Cultivo de Una Microalga, Mediante La Tecnica de La Masificación

Cultivo de fitoplancton, zooplancton y macroalgas
AO DE LA INVERSION PARA EL DESARROLLO RURAL Y

LA SEGURIDAD ALIMENTARIA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

[Escriba texto]
Pgina 1
FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE INGENIERIA
PESQUERA
TEMA
: CULTIVO DE UNA MICROALGA, MEDIANTE LA

TECNICA DE LA MASIFICACIN
CURSO
: CULTIVO DE FITOPLANCTON, ZOOPLANCTON Y

MACROALGAS
PROFESOR
: ING. EDGAR REGULO VEGA ALCAZAR M. Sc.
INTEGRANTES:
ALDANA AMAYA, GIAN MARCOS

ALVARADO NUEZ ARNOLD
CORDOVA CRUZ, HERNAN
SILVA TALLEDO, JOSE HERNAN
SUAREZ RAMIREZ SEGUNDO CHRISTIAN
NDICE
I.
INTRODUCCIN
.
3
[Escriba texto]
Pgina 2
II.
OBJETIVOS...
III.
MATERIALES
EQUIPOS
IV.
Y
5
FUNDAMENTO
TERICO
7
4.1. CARACTERISTICAS DE LA MICROALGA EN CULTIVO
(nannochloropsis)
7
4.2. ACONDICIONAMIENTOS FISICOS..
8
4.3. ACONDICIONAMIENTOS QUIMICOS
..
10
4.4. TCNICAS DE CONTAJE CELULAR...........................
13
V.
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
Y
14
5.1. LIMPIEZA Y DESINFECCIN DE TODOS LOS EQUIPOS

Y
MATERIALES
.. 14
5.2.
PRIMERA
MASIFICACIN.
17
5.3. RESULTADOS DE LA CUANTIFICACION..
24
5.4.SEGUNDA
...
MASIFICACIN:
31
5.5. RESULTADOS DE LA CUANTIFICACION..

37
[Escriba texto]
Pgina 3
VI.- REPRESENTACIN GRFICA DE LA CURVA DE

CRECIMIENTO
DEL
CULTIVO.
43
VII.-DISCUSIONES
45
VIII.-
CONCLUSIONES
46
IX.-
BIBLIOGRAFIA
47
I.-INTRODUCCIN
El cultivo de microalgas se realiza mediante la tcnica de la masificacin,
que necesariamente debe ser desarrollada en la prctica, para reafirmar
los conocimientos tericos y finalmente capacitar al estudiante de
Acuicultura para obtener microalgas como cultivo de apoyo para alimentar
a los diferentes cultivos principales.
Las microalgas en los sistemas acuticos cumplen un papel importante
debido a que son el primer eslabn en la cadena trfica ya que ellas son
foto auttrofas, es decir, generan su propio alimento utilizando la luz, el
CO2 y una serie de nutrientes que les brinda el medio donde se
desarrollan.
Su cultivo es muy importante en una acuicultura comercial ya que
representan un adecuado alimento para los cultivos principales, por lo que
deben
manejarse
las
condiciones
adecuadas
semi-controladas
controladas totalmente, para lograr en ellas una biomasa considerable

como alimento.
[Escriba texto]
Pgina 4

Entre estas condiciones para el cultivo adecuado deben manejarse
requerimientos fsicos (Agitacin, luz, Temperatura) y qumicos (Manejo de
la contaminacin, nutrientes o sales minerales, gases, Ph, salinidad) los
cuales si se manejan eficientemente van a generar una exitosa y
considerable biomasa.
Adems de todo lo anteriormente mencionado se deben realizar controles
de desarrollo del cultivo (generales y sistemticas) para determinar
crecimiento,
incremento
de
biomasa
posibles
competidores
predadores.
Por lo que en el presente informe detallamos el procedimiento
para un
cultivo adecuado de microalgas (nannochloropsis), teniendo en cuenta las

caractersticas fsicas y qumicas, as como los controles mencionados.
II.- OBJETIVOS
Utilizar el medio de cultivo de GUILLARD modificado.
Establecer
acondicionar
un
sistema
de
cultivo
para
microalgas.
Desarrollar la tcnica de la masificacin, hasta llegar a un
volumen de 3
litros.
Cuantificar el cultivo mediante la tcnica de conteo directo,

utilizando la cmara de Neubaver
[Escriba texto]
Pgina 5
III.- MATERIALES Y EQUIPOS

3.1.- Materiales para la masificacin:
Dos botellas de 1.5 litros.
Dos botellas de 3.0 litros.
2 mts de manguera transparente (
).
2 llaves para acuario (
2 T para acuario (
[Escriba texto]
).
).
Pgina 6

2 uniones para acuario (
2 pali globos. (
).
).
2 pliegos de papel de molde.

Un rollo de papel higinico.
Un pao para limpieza (toalla).
Un paquete de algodn.
Una cinta de embalaje.
Un marcador indeleble.
3.2.- Materiales y reactivos para la desinfeccin y conteo de
microalgas:
Hipoclorito de sodio.
Tiosulfato de sodio.
Agua destilada
Formol al 5%.
[Escriba texto]
Pgina 7
3.3.- Materiales y equipos de laboratorio utilizados:
Microscopio.
Laminillas
Cmara de neubaver.
objetos.
Pipetas volumtricas.
Vasos de precipitados (500 y 250 ml).
Probeta (500 ml).
cubre
porta
Placas Petri.
Pizeta
MICROSCOPIO
BOTELLAS
PIZETA
LLAVES T
TOALLA
PLUMON
INDELEBLE
PAPEL
PAPEL MOLDE
HIGIENICO
CINTA
[Escriba texto]
ALGODON
Pgina 8
IV.- FUNDAMENTO TEORICO

4.1 CARACTERISTICAS DE LA MICROALGA EN CULTIVO.
Nannochloropsis sp.
Nannochloropsis es una pequea alga verde usada ampliamente en la
industria de la acuicultura para cultivar zooplancton, tal como la
alimentacin de rotferos y para hacer la tcnica de las aguas verdes.
Tambin es usada para alimentar corales y otros consumidores
filtradores.
Nannochloropsis es un gnero de alga que comprende aproximadamente
6 especies. Las especies mayormente se han conocido en el medio
marino, pero tambin se producen en agua dulce y salobre. Todas la
especies son pequeas esferas, no mviles que no expresan ninguna
caracterstica morfolgica distintiva, y no puede ser indicada mediante
luz o microscopia electrnica.
Las algas del genero Nannochloropsis ellos tienen un dimetro de
alrededor de 2 a 3 micrmetros.
.
Cultivo de nannochloropsis
Pgina 9
CLASIFICACIN CIENTIFICA
Dominio
Eucariontes
Reino
Filo
Clase
Familia
Genero
Chromalveolata
Heterokontophyta
Eustigmatophyceae
Eustigmataceae
Nannochloropsis
4.2.-ACONDICIONAMIENTOS FISICOS:
Nuestro cultivo masificado deber contar con 3 factores fsicos fundamentales que son:
agitacin, luz blanca y temperatura del medio ambiente.
Estos acondicionamientos tienen influencia de forma directa sobre los cultivos debido a que
si faltarn algunos de estos factores nuestro cultivo se ver seriamente afectado y
posteriormente fracasar.
Pgina 10
LA
AGITACIN.- Este acondicionamiento evita la sedimentacin de las
microalgas y es necesario agitar constantemente; esto es posible hacerlo por medios

mecnicos es decir utilizando un aireador, logrando as que en el cultivo haya una
mejor distribucin de los nutrientes disueltos en el agua, adems permite un
abastecimiento continuo de anhdrido carbnico (CO2 ) el cual es un componente del
aire, como efecto del bombeo y adems la agitacin permite
que todas las
microalgas aprovechen la mayor captacin de la luz para la fotosntesis. Por esta

razn es considerada como el primero factor fsico y ms importante.
LA LUZ.- Es un factor fsico de gran influencia, la cual puede ser tomada de dos
fuente, una natural que es la luz solar, esta es utilizada si los cultivos son exteriores
y extensivos, y la otra fuente es artificial que por lo general es utilizada para
cultivos intensivos e interiores es decir los que se controlan dentro de un
laboratorio.
Esta luz artificial debe de ser LUZ BLANCA O FRIA, no la luz amarilla o la que produce
calor.
En cambio la luz blanca es producida por la reaccin de la energa elctrica con el gas
nen, contenida en los fluorescentes; mientras que la luz amarilla es producida por
incandescencia sea por calor en el vaci, lo que genera mucha energa calorfica, que
calienta los cultivos de microalgas y los mata.
Las condiciones que debe reunir La luz artificial es que
tener la calidad
espectral
adecuada, que estn comprendidas entre los 380 y 720 nano micras (nm), nunca por debajo
de los 380 ni mayor a los 720 nano micras, debido a que cuando se encuentran fuera de
estos rangos son muy perjudiciales para nuestros cultivos debido a que producen inhibicin
de la fotosntesis.
La otra condicin es que debe tener una adecuada intensidad, que est en relacin a la
distancia que existe entre la fuente de luz y el cultivo de microalgas, esta debe estar entre
Pgina 11
0,20 a 1.0 m dependiendo del volumen del cultivo. La intensidad de la luz se mide por
LUX, y el rango adecuado de LUX para los cultivos est entre 2000 a 5000 lux,
dependiendo siempre del volumen y la densidad del cultivo.
LA TEMPERATURA.- Es un factor de igual importancia que los anteriores
mencionados debido a
que la fisiologa de las microalgas depende de la
temperatura del medio en la que se desarrollan en este caso el agua de mar.

La temperatura del medio de cultivo determina la principal actividad fisiolgica, que es la
fotosntesis y su intensidad. Razn por la que la produccin de biomasa de las microalgas,
depende de la temperatura del agua o medio.
4.3.- ACONDICIONAMIENTOS QUMICOS:

Nuestro cultivo de Nannochloropsis sp tambin deber contar con los 5 factores
qumicos ms importantes los cuales son: manejo de la contaminacin, nutrientes, pH,
gases y salinidad. Los cuales tienen influencia sobre los cultivos debido a que si algunos de
estos factores no estuviera en los mrgenes correctos nuestro cultivo estar retardado en
crecimiento o aumento de densidad y se vera seriamente afectado y posteriormente
fracasar.
MANEJO DE LA CONTAMINACIN: Este factor es el primero y
principal requerimiento o acondicionamiento qumico, debido a
que determina la produccin de biomasa (microalgas) en el tiempo
y en las condiciones proyectadas. Manejar la contaminacin va a
significar principalmente evitar que el ecosistema o medio de
cultivo no sea invadido por otros organismos competidores u
organismos predadores es decir evitar que en nuestro cultivo
existan organismos no invitados. Entre los competidores estn
otras microalgas y/o bacterias que se alimentan de los nutrientes
desplazando a la microalga cultivada; de los predadores sern
Pgina 12
todos aquellos organismos que se alimentan de las microalgas Las

dos principales tcnicas para manejar la contaminacin son:
La
Esterilizacin.- Consiste en la
eliminacin de TODOS los
microorganismos como bacterias y otras microalgas y sus formas

resistentes, para evitar que compitan con la microalga en cultivo y as
obtener un ecosistema estril, donde slo viva la microalga en cultivo.
Se logra luego de haber utilizado el calor directo o hmedo y
procedimientos qumicos en combinacin con procesos qumicos, cuando
se filtra el agua hasta llegar a las 2 micras, y luego aplicar radiacin
ultravioleta.
La
desinfeccin.-
microorganismos
Es
como
la
eliminacin
bacterias
otras
de
la
mayora
microalgas
de
sus
los
formas
resistentes, para evitar que compitan con la microalga en cultivo y as

obtener un ecosistema monoespecfico , donde prevalezca la microalga
en cultivo por su densidad sobre los dems acompaantes, as la
microalga tendr un ecosistema acutico ms indicado para su
crecimiento. Se logra aplicando lavados con detergentes, alcohol, leja,
formol, yodo.
NUTRIENTES O SALES MINERALES: Es un factor importante
pues los nutrientes son
el conjunto de sustancias que son
agregadas al medio de cultivo en este caso agua de mar

esterilizada o desinfectada, que deber necesariamente contener
toda la composicin de sales minerales que requiera cada especie
de microalga, en general se requiere:
-Nitrato de sodio 75 mg/L
-Fosfato de sodio
5 mg/L
Pgina 13
-Trazas de minerales
- Vitaminas
GASES: tercer factor a tener en cuenta en los cultivos de
microalgas, los principales son el Anhdrido carbnico (CO 2) y el
oxgeno disuelto en el agua (O2), el CO2 es el gas insumo y
deficitario en el cultivo de microalgas, debido a que participa en la
fotosntesis.
El CO2, ingresa mediante la agitacin con el aire filtrado al cultivo de

microalgas, logrando densidades elevadas ejemplo 4.5 x 10 6, para
mayores densidades es necesita aadir al cultivo CO 2 en su forma
purificada en un 1% del volumen del aire que ingresa con la agitacin,
caso contrario el cultivo no se desarrolla y por falta de CO 2 el pH se
eleva hasta 9, creando un medio ambiente no adecuado para las
microalgas.
PH DEL AGUA.- Es el cuarto factor qumico a tener en cuenta
debido a que este representa la cantidad de hidrogeniones activos
que estn presentes en el agua y determinan si el cultivo de
microalgas se va a desarrollar adecuadamente, para lo cual debe
estar en el rango de 6,5 a 9,5, siendo el ptimo entre 7 y 8,
valores fuera de este rango (6,5 a 9,5) causan problemas de
erosin y deterioro en la pared celular de las microalgas.
El pH del agua est relacionado directamente con la cantidad de CO2 disuelto en el agua.
Por esta razn el pH promedio recomendado para el medio de cultivo de microalgas en
agua dulce ser de 7,5 y en agua de mar 8,4 los que con la edad de las clulas y el
desarrollo del cultivo se incrementar hasta 9,0 , pH que detendr el desarrollo del cultivo,
Pgina 14
dado que se ha consumido todo el CO2 administrado por la agitacin al cultivo, debiendo
obligatoriamente agregar el 1% de CO2 al sistema de agitacin, para proveer CO 2 para que
el desarrollo del cultivo reinicie su incremento, y se baje el pH a 7,5 o 8,4 segn el tipo de
agua.
SALINIDAD DEL AGUA.- Es el quinto factor qumico a tener en
cuenta debido a que este comprende todas las sales disueltas en
el agua, que las microalgas necesitan para su desarrollo normal,
como por ejemplo el cloruro de sodio, el nitrato de sodio y el
fosfato de sodio.
Las microalgas cultivadas pueden ser de origen marino o de agua dulce,
en ambos casos ser necesario verificar con un salinmetro ptico que
la salinidad del medio de cultivo sea igual o muy similar al nuevo medio
de cultivo a utilizar, durante el proceso de la masificacin.
4.4.- TECNICAS DE CONTAJE CELULAR:

A continuacin se hace una descripcin breve de los mtodos que se utilizan para
determinar el nmero de clulas presentes en una muestra.
UTILIZANDO UN MICROSCOPIO Y UNA CMARA DE NEUBAVER.
Primero tomamos una muestra la cual tiene que ser homognea y
representativa, esto ser realiza no destapando la botella si no apretando
la botella y por la misma manguera de aireacin verter en un vasito la
Pgina 15
muestra, luego mediante una pipeta se toma una submuestra de 2 ml

del cultivo y se les aplica 2 ml de formol al 5%, luego homogenizamos,
despus con otra pipeta se extrae la muestra homognea y se desliza
en la cmara. Luego se cubre con la lmina cubreobjetos, se procede a
contar
el nmero de clulas presentes en cada cmara
mediante el
microscopio.
Una vez que se tiene el promedio de clulas de las cmaras, el clculo
total de clulas por mililitro se lleva a cabo de la siguiente manera:
a.- Primero calcule el factor de dilucin
m = Muestra problema (ml)

f = solucin de formol al 5% (ml)
b.- Se tiene que multiplicar por 10 000, debido a que el volumen de una
cuadricula es de 0.1 micro litro y para llevarlo a mililitro se tiene q
multiplicar por 10 000
c.- Se requiere el nmero promedio de clulas de la muestra problema.
N.P. = Nmero promedio de clulas por ml
Con todos los incisos anteriores se realiza el clculo de nmero de
clulas de la muestra problema por ml y la frmula queda as:
No. de Clulas/ ml = (F.D.) (10 000) (N.P.
V.- PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS

5.1. LIMPIEZA Y DESINFECCIN DE TODOS LOS EQUIPOS Y
MATERIALES
Para manejar el problema de la limpieza y desinfeccin, hemos tenido que lavar los
materiales que vamos a utilizar en la masificacin y tambin el lugar de trabajo del grupo
(mesa). Aqu se realiz lo siguiente:
Pgina 16
El Primero lavado se hizo con detergente.

El Segundo lavado se hizo con hipoclorito de sodio.
El tercer lavado se hizo con tiosulfato.
El cuarto lavado se hizo con agua destilada.
El procedimiento fue el siguiente:

EL PRIMER LAVADO:
Lo hicimos utilizando detergente con la finalidad de eliminar las partculas ms grandes y
persistentes como la suciedad y algunas impurezas de mayor tamao, pues inicialmente
lavamos cuidadosamente el rea de la mesa de trabajo, utilizando abundante agua y una
cierta cantidad detergente, restregando con el pao de limpieza para poder sacar la mayor
suciedad posible; luego el rea lavada con agua, detergente y enjuagada con agua potable
la secamos totalmente con el papel higinico.
As mismo, se procedi el lavado con detergente y agua a los materiales tanto de vidrio
como los materiales de plstico que se utilizaran durante el proceso de masificacin.
Pgina 17
EL SEGUNDO LAVADO:
Luego se procedi a realizar el segundo lavado utilizando hipoclorito de sodio (leja), con
el fin de eliminar todo tipo de microorganismos presentes e impurezas de menor tamao
adheridas al material, pero solo se realiz en materiales que luego utilizaramos en la
masificacin; ya que el cloro tiene una valencia muy activa y por lo tanto corrosiva. Que al
estar en contacto con cualquier organismo vivo este lo corroer (es decir les destruir su
pared celular lo que les impedir seguir reproducindose y en consecuencia morirn)
Determinamos la cantidad de esta solucin para luego diluirla y realizar el desinfectado
utilizando la siguiente cantidad 5.88ml a una concentracin de 500 ppm para 500 ml de
agua de mar.
Pgina 18
TERCER LAVADO:
Luego pasamos al tercer lavado que lo hicimos con Tiosulfato el cual se agreg 0.5 ml
por cada 500 ml de agua destilada en un vaso de precipitado, este lavado se hace con el fin
de neutralizar y eliminar los residuos de HCl que han quedado presentes tanto en los
materiales como en la zona de trabajo, es importante neutralizar con tiosulfato debido a
que si no lo hacemos los residuos de cloro al momento de verterle nuestro inoculo corroer
la pared celular de nuestras micro algas causndoles la muerte.
CUARTO LAVADO:
Por ltimo realizamos el cuarto lavado con agua destilada para retirar los residuos de
Tiosulfato concluyendo finalmente que los materiales estn desinfectados completamente.
Para evitar que nuestros materiales se vuelvan a contaminar cubrimos con papel molde
todos los materiales desinfectados: botellas rotuladas, el pali globo, la manguera, las
conexiones de plstico (Uniones, llaves T). Una ver cubierto todos los materiales los
recubrimos con un pliego de papel para obtener un solo paquete u bolsa, lo cerramos con
cinta y volvemos a rotular (marcar con los datos del grupo) est vez el paquete.
Al final todo el paquete de materiales desinfectados se les entregar al docente para
guardarlos, adems se le har la devolucin de todos los materiales utilizados en esta
prctica completamente limpios.
Pgina 19
5.2.- PRIMERA ETAPA DE MASIFICACIN:

5.2.1.- PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO A MASIFICAR.
5.2.1.1.- TRATAMIENTO DEL AGUA DE MAR:
Se inicia con el proceso de recoleccin en el (mar), para luego ser
llevada al CEAPA entregada a los encargados de esa zona y luego ellos
hagan lo siguiente:
a.- FILTRACIN:
Los encargados del CEAPA tuvieron
que aplicar el filtrado a nuestra
agua con el fin de esta no presente slidos, tal que todos los elementos
slidos no deseados se vayan quedando en el papel filtro y as lograr el
adecuado manejo de la contaminacin. Una vez filtrada un alumno del
grupo tiene que ir a recoger la botella previa desinfeccin.
b.- TRATAMIENTO TERMICO:
Una vez filtrada el agua de mar llevamos a calor hmedo la cual se
eleva a una determinada temperatura hasta que sea calentada,
obteniendo
la eliminacin de: esporas, bacterias y todo tipo de
microorganismos que pongan en riesgo nuestro cultivo.
Pgina 20
Nota: El tiempo de aplicacin del calor hmedo debe ser breve ya que si
esta hierve se formaran precipitados de color blanquecino (bsicamente
son sales), lo cual perjudicara el desarrollo ptimo de nuestro cultivo.
5.2.1.2.- PREPARACIN Y ENRIQUECIMIENTO DEL MEDIO DE
CULTIVO
El proceso de filtracin y esterilizacin lo llevamos a cabo dos das un da
antes de la masificacin respectivamente. Nutrientes (nitrato de sodio,
fosfato de sodio
trazas de minerales y vitaminas) cada una con
su
respectivo volumen que a continuacin detallamos:

NITRATO DE SODIO:
Se trata de una sustancia incolora, ligeramente higroscpica y altamente
oxidante; debido a su contenido de nitrgeno se utiliza como fertilizante.
1 mg
1000 ml
X mg
1000 ml
X=1 mg=1 ml
Pgina 21
Para los nitratos de sodio en la fiola estaba especificado que
dicha
solucin debera vestirse 1 mg por cada 1000 ml de agua de mar

tratada, pero como esta (nitrato de sodio) est en forma de solucin
entonces decimos que: 1 mg = 1ml, para que pueda ser tomado como
medida volumtrica en la pipeta; es por ello que nuestra muestra le
hemos agregado 1 ml de fosfato de sodio para empezar a enriquecer
nuestra agua de mar.
FOSFATO DE SODIO:
Se emplean como aditivos alimentarios principalmente estabilizantes, en
algunas ocasiones empleado como regulador de la acidez, y tambin
como agente en algunos minerales.
1 mg
1000 ml
X mg
1000 ml
X=1 mg=1 ml
Para los fosfatos de sodio en la fiola estaba especificado que
dicha
solucin debera vestirse 1 mg por cada 1000 ml de agua de mar

tratada, pero como esta (Fosfato de sodio) est en forma de solucin
entonces decimos que: 1 mg = 1ml, para que pueda ser tomado como
medida volumtrica en la pipeta; es por ello que nuestra muestra le
hemos agregado 1 ml de fosfato de sodio para empezar a enriquecer
nuestra agua de mar.
Pgina 22
TRAZAS DE MINERALES:
1 mg
1000 ml
X mg
1000 ml
X=1 mg= 1 ml
Para las trazas en la fiola estaba especificado que
dicha solucin
debera vestirse en 1.1 mg por cada 1000 ml de agua de mar tratada,

pero como esta (trazas) est en forma de solucin entonces decimos
que: 1mg = 1 ml, para que pueda ser tomado como medida volumtrica
en la pipeta; es por ello que nuestra muestra le hemos agregado 1 mg
de trazas para concluir el enriquecer de nuestra agua de mar.
La razn por la cual se agregan ms volmenes de fosfatos, nitratos y
vitaminas es debido a que estos en el agua de mar que hemos tratado
estn en condiciones deficitarias; los minerales o trazas le hemos
reducido su volumen a 1 ml es debido a que en el agua de mar existen
ms carbonatos y bicarbonatos lo cual este volumen vertido es solo para
complementar algunas trazas faltantes ya que toda agua donde se va a
realizar un cultivo debe contar con minerales en concentraciones
relativamente bajas para que este progrese.
Todo esto que hemos realizado es con la finalidad de darle todas las
facilidades a la especie a cultivar
para que tenga el crecimiento o
reproduccin adecuada.
Pgina 23
VITAMINAS:
La actividad de las vitaminas se pone en manifiesto qumico como
precursores en las formas metablicas correspondientes por esta razn
como el aporte natural es escaso de vitaminas da lugar a sntomas de
deficiencia.
0.5 mg
X mg
1000 ml
1000 ml
X=0.5 mg=0.5 ml
Para las vitaminas en la fiola estaba especificado que
dicha solucin
debera vestirse 0.55 mg por cada 1000 ml de agua de mar tratada, pero
como esta (Vitaminas) est en forma de solucin entonces decimos que:
1 mg = 1ml, para que pueda ser tomado como medida volumtrica en
la pipeta; es por ello que nuestra muestra le hemos agregado 0.5 ml de
vitaminas para empezar a enriquecer nuestra agua de mar.
5.2.2.- INCORPORACIN DEL INCULO:
Inicialmente estaba presente como cepa del cual se extraera la muestra
para el cultivo (inoculo), y que posteriormente albergara a todos los
cultivos de las microalgas a cultivar. El inoculo incorporado al medio de
cultivo preparado fue de 500 ml
A.- TOMA DE MUESTRA PARA SU PRIMERA CUANTIFICACIN.
Luego de tener nuestro sistema de cultivo en completo funcionamiento
procedemos a desconectar el sistema de aireacin de la lnea madre,
Pgina 24
luego extraemos una pequea muestra la cual debe ser homognea y

representativa.
De esta muestra sacaremos una submuestra la cual tendr un volumen
de 2 ml, que lo vertimos en la placa Petri. La pipeta a utilizar para esta
medida debe estar totalmente esterilizada para evitar contaminar la
muestra y alterar los resultados.
De inmediato pipeteamos un volumen de 2 ml de formol al 5%, el cual le
agregaremos a la placa Petri que contiene los 2 ml de la muestra,
teniendo estos dos volmenes nos servirn para el factor de dilucin. El
motivo por el cual agregamos formol es de inmovilizar (matar) a las
microalgas para poder realizar el conteo; hecho esto homogenizaremos
con el propsito de tener una muestra fiable a nuestro propsito
(cuantificacin).
Luego de haber realizado esto haremos uso de parte de pali globo, el

cual nos servir para llevar parte de
cmara de Neubaver, el pali globo
la muestra homogenizada a la
y la cmara deben estar limpia y
bien desinfectado, para obtener resultados fiables, Una vez realizado
Pgina 25
esto cubrimos la muestra puesta en la cmara de Neubaver con una

laminilla cubre objeto.
Para llevarla al microscopio y realizar el conteo correspondiente; para

localizar las cuadriculas primero hicimos uso del lente de color rojo, el
cual tiene un aumento de 4 aumentos (X 4), este sirvi para ubicar la
cuadriculas en dimensiones relativamente pequeas.
Una vez ubicada procedemos a utilizar el lente de color amarillo el cual

tiene un aumento de 10 aumentos (X 10) , el cual nos sirvi para ubicar
una cuadricula de las cuatro en dimensiones relativamente ms grandes
que a la anterior, luego hicimos uso del micrmetro para darle nitidez a
la imagen a la muestra que visualizamos en el microscopio.
Pgina 26
Hecho todo esto procedimos a realizar el conteo correspondiente de

cada una de las cuadriculas
5.3.- CUANTIFICACIN: RESULTADOS.
PRIMER CONTEO DE MICROALGAS (SIEMBRA): (lunes 11/11/13)

76
62
60
68
50
57
40
72
53
58
77
53
69
48
50
55
Promedio:
X = (76+62+60+68.) =
14
59.36
Total de microalgas
T = X . 2 . 10 000
T = 59.36 x 2 x 10 000
Pgina 27
T = 1.1 x 106 clulas/mililitro
SEGUNDA CONTEO : (mircoles 13/11/13)

13
2
13
0
13
2
10
9
12
4
12
2
11
6
10
1
14
1
12
0
14
8
16
0
12
3
12
1
11
6
12
7
13
2
11
0
93
87
89
94
93
96
71
73
95
97
10
5
11
4
105
92
Promedio:
A = (132+124++127)= 125.79
14
B = (132+110++92)= 95.93
14
Pgina 28
X= 125.78 + 95.93= 110.86

2
Total de microalgas
T = X . 2 . 10 000
T = 110.86 x 2 x 10 000
11
6
14
5
14
7
10
3
TERCER CONTEO: (viernes15/11/13)
111
11
3
11
9
111
97
12
0
12
7
14
3
14
2
12
0
12
8
13
0
17
0
13
0
13
3
10
8
14
0
10
3
11
7
12
7
11
8
12
5
12
8
12
4
140
11
9
12
6
127
Promedio:
A =(116+111+..+130)=123.43
Pgina 29
14
B = (130+140++108)= 125.86
14
X= 123.43 + 125.86= 124,65
Total de microalgas
T = X . 2 . 10 000
T = 124,65 x 2 x 10 000
T = 2.4 x 106 clulas/mililitros
CUARTO CONTEO: (martes 19/11/13)
15
2
18
5
16
7
16
4
18
3
16
5
13
4
16
6
18
0
15
8
16
6
17
9
12
6
16
0
17
9
20
6
Promedio:
X = (152+183+..+206)
=167celulas
Pgina 30
14
Total de microalgas
T = X . 2 . 10 000
T = 167 x 2 x 10 000
5.3.3. ACONDICIONAMIENTO DEL SISTEMA DE AGITACIN

La agitacin es el acondicionamiento fsico ms importante que debe tener un
cultivo de microalgas ya que va a evitar la sedimentacin de la densidad de
microalgas, generar el movimiento del medio de cultivo y as proporcionar la buena
distribucin de los nutrientes disueltos en el agua, tambin funciona como
abastecedor de anhdrido carbnico (CO2) del aire por efecto del bombeo a travs
del burbujeo y brinda una mejor captacin de la energa de la luz. Todo esto va a
ser posible que se produzca una rpida reproduccin de las microalgas y por
consiguiente aumento en biomasa.
El abastecimiento de aire para nuestro cultivo es proporcionado por una bomba de
aire la cual toma aire del medio ambiente para luego comprimirlo y distribuirlo por
toda la red. Es importante que la bomba cuente con un filtro para poder controlar
la contaminacin del cultivo. La distribucin del aire se realiza a travs de una
tubera principal de PBC la cual va a tener pequeas boquillas por donde se
conecta una manguera transparente de 2 metros y
, para
regular la cantidad de aire que entre al cultivo es necesario colocar en la conexin

una llave pequea de plstico. En la parte final de la manguera se coloca un pali
Pgina 31
globo (
) el cual va a pasar por la tapa de la botella previamente
perforada colocndose hasta la parte ms profunda de la botella para as generar

una mayor agitacin del cultivo y obtener una mayor biomasa.
5.3.4. CONTROLES DE DESARROLLO DEL CULTIVO DE MICROALGAS:

A.- REGISTRO DE DESARROLLO GENERALES (Diarias):
- DETERMINACIN DE COLOR Y TONALIDAD:
El color que iba tomando nuestro cultivo a lo largo de los das fue uno de
los indicadores que nos permiti determinar que nuestro cultivo estaba
progresando, es decir que las microalgas (nannochloropsis sp) se
estaban reproduciendo, consumiendo los nutrientes aportados al agua
de mar y que los acondicionamientos fsicos y qumicos que se haban
hecho estaban dentro de los rangos aceptables para el cultivo de dicha
microalga.
Fue as que a diario se tomaba nota del color, este iba en aumento es
decir aumentaba el tono del color, inicindose nuestro cultivo en un
verde claro de ah en adelante se fue notando que el color iba en
aumento hasta llegar a un verde oscuro.
Pgina 32
B.- REGISTRO DE DESARROLLO SISTEMATICO (diarias)

FECHA
HORA
TEMPERATURA
lunes
11/11/13
08.30 am.
23 C
11.30
24 C
martes
12/11/13
08.00 am.
23 C
11.30 am.
25 C
mircoles
13/11/13
08.30 am.
23 C
12.30 pm.
25 C
jueves
14/11/13
08.30 am.
23 C
12.00 m.
25 C
Pgina 33
viernes
15/11/13
08.30 am.
12.00 m
23 C
25 C
lunes
18/11/13
08.30 am.
25 C
10.55 am.
26 C
5.4.- SEGUNDA MASIFICACIN:

5.3.1. PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO A MASIFICAR
5.3.1.1. TRATAMIENTO DEL AGUA DE MAR:
Inicia con el uso del agua de mar anteriormente recolectada en el mar, en el
CEAPA se volver a hacer la entrega a los correspondientes encargados de esa
zona y luego empiecen con el siguiente proceso:
a.- FILTRACIN:
Pgina 34
Los encargados del CEAPA tuvieron que aplicar nuevamente el filtrado con el fin de que
no haya slidos, tal que todos los elementos slidos no deseados se vayan quedando en el
papel filtro de 50 a 1
y as poder manejar adecuadamente la contaminacin dndole
calidad al agua de mar. Una vez filtrada un alumno del grupo tiene que ir a recoger la
botella previa desinfeccin con agua de mar filtrada para luego sea calentada (tcnica del
calor hmedo).
b.- TRATAMIENTO TRMICO:
Una vez filtrada el agua de mar ser llevada a calor hmedo la cual se
eleva a una determinada temperatura hasta que sea calentada,
obteniendo
la eliminacin de: esporas, bacterias y todo tipo de
microorganismos que pongan en riesgo nuestro cultivo.

Hay que tener en cuenta que el tiempo de aplicacin del calor hmedo
debe ser breve ya que si esta hierve se formaran precipitados de color
blanquecino (bsicamente son sales), lo cual perjudicara el desarrollo
ptimo de nuestro cultivo.
5.3.1.2.- PREPARACIN Y ENRIQUECIMIENTO DEL MEDIO DE CULTIVO:

Para poder agregar los nutrientes (nitrato de sodio, vitaminas, fosfato de
sodio y trazas) cada una con
su respectivo volumen como ya se ha
detallado anteriormente, debemos hacer clculos para cada uno en

relacin con la cantidad de agua de mar que se necesita para llegar a los
tres litros obtenindolos de la diferencia entre los tres litros que se
necesitan y el inoculo.
En nuestra muestra obtuvimos 1350 de inoculo
y la diferencia: 1750 necesitamos de agua de mar. Cada nutriente esta

especificada en su respectiva fiola que dicha soluciones deben verterse
Pgina 35
1 mg por cada 1000 ml de agua de mar tratada, pero como estn en

forma de soluciones entonces decimos que 1 mg = 1ml.
NITRATO DE SODIO:
Clculos para determinar la cantidad de nitrato de sodio a utilizar en la
segunda masificacin:
1 mg
1000 ml
X mg
1750ml
X=1.75mg = 1.75 ml de Nitrato de sodio

FOSFATO DE SODIO:
Como
ya se sabe estos se emplean como aditivos alimentarios
principalmente estabilizantes, en algunas ocasiones empleado como

regulador de la acidez,
y tambin como agente quelante en algunos
minerales.
1 mg
1000 ml
Pgina 36
1750 ml
X=1.75 mg =1.75 ml de Fosfato de sodio.

TRAZAS:
1 mg
1000 ml
X mg
1750 ml
X=1.75mg =1.75 ml de trazas.

Para las trazas en la fiola estaba especificado que
dicha solucin
debera vestirse en 0.5 mg por cada 1000 ml de agua de mar tratada,

pero como esta (trazas) est en forma de solucin entonces decimos
que: 1mg = 1 ml, para que pueda ser tomado como medida volumtrica
en la pipeta; es por ello que nuestra muestra le hemos agregado 0.95 ml
de trazas para concluir el enriquecer de nuestra agua de mar.
La razn por la cual se agregan ms volmenes de fosfatos, nitratos y
vitaminas ya ha sido explicada en la primera preparacin del medio de
cultivo para la masificacin de la microalga.
VITAMINAS:
Clculos para determinar la cantidad de vitaminas que van a ser
utilizadas para nuestro cultivo
0.5 mg
1000 ml
Pgina 37
X mg
1750 ml
X=0.875mg =0.875 ml de vitaminas.
5.3.2. INCORPORACIN DEL INCULO:

En este caso debemos agregar el volumen total de nuestro cultivo
realizado como inoculo que es ms de 1100ml de microalga.
A.-Toma de muestra para su primera cuantificacin
Pgina 38
Una vez que se ha condicionado el sistema de cultivo para la microalga

y est en completo funcionamiento procedemos a tomar una muestra
para realizar la primera cuantificacin, para lo cual tenemos que
desconectar el sistema de aireacin de la lnea madre, y luego
extraemos nuestra muestra (4ml).
Sacaremos una sub-muestra la cual tendr un volumen de 2 ml, y lo

verteremos en la placa Petri, cabe recordar que la pipeta a utilizar para
esta medida debe estar totalmente esterilizada para evitar contaminar
la muestra y alterar los resultados.
De inmediato pipetearemos un volumen de 2 ml de formol (5%), el cual
le agregaremos a la placa Petri que contiene los 2 ml de nuestra
muestra
(determinamos
el
factor
de
disolucin);
hecho
esto
homogenizaremos con el propsito de tener una muestra fiable a

nuestro propsito (cuantificacin).
Luego de haber realizado esto usamos el pali globo para llevar parte de
la muestra homogenizada a la cmara de Neubaver, el pali globo y la
cmara deben estar limpia y bien desinfectado, para obtener resultados
Pgina 39
fiables. Una vez realizado esto cubrimos la muestra puesta en la cmara

de Neubaver con una laminilla cubre objeto.
Luego se lleva al microscopio para el conteo correspondiente;

localizamos las cuadriculas con el aumento (X4). Una vez ubicadas
las cuadriculas utilizamos el lente de (X10), para localizar la primera
cuadricula y empezamos a realizar el conteo correspondiente.
5.5.- CUANTIFICACION: RESULTADOS:
Pgina 40
PRIMER CONTEO: (MARTES 19/11/13)
36
50
72
55
75
79
60
70
74
84
81
85
75
68
58
62
X = (36+50+..+62)
14
=68.79celulas
Total de microalgas
T = X . 2 . 10 000
T = 68.79 x 2 x 10 000
SEGUNDO CONTEO: (JUEVES 21/11/13)

60
68
78
90
Pgina 41
X = (60+68+78+.+112)
14
=97.86clulas
Total de microalgas
T = X . 2 . 10 000
T = 97.86 x 2 x 10 000
TERCER CONTEO: (SBADO 23/11/13)

13
5
13
0
12
6
15
1
10
3
11
3
13
9
111
11
7
13
0
11
3
11
9
12
3
12
5
12
7
14
3
Pgina 42
X = (135+103+..+143) = 125.07clulas
14
Total de microalgas
T = X . 2 . 10 000
T = 125.07 x 2 x 10 000
T = 2.5x 106 clulas/mililitro
VOLUMEN FINAL: 2840 MILILITROS
5.3.4. ACONDICIONAMIENTO DEL SISTEMA DE AGITACIN

La agitacin es el acondicionamiento fsico ms importante que debe tener un
cultivo de microalgas ya que va a evitar la sedimentacin de la densidad de
microalgas, generar el movimiento del medio de cultivo y as proporcionar la buena
distribucin de los nutrientes disueltos en el agua, tambin funciona como
abastecedor de anhdrido carbnico (CO2) del aire por efecto del bombeo a travs
del burbujeo y brinda una mejor captacin de la energa de la luz. Todo esto va a
ser posible que se produzca una rpida reproduccin de las microalgas y por
consiguiente aumento en biomasa.
Pgina 43
El abastecimiento de aire para nuestro cultivo es proporcionado por una bomba de

aire la cual toma aire del medio ambiente para luego comprimirlo y distribuirlo por
toda la red. Es importante que la bomba cuente con un filtro para poder controlar
la contaminacin del cultivo. La distribucin del aire se realiza a travs de una
tubera principal de PBC la cual va a tener pequeas boquillas por donde se
conecta una manguera transparente de 2 metros y
, para
regular la cantidad de aire que entre al cultivo es necesario colocar en la conexin

una llave pequea de plstico. En la parte final de la manguera se coloca un pali
globo (
) el cual va a pasar por la tapa de la botella previamente
perforada colocndose hasta la parte ms profunda de la botella para as generar

una mayor agitacin del cultivo y obtener una mayor biomasa.
5.3.5. CONTROLES DE DESARROLLO DEL CULTIVO DE MICROALGAS:

A.- REGISTRO DE DESARROLLO GENERALES (Diarias):
- DETERMINACIN DE COLOR Y TONALIDAD:
El color que iba tomando nuestro cultivo a lo largo de los das fue uno de
los indicadores que nos permiti determinar que nuestro cultivo estaba
progresando, es decir que las microalgas (nannochloropsis sp) se
estaban reproduciendo, consumiendo los nutrientes aportados al agua
Pgina 44
de mar y que los acondicionamientos fsicos y qumicos que se haban

hecho estaban dentro de los rangos aceptables para el cultivo de dicha
microalga.
Fue as que a diario se tomaba nota del color, este iba en aumento es
decir aumentaba el tono del color, inicindose nuestro cultivo en un
verde claro de ah en adelante se fue notando que el color iba en
aumento hasta llegar a un verde caa oscuro.
B.- REGISTRO DE DESARROLLO SISTEMATICO (diarias)

FECHA
HORA
TEMPERATURA
lunes
18/11/13
08.30 am.
25 C
10.55 am.
26 C
martes
08.30 am.
24 C
Pgina 45
VI.-
19/11/13
11.35 am.
24 C
mircoles
20/11/13
08.30 am.
23 C
10.30 pm.
24 C
jueves
21/11/13
08.30 am.
25 C
11.35 am.
25 C
viernes
22/11/13
08.25 am.
11.30 m
25 C
25 C
sbado
23/11/13
08.50 am.
24 C
10.55 am.
25 C
REPRESENTACIN
GRFICA
DE
LA
CURVA
DE
CRECIMIENTO DEL CULTIVO.

Al final de todo el proceso de cultivo se obtuvo una grfica que es una curva que muestra el
resultado de 2 masificaciones del cultivo de la Nannochloropsis sp.
Pgina 46
MASIFICACIN
TIPO
FECHA
CELULAS / mL
A 1500 ml
1 cuantificacin (Siembra)
11/11/13
A 1500 ml
A 1500 m
A 1500 ml
2 cuantificacin
3 cuantificacin
4 cuantificacin
13/11/13
15/11/13
19/11/13
1.1
2.2
2.4
3.3
A 3000 ml
1 cuantificacin (Siembra)
19/11/13
1.3 x 106
A 3000 ml
A 3000 ml
2 cuantificacin
3 cuantificacin
21/11/13
23/11/13
1.9 x 106
2.5x 106
x
x
x
x
106
106
106
106
CURVA DE CRECIMIENTO
Pgina 47
VII.- DISCUSIONES
Se comprob que la agitacin es un factor determinante en el
cultivo de microalgas porque nos va a permitir que todas las
especies se encuentren en constante movimiento, es decir para
que no s sedimenten.
Las determinaciones generales y sistemticas es una actividad que
se debe realizar diariamente, para tener una mejor referencia es
Pgina 48
necesario realizar estas determinaciones dos veces x da. Esto nos

permitir verificar si hay aumento o disminucin de la poblacin.
La luz es un factor muy importante para que las microalgas

puedan realizar la fotosntesis, por lo tanto debe mantener una
cierta distancia que le permita a la microalga desarrollarse. Debe
de ser de color blanca o fra.
Todos los materiales deben ser lavados, desinfectados para que as
nuestro cultivo se desarrolle de la mejor manera.
Se debe de entregar con anticipacin el agua de mar no

contaminada a los encargados del CEAPA, para que ellos sean los
responsables de esterilizarla y as nosotros poder cultivar sin
ningn problema cualquier tipo de microalga.
VIII.- CONCLUSIONES
Se concluy que la tcnica de la masificacin de microalgas es de
gran importancia, que tiene por objetivo principal obtener la
densidad
volumen
determinado
de
la
microalga
(Nannocholoropsis sp.)en un determinado tiempo, y que va a

servir de alimento para los cultivos de apoyo y cultivos principales.
Pgina 49
Se
establecieron
condiciones
adecuadas
para
el
cultivo
de
microalgas.
Se aprendi a manejar la cmara de NeuBauer que sirve para

realizar
el
conteo
de
microalgas
como
una
determinacin
sistemtica.
IX.- BIBLIOGRAFIA:
http://en.wikipedia.org/wiki/Nannochloropsis
http://www.acuinuga.com/00_plugins/docs.php?id=572.
http://mznbiotech.com/nannochloropsis-sp
Pgina 50
http://gaceta.cicese.mx/print.php?topico=secciones&ejemplar=152&sid=&id=2273
http://centrodeartigos.com/articulos-de-todos-los-temas/article_39981.html
Pgina 51

Cultivo de Una Microalga, Mediante La Tecnica de La Masificación

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Cultivo de Una Microalga, Mediante La Tecnica de La Masificación

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Cultivo de Una Microalga, Mediante La Tecnica de La Masificación

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Cultivo de fitoplancton, zooplancton y macroalgas

AO DE LA INVERSION PARA EL DESARROLLO RURAL Y

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

Cultivo de fitoplancton, zooplancton y macroalgas

FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA