Reconocimiento de Proteinas
Reconocimiento de Proteinas
Reconocimiento de Proteinas
FUNDAMENTO TEORICO: Identificacin de protenas mediante la reaccin el Biuret: La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.
O C HN R CH Cu2+ O C HN R CH C O NH HC R C O NH HC R
La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin, comn a todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas. Espectrofotometra. Principios bsicos: A diferencia de las pruebas realizadas anteriormente, la reaccin de Biuret es cuantificable, es decir, a mayor concentracin de protenas, mayor intensidad de color violeta. Esta reacciones, en las que el color formado es proporcional a la cantidad de sustancia se llaman reacciones colorimtricas. Midiendo la intensidad de color se podra conocer la concentracin de la sustancia que lo produce. Para ello se aplican tcnicas fotomtricas, empleando un aparato llamado colormetro (si mide slo un determinado color) o espectrofotmetro (si realiza una medida de todo el espectro de colores).
Identificacin de cadenas Laterales Aromticas - Reaccin Xantoproteica: Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con acido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos (Aromticos), especialmente en presencia de tirosina.
MATERIALES Y REACTIVOS: Clara de Huevo Tubos de ensayo Vaso de precipitados Gradilla Pipetas Varillas de vidrio Acido ntrico concentrado Reactivo de Biuret: Hidrxido de sodio al 20% y Sulfato cprico al 1%
METODOLOGIA: 1. Reaccin del Biuret: Separar la clara del huevo en un vaso de precipitado Colocar a un tubo de ensayo 2 a 3 cc. de albmina de huevo. Colocar a otro tubo d ensayo agua. Aadir 1 ml de Reactivo de Biuret a cada uno de los tubos. Observar y anotar la coloracin que aparezca. 2. Reaccin Xantoproteica: Colocar en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solucin problema (clara de huevo). Colocar a otro tubo de ensayo agua. Aadir 1 cc. de HNO3 y agitar. Calentar a bao mara Enfriar en agua fra. RESULTADOS Y DISCUSIN:
REACCION DE BIURET PRIMER TUBO (albumina) SEGUNDO TUBO (agua) Violeta (Biuret +) Celeste bajito (Biuret -) REACCION XANTOPROTEICA PRIMER TUBO (albumina) SEGUNDO TUBO (agua) Anillos aromticos amarillos (+) Nose formaron los anillos (-)
1. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena Para saber si una sustancia desconocida, es una protena se utiliza el Reactivo de Biuret ya que por medio de este se puede detectar la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos. 2. Qu coloracin da la reaccin de Biuret El color violeta indica la presencia de protenas. 3. Una protena coagulada podra dar la reaccin de Biuret La reaccin de Biuret reacciona con cualquier protena, liquida o solida. Entonces si puede dar la racin de Biuret con una protena coagulada. 4. Si se realiza la reaccin de Biuret sobre un aminocido como la Glicina Es positiva o negativa La glicina no reacciona con el reactivo de Biuret ya que esta de forma libre y no tiene enlaces peptdicos para poder reaccionar. Entonces la glicina es negativa. 5. Como podramos saber si la protena est formada por un aminocido que poseen en su cadena R (lateral) un grupo aromtico o lineal Cuando las protenas tienen aminocidos portadores de grupos bencnicos la reaccin Xantoproteica da como resultado la formacin de unos anillos aromticos amarillos