Manual de Quimica Clinica
Manual de Quimica Clinica
Manual de Quimica Clinica
ELABORADO POR:
LABORATORIO CLINICO
ACIDO URICO
1. Metodo
Análisis enzimático colorimétrico por ácido urico con factor aclarante de lípidos
(LCF) (PAP)
2. Fundamento
Determinación del Acido Urico por la reacción con la uricasa. El peróxido de
hidrógeno formado reacciona por la acción catalítica de la peroxidasa con ácido
3,5-dicloro-2-hydroxybenzenesulfónico (DCHBS) y 4-aminofenazona (PAP) para
producir un complejo rojo-violeta de quinonemina como indicador.
3. Muestras
Suero o plasma con heparina o EDTA, orina.
Diluir la orina 1 + 10 con agua destilada.
Antes:
• Explicar el procedimiento al paciente.
• Llevar estrictamente los siguientes puntos.
• Suspender la medicación de drogas como: alopurinol, salicilatos, fenilbutazona,
calmantes o analgésicos, ácido ascórbico (vitamina C), buscapina, diuréticos
de la trazida, tioles libres, purinas metiladas, ácido homogentístico y altas
cantidades de glucosa.
• Dos días antes del examen evitar ejercicios violentos.
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24 horas antes del examen, el paciente debe abstenerse de ingerir carnes rojas,
mariscos y frijoles ya que contienen altos contenidos de purina.
48 horas antes de la venoclisis suspender el consumo de alcohol.
Durante:
Recoger 5 - 7 ml de sangre venosa en un tubo de tapón rojo.
• Retomar nuevamente la ingesta de cualquier medicamento que pueda alterar
los resultados.
Después:
• Aplicar presión en el sitio de punción.
Nota
Las muestras lipémicas generalmente generan turbidez en la mezcla del reactivo
con la muestra, lo que lleva a resultados elevados falsos.
El LCF aclara completamente la turbidez causada por muestras lipémicas.
Los valores en sangre total varían con la proporción de células en la sangre
debido a que las células también contienen muchas más sustancias que interfieren
en la reacción.
5. Condición de la muestra
La sangre debe recogerse en tubos limpios, libres de metales pesados, ya que
estos y los cianuros son inhibidores enzimáticos.
La prueba no se ve influenciada por valores hasta 100mg/dl de hemoglobina o por
valores de bilirrubina hasta 20mg/dl.
La estabilidad de la muestra es:
Temperatura ambiente 3 días
Refrigerado 2 - 8°C por 5 días.
Congelado 20°C, seis meses.
En orina de 24 horas con preservativos y a temperatura ambiente → 2 días.
6. Metodo de determinacion
Longitud de onda: 520nm, Hg 546 nm.
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20 - 25 °C ó 37°C
Medir: frente a blanco de reactivos
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7. Tecnica
Pipetear:
8. Valores de referencia
Hombres: 3.7 - 7.0 mg/dl.
Mujeres: 2.4 - 5.7 mg/dl.
9. Interferentes de la prueba
El ácido ascórbico en concentraciones terapéuticas no interfiere en la prueba, pero
en cantidades excesivas puede dar resultados elevados.
Sustancias químicas con efecto antiuricosúrico.
Acido etacrínico, furosemida, diuréticos de la benzotiacida.
Sustancias que inhiben competitivamente la secreción tubular del urato.
El p- aminohipurato, lactato, acetoacetato y B. hidroxibutírico.
Por otra parte, ciertos fármacos como los salicilatos, fenilbutazona entre otros,
inhiben la secreción de ácido úrico a dosis bajas, pero causan un efecto urosúrico
intenso a dosis altas, debido a que estos fármacos pueden inhibir reabsorción
tubular a niveles altos.
Notas
El etanol altera el metabolismo del ácido úrico aumentando la producción de urato
y por la supresión de la excreción renal de ácido úrico. Esta última es el resultado
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del exceso de lactato producido por la oxidación del etanol a acetaldehído, que
inhibe competitivamente la secreción tubular renal del urato.
Hiperuricemia.
Precipitación de urato monosódico en forma de depósitos (tofos) por todo el
cuerpo, excepto por el SNC, aunque presenta predilecciones por articulaciones,
tejido subcutáneo y bolsas sinoviales.
Ataques clínicos recidivantes de artritis.
Nefropatía y a menudo nefrolitiasis.
ALBUMINA
1. Metodo
Prueba fotometrica colorimetrica para Albumina
Metodo BCG
2. Fundamento.
El verde de bromocresol forma con la albumina en buffer de citrata un complejo
coloreado. La absorbancia de este complejo es directamente proporcional a la
concentracion de albumina en la muestra.
3. Muestras
Suero ó plasma con EDTA ó heparina.
Estable 1 mes a 2-8 grados y 1 semana entre 15 y 25 grados
5. Condiciones de la muestra
No usar plasma heparinizado porque se puede alterar el valor.
Patron de albúmina y el RGT son estables hasta la fecha de vencimiento cuando
se almacenan de 2 a 25 grados centigrados, despues de abierto debe evitarse la
contaminación.
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6. Metodo de determinacion
Longitud de onda: Hg 546 nm, 578 nm
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20 a 25
Medición: frente a blanco de reactivo por serie.
7. Tecnica
Pipetear en tubos de ensayo:
blanco patrón muestra
Patrón albúmina ------ 10 ul ----
Muestra ----- ---- 10 ul
Reactivo 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml
ABS muestra
____________ X 4 g/dl albúmina
ABS patrón
8. Valores normales
3.8 – 5.1 g/dl en hombres y mujeres.
9. Interferencias
La prueba no es influenciada por valores de Bilirrubina hasta 20mg/d.
Hemoglobina (1 g/L).
La reacción de la albúmina con el verde de bromocresol es inmediata.
Otras proteinas reaccionan lentamente, por lo que es conveniente no demorar la
lectura.
Otras:
Trastornos pulmonares.
Anemia persistente
Neoplasia nefrosis lipoidea.
Edemas carenciales.
La manifestacion clínica mas llamativa es el edema.
MICROALBUMINURIA
1. Metodo
Prueba de turbidimetría para la cuantificación de microalbúmina en orina humana.
2. Fundamento
Las partículas de látex con anticuerpos anti-albúmina humana, son aglutinadas por
uALB presente en la muestra del paciente. El proceso de aglutinación provoca un
cambio de absorbancia proporcional a la concentración de uALB de la muestra, y
por comparación conocida se puede determinar el contenido de uALB en la
muestra ensayada.
3. Muestra
Orina fresca.
4. Condiciones de la muestra
La orina debe ser lo más fresca posible, y se debe ajustar su pH a 7.0 con
NaOH/HCl 1 mol/L.
Es estable por 7 días cuando se le añade azida sódica para prevenir posibles
contaminaciones.
5. Metodo de determinacion
Longitud de onda: 540 nm (530-550 nm)
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 37°C
Medición: frente a agua destilada
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6. Tecnica
Mezclar y leer la absorbancia frente a agua destilada y leer a los dor minutos
después y se multiplica el valor por la concentración del calibrador.
7. Valores de referencia
Hasta 15 mg/L
8. Interferencias
No interfieren valores de Glucosa 2 g/L, hemoglobina 10g/L, creatinina 3 g/L.
La urea > de 1g/L y bilirrubina > 10mg/dl interfieren.
Correlacion diagnostica
Se define la microalbúmina como la tasa de excresión de albúmina en orina entre
20 y 200 ug/min, concentración que, siendo superior al valor normal, esta aun por
debajo de la concentración considerada como una proteinuria convencional.
La microalbuminuria es un marcador del riesgo de la nefropatía diabética, así
como de alteraciones cardiovasculares en pacientes que sufren diabetes mellitus
insulinodependientes o bien insulina no-dependiente.
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Generalidades
La bilis se forma en el hígado y presenta muchos componentes, incluyendo sales
biliares, fosfolípidos, colesterol, bicarbonato, agua y bilirrubina.
El metabolismo de la bilirrubina proviene en un 80% de la descomposición de los
hematíes envejecidos en el sistema retículo endotelial (bazo, hígado y medula ósea).
Un 5% de los citocromos citoplasmáticos y mitocondriales hepáticos; y el otro
porcentaje de los eritrocitos defectuosos destruidos en la medula ósea antes de ser
liberados.
1. Metodo
Método modificado de Jendrassik/Gróf.
2. Fundamento
La Bilirrubina reacciona con al ácido sulfanílico diazotado (DSA) formando un color
rojo. La absorbancia de este color a 546 nm es directamente proporcional a la
concentración de bilirrubina en la muestra. Los glucoronidos de la bilirrubina solubles
en agua reaccionan directamente con DSA mientras la bilirrubina indirecta conjugada
con albumina reacciona sólo en la presencia de un acelerador.
Bilirrubina total = bilirrubina directa + bilirrubina indirecta.
3. Muestra
Suero o Plasma con heparina.
Evitar muestras hemolizadas, y deben estar protegidas de la luz.
La muestra es estable por 3 días a una temperatura de 2 a 8 grados, alajada de la
luz.
5. Condiciones de la muestra
No agitar el tubo, ya que en caso contrario los resultados de la prueba podrían ser
inexactos.
Proteger la muestra de sangre de la luz brillante.
Mencionar en el volante del laboratorio cualquier fármaco que pudiera afectar los
resultados de la prueba.
Debe procesarse la muestra el mismo día.
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6. Metodo de determinacion
7. Tecnica
Bilirrubina total
Blanco Muestra
Reactivo TBR 1 ml 1 ml
Reactivo TNR .... 1 gota
Bilirrubina directa
Pipetear en tubos oscuros o protegidos de la luz:
Blanco Muestra
Reactivo DBR 1 ml 1 ml
Reactivo DNR .... 1 gota
8. Valores de referencia
Bilirrubina total: 0.1 - 1.0 mg/dl o 5.1 - 17.0 umol/l.
Bilirrubina indirecta: 0.2 - 0.8 mg/dl o 3.4 - 12.0 umol/l.
Bilirrubina directa: 0.1 - 0.3 mg/dl o 1.7 - 5.1 umol/l.
9. Interferentes
La exposición prolongada (más de 1 hora) a la luz solar directa o artificial puede
causar disminución de la bilirrubina en un 50%.
La hemólisis de la sangre y la lipemia pueden producir resultados erróneos.
Entre los fármacos que pueden causar niveles aumentados de bilirrubina total se
incluyen: Esteroides, anabolizantes, antibióticos (Eritromicina), antipalúdicos, ácido
ascórbico, diuréticos, morfina, anticonceptivos orales, salicilatos y vitamina A, etc.
Entre los fármacos que reducen los niveles de bilirrubina total se incluyen
barbitúricos, cafeína, penicilinas y salicilatos (dosis elevadas).
10. Estabilidad
No es muy estable, se altera rápidamente con la luz, por lo tanto, debe procesarce la
muestra lo más rápido posible.
El almacenamiento no es conveniente, si se necesita debe refrigerarse por pocos
días (3 días a 2-8 °C) protegida de la luz.
11. Linealidad
La prueba es lineal hasta 25 mg/dl, si la concentración es mayor de 25 mg/dl, diluir la
muestra 1 + 4 con solución fisiológica y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por
5.
Correlacion diagnostica
La determinación de bilirrubina total es útil para evaluar la extensión y progreso de la
ictericia en problemas hepatocelulares, obstructivos y prehepáticos.
La ictericia es una coloración amarillenta de los tejidos corporales (piel, membranas
mucosas y escleróticas), causada por niveles sanguíneos de bilirrubina
anormalmente altos; el color amarillo se aprecia cuando la bilirrubina serica total
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Causas:
Metabolismo aumentado del Heme: esferocitosis hereditaria, enfermedad
drepanocitica, policitemia, etc.
Eritropoyesis ineficaz acelerada: Anemia megaloblástica, talasemia intoxicación por
plomo.
Destrucción prematura de eritrocitos defectuosos.
Hiperbilirrubinemia por derivación.
Cirrosis.
Insuficiencia cardiaca congestiva.
Síndrome de Gilbert
Recién Nacidos.
Síndrome de Cliger - Najjan I y II.
Ictericia hepatocelular
Hay aumento mayor de la bilirrubina directa y puede haber aumentos menores de B.
indirecta o estar normal y la bilirrubina total aumentada. En general hay bilirrubinuria.
Causas:
Shock por hipoxia.
Hepatitis viral, alcohol y tóxica.
Cirrosis por alcohol.
Causas:
Obstrucción intrahepática: debido a obstrucción por fármacos, hormonas
esteroideas, hepatitis aguda, virica o alcohólica, cirrosis biliar primaria, atresia de
conductos, tumores metastásicos etc.
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Nota
La bilirrubina directa diferencia la ictericia Pre-hepática de la hepatocelular y
obstructiva y la bilirrubina indirecta hace la diferenciación entre la hepatocelular
obstructiva y las Pre-hepáticas.
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Generalidades de lipidos
Los lípidos constituyen la principal reserva energética de los seres vivos y también
forman parte de la membrana celular y regulan la actividad de la célula y tejidos.
Los lípidos totales están compuestos por: colesterol libre, esteres de colesterol,
triglicéridos, fosfolípidos y ácidos grasos libres. Todos estos lípidos con excepción
de los ácidos grasos que están ligados a la albúmina, se encuentran en el plasma
como lipoproteínas.
En el estudio del perfil lipídico mínimo se deben tener en cuenta los siguientes
parámetros:
El aspecto del suero no indica que el paciente este normal, porque valores de
colesterol aumentados no producen ninguna turbidez.
El colesterol total del cuerpo: comprende el colesterol libre y esterificado. 70%
esterificado, 30% libre. Transportado principalmente por LDL, HDL, IDL y VLDL.
Triglicéridos
HDL colesterol
VLDL colesterol: se evalúa mediante la formula trigliceridos/5, cuando estos son <
400 mg/ml.
LDL colesterol: se determina con la formula de Friedewald
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COLESTEROL TOTAL
1. Metodo
Prueba enzimática colorimétrica para colesterol con factor aclarante de lípidos
(LCF) CHOD-PAP
2. Fundamento
El colesterol se determina después de la hidrólisis enzimática y la oxidación. El
indicador es la quinonemina formada por el peróxido de hidrógeno y 4-
aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa.
3. Muestra
Suero o plasma con heparina o EDTA.
5. Condiciones de la muestra
La muestra ideal es suero ó plasma heparinizado ó con EDTA.
Extraer 5-10 ml de sangre en un tubo seco.
Anotar cualquier fármaco que pueda modificar los valores de Colesterol.
Separar el suero de los glóbulos rojos en la media hora siguiente a la extracción,
para evitar la redistribución del Colesterol entre las diversas lipoproteínas.
6. Metodo de determinacion
Longitud de onda 500 nm, 546 nm
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 25 ó 37 grados C.
Medición: frente a blanco de reactivo.
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7. Tecnica
Pipetear
8. Valores de referencia
Varían con la edad y el laboratorio.
9. Interferencias
La Ovariectomía aumenta los niveles de Colesterol.
Hay fármacos que elevan los niveles de Colesterol como:
Hormona adrenocorticotrópica, Esteroides anabólicos, Corticosteroides,
bloqueadores beta-adrenérgicos, Adrenalina, Anticonceptivos orales, sulfamidas,
Diuréticos tiacídicos, Vitamina D.
Hay otros que disminuyen los valores como:
Andrógenos, Allopurinol, Quelantes de las sales biliares, Captopril, Niaciana,
Nitratos, Colchicina, Colestipol, Eritromicina, Isoniacida, Liotironina (Cytomel),
Lovastatina (Mevacor), Neomicina (oral).
Notas
El test no se afecta con valores de hemoglobina inferiores a 200 mg/dl, ni de
Bilirrubina menor a 5 mg/dl.
Evitar el contacto con los reactivos ya que son muy corrosivos.
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9. Linealidad
El test es lineal hasta una concentración de Colesterol de 750 mg/dl (19.3 mmol/l).
Para concentraciones mayores diluir la muestra con solución salina al (0.9%), 1 +
2 y repetir la determinación, multiplicar el resultado por 3.
Correlacion diagnostica
Niveles sospechosos: 220 mg/dl ó 5.7 mmol/l
Niveles elevados: 260 mg/dl ó 6.7 mmol/l
Niveles superiores: 300 mg/dl Necesitan tratamiento.
Resultados anormales
COLESTEROL HDL
1. Metodo
Colesterol precipitnte.
2. Fundamento
3. Muestra
Suero o plasma con anticoagulante EDTA o heparina.
5. Condiciones de la muestra
La muestra debe separarse del coagulo dentro de las dos horas de la extracción y
conservarse a 4ºC a menos que se analice de inmediato.
HDL es estable en la muestra de suero durante 7 días a 4ºC o durante 4 meses a
–20ºC.
6. Metodo de determinacion
Longitud de onda 500 nm, 546 nm
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 25 ó 37 grados C.
Medición: frente a blanco de reactivo
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7. Tecnica
A. Precipitación
B. Determinación
Mezclar, incubar todos los tubos a temperatura ambiente por 10 minutos ó a 37ºC
por 5 minutos.
Leer la absorbancia de la muestra y el estándar frente al blanco de reactivo antes
de una hora.
Notas
El sobrenadante debe ser claro. En las muestras con un contenido de triglicéridos
altos se pueden presentar precipitaciones incompletas de las lipoproteínas o
flotación por parte de las mismas sobre él liquido, observando un sobrenadante
turbio, en ese caso, se hace una dilución 1: 1 con solución cloruro de sodio al
0.9% y se repite la precipitación de la muesta diluida. El resultado se multiplica por
dos.
8. Valores de referencia
Mujeres > 45mg/dl
Hombres > 35mg/dl
9. Correlacion diagnostica
La HDL contrarresta la acción nociva que puede tener la LDL sobre nuestro
organismo, al evitar la arteriosclerosis excesiva porque remueve y elimina a través
de la bilis cantidades considerables de LDL en forma de ácidos biliares y
esteroides neutros.
Resultados Anormales.
TRIGLICERIDOS
1. Metodo
Prueba enzimática colorimétrica para triglicéridos con factor aclarante de lípidos.
GPO-PAP
2. Fundamento
Los triglicéridos son determinados después de hidrólisis enzimática con lipasa. El
indicador es Quinineimina formada a partir de peróxido de hidrógeno, 4-
aminoantipirina y 4-chlorofenol bajo la influencia catalítica de peroxidasa.
3. Muestra
Suero o plasma heparinizado o palsma con EDTA
5. Condiciones de la muestra
La muestra ideal es suero ó plasma heparinizado ó con EDTA.
Extraer 5-10 ml de sangre en tubo seco y separar el suero de los glóbulos rojos en
la media hora siguiente a la extracción, para evitar la redistribución de los
Triglicéridos entre las diferentes lipoproteínas.
Notas
La lipemia, la hemólisis hasta 10 mg/dl ó 170 mmol/l, metabólitos y una serie de
fármacos de uso común NO interfieren con el método. Los volúmenes de la
reacción sugeridos se pueden modificar sin ningún cambio en los cálculos.
6. Metodo de determinacion
Longitud de onda: 500 nm, 546 nm
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20, 25 ó 37 grados C
Medición: frente a blanco de reactivo
7. Tecnica
Pipetear:
Mezclar, e incubar por 10 minutos a 25ºC o por 5 minutos a 37 grados C, leer con
Blanco de reactivo. Estabilidad de la reacción 1 hora.
Linealidad
El método es lineal hasta 1000 mg/dl (11.3 mmol/l) de Triglicéridos. Para
concentración superior diluir la muestra 1+5, con solución salina al 0.9%, repetir la
determinación y multiplicar el resultado por 6.
8. Valores de referencia
9. Interferencias
Elevando los valores
Colestiramina, Estrógenos y anticonceptivos orales.
Disminuyendo los valores
Acido ascórbico, Asparraginasa, Clofibrato y colestipol.
Nota:
Los trigliceridos elevados afectan el cálculo de las LDL, por lo tanto cuando esto
sucede las LDL no se deben reportar.
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CREATININA
Generalidades
Sus aumentos suelen ser proporcionales con respecto a los de la urea, aun
cuando en general son más tardíos. Tiene particular interés diagnostico y
pronóstico en los siguientes casos:
1. Metodo
Reacción de Jaffe
Prueba fotométrica colorimértica para mediciones de punto final desproteinización.
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2. Fundamento
La creatinina en solución alcalina forma un complejo coloreado rojo-naranja con
ácido picrico. La absorbancia de este complejo es directamente proporcional a la
creatinina en la muestra.
3. Muestra
Suero o plasma heparinizado u orina
5. Condiciones de la muestra
La muestra de suero para creatinina es inestable a temperatura ambiente,
refrigerada de 2 – 4 ºC por 24 horas. Congelada a –20 ºC es estable por 6 meses
La creatinina puede ser determinada en cualquier líquido biológico, pero las
muestras mas usadas son suero, plasma y orina.
6. Metodo de determinacion
7. Tecnica
Estándar Muestra
Solución Trabajo 500λ 500λ
Estándar 50λ ----
Suero ---- 50λ
8. Valores de referencia
Estos valores están influenciados por el sexo (siendo menor en la mujer), masa
muscular del individuo.
La velocidad de producción.
La velocidad de filtración.
Notas
La especificidad de la reacción depende del pH, temperatura y tiempo.
Los volúmenes de reacción podrán aumentarse o disminuirse del fotómetro, sin
que se alteren los resultados finales.
El ácido pícrico es tóxico. Evite la inhalación, ingestión y contacto con la piel, lavar
enseguida con polietilenglicol 400, con abundante agua.
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DEPURACION DE CREATININA
Generalidades
Es un método útil para seguir el progreso de una enfermedad renal evolutiva,
porque nos da información de cómo esta la filtración glomerular. La relación entre
la concentración de una sustancia en orina y sangre es el mejor índice de función
renal, que la concentración de dicha sustancia aislada en sangre o en orina.
1. Muestra
Técnica para el suero, el mismo procedimiento de creatinina en suero.
Técnica para la orina: Diluir 1:100 con Solución Salina 0.9%.
Valores de referencia:
Para la recolección de la orina el paciente debe fijar una hora cero. Descartar
la orina de esa hora y a partir de entonces recoger todo el volumen de orina,
inclusive la muestra del tiempo fijado para la recolección.
Marcar en el frasco la hora de iniciación de la recolección.
Guardar refrigerada y en frasco bien tapado.
El paciente debe abstenerse de ingerir carne, té y café durante las 24 horas
anteriores a la recolección.
Debe seguir tomando agua, para asegurar un volumen urinario de 1 ml por
minuto cuando menos.
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3. Condiciones de la muestra
Muestra de suero libre de hemólisis fuerte y de ictericia (ya que una ligera
hemólisis no afecta la determinación).
La muestra de orina debe refrigerarse o agregarse un inhibidor bacteriano. La
concentración de creatinina debe determinarse antes de las 24 horas de recogida
la muestra, ya que los gérmenes producen variación en el pH promoviéndose así
la conversión de creatinina en creatina, la cual no puede medirse por la reacción
de Jaffé, además producen creatininasas que destruyen la creatinina.
4. Metodo de determinacion
Longitud de onda: 546 nm (500-550 nm)
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 25° C
Medición: frente a blanco de reactivo
5. Tecnica
Pipetear:
Estándar Muestra
Solución Trabajo 500λ 500λ
Estándar 50λ ----
Orina diluida ---- 50λ
Dilución de la orina *
Hacer una dilución de la orina de 1: 50. 10 ml de orina + 490 ml de agua
destilada; el resultado se multiplica por 50.
Calculo
Creatinina en Orina* x Volumen (ml)
________________ _________
Creatinina en suero 1140 (Constante)
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6. Valores de referencia
7. Interferencias
Notas
8. Correlacion diagnostica
GLICEMIA
Generalidades
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
5. Condiciones de la muestra
6. Metodo de determinacion
7. Tecnica
Pipetear:
Blanco Patron Muestra
BLANCO ---- ---- ----
PATRON ---- 10λ ----
MUESTRA ---- ---- 10λ
RVO. COLOR 1000λ 1000λ 1000λ
8. Valores de referencia
9. Carga de glucosa
Niños: 1.75 gr de dextrosa por kilogra la prueba tamiz consiste en administrar la
carga de dextrosa y tomar una muestra después de una hora post-ingesta. Para
la P.O.T.G, 100 gr. de dextrosa en 300 ml.de agua.
Nota
El tiempo máximo para ingerir la carga de glucosa oral es de 5 minutos, a partir
de los cuales se empezara tomar los tiempos para la toma de las muestras asi:
Gestantes 1-2 y 3 horas, no Gestantes 2 horas postcarga.
Utilizar métodos de laboratorio previamente estandarizados y sueros control
Basal >= a 140 mg/dl en dos ocasiones consecutivas sea en adultos o en niños.
Los criterios diagnósticos por P.T.O.G. solo son válidos para individuos sanos que
no presentan infecciones, enfermedades cardiovasculares o vasculares
Cerebrales agudas, enfermedades endocrinas que deterioren la tolerancia a la
glucosa o enfermedades hepáticas, renales o del S.N.C., tampoco pacientes
tratados con fármacos que alteren la prueba de tolerancia oral a la glucosa
(tiazidas, glucocorticoides, ac. Nicotinico, anticonceptivos orales que contengan
estrógenos sintéticos).
En la P.T.O.G., por lo menos dos valores deben ser > = 200 mg/dl.
Adultos: dos horas y en cualquier otro momento de la P.T.O.G...
Niños: asintomaticos deben ser mas estricto en diagnóstico por P.T.O.G.,(dado el
mayor riesgo de un exceso de diagnóstico de DM).
Valores normales
3. Dos horas poscarga durante una prueba de tolerancia oral a la glucosa (PTOG)
mayor o igual a 200 mg/dl. Para ello se utiliza 75 gramos de glucosa anhidra
disueltos en 300 cc de agua.
Se han establecido tres criterios para el diagnostico de diabetes, cada uno de ellos
debe ser confirmado con una prueba posterior. Por ejemplo, síntomas con una
glicemia al azar > de 200 mg/dl, debe ser confirmado subsecuentemente por una
glicemia en ayunas ≥ a 126 mg/dl, una glicemia 2 horas postcarga ≥ a 200 mg/dl, o
una glicemia al azar ≥ a 200 mg/dl.
Diagnostico de hipoglicemia
Depende si el paciente presenta manifestaciones del sistema nervioso central
(S.N.C) inexplicadas o sintomas adrenergicos inexplicables.
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HOSPITAL SAN RAFAEL
YOLOMBÓ - ANTIOQUIA Versión: 1.0
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UREA
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
24 horas antes de tomar la muestra, el paciente debe llevar una dieta pobre en
proteínas y 12 horas de ayuno total.
5. Condiciones de la muestra
Por acción bacteriana se puede perder la urea, por lo tanto debe analizarse pocas
horas despúes de recogida o conservarse en refrigeración.
Sueros lipémicos causan turbidez en la solución final.
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6. Metodo de determinación
7. Tecnica
Pipetear
8. Valores de referencia
El método es lineal hasta 200 mg/dl (33, 3 mmo1/1) de urea para suero o plasma y
200 g/L (330 mmol/L) para la orina. Para concentraciones más altas mezclar un
volumen de la muestra con un volumen igual de agua destilada, repetir el ensayo y
multiplicar el resultado por dos.
9. Interferencias
Cuando existe uremia los síntomas incluyen letargo, anorexia, náusea y vómito,
deterioro mental y confusión, sacudidas musculares, convulsiones y coma. La
anemia es un carácter prominente en la uremia crónica porque está deprimida la
eritropoyesis. El nitrógeno uréico de la sangre, el nitrógeno no proteico y la
creatinina están elevados y los niveles sanguíneos de estas sustancias se
emplean como índice de la gravedad de la uremia.
Los valores de la urea pueden disminuirse en alteraciones hereditarias de la
síntesis de urea o cuando existe una ingesta inadecuada de proteínas, o una
enfermedad hepática grave.
El nitrogeno ureico se saca de dividir el valor de la urea por un factor que es 2.14.
PROTEINAS TOTALES
Generalidades.
La cifra normal de las proteinas totales del suero está comprendida entre 6 y 8 mg/
ml encontrándose de 1 gramo menos en los pacientes que guardan cama por mas
de dos semanas las proteínas totales están integradas por la fracción albúmina y
bla fraccion globulina. La priemera regula la presión osmótica coloidal de la
sangre, aporta la nutricion celular, interviene en el equilibrio ácido-básico,
transporta los lipidos originando los compuesos que se denominan, lipo-proteínas
y sirve de medio de transporte a multitud de elemntos como esteroides, hierro,
cobre, vitaminas liposolubles. La fracción globulina se sintetiza especialmente en
las células plasmáticas y tienen como misión principal fabricar anticuerpos, de
donde se origianan el nombre de inmunoglobulinas.
1. Metodo
Prueba colorimétrica fotométrica para proteínas totales (Biuret)
2. Fundamento
Los iones cúpricos con las proteínas y peptidas en solución alcalina forman un
complejo púrpura. La absorbancia de este complejo es proporcional a la
concentración de proteínas en la muestra.
3. Muestras.
Suero y plasma heparinizado. Estable 8 dias a 2-8 C.
Los anticoagulantes quelantes interfieren.
6. Tecnica
ABS Muestra
____________ X 80= mg/dL proteína
ABS Patrón
7. Valores de referencia
Suero: 65 – 80 g/L
Plasma: 68 –83 g/L
8. Interferentes
Generalidades.
1. Metodo
2. Fundamento.
3. Muestras.
4. Condiciones de la muestra
6. Tecnica
Calculos:
Proteinas de 24 horas: Muestra
Patron x volumen x 100
7. Valores de referencia
8. Interferencias
Generalidades
1. Metodo
Prueba liquiUV
2. Fundamento
3. Muestra
5. Condiciones de la muestra
Sueros que pueden ser recolectados con EDTA o Heparina, se debe tener en
cuenta que los sueros hemolisados pueden alterar el resultado.
Se debe tener un ayuno mínimo de 8 horas. Se recomienda analizarlas después
dé una hora de tomada la muestra
6. Metodo de determinacion
8. Valores de referencia
25 ºC 30 ºC 37 ºC
Hombres hasta 18 U/L 25 U/L 37 U/L
Mujeres hasta 15 U/L 21 U/L 31 U/L
9. Interferencias
Linealidad
Los valores aumentados de esta enzima suceden cuando hay muerte en las
células del miocardio (infarto al miocardio), en las próximas 6-12h después de la
oclusión de una arteria coronaria; el grado del aumento es proporcional a la
magnitud del daño, osea que una lesión grande puede hacer elevar los valores
>200 unidades, los valores máximos se ven en al cabo de 48h y recupera sus
valores normales de 3-5 días.
Las cifras de GOT también se ven aumentadas en lesiones agudas de las células
hepáticas como en las hepatitis virales y lesiones por intoxicación con fármacos o
tóxicos como tetracloruro de carbono. Los aumentos moderados se observan en
las etapas finales de la cirrosis, ictericias obstructivas.
ALANINA AMINOTRANSFERASA (GPT)
1. Metodo
2. Fundamento
Es un método cinético para la determinación de la actividad de la GPT de acuerdo
con las recomendaciones del panel de expertos de la IFCC sin activación por
piridoxalfosfato.
Los métodos para la medición de GPT son muy semejantes a los de la GOT; el
ácido pirúvico producido por la enzima a partir de alanina y ácido alfacetoglutarato
se transforma en ácido láctico por efecto de la deshidrogenasa láctica. La
transformación simultánea de NADH en NAD va seguida por una disminución de la
absorbancia a 340nm.
3. Muestra
5. Condiciones de la muestra
Sueros que pueden ser recolectados con EDTA o Heparina, se debe tener en
cuenta que los sueros hemolisados pueden alterar el resultado.
Se debe tener un ayuno mínimo de 8 horas. Se recomienda analizarlas después
dé una hora de tomada la muestra
6. Metodo de determinacion
Linealidad
8. Valores de referencia
Precauciones
El Buffer/sustrato esta compuesto con sodio de azida 0.095% evitar contacto con
mucosas y piel.
9. Interferencias
Nota
Gran parte del éxito de obtener buenos resultados en este tipo de determinaciones
enzimáticas esta en el correcto manejo del tiempo a la hora de la lectura (pues las
enzimas actuaran hasta consumir el substrato), un buen trabajo organizado, un
buen lavado del material y no dejar de lado el uso de los controles.
AMILASA
GENERALIDADES
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
No requiere ayuno.
Evitar la utilización del torniquete por más de 30 segundos.
5. Condiciones de la muestra
6. Metodo de determinación
7. Tecnica
8. Valores de referencia
10. Interferencias
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
Suero o plasma
Es estable al menos por 7 días a una temperatura de 2 a 8 °C.
5. Condiciones de la muestra
Puede trabajarse con plasma, pero este no debe contener floruros ni oxalatos.
La utilización de EDTA inhibe la reacción.
El mejor anticoagulante es la heparina, los valores obtenidos en plasma y suero
siempre son iguales
6. Metodo de determinacion
8. Valores de referencia
9. Interferencias
1. Metodo
2. Fundamento
El calcio en medio neutro, forma un complejo de color azul con arsenazo III (ácido
1,8-dihidroxi-3,6-disulfo-2,7-naftalenen-bis (azo)-dibenzenarsónico).
La intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad de calcio
existente en la muestra.
3. Muestra
Suero o plasma
No requiere ayuno.
5. Condiciones de la muestra
6. Metodo de determinacion
8. Valores de referencia
Suero o plasma:
Adultos 8.5 – 10.5 mg/dl 2.1 –2.6 mmol/l
Niños 10 - 12 mg/dl 2.5 – 3 mmol/l
Recién nacidos 8.0 – 13 mg/dl 2.0 – 3.2 mmol/l
Orina:
Adultos 50 – 300 mg/24h
Niños 80 –160 mg/24h
9. Interferencias
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
No requiere ayuno
5. Condiciones de la muestra
6. Metodo de determinacion
7. Tecnica
8. Valores de referencia
1.6 – 2. 5 mg/dl
9. Correlacion diagnostica
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
Suero.
No requiere ayuno.
5. Condiciones de la muestra
6. Metodo de determinacion
7. Tecnica
8. Valores de referencia
9. Interferencias
Generalidades.
Normalmente los músculos estriados tienen una alta concentración, y muy poca se
encuentra en el miocardio y el cerebro (CK).
En el infarto de miocardio sus unidades se elevan entre 3 y 6 horas, despúes de
iniciado. Tiene su máxima concentración entre las 24 y 48 horas, empezando a
descender despúes de dicho tiempo, lentamente, para retornar a la normalidad
entre 3 y 6 dias despúes.
1. Metodo
2. Fundamento
La cratina quinasa (CK) cataliza la fosforilación del ADP por el fosfato de creatina,
obteniéndose creatina y ATP. La concentración catalítica se determina, empleando
las reacciones acopladas de la hexoquinasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa,
apartir de la velocidad de formación del NADPH, medido a 340 nm.
Método estándar modificado de acuerdo con las recomendaciones del cómite
ECCLS.
3. Muestra
6. Metodo de determinacion
7. Tecnica
Calculos.
Considerando que el coeficiente de absorción molar del NADPH a 340 nm es
6300, se deducen las siguientes fórmulas para calcular la concentración catalítica:
9. Interferencias
La hemólisis
El valor cliníco está en una elevación manifiesta y su relación con el CK-MB y las
otras enzimas que se alteran en el infarto.
CREATINCINASA FRACCION MB
Generalidades.
Metodo
Fundamento
Muestra
Condiciones de la muestra
Metodo de determinacion
Tecnica
muestra 40 ul
Reactivo 1000 ul
Valores de referencia
25 °C 30°C 37°C
CK total
hombres >80 U/l >130 U/l >195 U/l
mujeres >70 U/l >110 U/l >170 U/l
CK-MB >10 U/l >16 U/l >25 U/l
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
5. Condiciones de la muestra
6. Metodo de determinacion
7. Tecnica
9. Interferencias
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
Suero o plasma
5. Condiciones de la muestra
6. Tecnica
7. Valores de referencia
Negativo
Positivo
8. Interferencia
1. Metodo
2. Fundamento
3. Muestra
Ayuno de 8 horas.
5. Condiciones de la muestra
6. Metodo de determinacion
Etapa de hemólisis
Reactivo lisante 500 ul Muestra 100 ul
Mezclar e incubar por 5 min 15°C ó 25°C
Determinación de HbA1
Pipetear 100 ul de hemolisado reactivo
Tapar a 1 cm aproximadamente
Mezclar por 5 min
Leer la absorbancia
Determinación de Hb total
Pipetear 20 ul de hemolisado 5 ml de agua destilada
Mezclar cuidadosamente
Leer la absorbancia
8. Valores de referencia
pacientes %HbA1
Metabolismo normal 4.5 – 7.0 %
Diabéticos descontrolados >8.5%
9. Correlacion diagnostica