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    Cinemática Enzimática 5.1

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    Eduardo Alonso
    El documento presenta los cálculos de una curva de calibración para medir la concentración de azúcares reductores usando espectrofotometría. Se midió la absorbancia producida por varias concentraciones conocidas de glucosa y fructosa para generar una curva patrón. Luego, se usará esta curva para determinar la concentración de azúcares reductores producidos en una reacción enzimática catalizada por la enzima invertasa.

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    El documento presenta los cálculos de una curva de calibración para medir la concentración de azúcares reductores usando espectrofotometría. Se midió la absorbancia producida por varias concentraciones conocidas de glucosa y fructosa para generar una curva patrón. Luego, se usará esta curva para determinar la concentración de azúcares reductores producidos en una reacción enzimática catalizada por la enzima invertasa.

    Título original

    Cinemática enzimática 5.1

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    Alonso Hernndez Eduardo Duarte Ortiz D.

    Anglica

    Lab. Bioqumica Clculos:


    Azcar reductor: 1: (0.1mL)x(0.01M) / 1000mL = (0.000001mol)x(1000000mol) = 1mol 2: (0.2mL)x(0.01M) / 1000mL = (0.000002mol)x(1000000mol) = 2mol 3: (0.4mL)x(0.01M) / 1000mL = (0.000004mol)x(1000000mol) = 4mol 4: (0.8mL)x(0.01M) / 1000mL = (0.000008mol)x(1000000mol) = 8mol 5: (1.2mL)x(0.01M) / 1000mL = (0.000012mol)x(1000000mol) = 12mol 6: (1.5mL)x(0.01M) / 1000mL = (0.000015mol)x(1000000mol) = 15mol

    3FM1 Secc.3

    Cinemtica enzimtica: Curva tipo de Azcares reductores


    La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y las condiciones que las modifican, as como sus mecanismos de reaccin. La enzima es un catalizador de las reacciones biolgicas, aumentan la velocidad en la que se alcanzara el equilibrio sin afectar el equilibrio final de la reaccin. Proporcionan una ruta con menor energa libre de activacin para transformar el sustrato a un producto. Estas son de alta especialidad (muy especificas), y su actividad puede verse modificada por factores como: temperatura, el pH, concentracin de enzima, concentracin de sustrato, entre otros Como ejemplo de enzima tenemos a las Sacarasa (fructofuranosidasa o invertasa), que es capaz de hidrolizar diferentes sustratos y su mxima actividad la presenta con el disacrido Sacarosa. La velocidad de la reaccin con la sacarosa puede ser medida observando el cambio de rotacin ptica, o valorando el poder reductor de los productos en un determinado tiempo. Objetivo: Obtener una curva de calibracin, mediante cual se puedan transformar las lecturas de absorbencia obtenidas a lo largo de las experiencias en cintica enzimtica; para poder obtener as la actividad de la enzima invertasa en unidades internacionales (UI). Resultados:
    Tubo No.
    Glucosa 0.0005 M Fructosa 0.005M (mL)

    Grafica de absorbencia contra concentracin de azcar reductor (anexa).

    Reaccin llevada a cabo:

    Blanco T

    Problemas 3 4

    Sacarosa 0.35M (mL)


    Regulador de acetatos 0.05M, pH 4.7 (mL)

    Agua (mL) 3,5 DNS (mL)


    Desarrollo de color

    0 1.0 0.5 2 1.0

    0.1 1.0 0.5 1.9 1.0

    0.2 1.0 0.5 1.8 1.0

    0.4 1.0 0.5 1.6 1.0

    0.5 1.0 0.5 1.2 1.0

    1.2 1.0 0.5 0.8 1.0

    1.5 1.0 0.5 0.5 1.0

    Dilucin

    5 minutos a 92C 8en bao mara) Colocar en bao con hielo y diluir con 4mL de agua destilada

    Leer en espectrofotmetro a 540 nm.


    Absorbencia Azcar reductor (moles)/3.5mL

    0 0

    .029

    .122

    .235

    .540

    .875

    1. 016

    12

    15

    Alonso Hernndez Eduardo Duarte Ortiz D. Anglica


    Discusin:

    Lab. Bioqumica

    3FM1 Secc.3

    La sacarosa es un azcar no reductor, disacrido; y puede dar lugar a dos azcares reductores, como lo son la Glucosa y la Fructosa, mediante la intervencin de la enzima Sacarasa (fructofuranosidasa o invertasa). Nosotros hemos simulado tal reaccin, y puesto ya los productos de la reaccin (los productos que deberan darnos), para as obtener una grafica estndar o tipo que nos guie y para poder comparar en ella los distintos experimentos que se realizaran; leyendo la absorcin de estos experimentos y as compararla con la absorcin de nuestras curva tipo y saber cuanta concentracin de azcar reductor tenemos en realidad.

    Conclusiones:

    La enzima Sacarasa (fructofuranosidasa o invertasa), cataliza a la sacarosa y hace que de cmo productos a la Glucosa y a la Fructosa.

    En la reaccin entre la invertasa y la Sacarosa, se obtiene grficamente una recta, as que: A mayor concentracin de azcar reductor, mayor ser la absorbencia.

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