρεμβάλλοντα αντισώματα πιθανόν να προκαλέσουν
ελέγχου, προκειμένου να διασφαλίζεται η ποιότητα των αποτελεσμάτων.
εσφαλμένα αποτελέσματα. Να αξιολογείτε προσεκτικά τα αποτελέσματα
Η επεξεργασία των δειγμάτων αυτών πρέπει να γίνεται με τον ίδιο τρόπο
ασθενών που υποπτεύεστε ότι φέρουν αυτά τα αντισώματα.
με τον οποίο γίνεται η επεξεργασία των άγνωστων δειγμάτων. Επιπλέον,
συστήνεται η ανάλυση των αποτελεσμάτων τους να γίνεται με τη βοήθεια
των κατάλληλων στατιστικών μεθόδων.
Σε περίπτωση επιδείνωσης συσκευασίας ή εάν τα αποτελέσματα που
προέκυψαν έχουν τροποποίηση απόδοσης, παρακαλώ ελάτε σε επαφή
με τον τοπικό διανομέα σας ή χρησιμοποιήστε την ακόλουθη διεύθυνση
ηλεκτρονικού ταχυδρομείου: imunochem@beckman.com

PI-IM1841–05 25 of 62
CORTISOL RIA KIT Saugos duomenų lapą galima gauti interneto svetainėje
IM1841 techdocs.beckmancoulter.com

RINKINYS RADIOIMUNINIAM KORTIZOLIO NUSTATYMUI MĖGINIŲ ĖMIMAS, PARUOŠIMAS, LAIKYMAS

IN VITRO ŽMOGAUS SERUME, PLAZMOJE BEI ŠLAPIME IR PRASKIEDIMAS
Diagnostikai in vitro. Kraujo plazmos ir serumo mėginiai
• Surinkti kraują į švarius sausus mėgintuvėlius ar mėgintuvėlius,
PRINCIPAS kuriuose EDTA.
Radioimuninis kortizolio nustatymas yra konkurencinis tyrimų tipas.
Naudojantis šiuo rinkiniu galima atlikti kortizolio nustatymą: • Atskirkite serumą ar plazmą nuo forminių elementų centrifuguojant.
.
● tiesiogiai serume, plazmoje ir šlapime • Serumo ir plazmos mėginius galima laikyti 2-8 ºC temperatūroje 24
● atlikus šlapimo ekstrakciją dichlormetanu, organinės fazės išgarinimo ir valandų bėgyje. Ilgesniam laikymui juos reikia suskirstyti į alikvotus
ekstrakto ištirpinimo „nuliniame“ kalibravimo mėginyje. ir užšaldyti < -20 ºC temperatūroje, iki 3 mėnesių. Vengti pakartotino
mėginių užšaldymo ir atitirpinimo. Tiriamus mėginius reikia atšildyti
Serumo, plazmos, šlapimo ir jo ekstrakto mėginiai, tai pat kontroliniai ir kambario temperatūroje.
kalibravimo mėginiai inkubuojami mėgintuvėliuose, padengtuose antikūniais,
su 125I-kortizolio tirpalu, atliekančiu žymens vaidmenį. Pasibaigus inkubacijai • Jeigu koncentracija mėginyje viršija maksimalios kalibravimo mėginio
iš mėgintuvėlių pašalinamas skystas turinys, matuojamas surištas 125I koncentraciją, jį reikia atskiesti nuliniu kalibravimo mėginiu.
aktyvumas. Kortizolio koncentracija analizuojamuose mėginiuose nustatoma Šlapimo mėginiai
interpoliavimo metodu pagal kalibravimo kreivę.
• Surinkti paros šlapimą.
ĮSPĖJIMAI IR ATSARGUMO PRIEMONĖS • Pamatuoti jos turį.
Bendrosios pastabos:
• Laikymui mėginius reikia suskirstyti į alikvotus ir užšaldyti < -20
• Buteliukus su kalibravimo ir kontroliniais mėginiais laikyti atidarytus ºC temperatūroje, iki 1 savaitė. Tiriamus mėginius reikia atšildyti
minimalų laiko tarpą, kad neišgaruotų skystis. kambario temperatūroje.
• Nemaišyk skirtingų rinkinių partijų reagentus. • Jeigu nustatytas kortizolio dydis mėginyje viršija maksimalios
• Kalibruojančių bandinių ir tiriamu ėminių analizė atliekama vienu metu. kalibravimo mėginio koncentraciją, mėginį reikia atskiesti distiliuotu
vandeniu ir pakartotinai atlikti tyrimą
• Rekomenduojama atlikti bandinį du kartus.
• Kiekvienas mėgintuvėlis turi būti panaudotas tik vieną kartą. PATEIKIAMOS MEDŽIAGOS
Visi rinkinio reagentai yra patvarūs, kol nepasibaigęs rinkinio tinkamumo
Pagrindinės radiacinės saugos taisyklės naudoti laikas, nurodytas ant rinkinio etiketės, jei laikomi 2-8 °C
Radioaktyvių medžiagų gavimas, naudojimas ir transportavimas turi temperatūroje. Buteliukų su reagentais etiketėse nurodyta galiojimo
vykti remiantis šioje šalyje galiojančiomis radiacinės saugos normomis terminas galioja tik laikant reagentus gamybinėmis sąlygomis iki pat rinkinio
sanitarinėmis darbo su radioaktyviomis medžiagomis taisyklėmis. komplektavimo ir netaikytina vartotojo gautai produkcijai.
• Šalia radioaktyviųjų medžiagų negalima valgyti, gerti, rūkyti ar taikyti Mėgintuvėliai, padengti kortizolio monokloniniais antikūniais: 2 x 50
kosmetikos priemones vnt. (paruošti naudojimui).
• Negalima pipetuoti radioaktyviųjų tirpalų burna. Žymuo, 125I-kortizolio tirpalas: 1 buteliukas, 55 ml (paruoštas naudojimui).
• Venkite bet kokio kontakto su radioaktyviomis medžiagomis, Pagaminimo dieną buteliuke yra 185 kBk 125I-žymėto kortizolio buferyje su
mūvėdami pirštinėmis ir vilkėdami laboratorinius chalatus. jaučio serumo albuminu, natrio azidu (<0,1 %) ir dažikliu.
• Visos manipuliacijos su radioaktyviomis medžiagomis turi būti Kalibravimo mėginiai: 5 buteliukai po 0,5 ml ir 1 buteliukas su 5 ml
vykdomos tinkamoje vietoje, toli nuo koridorių ir kitų judrių vietų. „nulinio“ kalibravimo mėginio (paruošti naudojimui)
• Radioaktyvios medžiagos turi būti saugomos konteineryje tam skirtoje Kalibravimo mėginiuose yra kortizolio koncentracijos diapazone nuo 0 iki
vietoje. maždaug 2 000 nM, buferyje su jaučio serumo albuminu ir natrio azidu
(<0,1 %). Tikslios koncentracijos nurodytos buteliukų etiketėse. Kalibravimo
• Turi būti vedama savalaikė visų radioaktyvių produktų gavimo ir mėginiai atestuoti dėl referencinių preparatų ERM-DA192 ir 193.
saugojimo registracija.
Nulinį kalibratorių galima užsisakyti ir atskirai (kat. nr. IM1959 - 10 ml, IM3444
• Laboratorinė įranga ir stikliniai indai, kurie gali būti užteršti, turėtų būti - 250 ml).
atskirti, siekiant išvengti kryžminio užteršimo skirtingais radioizotopais.
Pastaba: Kartais įmanomas skaidrumo sumažėjimas “nulinio“ kalibratoriaus,
• Kiekvienas radioaktyvaus užteršimo ar radioaktyvios medžiagos neveikiantis testo charakteristikai.
praradimo atvejis turi būti tvarkomas pagal nustatytas procedūras.
Kontrolinis serumas: 1 buteliukas 0,5 ml (paruošti naudojimui)
• Radioaktyvios atliekos turi būti tvarkomos pagal šalyje nustatytas
taisykles. Buteliuke yra žmogaus kraujo serumas albuminu ir natrio azidu (< 0,1 %)
su žinomu kortizolio kiekiu. Tikėtinas koncentracijos diapazonas nurodytas
Natrio azidas pridėtame lapelyje.
Kai kuriuose rinkinio komponentuose yra natrio azido kaip konservuojančios
medžiagos. Reaguodamas su švinu, variu ar žalvariu, natrio azidas sudaro REIKALINGOS, BET NEPATEIKIAMOS
sprogius metalų azidus. Vartotus reagentus būtina atskiesti dideliu kiekiu MEDŽIAGOS
vandentiekio vandens, po to juos galima išpilti į kanalizaciją. Be standartinės laboratorinės įrangos, reikalingi:
Žmogaus kilmės medžiagos Tiesioginiam kortizolio nustatymui serume, plazmoje ir šlapime:
Su visais tiriamais kraujo serumo ir plazmos mėginiais būtina elgtis kaip su • mikropipetė (50 µl)
potencialiai infekcine medžiaga, kurioje gali būti AIDS ir hepatito virusai.
Atliekų utilizavimas turi būti atliekamas pagal įstatymus. • pusiau automatinė pipetė (500 µl)
Dichlormetanas • Vortex tipo sūkurinis maišytuvas
Dichlormetanas yra labai lakus ir degus skiediklis. Ekstrakcijos ir garinimo • horizontalus arba orbitinis kratiklis;
stadijas būtina atlikti traukos spintoje. Vengti atviros ugnies. Netraukti • čiurkšlinis siurblys;
reagento burna.
• gama-skaitiklis 125I aktyvumui matuoti.
VISUOTINAI SUDERINTOS SISTEMOS (GHS) Kortizolio nustatymui šlapimo ekstraktuose (pagal norą):
PAVOJINGUMO KLASIFIKACIJA • dichlormetaną (metilenchloridą), nestabilizuotą etanoliu
Neklasifikuojama kaip pavojinga

PI-IM1841–05 26 of 62
 • stiklinės pipetės 2 ml ir 5ml Stadija Kalibravimo Šlapimo Mėgintuvėliai
ir kontroliniai pavyzdžiai bendram skaičiui
• stiklinius mėgintuvėlius ar buteliukus su užsukamais kamšteliais ir mėginiai (T)
tefloniniais intarpais 1: Reagentų
• garintuvą. įlašinimas
Į antikūniais
PROCEDŪRA padengtus
Šlapimo mėginių ekstrakcija (pagal norą, tiesioginis nustatymas - žr mėgintuvėlius
Tiesioginio kortizolio nustatymo šlapimo mėginiuose schema) paeiliui įlašinti:
kalibravimo ir 50 µl - -
Dėmesio: Ekstrakcija atliekama iš anksto dichlormetanu apiplautuose ir
išdžiovintuose švariuose stikliniuose buteliukuose arba mėgintuvėliuose su kontrolinius
tefloniniais kamšteliais. mėginius
šlapimo - 50 µl -
Prieš pradedant ekstrakciją, sušildyti mėginius iki kambario temperatūros ir pavyzdžius
gerai išmaišyti. - -
„nulinį“ 50 µl
Ekstrakcijos procedūra būtina tik kraujo plazmos arba serumo kalibravimo
bandiniams. Neekstrahuoti kalibravimo mėginių. mėginį (dėmesio:
tiktai į šlapimo
• Atšaldyti reikiamą dichlormetanmo kiekį ledo vonioje.
pavyzdžius)
• Pažymėti reikiamą kiekį mėgintuvėliui (buteliukų). žymens tirpalą 500 µl 500 µl 500 µl
• Sunumeruotus mėgintuvėliui (buteliukus) padėti į ledo vonią ir įlašinti į Sumaišyti.
juos po 500 µl analizuojamų šlapimo mėginių. 2: Inkubacija
• Į kiekvieną mėgintuvėlį (buteliuką) stikline pipete įlašinti po 5 ml 1 valandą 18-25 ºC temperatūroje, nuolat
dichlormetano, kruopščiai uždaryti juos mėgintuvėliais ir sumaišyti pakratant (≥400 aps./min.)
turinį sūkuriniame maišytuve 1 minutės bėgyje. 3: Rezultatų
matavimas
• Palikti buteliukus kambario temperatūroje, kol atsiskirs vandens ir Kruopščiai pašalinti mėgintuvėlių turinį
organinė fazės. (išskyrus T mėginius).
• Vandens čiurkšlių siurblio pagalba pašalinti viršutinę vandens fazę. Nustatyti surištą (B) ir bendrą aktyvumą (T) (imp./min.).
• Atrinkti 2 ml organinės fazės stikline pipete arba švirkštu.
• Pilnai išgarinti organinę fazę garintuve be pašildymo.
REZULTATAI
Rezultatai skaičiuojami interpoliacijos metodu pagal kalibravimo kreivę, gautą
• Ištirpinti išdžiovintus ekstraktus 200 µl „nulinio“ kalibravimo mėginio. kartu su nežinomų mėginių analize.
Po 15 minučių intensyviai sumaišyti mėgintuvėlių turinį.
Kalibravimo kreivė
Kortizolio nustatymo serumo ir plazmos mėginiuose bei šlapimo
Kokybės kontrolės skyriuje pateikti rezultatai apskaičiuoti naudojant spline
ekstraktuose schema
(glodžiosios) kreivės pritaikymą, logit vertikaliojoje ašyje nurodant B/T
Prieš pipetavimą padėk visus reagentus į kambario temperatūrą. arba B/B0, o logaritminėje horizontaliojoje ašyje – kalibratorių analitės
koncentraciją (nmol/l).
Stadija Kalibravimo Serumo, plazmos Mėgintuvėliai
ir kontroliniai pavyzdžiai bendram skaičiui Naudojant kitus duomenų redukcijos metodus, rezultatai gali šiek tiek skirtis.
mėginiai bei šlapimo (T)
Bendrasis aktyvumas: 66 953 skč./min.
ekstraktai
Kalibratoriai Kortizolis skč./min. B/T (%) B/B0 (%)
1: Reagentų
(nmol/l) (n=3)
įlašinimas
0 0 62 217 92,9 100
Į antikūniais
padengtus 1 20 53 531 80,0 86,0
mėgintuvėlius 2 70 38 175 57,0 61,4
paeiliui įlašinti: 3 200 21 730 32,5 34,9
kalibravimo ir 50 µl - - 4 700 9 233 13,8 14,8
kontrolinius 5 2000 4 271 6,38 6,87
mėginius
serumo, plazmos - 50 µl - (Standartinės kalibravimo kreivės pavyzdys. Nesinaudoti skaičiuojant
mėginius rezultatus.)
bei šlapimo Ėminiai
ekstraktus
žymens tirpalą 500 µl 500 µl 500 µl Kiekvienam mėginiui kalibravimo grafiko vertikalioje ašyje rasti reikšmę B/T
arba B/B0, o horizontalioje ašyje atitinkamą kortizolio koncentraciją.
Sumaišyti.
2: Inkubacija Koncentracijų pervedimui iš nmol/l į ng/ml būtina padauginti gautą rezultatą
1 valandą 18-25 ºC temperatūroje, nuolat iš 0,362.
pakratant (≥400 aps./min.) Serumo, plazmos mėginiai ir šlapimo ekstraktai
3: Rezultatų
matavimas Koncentracijų reikšmės, gautos šio rinkinio pagalba, išreikšti nmol/l.
Kortizolio paros ekskrecijos su šlapimu nustatymas pateikiamas sekančiame
Kruopščiai pašalinti mėgintuvėlių turinį
skyriuje.
(išskyrus T mėginius).
Nustatyti surištą (B) ir bendrą aktyvumą (T) (imp./min.). Tiesioginis kortizolio nustatymas šlapimo mėginiuose
Tiesioginiu būdu nustatytus dydžius būtina padauginti iš 1,09, šlapimo
Tiesioginio kortizolio nustatymo šlapimo mėginiuose schema mėginio atskiedimo faktorių įlašinant į jį 50 µl „nulinio“ kalibravimo mėginio.
Prieš pipetavimą padėk visus reagentus į kambario temperatūrą. Jeigu gauti rezultatai nesutampa su klinikiniu vaizdu ir su kitų laboratorinių
tyrimų duomenimis, rekomenduojamą atlikti pakartotinį šlapimo tyrimą su
ekstrakcija dichlormetanu.
Kortizolio ir šlapimo paros ekskreciją (Q) (μg/24 val.) galima apskaičiuoti
pagal formulę:

Q = U x V

PI-IM1841–05 27 of 62
kur arba lygus 5,8 %, o šlapimui – mažesnis arba lygus 8,9 %, o šlapimo
ekstraktai - mažesnis arba lygus 9,4 %.
U = kortizolio koncentracija šlapime (nmol/l)
Tarp analizių
V = šlapimo turis litrais / 24 val.
Mėginių dublikatų analizė buvo atliekama 17 arba 10 skirtingose nustatymo
TIKĖTINOS VERTĖS serijose. Nustatyta, kad serumo variacijos koeficientas yra mažesnis arba
Rekomenduojama kiekvienai laboratorijai nusistatyti savo normos dydžius. lygus 9,2 %., o šlapimui – mažesnis arba lygus 13,3 %, o šlapimo ekstraktai
Žemiau pateikti iš sveikų asmenų gauti dydžiai yra tik indikatyvūs. - mažesnis arba lygus 12,6 %.
Kraujo serumas Tikslumas
Rytas: nuo 263 iki 724 nmol/l (n = 69). Vakaras: nuo 49 iki 430 nmol/l (n = Praskiedimo testas
84).
Didelės koncentracijos mėginiai buvo serijiniu būdu skiedžiami nuliniu
Šlapimas (n = 66) kalibratoriumi. Gautas atkūrimo procentas serumui buvo tarp 86 ir 115 %,
šlapimui – tarp 80,1 ir 118 %, o šlapimo ekstraktai – tarp 81,4 ir 112 %.
Tyrimas Vidurkis (nmol/24 Standartinis Ribiniai dydžiai
val.) nuokrypis 95 % populiacijos „Atsidarymo“ testas
(nmol/24 val.) (nmol/24 val.) Žinomi kortizolio kiekiai buvo lašinami į bandinius su maža hormono
Tiesioginis 114 55 38 - 208 koncentracija. Gautas atkūrimo procentas serumui buvo tarp 95 ir 113 %,
Su ekstrakcija 103 45 30 - 197 šlapimui – tarp 82,6 ir 107 %, o šlapimo ekstraktai – tarp 83,0 ir 119 %.
Matavimo diapazonas (nuo analitinio jautrumo iki didžiausios koncentracijos
Detali informacija apie numatomų verčių vaikams (surūšiuotas pagal kalibratoriaus) nuo 5,0 nM iki maždaug 2 000 nM.
amžių ir lytį ) galima rasti duomenų lapo priede " APPENDIX "

KOKYBĖS KONTROLĖ RIBOJIMAI

Tyrimo metodikos nepaisymas gali iškraipyti tyrimo rezultatus.
„Gera laboratorinė praktika“ suprantama taip, kad reguliariai naudojami
kontroliniai ėminiai gautų rezultatų kokybei užtikrinti. Šiuos ėminius reikia Tyrimo rezultatai turi būti interpretuojami bendrame paciento klinikinio
paruošti lygiai taip pat, kaip ir tyrimo ėminius. Rekomanduojama jų rezultatus vaizdo kontekste, įskaitant anamnezę, kitų testų duomenis ir kitokią tinkamą
analizuoti panaudojant atitinkamus statistinius metodus. informaciją.
Tuo atveju, kai pakuotė rimtai pažeista arba gauti rezultatai nesutampa su Nenaudokite lipeminių, ūminių ar hemolizuotų bandinių.
tyrimų charakteristikomis, prašome kreiptis į mūsų specialistus: Elektroninis Nežiūrint į žemą kryžminę reakciją su vaistiniais kortikoidais, tame tarpe su
paštas: imunochem@beckman.com prednizolonu ir prednizonu, didelių šių preparatų dozių taikymas gali sukelti
klaidingai padidintą kortizolio lygį kraujo serume ir šlapime dėl įvedamų
ANALITINĖS CHARAKTERISTIKOS medžiagų ar jų metabolitų interferencijos. Todėl nerekomenduojama
(detalesnė informacija pateikiama skyriuje „APPENDIX“) atlikti tiesioginio kortizolio nustatymo pas pacientus, nuolat vartojančius
Tipingi duomenys pateikiami tik kaip iliustracija. Atskirose laboratorijose gauti kortikosteroidus.
efektyvumo duomenys gali skirtis. Tyrimams, kuriuose naudojami antikūnai, gali trukdyti paciento mėginyje
Analitinis jautrumas: 5 nmol/l esantys heterofiliniai antikūnai. Pacientai, nuolat kontaktuojantys su
gyvūnais arba tie, kuriems taikyta imunoterapija arba diagnostinės
Specifiškumas procedūros naudojant imunoglobulinus ar imunoglobulinų fragmentus, gali
Šiame rinkinyje naudojami antikūniai pasižymi dideliu specifiškumu sintetinti antikūnus, pvz., HAMA, trukdančius atlikti imuninius tyrimus.
kortizolio atžvilgiu. Kryžminė reakcija su gamtiniais steroidais (aldosteronu, Tokie trukdantys antikūnai gali lemti klaidingus rezultatus. Pacientų, kurie
kartizonu, kortikosteronu, 11-dezoksikortikosteronu ir t.t..) ir vaistiniais įtariami turintys šių antikūnų, rezultatus reikia vertinti atsargiai.
preparatais, galinčiais būti paciento kraujo serume (danazolis, prednizolonas,
spironolaktonas ir kt.), labai silpna.
Preciziškumas
Analizės metu
Mėginio analizė buvo atliekama 10 arba 25 replikatuose vienos nustatymo
serijos ribose. Nustatyta, kad serumo variacijos koeficientas yra mažesnis

PI-IM1841–05 28 of 62
CORTISOL RIA KIT GHS SZERINTI VESZÉLYESSÉGI BESOROLÁS
Nincs veszélyes anyagként besorolva.
IM1841
RADIOIMMUNOASSAY KORTIZOL IN VITRO A biztonsági adatlap megtalálható a következő internetes
MEGHATÁROZÁSRA HUMÁN SZÉRUMBAN helyen: techdocs.beckmancoulter.com
PLAZMÁBAN ÉS VIZELET
In vitro diagnosztikai használatra. MINTAVÉTEL, FELDOLGOZÁS, TÁROLÁS ÉS
HIGÍTÁS
MŰKÖDÉSI ELV Szérum és plazma minták
A kortizol radioimmunoassay egy kompetitív beépülési assay. Ugyanaz a • A vért natív, EDTA-s csövekbe vegye le.
készlet alakalmas kortizol mérésére:
. • A szérumot, vagy plazmát centrifugálással különítsük el a sejtektől.
● egyrészt közvetlenül szérumból, plazmából, vagy vizeletből.
● vagy a vizeletből diklór-metánnal történő extrakciót követően, az oldószer • A szérum és plazma mintákat 2-8 °C között tárolhatja, ha a
bepárlása utáni, nulla kalibrátorban történő újrafeloldással. vizsgálatot 24 órán belül elvégzi. Hosszabb idejű tárolás esetén
aliquotok-ra történő szétosztást követően <-20 °C-on tárolja a
A szérum, plazma és vizelet minták, vizelet extraktumok, kontrollok és többszöri fagyasztás-olvasztás elkerülése érdekében (legfeljebb 3
kalibrátorok 125I-tel jelölt kortizol tracerrel együttesen kerülnek inkubálásra hónapig). A minta felolvasztását szobahőn kell végezni.
monoklonális antitesttel bevont csövekben. Az inkubációt követően a cső
folyadék tartalmának leszívása és a kötődött anyagok mérése következik. A • Ha a minta koncentrációja magasabb a legnagyobb kalibrator
kalibrációs görbe képzését követően az ismeretlen értékek interpolációval koncentrációjánál, azt null-kalibratordal kell meghígítani.
kerülnek meghatározása a görbe alapján. Vizelet minták
FIGYELMEZTETÉSEK ÉS ÓVINTÉZKEDÉSEK • 24 órás vizelet gyűjtés lombikba.
Általános megjegyzések: • Meghatározzott térfogat.
• A kalibrátorokat és kontrollokat tartalmazó üvegeket a lehető • Elengedheteln az aliqut-ok < -20 °C-on történő tárolása, legkésőbb
legrövidebb ideig tartsák nyitva a nagymértékű párolgás elkerülése egy héten. A minta felolvasztását szobahőn kell végezni.
érdekében.
• Ha a minta koncentrációja magasabb a legnagyobb kalibrátor
• Ne keverjen össze különböző gyártási számú reagenseket. koncentrációjánál, azt desztillált vízzel kell meghígítani.
• Minden vizsgálathoz készítsen standardgörbét.
SZÁLLÍTOTT ANYAGOK
• Ajánlott a vizsgálat során két párhuzamos mérést végezni. A reagensek 2-8 °C-on tárolva a dobozon feltüntetett lejárati időig
• Minden csövet csak egyszer használjunk. használhatók fel. A csövek cimkéjén jelzett lejárati idők a gyártó részére
szogáltatnak információt az adott komponens hosszú távú eltarthatóságával
Alapvető sugárbiztonsági szabályok kapcsolatban. Kérjük ezt az adatot ne vegyék figyelembe!
Radioaktív anyagok beszerzését, felhasználását és szállítását külön Anti-kortizol monoklonális antitesttel bevont csövek: 2 x 50 cső
jogszabályok írják elő. Az alábbi alapvető szabályok betartása megfelelő (felhasználásra kész)
védelmet biztosíthat: 125
I-tel jelölt kortizol tracer: 1 x 55 mL üveg (felhasználásra kész)
• Radioaktív anyagok jelenlétében ne fogyasszon ételt, italt, ne
dohányozzon és ne használjon kozmetikumokat. Az üveg tartalma 185 kBq aktivitású (a gyártás napján mérhető aktivitás)
125
I-tel jelölt kortizol, marha szérumalbumint, Na-azidot (<0. 1%) továbbá
• Ne pipettázzon szájjal radioaktív oldatokat. festéket tartalmazó pufferben.
• Kerülje a radioaktív anyagokkal történő érintkezést: munka közben Kalibrátorok: 5 x 0,5 mL üveg és 1 x 5 mL «nulla» kalibrátor
viseljen egyszer használatos kesztyűt és laboratóriumi köpenyt. (felhasználásra kész)
• Minden radioaktív anyagokkal végzett műveletet egy erre megfelelő, A kalibrátorok 0 - kb. 2000 nM koncentrációjú kortizolt tartalmaznak
folyosóktól és más forgalmas részektől távol eső helyen kell elvégezni. szarvasmarha-szérumalbumint és nátrium-azidot (<0,1%) tartalmazó
• A radioaktív reagenseket egy erre kijelölt helyen tartott edényben kell pufferben. A pontos koncentrációt minden egyes üvegcse címkéjén
tárolni. feltüntették. A kalibrátorok hitelesítése a ERM-DA192 és 193 referencia
készítménnyel történt.
• A laboratóriumba érkezett radioaktív anyagok átvételéről és
tárolásáról vezessen jegyzőkönyvet. A «Nulla» kalibrátort külön is lehet rendelni (kat. szám IM1959 – 10 mL vagy
IM3444 – 250 mL).
• Azokat a laboratóriumi eszközöket és üvegedényeket, amelyek
radioaktív anyaggal szennyeződhettek, különítse el, hogy elkerülje a Megjegyzés: A nulla kalibrátor esetenként észlelhető zavarossága nem
különböző radioizotópokkal történő keresztszennyeződést. befolyásolja a vizsgálat eredményét.
• Sugárszennyeződés vagy radioaktív anyag kiömlése esetén tartsa be Kontroll szérum: egy üveg, 0,5 mL (felhasználásra kész)
az erre vonatkozó előírásokat. Az üveg liofilizált kortizolt tartalmaznak szarvasmarha-szérumalbumint
• A radioaktív hulladékot kezelje az adott országban érvényes és nátrium-azidot (<0,1%) tartalmazó pufferben. A beoldás után kapott
szabályoknak megfelelően. koncentráció értéke a kiegészítésben található.
Nátrium azid SZÜKSÉGES, DE NEM SZÁLLÍTOTT ANYAGOK
Néhány reagens tartósítószerként nátrium azidot tartalmaz. A nátrium azid A standard laboratóriumi felszerelésen kívül az alábbiak szükségesek:
reakciója ólommal, rézzel, vagy sárgarézzel robbanékony fém-azidokat A közvetlen szérum, plazma és vizelet kortizol meghatározáshoz
eredményezhet. Ezért a nátrium azid tartalmú reagenseket a lefolyóba
történő kiöntés után nagy mennyiségű folyóvízzel öblítsük le. • precíziós mikropipetta (50 µL)
Humán eredetű anyagot • félautomata pipetta (500 µL)
Ezért a kiteket az összes szükséges biztonsági előírás betartásával kezelje. • Vortex keverő
Minden szérum és plazma mintát úgy kezeljen, mint hepatitis és AIDS • horizontális vagy orbitális rázó.
fertőzésre alkalmas anyagokat.
• leszívó rendszer.
Diklór-metán
• 125I mérésére alkalmas gamma-számláló
A diklór-metán rendkívűl illékony és gyúlékony oldószer. Az extrakciót és
a bepárlást elszívó fülke alatt végezze. Nyílt láng használata tilos! Ne Vizelet kortizol meghatározás extrakció után (opcionális)
pipettázza szájjal a reagenst! • analitikai tisztaságú diklór-metán (metilén-klorid), nem etanollal
stabilizált

PI-IM1841–05 29 of 62
 • 2 és 5 mL-es üveg pipetta Lépések Kalibrátorok és Vizelet Totál értékű
kontrollok csövek (T)
• üveg cső, vagy üvegek teflon bevonatu csavaros kupakkal 1: Bemérés
• bepárló készülék Az antitesttel
bevont csövekbe
ELJÁRÁS mérje egymás
Vizelet extrakció (opcionális, Isd A vizsgálat menete vizelet kortizol után a
közvetlen meghatározására). következőket:
kalibrátorok, vagy 50 µL - -
Megjegyzés: Az extrakciót diklór-metánnal előöblített tiszta, üveg, vagy
teflon dugóval lezárt csőben, vagy üvegben kell elvégezni. kontrollok
vizelet minták - 50 µL -
Az extrakció előtt a mintát hozza szobahőmérsékletre és alaposan keverje nulla kalibrátor - 50 µL -
össze. (figyelmeztetés
meghatározás előtt csak a mintákat extrahálja; a kalibrátorokat ne! : csak vizelet
mintákhoz)
• Hűtsön elegendő térfogatú diklór-metánt víz-jég fürdőn.
tracer 500 µL 500 µL 500 µL
• Számozza be a csöveket és a lombikokat. Keverje össze a reakcióelegyet.
• Adjon 500 µL vizelet mintát a jégen tartott, számozott csőbe. 2: Inkubáció
1 óra 18-25 °C-on rázatással (≥400 rpm)
• Adjon 5 mL diklór-metánt üvegpipettával a mintájoz, fedje le azonnal
dugóval és Vortexelje 1 percig. 3: Mérés
Csövek tartalmának leszívása (kivéve a két
• Hagyja, hogy a két fázis szétváljon, szobahőmérsékleten. Totál értékű cső).
• Leszívással távolítsa el a felülúszó folyadék fázist. Határozza meg a kötött esemény/perc-et (B)
és a totál esemény/perc-et (T)
• Mérjen ki 2 mL-t a szerves fázisból üveg pipettával, vagy fecskendővel.
• Szárítsa ki teljesen a szerves fázist bepárló készülékkel. Ne EREDMÉNYEK
melegítse! Az eredményeket a standard görbéből interpolációval kapja meg. A
• Adjon 200 µL nulla kalibrátorot a szerves extraktumhoz. Várjon 15 görbe segítségével, az annak felvételével egyidőben lemért minták kortizol
percig, majd Vortexelje erőteljesen. koncentrációja meghatározható.
A vizsgálat menete szérum, plazma vagy vizelet extraktum Standard görbe
feldolgozására A minőségbiztosítási osztályon az eredmények számítása spline (illesztett)
Bemérés előtt várja meg, amíg a reagensek felmelegednek görbe mentén történt, ahol a B/T vagy a B/B0 értéke a logit függőleges
szoba-hőmérsékletre. tengelyen, a kalibrátorok analitkoncentrációja pedig a logaritmikus vízszintes
tengelyen (nmol/L) található.
Lépések Kalibrátorok és Szérum, plazma, Totál értékű
kontrollok vizelet extraktum csövek (T) Más adat redukciós eljárások kissé eltérő eredményeket adhatnak.
1: Bemérés Teljes aktivitás: 66 953 esemény/perc
Az antitesttel Kalibrátorok Kortizol (nM) esemény/ B/T (%) B/B0 (%)
bevont csövekbe perc (n=3)
mérje egymás 0 0 62 217 92,9 100
után a 1 20 53 531 80,0 86,0
következőket:
- - 2 70 38 175 57,0 61,4
kalibrátorok, vagy 50 µL
kontrollok 3 200 21 730 32,5 34,9
szérum, plazma, - 50 µL - 4 700 9233 13,8 14,8
vagy vizelet 5 2000 4271 6,38 6,87
extraktum
(A standard görbe csak minta, számításhoz nem használható)
tracer 500 µL 500 µL 500 µL
Keverje össze a reakcióelegyet. Minták
2: Inkubáció Minden egyes minta esetén keresse meg a megfelelő B/T, vagy B/B0 értéket a
1 óra 18-25 °C-on rázatással (≥400 rpm) függőleges tengelyen és olvassa le a hozzá tartozó nM-ban kifejezett kortizol
3: Mérés koncentrációt a vízszintes tengelyen.
Csövek tartalmának leszívása (kivéve a két Az eredmények nmol/L (nM)-ről ng/mL-ra történő átszámítás faktor értéke
Totál értékű cső). 0.362.
Határozza meg a kötött esemény/perc-et (B)
és a totál esemény/perc-et (T) Szérum, plazma, vagy vizelet extraktum mérése
A koncentráció nmol/L-ben kifejezett (nM). A vizelet kortizol extraktum kortizol
A vizsgálat menete vizelet kortizol közvetlen meghatározására: eredményének számítását a következő bekezdés tartalmazza.
Bemérés előtt várja meg, amíg a reagensek felmelegednek Vizelet kortizol közvetlen mérése
szoba-hőmérsékletre.
Az értékeket meg kell szorozni 1.09, ez a faktor a nulla kalibrátordal való
hígításból származik.
Javasolt a dirkt meghatározás ellenőrzése extrakciós meghatározással,
amennyiben a klinikai adatokkal és egyéb mérési eredményekkel az értékek
nincsenek összhangban.
Vizelet kortizol napi kiválasztódása (Q) (nmol/24óra):

Q = U x V

ahol
U = vizelet kortizol érték (nM)
V = vizelet térfogat literben kifejezve/24 óra

PI-IM1841–05 30 of 62
VÁRHATÓ ÉRTÉKEK szérum esetében, ≤ 8,9% a vizelet esetében és ≤ 9,4% a vizelet extraktum
Javasolt, hogy minden laboratórium saját maga állapítsa meg referencia esetében.
tartományát. Az alábbi, egészségesek vizsgálata során kapott adatok csak Inter-assay
tájékoztató jellegűek.
Mintákat duplikátumban vizsgálták 17 vagy 10 különböző sorozatban. A
Szérum: variációs koefficiens ≤ 9,2% volt a szérum esetében, ≤ 13,3% a vizelet
Reggel: 263 - 724 nM (n = 69) Este: 49 - 430 nM (n = 84) esetében és ≤ 12,6% a vizelet extraktum esetében.
Vizelet (n = 66) Valósság
Hígítási teszt
Vizsgálat Átlag (nmol/24h) Standard Szélső értékek
deviancia (95% populáció) A magas koncentrációjú mintákat a készletben található “nulla” kalibrátor
(nmol/24h) (nmol/24h) segítségével hígították meg. A visszanyerési százalék 86% és 115% között
Direkt 114 55 38 - 208 volt a szérum esetében, 80,1% és 118% között a vizelet esetében és 81,4%
Extrakció után 103 45 30 - 197 és 112% között a vizelet extraktum esetében.
Visszanyerési teszt
A gyermekkori (életkor és nem szeribnti) várt értékekre vonatkozó
részletes információ a metodikai leírás „APPENDIX” fejezetében Alacsony koncentrációjú mintához adtak ismert mennyiségű kortizolt. A
található. visszanyerési százalék 95% és 113% között volt a szérum esetében, 82,6%
és 107% között a vizelet esetében és 83,0% és 119% között a vizelet
MINŐSÉG-ELLENŐRZÉS extraktum esetében
A helyes laboratóriumi gyakorlat magába a foglalja a kontroll minták Mérési tartomány (az analitikai érzékenységtől a legmagasabb kalibrátor
rendszeres használatát a kapott eredmények minőségének biztosítása értékéig): 5,0-tól kb. 2000 nM-ig.
érdekében. A kontrollokat a mintákkal teljesen azonos módon kell vizsgálni,
a kapott adatokat pedig ajánlott a célnak megfelelő statisztikai módszerrel KORLÁTOZÁSOK
elemezni. A jelen leírásban foglalt előírások be nem tartása jelentős mértékben
Amennyiben a csomagolás sérült, vagy az adatok a kit teljesítőképességének befolyásolhatja az eredményeket.
romlására utalnak, kérjük, hogy lépjen kapcsolatba országának Az eredmények a beteg teljes klinikai képének (klinikai anamnézis, egyéb
Immunotech képviselőjével, vagy írjon a következő e-mail címre: vizsgálatok eredményei, más releváns információk) tükrében értelmezhetők.
imunochem@beckman.com
Hemolizált, icterusos vagy lipémiás mintát ne használjanak.
MINŐSÉGI JELLEMZŐK A jelenleg alkalmazott terápiás kortikoidokkal (prednizolon, prednizon) való
(További részletek a Mellékletben található Adattáblában) nagyon alacsony kereszt-reaktivitás ellenére, a nagy dózisokkal történő
A reprezentatív adatok kizárólag szemléltető jellegőek. A különálló kezelés a szérum és vizelet kortizol szint látszólagos emelkedéséhez
laboratóriumok eredményei ettől eltérhetnek. vezethet, a beadott terápiás szer vagy metabolitjai hatására. Ezért nem
tanácsos direkt kortizol meghatározást végezni rendszeres kortikoterápában
Analitikai érzékenység: 5 nM részesülő betegeknél.
Specificitás Antitesteket tartalmazó tesztek esetén fennáll a páciens mintában esetleg
Az immunoassay-ben használt antitestek kortizol specificitása igen magas. meglévő heterofil antitestek interferenciájának lehetősége. Azok a
Rendkívül alacsony a keresztreakció esélye a természetben előforduló páciensek, akik rendszeresen állatokkal érintkeznek vagy kezelés vagy
szteroidokkal (Aldoszteron, Kortikoszteron, Kortizon, 11-Dezoxikortizon, diagnosztikus eljárás során immunglobulinokat vagy immunglobulin
Progeszteron, stb.), illetve a mintákban előforduló terápiás gyógyszerekkel fragmenteket kaptak, antitestek (pl. HAMA) termelődéssel reagálhatnak,
(Prednisolon, Prednison, Spironolacton, stb.). melyek az immunoassay-vel interferálnak.
Pontosság Ezek okozhatnak hibás eredményeket. Fokozott körültekintéssel értékelje az
olyan páciensektől származó mintákat, akiknél valószínusíthető, hogy ilyen
Intra-assay antitestek vannak jelen.
Ugyanabban a kísérletsorozatban 10 vagy 25 párhuzamos minta
vizsgálatával a mintákra vonatkozó variációs koefficiens ≤ 5,8% volt a

PI-IM1841–05 31 of 62
CORTISOL RIA KIT Materiały pochodzące od człowieka
IM1841 Wszystkie surowice i osocza należy tak traktować jakby były materiałem
do zakażenia hepatitis lub AIDS, a niszczenie odpadów powinno być
przeprowadzo-ne zgodnie z przepisami obowiązującymi w kraju użytkownika.
RADIOIMMUNOLOGICZNA METODA DO OZNACZANIA
IN VITRO KORTYZOLU W LUDZKIEJ SUROWICY, Dichlorometan
OSOCZU I MOCZU Dichlorometan jest wysoce lotnym i łatwopalnym rozpuszczalnikiem.
Do użytku diagnostycznego in vitro. Ekstrakcja i odparowywanie musi być przeprowadzone pod wyciągiem.
Trzymać z daleka od płomienia. Nie pipetować odczynników przy użyciu ust.
ZASADA KLASYFIKACJA ZAGROŻEŃ WG GHS
Zestaw radioimmunologiczny do oznaczania kortyzolu jest zestawem
kompetycyjnym. Ten sam zestaw może być stosowany do oznaczania Substancja niesklasyfikowana jako niebezpieczna
kortyzolu:
.
● bezpośrednio w surowicy, osoczu oraz moczu, Karta charakterystyki jest dostępna w witrynie
● lub po ekstrakcji z moczu dichlorometanem i odparowaniu rozpuszczalnika, techdocs.beckmancoulter.com
a następnie zawieszeniu w kalibratorze zero.
Próbki surowicy, osocza, moczu, ekstraktów moczu, kontroli i kalibratorów ZBIERANIE PRÓB, PRZYGOTOWYWANIE,
są inkubowane w probówkach pokrytych monoklonalnym przeciwciałem ROZCIEŃCZANIE I PRZECHOWYWANIE
z kortyzolem znakowanym 125J, jako znacznikiem. Po inkubacji płynna Surowica lub osocze
zawartość probówek jest odciągana, a związana radioaktywność jest
mierzona w liczniku gamma. Zawartość hormonu w danej próbie jest • Pobierać krew do suchych probówek lub zawierających EDTA.
odczytywana z krzywej standardowej. • Oddzielić surowce lub osocze od komórek poprzez wirowanie.

OSTRZEŻENIE I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI • Próbki surowicy i osocza powinny być przechowywane w 2-8°C,
Ogólne uwagi jeżeli oznaczanie zostanie przeprowadzone w ciągu 24 godzin. Jeżeli
oznaczanie będzie przeprowadzone później, to należy odpowiednio
• Fiolki z kalibratorami i kontrolami nie powinny pozostawać otwarte rozdozowane próbki zamrozić (< -20°C, w ciągu 3 miesięcy), aby nie
przez czas dłuższy niż jest to konieczne aby uniknąć nadmiernego powtarzać ich zamrażania i rozmrażania. Rozmrażanie próbek musi
odparowania zawartości fiolki. być przeprowadzane w temperaturze pokojowej.
• Nie należy mieszać odczynników z różnych serii produkcyjnych. • Jeżeli stężenie próbki jest większe niż najwyższy kalibrator, to musi
• Krzywa standardowa musi być wykonana podczas każdego być ona rozcieńczona kalibratorem zero.
oznaczania. Próbki moczu
• Zalecane jest wykonywanie oznaczeń w duplikatach. • Zrobić dobową (24 godz.) zbiórkę moczu.
• Każda probówka może być użyta tylko raz. • Zmierzyć objętość.
Podstawowe zasady bezpieczeństwa podczas postępowania z • Jeżeli potrzebne, to podzielony zamrozić w < -20°C, najdłużej1
promieniowaniem tydzień. Rozmrażanie próbek musi być przeprowadzane w
Wejście w posiadanie, używanie, utylizacja i transfer materiałów temperaturze pokojowej.
radioaktywnych powinien być zgodny z prawem obowiązującym w • Jeżeli próbki moczu mają stężenie wyższe niż najwyższy kalibrator,
danym kraju. Przestrzeganie podstawowych zasad bezpieczeństwa przy muszą być rozcieńczone wodą destylowaną.
stosowaniu materiałów radioaktywnych powinno zapewnić odpowiednią
ochronę. MATERIAŁY DOSTARCZONE
• Nie jeść, nie pić, nie palić wyrobów tytoniowych, nie aplikować Wszystkie odczynniki zestawu są stabilne zgodnie z datą ich ważności
kosmetyków w obecności materiałów radioaktywnych. umieszczoną na opakowaniu, pod warunkiem przechowywania ich w
temperaturze 2-8°C. Daty ważności są wydrukowane tylko na etykietach
• Nie pipetować radioaktywnych roztworów przy użyciu ust. fiolek z przedłużonym okresem składowania składników przez producenta.
• Unikać wszelkiego kontaktu z materiałami radioaktywnymi poprzez Nie należy brać ich pod uwagę.
stosowa-nie rękawic i ubrań ochronnych. Probówki pokryte przeciwciałem monoklonalnym przeciw kortyzolowi:
• Wszystkie czynności przy użyciu materiałów radioaktywnych 2 x 50 probówek (gotowy do użycia)
powinny być wykonywane w przeznaczonym do tego celu miejscu, Znacznik kortyzolu znakowany 125J: 1 fiolka, 55 mL (gotowy do użycia)
znajdującym się w odpowiedniej odległości od korytarzy i innych
pomieszczeń. Fiolka zawiera mniej niż 185 kBq, w dniu produkcji, znakowanego 125J
kortyzolu w buforze z albuminą surowicy bydlęcej i azydek sodu (<0,1%)
• Materiały radioaktywne powinny być przechowywane w oraz barwnik.
zabezpieczonym pojemniku.
Kalibratory: pięć fiolek po 0,5 mL + jedna 5 mL fiolka z kalibratorem
• Należy zapisać datę przyjęcia radioaktywnych produktów, a czas ich „zero” (gotowy do użycia)
przechowywania powinien być zgodny z odpowiednim terminem.
Fiolki ze kalibratorami zawierają od 0 do około 2000 nM kortyzolu w buforze
• Sprzęt laboratoryjny i naczynia, które uległy kontaminacji powinny z albuminą bydlęcej surowicy i azydkiem sodu (<0,1%). Właściwe stężenia
być oddzielone od pozostałych, aby nie spowodować kontaminacji są podane na etykiecie każdej fiolki. Kalibratory są wykalibrowane według
krzyżowej różnymi radioizotopami referencyjnego preparatu ERM-DA192 i 193.
• W sytuacji zanieczyszczenia radioizotopami i/lub zgubieniu Kalibrator zero może być także zamówiony oddzielnie (kod: # IM1959 - 10
radioaktywnego materiału powinno być powzięte postępowanie mL, IM3444 - 250 mL).
zgodne z prawem obowiązującym w kraju użytkownika.
Uwaga: Sporadycznie występujące zmętnienie kallibratora "zero" nie ma
• Radioaktywne odpady powinny być przechowywane zgodnie z żadnego wpływu na jakość wyników.
przepisami obowiązującymi w kraju użytkownika.
Surowice kontrolne: 1 fiolka, 0,5 mL (gotowy do użycia)
Azydek sodu
Fiolka zawiera kortyzol w buforze z albuminą surowicy bydlęcej i azydek sodu
Niektóre odczynniki zawierają azydek sodu jako środek konserwujący. (<0,1%). Oczekiwany zakres wartości stężeń podano w dodatku.
Azydek sodu wchodzi w reakcje z ołowiem, miedzią lub mosiądzem, tworząc
wybuchowe azydki. W związku z tym odczynniki zawierające azydek MATERIAŁY WYMAGANE, ALE
sodu powinny być rozcieńczane dużą ilością wody przed wylaniem ich do
kanalizacji. NIEDOSTARCZANE
Poza standardowym wyposażeniem laboratorium wymagane są następujące
urządzenia:

PI-IM1841–05 32 of 62
Dla bezpośredniej metody oznaczania kortyzolu w surowicy, osoczu lub Procedura dla oznaczania bezpośredniego kortyzolu w moczu:
moczu
Wszystkie odczynnik przed pipetowaniem należy doprowadzić do
• Dokładna mikropipeta (50 µL). temperatury pokojowej.
• Półautomatyczna pipeta (500 µL). Etap Kalibratory i Mocze Probówki do
• Mieszadło wirowe („vortex“). kontrole całkowitego
zliczania (T)
• Pozioma lub orbitalna wytrząsarka.
1: Dodawanie
• System odciągający. Do pokrytych
• Licznik gamma do 125 jodu. przeciwciałem
probówek dodać
Dla metody do oznaczania kortyzolu w ekstraktach moczu (do wyboru) kolejno:
• dichlorometan (chlorek metylenu) o czystości analitycznej, nie kalibratory lub 50 µL - -
stabilizowany etanolem, kontrole
próbki moczu- - 50 µL -
• szklane pipety 2 i 5 mL, próbki moczu
• szklane probówki lub odpowiednie fiolki z zakręcanymi teflonowymi kalibrator zero - 50 µL -
korkami, - dobrze działający zestaw do wytrząsania, ponieważ jest to (uwaga: tylko do
bardzo ważne dla powtarzalności wyników oznaczania, próbek moczu)
• urządzenie do odparowywania. znacznik. 500 µL 500 µL 500 µL
Zmieszać.
PROCEDURA 2: Inkubacja
Ekstrakcja moczu (do wyboru, patrz Procedura dla oznaczania 1 godzinę w 18-25°C z wytrząsaniem (≥400 rpm).
bezpośredniego kortyzolu w moczu). 3: Zliczanie:
Uwaga: Ekstrakcja musi być przeprowadzona w czystych szklanych Odciągnąć starannie zawartość probówek (z wyjątkiem
probówkach lub fiolkach, przepłukanych dichlorometanem i nakrytych 2 probówek «całkowite cpm»).
teflonowym lub szklanym korkiem. Zliczać związane cpm (B) i całkowite cpm (T).
Przed ekstrakcją próbki doprowadzić do temperatury pokojowej.
Tylko próbki są ekstrahowane przed oznaczaniem; nie ekstrahować
WYNIKI
Wyniki należy odczytać z krzywej standardowej. Krzywa standardowa służy
kalibratorów.
do oznaczania stężenia kortyzolu w próbkach mierzonych w tym samym
• Ochłodzić odpowiednio objętość dichlorometanu w łaźni czasie co kalibratory.
wodno-lodowej.
Krzywa standardowa
• Ponumerować probówki lub fiolki.
Wyniki w dziale kontroli jakości były obliczane przy użyciu krzywej spline
• Dodać 500 µL próbki moczu do ponumerowanej probówki trzymanej (składanej) dopasowania z B/T lub B/B0 na osi pionowej w skali logit
w lodzie. i stężeniem analitu w kalibratorach na logarytmicznej osi poziomej (nmol/L).
• Dodać 5 mL dichloroetanu używając szklanych pipet, zakorkować Zastosowanie innych metod do opracowania danych może dać nieco inne
dokładnie i mieszać wirowo jedna minutę. wyniki.
• Pozwolić na rozdzielenie się dwóch faz w temperaturze pokojowej. Łączna aktywność: 66 953 cpm
• Odciągnąć warstwę wodną. Kalibratory Kortyzol cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
• Wziąć 2 mL fazy organicznej używając szklanej pipety lub strzykawki. (nmol/L)
0 0 62 217 92,9 100
• Odparować całkowicie fazę organiczną. Nie podgrzewać. 1 20 53 531 80,0 86,0
• Zawiesić organiczny ekstrakt w 200 µL kalibratoru zero. Odczekać 15 2 70 38 175 57,0 61,4
minut i mocno zamieszać wirowo. 3 200 21 730 32,5 34,9
Procedura oznaczania dla surowicy, osocza i ekstraktów moczu: 4 700 9233 13,8 14,8
5 2000 4271 6,38 6,87
Wszystkie odczynnik przed pipetowaniem należy doprowadzić do
temperatury pokojowej. (Przykładowe wartości do krzywej wzorcowej, nie do zastosowania)
Etap Kalibratory i Surowica, osocze Probówki do Próbki
kontrole lub ekstrakt całkowitego Dla każdej próbki odnajdź B/T lub B/B0 na osi pionowej i odczytaj
moczu zliczania (T) odpowiadające tej wartości stężenie kortyzolu na osi poziomej.
1: Dodawanie
Do pokrytych Aby przeliczyć nmol/L (nM) na ng/mL należy pomnożyć wynik przez 0.362.
przeciwciałem Surowica, osocze lub próbki moczu po ekstrakcji
probówek dodać
kolejno: Stężenie jest w nanomolach na litr (nM). Przeliczenie kortyzolu
- - wyekstrahowanego z moczu na dobową zbiórką moczu jest podane w
kalibratory lub 50 µL
następnym paragrafie.
kontrole
próbki surowicy - 50 µL - Próbki moczu oznaczane bezpośrednio
lub ekstrakty Wartość musi być pomnożona przez 1.09, współczynnik rozcieńczenia
moczu wynikający z dodania 50 µL kalibratoru zero.
znacznik. 500 µL 500 µL 500 µL
Zmieszać. Jest sugerowane, aby w przypadkach kiedy wyniki nie są zgodne z
danymi klinicznymi lub innymi pomiarami, sprawdzić oznaczenie z metody
2: Inkubacja
bezpośredniej metodą pośrednią, po ekstrakcji dichlorometanem.
1 godzinę w 18-25°C z wytrząsaniem (≥400 rpm).
3: Zliczanie: Kortyzol w dobowej zbiórce moczu (Q) (nmol/24 godziny) jest:
Odciągnąć starannie zawartość probówek (z wyjątkiem Q = U x V
2 probówek «całkowite cpm»).
Zliczać związane cpm (B) i całkowite cpm (T). gdzie:
U = zawartość kortyzolu w moczu (nM)

PI-IM1841–05 33 of 62
V = objętość moczu w litrach / 24 godziny Między oznaczeniami
Próbki były oznaczane w duplikatach w 17 lub 10 różnych seriach.
OCZEKIWANE WARTOŚCI Współczynniki wariancji były poniżej lub równały się wartości do 9,2%
Sugeruje się, aby w każdym laboratorium ustalono własne wartości
dla próbek surowicy, do 13,3% dla próbek moczu i do 12,6% dla próbek
normalne. Poniższe wartości otrzymano tylko od osób zdrowych i są one
ekstraktu moczu.
jedynie wskazówką:
Kontrola dokładności
Surowice:
Test rozcieńczania
Rano: 263 do 724 nM (n = 69) Wieczór: 49 do 430 nM (n = 84)
Próbki o wysokim stężeniu były seryjnie rozcieńczane kalibratorem zero.
Mocze (n = 66)
Procentowe odzyski otrzymano między 86% i 115% dla próbek surowicy,
Oznaczenie Odchylenie Najwyższe między 80,1% i 118% dla próbek moczu i między 81,4% i 112% dla próbek
Średnia
standardowe wartości dla ekstraktu moczu.
(nmol/24godz.)
(nmol/24godz.) 95% populacji Test odzysku
(nmol/24godz.)
Próbki o niskim stężeniu kortyzolu były łączone ze znaną ilością kortyzolu.
Bezposrednia 114 55 38 - 208
Procentowe odzyski otrzymano między 95% i 113% dla próbek surowicy,
Po ekstrakcji 103 45 30 - 197 między 82,6% i 107% dla próbek moczu i między 83,0% i 119% dla próbek
ekstraktu moczu.
Szczegółowe informacje dotyczące oczekiwanych wartości u dzieci (wg
wieku i płci) można znaleźć w dodatku z danymi "APPENDIX". Zakres pomiarowy (od czułości analitycznej do najwyższego kalibratora):
od 5,0 do około 2000 nM.
KONTROLA JAKOŚCI
Dobrze funkcjonujące laboratorium dla swej wiarygodności stosuje regularnie OGRANICZENIA
wewnętrzną kontrolę jakości otrzymanych wyników. Te próbki musza być Niestosowanie się do instrukcji załączonej do zestawu może znacznie
przygotowywane i oznaczane zgodnie z procedurą. Ich przydatność do wpływać na wyniki.
oceny każdego zestawu będzie właściwa przy zastosowaniu odpowiedniej Wyniki powinny być interpretowane w świetle całkowitego obrazu klinicznego
analizy statystycznej. pacjenta, włączając historię choroby, dane z innych testów i inne stosowne
W przypadku uszkodzenia paczki lub jeżeli opracowanie otrzymanych informacje.
wyników sprawia trudności proszę się kontaktować z miejscowym Nie używać zhemolizowanych, żółtaczkowych i lipemicznych próbek.
dystrybutorem lub pod adresem E-mail: imunochem@beckman.com
Ustalono niską reaktywnością krzyżową z kortykosteroidami podawanymi
CHARAKTERYSTYKA TESTU terapeutycznie, szczególnie prednisolonem i prednisonem. Jednak
(Po więcej wiadomości zajrzyj do zestawu danych w “DODATKU”) podawanie wysokich dawek tych leków może doprowadzić do mylącego
(artefakt) wzrostu kortzolu w surowicy i w moczu. Spowoduje to intrferencja
Reprezentatywne dane są przedstawiane tylko do celów ilustracyjnych. substancji podawanych, a szczególnie ich metabolitów. Niewskazane jest
Uzyskiwane parametry mogą się różnić w zależności od laboratoriów. stosowanie zestawu do bezpośredniego oznaczania kortyzolu u pacjentów
Analalityczna czułość: 5 nM otrzymujących systematycznie kortykoterapię.
Specyficzność W przypadku oznaczeń z wykorzystaniem przeciwciał istnieje możliwość
zakłóceń spowodowanych przez obce przeciwciała w próbce pacjenta.
Przeciwciało użyte w tej metodzie radioimmunologicznej jest wysoce Pacjenci, którzy byli regularnie wystawieni na kontakt ze zwierzętami
specyficzne w stosunku do kortyzolu. Ekstremalnie niska reaktywność lub byli poddawani immunoterapii lub zabiegom diagnostycznym z
krzyżowa została otrzymana w stosunku do innych naturalnie występujących użyciem immunoglobulin lub fragmentów immunoglobulin, mogą wytworzyć
steroidów (Aldosteronu, Kortikosteronu, Kortyzonu, 11-Dezoksykortyzol, przeciwciała (np. HAMA) zakłócające wyniki oznaczeń immunologicznych.
Progesteronu, etc.) lub leków obecnych w próbkach pacjentów
(Prednizolonu, Prednizonu, Spironolaktonu, etc.) Takie przeciwciała zakłócające mogą prowadzić do uzyskania błędnych
wyników. Należy starannie przeanalizować wyniki u pacjentów z
Precyzja podejrzeniem obecności tych przeciwciał.
Wewnątrz zestawu
Próbki z tej samej serii były oznaczane 10 lub 25 razy. Współczynniki
wariancji były poniżej lub równe wartości do 5,8% dla próbek surowicy, do
8,9% dla próbek moczu i do 9,4% dla próbek ekstraktu moczu.

PI-IM1841–05 34 of 62
CORTISOL RIA KIT SBĚR A PŘÍPRAVA, SKLADOVÁNÍ A ŘEDĚNÍ
IM1841 VZORKŮ
Vzorky plazmy a séra
IN VITRO RADIOIMUNOANALYTICKÉ STANOVENÍ • Odebírejte vzorky krve do zkumavek bez aditiv nebo s EDTA.
KORTISOLU V LIDSKÉM SÉRU, PLAZMĚ A MOČI • Centrifugací oddělte od buněk frakci séra nebo plazmy.
Pro diagnostické účely in vitro.
• Vzorky séra a plazmy lze uchovávat při 2-8 °C, jestliže bude stanovení
provedeno do 24 hodin. Při delším uchovávání (maximálně 3 měsíce)
PRINCIP je nutno vzorky zamrazit při (< -20 °C), v alikvotech, aby se předešlo
Radioimunoanalytické stanovení kortisolu je kompetitivní stanovení. Tato opakovanému rozmrazování a zmrazování. Rozmrazování provádějte
souprava může být použita buď: při laboratorní teplotě.
.
● pro přímé stanovení kortisolu v séru, plazmě a moči, • Vzorky, v nichž je koncentrace vyšší než nejvyšší kalibrátor, je nutno
● nebo pro nepřímé stanovení kortisolu v moči po extrakci dichlormetanem, zředit „nulovým“ kalibrátorem.
odpaření extraktu a jeho rozpuštění v „nulovém“ kalibrátoru.
Vzorky moči
Vzorky séra, plazmy nebo extrakty moči, kontrolní vzorek a kalibrátory se
spolu s 125I-kortisolem inkubují ve zkumavkách potažených monoklonální • Sbírejte moč po 24 hodin.
protilátkou proti kortisolu. Po inkubaci se obsah zkumavek odsaje a • Stanovte objem.
navázaná aktivita se změří gama-čítačem. Sestrojí se kalibrační křivka a
koncentrace kortisolu v neznámých vzorcích se odečtou z kalibrační křivky. • Je-li třeba, rozdělte do alikvotů a zamrazte na < -20 °C, maximálně 1
týden. Rozmrazování provádějte při laboratorní teplotě.
VAROVÁNÍ A OPATŘENÍ • Vzorky, v nichž je koncentrace kortisolu větší než v nejvyšším
Obecné poznámky: kalibrátoru, je nutno zředit destilovanou vodou a znovu analyzovat.
• Lahvičky s kalibrátory a kontrolními vzorky by měly být otevřené co
nejkratší dobu, aby nedošlo k nežádoucímu odpaření roztoku. POSKYTNUTÉ MATERIÁLY
Všechny reagencie v soupravě jsou stabilní do data exspirace, uvedeného
• Nemíchejte substance ze souprav různých šarží. na štítku krabice, jestliže jsou skladovány při 2-8 °C. Data exspirací uvedená
• Pro každou novou sérii analýz je nutné provést novou kalibraci. na štítcích jednotlivých složek se vztahují pouze k dlouhodobému skladování
u výrobce před kompletací souprav. Neberte na ně tedy, prosím, ohled.
• Doporučuje se provádět stanovení v duplikátech.
Zkumavky potažené monoklonální protilátkou proti kortisolu: 2 x 50
• Každá zkumavka může být použita jen jednou. kusů (připraveny k použití)
Základní pravidla radiační bezpečnosti 125
I-kortisol: 1 lahvička (55 ml); připraven k použití.
Tento radioaktivní materiál mohou přijímat, skladovat a používat pouze Lahvička obsahuje ke dni výroby méně než 185 kBq 125I značeného kortisolu
pracoviště, která splňují platné zákonné předpisy upravující podmínky v tlumivém roztoku s hovězím sérovým albuminem, azidem sodným (<0,1 %)
pro bezpečné nakládání s otevřenými radionuklidovými zářiči. Při práci s a barvivem.
radioaktivními látkami dodržujte následující pravidla:
Kalibrátory: 5 lahviček (po 0,5 ml) a 1 lahvička (5 ml) "0" kalibrátoru;
• Všechny radioaktivní látky musí být skladovány v původním balení a připraveny k použití.
jen na místech k tomu určených.
Lahvičky obsahují roztoky kortisolu o koncentracích od 0 do přibližně 2000
• Příjem a spotřeba radioaktivních látek musí být evidována. nmol/L v tlumivém roztoku s BSA, azidem sodným (<0,1 %). Přesné
• Práce s radioaktivními látkami musí být prováděny pouze ve koncentrace jsou uvedeny na štítcích lahviček. Kalibrátory jsou kalibrovány
vyhrazených prostorách. pomocí referenčního materiálu ERM-DA192 a 193.
• Pipetování nesmí být prováděno ústy. Nulový kalibrátor je možno objednat samostatně (kat.č. IM1959 - 10 ml,
IM3444 - 250 ml).
• V laboratořích určených k práci s radioaktivními látkami je zakázáno
jíst, pít, kouřit, líčit se a pod. Poznámka: Případný výskyt zákalu v nulovém kalibrátoru nemá vliv na kvalitu
stanovení.
• Obalový materiál, který není kontaminován, je možno odložit do
běžného odpadu pouze po odstranění varovných nápisů a značek. Kontrolní vzorek: 1 lahvička; (0,5 ml) připraven k použití.
• Povrch pracovních stolů, který by mohl být kontaminován, je třeba Vzorek obsahuje kortisol v tlumivém roztoku s BSA, azidem sodným (<0,1
pravidelně kontrolovat. Všechno laboratorní sklo, které bylo použito %). Koncentrační rozmezí očekávaných hodnot jsou uvedeny na dodatku
pro práci s radioaktivními látkami, musí být řádně dekontaminováno a návodu.
proměřeno před dalším použitím.
VYŽADOVANÉ, ALE NEPOSKYTNUTÉ
• V případě kontaminace nebo úniku radioaktivního materiálu
postupujte podle stanovených předpisů. MATERIÁLY
Kromě obvyklého laboratorního zařízení je pro analýzu potřebné následující
• Radioaktivní odpad likvidujte v souladu s platnými zákony a předpisy. vybavení:
Azid sodný Pro přímé stanovení kortisolu ve vzorcích plazmy, séra a moči
Nekteré substance jsou konzervovány azidem sodným. Azid sodný muže • přesná mikropipeta (50 µl)
reagovat s olovem, medí nebo mosazí za vzniku príslušných výbušných
azidu. Proto likvidované reagencie splachujte velkým množstvím vody. • poloautomatická pipeta (500 µl)
Biologický materiál lidského původu • vibrační míchadlo
Se všemi vzorky séra a plazmy musí být manipulováno jako s potenciálně • horizontální nebo orbitální třepačka
infekčními (hepatitis, nebo AIDS). • vývěva
Dichlormetan • gama-čítač kalibrovaný na 125I
Dichlormetan je vysoce těkavé a hořlavé rozpouštědlo. Extrakce a odpaření Pro stanovení kortisolu v extraktech moči (volitelné)
musí být provedeny v digestoři. Zabraňte styku s otevřeným ohněm.
Nepipetujte ústy. • dichlormetan, p.a. (nestabilizovaný etanolem)
• skleněné pipety (2 a 5 ml)
KLASIFIKACE NEBEZPEČÍ PODLE GHS
Není klasifikované jako nebezpečné • skleněné zkumavky nebo lahvičky se šroubovacími uzávěry,
těsněnými teflonem.
• odpařovací zařízení.
Bezpečnostní list je k dispozici na adrese
techdocs.beckmancoulter.com
PI-IM1841–05 35 of 62
POSTUP Krok Kalibrátory a Moč Zkum. pro "total
Extrakce moči (volitelná, viz Schéma postupu pro přímé stanovení kontrola (T)
kortisolu v moči). 1: Pipetace
Do zkumavek
Poznámka: Extrakce musí být prováděna v čistých skleněných zkumavkách
potažených
nebo lahvičkách, které byly vymyty dichlormetanem a vysušeny.
protilátkou
Před extrakcí nechejte vzorky vytemperovat na lab. teplotu a řádně je postupně
promíchejte. přidejte:
kalibrátor nebo 50 µl - -
Před stanovením se extrahují pouze vzorky; neextrahujte kalibrátory.
kontrolní vzorek
• Vychlaďte dostatečné množství dichlormetanu v ledem chlazené vodní Moč - 50 µl -
lázni. zero kalibrátor - 50 µl -
• Označte skleněné zkumavky. (pozor: pouze ke
vzorkům moči)
• Napipetujte po 500 µl vzorku moči do zkumavek chlazených v ledu.
radioindikátor 500 µl 500 µl 500 µl
• Přidejte 5 ml dichlormetanu, pečlivě zazátkujte a míchejte na Promíchejte.
vibračním míchadle 1 minutu. 2: Inkubace
• K oddělní obou fází nechejte dojít při laboratorní teplotě. 1 h při 18-25 °C za stálého třepání (≥400 rpm).
• Opatrně odsajte horní vodnou vrstvu. 3: Měření
Odsajte pečlivě obsah zkumavek (s výjimkou dvou
• Skleněnou pipetou nebo skleněnou injekční stříkačkou odeberte 2 ml zkumavek pro stanovení celkové aktivity T).
organické fáze. Měřte cpm pro vazebnost (B) a celkovou aktivitu (T).
• Odpařte tyto 2 mL do sucha bez zahřívání.
• Přidejte k odparku 200 µl „nulového" kalibrátoru. Nechejte stát 15 VÝSLEDKY
minut, a pak intenzívně zamíchejte na vibračním míchadle. Výsledky jsou získány proložením z kalibrační křivky. Křivka slouží k určení
koncentrace kortisolu pouze ve vzorcích měřených současně s kalibrátory.
Schéma postupu pro plazmu, sérum a extrakty moči
Kalibrační křivka
Nechte reagencie před pipetací vytemperovat na laboratorní teplotu.
Výsledky v oddělení kontroly kvality jsou vypočteny za použití křivky spline
Krok Kalibrátory a Sérum, plazma Zkum. pro "total s parametrem B/T nebo B/B0 na svislé ose logit a koncentrací analytu
kontrola nebo extrakty (T) kalibrátorů na vodorovné logaritmické ose (nmol/l).
moči
Jiné metody zpracování mohou dávat mírně rozdílné výsledky.
1: Pipetace
Do zkumavek Celková aktivita: 66 953 cpm
potažených Kalibrátory Kortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
protilátkou 0 0 62 217 92,9 100
postupně
1 20 53 531 80,0 86,0
přidejte:
- - 2 70 38 175 57,0 61,4
kalibrátor nebo 50 µl
kontrolní vzorek 3 200 21 730 32,5 34,9
vzorek séra, - 50 µl - 4 700 9 233 13,8 14,8
plazmy nebo 5 2000 4 271 6,38 6,87
extrakt moči
radioindikátor 500 µl 500 µl 500 µl (Příklad typického stanovení, nepoužívejte pro výpočet.)
Promíchejte. Vzorky
2: Inkubace Na vertikální ose lokalizujte pro každý vzorek hodnoty B/T nebo B/B0 a na
1 h při 18-25 °C za stálého třepání (≥400 rpm). horizontální ose odečtěte odpovídající koncentrace kortisolu.
3: Měření
Přepočet koncentrací z nmol/l na ng/ml se provede vynásobením faktorem
Odsajte pečlivě obsah zkumavek (s výjimkou dvou 0,362.
zkumavek pro stanovení celkové aktivity T).
Měřte cpm pro vazebnost (B) a celkovou aktivitu (T). Vzorky séra, plazmy nebo extraktů moči
Koncentrace odečtená s kalibrační křivky je udána v nmol/L (nM). Výpočet
Schéma postupu pro přímé stanovení kortisolu v moči množství kortisolu vyloučeného v moči za 24 hodin je uvedeno v následující
Nechte reagencie před pipetací vytemperovat na laboratorní teplotu. kapitole.
Vzorky moči stanovené přímo
Hodnota musí být vynásobena faktorem 1,09, vztaženým na ředění vzniklé
přídavkem 50 µl nulového kalibrátoru.
Doporučení: v případě, že získané výsledky přímého stanovení neodpovídají
klinickému obrazu, ověřte je v extrakčním stanovení.
Množství kortisolu Q, vyloučené v moči za 24 hodin (nmol/24h) se vypočítá
ze vztahu:

Q = U x V

kde
U = koncentrace kortisolu v moči v nmol/L
V = objem moči vyloučené za 24 hodin v litrech

OČEKÁVANÉ HODNOTY
Každá laboratoř by si měla stanovit vlastní rozmezí referenčních hodnot.
Následující hodnoty byly získány u zdravých jedinců a jsou zde uvedeny pro
informaci.

PI-IM1841–05 36 of 62
Sérum: Správnost
Ráno: 263 až 724 nM (n = 69) Odpoledne: 49 až 430 nM (n = 84) Test ředění
Moč (n = 66) Vzorky s vysokou koncentrací kortisolu byly ředěny a analyzovány.
Naměřené hodnoty „recovery” se pohybovaly v rozmezí 86 % až 115 % pro
Stanovení Průměrná Směrodatná Mezní hodnoty sérum, 80,1 % až 118 % pro moč a 81,4 % až 112 % pro extrakty moči.
koncentrace odchylka pro 95 %
(nmol/24h) (nmol/24h) populace Test „recovery“
(nmol/24h) Ke vzorkům s nízkou hladinou kortisolu byla přidána různá množství kortisolu
Přímé stanovení 114 55 38 - 208 a vzorky byly analyzovány. Naměřené hodnoty „recovery” se pohybovaly v
Extrakční 103 45 30 - 197 rozmezí 95 % až 113 % pro sérum, 82,6 % až 107 % pro moč a 83,0 % až
stanovení 119 % pro extrakty moči.
Rozsah měření (od analytické citlivosti po nejvyšší kalibrátor): 5,0 až
Detailní informace o očekávaných hodnotách dětských vzorků přibližně 2 000 nM.
(seřazených podle věku a pohlaví) jsou uvedeny v příloze "APPENDIX“

KONTROLA KVALITY OMEZENÍ

Nedodržení instrukcí uvedených v tomto návodu může vést k nesprávným
Správná laboratorní praxe předpokládá řádné a pravidelné používání výsledkům.
kontrolních vzorků, aby mohla být zajištěna kontrola kvality stanovených
výsledků. Kontrolní vzorky musí být stanoveny naprosto stejným způsobem Výsledky stanovení by měly být interpretovány ve světle celkového klinického
jako neznámé vzorky a k vyhodnocení výsledků se mají použít vhodné obrazu pacienta včetně anamnézy, údajů z dalších testů a jiných vhodných
statistické metody. informací.
V případě závažného poškození obalu, nebo jestliže získané výsledky Nepoužívejte hemolyzované, ikterické ani lipemické vzorky.
nejsou ve shodě s analytickými parametry stanovení, kontaktujte prosím Kortikoidy, běžně používané v terapii (např. prednisolon a prednison),
naše odborné pracovníky. E-mail: imunochem@beckman.com vykazují při stanovení nízkou zkříženou reakci. U pacientů, léčených
vysokými dávkami těchto léků může docházet ke zvýšení hladin kortisolu v
FUNKČNÍ CHARAKTERISTIKY moči a séru v důsledku vlivu samotných léčiv nebo jejich metabolitů. Proto
(podrobnosti jsou uvedeny v příloze “APPENDIX”) doporučujeme u pacientů s kortikoterapií používat ke stanovení kortisolu
Vzorová data slouží pouze k ilustrativním účelům. Výsledky získané v extrakční metodu.
jednotlivých laboratořích se mohou lišit. U stanovení využívajících protilátky existuje možnost interference
Analytická citlivost: 5 nM heterofilních protilátek přítomných v pacientském vzorku. Pacienti,
kteří byli pravidelně ve styku se zvířaty nebo podstoupili imunoterapii
Specifita nebo diagnostické procedury využívající imunoglobuliny nebo fragmenty
Protilátka použitá v systému je vysoce specifická pro kortisol. Ostatní imunoglobulinů, mohou produkovat protilátky jako například HAMA (Human
přirozeně se vyskytující steroidy (aldosteron, kortikosteron, kortison, Anti-Mouse Antibodies - lidské protilátky proti myším proteinům), které
11-deoxykortiko-steron, progesteron, atd.) nebo léky (Danazol, Prednisolon, interferují při imunologických stanoveních.
Spironolacton, atd.) dávají extrémně nízkou zkříženou reakci. Takové interferující protilátky mohou vést k chybným výsledkům. Výsledky
Přesnost pacientů, u nichž existuje podezření na přítomnost takovýchto protilátek,
posuzujte s opatrností.
Intra-assay
Přesnost intra-assay byla stanovena 10- resp. 25-krát opakovanou analýzou
sér. Hodnota variačního koeficientu byla menší nebo rovna 5,8 % pro sérum,
8,9 % pro moč a 9,4 % pro extrakty moči.
Inter-assay
Přesnost inter-assay byla určena analýzou sér v 17 resp. 10 nezávislých
analýzách. Hodnota variačního koeficientu byla menší nebo rovna 9,2 % pro
sérum, 13,3 % pro moč a 12,6 % pro extrakty moči.

PI-IM1841–05 37 of 62
CORTISOL RIA KIT Bezpečnostný list je k dispozícii na stránkach
IM1841 techdocs.beckmancoulter.com

IN VITRO RADIOIMUNOANALYTICKÉ STANOVENIE ZBER A PRÍPRAVA, SKLADOVANIE A

KORTIZOLU V ĽUDSKOM SÉRE, PLAZME A MOČI RIEDENIE VZORIEK
Na in vitro diagnostické použitie. Vzorky plazmy a séra
• Odoberajte vzorky krvi do skúmaviek bez aditív alebo s EDTA.
PRINCÍP
Rádioimunoanalytické stanovenie kortizolu je kompetitívne stanovenie. Táto • Centrifugáciou oddeľte od buniek frakciu séra alebo plazmy.
súprava môže byť použitá: • Vzorky séra a plazmy možno uchovávať pri 2-8 °C, ak bude stanovenie
.
● na priame stanovenie kortizolu v sére, plazme a v moči, urobené do 24 hodín. Pri dlhšom uchovávaní (maximálne 3 mesiace)
● na nepriame stanovenie kortizolu v moči po extrakcii dichlórmetánom, je nutné vzorky zamraziť pri (< -20 °C), v alikvótoch, aby sa predišlo
odparení extraktu a jeho rozpustení v „nulovom“ kalibrátori. opakovanému rozmrazovaniu a zmrazovaniu. Rozmrazovanie robte
pri laboratórnej teplote.
Vzorky séra, plazmy alebo extrakty moča, kontrolná vzorka a kalibrátory sa
spolu s 125I-kortizolom inkubujú v skúmavkách potiahnutých monoklonálnou • Vzorky, v ktorých je koncentrácia vyššia ako v najvyššom kalibrátori,
protilátkou proti kortizolu. Po inkubácii sa obsah skúmaviek odsaje a treba zriediť „nulovým“ kalibrátorom.
naviazaná aktivita sa zmeria gama-meračom. Zostrojí sa kalibračná krivka Vzorky moča
a koncentrácie kortizolu v neznámych vzorkách sa odpočítajú z kalibračnej
krivky. • Zbierajte moč 24 hodín. Stabilizácia nie je nutná.
• Stanovte objem.
VÝSTRAHA A OPATRENIA
Všeobecné poznámky: • Ak je treba, rozdeľte do alikvótov a zmrazte na < -20 °C, maximálne
na týždeň. Rozmrazovanie robte pri laboratórnej teplote.
• Fľaštičky s kalibrátormi a kontrolnými vzorkami môžu byť otvorené čo
najkratšiu dobu, aby nedošlo k nežiaducemu odparení roztoku. • Vzorky, v ktorých je koncentrácia kortizolu vyššia ako najvyšší
kalibrátor, je potrebné zriediť destilovanou vodou a znovu analyzovať.
• Nemiešajte substancie zo súprav rôznych šarží.
• Pre každú novú sériu analýz treba urobiť novú kalibráciu. POSKYTOVANÝ MATERIÁL
Všetky reagencie v súprave sú stabilné do dátumu exspirácie, uvedeného
• Doporučuje sa robiť stanovenia v duplikátoch. na štítku krabice, ak sú skladované pri 2-8 °C. Dátumy exspirácií uvedené
• Skúmavky sú iba na jedno použitie. na štítkoch jednotlivých zložiek sa vzťahujú iba na dlhodobé skladovanie u
výrobcu pred kompletizáciou súprav. Neberte na ne, prosím, ohľad.
Základné pravidlá radiačnej bezpečnosti
Skúmavky potiahnuté monoklonálnou protilátkou proti kortizolu: 2 x 50
Tento rádioaktívny materiál môžu prijímať, skladovať a používať iba kusov (pripravené na použitie)
pracoviská, ktoré spĺňajú platné zákonné predpisy upravujúce podmienky 125
pre bezpečné nakladanie s otvorenými rádionuklidovými žiaričmi. Pri práci s I-kortizol: 1 fľaštička (55 ml); pripravená na použitie.
rádioaktívnymi látkami dodržujte nasledujúce pravidlá: Fľaštička obsahuje ku dňu výroby menej ako 185 kBq 125I značeného kortizolu
• Všetky rádioaktívne látky sa musia skladovať v pôvodnom balení a iba v tlmivom roztoku s hovädzím sérovým albumínom, azidom sodným (<0,1 %)
na miestach k tomu určených. a farbivom.
• Nesmie sa pipetovať ústami. Kalibrátory: 5 fľaštičiek (po 0,5 ml) a 1 fľaštička (5 ml) "0" kalibrátora;
pripravené na použitie.
• Príjem a spotreba rádioaktívnych látok musia byť evidované.
Fľaštičky obsahujú roztoky kortizolu o koncentráciách od 0 do približne
• Práce s rádioaktívnymi látkami sa musia robiť iba vo vyhradených 2000 nmol/L v tlmivom roztoku s BSA, azidom sodným (<0,1 %). Presné
priestoroch. koncentrácie sú uvedené na štítkoch fľaštičiek. Kalibrátory sú kalibrované
• V laboratóriách určených na prácu s rádioaktívnymi látkami je pomocou referenčného materiálu ERM-DA192 a 193.
zakázané jesť, piť, fajčiť, líčiť sa a pod. Nulový kalibrátor je možné objednať zvlášť (kat. č. IM1959 - 10 ml, IM3444
• Obalový materiál, ktorý nie je kontaminovaný, možno odložiť do - 250 ml).
bežného odpadu až po odstránení výstražných nápisov a značiek. Poznámka: Prípadný výskyt zakalenia v nulovom kalibrátore nemá vplyv na
• Povrch pracovných stolov, ktorý by mohol byť kontaminovaný, treba kvalitu stanovenia.
pravidelne kontrolovať. Kontrolná vzorka: 1 fľaštička (0,5 ml); pripravená na použitie.
• V prípade kontaminácie alebo úniku rádioaktívneho materiálu Vzorka obsahuje kortizol v tlmivom roztoku s BSA, azidom sodným (<0,1
postupujte podľa stanovených predpisov. %). Koncentračné rozmedzia očakávaných hodnôt sú uvedené v dodatku
• Rádioaktívny odpad likvidujte v súlade s platnými zákonmi a Návodu.
predpismi.
POTREBNÝ MATERIÁL, KTORÝ SA
Azid sodný
Niektoré substancie sú konzervované azidom sodným. Azid sodný môže
NEPOSKYTUJE
Okrem obvyklého laboratórneho zariadenia je pre analýzu potrebné
reagovať s olovom, meďou alebo mosadzou za vzniku príslušných výbušných nasledujúce vybavenie:
azidov. Preto likvidované reagencie splachujte veľkým množstvom vody.
Na priame stanovenie kortizolu vo vzorkách plazmy, séra a moča
Biologický materiál ľudského pôvodu
• presná mikropipeta (50 µl)
So všetkými krvnými vzorkami sa musí manipulovať ako s potenciálne
infekčnými (hepatitis alebo AIDS). Všetok vzniknutý odpad je treba likvidovať • poloautomatická pipeta (500 µl)
podľa platných predpisov. • vibračné miešadlo
Dichlórmetán • horizontálna alebo orbitálna trepačka
Dichlórmetán je vysoko tekavé a horľavé rozpúšťadlo. Extrakcia a odparenie • výveva
sa musí robiť v digestóriu. Zabráňte styku s otvoreným ohňom. Nepipetujte
ústami. • gama-merač kalibrovaný na 125I
Na stanovenie kortizolu v extraktoch moča (voliteľné)
KLASIFIKÁCIA RIZÍK PODĽA GHS
Nie je klasifikované ako nebezpečné. • dichlórmetán, p.a. (nestabilizovaný etanolom),
• sklenené pipety (2 a 5 ml),

PI-IM1841–05 38 of 62
 • sklenené skúmavky alebo fľaštičky so závitovými uzávermi, tesnenými Krok Kalibrátory a Moč Skúm. pre
teflonom, kontrola „total” (T)
1: Pipetácia
• odparovacie zariadenie.
Do skúmaviek
potiahnutých
POSTUP protilátkou
Extrakcia moča (voliteľná, viď tiež Schéma postupu pre priame
postupne
stanovenie kortizolu v moči).
pridajte:
Poznámka: Extrakcia sa musí robiť v čistých sklenených skúmavkách alebo kalibrátor alebo 50 µl - -
fľaštičkách, ktoré boli vymyté dichlórmetánom a vysušené. kontrolnú vzorku
Pred extrakciou nechajte vzorky vytemperovať na lab. teplotu a riadne ich vzorku moča - 50 µl -
premiešajte. zero kalibrátor - 50 µl -
(pozor: iba k
Pred stanovením sa extrahujú iba vzorky; neextrahujte kalibrátory. vzorkám moča)
• Vychlaďte dostatečné množstvo dichlórmetánu v ľadom chladenom rádioindikátor 500 µl 500 µl 500 µl
vodnom kúpeli. Premiešajte.
• Označte sklenené skúmavky. 2: Inkubácia
1 h pri 18-25 °C za stáleho trepania (≥400 rpm)
• Napipetujte po 500 µl vzorky moča do skúumaviek chladených ľadom.
3: Meranie
• Pridajte 5 ml dichlórmetánu, dobre zazátkujte a miešajte na vibračnom Odsajte pozorne obsah skúmaviek (s výnimkou dvoch
miešadle 1 minútu. skúmaviek pre stanovenie celkovej aktivity T).
• K oddeleniu oboch fáz nech dôjde pri laboratórnej teplote. Merajte cpm pre väzobnosť (B) a celkovú aktivitu (T).
• Opatrne odsajte hornú vodnú vrstvu.
• Sklenenou pipetou alebo sklenenou injekčnou striekačkou odoberte 2
VÝSLEDKY
Výsledky sa získajú preložením z kalibračnej krivky. Krivka slúži na určenie
ml organickej fázy. koncentrácie kortizolu iba vo vzorkách meraných súčasne s kalibrátormi.
• Odparte tieto 2 mL do sucha bez zahrievania. Kalibračná krivka
• Pridajte k odparku 200 µl „nulového" kalibrátora. Nechajte stáť 15 Výsledky uvedené v časti o kontrole kvality sú vypočítané preložením krivky
minút a potom intenzívne zamiešajte na vibračnom miešadle. metódou spline. Na logit vertikálnu os sa vyniesli hodnoty B/T alebo B/B0 a na
Schéma postupu pre plazmu, sérum a extrakty moča logaritmickú horizontálnu os koncentrácie analytu v kalibrátoroch (nmol/l).
Nechajte reagencie pred pipetovaním vytemperovať na laboratórnu teplotu. Iné metódy spracovania môžu dávať mierne rozdielne výsledky.

Krok Kalibrátory a Sérum, plazma Skúm. pre Celková aktivita: 66 953 cpm
kontrola alebo extrakty „total” (T) Kalibrátory Kortizol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
moča 0 0 62 217 92,9 100
1: Pipetácia 1 20 53 531 80,0 86,0
Do skúmaviek 2 70 38 175 57,0 61,4
potiahnutých 3 200 21 730 32,5 34,9
protilátkou 4 700 9233 13,8 14,8
postupne
5 2000 4271 6,38 6,87
pridajte:
kalibrátor alebo 50 µl - -
(Príklad typického stanovenia, nepoužívajte pre výpočet.)
kontrolnú vzorku
vzorku séra, - 50 µl - Vzorky
plazmy alebo Na vertikálnej ose lokalizujte pre každú vzorku hodnoty B/T alebo B/B0 a na
extrakt moča horizontálnej osi odpočítajte odpovedajúcu koncentráciu kortizolu.
rádioindikátor 500 µl 500 µl 500 µl
Prepočet koncentrácií z nmol/l na ng/ml sa urobí vynásobením faktorom
Premiešajte. 0,362.
2: Inkubácia
1 h pri 18-25 °C za stáleho trepania (≥400 rpm) Vzorky séra, plazmy alebo extraktov moča
3: Meranie Koncentráciae odpočítaná z kalibračnej krivky je udaná v nmol/L (nM).
Odsajte pozorne obsah skúmaviek (s výnimkou dvoch Výpočet množstva kortizolu vylúčeného v moči za 24 hodín je uvedený v
skúmaviek pre stanovenie celkovej aktivity T). nasledujúcej kapitole.
Merajte cpm pre väzobnosť (B) a celkovú aktivitu (T). Vzorky moča stanovené priamo
Schéma postupu pre priame stanovenie kortizolu v moči Hodnota musí byť vynásobená faktorom 1,09, vztiahnutým na riedenie
vzniknuté prídavkom 50 µl nulového kalibrátora.
Nechajte reagencie pred pipetovaním vytemperovať na laboratórnu teplotu.
Doporučenie: v prípade, že získané výsledky priameho stanovenia
neodpovedajú klinickému obrazu, overte ich v extrakčnom stanovení.
Množstvo kortizolu Q vylúčené v moči za 24 hodín (nmol/24h) se vypočíta zo
vzťahu:

Q = U x V

kde
U = koncentrácia kortizolu v moči v nmol/L
V = objem moča vylúčeného za 24 hodín v litroch

OČAKÁVANÉ HODNOTY
Každé laboratórium by si malo stanoviť vlastný rozsah referenčných hodnôt.
Uvádzané hodnoty sa získali od zdravých jedincov a sú iba informačné.
Sérum:
Ráno: 263 až 724 nM (n = 69) Poobede: 49 až 430 nM (n = 84)

PI-IM1841–05 39 of 62
Moč (n = 66) Správnosť

Assay Priemerná Smerodatná Medzné hodnoty Test riedenia

Koncentrácia odchýlka pre 95 % Vzorky s vysokou koncentráciou kortizolu boli riedené a analyzované.
(nmol/24h) (nmol/24h) populácie Namerané hodnoty „recovery” sa pohybovali v rozmedzí 86 % až 115 % pre
(nmol/24h) sérum, 80,1 % až 118 % pre moč a 81,4 % až 112 % pre extrakty moča.
Priame 114 55 38 - 208
Test „recovery“
stanovenie
Extrakčné 103 45 30 - 197 K vzorkám s nízkou hladinou kortizolu boli pridané rôzne množstvá kortizolu
stanovenie a vzorky boli analyzované. Namerané hodnoty „recovery” sa pohybovali v
rozmezí 95 % až 113 % pre sérum, 82,6 % až 107 % pre moč a 83,0 % až
Detailné informácie o očakávaných hodnotách detských vzoriek 119 % pre extrakty moča.
(zoradených podľa veku a pohlavia) sú uvedené v prílohe " APPENDIX“ Rozsah merania (od analytickej citlivosti po najvyšší kalibrátor): 5,0 až
približne 2000 nM.
KONTROLA KVALITY
Správna laboratórna prax predpokladá riadne a pravidelné používanie OBMEDZENIA
kontrolných vzoriek, aby mohla byť zaistená kontrola kvality stanovených Nedodržanie inštrukcií uvedených v tomto návode môže viesť k nesprávnym
výsledkov. Kontrolné vzorky sa musia stanoviť úplne rovnakým spôsobom výsledkom.
ako neznáme vzorky a na vyhodnotenie výsledkov sa majú použiť vhodné
štatistické metódy. Výsledky stanovení by mali byť interpretované v súlade s celkovým klinickým
obrazom pacienta vrátane anamnézy, údajov z ďalších testov a iných
V prípade závažného poškodenia obalu, alebo ak získané výsledky nie sú vhodných informácií.
v zhode s analytickými parametrami stanovenia, kontaktujte prosím našich
odborných pracovníkov. E-mail: imunochem@beckman.com Nepoužívajte hemolyzované, ikterické ani lipemické vzorky.
Kortikoidy, bežne používané v terapii (napr. prednisolon a prednison),
VÝKONNOSTNÉ CHARAKTERISTIKY vykazujú pri stanovení nízku skríženú reakciu. U pacientov liečených
(podrobnosti sú uvedené v prílohe “APPENDIX”) vysokými dávkami týchto liekov môže dochádzať k zvýšeniu hladín kortizolu
Vzorové dáta slúžia iba k informačným účelom. Výsledky získané v v moči a sére v dôsledku vplyvu samotných liečiv alebo ich metabolitov.
jednotlivých laboratóriách sa môžu líšiť. Preto doporučujeme u pacientov s kortikoterapiou používať na stanovenie
kortizolu extrakčnú metódu.
Analytická citlivosť: 5 nM
Pri stanoveniach využívajúcich protilátky existuje možnosť interferencie
Špecifita heterofilných protilátok prítomných v pacientskej vzorke. Pacienti, ktorí
Protilátka použitá v systéme je vysoko špecifická pre kortizol. Ostatné pravidelne prichádzali do kontaktu so zvieratami alebo užívali imunoterapiu,
prirodzene sa vyskytujúce steroidy (aldosterón, kortikosterón, kortizon, prípadne podstúpili diagnostické procedúry využívajúce imunoglobulíny
11-deoxykortiko-sterón, progesterón, atď.) alebo lieky (Danazol, alebo fragmenty imunoglobulínov, môžu produkovať protilátky, napríklad
Prednisolon, Spironolacton, atd.) dávajú extrémne nízku skríženú reakciu. ľudské protilátky proti myším proteínom (HAMA), ktoré interferujú pri
imunologických stanoveniach.
Presnosť
Také interferujúce protilátky môžu mať za následok chybné výsledky.
Intra-assay Výsledky pacientov, u ktorých existuje podozrenie na prítomnosť takýchto
Presnosť intra-assay bola stanovená 10-krát resp. 25-krát opakovanou protilátok, posudzujte s opatrnosťou.
analýzou sér. Hodnota variačného koeficienta bola nižšia alebo rovná 5,8 %
pre sérum, 8,9 % pre moč a 9,4 % pre extrakty moča.
Inter-assay
Presnosť inter-assay bola určená analýzou sér v 17 resp. 10 nezávislých
analýzach. Hodnota variačného koeficienta bola nižšia alebo rovná 9,2 %
pre sérum, 13,3 % pre moč a 12,6 % pre extrakty moča.

PI-IM1841–05 40 of 62
CORTISOL RIA KIT 표본 채집, 처리, 보관 및 희석
혈청과 혈장 검체의 수집
IM1841
• 어떤 첨가물이나EDTA도 들어있지 않은 시험관에 혈액을 수집한다.
사람 혈청과 혈장, 뇨 안의 코티졸의 시험관 내 측정을 위 • 혈청과 혈장은 원심침전법에 의해 분리한다.
한 방사선 면역 측정법 • 측정이 24시간 이내에 실행된다면 혈청과 혈장 검체는 2-8℃에서 보
체외 진단용으로 사용합니다. 관한다. 더 오랜 기간 보관을 위해서는 하여 반복적인 냉동과 해동을
막기 위해 -20℃ (3 개월 이내) 에서 냉동 보관하라. 검체는 실온에서
원리 해동시킨다.
Cortisol의 방사면역측정법은 경합측정법이다. 동일한 kit로 아래의 여러 방 • 최고 표준액 농도보다 높은 검체는 0번 표준액으로 희석해야 한다.
법을 이용한 cortisol 측정에 이용할 수 있다:
. 뇨검체의 수집
● 혈청, 혈장이나 뇨 중에서 직접 측정.
● 또는 0 standard로 재현탁한 후, dichloromethane을 이용한 뇨추출법과 용 • 플라스크에 24시간동안의 축뇨를 수집한다.
매를 이용한 증발탈수법을 이용한 측정. • 부피를 측정한다.
혈청, 혈장 또는 뇨 검체, 뇨추출물은, control과 standard는 125I 표지 cortisol • 필요하다면 -20℃에 분리 보관한다(일주). 검체는 실온에서 해동시
tracer와 함께 단세포군 항체 피복 시험관 내에서 배양된다. 배양 후, 시험관 킨다.
의 액체 내용물은 흡입되고 결합형의 방사능이 측정된다. 미지의 검체 값은
표준곡선의 내삽에 의해 결정되어진다. • 만약 검체의 농도가 최고 표준용액보다 크다면 증류수로 희석시켜야
한다.
경고 및 주의 사항 제공되는 품목
일반적인 주의
Kit 내의 모든 시약은 2~8°C에 저장하면 Kit label에 표기된 유효기간까지 안
• 표준액과 정도관리용액은 증발을 막기 위해 가능한 짧게 개봉해야 한 정하다. 구성 바이알에 표기된 온도와 유효기간은 제조사를 위한 표기이니,
다. 참고하지 마십시요.
• 상이한 lot의 kit들을 서로 섞지 않는다. 개 (즉시 사용가능)
Anti-cortisol 단 세 포 군 항 체 로 피 복 된 시 험 관 : 2 × 50개
• 각 측정마다 새로운 표준 곡선이 필요하다. 125
㎖) 1개
I 표 지 cortisol tracer : vial(55㎖ 개 (즉시 사용가능)
• 2번의 반복 측정이 권장된다. Vial은 제조당시, 소혈청 알부민과 아지드화나트륨(<0.1), 염색제를 포함한
• 각 튜브는 반드시 한번씩만 사용해야 한다. 완충액 내에 125I 표지 cortisol 185kBq 함유하고 있다.
방사선 안전에 대한 기본 규칙 ㎖ vial 5개
표 준 용 액 : 0.5㎖ 개와 5㎖
㎖ 0번
번 표 준 용 액 vial 1개
개 (즉시 사용가능)
방사성 물질의 구입, 소유와 양도는 사용되는 국가의 규제에 따른다. 기본 각 vial은 소혈청 알부민과 아지드화 나트륨(<0.1 %)과 함께 cortisol의 0에서
규칙에 대한 엄수는 충분한 방호를 제공한다. 대략 2,000 nM까지의 용액을 담고 있다. 정확한 표준액 농도는 vial 표지에
표시되어 있다. 표준액은 ERM-DA192 뇨 193 기준에 의해 표준화되었다.
• 방사성 물질이 있는 장소에서는 취식, 음주, 흡연과 화장을 하지 않도
록 한다. 0번 표준액은 별도 주문해야 한다. (cat. #IM1959 – 10 mL, IM3444 – 250 mL)
• 방사성 용액을 입으로 pipetting 하지 않도록 한다. 주의: 0번 표준액이 경우에 따라 혼탁할 수 있는데 이것은 실험 결과에 영향
을 미치지는 않는다.
• 장갑과 실험복을 착용하여 방사성 물질에 대한 모든 접촉을 피하여라.
㎖) 1개
정 도 관 리 용 액 : vial(0.5㎖ 개 (즉시 사용가능)
• 방사성 물질의 모든 조작은 복도와 다른 바쁜 장소에서 적절한 장소,
거리에서 수행되어야한다. vial은 소혈청 알부민과 아지드화 나트륨(<0.1 %)을 포함한 완충액 내에
cortisol을 담고 있다. 예상 값이 부록에 표기된 농도 범위에 해당합니다.
• 방사성 물질은 지정된 장소 내에서 제공되는 용기에 보관되어야만 한
다. 필요하지만 제공되지 않는 품목
• 모든 방사성 제품의 수령과 저장에 대한 기록은 최신정보로 갱신하여 표준적인 실험실 기기에 부가하여 아래의 항목들이 요구된다.
야 한다. 플 라 즈 마 샘 플 에 서 cortisol 직 접 결 정 , 혈 청 과 소 변
• 오염이 되기 쉬운 실험실 장비와 유리제품은 다른 종류의 방사성 동 • 정밀 micropipet (50 µL)
위원소와의 교차오염 의 예방을 위해 분리 보관되어야 한다.
• 반 자동 pipet (500 µL)
• 모든 경우의 방사성 오염이나 방사성 물질의 분실은 규정된 절차에
의해 해결되어야만 한다 • Vortex형 믹서
• 방사성 폐기물은 사용되는 국가에서 규정한 규제에 따라 처리되어야 • 수평 궤도형 shaker
만 한다. • 흡입용 system
아지드화 나트륨 • I-125측정을 위한gamma counter
어떤 시약은 방부제로서 아지드화 나트륨을 포함하고 있다. 아지드화 나트 뇨 추 출 법 의 cortisol 측 정
륨은 납, 구리, 황동과 폭발성 요오드화 금속의 형태를 띄는 반응을 일으킬
수 있다. 시약은 많은 양의 물로 씻어내어 배관계통을 통해 처분하라. • 분석 등급 dichloromethane (methylene chloride), ethanol-안정화되지
않은 것
사람 기원 물질
• 2㎖와 5㎖ 유리 pipets
모든 혈액 검체는 질병을 전염시키는 것으로(예를 들면 간염이나 AIDS) 취
급해야 하고 폐기물은 국가에서 규정한 규제에 따라 처리되어야 한다. • Teflon-lined screw 마개가 달린 유리 시험관이나 vial

Dichloromethane • 증발기

Dichloromethane은 휘발성과 가연성이 매우 높은 용액이다. 추출과 증발은 절차

반드시 환기장치가 있는 곳에서 해야 한다. 어떠한 화염과도 멀리 해야 한다. 뇨로부터의 추출
입으로 용액을 pipet하면 안된다.
주의: 추출은 dichloromethane으로 미리 세척하고 teflon 또는 유리마개에 맞
GHS 유 해 물 질 등 급 는 유리 바이알이나 시험관에서 행한다.
유해물질로 분류되지 않음 검체는 검사전에 추출한다, 표준액은 추출하지 않는다. 모든 검체를 실온에
이르게 하고 추출 시작전에 잘 혼합한다.
안전보건자료는 techdocs.beckmancoulter.com에서 확인할 수 실 험 전 에 검 체 만 추 출 한 다 .; 표 준 용 액 은 추 출 하 지 않 는 다 .
있습니다 • 충분한 양의 dichloromethane을 얼음물이 든 용기에서 냉각시킨다.
• 시험관이나 플라스크에 번호를 매긴다.
• 번호를 매겨 얼음물로 냉각시킨 시험관에 뇨검체 500㎕를 첨가한다.

PI-IM1841–05 41 of 62
 • 유리 pipet과 마개를 사용하여 dichloromethane 5㎖를 조심스럽게 첨 총 활 동 : 66,953 cpm
가하고 1분간 혼합한다. 표준용액 Cortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
• 실온에서 2가지 상을 분리한다. 0 0 62,217 92.9 100
1 20 53,531 80.0 86.0
• 수용액상태의 상층액을 흡입하여 제거한다. 2 70 38,175 57.0 61.4
• 유리 pipet이나 주사기를 사용하여 유기상 2㎖를 취한다. 3 200 21,730 32.5 34.9
• 증발탈수기를 사용하여 유기상을 완전히 증발시킨다. 가열하지 않도 4 700 9,233 13.8 14.8
록 한다. 5 2000 4,271 6.38 6.87
• 유기 추출물을 0 calibrator 200㎕에 더한다. 15분간 대기한 후 세게 ( 표준곡선의 예 , 결과값에는 적용하지 마십시요 .)
흔들어준다.
검체
혈청과, 혈장 뇨 추출 측정 순서
수직축에 각각의 검체와 정도관리 B/T 또는 B/B0 가 위치하고 수평축에서 상
pipeting하기 전에 모든 시약을 실온에 가져온다. 응하는 cortisol 농도를 읽어 낸다.
순서 표준액과 정도 혈청, 혈장이나 총방사능(T) 측 nmol/L(nM)을 ng/mL로 전환하려면, 결과값에 0.362를 곱해준다.
관리용액 뇨 추출물 정용 시험관 추출 후에 측정한 혈청, 혈장 또는 뇨 검체
단계 : 첨 가
1단
농도는 nmol/L(nM)로 나타낸다. 하루의 뇨 중 cortisol 추출 농도의 계산은 다
항체 피복 시험 음 그래프에서 주어진다.
관에 차례대로
첨가하라: 직접 측정에 의한 뇨 검체
표준용액이나 50 µL - - 로 결과값을 곱하여
0번 표준용액의 50㎕의 첨가에 기인한 희석 인자, 1.09로
control 야 한다.
혈청이나 뇨추 - 50 µL -
임상적인 data나 다른 측정의 결과와 일치하지 않는 경우에는 dichloromethane
출물 추출 후, 간접적으로 측정한 값으로 직접 측정에 의한 값을 맞추어 볼 것을
트레이서 500 µL 500 µL 500 µL 제안한다.
혼합한다. 뇨 중 cortisol의 일일 배출량(Q)(nmol/24시간)은:
단계 : 배 양
2단
≥400 rpm으로 흔들어 주며 실온(18-25℃)에 Q = U x V
서 1시간동안 배양한다.
여기서
단계 : 계 수
3단
시험관의 내용물(총방사능(T)측정을 위한 시 U = 뇨 cortisol 값 (nM)
험관 2개는 제외)을 흡입한다. V = liters/24시간으로 나타낸 뇨의 부피
결합형 cpm(B)과 총 cpm(T)를 측정
기대값
뇨 cortisol 직 접 측 정 순 서 개별 실험실마다 개별적인 정상값을 결정할 것을 권장한다. 건강한 사람들
로부터 얻어진 아래의 값들은 단지 지침일 뿐이다.
pipeting하기 전에 모든 시약을 실온에 가져온다.
혈청:
순서 표준액과 정도 뇨 총방사능(T) 측
오전: 263 ~ 724 nM(n=69) 오후: 49 ~ 430 nM(n=84)
관리용액 정용 시험관
단계 : 첨 가
1단 뇨 (n=66)
항체 피복 시험
분석 평균 (nmol/24h) 표준편차 개체 중 95 %
관에 차례대로
(nmol/24h) 에 대한 극한값
첨가하라:
- - (nmol/24hrs)
표준용액이나 50 µL
직접 측정 114 55 38 - 208
control
- - 추출 후 103 45 30 - 197
뇨 검체 50 µL
0번 표준용액( 뇨 - 50 µL -
연령에 따라 분류됨)는
소아의 기대 값에 대한 상세 정보(연 는 데이터 시트 “부
부록”
검체에만) 에 나와 있습니다.
트레이서 500 µL 500 µL 500 µL
혼합한다. 정도관리
단계 : 배 양
2단 좋은 실험 실습은 control 검체가 결과값의 질을 향상시켜주는데 이용되는
것을 내포한다. 검체들은 측정 검체와 같은 방법으로 처리되어져야 하며 적
≥400 rpm으로 흔들어 주며 실온(18-25℃)에 절한 통계방법에 의해서 분석되어진 결과값이 권장된다.
서 1시간동안 배양한다.
단계 : 계 수
3단 만약 포장에 이상이 있거나 결과값에 문제가 있으면, 공급업체나 다음의 메
일로 연락주시기 바랍니다. imunochem@beckman.com
시험관의 내용물(총방사능(T)측정을 위한 시
험관 2개는 제외)을 흡입한다. 성능 특성
결합형 cpm(B)과 총 cpm(T)를 측정 ( 더 자 세 한 사 항 은 “APPENDIX” 를 참 고 하 세 요 .)
제시된 자료는 예시 참고용입니다. 각 실험실의 결과들은 다를 수 있습니다.
결과 민 감 도 : 5 nM
결과는 내삽에 의한 표준곡선을 사용하여 구한다. 표준곡선은 표준물질과
동시에 측정된 검체의 Cortisol 농도를 결정지어 준다. 특이도
표준곡선 면역측정에 사용된 항체들은 Cortisol에 매우 높은 특이성을 갖고 있다.
정도관리 부서의 결과는 대수 세로 축에 B/T 또는 B/B0 이 있고 대수 가로 축 자연스럽게 발생되는 스테로이드(Aldosterone, Corticosterone, Cortisone,
에 교정물질의 분석물질 농도(nmol/L)가 있는 spline (스플라인) 곡선 맞춤을 11-Desoxycortisol, Progesterone, etc.)나 환자 검체에 있을 수 있는 치료용
사용하여 산출되었습니다. 약제(Prednisolone, Prednisone, Spironolactone, etc.) 와는 거의 교차반응이
없다.
다른 데이터의 공제 방법은 다른 결과값을 보여줄 수 있다.
정밀성
측정내
검체들은 같은 종류로10또는 25번 측정된다. 변이계수는 혈청에서 5.8 %나
그 이하이며, 뇨에서는 8.9 %나 그 이하에서 보여졌다, 뇨 추출물9.4 %나 그
이하에서 보여졌다.
PI-IM1841–05 42 of 62
측정간 결과는 환자의 임상학적 가족력과 추가되는 실험이나 적절한 정보 등 모든
임상학적 자료를 통해 해석해야 한다.
검체들은 17또는10가지의 다른 종류로 2번 반복 측정된다. 변이계수는 혈
청에서 9.2 %나 그 이하이며, 뇨에서는 13.3 %나 그 이하에서 보여졌다, 뇨 용혈된 검체나 고지혈증, 황달이 있는 검체의 사용은 피한다.
추출물12.6 %나 그 이하에서 보여졌다.
본 검사에 사용되는 항체는 환자 검체의 헤테로필릭 항체의 간섭을 받을 수
정확성 있다.
희석 검사 본 검사에 사용되는 항체는 환자 검체의 헤테로필릭 항체의 간섭을 받을 수
있다. 정기적으로 동물에 노출되거나 면역치료 또는 항체를 생산할 수 있는
고농도의 검체는 0번 표준용액으로 연속적으로 희석되었다. 고농도 검체는
면역글로불린 (예: HAMMA)을 이용하는 진단 검사를 받은 환자는 면역검사
표준용액 0번으로 희석했다. 혈청의 회수율은 86~115 %, 뇨는 80.1~118 %
에 간섭을 받을 수 있다.
였다, 뇨 추출물81.4~112 %였다.
이와 같이 간섭을 일으키는 항체는 잘못된 결과를 가져올 수 있습니다. 이러
회수율 검사
한 항체를 보유한 것으로 의심되는 환자의 결과를 주의해서 평가하십시오.
저농도의 검체들은 정량의 cortisol을 첨가하였다. 회수율 비율은 95~113 %
사이였다, 뇨는 82.6~107 % 였다, 뇨 추출물83.0~119 %였다.
측 정 범 위(분석 민감도에서 최고 교정물질까지): 5.0~약 2,000 nM.

한계
이 사용설명서를 준수하지 아니하면 결과에 크게 영향을 미칠 것이다.

PI-IM1841–05 43 of 62
CORTISOL RIA KIT Güvenlik Bilgi Formuna techdocs.beckmancoulter.com
IM1841 adresinden ulaşılabilir

İNSAN SERUM, PLAZMA VE İDRARINDA KORTISOL’ÜN NUMUNE TOPLANMASI, SAKLANMASI VE

İN VİTRO TESPİTİ İÇİN RADIOIMMUNOASSAY TESTTİR DİLÜSYONU
İn vitro diagnostik kullanım içindir. Serum ve plazma numuneleri
• Kanı, başka bir madde içermeyen kuru tüplere veya EDTA içeren
PRENSİP tüplere alınız.
Kortisol’lün radioimmunoassay kiti, bir yarışma deneyidir. Aynı kit, kortisolün
ölçümü için aşağıdakilerde de kullanılabilir: • Serum veya plazmayı hücrelerden santrifüjle ayırınız.
.
● doğrudan serum, plazma veya idrar, • Eğer test 24 saat içinde gerçekleştirilecekse, serum ve plazma
● veya idrarda diklorometan ile ekstraksiyondan sonra solventin numuneleri 2-8°C’de saklanabilir. Daha uzun süre saklanacaksa (<
buharlaştırılmasının ardından sıfır kalibratörde yeniden süspansiyon haline -20°C, 3 ay içinde)’de tekrar çözüp dondurma işlemini önlemek için
getirilerek. bölerek dondurunuz. Numunelerin buzu oda ısısında çözdürülmelidir.
Serum, plazma veya idrar numuneleri, idrar ekstreleri, kontrol ve kalibratörler • Eğer numuneler en yüksek kalibratörden daha yüksek konsantrasyona
monoclonal antikor-kaplanmış tüplerde 125I-işaretlenmiş kortisol tracer’ı ile sahipse sıfır kalibratör ile dilüe edilmelidir.
inkübe edilirler. İnkübasyon sonrasında, tüplerin sıvı içeriği aspire edilir İdrar numuneleri
ve bağlanmış radyoaktivite ölçülür. Bir kalibrasyon eğrisi oluşturulur ve
bilinmeyen değerler, standard eğrisinden interpolasyon yolu ile elde edilirler. • 24-saatlik idrarı bir kaba toplayınız.
• Miktarını ölçünüz.
UYARILAR VE ÖNLEMLER
Genel uyarılar • Gerekiyorsa bölerek < -20°C’de saklayınız, maksimum 1 hafta.
Numunelerin buzu oda ısısında çözdürülmelidir.
• Kalibratör ve kontrol şişeleri, buharlaşmayı önlemek amacıyla
mümkün olduğunca kısa süreli açık kalmalıdır. • Eğer numuneler en yüksek kalibratörden daha yüksek konsantrasyona
sahipse distile su ile dilüe edilmelidir.
• Farklı lotlardan kit reaktiflerini karıştırmayınız.
• Her deney için bir standard eğrisi dahil edilmelidir. SAĞLANAN MALZEMELER
2-8°C’de saklandığında bütün reaktifler, kit etiketindeki son kullanma
• Testi duplike olarak çalışmak önerilmektedir. tarihine kadar stabildir. Şişe üzerindeki son kullanma tarihleri sadece üretici
• Her tüp sadece bir kez kullanılmalıdır. tarafından içeriklerin uzun süreli saklanmaları durumunda geçerlidir.
Radyasyon güvenliği için temel kurallar Anti-cortisol monoklonal antikor kaplanmış tüpler: 2 x 50 tüp (kullanıma
hazır)
Satınalma, sahip olma, kullanma ve radyoaktif materyalin taşınması, 125
kullanılan ülkenin yönetmeliğine tabidir. Radyasyon güvenliğinin temel I-işaretlenmiş kortisol tracer: 55 mL bir şişe (kullanıma hazır)
kurallarına bağlı kalınması, yeterli korumayı sağlayacaktır. Şişe üretim tarihinde, bovin serum albumin, sodyum asit (<% 0,1) ve boya
• Radyoaktif materyallerin bulunduğu ortamda yeme, içme, sigara içme, içeren bir tampon içindeki 125I-işaretlenmiş kortisol’den, 185 kBq içerir.
kozmetik uygulaması gibi faaliyetler gerçekleştirilmemelidir. Kalibratörler: 0,5 mL beş şişe ve 5 mL 1 şişe “sıfır kalibratör” (kullanıma
• Radyoaktif materyallerin pipetlemesi ağızla yapılmamalıdır. hazır)
• Eldiven ve laboratuvar kıyafetleri giyerek, radyoaktif materyallerle Kalibratör şişeleri, bovin serum albumin ve sodyum asit (<% 0,1) tamponu
teması önleyiniz. içinde 0 ile yaklaşık 2.000 nM kortisol içerir. Tam konsantrasyon,
şişe üzerindeki etikette belirtilmiştir. Kalibratörler, referans solüsyonu
• Radyoaktif malzemelerle ilgili bütün işlemler, kalabalık ortamlar ve ERM-DA192 ve 193 karşı kalibre edilmiştir.
koridorlardan uzakta uygun bir ortamda gerçekleştirilmelidir.
Ayrıca 0 kalibratör sipariş edilebilir (Kat. No IM1959 - 10 mL, IM3444 - 250
• Radyoaktif materyaller, bu malzemeler için ayrılmış bir bölümde ve mL)
kapalı bir dolapta saklanmalıdır.
Not: Sıfır kalibratörde bazen oluşabilecek bulanıklık test performansını
• Radyoaktif ürünlerin girişi ve saklanması ile ilgili bir kayıt güncel olarak etkilemez.
tutulmalıdır.
Kontrol serumu: 0,5 mL bir şişe (kullanıma hazır)
• Kontaminasyona uğramış laboratuvar ekipmanları ve tüpler, farklı
radyoizotopların çapraz kontaminasyonunu önlemek için ayrı Şişe, bovin serum albumin ve sodyum asit (<% 0,1) tamponu içinde kortisol
tutulmalıdır. içerir. Beklenen değerler, ekteki konsantrasyon aralıklarında belirtilmiştir.
• Her bir radyoaktif kontaminasyon veya radyoaktif malzeme kayıp GEREKLİ OLAN ANCAK SAĞLANMAYAN
vakası, belirlenen prosedürler izlenerek çözülmelidir.
MALZEMELER
• Radyoaktif atıklar, ülkenin kurallarına uyularak ele alınmalı ve yok Standard laboratuvar ekipmanlarına ek olarak aşağıdaki malzemeler
edilmelidir. gerekmektedir:
Sodyum asit Plazma örneklerinde kortizol doğrudan belirlenmesi, serum ve idrar
Bazı reaktifler koruyucu olarak sodyum asit içermektedir. Sodyum asit, • Hassas mikropipet (50 µL).
kurşun, bakır veya pirinç ile reaksiyona girebilir ve patlayıcı metal asitler
oluşturabilir. Reaktiflerin, lavabo ve boru sisteminden bol su akıtılarak • Yarı-otomatik pipet (500 µL).
giderilmesi gerekmektedir. • Vorteks tipi mikser.
İnsan kaynaklı materyal • Horizontal veya orbital shaker.
Bütün serum ve plazmalara, hepatitler ve AIDS’i geçirebilecek gibi işlem • Aspirasyon sistemi.
yapılmalıdır. Atıklar, ülkenin kurallarına göre yok edilmelidir.
• 125 iyot için gamma counter seti.
Diklorometan
İdrar ekstraktı kortisol deneyi için (isteğe bağlı)
Diklorometan çok uçucu ve parlayıcı bir çözücüdür. Ekstraksiyon ve
buharlaştırma ventilasyon başlığı altında yapılmalıdır. Olası alevden uzak • etanolsüz stabilize edilmiş analitik sınıf diklorometan (metilen klorür)
durunuz. Reaktifleri ağızla pipetlemeyiniz • 2 ve 5 mL cam pipetler,
GHS TEHLİKE SINIFLANDIRMASI • cam tüpler veya teflonla kaplanmış vidalı kapaklı şişeler,
Tehlikeli olarak sınıflandırılmamıştır • buharlaştırıcı.

PI-IM1841–05 44 of 62
PROSEDÜR SONUÇLAR
İdrarın ekstraksiyonu (isteğe bağlı, İdrar kortisolü için direkt test Sonuçlar, interpolasyon ile standard eğrisinden bulunmalıdır. Standard
prosedürü bakınız). eğrisi, kalibratörlerle aynı anda, numunelerin unkonjuge estriol
konsantrasyonlarının tespiti için kullanılır.
Not: Ekstraksiyon, diklorometan ile çalkalanmış, ağzı teflon veya cam
kapakla kapatılmış temiz cam şişe veya tüplerde yapılmalıdır. Standard eğrisi
Ekstraksiyona başlamadan önce, numuneleri oda ısısına getiriniz. Kalite kontrol bölümündeki sonuçlar, logit dikey eksende B/T veya B/B0 ile
spline eğri uydurma ve logaritmik yatay eksende (nmol/L) kalibratörlerin analit
Testten önce, sadece numuneler ekstrakte edilmelidir, kalibratörler konsantrasyonu kullanılarak hesaplanmıştır.
ektrakte edilmemelidir.
Diğer veri indirgeme metodları biraz farklı sonuçlar verebilir.
• Yeterli miktarda diklorometanı buz-banyosunda soğutunuz.
• Tüp veya şişeleri numaralandırınız. Toplam etkinlik: 66.953 sayım/dak
Kalibratörler Cortisol (nM) sayım/dak B/T (%) B/B0 (%)
• Buz içinde tutulan tüplere 500 µL idrar numunesi ekleyiniz.
(n=3)
• Bir cam pipet kullanarak 5 mL diklorometan ekleyiniz, dikkatlice 0 0 62.217 92,9 100
kapatınız ve bir dakika süresince vorteksleyiniz. 1 20 53.531 80,0 86,0
• Oda ısında iki faza dönüşmesi için bırakınız. 2 70 38.175 57,0 61,4
3 200 21.730 32,5 34,9
• Üstteki kısmı aspirasyonla alınız.
4 700 9.233 13,8 14,8
• Cam pipet veya şırınga ile 2 mL organik fazdan alınız. 5 2000 4.271 6,38 6,87
• Organik fazı evaporatörde tamamen buharla uçurunuz. Isıtmayınız.
(Standard eğrisi örneği, hesaplamada kullanmayınız)
• Organik ekstraktı 200 µL sıfır kalibratöre alınız. 15 dakika bekleyiniz
ve sonra iyice vorteksleyiniz. Numuneler
Serumlar, plazma ve idrar ekstraktları için Test prosedürü: Her bir numune için, dikey eksende B/T veya B/B0 yerini belirleyiniz ve
yatay eksende ona karşılık gelen kortisol konsantrasyonunu nmol/L olarak
Pipetlemeden önce bütün reaktifleri oda ısısına getiriniz. okuyunuz.
Aşamalar Kalibratörler ve Serumlar, plazma Total sayım (T) nmol/L’yi ng/mL’ye dönüştürmek için sonuçları 0.362 ile çarpınız.
kontrol veya idrar tüpleri Serum, plazma veya idrar numuneleri ekstraksiyon sonrasında test
ekstraktları edilirler
1: Eklemeler
Antikor Konsantrasyon litrede nanomol şeklindedir (nM). Günlük kortisol atım
kaplanmış miktarının hesaplaması aşağıdaki paragrafta verilmiştir.
tüplere doğru bir Direkt prosedürle test edilen idrar numuneleri
şekilde ekleyiniz:
- - 50 µL sıfır kalibratörü eklenmesi nedeniyle değer 1.09 ile çarpılmalıdır.
kalibratörler veya 50 µL
kontrol Kilinik veriler veya diğer ölçümlerle uyumsuzluk durumlarında direkt test ile
serum - 50 µL - alınan sonucun, diklorometan ekstrksiyonu sonrasında indirekt test ile alınan
numuneleri veya sonuçla karşılaştırılması önerilmektedir.
idrar ekstraktı İdrar kortisolünün günlük atımı (Q) (nmol/24 saat)’tir:
tracer 500 µL 500 µL 500 µL
Karıştırınız Q = U x V
2: Inkübasyon
1 saat 18-25°C’de (≥400 rpm) çalkalayıcıda Burada:
3: Sayınız U = idrar kortizol değeri (nM)
Tüplerin içeriğini dikkatlice aspire ediniz (Total
V = litre olarak idrar volümü /24 saat
sayım için iki tüp hariç).
Bağlanmış (B) ve total sayım/dak (T)’yi belirleyiniz. BEKLENEN DEĞERLER
Her laboratuvarın kendi normal değerlerini oluşturması önerilmektedir.
İdrar kortisolü için direkt test prosedürü: Aşağıdaki değerler sağlıklı bireylerden alınmıştır ve sadece yol göstericidir.
Pipetlemeden önce bütün reaktifleri oda ısısına getiriniz. Serumlar:
Aşamalar Kalibratörler ve İdrarlar Total sayım (T) Sabah: 263 to 724 nM (n = 69) Akşam: 49 to 430 nM (n = 84)
kontrol tüpleri İdrarlar (n = 66)
1: Eklemeler
Antikor Test Ortalama Standard Popülasyonun
kaplanmış (nmol/24s) sapması %95’i için en
tüplere doğru bir (nmol/24s) uç değerler
şekilde ekleyiniz: (nmol/24s)
kalibratörler veya 50 µL - - Direkt 114 55 38 - 208
kontrol Ekstraksiyon 103 45 30 - 197
idrar numuneleri - 50 µL - sonrası
sıfır kalibratör - 50 µL -
(dikkat: Çocuklar için beklenen değerler (yaş ve cinsiyete göre belirlenmiş),
sadece idrar kullanma kılavuzunun “APPENDIX-EK” bölümünde bulunabilir.
numunelerine)
tracer 500 µL 500 µL 500 µL KALİTE KONTROL
Karıştırınız İyi laboratuvar uygulamaları, alınan sonuçların kalitesini garanti altına
almak için kontrol numunelerinin düzenli olarak kullanılmasını gerektirir. Bu
2: Inkübasyon
numuneler, aynen test numuneleri gibi kullanılmalıdır ve sonuçlarının uygun
1 saat 18-25°C’de (≥400 rpm) çalkalayıcıda istatiksel metodlarla analiz edilmesi önerilmektedir.
3: Sayınız
Tüplerin içeriğini dikkatlice aspire ediniz (Total Paketteki bozulma veya alınan verilerde değişiklik olduğu durumlarda lütfen
sayım için iki tüp hariç). yerel distribütörünüzü arayınız veya aşağıdaki e-mail adresini kullanınız.
imunochem@beckman.com
Bağlanmış (B) ve total sayım/dak (T)’yi belirleyiniz.

PI-IM1841–05 45 of 62
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ ve % 113, idrar için % 82,6 ile % 107 ve idrar ekstraktları için % 83,0 ile %
(daha fazla bilgi için ekteki “APPENDIX-EK” veri formuna bakınız) 119 arasında bulundu.
Temsili veriler yalnızca örnek olarak verilmiştir. Her bir laboratuarda elde Ölçüm aralığı (analitik duyarlılıktan en yüksek kalibratöre): 5,0 ila yaklaşık
edilen performans farklılık gösterebilir. 2.000 nM.
Analitik duyarlılık: 5 nM SINIRLAMALAR
Özgüllük Bu kullanım kılavuzuna uyulmaması, sonuçları belirgin olarak etkileyebilir.
Bu testte kullanılan antikorlar, kortisol’e yüksek duyarlılığa sahiptir. Sonuçlar, klinik hikaye, ek testlerden alınan veriler ve diğer bilgilerin de
Diğer doğal steroidlere karşı (Aldosterone, Corticosterone, Cortisone, yeraldığı hastanın toplam klinik durumu ışığı altında değerlendirilmelidir.
11-Desoxycortisol, Progesterone, vb) veya hasta numunesinde bulunan Çok hemolizli, sararmış ve lipemik numuneleri kullanmayınız.
ilaçlara karşı (Prednisolone, Prednisone, Spironolactone, vb.) çok düşük bir
çapraz reaksiyon görülmüştür. Uygulanmakta olan kortikoid tedavisine (özellikle de prednizolin, prednizon
gibi) çok düşük çapraz reaksiyon olasılığına karşın, yüksek doz tedavi,
Kesinlik verilen maddelerle veya metabolitleri ile etkileşim sebebiyle serum ve idrar
Deney-içi kortizolünde yapay bir yükselme görülebilir. Bu sebeple, sistematik kortizol
tedavisi gören hastalarda direkt kortisol testi önerilmemektedir.
Numuneler, aynı seride 10 veya 25 kez tekrarlandı. Değişim katsayısı serum
için % 5,8’e eşit veya altında, idrar için % 8,9’e eşit veya altında ve idrar Antikor içeren testlerde, hasta serumu içindeki heterofil antikorlar tarafından
ekstraktları için % 9,4’e eşit veya altında bulundu. interferans olasılığı bulunmaktadır. Hayvanlarla sürekli etkileşimde bulunan
hastalar veya immunoterapi gören veya ör. HAMA gibi immunoassay ile
Testler arası etkileşim gösteren immunoglobulinler veya immunoglobulin fragmanlarının
Numuneler 17 veya 10 farklı seride duplike olarak test edildi. Değişim kullanıldığı tedavi gören hastalarda antikor oluşturabilir.
katsayısı serum için % 9,2’ye eşit veya altında, idrar için % 13,3’e eşit veya Etkileşime giren bu tür antikorlar hatalı sonuçlar üretebilir. Bu antikorlara
altında ve idrar ekstraktları için % 12,6’e eşit veya altında bulundu. sahip olduğundan şüphe duyulan hastaların sonuçlarını dikkatle
Doğruluk değerlendirin.
Dilüsyon testi
Yüksek konsantrasyonlu numuneler seri olarak sıfır kalibratör ile dilüe edildi.
Elde edilen düzeltme oranı serum için % 86 ve % 115, idrar için % 80,1 ile %
118 ve idrar ekstraktları için % 81.4 ile % 112 arasında bulundu.
Düzeltme testi
Değeri bilinen iki serum numunesi eşit oranlarda karıştırılarak test
prosedürüne göre çalışılmıştır. Elde edilen düzeltme oranı serum için % 95

PI-IM1841–05 46 of 62
CORTISOL RIA KIT Материал человеческого происхождения
IM1841 С исследуемыми образцами сыворотки или плазмы крови следует
обращаться как с потенциально инфекционным материалом, могущим
содержать вирусы СПИД и гепатита.
НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO
ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОРТИЗОЛА В СЫВОРОТКЕ, ПЛАЗМЕ Дихлорметан
И МОЧЕ ЧЕЛОВЕКА Дихлорметан является высоко летучим и огнеопасным растворителем.
Для диагностики in vitro. Стадии экстракции и испарения следует проводить в вытяжном шкафу.
Избегать открытого огня. Не пипетировать реагент ртом.
ПРИНЦИП КЛАССИФИКАЦИЯ ОПАСНОСТЕЙ ПО
Радиоиммунологическое определение кортизола является
конкурентным видом анализа. С помощью данного набора можно СИСТЕМЕ СГС
проводить определение кортизола: Не классифицируется как опасное вещество
.
● непосредственно в сыворотке, плазме и моче
● после экстракции мочи дихлорэтаном, испарения органической фазы Паспорт безопасности доступен на сайте
и растворения экстракта в «нулевой» калибровочной пробе. techdocs.beckmancoulter.com
Образцы сыворотки, плазмы, мочи и ее экстрактов, а также
контрольные и калибровочные пробы инкубируют в пробирках, ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И
покрытых моноклональными антителами, совместно с раствором
125
I-кортизола в качестве метки. После окончания инкубации удаляют РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
жидкое содержимое пробирок и измеряют связанную активность 125I. Образцы плазмы и сыворотки крови
Концентрацию кортизола в анализируемых образцах определяют • Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки,
методом интерполяции по калибровочной кривой. содержащие ЭДТА.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ • Отделить сыворотку/плазму от клеток крови

центрифугированием.
ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ • Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8°C в течение
Общие замечания:
24 часов. Для более длительного хранения их необходимо
• Флаконы с калибраторами и контролями следует открывать разделить на аликвоты и заморозить при < -20°C, до 3 месяцев.
непосредственно перед использованием, во избежание Анализируемые образцы следует размораживать при комнатной
чрезмерного испарения. температуре.
• Не смешивать реагенты из наборов разных серий. • Если концентрация в образце превышает концентрацию в
• Анализ калибровочных проб должен проводиться одновременно максимальной калибровочной пробе, его следует разбавить
с исследуемыми образцами. нулевой калибровочной пробой.

• Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. Образцы мочи

• Пробирки только для одноразового применения. • Собрать суточную мочу.

Основные правила обращения с радиоактивными веществами. • Измерить ее объем.

Получение, использование и транспортировка радиоактивных • Для хранения образцов их следует разделить на аликвоты и
материалов должны происходить в соответствии с принятыми в данной заморозить при < -20°C (1 неделю). Анализируемые образцы
стране нормами радиационной безопасности и санитарными правилами следует размораживать при комнатной температуре.
работы с радиоактивными веществами. • Если измеренное значение кортизола в образце превышает
• В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, максимальную концентрацию в калибровочных пробах, его
пользоваться косметикой. следует развести дистиллированной водой и провести анализ
повторно.
• Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
• Для ограничения контакта с радиоактивными материалами ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
рекомендуется использовать разовые перчатки и лабораторную Все реагенты стабильны при 2-8°C до окончания срока годности
спецодежду. набора, указанного на этикетке. Сроки годности, указанные на
этикетках флаконов с реагентами, относятся только к их хранению в
• Все манипуляции с радиоактивными веществами следует производственных условиях вплоть до момента комплектации набора и
проводить в специально оборудованных для этого помещениях, не распространяются наполученную заказчиком продукцию.
удаленных от мест постоянного пребывания людей.
Пробирки, покрытые моноклональными антителами к кортизолу: 2
• Радиоактивные вещества следует хранить с использованием x 50 шт. (готовы к использованию).
контейнеров в специально отведенных для этого местах. 125
Метка, раствор I-кортизола: один флакон, 55 мл (готова к
• Необходимо регистрировать поступление и расход использованию).
радиоактивных материалов.
На дату выпуска препарат содержит 185 кБк 125I-меченого кортизола в
• Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, растворе буфера с бычьим сывороточным альбумином, азидом натрия
чтобы предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами. (<0,1%) и красителем.
• Любой случай радиоактивного загрязнения или исчезновения Калибровочные пробы: 5 флаконов по 0,5 мл и 1 флакон с 5 мл
радиоактивного материала должен рассматриваться в «нулевой» калибровочной пробы (готовы к использованию).
соответствии с законодательством.
Калибровочные пробы содержат кортизол в диапазоне концентраций
• Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в от 0 до приблизительно 2 000 нМ в буфере с бычьим сывороточным
соответствии с законодательством. альбумином и азидом натрия (< 0,1%). Точные концентрации указаны на
Азид натрия этикетках флаконов. Калибровочные пробы аттестованы относительно
референсных препаратов ERM-DA192 и 193.
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид Нулевой калибратор может быть заказан отдельно (кат. № IM1959 - 10
натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные мл, IM3444 - 250 мл).
реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной Примечание: Иногда возможно снижение прозрачности "нулевого"
воды, после чего их можно сливать в канализацию. калибратора, что не влияниет на характеристики теста.

PI-IM1841–05 47 of 62
Контрольная сыворотка: 1 флакон (0,5 мл), (готова к использованию) Стадия Калибраторы Сыворотки, Пробирки для
и контрольные плазмы и общего счета (T)
Флакон содержит кортизол в буфере с бычьим сывороточным пробы экстракты мочи
альбумином и азидом натрия (< 0,1%). Ожидаемые диапазоны 1: Внесение
концентраций указаны на дополнительном листке-вкладыше. реагентов
В покрытые
НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ антителами
ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ пробирки
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь последовательно
следующее: внести:
Калибровочные 50 мкл - -
Для прямого определения кортизола в сыворотке, плазме и моче
и контрольные
• микропипетка (50 мкл) пробы
• полуавтоматическая пипетка (500 мкл) образцы - 50 мкл -
сыворотки,
• вихревой смеситель типа Vortex плазми и
• горизонтальный или орбитальный встряхиватель экстракты мочи
раствор метки 500 мкл 500 мкл 500 мкл
• водоструйный насос
Перемешать
• гамма-счетчик для измерения активности 125I. 2 Инкубация
Для определения кортизола в экстрактах мочи (по желанию) 1 час при 18-25°C и постоянном встряхивании
(≥400 осц./мин.)
• дихлорметан (метиленхлорид), не стабилизированный этанолом,
3: Измерение
х.ч.
результатов
• стеклянные пипетки на 2 и 5 мл Тщательно удалить содержимое пробирок
• Стеклянные пробирки или флаконы с (кроме проб Т).
завинчивающимисякрышками и тефлоновыми прокладками Измерить связанную (В) и общую (Т)
активность (имп./мин.).
• испаритель
Схема процедуры прямого определения кортизола в пробах мочи
ПРОЦЕДУРА
Экстракция проб мочи (по желанию; прямое определение – см п Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
Схема процедуры прямого определения кортизола в пробах мочи).
Стадия Калибраторы образцы мочи Пробирки для
Внимание: Экстракцию следует проводить в чистых стеклянных и контрольные общего счета (T)
пробирках или флаконах со стеклянными или тефлоновыми пробками, пробы
ополоснутых дихлорметаном и высушенных. 1: Внесение
Перед экстракцией довести образцы до комнатной температуры и реагентов
хорошо перемешать. В покрытые
антителами
Процедура экстракции необходима только для образцов. Не пробирки
экстрагировать калибровочные пробы. последовательно
• Охладить необходимое количество дихлорметана на ледяной внести:
бане. Калибровочные 50 мкл - -
и контрольные
• Промаркировать необходимое количество пробирок (флаконов).
пробы
• Поместить пронумерованные пробирки (флаконы) на ледяную образцы мочи - 50 мкл -
баню и внести в них по 500 мкл анализируемых проб мочи. «нулевая» - 50 мкл -
• В каждую пробирку (флакон) внести стеклянной пипеткой по 5 мл калибровочная
дихлорметана, тщательно закрыть их пробками и перемешать проба
содержимое на вихревом смесителе в течение 1 минуты. (внимание:
только в
• Оставить пробирки при комнатной температуре до разделения образцы мочи)
водной и органической фазы. раствор метки 500 мкл 500 мкл 500 мкл
• С помощью водоструйного насоса удалить верхнюю водную фазу. Перемешать
• Отобрать 2 мл органической фазы с помощью стеклянной пипетки 2 Инкубация
или шприца. 1 час при 18-25°C и постоянном встряхивании
(≥400 осц./мин.)
• Полностью испарить органическую фазу в испарителе без 3: Измерение
подогрева. результатов
• Растворить высушенные экстракты в 200 мкл «нулевой» Тщательно удалить содержимое пробирок
калибровочной пробы. Через 15 минут интенсивно перемешать (кроме проб Т).
содержимое пробирок. Измерить связанную (В) и общую (Т)
Схема определения кортизола в пробах сыворотки, плазмы и активность (имп./мин.).
экстрактах мочи
Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры. РЕЗУЛЬТАТЫ
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной
кривой, полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
Калибровочная кривая
Результаты в отделении контроля качества рассчитаны с
использованием подбора кривой spline «сплайн» с B/T или B/B0
по логистической вертикальной оси и концентрацией аналита
калибраторов на логарифмической горизонтальной оси (нмoль/л).
Другие методы обсчета могут давать несколько отличающиеся
результаты.

PI-IM1841–05 48 of 62
 Общая активность: 66 953 имп/мин ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Калибраторы Кортизол Имп./мин. B/T (%) B/B0 (%) (более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX”)
(нмоль/л) (n=3)
Репрезентативные данные предоставлены исключительно для
0 0 62 217 92,9 100
пояснений. Показатели, полученные в конкретной лаборатории, могут
1 20 53 531 80,0 86,0 отличаться.
2 70 38 175 57,0 61,4
3 200 21 730 32,5 34,9 Аналитическая чувствительность: 5 нмоль/л
4 700 9 233 13,8 14,8 Специфичность
5 2000 4 271 6,38 6,87 Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую
специфичность к кортизолу. Перекрестная реакция с другими
(Пример типичной калибровочной кривой. Не использовать для природными стероидами (альдостероном, кортикостероном,
обсчета результатов.) кортизоном, 11-дезоксикортикостероном, прогестероном и др.), а также
Образцы лекарственными препаратами, могущими присутствовать в сыворотке
крови пациентов (даназол, преднизолон, спиронолактон и др.), очень
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного
мала.
графика соотношение B/T или B/B0, а на горизонтальной оси
соответствующую концентрацию кортизола. Воспроизводимость
Для перевода концентраций из нмоль/л в нг/мл нужно умножить Внутри анализа
полученный результат на 0,362. Анализ проб проводили в 10 или 25 повторах в одной и той же серии
Образцы сыворотки, плазмы и экстракты мочи определений. Коэффициент вариации при измерении содержания
кортизола в пробах сыворотки крови не превышал 5,8% для сыворотки,
Значения концентраций, измеренные с помощью данного набора,
8,9% для мочи и 9,4% для экстрактов мочи.
выражены в нмоль/л. Определение суточной экскреции кортизола с
мочой приведено в следующем разделе. Между анализами
Прямое определение кортизола в пробах мочи Анализ образцов в дубликатах проводили в 17 или 10 различных сериях
определений. Коэффициент вариации при измерении содержания
Измеренные прямым методом значения следует умножить на 1,09,
кортизола в пробах сыворотки крови не превышал 9,2% для сыворотки,
фактор разведения пробы мочи при добавлении к ней 50 мкл «нулевой»
13,3% для мочи и 12,6% для экстрактов мочи.
калибровочной пробы.
Точность
При расхождении полученных результатов с клинической картиной, а
также с данными других лабораторных исследований рекомендуется Тест на разведение
провести повторный анализ мочи с экстракцией дихлорметаном. «Открытие» кортизола при серийном разведении образцов с высокой
Суточную экскрецию кортизола с мочой (Q) (нмоль/24часа) можно его концентрацией составило от 86 до 115% для сыворотки, от 80,1 до
рассчитать по формуле: 118% для мочи и от 81,4 до 112% для экстрактов мочи.

Q = U x V Тест на открытие стандартной добавки

Известные количества кортизола добавляли к образцам с низким
где уровнем гормона. Измеренная величина «открытия» составила от 95
U = концентрация кортизола в моче (нмоль/л) до 113% для сыворотки, от 82,6 до107% для мочи и от 83,0 до 119% для
экстрактов мочи.
V = объем мочи в литрах/24 часа
Диапазон измерения (от предела аналитической чувствительности до
ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ наибольшего калибратора): от 5,0 до приблизительно 2 000 нM.
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни,
соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения являются ОГРАНИЧЕНИЯ
ориентировочными. Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
результатов исследования.
Сыворотка крови:
Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей
Утро: от 263 до 724 нмоль/л (n = 69) Вечер: от 49 до 430 нмоль/л (n = 84) клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов
Моча (n = 66) и подходящую иную информацию.
Не используйте гемолизированные, желтушные или липемические
Анализ Среднее Стандартное Пограничные образцы.
значение отклонение значения для
(нмоль/24 часа) (нмоль/24 часа) 95% популяции Несмотря на очень низкую перекрестную реакцию с лекарственными
(нмоль/24часа) кортикоидами, в частности, с преднизолоном и преднизоном,
Прямой 114 55 38 - 208 применение высоких доз этих препаратов может привести к кажущемуся
повышению уровня кортизола в сыворотке крови и моче из-за
С экстракцией 103 45 30 - 197
интерференции вводимых веществ или их метаболитов. Поэтому не
рекомендуется проводить прямое определение кортизола у пациентов,
Подробная информация о ожидаемых значений педиатрических
систематически принимающих кортикостероиды.
образцов (отсортированных по возрасту и полу) приведены в
разделе APPENDIX. При выполнении анализов с использованием антител возможна
интерференция гетерофильными антителами в пробе пациента. У
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА пациентов, имеющих постоянный контакт с животными или проходивших
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля иммунотерапию или диагностические процедуры с использованием
качества проводимых исследований следует регулярно использовать иммуноглобулинов или их фрагментов, могут вырабатываться антитела
контрольные образцы, которые должны проходить те же стадии (т.е. HAMA), которые влияют на результаты иммунного анализа.
анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля качества
Интерференция со стороны этих антител может привести к получению
рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических
ошибочных результатов. Тщательно проверяйте результаты анализов
методов.
пациентов с подозрением на наличие этих антител.
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае
несоответствия полученных результатов аналитическим
характеристикам обратитесь, пожалуйста, к нашим специалистам.
E-mail: imunochem@beckman.com или beckman.ru@beckman.com

PI-IM1841–05 49 of 62
CORTISOL RIA KIT • 若檢體濃度高於高表準值的校正液，建議以空白校正液進行稀 釋。
IM1841 尿液
• 收集24小時尿瓶。
用於體外測定人血清、血漿和尿液中的皮質醇的放射免 • 確定量。
疫檢測
• 如有必要，將分裝檢體儲存在 < -20°C 下，最多儲存 1 周。應該在室
體外診斷用。 溫下解凍檢體。
原理 • 如果檢體濃度高於最高濃度校準品，則必須以蒸餾水進行稀釋。
皮質醇的放射免疫檢測是一種競爭性檢測。以下皮質醇測定方法可能會採
用相同的試劑盒： 提供的材料
. 若將分析組的所有試劑儲存於2-8℃的溫度下，則所有分析組之試劑在其標
在血清、血漿或尿液中直接測定 籤指明的有效期限內都可維持穩定。在配件小瓶標籤打印有效期 限，僅適
或者使用二氯甲烷萃取尿液、蒸發溶劑並在空白校準品中再懸浮後進行測 用於在組成套之前製造商長期儲備 。一般不適用。
定。
以 抗 皮 質 醇 單 株 抗 體 附 著 的 試 管 ： 2×50 管 （現成可用）
在單株抗體附著且具有 125I 標記的皮質醇示蹤物的試管中培育血清、血漿或 125
尿液檢體、尿液萃取物、對照品和校準品。培育完成後，吸取試管中的液體 標記 的 Cortisol tracer；
I標 ；每 瓶 55 mL(現成可用)
內容物並測定結合放射性。建立校準曲線，並採用插值法從標準曲線上確 含有製造日期當時強度為185 kBq的125I-Cortisol，溶於含有牛血清 白蛋白、
定未知值。 疊氮化鈉(<0.1%)、以及染料的緩衝液中。

警告和預防措施 瓶， 每 瓶 0.5 mL，

校 正 液 ： 5瓶 ，以 及 1瓶
瓶5 mL的
的『 空 白 』 校 正 液 (現成可用)
一般注意事項： 校準品瓶中含有 0 到大約 2,000 nM 皮質醇，其溶於含有牛血清白蛋白及疊
• 每瓶的校正液和對照液應儘快打開以免過度揮發。 氮化鈉 (<0.1%) 的緩衝液中。準確濃度標示於各瓶標籤上。校準品已利用參
考製劑 ERM-DA192 和 193 進行過校準。
• 請勿混合不同批號之分析組試劑
空白校準品也可以單獨訂購（目錄編號IM1959 - 10 mL，IM3444 - 250 mL）。
• 應建立各次分析的標準曲線-
註：空白校準品偶爾出現渾濁不會影響檢測效能。
• 建議進行分析兩次
對 照 檢 體 ： 一 瓶 0.5 mL（現成可用）
• 各管均僅限單次使用
瓶中含有皮質醇，其溶於含有牛血清白蛋白及疊氮化鈉 (<0.1%) 的緩衝液
放射線安全的基本原則 中。預期數 值介於附錄中所註明的濃度範圍內。
放線性物質的購買、擁有、利用及運送均受到使用者當地國家的 法規所規
範。 遵循放射線安全的基本原則理應可以提供適當的保護 需要但未附的物品
除了一般實驗室設備以外，尚需要下列各物品
• 在放射性物質的使用區域中， 不可吃東西、 喝飲料、 抽煙或使用化
妝品 對於血清、血漿或尿液皮質醇的直接檢測

• 不可以用嘴來分注具有放射性的溶液 • 精確的微量吸管(50 µL)

• 利用手套及實驗室防護衣來避免接觸所有放射性物質 • 半自動分注吸管(500 µL)

• 所有放射性物質的處置均應在距離走廊及其他較多 人走動之區域較 • 震盪行混合器。

遠的適當處進行 • 水平式或旋轉式搖動器
• 放射性物質應儲存於指定區域的容器中 • 吸入系統。
• 所有放射性產物的接收和儲存記錄應及時更新。 • 適用 125 iodine的迦瑪計數器
• 易受污染的實驗室裝置和玻璃器皿應予以隔離，以防止不同的放射性 對於尿液萃取皮質醇的檢測（可選）
同位素之間發生交叉感染。
• 分析級二氯甲烷（亞甲基氯），未經乙醇穩定化處理。
• 應根據已確立的程序處理放射性污染或放射性物質丟失的個案。
• 2 和 5 mL 玻璃吸管。
• 應根據所在國家確立的原則處理放射性廢棄物。
• 裝配有帶聚四氟乙烯襯裡之螺旋蓋的玻璃試管或小瓶。
疊氮化鈉
• 蒸發器。
有些試劑中含有疊氮化鈉作為防腐劑，疊氮化鈉可能與鉛、銅或黃銅反應形
成具有爆炸性的疊氮金屬物，因此在棄置時應以大量清水沖洗水管線系統。 程序
材料來源是人類 萃取尿液（可選，請參閱直接檢測尿液皮質醇的檢測程序）。

所有血清及 血漿檢體均應視為具有傳染肝炎或AIDS 能力來處置，廢棄物的 註 ： 萃取必須在乾淨的玻璃小瓶或試管中進行，小瓶或試管應使用二氯甲

棄置應遵 循當地法規。 烷預沖洗並裝配有聚四氟乙烯或玻璃塞。

二氯甲烷 開始萃取前，讓檢體回到室溫並充分混合。

二氯甲烷是一種高揮發性和易燃性溶劑。萃取和蒸發必須在通風櫥中進行。 需要 提 取 校 準 試 樣 。
試 樣 僅 在 測 定 前 提 取 ;需
遠離明火。請勿用嘴吸取試劑。 • 在冰水浴中冷卻足夠體積的二氯甲烷。

GHS 危 害 分 類 • 對試管或燒瓶進行編號。
未歸類為危險物質 • 將 500 µL 尿液檢體添加到保存在冰上的帶編號試管中。
• 使用玻璃吸管添加 5 mL 二氯甲烷，小心塞住並漩渦振蕩一分鐘。
安全性資料表載於 techdocs.beckmancoulter.com • 在室溫下讓兩相分離。
• 脫下上層水 吸階段。
檢體收集、處理、儲存、以及稀釋 • 使用玻璃吸管或注射器吸取 2 mL 有機相。
血清和血漿
• 在蒸發器中完全蒸發有機相。請勿加熱。
• 推薦使用添加過EDTA的血清或血漿樣本
• 將有機萃取物加入 200 µL 空白校準品中。等待 15 分鐘，然後大力
• 利用離心將血清或血漿與細胞分開。 漩渦振蕩。
• 若預計在24小時內進行分析，請將血清及血漿檢體儲存於2 8℃ 的溫 血清、血漿和尿液萃取物的檢測程序：
度下。若需較長期儲存，請分裝後冷凍儲存(低於 -20℃, 最長3个月
内)， 避免重複的冷凍及解凍。 檢體必需在室溫下解凍。 所有試劑在分注前需回到室溫

PI-IM1841–05 50 of 62
 步驟 校準品和對照品 血清、血漿或 用於總計數的 採用直接程序檢測尿液檢體
尿液萃取物 試管 (T)
由於添加了 50 µL 空白校準品，因此值必須乘以稀釋係數 1.09。
1: 加 入
在抗體附著的 當與臨床資料或其他測定值不一致時，建議透過在二氯甲烷萃取後進行間
試管中，陸續 接檢測來檢查在直接檢測中獲得的值。
加入： 尿液皮質醇的每日排泄量 (Q) (nmol/24h) 為：
校準品或對照品 50 µL - -
血清檢體或尿 - 50 µL - Q = U x V
液萃取物
U = 尿液皮質醇值 (nM)
描圖者 500 µL 500 µL 500 µL
然後混合 V = 尿液體積（升/24 小時）
2: 培 養 預期值
在 18-25℃ 下培育 1 小時，同時搖動（以 我們建議各實驗室應利用有臨床特徵的血清來建立自有參考數值， 以下價
≥400 rpm 的 速 度 ） 值被獲得以健康人是表示唯
3: 計 數 血清：
小心吸取試管內容物（除了用於總計數
的兩個試管外）。 早上：263 至 724 nM (n = 69) 晚上：49 至 430 nM (n = 84)
測定結合 cpm (B) 和總 cpm (T) 尿 液 (n = 66)

直接檢測尿液皮質醇的檢測程序： 化驗 均值 (nmol/24h) 標準差 95% 群體的極值

(nmol/24h) (nmol/24h)
所有試劑在分注前需回到室溫 114 55 38 - 208
直接
步驟 校準品和對照品 尿液 用於總計數的 後 萃取 103 45 30 - 197
試管 (T)
附录 ”数
有 关 儿 童 预 期 值 （ 按 年 龄 和 性 别 分 类 ） 的 详 细 信 息 可 在 “附 数据 表 中 找
1: 加 入
到。
在抗體附著的
試管中，陸續 品質管制
加入： 優良實驗室規範表示定期利用對照檢體來確認所得結果的品質，且必須利
校準品或對照品 50 µL - - 用與分析檢體完全相同的方式來進行這些檢體的分析，並且建議利用適當的
尿液 - 50 µL - 統計方法來分析所得結果。
空白校準品（注 - 50 µL -
如果遇到包装破碎或所得结果出現一些偏差，請聯絡您的地區分銷商或使
意： 僅 針 對 尿 用這個E-mail地址：imunochem@beckman.com
液 檢 體）
描圖者 500 µL 500 µL 500 µL 性能特色
然後混合 (有關更多細節，請參閱資料表中的『附錄』)
2: 培 養 代表資料僅供參考。本化驗在各個實驗室中展現的效能可能不盡相同。
在 18-25℃ 下培育 1 小時，同時搖動（以 分 析 靈 敏 度 ： 5 nM
≥400 rpm 的 速 度 ）
專一性
3: 計 數
小心吸取試管內容物（除了用於總計數 免疫檢測中使用的抗體對皮質醇具有高度特異性。與其他天然類固醇（醛
的兩個試管外）。 固酮、皮質固酮、皮質酮、11-脫氧皮質醇、孕酮等）或患者檢體中可能存
在的治療藥物（普賴蘇穠、普賴鬆、安體舒通等）的交叉反應性極低。
測定結合 cpm (B) 和總 cpm (T)
精確度
結果 各次分析內
在標準曲線上進行內插法來獲得結果，標準曲線適用於與校正液同時進 行 在同一次檢測內，將檢體檢測 10 resp 25 次。對於血清、尿液檢體和尿液
檢測之檢體內的Cortisol濃度分析。 萃取物，所得的變異係數分別低於或等於 5.8%、8.9% 和 9.4%。
標準曲線 各次分析間-
品質管制部門的結果為使用spline (樣條)曲線擬合，其中 B/T 或 B/B0 在對數 在 17 resp 10 次不同檢測內，以一式二份方式來檢測檢體。對於血清、尿
垂直軸上，校準品的分析物濃度在對數水平軸上 (nmol/L)。 液檢體和尿液萃取物，所得的變異係數分別低於或等於 9.2%、13.3% 和
利用其他 資料縮減的統計方法所得到的結果可能會稍微不同。 12.6%。
準確性
總 強 度 ： 66,953 cpm
校正液 Cortisol (nM) cpm (3次 次) B/T(%) B/B0 (%) 稀釋試驗
0 0 62,217 92.9 100 高濃度檢體採用空白校準品進行連續稀釋。對於血清、尿液和尿液萃取物，
1 20 53,531 80.0 86.0 所得的回收百分比分別介於 86% - 115%、80.1% - 118% 和 81.4% - 112%
2 70 38,175 57.0 61.4 之間。
3 200 21,730 32.5 34.9 回收試驗
4 700 9,233 13.8 14.8
在檢體中加入已知量的皮質醇。對於血清、尿液和尿液萃取物，所得的回
5 2000 4,271 6.38 6.87
收百分比分別介於 95% - 113%、82.6% - 107% 和 83.0% - 119% 之間。
( 標準曲線範例，請勿用此進行計算 ) 測 定 範 圍（得自最高濃度校準品的檢驗靈敏度）：5.0 至大約 2,000 nM。
檢體
限制
在縱軸上定出各檢體數值B/T 或B/B0，然後在橫軸上對出 Cortisol濃度nM。 非指示在這說明書裡可以極大影響結果。
轉換nmol/L(nM)至ng/mL,計算結果為 0.362 應該根據患者的總臨床敘述解釋結果，包括臨床的歷史、 從另 外的測試數
據和其他適當的信息。
在萃取後檢測血清、血漿或尿液檢體
不要使用嚴重溶血或脂血標本。
濃度的單位為奈莫耳/升 (nM)。每日尿液皮質醇排泄量的計算在下面的段落
中給出。 儘管與目前在治療上採用的腎上腺皮質素（尤其是普賴蘇穠和普賴鬆）的
交叉反應性極低，但由於受到所使用藥物或其某些代謝物的干擾，高劑量治

PI-IM1841–05 51 of 62
療時可能會導致血清和尿液皮質醇的人為增加。因此不宜對接受全身性腎上 該等干擾抗體可能會導致錯誤結果。如懷疑有這些抗體，則請仔細地評估
腺皮質素治療的患者進行直接皮質醇檢測。 患者的結果。
為使用抗體的分析用試樣，可能為由heterophile抗體的干涉存在病人樣品
中。 通常病人被暴露在動物或接受了免疫療法或運用免疫球蛋白或免疫球
蛋白片段的诊断过程也許生產抗體，即HAMA，干擾免疫測定法。

PI-IM1841–05 52 of 62
CORTISOL RIA KIT Bezbednosni list je dostupan na internet adresi
IM1841 techdocs.beckmancoulter.com

RADIO IMUNO TEST ZA IN VITRO ODREĐIVANJE PRIKUPLJANJE UZORAKA, OBRADA,

KORTIZOLA U HUMANOM SERUMU, PLAZMI I URINU SKLADIŠTENJE I RAZBLAŽIVANJE
Za in vitro dijagnostičku upotrebu Uzorci seruma i plazme
• Krv sakupljati ili u epruvete koje ne sadrže nikakav dodatak ili sadrže
PRINCIP EDTA.
Radio imuno test za određivanje kortizola je vrsta testa sa kompeticijom. Isto
pakovanje može da se koristi za određivanje kortizola: • Odvojite serum ili plazmu od ćelija centrifugiranjem.
.
● direktno iz seruma, plazme ili urina. • Uzorci seruma i plazme se mogu čuvati na 2-8°C, ako se test izvodi
● ili nakon ekstrakcije iz urina sa dihlorometanom i isparavanjem rastavrača, u okviru 24 sata. Za duže skladištenje držite ih zamrznutim (na <
koji se zatim ponovo rastvara u nultom kalibratoru. -20°C maksimalno, 3 meseca) nakon alikvotiranja kako bi se izbeglo
ponovljeno zamrzavanje i odmrzavanje. Odmrzavanje uzorka se treba
Uzorci seruma, plazme,urina ilii ekstrakta urina, kontrole i kalibratori. izvoditi na sobnoj temperaturi.
Kalibratori se inkubiraju sa 125I obeleženim kortizola kao obeleživačem u
epruvetema obloženim monoklonskim antitelima. Nakon inkubacije, tečni • Ako uzorci imaju koncentraciju veću od najvećeg kalibratora, onda se
sadržaj epruveta se aspirira i vezana radioaktivnost se onda određuje. oni moraju razblažiti sa nultim kalibratorom.
Formira se standardna kriva i nepoznate koncentracije se dobijaju Uzorci urina
interpolacijom sa standardne krive.
• 24-časovni urin sakupljati u posudu.
UPOZORENJE I MERE OPREZA • Odrediti volumen.
Opšte napomene:
• Ako je potrebno, čuvati alikvotirano na −20°C nedelju dana maksimum.
• Bočice sa kalibratorima i kontrolama treba da budu otvorene što je Odmrzavanje uzorka se treba izvoditi na sobnoj temperaturi.
kraće moguće da bi se izbeglo prekomerno isparavanje.
• Ako uzorci imaju koncentraciju veću od najvećeg kalibratora onda se
• Ne mešati reagense iz kitova različitih lotova. oni moraju razblažiti destilovanom vodom.
• Standardna kriva mora biti obuhvaćena sa svakim testom.
ISPORUČENI MATERIJALI
• Preporučeno je da se test vrši u duplikatu. Svi reagensi kita su stabilni do isteka roka označenog na etiketi kita, pod
• Svaka epruveta mora da se upotrebi samo jedanput. uslovom da se čuvaju na 2-8°C. Rokovi odštampani na etiketama bočica
važe za dugoročno skladištenje komponenti samo od strane proizvođača,
Osnovna pravila bezbednosti od radijacije pre sastavljanja kita. Ovo ne uzimajte u obzir.
Kupovina, posedovanje, upotreba i prenos radioaktivnog materijala je Epruvete obložene anti-kortizol antitelima: 2 x 50 epruveta (spremno za
predmet regulative zemlje korisnika. Pridržavanje osnovnih pravila upotrebu)
bezbednosti od radijacije treba da obezbedi adekvatnu zaštitu: 125
I-obeležen kortizol obeleživač: jedna bočica 55 ml (spremno za
• Ne treba jesti, piti, pušiti ili nanositi kozmetiku u prisustvu radioaktivnih upotrebu)
materijala.
Bočica sadrži 185 kBq, na dan proizvodnje, 125I-obeleženog kortizola u puferu
• Ne pipetirati radioaktivni rastvor ustima. sa goveđim serumskim albuminom, natrijum azidom (<0,1%) i bojom.
• Izbegavati svaki kontakt sa radioaktivnim materijalom upotrbom Kalibratori: pet bočica od 0,5 ml i jedna bočica 5 ml «nultog» kalibratora
rukavica i laboratorijskog kombinezona. (spremno za upotrebu)
• Sva manipulacija radioaktivnim supstancama treba da se obavi u Bočice kalibratora sadrže koncentracije kortizola standardnog opsega od 0
odgovarajućem prostoru, udaljenom od hodnika i drugih prometnih do približno 2000 nM kortizola u puferu sa goveđim serumskim albuminom sa
mesta. natrijum azidom (<0,1%). Tačna koncentracija je navedena na svakoj etiketi
• Radioaktivni materijali treba da se čuvaju u kontejnerima koji su bočice. Kalibratori se proveravaju prema internom referentnom standardu
obezbeđeni u označenom prostoru. ERM-DA192 i 193.
• Zapis o prijemu i skladištenju svih radioaktivnih proizvoda treba da se Nulti kalibrator se može naručiti odvojeno takođe (kat.br. IM1959 – 10 ml,
vodi ažurno. IM3444- 250 ml).
• Laboratorijska oprema i stakleno posuđe koje je podložno Napomena: Povremeno prisustvo zamućenja u nultom kalibratoru ne utiče
kontaminaciji treba da budu razdvojeni da bi se izbegla unakrsna na performance testa.
kontaminacija različtim radioizotopima. Kontrolni serum: jedna bočica 0,5 ml (spremno za upotrebu)
• Svaki slučaj radioaktivne kontaminacije ili gubitka radioaktivnog Bočice sadrže kortizol u puferu sa goveđim serumskim albuminom sa
materijala treba da bude rešen u skladu sa ustanovljenim natrijum azidom (<0,1%). Očekivane vrednosti su u opsegu koncentracija
procedurama. navedenim na dodatku.
• Postupanje sa radioaktivnim otpadom treba da bude u skladu sa
pravilima utvrđenim u zemlji korisnika. POTREBNI MATERIJALI KOJI NISU
Natrijum azid OBEZBEĐENI
Pored standardne laboratorijske opreme, potrebne su sledeće stavke:
Neki reagensi sadrže natrijum azid kao konzervans. Natrijum azid može
da reaguje sa olovom, bakrom ili mesingom i da formira eksplozivne Za direktni test kortizola iz seruma, plazme ili urina
metalne azide. Izbaciti reagense ispiranjem sa velikom količinom vode kroz • Precizne mikropipete (50 µl).
vodovodne instalanacije.
• Poluautomatske pipete (500 µl).
Materijali humanog porekla
• Vorteks tip miksera.
Sa svim uzorcima seruma i plazme treba postupati kao da su sposobni za
prenos hepatitisa ili AIDS-a. • Horizontalna ili orbitalni šejker.
Dihlorometan • Aspiracioni sistem.
125
Dihlorometan je jako isparljiv i zapaljivi rastvarač. Ekstrakcija i isparavanja • Gama brojač za I.
se mora vršiti u digestoru. Držati van domašaja otvorenog plamena. Ne Za određivanje kortizola iz ekstrakta urina (opciono)
pipetirati ustima.
• analitički graduisan dihlormetan (metilen hlorid), koji nije stabilizovan
GHS KLASIFIKACIJA OPASNOSTI etanolom.
Nije klasifikovano kao opasno
PI-IM1841–05 53 of 62
 • Staklene pipete od 2 i 5 ml. Koraci Kalibratori i Uzorak Epruvete za
kontrole ukupno brojanje
• Staklene epruvete ili bočice sa poklopcima na zavijanje obloženim (T)
teflonom. 1: Dodaci
• Evaporator. Obloženim
epruvetama,
POSTUPAK sukcesivno
Ekstrakcija urina (opciono, pogledati postupak testiranja za direktni dodavati:
kortizol iz urina). kalibratore ili 50 µl - -
Napomena: Ekstrakcija se mora vršiti u čustim staklenim bočicama ili kontrole
uzorke urina - 50 µl -
epruvetama, prethodno isprane dihlorometanom i zatvorene teflonskim
zapušačima. nulti kalibrator - 50 µl -
(pažnja: samo u
Neka svi uzorci distignu sobnu temperaturu i dbor ih promešati pre uzorke urina)
ekstrakcije.
obeleživač 500 μl 500 μl 500 μl
Uzorci se ekstrahuju pre testiranja; kalibratore ne treba ekstrahovati. Promešati
• Ohladiti dovoljnu količinu dihlorometana u ledenom vodenom kupatilu. 2: Inkubacija
1 sat na 18-25°C uz mešanje (≥400 rpm)
• Obeležiti eprvete ili boce.
3: Brojanje
• Dodati 500 μl urina u obeležene epruvete koje su na ledu. Pažljivo aspirirati sadržaj epruveta (izuzev 2
• Dodati 5 ml dihlorometana pomoću staklene pipete, pađljivo zatvoriti i epruvete ukupan cpm).
promešati na vorteksu jedan minut. Brojati vezanu aktivnost cpm (B) i ukupni cpm (T)
• Ostaviti da se dve faze odvoje na sobnoj temperaturi.
• Aspiracijom ukloniti gornju vodenu fazu.
REZULTATI
Rezultati su dobijeni interpolacijom sa standardne krive. Kriva služi za
• Uzeti 2 ml organske faze staklenom pipetom ili špricem. određivanje koncentracije kortizola u uzorku izmerene u isto vreme kad i
kalibratori.
• Osragnsku fazu ispariti u potpunosti u evaporatoru. Ne zagrevati.
Standardna kriva
• Rastvoriti organski ekstrakt u 200 μl nultog kalibratora. Sačekati 15
minuta i snažno promešati na vorteksu. Rezultati u odeljenju za kontrolu kvaliteta izračunati su upotrebom spline
(splajn) (eng. spline) krive koja ima vrednosti B/T ili B/B0 na logit vertikalnoj
Postupak testa za serum,plazmu i ekstrakt urina: osi i koncentraciju kalibratora na logaritamskoj horizontalnoj osi (nmol/l).
Neka svi reagensi dostignu sobnu temperaturu. Druge metode redukcije podataka mogu dati neznatno različite rezultate.
Koraci Kalibratori i Serum, plazma i Epruvete za Ukupna aktivnost: 66.953 cpm
kontrole ekstrakt urina ukupno brojanje
Kalibratori Kortizol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
(T)
1: Dodaci 0 0 62.217 92,9 100
1 20 53.531 80,0 86,0
Obloženim
epruvetama, 2 70 38.175 57,0 61,4
sukcesivno 3 200 21.730 32,5 34,9
dodavati: 4 700 9.233 13,8 14,8
kalibratore ili 50 µl - - 5 2000 4.271 6,38 6,87
kontrole
uzorci seruma ili - 50 µl - (Primer standardne krive, ne koristiti za proračun)
ekstrakti urina Uzorci
obeleživač 500 μl 500 μl 500 μl
Za svaki uzorak locirati odnos B/T ili B/B0 na veretikalnoj osi standardne krive
Promešati i čitati odgovarajuću koncentraciju kortizola u uzorku na horizontalnoj osi.
2: Inkubacija
1 sat na 18-25°C uz mešanje (≥400 rpm) Za konvertovanje iz nmol/l (nM) u ng/ml pomnožiti rezultate sa 0,362.
3: Brojanje Uzorci plazme, seruma ili urina analziriani nakon ekstrakcije
Pažljivo aspirirati sadržaj epruveta (izuzev 2 Koncentracije su izražene u nanomolu po mitru (nM). Izračunavanje dnevne
epruvete ukupan cpm). ekskrecije kortizola urinom je dato u sledećem poglavlju.
Brojati vezanu aktivnost cpm (B) i ukupni cpm (T)
Uzorci urina testirani direktnom metodom
Postupak testa za direktni test kortizola u urinu: Vrednost se mora pomnožiti sa 1,09, dilucionu faktor zbog dodavanja 50 μl
Neka svi reagensi dostignu sobnu temperaturu. nultog kalibratora.
Preporuka je da se u slučajevima gde se ne slažu rezultati sa kliničkom
slikom, provere vrednosti dobijene direktnim testom sa vrednostima
indirektnog testa nakon ekstrakcije.
Dnevna ekstrakcija kortizola urinom (Q) (nmol/24h) je:

Q = U x V

gde je
U = vrednost kortizola u urinu (nM)
V = volume 24h urina u litrima

OČEKIVANE VREDNOSTI
Laboratorije trebaju da uspostave svoje vlastite referentne vrednosti.
Sledeće vrednosti dobijene kod zdravih osoba su samo indikativne.
Serum:
Jutarnje vrednosti: 263 do 724 nM (n = 69) Večernje: 49 do 430 nM (n = 84)

PI-IM1841–05 54 of 62
Urini (n = 66) Tačnost

Test Srednja vrednost Standardna Ekstremne Test razblaživanja

(nmol/24h) devijacija vrednosti za Uzorci visoke koncentracije serijski su razblaženi nultim kalibratorom.
(nmol/24h) 95% populacije Dobijeni procenti vrednosti recovery nalazili su se između 86% i 115% za
(nmol/24h) serum, 80,1%–118% za urin i 81,4%–112% za ekstrakte urina.
Direktni 114 55 38 - 208
Recovery test
Nakon 103 45 30 - 197
ekstrakcije U uzorke su dodate poznate količine kortizola. Dobijeni procenti vrednosti
recovery nalazili su se između 95% i 113% za serum, 82,6%–107% za urin i
Detaljne informacije o očekivanim vrednostima za decu (sortirane 83,0%–119% za ekstrakte urina.
prema starosti i polu) mogu se naćí u listi podataka."APPENDIX". Opseg merenja (od analitičke osetljivosti do najvišeg kalibratora): od 5,0 do
približno 2.000 nM.
KONTROLA KVALITETA
Dobra laboratorijska praksa nalaže da se kontrolni uzorci moraju redovno OGRANIČENJA
koristiti da bi se osigurao kvalitet dobijenih rezultata. Ti uzorci se moraju Ne pridržavanje instrukcija u ovom uputstvu pakovanja može značajno da
obraditi na potpuno isti način kao i testirani uzorci, i preporučeno je da se utiče na rezultate.
njihovi rezultati analiziraju upotrebom odgovarajućih statističkih metoda.
Rezultate treba interpretirati u skladu sa celokupnom kliničkom slikom
U slučaju oštećenja pakovanja ili ako dobijeni podaci pokazuju neku promenu pacijenta, uključujući i kliničku istoriju, podatke iz dodatnih testova i drugim
performansi, molimo da kontaktirate vašeg lokalnog distributera ili upotrebite odgovarajućim informacijama.
sledeću e-mail adresu: imunochem@beckman.com
Ne koriste se hemolizovani, ikterični ili lipemični uzorci.
KARAKTERISTIKE PERFORMANSI Uprkos veoma niskoj unakrsnoj reaktivnosti sa kortikoidima koji se trenutno
(za više detalja, videti “DODATAK”) koriste terapeutski, posebno prednizolonom i prednizonom, lečenje visokim
Reprezentativni podaci su obezbeđeni u svrhu ilustracije. Perfomanse dozama može dovesti do artefaktnog porasta kortizola u serumu i urinu, usled
dobijene u pojedinačnim laboratorijama mogu da variraju. interferencije supstance koja se daje ili određenih njenih metabolita. Zbog
toga se ne preporučuje obavljanje direktnih testova kortizola kod pacijenata
Analitička osetljivost: 5 nM koji primaju sistemsku kortikoterapiju.
Specifičnost Za testove koji upotrebljavaju antitela, postoji mogućnost mešanja od strane
Antitelo upotrebljeno u imunotestu je visoko specifično za kortizol. heterofilnih antitela u uzorku pacijenta. Pacijenti koji su bili redovno izloženi
Izuzetna niska ukrštena reaktivnost je dobijena za druge prirodne hormone životinjama ili su primili imunoterapiju ili dijagnostičke procedure koje koriste
(aldosteron, kortikosteron, kortizon, 11-dezoksikortizol, progesterone itd.) imunoglobuline ili imunoglobulinske fragmente mogu proizvesti antitela, npr.
i nekoliko terapeutskih lekova koji mogu biti prisutni u uzorku pacijenata HAMA, koji utiču na imunotestove.
(prednizolon, prednizon, spironolakton itd.) Takva interferirajuća antitela mogu uzrokovati pogrešne rezultate. Pažljivo
Preciznost procenite rezultate pacijenata za koje se sumnja da imaju ova antitela.
Unutar serije
Uzorci su testirani 10 ili 25 puta u istoj seriji. Izmereni koeficijenti varijacije
bili su manji od ili jednaki 5,8% za serum, 8,9% za uzorke urina i 9,4% za
ekstrakte urina.
Između serija
Uzorci su testirani u duplikatu u 17 ili u 10 različitih serija. Izmereni koeficijenti
varijacije bili su manji od ili jednaki 9,2% za serum, 13,3% za uzorke urina i
12,6% za ekstrakte urina.

PI-IM1841–05 55 of 62
KIT DE RIA DE CORTISOL CLASSIFICAÇÃO DE PERIGO DO GHS
Não classificado como perigoso
IM1841
RADIOIMUNOENSAIO PARA A DETERMINAÇÃO IN A Folha de dados de segurança está disponível em
VITRO DE CORTISOL NO SORO, NO PLASMA E NA techdocs.beckmancoulter.com
URINA HUMANOS
Para uso em diagnóstico in vitro. COLHEITA, PROCESSAMENTO,
ARMAZENAGEM E DILUIÇÃO DA AMOSTRA
PRINCÍPIO Amostras de soro e plasma
O radioimunoensaio de cortisol é um ensaio competitivo. O mesmo kit pode • Colete o sangue em tubos sem aditivos ou contendo EDTA.
ser utilizado para a determinação de cortisol:
. • Separe o soro ou plasma das células por centrifugação.
● diretamente no soro, no plasma ou na urina,
● ou após a extração da urina com diclorometano e a evaporação do • As amostras de soro e plasma podem ser armazenadas a 2–8°C se o
solvente, seguido por ressuspensão no calibrador zero. teste for realizado no espaço de 24 horas. Para um armazenamento
mais longo, mantenha-as congeladas (< –20°C, durante 3 meses no
Amostras de soro, plasma ou urina, extratos de urina, o controle e os máximo) após tê-las dividido em alíquotas para evitar o congelamento
calibradores são incubados em tubos revestidos com anticorpo monoclonal e o descongelamento repetidos. O descongelamento de amostras
e adicionados de rastreador de cortisol marcado com 125I. Após incubação, deve ser efetuado à temperatura ambiente.
o conteúdo líquido do tubo é aspirado e mede-se a radioatividade ligada.
É estabelecida uma curva de calibração, e os valores desconhecidos são • Se houver amostras com concentrações superiores à do calibrador
determinados por interpolação a partir da curva padrão. mais alto, elas deverão ser diluídas com o calibrador zero.
Amostras de urina
AVISOS E PRECAUÇÕES • Colete a urina de 24 horas em um frasco.
Observações gerais
• Os frascos com calibradores e controles devem permanecer abertos • Determine o volume.
o menor tempo possível para evitar evaporação excessiva. • Se necessário, armazene dividido em alíquotas a < –20°C durante
• Não misture os reagentes de kits de lotes diferentes. 1 semana no máximo. O descongelamento de amostras deve ser
efetuado à temperatura ambiente.
• Uma curva padrão deve ser incluída com cada ensaio.
• Se houver amostras com concentrações superiores à do calibrador
• Recomenda-se realizar o ensaio em duplicata. mais alto, elas deverão ser diluídas com água destilada.
• Cada tubo só deve ser usado uma vez.
MATERIAIS FORNECIDOS
Proteção contra radiação ionizante Todos os reagentes do kit permanecem estáveis até a data de validade
A compra, a posse, o uso e a transferência de materiais radioativos estão indicada no rótulo do kit, se armazenados a 2–8°C. As datas de validade
sujeitos às regulamentações do país em que eles forem utilizados. O impressas nos rótulos dos frascos se aplicam somente ao armazenamento
cumprimento das regras básicas de segurança radiológica deve fornecer de longo prazo dos componentes pelo fabricante, antes da montagem do
uma proteção adequada. kit. Não levar em consideração.
• Não se deve comer, beber, fumar nem aplicar cosméticos na presença Tubos revestidos de anticorpo monoclonal anticortisol: 2 x 50 tubos
de materiais radioativos. (prontos para uso)
• Não pipetar soluções radioativas com a boca. Rastreador de cortisol marcado com 125I: um frasco de 55 mL (pronto para
uso)
• Utilize luvas e jaleco de laboratório para evitar qualquer contato com
materiais radioativos. Na data de fabricação, o frasco contém 185 kBq de cortisol marcado com
125
I em tampão contendo albumina sérica bovina, azida sódica (<0,1%) e um
• Toda manipulação de substâncias radioativas deve ser efetuada corante.
em local apropriado e longe de corredores e outras áreas muito
frequentadas. Calibradores: 5 frascos com 0,5 mL e 1 frasco com 5 mL do calibrador
“zero” (prontos para uso)
• Os materiais radioativos devem ser armazenados no recipiente
fornecido e numa área designada. Os frascos do calibrador contêm entre 0 e aproximadamente 2.000 nM de
cortisol em tampão com albumina sérica bovina e azida sódica (<0,1%). A
• É necessário manter atualizado um registro de recebimento e concentração exata está indicada no rótulo de cada frasco. Os calibradores
armazenamento de todos os produtos radioativos. foram calibrados de acordo com preparação de referência ERM-DA192 e
• Os equipamentos e os objetos de vidro de laboratório que estejam 193.
sujeitos a contaminação devem ser segregados para se evitar a O calibrador zero também pode ser encomendado separadamente (nº de cat.
contaminação cruzada de diferentes radioisótopos. IM1959 — 10 mL, IM3444 — 250 mL).
• Cada caso de contaminação radioativa ou perda de material radioativo Nota: a presença ocasional de turbidez no calibrador zero não afeta o
deve ser resolvido de acordo com os procedimentos estabelecidos. desempenho do ensaio.
• Os resíduos radioativos devem ser tratados de acordo com as regras Amostra de controle: um frasco de 0,5 mL (pronto para uso)
estabelecidas por cada país.
O frasco contém cortisol em tampão com albumina sérica bovina e azida
Azida sódica sódica (<0,1%). Os valores esperados estão dentro do intervalo de
Alguns reagentes contêm azida sódica como conservante. A azida sódica concentração indicado num suplemento.
pode reagir com chumbo, cobre ou latão, formando azidas metálicas
explosivas. Descarte os reagentes através de lavagem com grandes MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO
quantidades de água no sistema de encanamento. FORNECIDOS
Material de origem humana Além de equipamentos de laboratório padrão, são necessários os seguintes
itens:
Todas as amostras de soro e plasma devem ser tratadas como capazes de
transmitir hepatite ou AIDS. Para ensaio direto de cortisol no soro, no plasma ou na urina
Diclorometano • micropipeta de precisão (50 µL).
O diclorometano é um solvente altamente volátil e inflamável. A extração e • pipeta semiautomática (500 µL).
a evaporação devem ser feitas em uma coifa ventilada. Mantenha afastado • misturador do tipo vórtex.
de chamas abertas. Não pipete reagentes com a boca.
• agitador horizontal ou orbital.

PI-IM1841–05 56 of 62
 • sistema de aspiração. Etapas Calibradores e Urinas Tubos para
controle contagem total
• contador gama ajustado para iodo 125. (T)
Para o ensaio de cortisol em extrato de urina (opcional) 1: Adições
Nos tubos
• diclorometano de grau analítico (cloreto de metileno), não estabilizado
revestidos com
com metanol.
anticorpos,
• Pipetas de vidro de 2 e 5 mL. adicione
• tubos ou frascos de vidro com tampa rosqueada revestida com teflon. sucessivamente:
calibradores ou 50 µL - -
• evaporador. controles
amostras de - 50 µL -
PROCEDIMENTO urina
Extração de urina (opcional, consulte Procedimento para ensaio direto calibrador - 50 µL -
de cortisol na urina). zero (atenção:
Nota: A extração deve ser feita em tubos ou frascos de vidro limpos, apenas para
pré-enxaguados com diclorometano e tampados com rolhas de teflon ou amostras de
vidro. urina)
Faça as amostras atingirem a temperatura ambiente e misture bem antes de rastreador 500 µL 500 µL 500 µL
começar a extração. Misture
2: Incubação
Somente as amostras são extraídas antes do ensaio; não extraia os
1 hora a 18–25°C com agitação (≥400 rpm)
calibradores.
3: contagem
• Esfrie um volume suficiente de diclorometano em banho-maria de Aspire cuidadosamente o conteúdo dos tubos (exceto
água com gelo. os dois tubos para contagem total).
• Numere os tubos ou frascos. Determine a cpm de ligação (B) e a cpm total (T)
• Adicione 500 µL de amostra de urina em um tubo numerado mantido
no gelo. RESULTADOS
Os resultados são obtidos a partir da curva padrão por interpolação. A curva
• Adicione 5 mL de diclorometano usando uma pipeta de vidro, tampe serve para a determinação das concentrações de cortisol em amostras
cuidadosamente com batoque e agite em vórtex por um minuto. medidas ao mesmo tempo que os calibradores.
• Deixe as duas fases se separem a temperatura ambiente. Curva padrão
• Retire a fase superior aquosa por aspiração. Os resultados no departamento de controle de qualidade foram calculados
• Retire 2 mL da fase orgânica usando uma pipeta ou seringa de vidro. usando o ajuste da curva spline com B/T ou B/B0 no eixo vertical logit e a
concentração de analito dos calibradores no eixo horizontal log (nmol/L).
• Evapore a fase orgânica completamente no evaporador. Não aqueça.
Outros métodos de redução de dados podem produzir resultados
• Retire o extrato orgânico em 200 µL do calibrador zero. Aguarde ligeiramente diferentes.
15 minutos e em seguida agite-o em vórtex vigorosamente.
Procedimento de ensaio para extratos de soro, plasma e urina: Atividade total: 66.953 cpm
Calibradores Cortisol (nM) cpm (n=3) B/T (%) B/B0 (%)
Deixe que todos os reagentes atinjam a temperatura ambiente antes de
pipetar. 0 0 62.217 92,9 100
1 20 53.531 80,0 86,0
Etapas Calibradores e Extratos de soro, Tubos para 2 70 38.175 57,0 61,4
controle plasma ou urina contagem total 3 200 21.730 32,5 34,9
(T) 4 700 9.233 13,8 14,8
1: Adições 5 2000 4.271 6,38 6,87
Nos tubos
revestidos com (Exemplo de curva padrão, não utilizar para cálculo)
anticorpos, Amostras
adicione
sucessivamente: Para cada amostra, localize a relação B/T ou B/B0 no eixo vertical e leia a
calibradores ou 50 µL - - concentração de cortisol correspondente no eixo horizontal.
controles Para converter nmol/L (nM) para ng/mL, multiplique os resultados por 0,362.
amostras de soro - 50 µL -
ou extratos de Amostras de soro, plasma ou urina testadas após a extração
urina A concentração é em nanomols por litro (nM). O cálculo da excreção diária
rastreador 500 µL 500 µL 500 µL de cortisol na urina é dado no parágrafo seguinte.
Misture Amostras de urina ensaiadas pelo procedimento direto
2: Incubação
1 hora a 18–25°C com agitação (≥400 rpm) O valor deve ser multiplicado por 1,09, o fator de diluição devido à adição de
3: contagem 50 µL do calibrador zero.
Aspire cuidadosamente o conteúdo dos tubos (exceto Em casos onde haja desacordo com os dados clínicos ou outras medições,
os dois tubos para contagem total). sugere-se verificar o valor obtido no ensaio direto por meio de um ensaio
Determine a cpm de ligação (B) e a cpm total (T) indireto após a extração de diclorometano.
A excreção diária de cortisol na urina (Q) (nmol/24 horas) é:
Procedimento para ensaio direto de cortisol na urina:
Deixe que todos os reagentes atinjam a temperatura ambiente antes de Q = U x V
pipetar.
onde
U = valor do cortisol na urina (nM)
V = volume de urina em litros/24 horas

PI-IM1841–05 57 of 62
VALORES ESPERADOS Interensaio
Sugere-se que cada laboratório estabeleça seus próprios valores normais.
As amostras foram testadas em duplicata em 17 e 10 séries diferentes,
Os valores a seguir, obtidos com indivíduos saudáveis, são apenas
respectivamente. Os coeficientes de variação encontrados foram iguais ou
indicativos.
inferiores a 9,2% para amostras de soro, 13,3% para amostras de urina e
Soros: 12,6% para extratos de urina.
Manhã: 263 a 724 nM (n = 69) Tarde: 49 a 430 nM (n = 84) Exatidão
Urina (n = 66) Teste de diluição

Ensaio Média Desvio padrão Valores extremos Amostras de alta concentração foram diluídas em série com o calibrador
(nmol/24 h) (nmol/24h) para 95% da zero. As porcentagens de recuperação obtidas foram 86–115% para soro,
população 80,1–118 % para urina e 81,4–112% para extratos de urina.
(nmol/24h) Teste de recuperação
Direto 114 55 38 - 208
As amostras foram aditivadas com quantidades conhecidas de cortisol. As
Após a extração 103 45 30 - 197 porcentagens de recuperação obtidas foram 95–113% para soro, 82,6–107%
para urina e 83,0–119% para extratos de urina.
Para obter informações mais detalhadas sobre os valores esperados
nas crianças (classificados por idade e sexo), consulte a folha de dados Intervalo das medições (da sensibilidade analítica ao calibrador mais alto):
“APPENDIX” (“ANEXO”). 5,0 até aproximadamente 2.000 nM.

CONTROLE DE QUALIDADE LIMITAÇÕES

As boas práticas de laboratório implicam o uso regular de amostras de O não cumprimento das instruções contidas neste folheto informativo pode
controle para garantir a qualidade dos resultados obtidos. Essas amostras afetar os resultados de forma significativa.
devem ser processadas exatamente da mesma forma que as amostras Os resultados devem ser interpretados conjuntamente com o quadro clínico
em ensaio, e é recomendável analisar os resultados utilizando métodos do paciente, incluindo histórico clínico, dados de testes adicionais e outras
estatísticos adequados. informações pertinentes.
Em caso de deterioração da embalagem ou se os dados obtidos mostrarem Não use amostras lipêmicas, ictéricas ou hemolisadas.
alguma alteração do desempenho, entre em contato com seu revendedor
local ou utilize o seguinte endereço de e-mail: imunochem@beckman.com Apesar da reatividade cruzada muito baixa dos corticoides utilizados
atualmente em contextos terapêuticos, especialmente prednisolona e
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO prednisona, o tratamento com doses altas pode levar a um aumento de
(Para obter mais detalhes, consulte o “APPENDIX” [“ANEXO”] de folhas artefatos no cortisol no soro e na urina, devido à interferência exercida pela
de dados) substância administrada ou por alguns de seus metabolitos. Portanto, não é
recomendável efetuar ensaios de cortisol diretos em pacientes que estejam
Os dados representativos são proporcionados apenas para fins ilustrativos. sob corticoterapia sistêmica.
O desempenho obtido em laboratórios individuais pode variar.
Nos ensaios que utilizam anticorpos, existe a possibilidade de interferência
Sensibilidade analítica: 5 nM dos anticorpos heterófilos contidos na amostra do paciente. Os pacientes
Especificidade expostos regularmente ao contato com animais ou que tenham sido
submetidos a imunoterapia ou a procedimentos diagnósticos que utilizam
O anticorpo usado no imunoensaio é altamente específico para o cortisol. imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas podem produzir
Foram obtidas reatividades cruzadas extremamente baixas com outros anticorpos, por exemplo HAMA, que interferem com os imunoensaios.
esteroides existentes naturalmente (aldosterona, corticosterona, cortisona,
11-desoxicortisol, progesterona, etc.) ou medicamentos terapêuticos Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errôneos. Os
que podem estar presentes nas amostras dos pacientes (prednisolona, resultados de pacientes suspeitos de terem esses anticorpos devem ser
prednisona, espironolactona, etc.). avaliados com cuidado.
Precisão
Intraensaio
As amostras foram testadas 10 e 25 vezes na mesma série. Os coeficientes
de variação observados foram iguais ou inferiores a 5,8% para soro, 8,9%
para amostras de urina e 9,4% para extratos de urina.

PI-IM1841–05 58 of 62
APPENDIX Accuracy
Dilution test
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Representative data are provided for illustration only. Performance obtained Samples were diluted in the zero calibrator and assayed according to the
in individual laboratories may vary. procedure of the kit.
Specificity Serum Dilution factor Measured Expected Ratio (%)
Data on cross-reactivity with several endogenous and pharmaceutically (nM) (nM) Measured/
employed steroids are presented in the following table: Expected
S1 Undiluted 309 - -
Cortisol concentration
——————– 1:2 158 154 102
Cross-reactivity (%) = x 100 at 50% binding of the zero calibrator
Steroid concentration
1:4 69 77 90
1:8 39 39 101
Steroid % Cross- Steroid % Cross- 1:16 18 19 95
reactivity reactivity 1:32 8.5 9.6 88
Cortisol 100 Tetrahydrocortisol <0.1 S2 Undiluted 437 - -
11-Desoxycortisol 18 Tetrahydro-11- <0.1 1:2 229 218 105
desoxycortisol 1:4 114 109 104
Corticosterone 8.4 Dexamethasone <0.1 1:8 63 55 115
21-Desoxycortisol 7.5 Substance E <0.1 1:16 28 27 102
Desoxycorticosterone 7.3 α-Cortolone <0.1 1:32 13.1 13.6 96
Prednisolone 6.0 Hydrocortisone-21- <0.1 S3 Undiluted 521 - -
sulfate 1:2 278 260 107
17α-Hydroxy- 3.5 Cholesterol <0.1 1:4 145 130 111
progesterone 1:8 75 65 115
Dihydrocortisol 2.4 Etiocholanolone <0.1 1:16 36 33 110
5α-Dihydrocortisone 2.3 11β-Hydroxy- <0.1 1:32 17.1 16.3 105
etiocholanolone S4 Undiluted 1,138 - -
5β-Dihydrocortisone <0.1 Prégnenolone sulfate <0.1 1:2 560 569 99
Progesterone 1.8 Estradiol <0.1 1:4 278 285 98
Cortisone 1.5 Estriol <0.1 1:8 140 142 98
Pregnenolone 1.1 Estrone <0.1 1:16 61 71 86
Allotetrahydro- 0.8 DHEA-sulfate <0.1 1:32 33 36 93
cortisone S5 Undiluted 1,432 - -
21-Desoxycortisone 0.13 Androstenedione <0.1 1:2 812 716 113
Prednisone <0.1 Spironolactone <0.1 1:4 350 358 98
6α-Methyl- 0.27 18-Hydroxy- <0.1 1:8 188 179 105
prednisolone corticosterone 1:16 96 90 107
6β-Hydroxycortisol <0.1 Aldosterone <0.1 1:32 49 45 109
β-Cortolone <0.1 Danazol <0.1
20α-Dihydrocortisol <0.1 5α- <0.1 EDTA plasma Dilution factor Measured Expected Ratio (%)
Dihydrotestosterone (nM) (nM) Measured/
Tetrahydrocortisone <0.1 19-Norethisterone <0.1 Expected
β-Cortol <0.1 Testosterone <0.1 P1 Undiluted 410.4 - -
1:2 202.0 205.2 98.47
Precision 1:4 86.40 102.6 84.22
Intra-assay 1:8 43.72 51.29 85.23
1:16 22.71 25.65 88.55
Sample Serum (n=10) EDTA Plasma 1:32 13.68 12.82 106.7
(n = 25) P2 Undiluted 534.3 - -
S1 S2 S3 S4 S5 P1 P2 P3 1:2 254.5 267.1 95.27
Mean (nM) 37 76 178 305 741 47.07 222.6 481.5 1:4 121.6 133.6 91.07
CV (%) 5.1 5.8 2.8 3.4 3.5 8.91 7.33 4.76 1:8 59.93 66.78 89.74
1:16 27.03 33.39 80.95
Sample Urine (direct) ( n = 25) Urine (extract) (n = 25) 1:32 13.39 16.70 80.20
U1 U2 U3 UE1 UE2 UE3 P3 Undiluted 377.7 - -
Mean (nM) 89.89 33.18 547.1 64.67 186.8 420.0 1:2 171.7 188.9 90.93
CV (%) 7.43 8.89 2.95 9.39 6.12 4.86 1:4 75.66 94.43 80.12
1:8 38.07 47.22 80.63
Inter-assay
1:16 20.89 23.61 88.49
Samples were assayed in duplicate. P4 Undiluted 327.0 - -
1:2 165.1 163.5 101.0
Sample Serum (n=17) EDTA Plasma (n = 10)
1:4 82.97 81.76 101.5
S1 S2 S3 S4 P1 P2 P3 P4
1:8 36.62 40.88 89.58
Mean (nM) 36.5 74.1 185 713 22.45 145.4 230.5 526.8
1:16 18.89 20.44 92.42
CV (%) 9.2 7.8 5.3 5.4 10.48 15.16 9.61 13.41 P5 Undiluted 754.4 - -
1:2 358.2 377.2 94.96
Sample Urine (direct) (n = 10) Urine (extract) (n = 10)
1:4 182.2 188.6 96.62
U1 U2 U3 U4 UE1 UE2 UE3 UE4
1:8 77.42 94.30 82.10
Mean (nM) 17.93 123.2 340.5 584.3 24.96 61.31 169.1 511.9
1:16 37.86 47.15 80.29
CV (%) 13.30 6.17 6.53 5.75 10.72 12.59 5.24 4.49
1:32 20.16 23.58 85.51

PI-IM1841–05 59 of 62
 Urine (direct) Dilution factor Measured Expected Ratio (%) Serum Endogen. Added Measured Expected Ratio (%)
(nM) (nM) Measured/ conc. conc. conc. conc. Measured/
Expected (nM) (nM) (nM) (nM) Expected
U1 Undiluted 342.8 - - S1 25 15 40 40 100
1:2 203.0 171.4 118.4 25 50 85 75 113
1:4 81.04 85.70 94.56 25 150 186 175 106
1:8 34.33 42.85 80.11 25 500 552 525 105
U2 Undiluted 524.5 - - 25 1,501 1,654 1,526 108
1:2 271.5 262.3 103.5 S2 71 15 87 85 102
1:4 141.8 131.1 108.1 71 50 130 120 108
1:8 53.96 65.57 82.30 71 150 231 220 105
1:16 29.33 32.78 89.47 71 500 612 570 107
1:32 13.89 16.39 84.74 71 1,501 1,675 1,572 107
U3 Undiluted 578.5 - - S3 143 15 150 158 95
1:2 295.8 289.2 102.3 143 50 187 193 97
1:4 138.3 144.6 95.63 143 150 295 293 100
1:8 66.08 72.31 91.39 143 500 724 643 112
1:16 28.96 36.15 80.10 143 1,501 1,722 1,644 105
U4 Undiluted 513.5 - - S4 261 15 276 276 100
1:2 261.1 256.7 101.7 261 50 338 311 109
1:4 129.5 128.4 100.9 261 150 427 411 104
1:8 62.16 64.18 96.85 261 500 806 761 106
1:16 27.42 32.09 85.44 261 1,501 1,862 1,762 106
U5 Undiluted 298.1 - - S5 353 15 367 368 100
1:2 156.9 149.1 105.3 353 50 406 403 101
1:4 77.78 74.53 104.4 353 150 513 503 102
1:8 31.83 37.26 85.42 353 500 891 853 104
353 1,501 1,911 1,854 103
Urine Dilution factor Measured Expected Ratio (%)
(extract) (nM) (nM) Measured/ EDTA Endogen. Added Expected Measured Ratio (%)
Expected plasma conc. conc. conc. conc. Measured/
UE1 Undiluted 272.6 - - Expected
(nM) (nM) (nM) (nM)
1:2 139.7 136.3 102.5 P1 22.06 9.59 31.65 37.86 119.6
1:4 56.90 68.15 83.49 20.99 19.55 40.54 35.40 87.33
1:8 30.75 34.08 90.24 22.35 23.55 45.89 44.29 96.51
1:16 13.86 17.04 81.35 P2 27.76 14.69 42.45 47.74 112.5
UE2 Undiluted 489.8 - -
28.29 36.96 65.25 77.97 119.5
1:2 234.9 244.9 95.90 27.09 66.36 93.45 104.0 111.3
1:4 121.4 122.5 99.15 P3 39.76 19.55 59.31 62.09 104.7
1:8 59.47 61.23 97.13 41.26 41.32 82.58 91.74 111.1
1:16 33.11 30.61 108.2 41.53 101.27 142.8 163.5 114.5
1:32 14.59 15.31 95.32 P4 46.97 23.55 70.52 72.38 102.6
UE3 Undiluted 529.1 - -
45.22 49.88 95.10 91.04 95.73
1:2 295.0 264.5 111.5 46.08 101.3 147.3 152.5 103.5
1:4 139.6 132.3 105.5 P5 50.16 28.08 78.24 72.88 93.15
1:8 64.36 66.13 97.32 48.01 58.22 106.23 108.8 102.4
1:16 31.05 33.07 93.90 48.91 125.0 173.9 180.89 104.0
1:32 16.72 16.53 101.1
UE4 Undiluted 444.1 - -
Urine Endogen. Added Expected Measured Ratio (%)
1:2 220.5 222.1 99.28 (direct) conc. conc. conc. conc. Measured/
1:4 104.8 111.0 94.38 (nM) (nM) (nM) (nM) Expected
1:8 49.74 55.52 89.60 U1 55.66 23.55 79.21 84.11 106.2
1:16 24.71 27.76 89.02 53.93 45.63 99.55 95.74 96.17
1:32 11.97 13.88 86.25 53.93 125.0 178.9 182.9 102.2
UE5 Undiluted 254.8 - -
U2 26.97 13.44 40.41 43.12 106.7
1:2 114.3 127.4 89.74 27.84 23.55 51.39 47.21 91.87
1:4 54.86 63.69 86.13 26.97 45.63 72.60 62.25 85.75
1:8 26.06 31.85 81.83 U3 19.15 13.44 32.59 26.92 82.60
1:16 13.89 15.92 87.23 19.77 23.55 43.32 37.05 85.53
19.15 45.63 64.78 60.53 93.44
Recovery test
U4 68.95 32.55 101.50 92.97 91.60
Cortisol was added to samples and assayed according to the procedure of 65.61 66.36 131.97 138.64 105.1
the kit. 67.24 136.6 203.9 208.4 102.2
U5 35.38 23.55 58.93 51.29 87.04
34.71 36.96 71.67 63.55 88.67
33.24 66.36 99.60 94.22 94.60

PI-IM1841–05 60 of 62
 Urine Endogen. Added Expected Measured Ratio (%)
(extract) conc. conc. conc. conc. Measured/
(nM) (nM) (nM) (nM) Expected
UE1 27.98 23.55 51.53 59.15 114.8
27.10 45.63 72.73 61.66 84.78
27.10 125.0 152.1 146.6 96.40
UE2 10.35 13.44 23.79 21.53 90.51
10.68 23.55 34.23 33.75 98.59
10.35 45.63 55.98 51.19 91.45
UE3 4.55 13.44 17.98 14.93 83.02
4.69 23.55 28.24 28.15 99.67
4.55 45.63 50.17 56.16 111.9
UE4 43.38 32.55 75.92 90.25 118.9
41.27 66.36 107.6 126.7 117.7
42.30 136.6 178.9 200.2 111.9
UE5 13.81 23.55 37.36 35.40 94.76
13.55 36.96 50.51 52.08 103.1
12.97 66.36 79.34 79.28 99.93

Expected data for children

Results are sorted according to the age and sex.

Cortisol (nM)
Boys N Median Min. Max. 2.5th 97.5th
percentile percentile
<1 month 26 150.3 59.60 472.5 62.60 416.4
1-2 months 28 161.6 33.40 653.0 43.32 641.9
3-5 months 14 353.9 120.5 516.5 130.5 500.3
6-11 months 46 218.2 80.30 686.2 117.4 570.3
1-8 years 36 377.9 153.9 682.1 167.6 676.7
9-14 years 31 274.3 126.5 484.1 180.4 476.4

Cortisol (nM)
Girls N Median Min. Max. 2.5th 97.5th
percentile percentile
<1 month 16 89.50 35.80 450.3 35.88 414.1
1-2 months 16 123.0 26.30 605.8 27.39 579.2
3-5 months 27 196.6 42.10 621.1 52.05 614.9
6-11 months 31 254.8 105.6 766.2 116.6 658.4
1-8 years 31 324.1 140.0 645.2 154.6 537.1
9-14 years 34 252.1 112.5 632.0 115.1 610.1
125
I Characteristics
T1/2 (125I) = 1443 h = 60.14 d
125
I E (MeV) %
γ 0.035
X 0.027 114
0.032 25

Correlations
Serum and EDTA plasma values for 20 samples (serum values ranging from
234.5 to 667.6 nM) were compared using the IM1841 Cortisol RIA kit. Reuslts
are as follows:
[EDTA-plasma] = 0.9874[serum] + 8.7389, R = 0.9771
Direct assay of urinary Cortisol and after extraction for 108 urine samples
(values of direct urinary cortisol ranging from 9.80 to 2,180 nM) were
compared using the IM1841 Cortisol RIA kit.
Results are as follows: [Direct] = 1.05 [Extraction] + 5.40, R = 1.00

PI-IM1841–05 61 of 62
03 June 2020