Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 719 vistas

    Colesterol Inserto

    Cargado por

    DAMARYSGELVES
    Este documento describe un método enzimático para determinar el colesterol en suero o plasma. El método involucra la conversión enzimática de los ésteres de colesterol y colesterol en una quinona coloreada cuya absorbancia se mide a 505 nm. Los niveles elevados de colesterol se asocian con un mayor riesgo de enfermedades cardíacas. El método proporciona valores reproducibles con un límite de detección de aproximadamente 0.007 g/L y es lineal hasta 5 g/L.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    Colesterol Inserto

    Cargado por

    DAMARYSGELVES
    719 vistas3 páginas
    Este documento describe un método enzimático para determinar el colesterol en suero o plasma. El método involucra la conversión enzimática de los ésteres de colesterol y colesterol en una quinona coloreada cuya absorbancia se mide a 505 nm. Los niveles elevados de colesterol se asocian con un mayor riesgo de enfermedades cardíacas. El método proporciona valores reproducibles con un límite de detección de aproximadamente 0.007 g/L y es lineal hasta 5 g/L.

    Descripción original:

    Inserto de Colesterol

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    Este documento describe un método enzimático para determinar el colesterol en suero o plasma. El método involucra la conversión enzimática de los ésteres de colesterol y colesterol en una quinona coloreada cuya absorbancia se mide a 505 nm. Los niveles elevados de colesterol se asocian con un mayor riesgo de enfermedades cardíacas. El método proporciona valores reproducibles con un límite de detección de aproximadamente 0.007 g/L y es lineal hasta 5 g/L.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    719 vistas3 páginas

    Colesterol Inserto

    Cargado por

    DAMARYSGELVES
    Este documento describe un método enzimático para determinar el colesterol en suero o plasma. El método involucra la conversión enzimática de los ésteres de colesterol y colesterol en una quinona coloreada cuya absorbancia se mide a 505 nm. Los niveles elevados de colesterol se asocian con un mayor riesgo de enfermedades cardíacas. El método proporciona valores reproducibles con un límite de detección de aproximadamente 0.007 g/L y es lineal hasta 5 g/L.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    Está en la página 1de 3

    Colestat

    enzimtico

    Mtodo enzimtico para la determinacin de colesterol


    en suero o plasma

    SIGNIFICACION CLINICA
    La determinacin de colesterol en forma aislada tiene utilidad
    diagnstica limitada. Se ha visto que el colesterol es uno de
    los factores contribuyentes a la formacin de ateromas dado
    que las complicaciones arteriosclerticas prevalecen en individuos hipercolesterolmicos.
    Estudios epidemiolgicos demuestran que el riesgo de contraer enfermedad cardaca coronaria para individuos de ms
    de 40 aos con colesterolemia menor a 2,10 g/l es 3 veces
    menor que entre individuos con ms de 2,30 g/l y 6 veces
    menor que entre individuos con ms de 2,60 g/l.
    FUNDAMENTOS DEL METODO
    El esquema reaccional es el siguiente:
    lipasa
    steres de colesterol
    > colesterol + cidos grasos
    CHOD
    colesterol + O2
    > colesten-3-ona + H2O2
    POD
    > quinona coloreada + H2O
    H2O2 + 4-AF + fenol
    REACTIVOS PROVISTOS
    A. Reactivo A: solucin de 4-aminofenazona 25 mmol/l.
    B. Reactivo B: solucin de fenol 55 mmol/l.
    C. Reactivo C: suspensin conteniendo lipasa fungal 300 U/ml,
    colesterol oxidasa (CHOD) 3 U/ml y peroxidasa (POD) 20 U/ml.
    S. Standard: solucin de colesterol 2 g/l.
    Concentraciones finales
    Lipasa .................................................................. 6000 U/l
    CHOD ...................................................................... 60 U/l
    POD ..................................................................... 400 U/l
    4-AF .................................................................. 1,25 mmol/l
    Fenol ................................................................. 2,75 mmol/l
    pH ......................................................... 7,4 0,1 (a to amb.)
    REACTIVOS NO PROVISTOS
    Agua destilada. Ver LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO.
    INSTRUCCIONES PARA SU USO
    Standard: mezclar por inversin antes de usar.
    Reactivo A: listo para usar.
    Reactivo B: listo para usar. Ver PRECAUCIONES.
    Reactivo C: homogeneizar por inversin antes de usar, evitando la formacin de espuma.
    Reactivo de Trabajo: segn el volumen de trabajo colocar
    en una probeta 50 partes de agua destilada, 5 partes de Reactivo A, 5 partes de Reactivo B y llevar a 100 partes con agua
    destilada. Agregar 2 partes de Reactivo C previamente homo-

    geneizadas. Mezclar por inversin, sin agitar. Rotular y fechar.


    Pueden prepararse distintas cantidades respetando las proporciones establecidas. Es importante adems, respetar el
    orden de agregado de los reactivos y asegurar una perfecta
    homogeneizacin de los mismos, a fin de que el Reactivo B
    no deteriore el Reactivo de Trabajo.
    PRECAUCIONES
    Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro".
    El Reactivo B (fenol) es txico e irritante. R36/38: irrita los
    ojos y la piel. R25: txico por ingestin. S24/25: evtese el
    contacto con los ojos y la piel. S37/39: usar guantes adecuados y proteccin para los ojos/la cara.
    Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
    de trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos.
    Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
    acuerdo a la normativa local vigente.
    ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
    ALMACENAMIENTO
    Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
    hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No mantener a temperaturas elevadas durante lapsos prolongados.
    Reactivo de Trabajo: en refrigerador y en frasco de vidrio
    color caramelo es estable 1 mes a partir del momento de su
    preparacin.
    INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
    REACTIVOS
    Durante el uso, el Reactivo de Trabajo puede desarrollar un
    ligero color rosado que no afecta los resultados siempre que
    se procese un Blanco con cada lote de determinaciones y un
    Standard peridicamente. Desechar cuando las lecturas del
    Blanco sean superiores a 0,160 D.O. o las lecturas del Standard sean anormalmente bajas.
    MUESTRA
    Suero o plasma
    a) Recoleccin: se debe obtener suero o plasma de la manera usual.
    b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda nicamente el uso de heparina como anticoagulante para su obtencin.
    c) Sustancias interferentes conocidas:
    - Excepto la heparina, los anticoagulantes comunes interfieren en la determinacin.
    - Los sueros con hemlisis visible o intensa producen valores

    870350022 / 00 p. 1/9

    falsamente aumentados por lo que no deben ser usados.


    - En sueros fuertemente hiperlipmicos puede observarse turbiedad: en tal caso, diluir el volumen final de reaccin a 1/2
    1/3 con Blanco de reactivos, repetir la lectura y multiplicar
    el resultado por el factor de dilucin.
    - No interfieren: bilirrubina hasta 200 mg/l, cido ascrbico hasta
    75 mg/l, cido rico hasta 200 mg/l, ni hemlisis ligera.
    Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las
    drogas en el presente mtodo.
    d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el colesterol en suero es estable 1 semana en refrigerador (2-10oC)
    y 2 meses congelado, sin agregado de conservadores.

    CONVERSION DE UNIDADES
    colesterol (g/l) = colesterol (mg/dl) x 0,01
    colesterol (mmol/l) = colesterol (g/l) x 2,59
    colesterol (g/l) = colesterol (mmol/l) x 0,39

    MATERIAL REQUERIDO (no provisto)


    - Espectrofotmetro o fotocolormetro.
    - Micropipetas, pipetas y material volumtrico adecuados.
    - Frasco de vidrio color caramelo.
    - Tubos o cubetas espectrofotomtricas de caras paralelas.
    - Bao de agua a 37C (opcional).
    - Reloj o timer.

    Deseable: < 2,00 g/l


    Moderadamente alto: 2,00 - 2,39 g/l
    Elevado: 2,40 g/l

    CONDICIONES DE REACCION
    - Longitud de onda: 505 nm en espectrofotmetro o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm).
    - Temperatura de reaccin: 37C
    - Tiempo de reaccin: 15 minutos
    - Volumen de muestra: 20 ul
    - Volumen de Reactivo de Trabajo: 2 ml
    - Volumen final de reaccin: 2,02 ml
    Los volmenes de Muestra y Reactivo pueden aumentarse o
    disminuirse proporcionalmente (Ej.: 10 ul de Muestra + 1 ml
    de Reactivo de Trabajo o 50 ul + 5 ml).
    PROCEDIMIENTO
    En tres tubos de fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar:
    B

    Standard

    20 ul

    Muestra

    20 ul

    2 ml

    2 ml

    2 ml

    Reactivo de Trabajo

    Incubar 15 minutos en bao de agua a 37 C o 30 minutos


    a temperatura ambiente (25oC). Leer en fotocolormetro con
    filtro verde (490-530 nm) o en espectrofotmetro a 505 nm,
    llevando el aparato a cero con el Blanco.
    o

    ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL


    El color de reaccin final es estable dos horas, por lo que la
    absorbancia debe ser leda dentro de este lapso.
    CALCULO DE LOS RESULTADOS
    colesterol (g/l) = D x f

    donde f =

    2,00 g/l
    S

    METODO DE CONTROL DE CALIDAD


    Procesar 2 niveles de un material de control de calidad
    (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas
    de colesterol, con cada determinacin.
    VALORES DE REFERENCIA
    El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los siguientes valores de colesterol:

    No obstante, se recomienda que cada laboratorio establezca


    sus propios intervalos o valores de referencia.
    LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
    Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
    Otras causas de resultados errneos son:
    - Los reductores disminuyen la respuesta de color mientras
    que los oxidantes colorean el Reactivo aumentando los Blancos. Dichos agentes son frecuentemente encontrados en el
    agua destilada empleada para preparar el Reactivo de Trabajo, por lo que se recomienda controlar la calidad de la
    misma.
    - Los detergentes, metales pesados y cianuros son inhibidores enzimticos.
    - Incubacin incorrecta. El nivel del agua en el bao no debe
    ser inferior al de los reactivos en los tubos.
    - Uso del Standard de un equipo con los reactivos de otro. Los
    reactivos y el Standard de cada equipo forman un conjunto
    perfectamente controlado y estandarizado.
    PERFORMANCE
    a) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas
    muestras en 10 das diferentes, se obtuvo:
    Nivel
    1,57 g/l
    2,90 g/l
    4,71 g/l

    D.S.
    0,033 g/l
    0,065 g/l
    0,102 g/l

    C.V.
    2,32 %
    2,23 %
    2,13 %

    b) Recuperacin: agregando cantidades conocidas de colesterol a distintos sueros, se obtuvo una recuperacin entre
    98 y 101%, para todo nivel de colesterol entre 1,90 y 4,79 g/l.
    c) Lmite de deteccin: depende del fotmetro empleado y
    de la longitud de onda. De acuerdo con la sensibilidad requerida, el cambio mnimo de concentracin detectable para
    0,001 D.O. ser aproximadamente de 0,007 g/l.
    d) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 5 g/l. Para valores
    superiores, diluir 1/2 con el Blanco y repetir la lectura multiplicando el resultado final por 2.
    PRESENTACION
    - 250 ml (Cd. 1220101)
    - 1000 ml (Cd. 1220102)

    870350022 / 00 p. 2/9

    Empleando los reactivos de Colestat enzimtico junto con


    HDL-Colesterol Reactivo Precipitante o HDL-Colesterol
    FT y LDL-Colesterol Reactivo Precipitante (provistos separadamente por Wiener lab.) es posible determinar el colesterol ligado a las lipoprotenas de alta densidad (HDL-colesterol) y a las lipoprotenas de baja densidad (LDL-colesterol).
    BIBLIOGRAFIA
    - Allain, C.C. et al. - Clin. Chem. 20:470 (1974).
    - American Health Foundation - Position statement on diet
    and coronary heart disease - pg. 255 (1972).
    - Castelli, W.P. - Current Prescribing 6/77:39 (1977).
    - Flegg, A.S. - Ann. Clin. Biochem. 10:79 (1973).
    - I.F.C.C. - Clin. Chim. Acta 87/3:459 F (1978).
    - Trinder, P. - Ann. Clin. Biochem. 6/24 (1969).
    - Coniglio R.I. - Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201, 1989.
    - Expert Panel of National Cholesterol Education Program JAMA 285/19:2486 (2001).
    - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
    AACC Press, 4th ed., 2001.

    SIMBOLOS
    Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnstico de Wiener lab.

    Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos
    sanitarios para el diagnstico "in vitro"

    Uso diagnstico "in vitro"

    Contenido suficiente para <n> ensayos

    Fecha de caducidad

    Lmite de temperatura (conservar a)

    No congelar

    Riesgo biolgico

    P Representante autorizado en la Comunidad Europea

    Volumen despus de la reconstitucin


    Cont.

    Contenido

    Nmero de lote

    Elaborado por:

    Xn

    Nocivo
    Corrosivo / Castico

    Xi

    i
    Calibr.

    b
    b
    c
    h

    Irritante
    Consultar instrucciones de uso
    Calibrador
    Control
    Control Positivo
    Control Negativo
    Nmero de catlogo

    M Wiener Laboratorios S.A.I.C.


    Riobamba 2944
    2000 - Rosario - Argentina
    http://www.wiener-lab.com.ar
    Dir. Tc.: Viviana E. Ctola
    Bioqumica
    Producto Autorizado A.N.M.A.T.
    Disp. N: 5983/83-5660/99

    870350022 / 00 p. 3/9

    Wiener lab.
    2000 Rosario - Argentina
    UR091119

    También podría gustarte